Setor 10. Farmacologia Clínica e Farmacocinética 10.001 AVALIAÇÃO DA RESISTÊNCIA A ANTIMICROBIANOS DE Staphylococcus aureus E ESTREPTOCOCOS GRUPO VIRIDANS DE PACIENTES COM RISCO A ENDOCARDITE INFECCIOSA Baglie, R. C. C.1; Baglie, S.1; Motta, R. H. L.2; Rosalen, P. L.2; Groppo, F. C.2 - 1UNICAMP / UEPG - FOP / DEFAR; 2UNICAMP - FOP Introdução: a endocardite infecciosa (EI) é uma infecção grave das válvulas cardíacas, do endocárdio mural e de septos defeituosos, provocada principalmente pelos Staphylococcus aureus e pelos estreptococos grupo viridans. Métodos: foi verificada a resistência aos antimicrobianos de cepas de S. aureus e estreptococos grupo viridans provindas de 100 voluntários, sendo 60 adultos (16 a 75 anos) divididos em três grupos: saudáveis (grupo 1), cardiopatas de baixo risco (grupo 2) e cardiopatas de alto risco (grupo 3) para EI e 40 crianças (6 a 14 anos) divididas em dois grupos: saudáveis (grupo 1) e cardiopatas de alto risco (grupo 2) para EI. Os voluntários dos grupos 2 e 3 e os responsáveis pelas crianças do grupo 2 responderam a um formulário sobre os riscos da EI e sua profilaxia. Amostras de saliva foram inoculadas em Mitis Salivarius agar e incubadas em microaerofilia durante 48 h. Amostras de pele (swab) foram inoculadas em Sal Manitol agar e incubadas em aerobiose durante 24 h. Os estreptococos e os S. aureus foram identificados e submetidos a testes de susceptibilidade. Resultados: dos voluntários adultos, foram isoladas 186 cepas, 58 do grupo 1, 62 do grupo 2 e 66 do grupo 3. Dentre os estreptococos o S. mitis foi o mais comum. A cepa mais resistente contra as penicilinas foi a do S. aureus isolada dos grupos 2 (57,9%) e 3 (80%). Considerando os grupos 2 e 3: 21 voluntários (52,5%) tinham conhecimento sobre sua doença, entretanto, somente 12,5% sabiam o significado de EI. Dezessete voluntários (42,5%) sabiam sobre a antibioticoprofilaxia antes de algum procedimento dental e 10 voluntários nomearam a amoxicilina como o principal antibiótico para a profilaxia. Trinta e cinco voluntários não receberam informações dos médicos ou dentistas sobre a importância da saúde oral para prevenir a EI. A maior parte (60%) disse ter visitado o dentista pela última vez há mais de 1 ano. Trinta e cinco porcento afirmou apresentar algum tipo de doença oral. Dos voluntários pediátricos, foram isoladas 98 colônias, 51 do grupo 1 e 47 do grupo 2. A espécie mais isolada foi S. pneumoniae: 23,4% e 25,5% nos grupos 1 e 2, respectivamente. S. aureus corresponderam a 36,2% e 31,9% nos grupos 1 e 2, respectivamente. Quatorze responsáveis (70%) tinham conhecimento sobre a doença de suas crianças; entretanto, somente 15% sabia o significado desta. Onze responsáveis (55%) sabiam sobre a antibioticoprofilaxia antes de algum procedimento dental, e 10 responsáveis nomearam a amoxicilina como o principal antibiótico para a profilaxia. Dezesseis responsáveis (80%) não receberam informações dos médicos ou dentistas sobre a importância da saúde oral para prevenir a EI. Das crianças, 40% visitou o dentista pela última vez há 6 meses. Discussão: de acordo com o perfil de resistência das cepas de estreptococos orais, a amoxicilina mostra-se como o agente antimicrobiano de primeira escolha para a profilaxia da endocardite infecciosa. É clara a necessidade de oferecer informações sobre a endocardite infecciosa para os pacientes afetados por doenças cardíacas ou para seus responsáveis. Agradecimento: Capes

10.002 CONCENTRAÇÕES PLASMÁTICAS E SALIVARES E EFEITO SOBRE A MICROBIOTA ORAL DE DUAS FORMULAÇÕES DE AMOXICILINA 875MG. Baglie, S.1; Baglie, R. C. C.2; Franco, L. M.3; Ruenis, A. P. D. B.4; Franco, G. C. N.4; Motta, R. H. L.4; Rosalen, P. L.4; Groppo, F. C.4 - 1UEPG / UNICAMP - Ciências Farmacêuticas / FOP; 2UNICAMP / UEPG - FOP / DEFAR; 3UNIMEP - Ciências da Saúde; 4UNICAMP - FOP Introdução: A amoxicilina é um antimicrobiano frequentemente prescrito e ativo contra muitos microrganismos. Formulações com 875mg têm sido prescritas mais recentemente na prática médica e odontológica. Métodos: as concentrações de amoxicilina em plasma e saliva e seus efeitos na microbiota oral de voluntários sadios foram analisados, em um estudo aberto, de forma aleatória, cruzado com dois períodos. Amoxicilina 875 mg (Amoxicilina EMS - medicamento teste e Amoxil - medicamento referência) foi administrada para 24 voluntários com 1 semana de intervalo entre as doses. Amostras de plasma e saliva foram colhidas em um intervalo de até 12h após a administração. As concentrações plasmáticas de amoxicilina foram obtidas por LC-ESI-MS. As concentrações de amoxicilina em saliva foram analisadas por HPLC. As contagens dos microrganismos totais, anaeróbios e estreptococos foram obtidas em diferentes condições de cultura. ASC foi calculada pelo método de extrapolação dos trapezóides. Cmax e Tmax foram compilados dos dados de concentração-tempo. Análise de variância foi realizada usando dados logaritmicamente transformados para ASC0-inf, ASC0-12h, Cmax e não transformados para Tmax. Resultados: as médias (±dp) para ASC0-12h (µg.h.mL-1), ASC0-inf (µg.h.mL-1), Cmax (µg.mL-1) and Tmax (h), foram respectivamente: 55,42(±16,85), 55,42 (±16,85), 18,59 (±6,3), 2,04(±0,75) para o medicamento teste e 51,11 (±18,9), 51,29 (±19,12), 17,83 (±5,86), 2,02 (±0,87) para o medicamento referência. Intervalos de confiança (90%) para a razão das médias de amoxicilina (teste/referência) para ASC0-12h e Cmax foram: 0,961 – 1,149 e 0,914 – 1,142, respectivamente. Tanto para as concentrações plasmáticas quanto para as salivares não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os dois medicamentos (Teste t pareado, p>0.05). As contagens de microrganismos provindos da saliva não mostraram diferenças estatísticas (ANOVA de medidas repetidas, p>0.05) entre as duas formulações durante cada tempo. A partir de 60 min, uma redução estatisticamente significante (ANOVA de medidas repetidas, p<0.05) foi observada para todos os microrganismos. Discussão: os dois medicamentos podem ser considerados bioequivalentes baseado na razão e extensão de absorção e foram igualmente eficazes na redução dos microrganismos da microbiota oral avaliados até 12 horas. Agradecimentos: Capes

10.003 DEVELOPMENT AND VALIDATION OF AN HPLC/UV METHOD FOR THE QUANTIFICATION OF A NEW ANTIINFLAMMATORY CANDIDATE LPSF/PG-15 IN RAT PLASMA Uchoa, F. D. T.1; Lima, M. C. A.1; Pitta, I. R.1; Galdino, S. L.1; Dalla Costa, T.2 - 1UFPE - Antibióticos; 2UFRGS - PPG - Ciências Farmacêuticas Introduction: From a series of new 5-indol-thiazolidinones designed to be a new prototype COX-2 inhibitors, the drug (5)-3-[2-(4-chlorophenyl)-2-oxoethyl]-5-(1H-indol-3-ylmethylene)-thiazolidine-2,4-dione (LPSF-PG-15) showed the best anti-inflammatory results by inhibiting leukocyte migration in mice air pouch model and in vitro enzymatic studies (data not published). Viewing to investigate the pre-clinical pharmacokinetics of LPSF/PG-15, the aim of this study was to develop and validate an HPLC method to quantify the drug in rat plasma. Methods: A Waters® HPLC system coupled to a Waters® 2487 UV detector was used. A C18 column (Nova Pack®, 15cm) with a Phenomenex security guard pre-column were used. The chromatographic conditions were: isocratic elution of methanol:water (70:30, v/v) at a flow of 1.0mL/min and detection at 385nm. The plasma samples (100µL) processing consisted in deproteinization with methanol (1:2) followed by vortexing and centrifugation (12.000rpm, 10min). A 50µL aliquot of the supernatant was injected into the HPLC system. The method was validated following FDA guidelines1. Calibration curves were prepared by spiking plasma with drug solution to obtain concentrations from 62.5 and 4000ng/mL, with quality controls of 80, 400 and 3200ng/mL. The method was applied to quantify LPSF/PG-15 after i.v. administration of 15mg/kg to male Wistar rats (n=3). After dosing, blood samples were collected from the lateral tail vein at pre-determined time points up to 12h; plasma was processed as described above for drug quantification. Individual pharmacokinetic parameters were determined by non-compartmental approach. The animal experiments was approved by UFRGS Ethics in Research Committee (#2006/608). Results and Discussion: The retention time of LPSF/PG-15 was approximately 6.8 min. No interference from plasma or metabolites was observed showing the specificity of the method. Concentration –peak area response was a linear (R2>0.99) over the concentration range investigated. The lower limit of quantification of the method (LLOQ) was determined to be 62.5ng/mL. The within- and between-day precision, expressed as the relative error, were found to be less than 15 and 10%, respectively for all the concentration investigated. The pharmacokinetic plasma profile of LPSF/PG-15 exhibited a rapid redistribution phase followed by a slower phase, compatible with a two compartment model. Pharmacokinetic parameters in rats were: Cp0 of 656±172 ng/mL, ke of 0,101±0,05 h-1, t1/2 of 9.5±4,3 h and AUC0-∞ of 3068±437 ng·h/mL, percentage of AUC extrapolated of 42±6. The HPLC/UV method developed is simple, specific, precise, and accurate and could be validated. However, LPSF/PG-15 presented low plasma levels after i.v. dosing and concentrations below the LLOQ were observed after 8h resulting in poor characterization of the elimination from plasma (extrapolated AUC > 20%). Conclusion: Although a valid HPLC/UV method has been developed to quantify LPSF/PG-15 in rat plasma it was not sensible enough to characterize the drug elimination from rat plasma in order to properly determine its pharmacokinetic parameters. References: 1FDA. Guidance for Industry. Bioanalytical Method Validation, 2001. Acknowledgments: CNPq IM-INOFAR, CNPq/Brazil

10.004 ANÁLISE DA EFICIÊNCIA DE PRINCÍPIOS ATIVOS DE CARRAPATICIDAS CONTRA Boophilus microplus EM BOVINOS DOS MUNICÍPIOS DE GARÇA E PEDERNEIRAS - SP Toledo-Pinto, E. A.1; Pereira Neto, S. F.1; Furlong, J.2 - 1FAMED, FAEF, Garça, SP - Medicina Veterinária; 2EMBRAPA - Gado de Leite, Juiz de Fora, MG. Introdução: Carrapatos e as doenças por eles transmitidas são amplamente distribuídos pelo mundo, particularmente em regiões tropicais e subtropicais. As infestações bovinas por Boophilus microplus podem reduzir a produção animal e chegar até a mortes. Este ectoparasita exige um único hospedeiro para sua evolução e possui sítios de predileção desde a região ventral do pescoço até a genitália do animal. Os danos causados ao hospedeiro são resultantes da ação direta do parasita compreendida pela espoliação sangüínea e suas conseqüências, e da ação indireta, caracterizada por perdas ocasionadas pelo Complexo Tristeza Parasitária Bovina (1). O controle dos carrapatos pode ser feito através de práticas de manejo e de produtos químicos. O uso, a aplicação incorreta e o pequeno nº de grupos químicos disponíveis no mercado resultam na seleção de populações de parasitas resistentes. Assim, o objetivo deste trabalho foi analisar o atual estado de resistência das populações de carrapatos Boophilus microplus em bovinos dos municípios de Garça e Pederneiras, SP. Métodos: As amostras (500 fêmeas ingurgitadas) do carrapato Boophilus microplus coletadas do gado leiteiro das cidades de Pederneiras e Garça, SP foram enviadas para a EMBRAPA Gado de Leite, Juiz de Fora, MG. O teste de resistência realizado baseou-se no Guidelines Resitance Management and Integrated Parasite Control in Ruminants (2). Resultados: Os produtos Carbeson e Colosso apresentaram uma excelente eficácia (90 a 98%) no combate ao Boophilus microplus no gado leiteiro de Pederneiras e Garça. O produto Top-line mostrou-se excelente para o gado de Garça (100%), entretanto sua eficácia foi de 26% no gado de Pederneiras, sugerindo que possa ter ocorrido resistência a este produto. Demais carrapaticidas apresentaram as seguintes eficiências: Ectofós (81,3%) Bovinal (72,1%), Aspersin (52,5%), Ectobam (27,0%), Triatox (20,1%) Ciperthion (11,2%), Alatox (8,2%), M3 Ecto (8,0%), Suppocade (6,9%). Os produtos Cypermil Plus e Butox não apresentaram nenhuma eficiência. A resistência apresentada pelos carrapatos e a baixa variedade de produtos químicos encontrados no mercado reforçam a necessidade de se realizar o teste de sensibilidade. Só assim o produtor se certifica da eficiência do produto, reduz gasto, minimiza os resíduos e principalmente retarda a resistência. Bibliografia: 1. Furlong, J.; Martins, J.R.S.; Prata, M.C.A. Controle estratégico do carrapato dos bovinos. A hora veterinária: revista de ensino pós-universitário e formação permanente, 23, n.137, 53-56, 2004. 2. Animal Production and Health Division Agriculture Department. Food and Agriculture Organization of the United Nations, Rome, 2004. Apoio Financeiro: FAEF - FAMED

10.005 EFEITO DO SILDENAFIL NA MUSCULATURA LISA DA BEXIGA URINÁRIA HUMANA “IN VITRO” Bittencourt, J. A. F.1; Tano, T.2; Gajare, S. A.1; Resende, A. C.2; Lemos Neto, M. de2; Soares de Moura, R.2 - 1UERJ - Serviço de Urologia; 2UERJ - Farmacologia e Psicobiologia Objetivos: Os benéfico clínicos do Sildenafil, um inibidor da fosfodisterase 5, no trratamento da hiperplasia prostática benígna e redução da retenção urinária tem sido recentemente demonstrado. Este efeito pode estar correlacionado com o relaxamento da musculatura lisa da próstata e também do colo vesical. O objetivo deste trabalho é avaliar o possível efeito do sildenafil na musculatura lisa do colo vesical da bexiga humana. Métodos: Fragmentos do colo vesical foram obtidos de pacientes submetidos a cirurgias de próstata. Os fragmentos foram dissecados (1-2 X 0.5 cm) e suspendidos em cubas de 30 mL contendo solução de Krebs modificado, borbulhada com 95% O2 e 5% CO2, pH = 7,4. Após a estabilização e a viabilização da preparação com KCl (60 mM), o tecido foi pré-contraído com fenilefrina (10-5 M) e concentrações crescentes de sildeafil (10-300 mg/mL) foram adicionas ao banho para a obtenção da curva concentração-resposta. O efeito do sildenafil também foi avaliado em preparações pré-tratadas com L-NAME (3.10-4 M, n=5) e ODQ (10-5 M, n=5), inibidores da NO sintase e guanilato ciclase, respectivamente. Resultados: O sildenafil induziu um significante relaxamento da musculatura lisa do colo vesical em todas as concentrações testada (10 - 300 mg/mL). O relaxamento máximo foi de 87±6.7 %, obtido com sildenafil (300 µg/ml). Tanto o L-NAME (n=5) como o ODQ (n=5) reduziu significativamente o efeito do sildenafil em preparação pré-contraída com fenilefrina. Conclusão: O sildenafil (1-300 mg/mL) provocou relaxamento significativo da musculatura lisa do colo vesical humano “in vitro” pré-contraído com agonista adrenérgico. Este efeito foi quase completamente abolido pelo L-NAME e ODQ, demonstrando claramente a participação da via NO-GMPc. Nossos resultados confirmam a atual indicação do sildenafil no tratamento da hipeplasia prostática benígna. Apoio Financeiro: FAPERJ/CNPq

10.006 EFICÁCIA TERAPÊUTICA DA PIPERAZINA HEXAHIDRATADA ASSOCIADA COM EXTRATO FLUIDO DE Rhamnus purshiana EM PACIENTES INFESTADOS POR Ascaris lumbricoides Nascimento, D. F. do1; Viana, F. A. C.1; Barbosa, N. S.1; Oliveira, M. I. P.1; Barbosa, O. A.1 - 1UFC - Fisiologia e Farmacologia - UNIFAC Introdução: Parasitas intestinais constituem um problema de saúde pública no mundo. As parasitoses, em geral, são transmitidas por contato direto fecal-oral ou contaminação de alimentos e água. A população de baixa renda, que reside em ambientes desprovidos de saneamento e coleta de lixo tem um maior risco de se infectar. A Ascaridíase representa a parasitose intestinal mais freqüente, acometendo aproximadamente um quarto da população mundial, é vastamente encontrada em Países em desenvolvimento. Segundo a Organização Mundial de Saúde, a infestação por Ascaris lumbricoides, a cada ano é responsável por aproximadamente 60.000 óbitos. Métodos: A eficácia e a segurança terapêutica de um medicamento a base de piperazina hexaidratada associada com o extrato fluido de Rhamnus purshiana (D.M. indústria farmacêutica) usada como tratamento anti-helmíntico em pacientes no Ceará, Brasil, foi testado em comparação com o produto composto de piperazina sem qualquer associação (D.M. indústria farmacêutica). Um estudo prospectivo, randomizado, controlado e duplo cego, comparando taxas de cura para infecção por Ascaris lunbricoides. Amostras coprológicas de 990 voluntários foram coletadas inicialmente e a prevalência de infecções parasitárias intestinais foi examinada. Amostras fecais positivas de 130 pacientes com para Ascaris lumbricoides foram incluídos no estudo clínico, no intuito de ser comprovada a eficácia e a segurança terapêutica. Informações sobre dados socioeconômicos e de saneamento foram coletas a partir de questionário próprio. Resultados: Mais da metade dos pacientes mostraram monoparasitismo (60%, n=287) e prevalência de Ascaris lumbricoides de 29% (n=136). Taxa positiva para helmintíase intestinal e infecções por protozoários atingiram índice de 48,38% (n=231) (trichuríase 4%, ancilostomíase 0%, amebíase 4%, giardíase 10%). A taxa de cura da piperazina associada com extrato fluido de Rhamnus purshiana foi de 93,33% (n= 60) e para a piperazina sem associações foi de 96,36% (n=55), portanto, não apresentou diferença estatisticamente significante em relação às taxas de cura dos medicamentos em estudo (P = 0,6809; nível de significância de 5%). Náusea (13,84%) e vômito (11,53%) foram os eventos adversos mais prevalentes. Não foi evidenciada diferença estatisticamente significante em relação à ocorrência de eventos adversos nas duas formulações (P = 0,2348). Dados socioeconômicos e de saneamento mostraram íntima relação com a ocorrência de infecção por Ascaris lumbricoides. Conclusão: A piperazina associada com extrato fluido de Rhamnus purshiana mostrou-se eficaz e segura no tratamento da ascaridíase, na população estudada. Apoio Financeiro: InCB, CNPq, UNIFAC-HM, FINEP, FUNCAP e CAPES

10.007 QUANTIFICAÇÃO DE ERITROMICINA EM PLASMA HUMANO POR CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA ACOPLADA À ESPECTROMETRIA DE MASSA Moraes, M. E. A.1; Nascimento, D. F. do1; Lima, F. A. V.1; Tagliapietra, J. I.1; Teixeira, C. F.1; Frota Bezerra, F. A.1; Moraes, M. O.1 - 1UFC - Fisiologia e Farmacologia - UNIFAC Introdução: A eritromicina inibe a síntese de proteínas microssomais em organismos susceptíveis pela inibição do processo de translocação. Objetivo: Desenvolver e validar um método para quantificação de eritromicina (analito) em plasma humano por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massa usando claritromicina como padrão interno (PI). Métodos e Resultados: O analito e o PI foram obtidos das amostras de plasma, através da extração líquido-líquido utilizando éter/diclometano (70:30 v/v), com recuperação de 70,51%, 74,56% e 75,05% para as concentrações de 300, 1800 e 3500 ng/mL, respectivamente. As análises cromatográficas foram realizadas usando uma pré-coluna SecurityguardTM C18 (4 x 3 mm), e uma coluna Phenomenex Luna C18 5µm (100 x 4,6 mm i.d.), utilizando como fase móvel uma solução de acetonitrila/água (1:1 v/v) e ácido acético (0,1%). A detecção das massas, utilizando fonte de ionização por electrospray operando no modo positivo (ESI+), foi realizada monitorando os íons resultantes no modo de monitoramento de múltiplas reações (MRM) e o aparelho ajustado para as seguintes transições: m/z 734,60>576,20 e m/z 748,80>590,20 para eritromicina e claritromicina, respectivamente. O método apresentou um tempo total de corrida de 2,5 minutos e mostrou-se linear no intervalo de 100 a 4000 ng/mL, com limite de quantificação de 100 ng/mL. A precisão intralote foi de 4,92%, 4,88% e 3,24% e a exatidão intralote foi de 92,86%, 103,37% e 105,83% para as concentrações de 300, 1800 e 3500 ng/mL, respectivamente. Para as mesmas concentrações, a precisão interlote foi de 7,92%, 4,54% e 3,38%, enquanto que a exatidão interlote foi de 101,36%, 104,43% e 104,26%, respectivamente. Este método foi aplicado para a avaliação do perfil farmacocinético da eritromicina administrada em 26 voluntários sadios de ambos os sexos. Conclusões: O método analítico utilizado, de cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massa, desenvolvido e validado mostrou-se rápido, sensível, específico, preciso e exato para quantificação de eritromicina em plasma humano. Apoio Financeiro: InCB, CNPq, UNIFAC-HM, FINEP, FUNCAP e CAPES

10.008 QUANTIFICAÇÃO DE NORFLOXACINO EM PLASMA HUMANO POR CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA COM DETECÇÃO POR FLUORESCÊNCIA: APLICAÇÃO EM ESTUDOS DE BIOEQUIVALÊNCIA Leite, I. O.1; Leite, A. L. A. S.1; Jamacuru, F. V. F.1; Camarão, G. C.1; Justa, G. C. G.1; Frota Bezerra, F. A.1; Moraes, M. O.1; Moraes, M. E. A.1 - 1UFC - Fisiologia e Farmacologia - UNIFAC Introdução: O Norfloxacino é um inibidor de DNA girase (topoisomerase II), uma enzima responsável pelo enovelamento negativo, dependente de ATP, do DNA bacteriano. Objetivo: Desenvolver e validar um método para quantificação de norfloxacino (analito) em plasma humano por cromatografia liquida de alta eficiência com detecção por fluorescência usando ciprofloxacino como padrão interno (PI). Métodos e Resultados: O analito e o PI foram obtidos das amostras de plasma, através da extração líquido-líquido utilizando acetonitrila, com recuperação de 103,5%, 100,2% e 102,2% para as concentrações de 90,1400 e 2800 ng/mL, respectivamente. As análises cromatográficas foram realizadas usando uma coluna Synergi MAX RP 4µm (150 x 4.6 mm i.d.), utilizando como fase móvel uma solução de fosfato de potássio monobásico (25 mM, pH 3,0)/acetonitrila (85:15 v/v). O método apresentou um tempo total de corrida de 8,0 minutos e mostrou-se linear no intervalo de 30 a 3500 ng/mL, com limite de quantificação de 30 ng/mL. A precisão intralote foi de 1,5%, 1,3% e 1% e a exatidão intralote foi de 100,2%, 103,6% e 102,6% para as concentrações de 90,1400 e 2800 ng/mL, respectivamente. Para as mesmas concentrações, a precisão interlote foi de 4,2%, 2,9% e 2,3% e a exatidão interlote foi de 104,1%, 103,4% e 100,7%, respectivamnete. Este método foi aplicado para a validação do perfil farmacocinético do norfloxacino administrado em 24 voluntários sadios de ambos os sexos. Conclusões: O uso da cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por fluorescência permite a quantificação de norfloxacino, com precisão, exatidão, sensibilidade e especificidade adequadas. Apoio Financeiro: InCB, CNPq, UNIFAC-HM, FINEP, FUNCAP e CAPES

10.009 EVALUATION IN SILICO AND IN VIVO OF ENTERIC COATED PANTOPRAZOLE FORMULATIONS AND PROVISIONAL BIOPHARMACEUTICAL CLASSIFICATION (BCS) AS CLASS III DRUG Campos, D. R.1; Vieira, N. R.1; Meurer, E. C.1; Pedrazzoli Jr, J.1; Coelho, E. C.1; Marchioretto, M. A.1; Barros, F. A. P.1; Calafatti, S.1 - 1USF - UNIFAG Introduction: The bioequivalence (BE) of two pantoprazole formulations were evaluated under fasted and fed conditionsas as well as in silico biopharmaceutical parameters of pantoprazole were applied to provisional BCS classification. Methods: The subjects received 40mg either of the reference or of test formulation under fasted (n=28) and fed (n=70) conditions. The studies were conducted under single dose and randomized crossover design. Plasma concentrations of pantoprazole were determined by LC-MS/MS. Bioequivalence between the formulations was assessed considering 90% confidence intervals (C.I) for the ratio of means for lnCmax and lnAUC0-t within 0.8-1.25. The clinical protocols were approved by The Institutional Review Board. In silico evaluation was performed using biopharmaceutical properties obtained from literature or calculated using suitable computacional softwares (ChemDraw Ultra 10.0 and ADMET Predictor). If dose number (Do) is lower or igual than 1, the drug is considered highly soluble. The drug is defined as highly permeable when the logP and human effective permeability (Peff) are higher than values relative of metoprolol.Results: Under fasting condition the 90% C.I for Cmax (0.94-1.03) and AUC0-t (0.89-0.99) were within the range of bioequivalence (0.8-1.25). However the data of fed study condition were not within the BE range. The in silico data demonstrated a Do of 0.8 and lower values of logP and Peff for pantoprazole. Our results demonstrated that the test formulation was bioequivalent to the reference in fasting condition but not under postprandial state. Moreover, the fed study shown a pronounced influence of food in the absorption of pantoprazole and the in silico data allowed the provisional BCS classification as a class III drug. Supported by: Medley S/A Indústria Farmacêutica

10.010 EVALUATION OF PANTOPRAZOLE FORMULATIONS IN BIORELEVANT MEDIUM AND IN VITRO – IN VIVO RELATIONSHIP (IVIVR) Campos, D. R.1; Klein, S.2; Vieira, N. R.1; Barros, F. A. P.1; Meurer, E. C.1; Coelho, E. C.1; Calafatti, S.1; Pedrazzoli Jr, J.1 - 1USF - UNIFAG; 2Johann Wolfgang Goethe University - Institute of Pharmaceutical Technology Introduction: The purposes of the study were to compare the in vitro dissolution behaviour of pantoprazole formulations in apparatus 2 and 3 applying biorelevant medium and to develop a possible in vitro – in vivo relationship (IVIVR). Methods: The in vivo study was conducted under single dose (n=28) and randomized crossover design. The clinical protocol was approved by The Institutional Review Board. Plasma concentrations of pantoprazole was determined by LC-MS/MS. Pharmacokinetic parameters and deconvolution data were obtained from the observed plasma-concentration time profiles by WinNonlin 5.2 - IVIVC toolkit. Bioequivalence between the formulations was assessed considering 90% confidence intervals (C.I) for the ratio of means for Cmax and AUC0-t within 0.8-1.25. Dissolution profiles were evaluated in biorelevant medium (Fasting State Simulating Intestinal Fluid – FaSSIF) in USP apparatus 2 and 3 and the dissolution curves were compared by either f2 values or model-independent approach. IVIVR analysis was applied to elucidate the overall absorption characteristics of each formulation considering either linear or non-linear correlation of fraction absorved (Fa) versus fraction dissolved (Fd). A linear correlation is obtained when the absorption is limited by dissolution and a non-linear correlation is stablished when the absorption is limited by permeability. The values of Fa were calculated by Loo-Riegelman model and the values of Fd were obtained from the in vitro dissolution profile (USP apparatus 2). Results: The bioequivalence was established between the formulations since 90% C.I for Cmax (0.94-1.03) and AUC0-t (0.89-0.99) were within the range of bioequivalence (0.8-1.25). The dissolution profiles in USP apparatus 2 demonstrated a similar disposition of the formulations in FaSSIF since the f2 value was higher than 50. The dissolution profiles in USP apparatus 3 were described by Weibull´s distribution because the faster dissolution rate of the products in this apparatus. The IVIVR indicated that absorption of pantoprazole is limited by permeability rather than dissolution because of the reverse L appearance of the Fa-Fd relationship (non-linear correlation). Moreover, the dissolution profiles in the biorelevant medium (FaSSIF) in both USP apparatus 2 and 3 may be used as a tool to predict the in vivo disposition of formulations of pantoprazole.

10.011 EFFECT OF EXERCISE INTERVENTION ON NITRIC OXIDE AVAILABILITY IN PATIENTS WITH METABOLIC SYNDROME. Gomes, V. A.1; Casella-Filho, A.2; Cau Sertorio, J. T.3; Da Luz, P. L.2; Chagas, A. C.2; Tanus-Santos, J. E.3 - 1UNICAMP - Ciências Médicas; 2InCor - FM - USP - Aterosclerose; 3FMRP - USP - Farmacologia Introduction and Objective: The metabolic syndrome (MetS) denotes a clustering of cardiovascular risk factors. The prevalence of MetS is increasing in our society due lifestyle changes that result in obesity, excessively rich nutrition and decreasing of physical activity. The measurement of nitric oxide (NO) bioavailability is a great clinical interest in the assessment of vascular health. We hypothesized that regular exercise training can increase NO production in individuals with MetS. The study protocol was approved by USP – CAPPesq Ethics Committee (number 547/05). Methods: We studied 19 patients (12 men and 11 women) with MetS. We measured the whole blood nitrite concentration before and after a 4 month aerobic exercise training program in individuals with MetS. In addition, we assessed the plasma concentration of cyclic guanosine monophosphate (cGMP), a second messenger of NO, in the same samples. Plasma cGMP concentrations were measured using a commercial enzyme immunoassay and the nitrite concentration was measured by chemiluminescence. Results: The exercise produced no significant changes in plasma cGMP (mean ± S.D. = 24.56 ± 3.18, 27.06 ± 4.99 fmol/µL before exercise and after exercise, respectively; P > 0.05), but the exercise produced increased whole blood nitrite concentrations by approximately 44 % (mean ± S.D. = 242.1 ± 119.5, 465.4 ± 228.9 ηmol before exercise and after exercise, respectively; P = 0.01). Discussion: Our findings suggest that exercise increases NO production in patients with metabolic syndrome which may have beneficial effects on the cardiovascular system by endogenous effects NO. Supported by: CNPq

10.012 NEUTROFILOS ESTIMULADOS POR IL-8 LIBERAM QUANTIDADES AUMENTADAS DE MMP-9 NA GRAVIDEZ PRÉ-ECLAMPTICA Moraes, D. P.1; Sandrim, V. C.1; Fernandes, K. S.1; Cavalli, R. C.2; Tanus-Santos, J. E.1 - 1FMRP - USP - Farmacologia; 2HC - FMRP - USP - Ginecologia e Obstetrícia Introdução: A metaloproteinase-9 (MMP-9), uma das MMPs que degradam a matriz extracelular, está envolvida na fisiopatologia de várias doenças cardiovasculares. Também é um marcador de risco cardiovascular liberado após estimulação por várias citocinas. Neste estudo, aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa, objetivamos avaliar comparativamente a quantidade de MMP-9 liberada por neutrófilos (NF) provenientes de mulheres não-grávidas (NG), gestantes sadias (GS) ou de gestantes hipertensas/pré-eclâmpticas (HG/PE). Métodos: Após coleta de sangue venoso em EDTA, isolamos os neutrófilos (NF) a partir do sangue total de 5 NG, 5 GS e 5 HG/PE com mono poly-resolving®. Incubamos 1x106 NT/mL com 20 ng/mL de IL-8 ou com veículo por 60 minutos à 37ºC. Após este período, centrifugamos o meio por 10 min a 1000 x g. MMP-9 foi quantificada no sobrenadante por zimografia. Resultados: Em níveis basais a atividade da MMP-9 no sobrenadante obtidos das culturas de NF foram significativamente diferente entre os grupos (teste One-Way ANOVA seguido por correção de Bonferroni), sendo que os valores obtidos no grupo HG/PE (1,98+/- 0,52 unidades arbitrárias u.a) foram significativamente maiores aos observados no grupo NG (1,15+/- 0,35 u.a., P<0,01) e GS (0,96+/- 0,09; u.a., P<0,05). O estímulo com IL-8 acarretou menor liberação (P<0,05 one-way ANOVA) de MMP-9 da cultura de NT proveniente de GS (1,76+/-0,71 u.a.) comparadas ao grupo NG (6,09+/-0,46 u.a.) ou HG/PE (8,92+/-4,05 u.a.). Discussão: Os resultados indicam que pode haver um mecanismo de atenuação da ativação de NT pela IL-8 durante a gestação, o qual pode ser perdido nas grávidas hipertensas/pré-eclâmpticas. Apoio Financeiro: CNPq, FAPESP and CAPES.

10.013 EVALUATION OF NITRIC OXIDE BIOAVAILABILITY IN SUBJECTS ENVIRONMENTALLY EXPOSED TO METHYLMERCURY Cau Sertorio, J. T.1; Barbosa Jr, F.1; Tanus-Santos, J. E.1 - 1FMRP - USP - Farmacologia Introduction Exposure to methylmercury has been associated with increased cardiovascular risk, which may be due to decreased activity of the enzyme endothelial nitric oxide synthase (eNOS). This may lead to increased oxidative stress and depressed nitric oxide (NO) availability. However, no previous clinical study has examined whether methylmercury exposure is associated with significant effects on biomarkers of NO activity. Methods We investigated whether there is an association between the circulating concentrations of plasma nitrites (which have been reported to reflect NO formation in vivo), and the concentrations of methylmercury in whole blood (Hg-B) from 281 methylmercury-exposed subjects. (Hg-B) concentrations were determined by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) coupled to a detector of inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS). Plasma nitrite concentrations were measured using an ozone-based chemiluminescence assay. Results No significant correlation were found between plasma nitrite and Hg-B concentrations (r = -0.03901; P=0.5149). Discussion Our initial results suggest that exposure to Hg does not significantly affect NO bioavailability. Other factors should be also assessed to check the possibility that Hg interacts with confounding factors and thus increase the cardiovascular risk. Supported by: FAPESP, CNPq.

10.014 AVALIAÇÃO DA EFICÁCIA DO CARPROFENO COMPRIMIDOS COMO ANTIPIRÉTICO EM CÃES. Pimpao, C. T.1; Pimentel, J. C.2; Figueiredo, M.3; Mikos, P. A.3; Budziak, C.3; Chi, K. D.1 - 1PUC - PR - Farmacologia e Imunologia Veterinária; 2Sespo Indústria e Comércio Ltda. - Pesquisa e Desenvolvimento; 3PUC - PR - Medicina Veterinária Introdução: Além da atividade antiinflamatória, os AINES (antiinflamatórios não esteroidais) também são utilizados no combate à dor e à febre. O processo febril ocorre quando os leucócitos, que estão fagocitando partículas estranhas, liberam pirogênios endógenos, estas substâncias distribuem-se no organismo e promovem a liberação de prostaglandinas, principalmente a PGE2, que atuam sobre o hipotálamo, aumentando o limiar térmico. Toxinas bacterianas, como a endotoxina, atuam sobre monócitos, macrófagos e células de Kupffer para produzir as citocinas, que agem como pirógenos endógenos (PGEs). O mecanismo de ação do carprofeno não está totalmente elucidado, no entanto, sabe-se que o bloqueio da síntese de prostaglandina através da inibição da enzima ciclooxigenase responde, pelo menos em parte, por suas propriedades antiinflamatória, analgésica e antipirética. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência de uma nova preparação do carprofeno comprimidos no controle da temperatura febril em cães – espécie alvo. Método: Foram utilizados 8 cães pertencentes ao Laboratório de Farmacologia Veterinária (PUCPR), SRD, adultos, machos e fêmeas. Todos os animais foram avaliados clinicamente (estado hígido, temperatura retal (T°C), freqüência cardíaca (FC) e respiratória (FR) antes, durante e após a experimentação. Os animais foram divididos em três grupos: grupo controle - C(somente LPS, n=2), grupo dipirona - D (n=2) e grupo carprofeno - C (n=4). A dipirona foi utilizada por já ter seu efeito antipirético confirmado em cães.Os animais receberam a dose de 0,5 µg/kg de Lipopolissacarídeo (LPS) Escherichia coli 0111:B4, iv. Uma hora antes da inoculação do LPS os animais do grupo D e C receberam dipirona (25 mg/kg) ou carprofeno comprimidos (4,4 mg/kg), respectivamente por via oral. Após o LPS, aferições (T°C, FC e FR) foram realizadas a cada 15 minutos até 180 minutos. Para a análise estatística dos dados foi utilizada ANOVA ONE – WAY para verificar se existe diferenças entre os grupos analizados. Resultados: O LPS estimula o vômito e provoca apatia em cães. Observamos que até 2 horas após a administração do LPS os dois medicamentos mantêm a temperatura retal até 38,5°C, considerada normal em cães adultos, porém após este período a temperatura tende a elevar-se mais no grupo carprofeno. O grupo que recebeu somente LPS mantém temperatura febril durante todo o experimento. Houve diferença significativa (p<0,05) da T°C entre os grupos experimentados. Para os outros parâmetros analisados não houve alterações significativas. Os animais foram observados por mais dois dias e todos os animais apresentaram comportamento normal. Discussão: A dose de 4,4 mg/kg de peso do carprofeno comprimido analisado apresenta resposta antipirética em cães, pois mantêm a temperatura abaixo de 38,5°C, por até duas horas após o estímulo do agente pirogênico.

10.015 UTILIZAÇÃO DE MEDICAMENTOS DURANTE A GRAVIDEZ NA CIDADE DO NATAL-RN Guerra, G. C. B.1; Ferreira, A. A. A.1; França, L. B.2; Artur, Q. B. S.2; Assunção, P. M. C.2; Cabral, R. X.2 - 1UFRN - BIOFÍSICA E FARMACOLOGIA; 2UFRN - ALUNO DO CURSO DE MEDICINA INTRODUÇÃO: O uso de medicamentos durante a gestação constituiu um desafio, uma vez que implica numa ação potencialmente danosa não apenas para a mulher, mas também para o feto. A maioria dos fármacos administrados a mulheres grávidas atravessa a barreira placentária e expõe o embrião em desenvolvimento a seus efeitos farmacológicos, os benefícios devem superam os riscos quando se prescreve medicamento à grávidas. OBJETIVOS: Estudar o uso de medicamentos por gestantes que realizaram pré-natal em unidades de saúde do SUS da cidade do Natal-RN. MÉTODOS: Foram entrevistadas 610 grávidas, entre o 1º e o 3º trimestre de gestação, que compareceram para consulta pré-natal em unidades de saúde localizadas nos 4 distritos sanitários de Natal-RN, entre maio e julho de 2006. Foi utilizado entrevistas estruturadas, baseando-se em perguntas uso-orientadas e medicamento-orientadas. Os fármacos foram classificados de acordo com o Anatomical Therapeutical Chemical Classification System - ATC (WHO Collaborating Centre for Drug Statistics Methodology,1990) segundo critérios de risco para a gestação da Food and Drugs Administration (FDA). As variáveis englobadas no estudo foram: dependentes (uso de medicamentos, classe farmacológica, fonte de informação para seu uso - se prescrito ou não - bem como trimestre da gestação em que foi usado); independentes (idade, escolaridade, estado conjugal, renda familiar, ocupação, gestações anteriores, tabagismo e doença crônica). Os dados coletados foram armazenados e processados no programa Statistica versão 5.5. Utilizou-se estatística descritiva e teste do qui-quadrado para análise dos resultados, considerando-se significante um valor p<0,05. RESULTADOS: Foram utilizados 1.505 medicamentos, média de 2,47 por mulher. O uso de um medicamento na gravidez foi relatado por 86,6% das gestantes. As classes mais utilizadas foram os antianêmicos (35,6%), analgésicos (24,9%), drogas para distúrbios gastrintestinais (9,1%) e vitaminas (7%). Foi usado no primeiro trimestre da gestação 43,6% dos fármacos. A automedicação ocorreu em 12,2% das vezes e esse índice aumenta quanto menor a escolaridade, maior o número de gestações e mais inicial a gravidez. Observou-se significância estatística na relação entre o uso de medicamentos prescritos por médico e as variáveis: escolaridade (p=0,0493), número de gestações (p=0,0103) e trimestre atual da gravidez (p=0,0001). Com isso, verificou-se que a taxa de automedicação aumenta quanto menor for o grau de instrução, maior for o número de gestações e mais inicial for a gravidez. DISCUSSÃO: Os valores obtidos no estudo acerca do uso de pelo menos um medicamento (86,6%) foram bem próximos dos valores mundiais (86%), todavia, um pouco inferiores se comparados aos estudos brasileiros (91,3%9 - 97,6%). Isso pode ter relação com o fato do nosso estudo representar uma realidade nordestina, que difere dos trabalhos realizados no sul e sudeste do país, onde uma população com maior renda pode implicar numa maior compra de medicamentos. As classes de medicamentos mais usadas concordaram com os estudos nacionais, em que prevalecem os antianêmicos, os analgésicos, os fármacos que afetam a função gastrintestinal e os antiinfecciosos vaginais, havendo pequenas variações nas percentagens. CONCLUSÕES: Podemos inferir que o perfil das gestantes com maior tendência a usar medicamentos é composto por mulheres acima de 30 anos, com mais de 8 anos de estudo, com renda familiar superior a 2 salários mínimos, casadas ou em união estável, empregadas e que iniciaram o pré-natal no primeiro trimestre gestacional.

10.016 MODULATION OF NITRIC OXIDE FORMATION BY ENDOTHELIAL NITRIC OXIDE SYNTHASE GENE HAPLOTYPES Metzger, I. F.1; Cau Sertorio, J. T.1; Tanus-Santos, J. E.1 - 1FMRP - USP - Farmacologia Background: Nitric oxide (NO) is a major regulator of the cardiovascular system. However, the effects of endothelial nitric oxide (eNOS) gene polymorphisms or haplotypes on the circulating concentrations of nitrite (a sensitive marker of NO formation) and cGMP are unknown. Here we examined the effects of eNOS polymorphisms in the promoter region (T-786C), in exon 7 (Glu298Asp), and in intron 4 (4b/4a), and eNOS haplotypes on the plasma levels of nitrite and cGMP. Methods: We genotyped 142 healthy subjects by PCR-RFLP. To assess NO formation, the plasma concentrations of nitrite, and cGMP were determined using an ozone-based chemiluminescence assay and an enzyme immunoassay. Haplotypes were inferred using PHASE 2.1 program. Results and Discussion: No significant differences were found in age, body mass index, sy stolic and diastolic arterial blood pressure, heart rate, total cholesterol, triglycerides, cGMP, and nitrite among the genotype groups for the three polymorphisms studied here (all P>0.05). Interestingly, the C-4b-Glu haplotype was associated with lower plasma nitrite concentrations (262.4±33.7 nM) than those found in the other haplotype groups (T-4b-Glu = 485.8 ± 35.91 nM; T-4b-Asp = 474.4 ± 56.5 nM; C-4b-Asp = 440.2 ± 43.3 nM; and C-4a-Glu = 409.9 ± 56.7 nM) (P<0.05; mean±SE), but not with different cGMP levels (P>0.05). These findings suggest that eNOS gene variants combined within a specific haplotype modulate NO formation, although individual eNOS polymorphisms probably do not have major effects. Supported by: CNPq, Fapesp e Capes

10.017 EFFECT OF HAPLOTYPES OF MATRIX METALLOPROTEINASE (MMP)-9 GENE ON PLASMA MMP-9 ACTIVITY IN HEALTHY SUBJECTS Vasconcellos, V. B.1; Demacq, C.1; Marcaccini, A. M.2; Gerlach, R. F.2; Silva Jr., W. A.3; Tanus-Santos, J. E.1 - 1FMRP - USP - Farmacologia; 2FORP - USP - Morfologia; 3FMRP - USP - Genética Background: Plasma MMP-9 levels have been identified as a predictor of cardiovascular risk in patients with coronary artery diseases and stroke. Moreover, two functional substitutions in the promoter region of the MMP-9 gene have been associated with several diseases, including cardiovascular. This study aimed at examining the combined effects (haplotype analysis) of this polymorphisms (C-1562T and microsatellite (CA)13-25) at plasma pro-MMP-9 and MMP-9 activities in healthy subjects. Methods: We studied 177 healthy male white volunteers (age range: 20-55 years) who were nonsmokers and were not taking any medicines. Genomic DNA was extracted from whole blood and genotypes for the C–1562T and the microsatellite (CA)n polymorphisms in the promoter region of MMP-9 gene were determined. Plasma from venous blood collected into EDTA tubes was stored -70o C until assayed for pro-MMP-9 and MMP-9 activities by gelatin zymography. Results: The frequency of the alleles “C” and “T” from C-1562T polymorphism and the alleles with lower than 21 CA repeats (“L”) and with 21 or higher (“H”) were 90% and 10%, and 47% and 53%, respectively. We found no differences in pro-MM9 and MMP-9 activity levels among the haplotypes and the genotypes groups (all P>0.05). Discussion: While the present study indicates lack of effect for the C− 1562T and (CA)n haplotypes on MMP-9 activity in plasma and it is known that basal expression of MMP-9, which is low in most cell types, can increase by more than 100-fold when required by physiological or pathological processes, we could speculate that increased circulating levels of MMP-9 in patients with cardiovascular diseases could result from the interaction between genetic (C-1562T and (CA)n polymorphisms) and environmental factors. Supported by: CAPES, FAPESP, CNPq.

10.018 ESTUDO PILOTO DE BIODISPONIBILIDADE DE DUAS FORMULAÇÕES CONTENDO CIPROFLOXACINO EM VOLUNTÁRIOS SADIOS Leite, I. O.1; Santana, A. P. M.1; Wong, D. V. T.1; Moraes, R. A. de1; Martiniano, G. V. M.1; Frota Bezerra, F. A.1; Moraes, M. O.1; Moraes, M. E. A.1 - 1UFC - Fisiologia e Farmacologia - UNIFAC Introdução: O ciprofloxacino (CPX) é um inibidor da enzima DNA girase usado como agente antibacteriano. O objetivo deste estudo foi avaliar se as formulações estudadas de CPX comprimidos de 500 mg produzida pela Biolab Sanus Farmacêutica Ltda (formulação teste) e Cipro® comprimidos de 500 mg produzida pela Bayer S.A. (formulação referência) apresentam uma clara tendência a bioequivalência. Métodos: Foram selecionados 8 voluntários saudáveis de ambos os sexos com idade entre 18 e 50 anos através de consulta médica, eletrocardiograma e exames laboratoriais (hemograma completo, bioquímica, sumário de urina, sorologia para hepatites B e C, HIV e β-HCG para mulheres). O estudo constou de dois internamentos com intervalo de 7 dias. O projeto de pesquisa, com o protocolo experimental e o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido foram submetidos e aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa da UFC. Amostras de sangue foram coletadas antes e até 24 horas após a administração do fármaco. As concentrações plasmáticas de CPX foram determinadas por método desenvolvido e validado de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detecção por fluorescência (HPLC-DLF). Os parâmetros concentração máxima atingida (Cmax) e área sob a curva (ASC) foram determinados a partir da curva de concentração versus tempo. Foi então calculada o IC 90% para a razão das médias geométricas (teste/referência) de Cmax e ASC. Resultados e Discussão: A idade dos voluntários selecionados variou de 21 a 42 anos com média ± desvio padrão (30,75 ± 7,61) anos e índice de massa corporal variando de 21,4 - 29,6 (24,77± 2,56) kg/m2. As duas formulações de CPX foram bem toleradas havendo 2 relatos de cefaléia de leve e moderada intensidade classificados como não relacionados ao fármaco sob investigação. A média geométrica da razão entre teste e referência do parâmetro farmacocinético Cmax foi de 105,739, com o intervalo de 90% de confiança (89,87% -124,40%) e coeficiente de variação intra-individual de 16,851%. A média geométrica da razão entre teste e referência do parâmetro farmacocinético ASC0-ult h. foi de 105,075, com o intervalo de 90% de confiança (96,29% – 114,63%). e coeficiente de variação intra-individual de 8,962%. Através da análise do poder do teste (>95,000%) e do cálculo de probabilidade pode-se concluir que a probabilidade das formulações de Ciprofloxacino serem bioequivalentes para Cmax e ASC0-ulth é de 41,97% e 69,23% respectivamente. Assim, com o poder do teste maior que 95% serão necessários 24 voluntários para a realização do estudo. Apoio Financeiro: InCB, CNPq, UNIFAC-HM, FINEP, FUNCAP e CAPES

10.019 HAPLOTYPES OF VITAMIN D RECEPTOR MODULATE THE CIRCULATING LEVELS OF LEAD IN EXPOSED SUBJECTS De Rezende, V.1; Barbosa Jr, F.2; Montenegro, M. F.2; Sandrim, V. C.2; Gerlach, R. F.3; Tanus-Santos, J. E.2 - 1UNICAMP - Farmacologia; 2FMRP - USP - Farmacologia; 3FORP - USP - Morfologia Introduction: Genetic factors influence blood lead (Pb-B) concentrations in lead exposed subjects (1). Several genetic variations (single nucleotide polymorphisms; SNP) have been identified in the Vitamin D Receptor gene (VDR)(2). Few studies have previously examined the effects of polymorphisms in VDR gene on the circulating concentrations of lead in exposed populations (3,4). Moreover, no previous study has examined the combined effects of polymorphisms (haplotypes) in VDR gene on the circulating concentrations of lead in exposed subjects. Material and Methods: This study aimed at examining the haplotype of three polymorphisms (BsmI, ApaI and FokI) in VDR gene on Pb-B and on the concentrations of lead in plasma (Pb-P) in 150 environmentally exposed subjects. Genotypes were determined by RFLP, and Pb-P and Pb-B were determined by inductively coupled plasma mass spectrometry and by graphite furnace atomic absorption spectrometry, respectively (5). Results: Subjects with the aa, (ApaI n=46) or ff (FokI n=14) genotypes have lower P-Pb (0.43* ± 0.09mg/L and 0.22* ± 0.08 mg/L, respectively) and %Pb-P/Pb-B (0.50* ± 0.06 and 0.37* ± 0.09, respectively) than subjects in the other genotype groups (*P<0.05). We found that polymorphisms of VDR gene modulate the Pb-P (all P<0.05) and that H8 haplotype (which combines the a, b, and f alleles; n=15) is associated with lower Pb-P (0.3*± 0.06mg/L), Pb-B (50.0* ± 7.4mg/L) levels and %Pb-P/Pb-B (0.47*±0.07) than those found in the other haplotype groups (*p<0.05). Discussion: The haplotype analysis has been valued as a more powerful approach than the analysis of single polymorphisms. In addition, no previous study has examined the effects of polymorphisms in VDR gene on the concentrations of lead in plasma (P-Pb), which reflects the diffusible lead portion in our body and is probably more relevant to lead toxicity than the concentrations of lead in whole blood (Pb-B). References: 1-Onalaja A. Environ Health Perspect 108; 23 (2000) 2-Uitterlinden A. Gene 338; 143 (2004) 3-Morrison N. Proc Natl Acad Sci 89; 6665 (1992) 4-Schwartz B. Environ Health Perspect 108; 199 (2000) 5- Schutz A. Occup Environ Med 53; 736 (1996) Supported by: CAPES, FAPESP, CNPq

10.020 GATIFLOXACIN PHARMACOKINETIC PROFILE AND BIOAVAILABILITY DETERMINATION IN RATS Tasso, L.1; Bettoni, C. C.2; Dalla Costa, T.1 - 1UFRGS - PPG - Ciências Farmacêuticas; 2UFRGS - Farmácia Introduction: Gatifloxacin (GATI) has been proposed as a treatment option for a variety of bacterial infections, e.g., community-acquired respiratory tract infections due to its extended in vitro spectrum of activity, favorable pharmacokinetic characteristics, and lower potential for drug resistance (1). However, only limited pharmacokinetic animal data can be found in the literature for the drug and parameters such as bioavailability are not reported. The objective of this study was to determine the pharmacokinetic parameters of GATI in rats, mainly the absolute bioavailability, viewing the future development of a pharmacokinetic/pharmacodynamic model to describe the drug temporal antimicrobial effect. Methods: The study was approved by the UFRGS Ethics in Research Committee (#2005413). GATI pharmacokinetic evaluation was conducted using two groups of male Wistar rats (250-300g): single i.v. bolus (6 mg/kg; n = 8) and p.o. (12 mg/kg; n = 6). The animals were anesthetized with urethane (1.25 mg/kg, i.p.) and blood was withdrawn from the canulated carotid artery at pre-determined time points up to 10 h. Plasma was separated by centrifugation and stored at -20 °C until analysis by a validated SPE-HPLC (2). The individual pharmacokinetic parameters were determined by non-compartmental and compartmental approach using Scientist® v. 2.0 computer program for both doses. The parameters were compared by Student “t” test. Results and Discussion: The mean pharmacokinetic parameters determined for GATI by non-compartmental and compartmental analysis after i.v. administration were: half-life (t½) of 3.3±0.8 h and 2.4±0.4 h; area under the curve (AUC0-∞) of 6.6±1.3 µg.h/mL and 6.0±1.1 µg.h/mL, clearance (CLtot) of 0.9±0.2 L/h/kg and 1.0±0.2 2 L/h/kg; volume of distribution (Vdss) of 2.8±0.4 L/kg and 2.7±0.2 L/kg and mean residence time (MRT) of 3.1±0.9 h and 2.7±0.5 h, respectively. For the orally administered group the parameters obtained were t½ 3.7±0.3 h and 3.2±0.6 h; AUC0-∞ 4.1±1.6 µg.h/mL and 3.7±1.2 µg.h/mL; CLtot 1.0±0.3 L/h/kg and 1.1±0.3 L/h/kg; Vdss 3.1±1.0 L/kg and 4.9±1.7 L/kg and MRT 3.3±0.1 h and 3.1±0.2 h for non-compartmental and compartmental approaches, respectively. There was no statistical difference between compartmental and non-compartmental analysis for both doses and administration routes investigated, except for the AUC0-∞. GATI oral bioavailability in rats turned out to be 31 %. The individual plasma data was best fitted by a two-compartment model after i.v. dosing. After oral administration, a one-compartment model with first order elimination adequately described the experimental data. GATI exhibits a very low absorption when orally administered (ka = 5.0±1.8 h-1), reaching peak levels of 0.9±0.3 µg/mL at 0.6 h. The distribution after i.v. dosing to rats is fast with a half-life of 3.6±1.6 h-1. The data obtained after GATI i.v. administration to rats were different from those described in the literature for humans. Conclusions: GATI exhibits a very low absorption after oral dosing, with a low bioavailability and a biphasic disposition after intravenous dosing to rats. References: (1) Fish, D.N. (2001) Pharmacother. 21:35; (2) Tasso, L & T. Dalla Costa (2007) J. Pharm. Biomed. Anal. 44:205. Acknowledgments: FAPERGS (project # 05/23220), BIC FAPERGS.

10.021 VORICONAZOLE PHARMACOKINETICS IN RAT PLASMA AND EVALUATION OF ITS BIOAVAILABILITY BY DISPOSITION DECOMPOSITION ANALYSIS Araujo, B. V.1; Silva, C. F.2; Haas, S. E.1; Dalla Costa, T.1 - 1UFRGS - PPG - Ciências Farmacêuticas; 2UFRGS - Farmácia Introduction: Voriconazole (VRC), a new triazolic antifungal agent, presents a potent and wide-spectrum of activity. Although the clinical use of VRC is approved and current, its pharmacokinetics (PK) in rodents is poorly described in literature and parameters such as bioavailability (F) are not yet known, besides many studies describing the drug pharmacodynamics (PD) in vivo utilizing these animals. The knowledge of VCR PK will allow the establishment of a true PK/PD relationship. Thus, the aims of this study were to evaluate VRC PK in plasma and to determine its F in rats, after administration by oral and intravenous routes. Methodology: Animal experiments were approved by UFRGS Ethics in Research Committee (# 2004300). VRC PK was investigated in male Wistar rats anesthetized by urethane (125 mg/kg) after oral (40 mg/kg) and i.v. administration (2.5, 5 and 10 mg/kg) (n = 6/ group). Plasma concentrations were determined by a validated LC/MS-MS method (Araujo et al., J. Pharmaceut. Biomed. Anal. 2007, doi:10.1016/j.jpba.2007.03.026). The PK evaluation was conducted by non-compartmental and compartmental analysis employing Excel® and Scientist® 2.01, respectively. Five compartmental models were tested to describe the PK profile of VRC in rats after i.v. administration. Determination of F was carried out by disposition decomposition analysis (DDA) (Veng-Pedersen et al., J. Pharm. Sci. 84, 760, 1995) using data obtained after VRC 10 mg/kg i.v. and 40 mg/kg oral dosing. The Model Selection Criteria and the determination coefficient were the statistical criteria applied to determine the best model to describe the PK profiles of the drug after each dose investigated. The statistical analysis was carried out by ANOVA. Results and Discussion: The elimination of VRC was characterized by non-linear pharmacokinetics in almost all doses tested, excepted for the lower i.v. dose (2.5 mg/kg), where a two-compartmental model with linear elimination (I) was able to describe the PK profile. For the other two doses administered, only the two-compartment model with Michaelis Menten (MM) elimination (II) was able to describe the data. The distribution rate constants between central and peripheral compartment and vice-versa (K12 and K21) determined by models I and II after i.v. administration of VRC 2.5, 5 and 10 mg/kg doses were, respectively: 1.94 ± 0.54 h-1 and 2.03 ± 0.09 h-1; 2.24 ± 1.67 h-1 and 2.05 ± 0.12 h-1; 1.67 ± 1.2 h-1 and 1.93 ± 0.29 h-1, showing that the distribution process was not altered besides the saturation of the drug elimination observed for the higher doses. The values of Michaelis (Km) constant and maximum elimination rate (Vmax) calculated using model II after 5 and 10 mg/kg i.v. dosing were 1.21 ± 0.25 µg/mL and 2.40 ± 0.54 µg/h and 1.10 ± 0.12 µg/mL and 2.74 ± 0.84 µg/h, respectively, similar to those described previously in the literature (Roffey et al. Drug Met. Disp., 31, 731, 2003). VRC oral absolute F determined by DDA was 70%. Conclusions: VRC pharmacokinetics in rats exhibits a non-linear behavior, described by two compartments disposition and MM elimination, with a rapid distribution phase by diffusion followed by a saturable metabolic elimination phase. The DDA approach allowed the establishment of VRC absolute bioavailability after oral dosing despite the drug non-linear behavior. Supported by: CNPq/BRAZIL

10.022 PHARMACOKINETIC-PHARMACODYNAMIC MODELING OF THE FUNGISTATIC EFFECT OF VORICONAZOLE AGAINST Candida albicans Araujo, B. V.1; Silva, C. F.2; Haas, S. E.1; Dalla Costa, T.1 - 1UFRGS - PPG - Ciências Farmacêuticas; 2UFRGS - Farmácia Introduction: Although minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (MFC) have been used as the most popular prediction tools for antifungal action, they have shortcomings. The MIC and MFC do not consider time-related antifungal effects, such as killing rate and post-antifungal effect. In this regard, the concept of pharmacokinetic and pharmacodynamic (PK/PD) modeling has been introduced to help interpreting susceptibility breakpoints and to improve antimicrobial dosing regimens in clinical practice. This approach, however, has not been applied to antifungal agents yet, being restricted only to antimicrobial agents. Thus, the aim of this study was to propose a PK-PD modeling for a new antifungal agent, voriconazole (VRC), against C. albicans employing an in vitro infection model. Methodology: A one-compartment in vitro model was used to simulate free VRC tissue levels reached after oral administrations of 2, 3 and 4 mg/kg doses at different dosing intervals: q12, q8 and q24 hours. The steady state levels obtained after the administration of these doses by continuous infusion were also simulated. The infection model consisted of a sterile plastic bottle containing 20 mL of RPMI 1640 medium buffered with MOPS 0,165 M inoculated with C. albicans ATCC 10231 (2.5 x 104 UFC/mL). VRC was added to the model to reach concentration equivalent to the free peak tissue levels expected after each dose. To simulate the half-live of the drug (6 h), 1 mL of medium containing antifungal was withdrawn from the bottle via a sterile filter (0.22 µm) every 30 min and replaced by fresh medium. The growth rate (k) was determined in control experiments in the absence of drug. The antifungal effect was evaluated by determining the number of yeasts in the model over time up to 24 hours. An Emax-model was used to described the variation in the number of viable yeasts (dN/dt) as a function of the growth rate (k) and fungistatic rate (Fmax) according to the equation dN/dt = {[K x (1-N/Nmax)]- [(Fmax x C)/(EC50 + C)] x N}, where Nmax is the maximum number of viable yeasts that can grow in the medium before reaching the stationary phase; C is the free tissue concentration of VRC, and EC50 is the antifungal concentration at which 50% of the maximum effect is obtained. The data was modeled using the software Scientis® v 2.01. The model selection criteria (MSC) and the determination coefficient were used to determine the model’s ability to describe the effect-time profiles after drug exposure. Results and Discussion: VRC showed a fungistatic effect against C. albicans as described in the literature previously (MANAVATHU et al., Antimicrob Agents Chemother, 42, 3018, 1998). The Emax-model used was appropriate to describe the pharmacodynamic effect of VRC against C. albicans, with MSC ranging from 2.25 to 4.34. The average growth half-life in the absence of VRC was 1.3±0.5 h and the maximum fungistatic effect was 0.42±0.13 h-1. The average EC50 for the various dosing regimens evaluated was 0.55 ng/mL. Conclusions: The PK-PD model tested adequately described VRC antifungal activity. The parameters obtained can be used to provide a more rational tool for VRC dosing regimen decisions. Supported by: CNPq/BRAZIL

10.023 TISSUE DISTRIBUTION AND MOLECULAR MODELING OF THE N-PHENYLPIPERAZINE DERIVATIVES LASSBIO-579 AND LASSBIO-581 Conrado, D. J.1; Verli, H.2; Neves, G. A.3; Fraga, C. A. M.4; Barreiro, E. J.4; Rates, S. M. K.2; Dalla Costa, T.2 - 1UFRGS - Produção e Controle de Medicamentos; 2UFRGS - PPG - Ciências Farmacêuticas; 3UFRGS - Farmácia; 4UFRJ - Fármacos - LASSBio Introduction: The search for more efficient dopaminergic drugs lead to the design and synthesis of new N-phenylpiperazine derivatives by molecular hybridization of the clozapine and L-741, aiming to obtain drugs with clozapine-like therapeutic efficacy devoid of its hematological side effects. Among the compounds obtained, LASSBio-579 displayed peculiar activity on the dopaminergic system, justifying its pre-clinical pharmacokinetic evaluation. The present work aimed to determine tissue distribution of the new N-phenylpiperazine derivative LASSBio-579 and to compare and explain, at a molecular level, the results obtained with those described for its bioisosteric derivative LASSBio-581. Methodology and Results: Experiments were approved by UFRGS Ethics in Research Committee (#2003239). LASSBio-579 penetration was investigated in homogenates of brain and other tissues after 10 mg/kg i.v. dosing. The tissues were frozen until assayed by a validated LC-MS/MS method after homogenization with saline and protein precipitation with acetonitrile. Through molecular dynamics simulations the conformational profiles of LASSBio-579 and LASSBio-581 were characterized in aqueous solution, showing an equivalent interaction with solvent molecules but a distinct conformational distribution. As a consequence, the lower LASSBio-579 brain penetration (6.3%) in comparison to that of LASSBio-581 (39.2%) is not due compounds lipophilicity but could be attributed to differences in active transport or efflux mechanism during the penetration process, besides of different LASSBio-579 and LASSBio-581 plasma protein binding (93% versus 71%), which could be also attributed to dissimilar interaction between them and proteins. Conclusions: The molecular modeling suggests that LASSBio-579 and LASSBio-581 present similar lipophilicity and their difference in pharmacokinetic parameters could be related to the compounds conformation in aqueous medium, which would lead to differences in process that involves drug-protein interaction. Supported by: PROCAD CAPES, FAPERGS, IM-INOFAR/CNPq

10.024 PHARMACOKINETICS OF NANOENCAPSULATED INDOMETHACIN ETHYL-ESTER AND EVALUATION OF INDOMETHACIN FORMATION IN VIVO Cattani, V. B.1; Pohlmann, A.2; Dalla Costa, T.2 - 1UFRGS - Produção e Controle de Matéria Prima; 2UFRGS - PPG - Ciências Farmacêuticas Introduction: A number of novel indomethacin esters were synthesized and tested for their cyclooxygenase (COX-1 and COX-2) inhibition properties. Indomethacin ethyl-ester (IndOEt) proved to be a selective COX-2 inhibitor. When nanoencapsulated, IndOEt (10 mg/kg p.o.) showed an anti-inflammatory activity 29% lower than that presented by indomethacin at the same dose, 4 hours after dosing, in the rat paw edema induced by carragenin (Cruz et al., J. of Nanosc. and Nanotechnol., v. 6, p. 3154-3162, 2006). Objectives: To investigate the plasma pharmacokinetic profile of IndOEt after the administration of the drug nanoencapsulated (IndOEt-NC) to rats and its conversion into indomethacin (IndOH). Methodology: Animal experiments were approved by UFRGS Ethics in Research Committee (# 2005478). The IndOEt-NC were prepared using poly(ε-caprolactone) and Mygliol® by nanoprecipitation, resulting in formulations with IndOEt content of 1.0 mg/mL. The pharmacokinetics was investigated in male Wistar rats after oral administration of IndOEt-NC (10 mg/kg) (n = 7/group). The control group was treated with IndOH in aqueous suspension (10 mg/kg) by oral route (n = 7). Blood samples were withdrawn from the lateral tail vein at pre-determined time points up to 24 hours. IndOEt and IndOH plasma concentrations were determined by a validated HPLC/UV method. Non-compartmental and compartmental approaches were used for individually analyze the profiles using Excel® 2003 or Scientist® 2.01, respectively. Results and Discussion: The nanocapsules presented IndOEt content of 1.04 mg/mL, pH of 5.6 and particle size around 267 nm. After IndOEt-NC oral administration, only IndOH was detected in plasma, suggesting a fast hydrolysis of the ester. IndOH plasma profiles after the administration of IndOEt or IndOH were modeled by a one compartment open model with first order absorption. The IndOH parameters after administration of IndOEt-NC and IndOH were similar, with clearance of 22.7±7.8 and 24.3±4.6 mL/h/kg, volume of distribution of 0.2±0.03 and 0.2±0.04 L/h and half-life of 6.7±2.3 and 6.1±1.4 h, respectively. The extent of IndOH absorption was smaller after the administration of IndOEt-NC than after the administration of IndOH, with a relative bioavailability of 65%, already taking into consideration the molecular weight of both compounds. The rate of IndOH absorption was also significantly smaller after the administration of IndOEt-NC than after the administration of the drug itself (ka = 2.8±1.4 h-1 and 0.5±0.22 h-1, respectively) probably due to the time needed for IndOEt to be released from NC and converted into IndOH before/during absorption. Conclusions: After oral administration, IndOEt-NC is quickly converted into IndOH, confirming that IndOEt is a pro-drug of IndOH. After oral administration, the ester is rapidly converted and only IndOH reaches the inflamed tissues to produce the anti-inflammatory activity observed. Four hours after dosing, IndOH plasma concentration following IndOEt-NC p.o. administration was 26% lower than that observed after IndOH administration. This difference is similar to that observed in the pharmacodynamic study, indicating that the IndOH formed from IndOEt is responsible for the activity determined in the edema paw assay. Acknowledgments: CAPES/Brazil

10.025 QUININE-LOADED NANOCAPSULES: PHARMACOKINETIC PROFILE AND ERYTHROCYTE BINDING IN Plasmodium berghei INFECTED ANIMALS Haas, S. E.1; Oliveira, L. K.2; Bettoni, C. C.2; Guterres, S. S.1; Dalla Costa, T.1; Dalla Costa, T.1 - 1UFRGS - PPG - Ciências Farmacêuticas; 2UFRGS - Farmácia Introduction: Although chloroquine is still the first-line treatment for uncomplicated falciparum malaria, this drug has been showing decreased efficacy all over the world due to the development of resistance. In this context, the utilization of quinine (QN) has increased besides its toxicity. We prepared QN-loaded nanocapsules (NC) (2 mg/mL) that were 30 % more effective than the free drug for treating P. berghei infected rats (Haas et al., XVIII Congresso Latinoamericano de Microbiologia, Pucón (Chile), v. 18, p. 142, 2006). Objectives: The aim of this work was to evaluate whether the QN efficacy improvement when loaded to NC happens due to modification in QN pharmacokinetic (PK) profile or due to alteration of its erythrocyte binding. Methodology: Protocol approved by UFRGS Ethics in Research Committee (#2005477). 25 mg/kg NC-QN or QN solution were intravenously administrated to P. berghei infected Wistar rats (n = 7/group). The infection protocol was previously published (Pedroni et al., Exp. Parasitol, v. 113, p. 193-196, 2006). Blood samples were collected at pre-determined time points and quantified by a validated HPLC/fluorescence method. QN free or NC-QN erythrocyte binding was evaluated in fresh P. berguei infected erythrocytes. Plasma and buffy coated were discarded. The remaining red cells were washed three times with glucose solution pH 7.4. Cells were ressuspended in buffer and the hematocrit adjusted to 0.48. The QN (free or NC) was added to reach a final concentration of 5 µg/mL. After 30 min incubation (37 °C) samples were centrifuged and QN was quantified in the supernatant. The sediment was hemolysed with distillated water (1:1 v/v) and QN was quantified. The erythrocyte binding coefficient was calculated as the relation between drug quantity added, hematocrit and drug concentration in the supernatant (Derendorf and Garret, Pharmakokinetic Einfuhrung in die Theorie und Relevanz fur die Arzneimitteltherapie, Stuttgart:Wiss. Verl-Ges, 1987). Results and Discussion: The NC-QN resulted in significant decrease in QN half-life compared to the free drug (32.9±8.9 and 69.8±44.6 min, respectively) in P. berghei infected rats (α = 0,05). This decrease was related to a tendency of increasing CLtotal (7.1±3.3 to 9.9±2.1 L/h/kg, for QN free and NC-QN, respectively). No alteration in the volume of distribution was observed after QN nanoencapsulation. In this context, QN increased efficacy when administered as NC-QN could not be explained based on the plasma PK parameters because a decrease in half-life will lead to lower plasma levels after nanoencapsulation in comparison to the levels obtained after administration of drug free solution. The binding study showed that NC-QN doubled QN erythrocyte binding compared to QN free (from 3.03±0.07 to 6.25±0.25) in infected erythrocytes (α = 0,05). Therefore, the nanoencapsulation increased the interaction between QN and the erythrocyte and this mechanism is probably responsible for the drug increased efficacy when nanoencapsulated. Conclusion: The enhancement of QN efficacy observed when the drug is administered as NC-QN is due to the increase in QN erythrocyte binding caused by nanoencapsulation. Acknowledgements: CAPES, CNPq/Brazil (project # 475831/2006-3)

10.026 ENDOTHELIAL NITRIC OXIDE SYNTHASE HAPLOTYPES AND RESISTENCE TO ANTIHYPERTENSIVE DRUG THERAPY Moraes, D. P.1; Sandrim, V. C.1; Yugar-Toledo, J. C.2; Desta, Z.3; Flockhart, D. A.3; Moreno Junior, H.2; Tanus-Santos, J. E.1 - 1FMRP - USP - Pharmacology; 2UNICAMP - Pharmacology; 3Indiana University School of Medicine - Clinical Pharmacology Introduction: Most hypertensive patients require two or more drugs to control arterial blood pressure effectively. Although endothelial nitric oxide synthase (eNOS) haplotypes have been associated with hypertension, it is unknown whether eNOS genotypes/haplotypes are associated with resistance to antihypertensive therapy. Methods: We studied the distribution of three eNOS genetic polymorphisms: single nucleotide polymorphisms in the promoter region (TS786C), and in exon 7 (Glu298Asp), and a variable number of tandem repeats in intron 4 (b/a). Genotypes were determined for 111 normotensive controls (NT), 116 hypertensive individuals who were well controlled (HT), and 100 hypertensive individuals who were resistant to conventional antihypertensive therapy (RHT). We also compared the distribution of eNOS haplotypes in the three groups of subjects. This studied was approved by ethics committee. Results: No differences were found in genotype or allele distribution among the three groups (all P>0.05). Conversely, the ‘C Glu b’ haplotype was more commonly found in the NT than in the HT or RHT groups (21 versus 8 and 7%, respectively; both P<0.00625). In addition, the ‘C Asp b’ haplotype was more commonly found in the HT or RHT groups than in the NT group (22 and 20%, respectively, versus 8%; both P<0.00625). The distribution of eNOS haplotypes was not significantly different in the HT and RHT groups (P>0.05). Discussion: Whereas our findings suggest a protective effect for the ‘C Glu b’ haplotype against hypertension and that the ‘C Asp b’ haplotype increases the susceptibility to hypertension, our results suggest that eNOS haplotypes are not associated with resistance to antihypertensive therapy. Supported by: CNPq, FAPESP and CAPES.

10.027 AVALIAÇÃO DA EFICÁCIA DO MELOXICAM COMPRIMIDOS COMO ANTIPIRÉTICO EM CÃES. Pimpao, C. T.1; Lima, L. A.2; Figueiredo, M.3; Mikos, P. A.3; Takada, R. A.3; Mira, R. T.1 - 1PUC - PR - Farmacologia e Fisiologia Veterinária; 2Sespo Indústria e Comércio Ltda. - Assistente Técnico; 3PUC - PR - Medicina Veterinária Introdução: Os antiinflamatórios não-esteróides (AINES) estão entre os agentes terapêuticos mais utilizados. Atualmente, há mais de cinqüenta diferentes AINES no mercado e há, ainda, um fluxo contínuo de novas preparações. O grande número de novas substâncias significa que nenhuma dessas, até o momento, tem sido ideal no controle ou modificação dos sinais da inflamação, sem que haja efeitos deletérios no indivíduo. O meloxicam é um moderno derivado oxicano que desenvolve uma atividade inibitória seletiva sobre a COX-2 na cascata biossíntética das prostaglandinas. É indicado como antiinflamatório, analgésico, antipirético e antiexsudativo no tratamento de processos inflamatórios degenerativos ósseos e cartilaginosos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência de uma nova preparação do meloxicam comprimidos no controle da temperatura febril em cães – espécie alvo. Método: Foram utilizados 8 cães pertencentes ao Laboratório de Farmacologia Veterinária (PUCPR), SRD, adultos, machos e fêmeas. Todos os animais foram avaliados clinicamente (estado hígido, temperatura retal (T°C), freqüência cardíaca (FC) e respiratória (FR) antes, durante e após a experimentação. Os animais foram divididos em três grupos: grupo controle - C (somente LPS, n=2), grupo dipirona - D (n=2) e grupo meloxicam - M(n=4). A dipirona foi utilizada por já ter seu efeito antipirético confirmado em cães. Os animais receberam a dose de 0,5 µg/kg de Lipopolissacarídeo (LPS) Escherichia coli 0111:B4, iv. Uma hora antes da inoculação do LPS os animais do grupo D e M receberam dipirona (25 mg/kg) e meloxicam comprimidos (0,2 mg/kg), respectivamente por via oral. Após o LPS, aferições (T°C, FC e FR) foram realizadas a cada 15 minutos por180 minutos. Para a análise estatística dos dados foi utilizada ANOVA ONE – WAY para verificar diferença entre os grupos. Resultados: O LPS estimula o vômito e provoca apatia em cães. Observamos que até 2 horas após a administração do LPS os dois medicamentos conseguem manter a temperatura retal até 38,5°C, considerada normal em cães adultos, porém após este período a temperatura tende a elevar-se mais no grupo meloxicam. O grupo que recebeu somente LPS mantém temperatura febril durante todo o experimento. Houve diferença significativa (p<0,05) da T°C entre os grupos experimentados. Para os outros parâmetros analisados não houve alterações significativas. Discussão: A dose de 0,2 mg/kg de peso do meloxicam comprimido analisado apresenta resposta antipirética em cães, pois mantêm a temperatura abaixo de 38,5°C, por até duas horas após o estímulo do agente pirogênico.

10.028 AVALIAÇÃO DA ABSORÇÃO INTESTINAL DE PRAZIQUANTEL EM DISPERSÕES SÓLIDAS OBTIDAS POR FLUÍDO SUPER CRÍTICO Camerin, C. R.1; Foltran, F. P.1; Gremiao, M. P. D.2; Lima, A. C.1; Paganelli, M. O.1; Chaud, M. V.3 - 1Unimep - FACIS; 2UNESP - FCF - Araraquara - Fármacos e Medicamentos; 3UNIMEP - Ciências da Saúde Introdução: Praziquantel (PZQ) é o fármaco de primeira escolha no tratamento da esquistossomose, doença que atinge cerca de 200 milhões de pessoas no mundo. Como fármaco que apresenta baixa solubilidade e alta permeabilidade o PZQ está incluído no grupo II do sistema de classificação biofarmacêutica. Assim, sua biodisponibilidade oral é dependente da taxa de dissolução. Entre as principais estratégias para aumentar a taxa de dissolução de fármacos pouco solúveis destaca-se a preparação de dispersões sólidas (DS) usando carreadores hidrossolúveis. O aumento da solubilidade do PZQ em água além de levar a uma otimização terapêutica deste fármaco, pode viabilizar outras formas de administração diferente das formas farmacêuticas sólidas usadas atualmente. Estudos de absorção, utilizando o modelo de saco intestinal invertido, possibilitam uma avaliação prévia do desempenho das formulações em estudo. O objetivo deste estudo foi avaliar a absorção intestinal do PZQ em DS com polivinilpirrolidona (PVP). Métodos: A DS e mistura física (MF) foram preparadas na taxa de 1:1(m/m). Tanto o PZQ como o PVP foram, previamente, dissolvidos em etanol. A evaporação do solvente foi realizada utilizando CO2 em condições supercríticas (temperatura 37°C e pressão 60-80 bar). A avaliação da absorção intestinal foi realizada utilizando modelo do saco intestinal de ratos. Os animais que foram anestesiados e o intestino delgado (duodeno proximal) imediatamente dissecado e invertido. Uma das extremidades do segmento intestinal foi preenchida com solução para cultura de tecido (TC-199). Esse segmento com cerca de 10cm de comprimento foi incubado em TC-199, previamente oxigenado contendo PZQ na forma livre, MF ou DS e mantidos a 37ºC por 60 min. Para cada formulação foram utilizados 6 segmentos intestinais idênticos. A concentração de PZQ absorvida foi determinada por espectrofotometria (l=263nm). Resultados: A quantidade de PZQ absorvido para PZQ livre, MF e DS foi de 3,99±0,182mg/mL (79,8%); 3,49±0,165mg/mL (69,8%) e 0,208±0,046mg/mL (4,16%), respectivamente. Discussão: Em estudos anteriores demonstramos que a taxa de dissolução em água do PZQ em DS com PVP (1:1m/m) é aumentada significativamente. No entanto, esta condição não favoreceu a absorção do PZQ. Neste estudo, não conseguimos explicar a restrição à permeação do PZQ na DS. Contudo, este fato não pode ser atribuído a presença de PVP uma vez que não há diferença estatística entre a permeabilidade do PZQ livre e da MF. CNPQ; MS-DAF; UNIMEP

10.029 ESTUDO DE BIODISPONIBILIDADE DE DOIS MEDICAMENTOS CONTENDO DICLOFENACO COLESTIRAMINA (CAPSULA 70MG) EM VOLUNTÁRIOS SADIOS Rigato, H. M.1; Moreno, R. A.2; Borges, N. C. C.1 - 1FCM - UNICAMP - Clínica Médica; 2FCM - UNICAMP - Farmacologia INTRODUÇÃO: O diclofenaco de colestiramina (DC) é um antiinflamatório não esteroidal associado a uma resina aniônica, que apresenta melhores resultados em seu perfil farmacocinético e farmacodinâmico quando comparado com o diclofenaco sódico ou potássico. O objetivo do trabalho foi avaliar a biodisponibilidade relativa do DC da Medley Industria Farmacêutica S.A., com o medicamento referência (FLOTAC®) da Novartis Biociências S.A.. MÉTODOS: Foram selecionados 26 voluntários sadios de ambos os sexos. O estudo foi aberto, randomizado, cruzado de duas fases. Foram administrados cápsulas de 70 mg em dose única, por via oral. As concentrações plasmáticas de DC foram dosadas por LC-MS-MS. A partir da curva de concentração versus tempo foram determinadas Cmax e ASC(0-12h) e calculado o IC 90% para a razão das médias geométricas dos mesmos. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Todos os voluntários completaram o estudo. A média geométrica da razão do Cmax e da ASC(0-

12h) foram respectivamente de 100,22% (IC de 90%= 84,99–118,19%) e 90,53 (IC de 90%= 82,86–98,91%). Considerando que 90% dos intervalos de confiança das razões de Cmax e da ASC(0-12h) se encontram dentro de 80-125% do intervalo proposto pela Agência Americana de Alimentos e Medicamentos (FDA) e aceita pela ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária), concluiu-se que a formulação Medley Industria Farmacêutica S.A., é bioequivalente e a formulação de referência (FLOTAC®) da Novartis Biociências S.A. em relação à taxa e extensão de absorção.

10.030 INFLUÊNCIA DA DIMETICONA E PEPSINA NA BIODISPONIBILIDADE DA METOCLOPRAMIDA Nascimento, D. F. do1; Silva, T. C. V.1; Araujo, R. B.1; Andrade, W. S.1; Uchoa, C. R. A.1; Frota Bezerra, F. A.1; Moraes, M. O.1; Moraes, M. E. A.1 - 1UFC - Fisiologia e Farmacologia - UNIFAC Introdução: A metoclopramida é um antagonista competitivo dos receptores dopaminérgicos D2 utilizado como agente antiemético e gastrocinético. O efeito antiemético do cloridrato de metoclopramida é resultante do bloqueio dos receptores dopaminérgicos D2 centrais. Comparar a biodisponibilidade de metoclopramida (7 mg) presente em uma formulação contendo dimeticona (40 mg) e pepsina (50 mg) [formulação teste] versus metoclopramida 7 mg [formulação referência] isoladamente para avaliar se a dimeticona e a pepsina presentes na formulação teste interferem na biodisponibilidade da metoclopramida presente na associação. Métodos: Foram selecionados 24 voluntários saudáveis de ambos os sexos com idade entre 18 e 50 anos através de consulta médica, eletrocardiograma e exames laboratoriais (hemograma completo, VHS, bioquímica, sumário de urina, sorologia para hepatites B e C, HIV e β-HCG para mulheres). O desenho consistiu de um estudo aberto, randomizado, cruzado onde voluntários sadios foram internados por 2 períodos de 36 horas, com 7 dias de intervalo entre os internamentos. O projeto de pesquisa, com o protocolo experimental e o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido foram submetidos e aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa da UFC. As concentrações plasmáticas de metoclopramida foram determinadas através de um método desenvolvido e validado de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada a Espectrometria de Massa (LC-MS-MS); a concentração máxima obtida (Cmax) e área sob a curva (ASC) foram determinadas e comparadas. Testes paramétricos (ANOVA) para cálculo das médias das razões Teste/Referência dos 24 voluntários para (Cmax) e ASC(0-tlast) foram realizados. A biodisponibilidade foi aceita de acordo com os critérios adotados pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), onde a média das razões Teste/Referência deve estar contida no intervalo de 80 a 125% para um intervalo de confiança de 90% (IC 90%). Resultados e Discussão: A idade dos voluntários selecionados variou de 18-42 anos com média±desvio padrão (25,88±6,97 anos) e índice de massa corporal variando de 19,3 - 29,2 (23,93 - 2,62) kg/m2. As formulações foram bem toleradas não havendo relatos de eventos adversos durante o estudo. As médias geométricas das razões Cmax e ASC(0-tlast) da metoclopramida teste versus metoclopramida referência foram respectivamente de 108,05% (IC 90% = 100,38-116,31%) e 103,33% (IC 90% = 99,47-107,35%). Conclusão: A dimeticona e a pepsina presentes na formulação teste não interferem nos parâmetros farmacocinéticos da metoclopramida. Apoio Financeiro: InCB, CNPq, UNIFAC-HM, FINEP, FUNCAP e CAPES

10.031 ESTUDO DE BIODISPONIBILIDADE DE DOIS PRODUTOS CONTENDO AMPICILINA EM VOLUNTÁRIOS SADIOS Moraes, M. E. A.1; Leite, I. O.1; Martins, I. L.1; Cunha, G. H.1; Martins, N. C.1; Ribeiro, S. A.1; Frota Bezerra, F. A.1; Moraes, M. O.1 - 1UFC - Fisiologia e Farmacologia - UNIFAC Introdução: A ampicilina (AMP) é um antibiótico com espectro de ação para gram-positivos e gram-negativos. O objetivo deste estudo foi avaliar a biodisponibilidade de uma formulação de AMP cápsulas 500 mg (formulação teste) em relação à Amplacilina® cápsulas 500 mg (formulação referência). Métodos: Foram selecionados 32 voluntários saudáveis de ambos os sexos com idade entre 18 e 50 anos através de consulta médica, eletrocardiograma e exames laboratoriais (hemograma completo, bioquímica, sumário de urina, sorologia para hepatites B e C, HIV e β-HCG para mulheres). O estudo constou de dois internamentos com intervalo de 7 dias. O projeto de pesquisa, com o protocolo experimental e o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido foram submetidos e aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa da UFC. Amostras de sangue foram coletadas antes e até 9 horas após a administração do fármaco. As concentrações plasmáticas de AMP foram determinadas por método desenvolvido e validado de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada a Espectrometria de Massas (LC-MS-MS). Os parâmetros concentração máxima atingida (Cmax) e área sob a curva (ASC) foram determinados a partir da curva de concentração versus tempo. Foi então calculada o intervalo de confiança de 90% (IC 90%) para a razão das médias geométricas (teste/referência) de Cmax e ASC. Resultados e Discussão: A idade dos voluntários selecionados variou de 21-42 anos com média±desvio padrão (30,75±7,61) e índice de massa corporal variando de 21,4-29,6 (24,78±2,57) kg/m2. As duas formulações de AMP foram bem toleradas havendo relatos de dor de garganta, tosse seca e adinamia (n=1); febre e vômitos (n=1) e diarréia (n=1). Todos os eventos adversos relatados foram de leve intensidade e classificados como não relacionados ao fármaco sob investigação. A razão das médias geométricas (teste/referência) de Cmax e da ASC(0-48h) foram respectivamente de 100,71% (IC de 90%= 90,23-112,40%) e 103,26% (IC de 90%= 92,22-115,61%), portanto, dentro do intervalo de 80 a 125% estabelecido pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa) para bioequivalência e pelo Food and Drug Administration (FDA). Conclui-se que as formulações de Ampicilina e Amplacilina® são bioequivalentes. Apoio Financeiro: InCB, CNPq, UNIFAC-HM, FINEP, FUNCAP e CAPES

10.032 AMYLOID B-PEPTIDE ACTIVATES NF-kB THROUGH AN NMDA SIGNALING PATHWAY IN CULTURED CEREBELLAR CELLS Kawamoto, E. M.1; Lepsch, B. L.2; Cury-Boaventura, M. F.3; Munhoz, C. D.1; Sa Lima, L.2; Yshii, L. M.4; Curi, R.5; Avellar, M. C. W.6; Mattson, Mp7; Scavone, C.2 - 1ICB - Farmacologia; 2ICB - USP - Farmacologia; 3ICB - Fisiologia e Biofísica; 4Instituto de Ciências Biomédicas - Farmacologia; 5ICB - USP - Fisiologia e Biofísica; 6UNIFESP - EPM - Farmacologia; 7NIA, NIH - Laboratory of Neurosciences Introduction: Amyloid b-peptide (Ab) likely causes functional alterations in neurons well prior to their death. Nuclear factor-kB (NF-kB), a transcription factor that is known to play important roles in cell survival and apoptosis, has been shown to be modulated by Ab in neurons and glia, but the mechanism is unknown. Because Ab has also been shown to enhance activation of NMDA receptors, we investigated the role of NMDA receptor-mediated intracellular signaling pathways in Ab-induced NF-kB activation in primary cultured rat cerebellar cells. Methods: Cells were treated with different concentrations of Ab1-40 (1 or 2 mM) for different periods of time (6, 12 or 24 h). MK-801 (NMDA antagonist), manumycin A and FTase inhibitor 1 (farnesyltransferase inhibitors), PP1 (Src- family tyrosine kinase inhibitor), PD98059 (mitogen activated protein kinase (MAPK) inhibitor), LY294002 (phosphatidylinositol 3-kinase (PI3-k) inhibitor) were added 20 min before Ab treatment of the cells. Results: Ab induced a time- and concentration-dependent activation of NF-kB (1 mM, 12 h); both p50/p65 and p50/p50 NF-kB dimers were involved. This activation was abolished by MK-801 and attenuated by manumycin A, FTase inhibitor 1, PP1, PD98059 and LY294002. Ab at 1 mM increased the expression of inhibitory protein IkB, brain derived neurotrophic factor, inducible nitric oxide synthase, tumor necrosis factor a and interleukin-1b as shown by RT-PCR assays. Discussion: Collectively, these findings suggest that Ab activates NF-kB by an NMDA-Src-Ras-like protein through MAPK and PI3-k pathways in cultured cerebellar cells. This pathway may mediate an adaptive, neuroprotective response to Ab. Financial support: FAPESP, CAPES, CNPq, Fundo Bunka Banco Sumitomo, NIA, NIH. FAPESP, CAPES, CNPq, Fundo Bunka Banco Sumitomo, NIA, NIH.

10.033 NICOTINE EFFECTS IN NF-κB TRANSCRIPTION FACTOR ACTIVATION IN CNS BY LIPOPOLYSACCHARIDE STIMULUS Cafe-Mendes, C. C.1; Hatanaka, E.2; Scavone, C.3; Markus, R. P.4; Marcourakis, T.5 - 1FCF-USP - Análises Clínicas e Toxicológicas e FM-USP; 2ICB-USP - Fisiologia; 3ICB - USP - Farmacologia; 4IB - USP - Fisiologia; 5FCF-USP - Análises Clínicas e Toxicológicas Introduction: Cigarette smoke is composed of a great variety of active pharmacological components in which nicotine is the main substance. Many studies have shown that in vitro chronic exposure to nicotine inhibits the immunological system probably acting as an immunosuppressor, however, the mechanisms underlying these events are still unknown. Since the transcription factor NF-kB regulates the gene expression related to different events in the CNS like plasticity, neuronal development and inflammation, our aim was to evaluate the activation pattern of NF-kB induced by nicotine after LPS stimulus. Materials and Methods: Wistar male rats were treated with nicotine (0.1, 0.3 and 1.0 mg/kg s.c.) for 14 days and challenged with lipopolysaccharide (LPS; 1 mg/kg i.v.) in the 15th day. Another group of animals was chronically treated with the non-selective nicotine receptor antagonist, mecamilamine (1 mg/kg s.c.), followed by nicotine (0.1 mg/kg s.c.) 40 minutes later. The control animals were treated with saline 0.9% and challenged with saline or LPS. After 2h of LPS administration the animals were decapitated and cerebellum was extracted. The blood was also collected and the plasma used for cytokines dosage (IL-1β, CINC 2α/b, TNF-α, MIP-1α and VEGF) using the DuoSet ELISA kit from R&D Systems. NF-kB activity was analyzed in tissue nuclear extracts preparations by Gel shift assay through 32P-ATP probe (Amersham) and the statistical significance was determined by ANOVA and Newman-Keuls. Results: The dose response curve of nicotine did not change the cytokines levels in plasma and NF-kB activity in cerebellum. The group treated with nicotine 1 mg/kg and challenged with LPS showed increased levels of TNF-α (722.70±69.42 pg/mL) in comparison to saline/saline (63.86±1.56 pg/mL) and to saline/LPS group (239.60±101.10 pg/mL). The levels of IL-1β and CINC 2α/b were also higher (857.30±87.99 and 1076.00±39.82 pg/mL) compared to saline/saline (509.60±39.03 and 113.40±6.53 pg/mL) but were not significantly different from saline/LPS animals. Interestingly the nicotine/LPS animals showed a reduced activity of NF-kB in cerebellum. The 0.1 mg/kg nicotine/LPS animals also showed an increase in TNF-α (77.00±13.01 pg/mL) when compared to saline/saline (39.08±4.48 pg/mL) but no significant difference was detected when compared to saline/LPS animals. On the other hand, IL-1β and MIP-1α levels of nicotine/LPS group (277.3±42.36 and 208.6±42.93 pg/mL) showed a significant reduction when compared to saline/LPS (861.3±258.8 and 318.0±45.89 pg/mL). Mecamilamine treatment was able to block the nicotine/LPS effects in plasma cytokines. Discussion: Those results indicate that the systemic and the central nervous system response to nicotine treatment seem to be different and the activation of NF-kB is significantly inhibited by nicotine in cerebellum. The mecamilamine response in plasma may indicate that other nicotinic receptors beyond subtype α7 are also important for nicotine systemic response. FAPESP