Recordando...HISTOLOGIA = é a ciência que estuda a estrutura

fina dos diferentes órgãos e tecidos vivos, tanto animais como vegetais.

PATOLOGIA = é o estudo das doenças Pathos= doença, sofrimento / logos= estudo- Patologia é o estudo da doença desde a causa

primária (etiologia) até seu mecanismo de produção ( patogenia)

HISTOLOGIA X HISTOPATOLOGIA

Por que realizar o exame histopatológico?

MATERIAIS RECEBIDOS

EXAMES REALIZADOS

PC (s) = Peça(s) cirúrgica(s)

Exame histopatológico

PN = Peças de Necropsia

Exame histopatológico

Cadáver + Peças coletadas na necropsia

Exame necroscópico + exame histopatológico

Esfregaços de punções, imprints...

Exame citopatológico

ExamesHistopatológicoCitopatológicoNecroscópico

ToxicológicoComplementares

Histopatologia x citopatologia

Fragmento de tecidosVisualizar a arquitetura tecidual

Avaliar os critérios de malignidadeDiagnóstico definitivo

Demorado, mais caro, invasivo

Células esfoliadasNão analiso a arquitetura tecidual

Avalio alguns critérios de malignidadeExame de triagem

Rápido, barato, indolor e pouco invasivo

Qual a importância da Anatomia Patológica??

- Auxílio ao Clínico / Cirurgião

- Diagnóstico (qual é o problema)

- Prognóstico (o que acontecerá)

- Tratamento – qual ?

- Diagnóstico “post-mortem”

O que é isso??

Histotécnica

Histotécnica - fases

1. Coleta ou Colheita do material2. Fixação 3. Clivagem4. Desidratação 5. Diafanização 6. Impregnação 7. Inclusão 8. Microtomia 9. Coloração de rotina 10. Montagem

1. Coleta / Colheita do material

- Quem realiza esta fase?

- Tipos: in vivo (biópsia) x post-mortem

Biópsia = é a remoção de tecido de pacientes vivos para exame diagnóstico (amostra obtida por biópsia)

- Acondicionar o material, identificar e colocar a substância fixadora de modo adequado são fundamentais neste momento!

1. Coleta / Colheita do material

- Erros nesta fase:

Fragmento não representativo da lesão Fragmento grandeDiversos fragmentos sem identificação do localFrasco impróprioMaterial em substância inadequadaSubstância fixadora mal preparada ou em pouco

volume

-Exames prévios

Necropsia: Autorização do proprietário!!!

Requisição

-Dados do animal

-Histórico

-Localização/ descrição

-Suspeita clínica

Clínica Escola de Medicina Veterinária Dr. Paulo Alfredo GissoniREQUISIÇÃO PARA ANATOMIA PATOLÓGICA - REG.UCB:_______

Policlínica no________________ Data:__________________Dados do animal:Espécie:_________ Idade:__________ Sexo:__________________ Raça:____________Nome:__________Proprietário:_____________________________________________

Material encaminhado/ Tipo de exame:( ) Peça Cirúrgica / Quantidade de peças: ______ / Histopatologia( ) Peças de necropsia / Quantidade de peças: ______ / Histopatologia( ) Cadáver / somente Necropsia (Macroscopia)( ) Cadáver / Necropsia (Macroscopia) com Histopatologia (Microscopia)

Suspeita clínica:__________________________________________

Histórico:- Local da(s) peça(s) ou órgão (s) encaminhado (s):__________________- Evolução: ( ) horas ( ) dias ( ) meses ( ) anos - Exames prévios com resultados: (se relevantes): __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

- Nas tumorações mamárias:- Usou anticoncepcional ? ( ) sim ( ) não - Castrado ? ( ) sim ( ) não- Pseudociese? ( ) sim ( ) não- Nas biópsias cutâneas: exames/ tratamentos anteriores? __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

- Demais informações relevantes:

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

.............................................................................................. Médico Veterinário Requisitante

(cont. no verso)

Preencher pelo proprietário/responsável no caso de necropsia:Eu,________________________________, identidade n__________________

expedida por __________, responsável pelo presente cadáver , autorizo o exame de necropsia neste. Informo que o referido animal morreu às_____h. do dia_______, tendo sido trazido: ( ) fresco ( ) resfriado ( ) congelado.

( ) Autorizo sua utilização em aulas práticas. ( ) Não autorizo sua utilização em aulas práticas.

______________________________________Assinatura do responsável

Para preencher no laboratório: Data de entrada / responsável pelo recebimento : _________ / __________

- Macroscopia da(s) peça(s) cirúrgica(s): Data da clivagem:________- Clivado por:________ n° frag.:_____n° cassetes:____ n° blocos:______

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

- Microscopia: ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

- Conclusão:_______________________________________________________

__________________________ ____________________________

Assinatura do patologista Data de liberação do laudo

2) FixaçãoConceito: É o tratamento dado a um tecido a fim de se evitar a deteriorização do mesmo por suas próprias enzimas (autólise) ou por microrganismos. Preserva a morfologia e a composição química do tecido através da insolubilidade das proteínas.

XSangueO2

MitocôndriasBomba Na/K

Lisossomos

Fixadores químicos: Formol a 10 % Bicromato de potássio-Simples Bicloreto de mercúrio Etanol Metanol

Líquido de Bouin-Compostos Líquido de Zenker Líquido de Helly

Fixadores físicos:

-Frio (congelamento/câmaras frigoríficas)-Calor (fixação de esfregaços)

Formol a 10%

Fórmula: 100ml de formol 40% (solução estoque)900 ml de água corrente

Ou

1 litro de formol 40% (solução estoque)9 litros de água corrente

Bom fixador

- agir rapidamente, matando a célula

- não interferir na coloração, aumentando a afinidade

do tecido pelo corante

- preservar morfologia e composição química

teciduais

- evitar a autólise e o crescimento de bactérias e

fungos

- não produzir arterfatos ou estruturas artificiais

- ter alto poder de penetração

- endurecer sem deformar

- ser de baixo custo / "atóxico"

-ter ação conservante

Requisitos para uma boa fixação

- intervalo mínimo entre a colheita e a fixação

- contato superfícies/ substância fixadora

- fixador = 20x o volume da peça

- espessura da peça = 1-6 mm

-boa colheita

Cadáver12h48h1 semana

FrescoResfriadoCongelado

2. Fixação

- Cuidados nesta fase:

- Relação tamanho / quantidade do material com o volume da substância fixadora – 20 x o vol da peça

- Substância fixadora: bem preparada

- Relação material x frasco adequado – boca larga

2. Fixação

- Erros nesta fase:

Fragmento grandeFrasco impróprio - pequenoMaterial em substância inadequadaSubstância fixadora mal preparada ou em pouco

volume

Descalcificação

- Quando realizar esta fase adicional ?

3. Clivagem

- É a secção da peça histológica fixada, selecionando a área de maior interesse para estudo

- Nesta fase é feita uma descrição macroscópica do material

3) Clivagem

Descrição macroscópica de PC

1- Local da (s) peça (s)

2- Quantidade: peça única/ retalho/ fragmentos

3- Formato: irregular/ arredondado/ ovalado

4- Tamanho: ...x...x... cm / .... cm diâmetro

5- Superfície externa

6- Consistência aos cortes

7- Superfície de corte

- São consideradas as seguintes características:

- Superfície externa

TonalidadeLisa / rugosaRecoberta por pele (parcial, total, tricotomizada)Úlcera/ íntegraEnvolta por tecido (do tipo adiposo, conjuntivo)Nodular/papilomatosa/deprimida/ulcerada/crostosaCoberta de sujidades/sangue/muco/pusPresença de ectoparasitas- Consistência aos

cortesFriável/ gelatinosa/ bem macia/ macia/ esponjosaElástica/ firme-elástica/ firme/ rangente/ pétreaOra macia, ora firme/ deixando fluir líquido

-Material: Navalha, faca,

bisturi

-Tamanho: 2 a 6 mm

- Finalidade

- Superfície de cortesTonalidade

Irregular/ lisa (compacta)/ fasciculada/ marmóreo/Aspecto fibroso/ untuosa/ lobada ou multilobadacística ou policística (...cm de diâmetro)

Conteúdo dos cistos: consistência (líquido, gelatinoso, caseoso, purulento...)

Tonalidade (brancacenta, pardacenta, rósea, enegrecida, ora.... ora...)

Odor (pútrido, inodoro, amoniacal...)

Planos de corte

3. Clivagem - Cuidados nesta fase: - Material afiado – não “serrar”

- Tamanho adequado do material – cassetes/lamínula

- Área representativa do que se quer estudar- planos de corte

- Acondicionamento adequado nos cassetes – mesma consistência dos fragmentosErros nesta fase ?

4) Desidratação (6h)

5) Diafanização (3h) (clarificação)

6) Impregnação pela parafina (2h) - 56 a 58o C

Remoção da água do tecido por substâncias miscíveis com a água

Remoção do álcool por substâncias miscíveis com o álcool e com a parafina

4. Desidratação

- Cuidados nesta fase: - Desidratação gradual em Álcool etílico...

evitar artefatos- Substituição periódica do álcool- Tempo de permanência do álcool

- Obs. Nesta fase ocorre retração tecidual

Erros nesta fase ?

5. Diafanização

- Cuidados nesta fase: - - Substituição periódica do Xilol (xileno)

- Tempo de permanência no Xilol

- Obs. Nesta fase os fragmentos ficam translúcidos (diáfanos)

Erros nesta fase ?

6. Impregnação pela parafina

- Cuidados nesta fase: - Substituição periódica da Parafina

- Tempo de permanência na Parafina

- Temperatura adequada

Erros nesta fase ?

7) Inclusão em parafinaParafina fundida .... 56o C .... solidificar à temperatura

ambiente

- molde apropriado

- altura = 1,5 cm

7. Inclusão em parafina

- Cuidados nesta fase ?

- Obedecer critérios de consistência e tamanho dos fragmentos, de acordo com a lamínula

- Erros nesta fase ?

8. Microtomia

- Cuidados nesta fase ?

- Navalha afiada- Espessura dos cortes- Técnico com experiência- Temperatura do banho-maria- Temperatura da estufa

- Erros nesta fase ?

9) Coloração de rotina: H. E.

- corantes: Hematoxilina e Eosina

- Hematoxilina ..... corante básico ..... cora estruturas

(natural / vegetal) ácidas Por ex. núcleo

- Eosina ..... corante ácido ..... cora estruturas

(artificial) básicas Por ex. citoplasma

9. Coloração de rotina

- Cuidados nesta fase ?

- Preparo adequado dos corantes- Respeitar os tempos de cada sub-fase da

coloração- Substituição periódica das substâncias

utilizadas

- Erros nesta fase ?

-Colorações especiais (histoquímicas)- exemplos:

- reações que evidenciam a natureza química das substâncias contidas nos tecidos - Azul de Toluidina

- PAS

-Tricrômico de Masson

- Impregnação pela prata (Gomori)

- Colorações para citopatologia- exemplos:

-Hematoxilina e Eosina

-Romanowsky (Diff-Quick, Giemsa, Wright)

-Papanicolau

10) Montagem

-Bálsamo do Canadá / Goma de Damar

CitológicaHistológica

10. Montagem

- Cuidados nesta fase ?

- Cobrir adequadamente os cortes histológicos com as lamínulas

- Utilizar o Bálsamo na diluição correta – evitar bolhas

- Erros nesta fase ?