Resultados em Duas Gerações de Seleção

do L. vannamei com Microsatélites e Estudo

de Diversidade Alélica de 2017 a 2019

ONELABT SA

SAMARIA UNIDADE DE PÓS LARVAS Ltda

A Onelabt SA se formou em 2005. Começou a com marcadores moleculares para paternidade(microsatelites), prestando serviço a programas genéticos de camarão.

Inicialmente o trabalho foi guiar maturações comerciais, dirigindo cruzamentos entre linhasmassais, baixando índices de consanguinidade e alcançando maior crecimento.

Gradualmente, as maturações foram mudando de programa, de massal a programas de seleçãofamiliar ou massal guiado por microsatelites.

Temos a capacidade de monitorar sobrevivência e crecimento a nivel familiar desde o povoamentocom PL12 até despesca através de perfis genéticos. Trabalhamos rotineiramente para distinguir indivíduos em populações com misturas de 40 a 120 famílias.

O laboratório pode processar 6000 amostras mensalmente usando 12 microssatélites ou até 720.000 PCRs por mês.

Temos 12 anos de experiência no setor, e clientes que trabalham conosco durante esse tempo com Projetos no Equador, Mexico e Brasil.

Primeiros passos do Programa 2017

Levantamento e Análise de Estrutura

Populacional

Agrupamentos por Distância Genética

Direcionamento de cruzamentos para

construir população base

- Análise de 49 Grupos Genéticos (Famílias Potiporã).

- 1591 Indivíduos.- 12 Microssatélites

- Variabilidade Genética (Baixa)- Nível de Imbreeding (Populações

variam de -0,35 a 0,27)- Estrutura Populacional

- Formar População Base

- Seleção Ambiental

- Produzir Famílias de Primos

- Produzir Breeding pool(Gerar Variabilidade Genética)

-Usado para produzir os Batchs.

BATCH

Ambiente 1 Ambiente 2

Famílias Selecionadas

FH FH

FH FH

Cruzamentos direcionados entre elites

e

FH FH FH FH

FH FH FH FH

BreedingPool

BP Famílias PP(Clusters) G0

GERAÇÕES DO PROGRAMA GENÉTICO

Batch 1PPG1FH1-32

Batch 2PPG1FH33-64

Batch 3PPG1FH65-96

G1

Batch 4PPG2FH1-22

Batch 5PPG2FH23-54

G2Batch 6PPG2FH55-86

Batch 7PPG3FH1-32

G3

(PPG1FP1,2,3,4,5,6) (PPG1FP7,8)

(PPG2FP1,2) (PPG2FP3,4) (PPG2FP5,6)

Batch 8PPG3FH33-64

Batch 9PPG3FH64-93

novembro

Batch 10

2017

2018

2019

BP Fam PP x RVZRVZ x RVZ

Resultados 5 º Batch

0,0% 10,0% 20,0% 30,0% 40,0% 50,0% 60,0% 70,0% 80,0% 90,0% 100,0%

FH23

FH24

FH25

FH26

FH27

FH28

FH29

FH30

FH31

FH32

FH33

FH34

FH35

FH36

FH37

FH38

FH39

FH40

FH41

FH42

FH43

FH44

FH45

FH46

FH47

FH48

FH49

FH50

FH51

FH52

FH53

FH54

Potipora Aquisa

BP

Sobrevivência PPG2FH23-54 em Desafíos Aquisa e Potipora

FP4/BP

FP3/BP

BP

FP3/BP

BPBP

FP4/BP

FP3/BP

FP4/BP

BP

BP

LARVA POTIPORA VE223

FAMILIA n %Contribuição n %SBV Peso OBS-EXP EBVSBV EBVCrec

PPG2FH71 21 1,49% 142 132% 12,2 0,08 2,74 0,36

PPG2FH73 40 2,84% 113 55% 13,0 0,05 1,63 1,04

PPG2FH69 36 2,56% 76 41% 12,6 0,03 0,89 0,68

PPG2FH70 14 0,99% 16 22% 13,9 0,00 0,04 1,87

PPG2FH55 12 0,85% 41 66% 13,1 0,02 0,65 1,10

PPG2FH86 89 6,32% 61 13% 13,7 -0,02 -0,69 1,66

PPG2FH63 14 0,99% 50 69% 11,3 0,02 0,81 -0,46

PPG2FH76 13 0,92% 11 16% 12,5 0,00 -0,05 0,58

PPG2FH61 54 3,83% 62 22% 11,5 0,00 0,15 -0,32

PPG2FH57 36 2,56% 73 39% 12,1 0,02 0,82 0,22

PPG2FH81 48 3,41% 25 10% 12,7 -0,02 -0,55 0,79

PPG2FH59 17 1,21% 33 38% 11,7 0,01 0,35 -0,17

PPG2FH62 10 0,71% 30 58% 11,8 0,01 0,45 -0,03

PPG2FH74 61 4,33% 77 25% 13,2 0,01 0,32 1,26

PPG2FH72 72 5,11% 52 14% 12,6 -0,02 -0,50 0,69

PPG2FH56 28 1,99% 68 47% 10,9 0,03 0,89 -0,86

PPG2FH65 11 0,71% 12 21% 10,6 0,01 0,25 -1,10

PPG2FH78 66 4,68% 50 15% 12,1 -0,01 -0,41 0,19

PPG2FH60 61 4,33% 48 15% 11,7 -0,01 -0,33 -0,09

PPG2FH82 58 4,12% 30 10% 12,0 -0,02 -0,67 0,17

PPG2FH77 6 0,43% 11 36% 10,4 0,00 0,11 -1,34

PPG2FH68 2 0,14% 6 58% 10,5 0,00 0,09 -1,19

PPG2FH58 7 0,50% 12 33% 10,6 0,00 0,11 -1,09

PPG2FH69 28 1,99% 20 14% 10,3 -0,01 -0,20 -1,41

PPG2FH66 2 0,14% 10 97% 10,0 0,01 0,18 -1,70

PPG2FH80 17 1,21% 7 8% 10,4 -0,01 -0,24 -1,28

PPG2FH64 8 0,57% 12 29% 10,0 0,00 0,09 -1,70

PPG2FH75 106 7,52% 43 8% 11,9 -0,05 -1,50 0,08

PPG2FH85 114 8,09% 68 12% 12,4 -0,03 -1,12 0,51

PPG2FH83 159 11,28% 106 13% 12,4 -0,04 -1,31 0,50

PPG2FH84 209 14,83% 84 8% 13,0 -0,09 -2,98 1,04

Envios 2018 e 2019 - Fazendas

2018 2019ago.18 ene.19

Potiporã L1 Potiporã L1/L2/L3Aquisa L1/LP Aquisa L1/L2/L3

sep.18 feb.19Potiporã L1 Potiporã L1/L2/L3/L4Aquisa L1 Aquisa L1/L2/L3/L4

oct.18 mar.19Potiporã L1 Potiporã L2/L3/L4Aquisa L1 Aquisa L2/L3/L4

nov.18 abr.19Potiporã L1/L2 Potiporã L3/L4Aquisa L1/L2 Aquisa L3/L4

dic.18 may.19Potiporã L1/L2 Potiporã L3/L4/L5Aquisa L1/L2 Aquisa L3/L4/L5

jun.19Potiporã L3/L5Aquisa L3/L5

jul.19Potiporã L5Aquisa L5

Geração Batch Origem Cruzamento LinhaG1 Batch 2 G1FP4 G1FP3 L1G1 Batch 1 G1FP2 G1FP1 L2G1 Batch 1/Batch 2 G1FP5 G1FP6 L3G1 Batch 1/Batch 2 G1FP1 G1FP3 L4G1 Batch 3 G1FP8 G1FP7 L5G2 Batch 4 G2FP1 G2FP2 L6

Out 2019: produção de L6Geração 2: G2FP1 x G2FP2

Envios comerciais de Pós-larvas

A partir das despescas de Dezembro/18 devemos ver efeito da seleção genética.

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

Aquisa, kg/ha 2017-2019

2017 2018 2019

0

500

1000

1500

2000

2500

Potiporã, kg/ha 2017-2019

2017 2018 2019

Meses propensos para WSSV

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

2017 2018 2019

730

1178

1580

361 386

1066

Média, kg/ha, 2017-2019

Potipora Aquisa

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

40000 60000 80000 100000 120000 140000 160000 180000 200000

Sob

revi

ven

cia

Densidade de povoamento por Ha

Rolesa, Densidade povoamento vs Sobrevivência

2008

2011

2014

2017

Linear (2008)

Linear (2011)

Linear (2014)

Linear (2017)

51

4644

39

2927

30

3436

45

0

10

20

30

40

50

60

70

Potiporã, %Sobrevivência 2017-2019, Densidade de povoamento 2017-2019

2017%Sbv 2018%Sbv 2019%Sbv 2017Densidad 2018Densidad 2019Densidad

46

56

53

44

36

33 3432

20

0

10

20

30

40

50

60

Aquisa, %Sobrevivência 2017-2019, Densidade de Povoamento 2017-2019

2017%Sbv 2018%Sbv 2019%Sbv 2017Densidad 2018Densidad 2019Densidad

2017:8%2019:20%

2017:16%2019:53%

2018:9%2019:44% 2017:13%

2019:33%

0,40

0,60

0,80

1,00

1,20

1,40

1,60

1,80

2,00

20000 30000 40000 50000 60000 70000 80000 90000 100000 110000 120000

Cre

c Se

man

al

Densidad Cosechada

Fimasa Densidade de despesca vs Crescimento 2008-2017

2008

2010

2011

2014

2013

2015

2016

2017

Linear (2008)

Linear (2010)

Linear (2011)

Linear (2014)

Linear (2013)

Linear (2015)

Linear (2016)

Linear (2017)

0,0 5,0 10,0 15,0 20,0

2017

2018

2019

AQ Cos/m PP Cos/m

0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20

2017

2018

2019

AQ Crec PP Crec

0 20 40 60 80 100 120

2017

2018

2019

AQ Dias PP Dias

0,00 5,00 10,00 15,00

2017

2018

2019

AQ Peso PP Peso

GENÉTICA = CONFIANÇAA genética facilita o manejo. O manejo permite realizar potencial genético.O aumento na produção desde 2001 até 2019 no Equador principalmente, não é devido a maior densidade de povoamento. É devido a mais ciclos por ano.

Genética, seleção constante;RacewaysTransferência, Bifase, TrifaseMelhor Nutrição, Investimento Nicovita, Skretting, Biomar, CargillFrequência de AlimentaçãoRecirculação, Probióticos

BR_P15 (F

P7)BR_P18 (FP7)

BR_VE44_BATCH 8

BR_F4G2_VE45

BR

_VE45_F4G

2

BR

_P

19(F

1G

2)

BR

_F2G

2_V

M2

BR

_BA

TCH

7_VM

11

BR_VE43 -F3G

2BR_P17 (FP8)

EC_G4FP9XG4FP10

EC_MIX MASAL_G4 -TR

EC_DESVS2018-1X64FP11

EC_G4FP11XG4FP12

MX_AQAPCFC _Est 62 y 63

MX_Boca_Grandes

MX_FP1

MX

_Boca_P

romedio

MX

_P

RLM

R_E

st 6

2 y

63

MX

_FP

2

MX

_FP

3

MX_FP4

MX_FP5

0.05

Mapa Genético 2019

10 linhas PP

4 linhas Ecuador

9 linhas México

-0,40

-0,30

-0,20

-0,10

0,00

0,10

0,20

0,30

0,40

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38

2017 Brasil 9 Linas 2017 38 lineas PP 10 lineas PP 2019 lineas mx2019 lineas ecuador2019

Variação no Fis (Consanguinidade) Brasil 2017 e 2019

Variação no Fis (Consanguinidade) Brasil 2017 e 2019

-0,40

-0,30

-0,20

-0,10

0,00

0,10

0,20

0,30

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

2017 Brasil 9 Linas 2017 38 lineas PP 10 lineas PP 2019 lineas mx2019 lineas ecuador2019

Ne indica o número efetivo de alelos corregidos para tamanho da amostra. Ne indica onúmero de alelos detectados com cada microssatélite, indicando a diversidade alélica da população.

0,00

0,50

1,00

1,50

2,00

2,50

3,00

3,50

4,00

4,50

5,00

2017 Brasil 9 Linas 2017 38 lineas PP 10 lineas PP 2019 lineas mx2019 lineas ecuador2019

4,69

2,65

3,30

4,24

3,04

Valores médios do Ne no Brasil 2017, 2019

-0,08

-0,16 -0,16

-0,19

-0,11

0,00

-0,07

0,01

-0,13

0,01

-0,20

-0,15

-0,10

-0,05

0,00

0,05

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Valores Fis 10 Linhas PP 2019

3,5

2,9

3,5

3,13,3

3,5 3,6 3,6

3,1 2,9

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

3,5

4,0

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Valores Ne 10 Linhas PP 2019

CONCLUSÕES

Samaria UPL Ltda mantém um programa de seleção familiar assistida com microssatellites.Anualmente avaliam 128 famílias em 4 batches de 32 familias.O programa começou em Janeiro de 2017. Os primeros reprodutores cultivados de familias elites começaram a produzienauplios a nível comercial, na maturação em Agosto de 2018. Os primeiros resultados de despescas comerciais com a primeirageração de famílias elites, foram evidentes a partir de dezembro de 2018.

Na Aquisa, a biomasa/ha aumentou de 315 kg/ha em Dezembro de 2017 a 648 kg/ha em Dezembro de 2018. Durante 2019 a media de biomassa/ha tem sido 1066 kg/ha versus 386 kg/ha em 2018 e 361 kg/ha em 2017.Nos meses onde temos dados com densidades de povoamento parecido, as diferenças em %Sobrevivência são os seguintes:

16%, 21/m (2017) 53%, 16/m, (2019) dados Março9%, 27/m (2018) 44%, 23/m (2019) dados Abril13% 36/m (2017) 33%, 33/m (2019) dados Junho8%, 28/m (2017) 20%, 25/m (2019) dados Setembro.

CONCLUSIONES

Na Potiporã, a media de povoamento foi 32/m em 2018 e 40/m em 2019. A densidade de povoamento aumentou 25% em2019. A sobrevivência na media foi de 40% em 2018 e 38% em 2019. A sobrevivência se manteve estável desde que a densidade aumentou 25%. A biomasa/ha de despesca em 2019 tem sido 1580 kg/ha versus 1178 kg/ha em 2018 e 730 kg/ha en 2017. Densidade de despesca/ha aumentou a 15.3/m en 2019 versus 12.5/m en 2018 e 8.4/m em 2017.Crescimiento em g/semana se manteve estável.

O número de alelos efetivos (Ne) entre linhas de Samaria UPL em 2017 teve uma media de 2.65 alelos/microsatellite. Em 2019 a media de Ne entre as linhas foi de 3.3. Os resultados demonstram que diversidade alélica é maior em 2019 do que em2017..

Em 2017 as linhas de Samaria UPL variavan entre -0.35 a 0.27 em valores de Fis. Em 2019, as linhas variavan entre -0.19 a 0.01. Os resultados demonstram que linhas de 2019 não indicam consaguinidade, mas tem bons indicadores de outbreeding (mais heterozigosidade em 2019 vs 2017).

Os valores Ne na média, indican 3.3 em linhas Samaria, 4.24 em linhas doMéxico e 3.03 em linhas Aquagen. No entanto, existe diversidade para seguir selecionando.

CONCLUSIONES

Nas gerações de seleção, estamos formando famílias de primos com os avaliados no Batch 7. Este batch é proveniente da Terceira geração em seleção de reprodutores.

Na produção comercial, o laboratório está produzindo L6, Larvas que são da segunda geração de seleção.

Os resultados do programa na Samaria UPL, vão seguir a mesma tendência que programas no Equador e no México. Aumentando a sobrevivência seguindo a pressão de seleção interfamiliar aplicada. Entretanto, menteremos 70% de pressãopara sobrevivência e 30% para crescimento. Uma vez que a sobrevivência na media aumentou a níveis aceitáveis para produção comercial (70% aproximadamente) o enfoque provavelmente vai mudra para aplicar mais pressão em crescimento.