relatório de bioquímica colesterol 17set

CURSO DE FARMÁCIADISCIPLINA DE BIOQUÍMICA

Dosagem de Colesterol Total

Guilhermina Brites1; Inez de Lima Gonçalves2; Dra.Sônia Aparecida Viana Câmara3.

1,2, - Acadêmicas do Curso de Farmácia. 3 - Professora da disciplina de Bioquímica.

1. Dosagem de Colesterol Total

Dosagem de Colesterol Total - experimento realizado em 17/09/2015.

2. Introdução

Colesterol é um álcool policíclico de cadeia longa, usualmente considerado um esteróide, encontrado nas membranas celulares e transportado no plasma sanguíneo de todos os animais. É um componente essencial das membranas celulares dos mamíferos. O colesterol é o principal esterol sintetizado pelos animais, mas pequenas quantidades são também sintetizadas por outros eucariotas, como plantas e fungos. O colesterol é insolúvel em água e, consequentemente, insolúvel no sangue. Para ser transportado através da corrente sanguínea ele liga-se a diversos tipos de lipoproteínas. As duas principais lipoproteínas usadas para diagnóstico dos níveis de colesterol são:

1. lipoproteínas de baixa densidade (Low Density Lipoproteins ou LDL): acredita-se que são a classe maléfica ao ser humano, por serem capazes de transportar o colesterol do fígado até as células de vários outros tecidos. Nos últimos anos, o termo (de certa forma imprecisa) "colesterol ruim" ou "colesterol mau" tem sido usado para referir ao LDL que, de acordo com a hipótese de Rudolf Virchow, acredita-se ter ações danosas (formação de placas arteroscleróticas nos vasos sanguíneos).

2. lipoproteínas de alta densidade (High Density Lipoproteins ou HDL): acredita-se que são capazes de absorver os cristais de colesterol, que começam a ser depositados nas paredes arteriais/veias (retardando o processo arterosclerótico). Tem sido usado o termo "colesterol bom" para referir ao HDL, que se acredita que tem ações benéficas. O colesterol é necessário para construir e manter as membranas celulares; regula a fluidez da membrana em diversas faixas de temperatura. O grupo hidroxil presente no colesterol interage com as cabeças fosfato da membrana celular, enquanto que a maior parte dos esteróides e da cadeia de hidrocarbonetos está mergulhada no interior da membrana. Algumas pesquisas recentes indicam que o colesterol pode atuar como um antioxidante. O colesterol também ajuda na fabricação da bílis (que é armazenada na vesícula biliar e ajuda a digerir gorduras), e também é

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importante para o metabolismo das vitaminas lipossolúveis, incluindo as vitaminas A, D, E e K. Ele é o principal precursor para a síntese de vitamina D e de vários hormônios esteróides (que incluem o cortisol e a aldosterona nas glândulas supra-renais, e os hormônios sexuais progesterona, os diversos estrógenos, testosterona e derivados). O colesterol é sintetizado primariamente da acetil CoA através da cascata da HMG-CoA redutase em diversas células e tecidos. Cerca de 20 a 25% da produção total diária (1 g/dia) ocorre no fígado; outros locais de maior taxa de síntese incluem os intestinos, glândulas adrenais e órgãos reprodutivos. Em uma pessoa de cerca de 68 kg, a quantidade total de colesterol é de 35 g, a produção interna típica diária é de cerca de 1 g e a ingesta é de 200 a 300 mg. Do colesterol liberado ao intestino com a produção de bile, 92-97% é reabsorvido e reciclado via circulação entero-hepática.

O que é o exame de colesterol:Exame de sangue que mede as taxas de colesterol e de suas frações – HDL (o “colesterol bom”), LDL (o “colesterol ruim”) e triglicerídeos – na corrente sanguínea. Produzida pelo fígado, essa substância está envolvida em diversos processos vitais do organismo e seu excesso no sangue está relacionado a um maior risco de desenvolvimento de doenças cardiovasculares.

Para que serveA avaliação dos níveis do colesterol permite ao médico detectar o risco aumentado de doenças cardiovasculares e adotar medidas para reduzir as taxas dessa substância no sangue. Isso pode ser feito com mudanças nos hábitos (alimentação pobre em gorduras e atividade física) ou com medicações específicas, como as estatinas.

Como é feitoO sangue é coletado por uma agulha colocada diretamente em uma veia do braço.

PreparoÉ necessário jejum (de 3 a 12 horas, dependendo da idade). É recomendável evitar excesso de comida gordurosa nas últimas 48 horas e o uso de álcool nas últimas 72 horas antes do exame. O uso de remédios deve ser informado.

Valores de referênciaColesterol total (CT): inferior a 200 mg/dLLDL: inferior a 100 mg/dLHDL: superior a 60 mg/dLTriglicerídeos: inferior a 150 mg/dL

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3. Objetivo em sala de aula

Realizar a técnica de dosagem de colesterol, e aprender o fundamento do método.

4. Materiais e Métodos

Todas as vidrarias e materiais utilizados serão relatados no item 4.1. seguidos pelos reagentes utilizados no 4.2. e o procedimento experimental no item 4.3.

4.1. Materiais Utilizados

Pipetador e ponteira; Galeria; Tubos de ensaio; Luvas de procedimentos; Água destilada; Frasco de plástico; Béquer; Cronometro; Papel toalha; Kit teste colesterol;

Figura 1 – Centrífuga fechada Figura 2 – Centrífuga aberta

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Figura 3 - Banho-maria a 370C;

Figura 4 - Espectrofotômetro;

4.2. Reagentes Utilizados

Reagente 1 - Colesterol Liquiform Labtest Cat. 76.

Figura 5 – Kit Labtest e Reagentes

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4.3. Procedimento Experimental Manual

1. Identificou-se três tubos de acordo com o procedimento indicado, letra B para Branco, letra T para o Teste e letra P para o Padrão.

2. Coletou-se sangue de um acadêmico do grupo, por meio de uma punção venosa usando agulha, seringa 3 ml, algodão umedecido em álcool 70% para assepsia local no braço indivíduo do qual será feito o exame de colesterol total.

Fig.6 - Intravenosa (25 x 0,8 mm) Figura 7 – Punção venosa

2. Pipetou-se 1,0mL de reagente1 em cada tubo de ensaio, adicionou-se 0,1mL da amostra e a mesma quantidade de padrão. Quadro 1.

O cálculo utilizado foi o seguinte:

Colesterol/Mg/dL=absorbância do testex200 absorbância do padrão

3. Homogeneizou-se os tubos e colocados no banho-maria a 37 ºC durante 10 minutos.

4. Determinou-se as absorbâncias do teste e padrão em 500 nm, acertando o zero com o branco. A cor é estável por 60 minutos. Lembrando que o nível da água no banho deve ser superior ao nível do reagente nos tubos de ensaio.

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TUBOS BRANCO TESTE PADRÃOAmostra - 0,01 -

Padrão2 - - 0,1mL

Reagente1 1,0 mL 1,0mL 1,0mL


Figura 8 e 9 – Procedimentos

5. Após esse procedimento colocou-se para centrifugar por 3 minutos a uma velocidade de 9 RPM´s. Quando coletamos o sangue do paciente, obtemos soroplasma, ou seja, plasma com hemácias misturadas, o objetivo de centrifugar é separar o plasma das hemácias. Uma vez separados, coloca-se o plasma em outro tubo e iniciamos a dosagem do colesterol, ou seja separa o liquido amarelo.

Hemácias = células vermelhasPlasma = Nutrientes

Como já foi colocado na introdução, o valor de referencia do Colesterol total (CT) deve ser inferior a 200 mg/dL, se o resultado for acima disso, estará fora da taxa normal, demonstra que é preciso fazer algum tipo de tratamento.Ainda em relação à centrífuga, lembramos que é preciso equilibrá-la com outro tubo com água, colocando-os um de frente para o outro (nunca de lado) para não trepidar, e os dois tubos tem que conter o mesmo volume pois tem que haver equilíbrio de peso.A centrífuga só pode ser aberta quando parar totalmente, não abri-la antes disso, para não trepidar.

6. Quando a centrífuga parou totalmente, retirou-se o tubo com a amostra.

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Figura 10 – Separação do líquido

7. Após retirada da centrífuga, utilizou-se uma pipeta de Pasteur para separar o líquido. Este processo deve ser feito bem devagarinho, para não subir o líquido vermelho.

8. Após esse procedimento levou-se para a centrífuga biospectro. O biospectro é o instrumento que caracteriza amostras coloridas para obter uma medida objetiva das características da cor. Colorímetros tornam possíveis as verificações de concentração de um soluto conhecido, desde que esta seja proporcional à absorbância. antes de iniciar o procedimento é necessário zerar o aparelho utilizando um tubo de ensaio branco e vazio, de acordo com a figura abaixo.Em sala de aula, cada grupo repetiu esse procedimento, mas quando isso é feito em laboratório, quando se zera o aparelho com o branco, é possível fazer pelo menos 50 (cinqüenta) testes de pacientes diferentes, não sendo necessário zerar cada vez que o fizer.Durante o procedimento de leitura do padrão, é preciso tomar cuidado para não balançar a bancada e nem trepidar o aparelho, para não interferir no resultado.

9. Pegou-se a cubeta de quartzo, lavou-se com água destilada contida na pisseta, secou-se com papel toalha, colocou-se o material colhido dentro dela e colocou-se no espectrofotômetro e aguardou-se a leitura no aparelho.

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Figura 11 – cubeta

10.É preciso lembrar-se de segurar a cubeta pelos lados opacos e estes mesmos lados devem ser colocados de forma contrária a luz, já que a mesma deverá incidir sobre o líquido pela parte transparente. Verifica-se a concentração da substância de acordo com a intensidade da cor.

5. Resultados

Os resultados que deveriam ser obtidos através do cálculo abaixo, e o valor encontrado deveria ser este:Desejável ...............................< 200Aceitável..............................200-239Elevado...................................> 240

Colesterol (g/dL) = Absorbância da amostra x 200Absorbância do padrão

Colesterol (g/dL) = 0,654 x 200 0,833

Colesterol (g/dL) = 157,02 mg/dL

Colesterol (g/dL) = 0,385.

6. Conclusão

Ao determinarmos a dosagem do colesterol, o resultado apresentou-se insatisfatório na analise realizada. O valor obtido foi 0,385 mg/dL, valor totalmente fora da faixa de especificação.

7. Discussão

No caso do nosso grupo, por falta de habilidade do aluno, talvez porque o mesmo não pipetou direito, ou porque usou kits diferentes e padrão diferentes, o resultado não foi satisfatório, a solução ficou incolor, a leitura ficou muito abaixo dos níveis normais.

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De qualquer forma, como estamos em sala de aula, e o objetivo é aprender as técnicas, por um lado o resultado saiu errado, mas por outro, serviu para a aprendizagem.

8. Referências

SBC. Sociedade Brasileira de Cardiologia. Resumo das III Diretrizes Brasileiras sobre Dislipidemias e Diretriz de Prevenção da Aterosclerose da Sociedade Brasileira de Cardiologia. Arq. Bras. Cardiol. 2001; 77:1-48.

Procedimento operacional padrão para dosagem de colesterol, disponível em:http://www.lincx.com.br/cuidando-de-sua-saude/saude-de-a-a-/medicina /bprevencao/5156-colesterol-e-triglicerides.html, acesso em 01/05/11 as 22:50.

Dosagem de colesterol total, disponível em http://www.mega21.com.br /artigo/310-Dosagem-de-colesterol-total.htm, acesso em 29/04/11 as 19:30.

Colesterol, disponível em: http://pt.wikipedia.org/wiki/Colesterol, acesso em 30/04/11 as 12:00.

http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S0004-27302002000100004&script=sci_arttextAcesso em: 14 de setembro de 2015.

http://www.diabetes.org.br/Acesso em: 14 de setembro de 2015.Juliana Hori, Bioquímica, Editora Sesse, Rio de Janeiro, 2015.

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