Termogenesis no frio e na obesidade

No frio:

• Qual seria a contribuição da SERCA e da UCP para a termogenesis?

• Estariam as duas proteínas se comunicando durante esse processo?

Na obesidade:

1. Poderia em indivíduos obesos o transplante/diferenciação de fibroblastos em BAT reverter este quadro clínico?

Objetivos 11ª Parte:

• In vivo, analisar a resistência ao frio de ratos tratados com RNA de interferência para SERCA 1 ou UCP 1.

• Medir o coeficiente respiratório (R) durante o período do tratamento, afim de saber se houve uma mudança do metabolismo energético.

• Medir o peso magro e conteúdo de gordura nos animais.

2ª parte:

• In vitro, analisar através de RT-PCR a transcrição de mRNA das isoformas de SERCA e UCP em tecido adiposo marron e músculo branco.

• Avaliar a geração de calor, atividade ATPásica e acoplamento do transporte de Ca2+ em vesículas de retículo sarcoplasmático e células de BAT e músculo branco.

• Em mitocôndrias isoladas e células, medir consumo de oxigênio acoplado e desacoplado.

Metodologia

Submetido ao frio durante 10 dias

Submetido ao frio durante 04 dias

Submetido ao frio durante 06 dias

iRNA(SERCA 1 ou UCP 1)

Controle

iRNA(SERCA 1 ou UCP 1)

Submetido ao frio durante 10 dias com período de aclimatação

Adaptado

Não adaptado

MetodologiaIn vivo:

• Medir a perda de temperatura, o rato que tiver sua temperatura diminuída abaixo de 34ºC é sacrificado (caracterização de hipotermia)

•Peso corporal total, massa gorda e massa magra.

•Fazer medidas de glicose, ácidos graxos, corpos cetônicos, lactato através da coleta do sangue do animal.

• Medir hormônios no plasma: hormônios tireôidianos, adrenalina e noraadrenalina, Gh, insulina e glucagon.

•Medir o coeficiente respiratório durante os dias de experimentação, afim de captar alguma mudança no metabolismo energético

Metodologia

Músculo esquelético branco

Tecido adiposo marrom

Preparar vesículas ou células de RS dos 3 grupos

Realizar as medidas de atividade ATPásica, produção de calor e H cal.

Metodologia

Músculo esquelético branco

Tecido adiposo marrom

Preparar homogenadodos 3 grupos

Através de RT-PCR analisar o mRNA das isoformas de SERCA 1, 2B e 3; e UCP 1, 2 e 3.

Metodologia

Músculo esquelético branco

Tecido adiposo marrom

Preparar mitocôndrias intactas ou células dos 3 grupos

Analisar o consumo de oxigênio e o acoplamento da cadeia respiratória

Perspectivas 1

Através destes experimentos visamos esclarecer algum pontos, tais como:

1. Qual é o grau de comunicação entre a SERCA 1 e a UCP 1 durante a produção de calor.

2. Através do coeficiente respiratório e os experimentos in vitru, tentar identificar qual tecido participa mais do processo de produção de calor, o músculo branco ou o tecido adiposo marrom.

3. Identificar possíveis isoformas de SERCA e UCP que através do processo adaptativo ao frio possam participar do processo de termogênesis.

Pergunta:

BAT poderia combater a obesidade?

Objetivo:

Transplantar fibroblastos que over expressa PRDM16-C/EBPβ em animais obesos.

Metodologia

• Induzir animais a uma dieta com alta caloria (high fat) por

• Observar as variações no peso corporal, massa magra, IMC, e % de

• gordura antes da dieta, após a dieta e após o tranplante

• Medir o conteúdo de mRNA para UCP1, Ap2, adiponectina e PPAR e a atividade do BAT nos animais WT e que foram induzidos a obesidade.

• Consumo de O2 do animal e capacidade para realizar exercício físico.

Perpectivas

• Obter uma nova estratégia para tratar obesidade e também diabetes tipo II.