DOI 1017523biav71n2p135 B Induacutestr Anim Nova Odessav71 n2 p135-142 2014 135

QUALIDADE MICROBIOLOacuteGICA DA AacuteGUA PARA CONSUMO ANIMAL1

Keila Maria roncato Duarte2 luiz HuMberto GoMes3 anGela Daniela Pertile Dozzo2 Flavio rocHa3 siMone PosseDente De lira3 Joatildeo Joseacute assuMPccedilatildeo De abreu DeMarcHi2

1Recebido para publicaccedilatildeo em 28052013 Aceito para publicaccedilatildeo em 060520142Instituto de Zootecnia(IZ) Agecircncia Paulista de Tecnologia dos Agronegoacutecios (APTA) Nova Odessa SP Brasil 3Universidade de Satildeo Paulo (USP) Escola superior de Agricultura ldquoLuiz de Queirozrdquo (ESALQ) Piracicaba SP BrasilAutor correspondente keilaizspgovbr

RESUMO Aacutegua para consumo humano ou animal deve atender ao miacutenimo de exigecircncias de padrotildees de qualidade para garantir consumo adequado sem provocar injurias aos animais devido agrave maacute qualidade como contaminaccedilatildeo microbioloacutegica ou quiacutemica Este trabalho avaliou a qualidade microbioloacutegica da aacutegua oferecida aos animais de produccedilatildeo do Instituto de Zootecnia (IZ) e algumas instalaccedilotildees de pesquisa e administraccedilatildeo Nestas amostras pH coliformes totais Escherichia coli e outras bacteacuterias do grupo das heterotroacuteficas foram quantificados usando o kit comercial Colitest para coliformes totais e Ecoli Os meios R2A e TSA foram utilizados para contagem de bacteacuterias heterotroacuteficas Coliformes totais foram encontrados no Lago do Maracanatilde nas duas amostragens da margem e do interior e em um dos piquetes Na aacuterea central do IZ coliformes totais foram encontrados no Riacho do Planalto nas duas amostragens e no Bosque Isidoro Bordon assim como no Lago Na aacuterea do Manancial nenhum coliforme total foi encontrado Destas aacutereas Ecoli estavam presentes em duas amostragens Do total das 25 coletas 28 apresentaram coliformes totais e 8 Ecoli Para bacteacuterias heterotroacuteficas o maacuteximo indicado pela CETESB para consumo animal eacute de 1000 UFC mL-1 e na comparaccedilatildeo entre os dois meios para contagem de bacteacuterias heterotroacuteficas verificou-se que 68 das amostras apresentaram valores superiores no meio R2A e 32 no meio TSA Na avaliaccedilatildeo dos meios de cultura utilizados o R2A apresentou resultados 293 superiores aos do meio TSA mostrando que um meio rico em nutrientes pode mascarar a variabilidade microbioloacutegica de um ecossistema naturalmente pobre (aacutegua) No teste estatiacutestico de anaacutelise de variacircncia o resultado obtido foi significativo a 1 de probabilidade pelo teste de F (1781) mostrando a diferenccedila entre os meios R2A e TSA utilizados provando que o meio R2A foi melhor na identificaccedilatildeo de bacteacuterias heterotroacuteficas presentes na aacutegua Estudos devem continuar a serem conduzidos de forma a garantir aacutegua de qualidade aos animais de produccedilatildeo

Palavras-chave bacteacuterias heterotroacuteficas coliforme consumo de aacutegua Escherichia coli recursos hiacutedricos

WATER MICROBIOLOGY QUALITY FOR ANIMAL CONSUMPTION

ABSTRACT Water designed for human or animal consumption must attend to minimal quality standards in order to guarantee the ideal consumption without injuries due to bad quality such as microbiology or chemical contaminants This work aimed to evaluate microbiology quality of water offered in the Institute of Animal Science and Pastures (IZ) for animal consumption In 25 sampling sites pH total coliforms Escherichia coli and heterotrophic bacteria were measured using Colitest commercial kit for total and Ecoli and R2A and TSA media for heterotrophic bacteria counting Total coliforms were presented at the Lake at both sampling sites (boarder and inside the Lake) and in one of the paddocks from Maracanatilde area At IZ major area total coliforms were observed at two sampling sites In the Wellspring area (Manancial) no total coliforms were found Ecoli was presented at the lake edge from Maracanatilde area and at the Planalto Stream inside the Institute From all 25 sampling sites 28 showed total coliforms and 8 presented Ecoli For

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QUALIDADE MICROBIOLOacuteGICA DA AacuteGUA PARA CONSUMO ANIMAL

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fresca Com o aumento da temperatura estes animais podem dobrar o consumo de aacutegua (santos e santacuteanna 2010)

A necessidade miacutenima de consumo de aacutegua de bovino de corte eacute de 45 L por cabeccedila por dia ou cerca de 8-9 litros para cada 100 kg de peso vivo em condiccedilotildees de manejo adequado A ovelha gestante aumenta o consumo a partir do terceiro mecircs e dobra no quinto mecircs enquanto que a ovelha lactante tem o dobro do consumo que a natildeo lactante A deprivaccedilatildeo de aacutegua eacute acompanhada por severa depressatildeo no consumo de alimentos e predispotildee as ovelhas a toxemia graviacutedica (ou doenccedila da gestaccedilatildeo) A adequada ingestatildeo de aacutegua eacute essencial para a excreccedilatildeo de substacircncias toacutexicas tais como oxalatos amocircnia e sais minerais A aacutegua a zero grau suprime a atividade microbiana ruminal por 4 horas apoacutes a ingestatildeo diminuindo a taxa de produccedilatildeo Para os ovinos se mantidos em pastagens de qualidade meacutedia o consumo em clima temperado chega a 4 L cabeccedila por dia e de 5 a 6 L cabeccedila por dia em clima quente (Melo 2014) Em bovinos leiteiros o consumo de aacutegua por dia chega a 95 L extremamente influenciado pela quantidade de sais e ferro contido na aacutegua que por sua vez eacute influenciado pela quantidade de micro organismos presentes (Mann et al 2013)

lucas et al (2010) ressaltam ainda que a anaacutelise bacterioloacutegica surge como uma importante ferramenta ao reconhecimento da qualidade da aacutegua de consumo Teacutecnicas bacterioloacutegicas satildeo sensiacuteveis e especiacuteficas ao agente patogecircnico investigado em qualquer instacircncia seja no alimento no solo ou na aacutegua HoeKstra e cHaPaGain (2007) descrevem que a qualidade de aacutegua para consumo animal estaacute diretamente ligada a quantidade de aacutegua gasta no sistema de produccedilatildeo que hoje estaacute inserido no conceito de ldquopegada hidricardquo que nada mais eacute que a quantidade de aacutegua gasta por unidade de produto Quanto melhor a qualidade menor a quantidade de aacutegua gasta

O objetivo do presente trabalho foi analisar a

heterotrophic bacteria the maximum count indicated by official Governmental Agency (CETESB) designated to animal consumption must be under 1000 CFUmL -1 The R2A medium in comparison to TSA medium showed 293 more bacteria countingrsquos confirming that richndashnutrient medium can fade the real count and biodiversity of a poor environment such as the water Variance analysis showed significant difference at 1 by F test (1781) for both R2A and TSA media showing R2A was better for heterotrophic bacteria identification in water resources Other studies must be continued in order to guarantee water quality given to livestock

Keywords heterotrophic bacteria coliform water consumption Escherichia coli hydric resources

INTRODUCcedilAtildeO

A partir da uacuteltima deacutecada do seacuteculo XX a questatildeo ambiental assumiu grande importacircncia no contexto nacional e internacional com o envolvimento direto de instituiccedilotildees de pesquisa organizaccedilotildees e da sociedade de um modo geral Eacute fato que alguns pontos tornam-se cada vez mais expliacutecitos e necessaacuterios como a necessidade de metodologias que forneccedilam subsiacutedios para o planejamento e tomada de decisotildees mais precisas adequadas e aacutegeis poreacutem com visatildeo mais efetiva quanto agrave incorporaccedilatildeo da componente ambiental no processo contemplando num futuro proacuteximo a rastreabilidade da ldquopegada hiacutedricardquo nos sistemas de produccedilatildeo (HoeKstra et al 2011)

A aacutegua de maacute qualidade pode afetar a vida e sauacutede dos animais causando reduccedilatildeo de consumo de aacutegua diarreacuteia reduccedilatildeo de ganho de peso e ateacute morte dos animais A quantidade diaacuteria de aacutegua exigida por bovinos eacute influenciada por fatores tais como temperatura ambiente peso idade fase de vida do animal (prenhez lactaccedilatildeo engorda e crescimento) e consumo de mateacuteria seca O fornecimento de aacutegua pode ser realizado atraveacutes de fontes naturais como represas e lagos ou fontes artificiais como os bebedouros Fornecimento inadequado diminui o consumo alimentar prejudicando o desempenho do animal (alvarez-vasquez et al 2011)

Segundo Melo (2014) do ponto de vista econocircmico a aacutegua representa o nutriente de mais baixo custo poreacutem fisiologicamente eacute essencial no metabolismo orgacircnico Ela estaacute distribuiacuteda no corpo animal de forma heterogecircnea mantendo o equiliacutebrio dinacircmico entre os compartimentos do organismo O aumento da temperatura ambiente leva a um incremento no consumo de aacutegua As perdas de calor corporal pelos suiacutenos e aves eacute um processo dificultoso jaacute que estes natildeo possuem glacircndulas sudoriacuteparas Em clima quente haacute a necessidade de auxiliar a perda de calor destes animais atraveacutes de ambientes adequados e aacutegua

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qualidade microbioloacutegica da aacutegua de consumo animal dentro das aacutereas do Instituto de Zootecnia em Nova Odessa observando a presenccedila de coliformes totais e coliformes fecais e contagem de Bacteacuterias heterotroacuteficas conforme Decreto Nordm 8468 de 1976 da CETESB (CETESB 2008)

MATERIAL E MEacuteTODOS

A sede do Instituto de Zootecnia (IZ) estaacute situada na cidade de Nova Odessa SP e pertence agrave Agencia Paulista de Tecnologia dos Agronegoacutecios Secretaria de Agricultura e Abastecimento do Estado de Satildeo Paulo A aacuterea de estudo eacute de uso agropecuaacuterio e de pesquisa com grande disponibilidade de recursos hiacutedricos Foram selecionadas trecircs aacutereas para amostragem da aacutegua aacuterea destinada a crescimento e engorda de bovinos aacuterea central do IZ e aacuterea de preservaccedilatildeo Ambiental Armelindo Nindo Budini ldquoManancialrdquo as duas uacuteltimas utilizadas como fonte de consumo dos animais uso domeacutestico e instalaccedilotildees de pesquisa e administrativas

Em cada um dos 25 pontos (Tabela 1) de amostragem localizados nas trecircs aacutereas acima citadas a coleta foi feita utilizando uma vasilha plaacutestica de 500 mL vedada com papel alumiacutenio na boca e tampa e autoclavada com o cuidado de evitar contado com as matildeos ou qualquer outro contato com o meio externo Apoacutes a coleta a aacutegua foi armazenada imediatamente em isopor sob refrigeraccedilatildeo a 5ordmC e levada ao laboratoacuterio para processamento das anaacutelises microbioloacutegicas Sob fluxo laminar 50 mL de cada amostra foi semeada com auxiacutelio de alccedila de Drigalski nos meios de cultura usando trecircs repeticcedilotildees para cada coleta

Os meios de cultura utilizados para anaacutelise e contagem das bacteacuterias foram o TSA o R2A e o Kit CoLItestreg (presenccedila de coliformes totais e E coli)

Para a preparaccedilatildeo do meio de cultura TSA diluiu-se em 1000 mL de aacutegua destilada Tryptic Soy Broth (comercial) - 30 gL e Agar - 20 gL O meio de cultura foi dissolvido em frascos Schott de 500 mL e esterilizado em autoclave a 121degC (1 atm) durante 20 minutos Apoacutes esterilizaccedilatildeo os frascos foram arrefecidos ateacute cerca de 50-55degC e colocados em condiccedilotildees de assepsia sob fluxo laminar horizontal cerca de 15 mL em cada uma das caixas de Petri previamente esterilizadas Apoacutes

solidificados os frascos contendo meios de cultura foram acondicionados sob refrigeraccedilatildeo (4degC)

Para a preparaccedilatildeo do meio R2A diluiu-se em 1000 mL de aacutegua destilada 050g de extrato de levedura 050g de protease peptona 050g de caseiacutena hidrolisada 050g de amido 050g de glicose 030g de fosfato hidrogecircnio dipotaacutessico 0024g de sulfato de magneacutesio anidro 030g de piruvato de soacutedio e 1500g de agar O preparo foi idecircntico ao meio acima citado

O kit CoLiItestreg conteacutem frascos descartaacuteveis e esterilizados de 100 mL para colocaccedilatildeo da aacutegua coletada blisters inativadores de cloro meio de cultura COLItestreg revelador Indol e tubos de ensaio para realizaccedilatildeo dos testes de fluorescecircncia e indol A sensibilidade do teste eacute de 1 UFC por 100 mL A aacutegua de cada ponto de amostragem foi coletada e acondicionada nos frascos descartaacuteveis ateacute a marca de 500 mL As amostras cloradas foram previamente tratadas com o blister inativador agindo por 20 minutos Posteriormente adicionou-se o meio de cultura COLItestreg e homogeneizou As amostras foram incubadas em estufas a 37ordmC por 18 a 48hs O frasco controle continha aacutegua purificada por osmose reversa e autoclavada

As provas de fluorescecircncia e indol foram utilizadas para verificaccedilatildeo da presenccedila de E coli nas amostras de aacutegua positivas para coliformes totais Segundo o fabricante 10 mL da amostra foi colocado em frasco e observada sob luz ultravioleta para emissatildeo de fluorescecircncia e em seguida submetida a prova de indol com adiccedilatildeo de 50 mL do regente do Kit Nos resultados positivos (alteraccedilatildeo na cor puacuterpura para o amarelo) se faz necessaacuterio a prova de fluorescecircncia e de indol Jaacute nos resultados negativos (sem alteraccedilatildeo na cor puacuterpura) natildeo haacute necessidade da prova

Para a prova de fluorescecircncia (presenccedila de E coli) foram transferidos 5 mL da cultura onde cresceram coliformes totais para um tubo de ensaio que foi submetido agrave fluorescecircncia azul sob luz ultravioleta (lacircmpada negra de 3 a 6 w ondas longas de 365 nm) A prova de indol (teste opcional para confirmaccedilatildeo de presenccedila de E coli) foi realizadas apoacutes a verificaccedilatildeo da fluorescecircncia adicionando-se ao mesmo tubo 02 mL do revelador de Indol O teste foi positivo quando houve a formaccedilatildeo de um anel vermelho na superfiacutecie do meio (alves 2007 GeHrinG et al 2014)

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fresca Com o aumento da temperatura estes animais podem dobrar o consumo de aacutegua (santos e santacuteanna 2010)

A necessidade miacutenima de consumo de aacutegua de bovino de corte eacute de 45 L por cabeccedila por dia ou cerca de 8-9 litros para cada 100 kg de peso vivo em condiccedilotildees de manejo adequado A ovelha gestante aumenta o consumo a partir do terceiro mecircs e dobra no quinto mecircs enquanto que a ovelha lactante tem o dobro do consumo que a natildeo lactante A deprivaccedilatildeo de aacutegua eacute acompanhada por severa depressatildeo no consumo de alimentos e predispotildee as ovelhas a toxemia graviacutedica (ou doenccedila da gestaccedilatildeo) A adequada ingestatildeo de aacutegua eacute essencial para a excreccedilatildeo de substacircncias toacutexicas tais como oxalatos amocircnia e sais minerais A aacutegua a zero grau suprime a atividade microbiana ruminal por 4 horas apoacutes a ingestatildeo diminuindo a taxa de produccedilatildeo Para os ovinos se mantidos em pastagens de qualidade meacutedia o consumo em clima temperado chega a 4 L cabeccedila por dia e de 5 a 6 L cabeccedila por dia em clima quente (Melo 2014) Em bovinos leiteiros o consumo de aacutegua por dia chega a 95 L extremamente influenciado pela quantidade de sais e ferro contido na aacutegua que por sua vez eacute influenciado pela quantidade de micro organismos presentes (Mann et al 2013)

lucas et al (2010) ressaltam ainda que a anaacutelise bacterioloacutegica surge como uma importante ferramenta ao reconhecimento da qualidade da aacutegua de consumo Teacutecnicas bacterioloacutegicas satildeo sensiacuteveis e especiacuteficas ao agente patogecircnico investigado em qualquer instacircncia seja no alimento no solo ou na aacutegua HoeKstra e cHaPaGain (2007) descrevem que a qualidade de aacutegua para consumo animal estaacute diretamente ligada a quantidade de aacutegua gasta no sistema de produccedilatildeo que hoje estaacute inserido no conceito de ldquopegada hidricardquo que nada mais eacute que a quantidade de aacutegua gasta por unidade de produto Quanto melhor a qualidade menor a quantidade de aacutegua gasta

O objetivo do presente trabalho foi analisar a

heterotrophic bacteria the maximum count indicated by official Governmental Agency (CETESB) designated to animal consumption must be under 1000 CFUmL -1 The R2A medium in comparison to TSA medium showed 293 more bacteria countingrsquos confirming that richndashnutrient medium can fade the real count and biodiversity of a poor environment such as the water Variance analysis showed significant difference at 1 by F test (1781) for both R2A and TSA media showing R2A was better for heterotrophic bacteria identification in water resources Other studies must be continued in order to guarantee water quality given to livestock

Keywords heterotrophic bacteria coliform water consumption Escherichia coli hydric resources

INTRODUCcedilAtildeO

A partir da uacuteltima deacutecada do seacuteculo XX a questatildeo ambiental assumiu grande importacircncia no contexto nacional e internacional com o envolvimento direto de instituiccedilotildees de pesquisa organizaccedilotildees e da sociedade de um modo geral Eacute fato que alguns pontos tornam-se cada vez mais expliacutecitos e necessaacuterios como a necessidade de metodologias que forneccedilam subsiacutedios para o planejamento e tomada de decisotildees mais precisas adequadas e aacutegeis poreacutem com visatildeo mais efetiva quanto agrave incorporaccedilatildeo da componente ambiental no processo contemplando num futuro proacuteximo a rastreabilidade da ldquopegada hiacutedricardquo nos sistemas de produccedilatildeo (HoeKstra et al 2011)

A aacutegua de maacute qualidade pode afetar a vida e sauacutede dos animais causando reduccedilatildeo de consumo de aacutegua diarreacuteia reduccedilatildeo de ganho de peso e ateacute morte dos animais A quantidade diaacuteria de aacutegua exigida por bovinos eacute influenciada por fatores tais como temperatura ambiente peso idade fase de vida do animal (prenhez lactaccedilatildeo engorda e crescimento) e consumo de mateacuteria seca O fornecimento de aacutegua pode ser realizado atraveacutes de fontes naturais como represas e lagos ou fontes artificiais como os bebedouros Fornecimento inadequado diminui o consumo alimentar prejudicando o desempenho do animal (alvarez-vasquez et al 2011)

Segundo Melo (2014) do ponto de vista econocircmico a aacutegua representa o nutriente de mais baixo custo poreacutem fisiologicamente eacute essencial no metabolismo orgacircnico Ela estaacute distribuiacuteda no corpo animal de forma heterogecircnea mantendo o equiliacutebrio dinacircmico entre os compartimentos do organismo O aumento da temperatura ambiente leva a um incremento no consumo de aacutegua As perdas de calor corporal pelos suiacutenos e aves eacute um processo dificultoso jaacute que estes natildeo possuem glacircndulas sudoriacuteparas Em clima quente haacute a necessidade de auxiliar a perda de calor destes animais atraveacutes de ambientes adequados e aacutegua

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MATERIAL E MEacuteTODOS

A sede do Instituto de Zootecnia (IZ) estaacute situada na cidade de Nova Odessa SP e pertence agrave Agencia Paulista de Tecnologia dos Agronegoacutecios Secretaria de Agricultura e Abastecimento do Estado de Satildeo Paulo A aacuterea de estudo eacute de uso agropecuaacuterio e de pesquisa com grande disponibilidade de recursos hiacutedricos Foram selecionadas trecircs aacutereas para amostragem da aacutegua aacuterea destinada a crescimento e engorda de bovinos aacuterea central do IZ e aacuterea de preservaccedilatildeo Ambiental Armelindo Nindo Budini ldquoManancialrdquo as duas uacuteltimas utilizadas como fonte de consumo dos animais uso domeacutestico e instalaccedilotildees de pesquisa e administrativas

Em cada um dos 25 pontos (Tabela 1) de amostragem localizados nas trecircs aacutereas acima citadas a coleta foi feita utilizando uma vasilha plaacutestica de 500 mL vedada com papel alumiacutenio na boca e tampa e autoclavada com o cuidado de evitar contado com as matildeos ou qualquer outro contato com o meio externo Apoacutes a coleta a aacutegua foi armazenada imediatamente em isopor sob refrigeraccedilatildeo a 5ordmC e levada ao laboratoacuterio para processamento das anaacutelises microbioloacutegicas Sob fluxo laminar 50 mL de cada amostra foi semeada com auxiacutelio de alccedila de Drigalski nos meios de cultura usando trecircs repeticcedilotildees para cada coleta

Os meios de cultura utilizados para anaacutelise e contagem das bacteacuterias foram o TSA o R2A e o Kit CoLItestreg (presenccedila de coliformes totais e E coli)

Para a preparaccedilatildeo do meio de cultura TSA diluiu-se em 1000 mL de aacutegua destilada Tryptic Soy Broth (comercial) - 30 gL e Agar - 20 gL O meio de cultura foi dissolvido em frascos Schott de 500 mL e esterilizado em autoclave a 121degC (1 atm) durante 20 minutos Apoacutes esterilizaccedilatildeo os frascos foram arrefecidos ateacute cerca de 50-55degC e colocados em condiccedilotildees de assepsia sob fluxo laminar horizontal cerca de 15 mL em cada uma das caixas de Petri previamente esterilizadas Apoacutes

solidificados os frascos contendo meios de cultura foram acondicionados sob refrigeraccedilatildeo (4degC)

Para a preparaccedilatildeo do meio R2A diluiu-se em 1000 mL de aacutegua destilada 050g de extrato de levedura 050g de protease peptona 050g de caseiacutena hidrolisada 050g de amido 050g de glicose 030g de fosfato hidrogecircnio dipotaacutessico 0024g de sulfato de magneacutesio anidro 030g de piruvato de soacutedio e 1500g de agar O preparo foi idecircntico ao meio acima citado

O kit CoLiItestreg conteacutem frascos descartaacuteveis e esterilizados de 100 mL para colocaccedilatildeo da aacutegua coletada blisters inativadores de cloro meio de cultura COLItestreg revelador Indol e tubos de ensaio para realizaccedilatildeo dos testes de fluorescecircncia e indol A sensibilidade do teste eacute de 1 UFC por 100 mL A aacutegua de cada ponto de amostragem foi coletada e acondicionada nos frascos descartaacuteveis ateacute a marca de 500 mL As amostras cloradas foram previamente tratadas com o blister inativador agindo por 20 minutos Posteriormente adicionou-se o meio de cultura COLItestreg e homogeneizou As amostras foram incubadas em estufas a 37ordmC por 18 a 48hs O frasco controle continha aacutegua purificada por osmose reversa e autoclavada

As provas de fluorescecircncia e indol foram utilizadas para verificaccedilatildeo da presenccedila de E coli nas amostras de aacutegua positivas para coliformes totais Segundo o fabricante 10 mL da amostra foi colocado em frasco e observada sob luz ultravioleta para emissatildeo de fluorescecircncia e em seguida submetida a prova de indol com adiccedilatildeo de 50 mL do regente do Kit Nos resultados positivos (alteraccedilatildeo na cor puacuterpura para o amarelo) se faz necessaacuterio a prova de fluorescecircncia e de indol Jaacute nos resultados negativos (sem alteraccedilatildeo na cor puacuterpura) natildeo haacute necessidade da prova

Para a prova de fluorescecircncia (presenccedila de E coli) foram transferidos 5 mL da cultura onde cresceram coliformes totais para um tubo de ensaio que foi submetido agrave fluorescecircncia azul sob luz ultravioleta (lacircmpada negra de 3 a 6 w ondas longas de 365 nm) A prova de indol (teste opcional para confirmaccedilatildeo de presenccedila de E coli) foi realizadas apoacutes a verificaccedilatildeo da fluorescecircncia adicionando-se ao mesmo tubo 02 mL do revelador de Indol O teste foi positivo quando houve a formaccedilatildeo de um anel vermelho na superfiacutecie do meio (alves 2007 GeHrinG et al 2014)

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qualidade microbioloacutegica da aacutegua de consumo animal dentro das aacutereas do Instituto de Zootecnia em Nova Odessa observando a presenccedila de coliformes totais e coliformes fecais e contagem de Bacteacuterias heterotroacuteficas conforme Decreto Nordm 8468 de 1976 da CETESB (CETESB 2008)

MATERIAL E MEacuteTODOS

A sede do Instituto de Zootecnia (IZ) estaacute situada na cidade de Nova Odessa SP e pertence agrave Agencia Paulista de Tecnologia dos Agronegoacutecios Secretaria de Agricultura e Abastecimento do Estado de Satildeo Paulo A aacuterea de estudo eacute de uso agropecuaacuterio e de pesquisa com grande disponibilidade de recursos hiacutedricos Foram selecionadas trecircs aacutereas para amostragem da aacutegua aacuterea destinada a crescimento e engorda de bovinos aacuterea central do IZ e aacuterea de preservaccedilatildeo Ambiental Armelindo Nindo Budini ldquoManancialrdquo as duas uacuteltimas utilizadas como fonte de consumo dos animais uso domeacutestico e instalaccedilotildees de pesquisa e administrativas

Em cada um dos 25 pontos (Tabela 1) de amostragem localizados nas trecircs aacutereas acima citadas a coleta foi feita utilizando uma vasilha plaacutestica de 500 mL vedada com papel alumiacutenio na boca e tampa e autoclavada com o cuidado de evitar contado com as matildeos ou qualquer outro contato com o meio externo Apoacutes a coleta a aacutegua foi armazenada imediatamente em isopor sob refrigeraccedilatildeo a 5ordmC e levada ao laboratoacuterio para processamento das anaacutelises microbioloacutegicas Sob fluxo laminar 50 mL de cada amostra foi semeada com auxiacutelio de alccedila de Drigalski nos meios de cultura usando trecircs repeticcedilotildees para cada coleta

Os meios de cultura utilizados para anaacutelise e contagem das bacteacuterias foram o TSA o R2A e o Kit CoLItestreg (presenccedila de coliformes totais e E coli)

Para a preparaccedilatildeo do meio de cultura TSA diluiu-se em 1000 mL de aacutegua destilada Tryptic Soy Broth (comercial) - 30 gL e Agar - 20 gL O meio de cultura foi dissolvido em frascos Schott de 500 mL e esterilizado em autoclave a 121degC (1 atm) durante 20 minutos Apoacutes esterilizaccedilatildeo os frascos foram arrefecidos ateacute cerca de 50-55degC e colocados em condiccedilotildees de assepsia sob fluxo laminar horizontal cerca de 15 mL em cada uma das caixas de Petri previamente esterilizadas Apoacutes

solidificados os frascos contendo meios de cultura foram acondicionados sob refrigeraccedilatildeo (4degC)

Para a preparaccedilatildeo do meio R2A diluiu-se em 1000 mL de aacutegua destilada 050g de extrato de levedura 050g de protease peptona 050g de caseiacutena hidrolisada 050g de amido 050g de glicose 030g de fosfato hidrogecircnio dipotaacutessico 0024g de sulfato de magneacutesio anidro 030g de piruvato de soacutedio e 1500g de agar O preparo foi idecircntico ao meio acima citado

O kit CoLiItestreg conteacutem frascos descartaacuteveis e esterilizados de 100 mL para colocaccedilatildeo da aacutegua coletada blisters inativadores de cloro meio de cultura COLItestreg revelador Indol e tubos de ensaio para realizaccedilatildeo dos testes de fluorescecircncia e indol A sensibilidade do teste eacute de 1 UFC por 100 mL A aacutegua de cada ponto de amostragem foi coletada e acondicionada nos frascos descartaacuteveis ateacute a marca de 500 mL As amostras cloradas foram previamente tratadas com o blister inativador agindo por 20 minutos Posteriormente adicionou-se o meio de cultura COLItestreg e homogeneizou As amostras foram incubadas em estufas a 37ordmC por 18 a 48hs O frasco controle continha aacutegua purificada por osmose reversa e autoclavada

As provas de fluorescecircncia e indol foram utilizadas para verificaccedilatildeo da presenccedila de E coli nas amostras de aacutegua positivas para coliformes totais Segundo o fabricante 10 mL da amostra foi colocado em frasco e observada sob luz ultravioleta para emissatildeo de fluorescecircncia e em seguida submetida a prova de indol com adiccedilatildeo de 50 mL do regente do Kit Nos resultados positivos (alteraccedilatildeo na cor puacuterpura para o amarelo) se faz necessaacuterio a prova de fluorescecircncia e de indol Jaacute nos resultados negativos (sem alteraccedilatildeo na cor puacuterpura) natildeo haacute necessidade da prova

Para a prova de fluorescecircncia (presenccedila de E coli) foram transferidos 5 mL da cultura onde cresceram coliformes totais para um tubo de ensaio que foi submetido agrave fluorescecircncia azul sob luz ultravioleta (lacircmpada negra de 3 a 6 w ondas longas de 365 nm) A prova de indol (teste opcional para confirmaccedilatildeo de presenccedila de E coli) foi realizadas apoacutes a verificaccedilatildeo da fluorescecircncia adicionando-se ao mesmo tubo 02 mL do revelador de Indol O teste foi positivo quando houve a formaccedilatildeo de um anel vermelho na superfiacutecie do meio (alves 2007 GeHrinG et al 2014)

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QUALIDADE MICROBIOLOacuteGICA DA AacuteGUA PARA CONSUMO ANIMAL

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Aacuterea 1 Unidade de Recria e Engorda de Bovino de Corte (Maracanatilde)1a Olho daacutegua1b Coacuterrego (30 m distacircncia do olho daacutegua)2a Lago principal (borda)2b Lago principal (4 m distacircncia da borda)3 Torneira do estaacutebulo4 Bebedouro gado de corte (proacuteximo estaacutebulo)5 Bebedouro gado de corte (piquete 12 A)6 Bebedouro gado de corte (piquete 6 A)Aacuterea 2 Sede do IZ- Centro da Cidade7 Torneira casa de confinamento bovino (aacutegua tratada)8 Coacuterrego (ponte da estrada dentro do IZ)9 Lago nascente10 Lago principal IZ11 Bebedouro ovino (aacutegua tratada)12 Nascente de frente com o bosque Izidoro Bordon13 Coacuterrego Planalto (que sai do Bosque)14 Bebedouro gado fistulado (aacutegua tratada)15 Filtro da cozinha Laboratoacuterio de Anaacutelise de Sementes Botacircnica e Fisiologia vegetal (aacutegua tratada e

filtrada)16 Torneira Laboratoacuterio de Anaacutelise de Sementes Botacircnica e Fisiologia vegetal (aacutegua tratada)Aacuterea 3 Aacuterea de Preservaccedilatildeo Ambiental Armelindo Nindo Budini (Manancial)17 Nascente Manancial18 Caixa coletora da nascente Manancial19 Ladratildeo antes da caixa daacutegua20 Caixa daacutegua (com tratamento cloro)21 Coacuterrego Marajoara22 Entrada de aacutegua do coacuterrego Marajoara para o Bosque23 Lago Bosque Izidoro Bordon

Tabela 1 Pontos de amostragem

RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Os resultados das anaacutelises de coliformes fecais e E coli revelaram a presenccedila ou natildeo da populaccedilatildeo bacteriana na amostra Das 25 amostras coletadas 7 mostraram a presenccedila de coliformes totais (28) das quais duas mostraram a presenccedila de coliformes fecais (8) A presenccedila de coliformes totais foi observada nas aacutereas da borda do lago principal (ponto 2a) da aacuterea experimental do Maracanatilde bem como a 4 m de distacircncia da borda (ponto 2b) no bebedouro para gado bovino no piquete 6A na sede do IZ nas aacutereas do coacuterrego (ponte da estrada principal) no lago proacuteximo agrave hospedaria e no Coacuterrego Planalto (que sai do Bosque) aleacutem do lago

do Bosque Isidoro Bordon Destas aacutereas a borda do lago principal da aacuterea experimental do Maracanatilde e o Coacuterrego Planalto (que sai do Bosque e percorre a sede do IZ) apresentaram coliformes fecais sendo totalmente improacuteprias para consumo humano e animal Como resultados da contagem de bacteacuterias heterotroacuteficas (Tabela 2) das 25 amostragens realizadas 16 foram positivas para no meio R2A (64 das amostras) e 7 amostras foram positivas no meio TSA (28)

A aacutegua deve de preferecircncia ser oferecida em bebedouros artificiais com o propoacutesito de evitar danos ambientais (erosatildeo assoreamento) muito comuns em aacutereas de maior declividade solos arenosos e principalmente em pequenos cursos de

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DUARTE KMR et al

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PontosMeio R2A Meio TSA ColiTestregMeacutedia Meacutedia Colif Totais E coliUFCml1 UFCml presenccedila (+) ou ausecircncia (-)

1a 127 20 - -1b 1413 613 - -2a2 2200 1920 + +2b 2113 993 + -3 180W 100 - -4 1620 1087 - -5 5647 660 - -6 3713 1807 + -7 1073 220 - -8 6020 453 + -9 7573 5073 + -10 5440 1147 - -11 4807 7 - -12 3827 980 - -132 2093 61 + +14 153 107 - -15 0 0 - -16 0 0 - -17 0 0 - -18 273 7 - -19 160 0 - -20 0 0 - -21 4420 2387 - -22 5413 587 - -23 3933 1187 + -

Tabela 2 Contagem de bacteacuterias heterotroacuteficas em meio TSA e R2A coliformes totais e E coli nos pontos amostrados

aacutegua (Figura 1) Haacute vaacuterias referecircncias de que a aacutegua defina as ondas de pastejo com os animais iniciando as ondas de desfolhaccedilatildeo da forragem a partir dos pontos de aacutegua Em condiccedilotildees extensivas o bovino pode se afastar ateacute 1600 m do ponto de aacutegua em busca da forragem (Mann et al 2013 coiMbra 2007)

Embora a CETESB natildeo utilize o meio R2A como indicador de qualidade de aacutegua este meio pode ser uma alternativa na contagem de bacteacuterias heterotroacuteficas e no isolamento de subculturas de aacutegua potaacutevel (alves 2007 ManDal et al 2013) Eacute recomendado pela APHA (Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater) para plaqueamento espalhamento em placa e teacutecnica de membrana filtrante (alves 2007) No teste estatiacutestico de anaacutelise de variacircncia (GoMes 2010) o resultado

1UFCmL = Unidade Formadora de Colocircnia por mL de aacutegua 2Amostra positiva para Ecoli

obtido foi significativo a 1 de probabilidade pelo teste de F (1781) mostrando a diferenccedila entre os meios R2A e TSA utilizados provando que o meio R2A obteve melhores resultados na identificaccedilatildeo de bacteacuterias heterotroacuteficas presentes na aacutegua

Tal diferenccedila nas contagens tambeacutem foi observado por Massa et al (1998) e por sMitH et al (2004) que comparando as contagens em ambos os meios o R2A apresentou contagem de bacteacuterias heterotroacuteficas 293 superior aos resultados obtidos no meio TSA mostrando que os meios ricos em nutrientes podem mascarar a variedade de microrganismos presentes na aacutegua (DeFives et al 1999) Para alves (2007) e bartley et al (2013) os meacutetodos oficiais de detecccedilatildeo devem ser revistos de forma a contemplar a gama de bacteacuterias presentes na aacutegua para consumo humano e oferecida aos animais de produccedilatildeo

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QUALIDADE MICROBIOLOacuteGICA DA AacuteGUA PARA CONSUMO ANIMAL

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A contagem de placas eacute recomendada para anaacutelise bacteriana de aacutegua potaacutevel dando estimativa das bacteacuterias aeroacutebicas e facultativamente anaeroacutebias que crescem melhor a 35degC variando entre +5 e -5 0C em um meio rico em nutrientes bastante diferente de seu habitat natural ou seja a aacutegua Entretanto estes micro organismos podem representar pequeno nuacutemero do total de bacteacuterias jaacute que outras bacteacuterias tambeacutem satildeo capazes de crescer na aacutegua mas crescem muito vagarosamente e podem natildeo ser detectadas em 48 horas Agar R2A eacute uma modificaccedilatildeo do meio TSA sendo menos nutritivo e mais semelhante agrave condiccedilatildeo da aacutegua Muitas bacteacuterias de aacuteguas naturais que contecircm nutrientes limitados em temperatura ambiente crescem melhor em meios com niacuteveis menores de nutrientes Elas crescem melhor em temperaturas abaixo a da temperatura de incubaccedilatildeo de rotina do laboratoacuterio de 35 a 37 degC (stewart et al 2013 GeHrinG et al 2014)

O Agar R2A eacute um meio de baixo nutriente consistindo de menos peptona e extrato de levedura quando comparado ao Agar Meacutetodos Padrotildees Este meio permite o crescimento de bacteacuterias estressadas e tolerantes ao cloro presente em aacuteguas tratadas (KoDaKa et al 2008 taner et al 2011)

A presenccedila de cianobacteacuterias em bebedouros deve ser evitada mantendo os bebedouros ao ar livre sempre limpos e com suas bordas escovadas As cianofiacuteceas satildeo confundidas com algas poreacutem

satildeo proliferaccedilotildees de bacteacuterias no meio aquaacutetico Elas satildeo gram-negativas sua parede celular eacute pouco permeaacutevel aos antibioacuteticos e assim como muitas bacteacuterias elas satildeo capazes de liberar toxinas podendo contaminar mananciais de aacutegua sem que o tratamento de aacutegua tradicional e tampouco a sua fervura seja eficaz para a eliminaccedilatildeo das toxinas As cianotoxinas comprometem a vida aquaacutetica e a dos que tecircm ligaccedilatildeo com as mesmas Algumas destas satildeo neurotoxinas bastante potentes e outras satildeo toacutexicas principalmente para o fiacutegado sendo que haacute ainda aquelas que podem ser irritantes por simples contato fiacutesico A diminuiccedilatildeo dos movimentos motores prostraccedilatildeo cefaleacuteia e hemorragias satildeo alguns dos sintomas que podem caracterizar a intoxicaccedilatildeo por ingestatildeo de aacutegua proveniente de fontes contaminadas por cianobacteacuterias (teixeira 2009 bertHiauMe et al 2010)

CONCLUSAtildeO

O meacutetodo R2A mostrou-se mais eficiente na detecccedilatildeo de bacteacuterias heterotroacuteficas e deve ser adotado como meacutetodo padratildeo para contagem total de bacteacuterias heterotroacuteficas estabelecendo padrotildees mais reais agraves agencias de fiscalizaccedilatildeo e controle sanitaacuterio uma vez que identifica micro organismos de multiplicaccedilatildeo tardia As aacutereas analisadas onde havia tratamento com cloro natildeo apresentaram coliformes totais o que demonstra mais uma vez a eficiecircncia deste tratamento A E coli foi detectada em locais onde os animais tanto de produccedilatildeo como os silvestres tem livre acesso levando a contaminaccedilatildeo dos recursos hiacutedricos por pisoteio do solo fezes e urina salientando a importacircncia de isolamento das aacutereas em questatildeo bem como adequada manutenccedilatildeo dos recursos hiacutedricos como isolamento das nascentes e aacutereas de mata nativa

REFEREcircNCIAS

ALVAREZ-VASQUEZ LJ MARTIacuteNEZ-RODRIacuteGUEZ AC VAacuteZQUEZ-MEacuteNDEZET ME SOS A numerical simulation toolbox for decision support related to wastewater discharges and their environmental impact Environmental Modelling amp Software v26 p543-545 2011

ALVES MG Bacteacuterias na aacutegua de abastecimento da cidade de Piracicaba 101 p 2007 Dissertaccedilatildeo (Mestrado) - Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz Piracicaba 2007

BARTLEY R BAINBRIDGE ZT LEWIS EE

Figura 1 Coacuterrego que passa no bairro Marajoara Nova Odessa e desaacutegua no Instituto de Zootecnia com entulhos e assoreamento aleacutem da presenccedila de animal silvestre (ponto de coleta 21)

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DUARTE KMR et al

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KROONC FJ WILKINSOND SN BRODIE JE SILBURN DM Relating sediment impacts on coral reefs to watershed sources processes and management A review Science of the Total Environment v468-469 p1138-115 2013

BERTHIAUME P RAVEL A MICHEL P BRAZEAU S BIGRAS-POULIN M Sensitivity analysis of agroenvironmental indicators of the pressure from livestock production on population health Biosystemns Engineering v105 p71-81 2010

CETESB Infoaacuteguas Disponiacutevel em lt httpwwwcetesbspgovbraguainfoaguas131-sistema-de-informacao-infoaguasgt Acesso em 15 abr 2014

CETESB Qualidade das aacuteguas interiores no Estado de Satildeo Paulo significado ambiental e sanitaacuterio das variaacuteveis de qualidade das aacuteguas e dos sedimentos e metodologias analiacuteticas e de amostragem Satildeo Paulo 2008 41p (Seacuterie relatoacuterios apecircndice A) Disponiacutevel em lt httpwwwcetesbspgovbraguaaguas-superficiais35-publicacoes--relatoriosgt Acesso em 15 abr 2014

COIMBRA PAD Aspectos extriacutensecos do comporta-mento de bebida de bovinos em pastoreio 103p 2007 Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Agroecossistemas) - Universidade Federal de Santa Catarina Florianoacutepolis 2007

DEFIVES C GUYARD S OULAREacute MM MARY P HORNEZ JP Total count culturable and viable non-culturable microflora of a French mineral water a case study Journal of Applied Microbiology v86 p1033-1038 1999

GEHRING AG PAOLI GC REEDA SA TUA SI LINDSAY JA Casamino acids and oxyrase enhance growth of listeria monocytogenes in multi-pathogen enrichments Food Control v40 p93-99 2014

GOMES FP Curso de estatiacutestica experimental 15 ed Piracicaba FEALQ 2010 451p

HOEKSTRA AY CHAPAGAIN AK Water footprints of nations water use by people as a function of their consumption pattern Water Resource Management v21 p35ndash48 2007

HOEKSTRA AY CHAPAGAIN AK ALDAYA MM MEKONNEN MM The Water Footprint Assessment Manual setting the Global Standard London Earthscan 2011 206p

KODAKA H TERAMURA H NIRAZUKA T MIZUOCHI S Evaluation of a new medium for the enumeration of total coliforms and Escherichia coli in Japanese surface waters Journal of Applied Microbiology v104 p1112-1118 2008

LUCAS AAT FOLEGATTI MV DUARTE SN Qualidade da aacutegua em uma microbacia hidrograacutefica do Rio Piracicaba SP Revista Brasileira de Engenharia Agriacutecola e Ambiental v14 p937-943 2010

MANDAL AK KYADAV KK SEN IK KUMAR A CHAKRABORTI S ISLAM SS CHAKRABORTY R Partial characterization and flocculating behavior of an exopolysaccharide produced in nutrient-poor medium by a facultative oligotroph Klebsiella sp PB12 Journal of Bioscience and Bioengineering v115 p76-81 2013

MANN GR DUNCAN SE KNOWLTON KF DIETRICH AD OacuteKEEFE SF Effects of mineral content of bovine drinking water Does iron content affect milk quality Journal of Dairy Science v96 p7478-7489 2013

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SMITH R S PINEIRO SA SINGH R ROMBERG E LABIB ME WILLIAMS HN Discrepancies in bacterial recovery from dental unit water samples on R2A medium and a commercial sampling device Current Microbiology International Journal v48 p243ndash246 2004

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DUARTE KMR et al

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PontosMeio R2A Meio TSA ColiTestregMeacutedia Meacutedia Colif Totais E coliUFCml1 UFCml presenccedila (+) ou ausecircncia (-)

1a 127 20 - -1b 1413 613 - -2a2 2200 1920 + +2b 2113 993 + -3 180W 100 - -4 1620 1087 - -5 5647 660 - -6 3713 1807 + -7 1073 220 - -8 6020 453 + -9 7573 5073 + -10 5440 1147 - -11 4807 7 - -12 3827 980 - -132 2093 61 + +14 153 107 - -15 0 0 - -16 0 0 - -17 0 0 - -18 273 7 - -19 160 0 - -20 0 0 - -21 4420 2387 - -22 5413 587 - -23 3933 1187 + -

Tabela 2 Contagem de bacteacuterias heterotroacuteficas em meio TSA e R2A coliformes totais e E coli nos pontos amostrados

aacutegua (Figura 1) Haacute vaacuterias referecircncias de que a aacutegua defina as ondas de pastejo com os animais iniciando as ondas de desfolhaccedilatildeo da forragem a partir dos pontos de aacutegua Em condiccedilotildees extensivas o bovino pode se afastar ateacute 1600 m do ponto de aacutegua em busca da forragem (Mann et al 2013 coiMbra 2007)

Embora a CETESB natildeo utilize o meio R2A como indicador de qualidade de aacutegua este meio pode ser uma alternativa na contagem de bacteacuterias heterotroacuteficas e no isolamento de subculturas de aacutegua potaacutevel (alves 2007 ManDal et al 2013) Eacute recomendado pela APHA (Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater) para plaqueamento espalhamento em placa e teacutecnica de membrana filtrante (alves 2007) No teste estatiacutestico de anaacutelise de variacircncia (GoMes 2010) o resultado

1UFCmL = Unidade Formadora de Colocircnia por mL de aacutegua 2Amostra positiva para Ecoli

obtido foi significativo a 1 de probabilidade pelo teste de F (1781) mostrando a diferenccedila entre os meios R2A e TSA utilizados provando que o meio R2A obteve melhores resultados na identificaccedilatildeo de bacteacuterias heterotroacuteficas presentes na aacutegua

Tal diferenccedila nas contagens tambeacutem foi observado por Massa et al (1998) e por sMitH et al (2004) que comparando as contagens em ambos os meios o R2A apresentou contagem de bacteacuterias heterotroacuteficas 293 superior aos resultados obtidos no meio TSA mostrando que os meios ricos em nutrientes podem mascarar a variedade de microrganismos presentes na aacutegua (DeFives et al 1999) Para alves (2007) e bartley et al (2013) os meacutetodos oficiais de detecccedilatildeo devem ser revistos de forma a contemplar a gama de bacteacuterias presentes na aacutegua para consumo humano e oferecida aos animais de produccedilatildeo

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QUALIDADE MICROBIOLOacuteGICA DA AacuteGUA PARA CONSUMO ANIMAL

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A contagem de placas eacute recomendada para anaacutelise bacteriana de aacutegua potaacutevel dando estimativa das bacteacuterias aeroacutebicas e facultativamente anaeroacutebias que crescem melhor a 35degC variando entre +5 e -5 0C em um meio rico em nutrientes bastante diferente de seu habitat natural ou seja a aacutegua Entretanto estes micro organismos podem representar pequeno nuacutemero do total de bacteacuterias jaacute que outras bacteacuterias tambeacutem satildeo capazes de crescer na aacutegua mas crescem muito vagarosamente e podem natildeo ser detectadas em 48 horas Agar R2A eacute uma modificaccedilatildeo do meio TSA sendo menos nutritivo e mais semelhante agrave condiccedilatildeo da aacutegua Muitas bacteacuterias de aacuteguas naturais que contecircm nutrientes limitados em temperatura ambiente crescem melhor em meios com niacuteveis menores de nutrientes Elas crescem melhor em temperaturas abaixo a da temperatura de incubaccedilatildeo de rotina do laboratoacuterio de 35 a 37 degC (stewart et al 2013 GeHrinG et al 2014)

O Agar R2A eacute um meio de baixo nutriente consistindo de menos peptona e extrato de levedura quando comparado ao Agar Meacutetodos Padrotildees Este meio permite o crescimento de bacteacuterias estressadas e tolerantes ao cloro presente em aacuteguas tratadas (KoDaKa et al 2008 taner et al 2011)

A presenccedila de cianobacteacuterias em bebedouros deve ser evitada mantendo os bebedouros ao ar livre sempre limpos e com suas bordas escovadas As cianofiacuteceas satildeo confundidas com algas poreacutem

satildeo proliferaccedilotildees de bacteacuterias no meio aquaacutetico Elas satildeo gram-negativas sua parede celular eacute pouco permeaacutevel aos antibioacuteticos e assim como muitas bacteacuterias elas satildeo capazes de liberar toxinas podendo contaminar mananciais de aacutegua sem que o tratamento de aacutegua tradicional e tampouco a sua fervura seja eficaz para a eliminaccedilatildeo das toxinas As cianotoxinas comprometem a vida aquaacutetica e a dos que tecircm ligaccedilatildeo com as mesmas Algumas destas satildeo neurotoxinas bastante potentes e outras satildeo toacutexicas principalmente para o fiacutegado sendo que haacute ainda aquelas que podem ser irritantes por simples contato fiacutesico A diminuiccedilatildeo dos movimentos motores prostraccedilatildeo cefaleacuteia e hemorragias satildeo alguns dos sintomas que podem caracterizar a intoxicaccedilatildeo por ingestatildeo de aacutegua proveniente de fontes contaminadas por cianobacteacuterias (teixeira 2009 bertHiauMe et al 2010)

CONCLUSAtildeO

O meacutetodo R2A mostrou-se mais eficiente na detecccedilatildeo de bacteacuterias heterotroacuteficas e deve ser adotado como meacutetodo padratildeo para contagem total de bacteacuterias heterotroacuteficas estabelecendo padrotildees mais reais agraves agencias de fiscalizaccedilatildeo e controle sanitaacuterio uma vez que identifica micro organismos de multiplicaccedilatildeo tardia As aacutereas analisadas onde havia tratamento com cloro natildeo apresentaram coliformes totais o que demonstra mais uma vez a eficiecircncia deste tratamento A E coli foi detectada em locais onde os animais tanto de produccedilatildeo como os silvestres tem livre acesso levando a contaminaccedilatildeo dos recursos hiacutedricos por pisoteio do solo fezes e urina salientando a importacircncia de isolamento das aacutereas em questatildeo bem como adequada manutenccedilatildeo dos recursos hiacutedricos como isolamento das nascentes e aacutereas de mata nativa

REFEREcircNCIAS

ALVAREZ-VASQUEZ LJ MARTIacuteNEZ-RODRIacuteGUEZ AC VAacuteZQUEZ-MEacuteNDEZET ME SOS A numerical simulation toolbox for decision support related to wastewater discharges and their environmental impact Environmental Modelling amp Software v26 p543-545 2011

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BARTLEY R BAINBRIDGE ZT LEWIS EE

Figura 1 Coacuterrego que passa no bairro Marajoara Nova Odessa e desaacutegua no Instituto de Zootecnia com entulhos e assoreamento aleacutem da presenccedila de animal silvestre (ponto de coleta 21)

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DUARTE KMR et al

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KROONC FJ WILKINSOND SN BRODIE JE SILBURN DM Relating sediment impacts on coral reefs to watershed sources processes and management A review Science of the Total Environment v468-469 p1138-115 2013

BERTHIAUME P RAVEL A MICHEL P BRAZEAU S BIGRAS-POULIN M Sensitivity analysis of agroenvironmental indicators of the pressure from livestock production on population health Biosystemns Engineering v105 p71-81 2010

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CETESB Qualidade das aacuteguas interiores no Estado de Satildeo Paulo significado ambiental e sanitaacuterio das variaacuteveis de qualidade das aacuteguas e dos sedimentos e metodologias analiacuteticas e de amostragem Satildeo Paulo 2008 41p (Seacuterie relatoacuterios apecircndice A) Disponiacutevel em lt httpwwwcetesbspgovbraguaaguas-superficiais35-publicacoes--relatoriosgt Acesso em 15 abr 2014

COIMBRA PAD Aspectos extriacutensecos do comporta-mento de bebida de bovinos em pastoreio 103p 2007 Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Agroecossistemas) - Universidade Federal de Santa Catarina Florianoacutepolis 2007

DEFIVES C GUYARD S OULAREacute MM MARY P HORNEZ JP Total count culturable and viable non-culturable microflora of a French mineral water a case study Journal of Applied Microbiology v86 p1033-1038 1999

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GOMES FP Curso de estatiacutestica experimental 15 ed Piracicaba FEALQ 2010 451p

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KODAKA H TERAMURA H NIRAZUKA T MIZUOCHI S Evaluation of a new medium for the enumeration of total coliforms and Escherichia coli in Japanese surface waters Journal of Applied Microbiology v104 p1112-1118 2008

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MANDAL AK KYADAV KK SEN IK KUMAR A CHAKRABORTI S ISLAM SS CHAKRABORTY R Partial characterization and flocculating behavior of an exopolysaccharide produced in nutrient-poor medium by a facultative oligotroph Klebsiella sp PB12 Journal of Bioscience and Bioengineering v115 p76-81 2013

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QUALIDADE MICROBIOLOacuteGICA DA AacuteGUA PARA CONSUMO ANIMAL

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A contagem de placas eacute recomendada para anaacutelise bacteriana de aacutegua potaacutevel dando estimativa das bacteacuterias aeroacutebicas e facultativamente anaeroacutebias que crescem melhor a 35degC variando entre +5 e -5 0C em um meio rico em nutrientes bastante diferente de seu habitat natural ou seja a aacutegua Entretanto estes micro organismos podem representar pequeno nuacutemero do total de bacteacuterias jaacute que outras bacteacuterias tambeacutem satildeo capazes de crescer na aacutegua mas crescem muito vagarosamente e podem natildeo ser detectadas em 48 horas Agar R2A eacute uma modificaccedilatildeo do meio TSA sendo menos nutritivo e mais semelhante agrave condiccedilatildeo da aacutegua Muitas bacteacuterias de aacuteguas naturais que contecircm nutrientes limitados em temperatura ambiente crescem melhor em meios com niacuteveis menores de nutrientes Elas crescem melhor em temperaturas abaixo a da temperatura de incubaccedilatildeo de rotina do laboratoacuterio de 35 a 37 degC (stewart et al 2013 GeHrinG et al 2014)

O Agar R2A eacute um meio de baixo nutriente consistindo de menos peptona e extrato de levedura quando comparado ao Agar Meacutetodos Padrotildees Este meio permite o crescimento de bacteacuterias estressadas e tolerantes ao cloro presente em aacuteguas tratadas (KoDaKa et al 2008 taner et al 2011)

A presenccedila de cianobacteacuterias em bebedouros deve ser evitada mantendo os bebedouros ao ar livre sempre limpos e com suas bordas escovadas As cianofiacuteceas satildeo confundidas com algas poreacutem

satildeo proliferaccedilotildees de bacteacuterias no meio aquaacutetico Elas satildeo gram-negativas sua parede celular eacute pouco permeaacutevel aos antibioacuteticos e assim como muitas bacteacuterias elas satildeo capazes de liberar toxinas podendo contaminar mananciais de aacutegua sem que o tratamento de aacutegua tradicional e tampouco a sua fervura seja eficaz para a eliminaccedilatildeo das toxinas As cianotoxinas comprometem a vida aquaacutetica e a dos que tecircm ligaccedilatildeo com as mesmas Algumas destas satildeo neurotoxinas bastante potentes e outras satildeo toacutexicas principalmente para o fiacutegado sendo que haacute ainda aquelas que podem ser irritantes por simples contato fiacutesico A diminuiccedilatildeo dos movimentos motores prostraccedilatildeo cefaleacuteia e hemorragias satildeo alguns dos sintomas que podem caracterizar a intoxicaccedilatildeo por ingestatildeo de aacutegua proveniente de fontes contaminadas por cianobacteacuterias (teixeira 2009 bertHiauMe et al 2010)

CONCLUSAtildeO

O meacutetodo R2A mostrou-se mais eficiente na detecccedilatildeo de bacteacuterias heterotroacuteficas e deve ser adotado como meacutetodo padratildeo para contagem total de bacteacuterias heterotroacuteficas estabelecendo padrotildees mais reais agraves agencias de fiscalizaccedilatildeo e controle sanitaacuterio uma vez que identifica micro organismos de multiplicaccedilatildeo tardia As aacutereas analisadas onde havia tratamento com cloro natildeo apresentaram coliformes totais o que demonstra mais uma vez a eficiecircncia deste tratamento A E coli foi detectada em locais onde os animais tanto de produccedilatildeo como os silvestres tem livre acesso levando a contaminaccedilatildeo dos recursos hiacutedricos por pisoteio do solo fezes e urina salientando a importacircncia de isolamento das aacutereas em questatildeo bem como adequada manutenccedilatildeo dos recursos hiacutedricos como isolamento das nascentes e aacutereas de mata nativa

REFEREcircNCIAS

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