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MODULAO DA TOXICIDADE DE INJETVEIS DE
ANTIMONIATO DE MEGLUMINA ATRAVS DO ESTUDO DE
DESENVOLVIMENTO DE NOVAS FORMULAES
FARMACUTICAS
VANIA NEVES MOREIRA JULIANO
Programa de Ps-Graduao em Vigilncia Sanitria
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade
Fundao Oswaldo Cruz
Orientadores: Prof. Dr. Lcio Mendes Cabral
Prof. Dr. Ricardo Erthal Santelli
Rio de Janeiro
2004
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ii
MODULAO DA TOXICIDADE DE INJETVEIS DE ANTIMONIATO
DE MEGLUMINA ATRAVS DO ESTUDO DE DESENVOLVIMENTO
DE NOVAS FORMULAES FARMACUTICAS
VANIA NEVES MOREIRA JULIANO
Dissertao apresentada Comisso Examinadora composta pelo corpo docente do
Programa de Ps-Graduao em Vigilncia Sanitria do Instituto Nacional de Controle de
Qualidade em Sade da Fundao Oswaldo Cruz e por professores convidados de outras
instituies, como parte dos requisitos necessrios obteno do grau de Mestre.
Aprovado:
Prof.______________________________________(UFF)
Dr. Ricardo Jorgensen Cassella
Prof.______________________________________(UFRJ)
Dra. Valria Pereira de Souza
Prof.______________________________________(FIOCRUZ)
Dr. Lcio Mendes Cabral
Prof.______________________________________(FIOCRUZ) - suplente
Dra. Maria Helena Simes Villas Boas
Orientadores: Prof. Dr. Lcio Mendes Cabral e Prof. Dr. Ricardo Erthal Santelli
Rio de Janeiro
2004
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iii
FICHA CATALOGRFICA
Juliano, Vania Neves Moreira
Modulao da toxicidade de injetveis de antimoniato de meglumina atravs
do estudo de desenvolvimento de novas formulaes farmacuticas./ Vania Neves
Moreira Juliano. Rio de Janeiro: INCQS/ FIOCRUZ, 2004.
xvi, 72 p., il., tab.
Dissertao em Vigilncia Sanitria, Programa Ps-Graduao em Vigilncia
Sanitria / INCQS, 2004. Orientadores: Lcio Mendes Cabral e Ricardo
Erthal Santelli.
1. Meglumina antimoniato. 2. Especiao. ICP-OES. 3.Estabilidade. 4. Validao.
I. Ttulo.
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iv
As dificuldades so superadas quando
lembramos que Deus nos abenoa a cada
instante, a mim, na forma de quatro
vidas: Marcelo, Ana Carolina, Alexandre
e Victor, meus filhos, aos quais dedico
este trabalho.
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v
No se pode ensinar coisa alguma a
algum; pode-se apenas auxili-la a
descobrir por si mesmo.
Galileu
http://www.citador.pt/view_quotes_collection.php?author=1020&firstrec=0
-
vi
AGRADECIMENTOS
A Deus por todas as coisas;
Ao meu esposo Alexandre pela ajuda e compreenso;
Aos meus filhos pelo carinho e compreenso;
Aos meus pais pelo incentivo;
A minha irm Sueli pela dedicao aos meus filhos;
Ao professor Lcio Mendes Cabral pela orientao e ensinamentos;
Ao professor Ricardo Erthal Santelli do Departamento de Geoqumica da UFF pela
orientao, ensinamentos e pela cesso de espao, equipamentos e materiais no
Laboratrio de Espectroanaltica, Automao e Ambiental da UFF;
Ao professor Ricardo Cassella do Departamento de Qumica analtica da UFF
pelos ensinamentos;
Aos professores rico Flores, Eliane Pereira e Celso Bittencourt da UFSM pela
colaborao;
Farmcia do HUAP pela gentil contribuio de materiais;
Ao Cel Haroldo e ao Laboratrio Qumico Farmacutico do Exrcito pelo incentivo
e ajuda financeira para aquisio de materiais respectivamente;
Ao Capito Aldair Falco do Laboratrio Qumico Farmacutico do Exrcito pelo
incentivo e empenho na compra de materiais;
Aos amigos Eliane, Fabiana, Mariana, Bruno e Silvinha do laboratrio de
espectroanaltica da UFF pelo incentivo e ajuda.
As amigas Salete Vellasco do Nascimento, Carla Cristina Velasco do Nascimento
Freixo e Cristiane Campos pela ajuda no idioma ingls.
Ao Instituto Vital Brazil pela gentil colaborao no envase das ampolas.
A SCHOTT pela gentil contribuio no fornecimento das ampolas.
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vii
RESUMO
Neste trabalho foram realizados estudos referentes ao desenvolvimento de oito
formulaes de medicamentos injetveis de antimoniato de meglumina, assim como, da
metodologia analtica utilizada para determinao de Sb(III) e Sb total por HG-ICP-OES e
ICP-OES respectivamente, deste ativo. O principal objetivo deste esforo visou posterior
implantao da produo deste medicamento em Laboratrio da Rede Oficial, visto sua
relevncia estratgica para sade pblica e a negligncia do setor produtivo privado em
termos de sua produo e comercializao. Para este fim, foram utilizados excipientes com
funo antioxidante/estabilizante como metabissulfito de sdio e Na2EDTA, ao mesmo
tempo em que se avaliou o uso de tampo fosfato pH 6,5 a fim de verificar seu impacto na
estabilidade da formulao. O efeito da autoclavao e da presena de veculos contendo
propilenoglicol em propores de 20:80 e 50:50 em gua frente a veculos aquosos, foi
tambm verificado com o propsito de avaliar a estabilidade dos processos de oxi-reduo
atravs da reduo da constante dieltrica do meio ou degradao do ativo. As formulaes
foram mantidas em estufa a 40 C por 90 dias e amostras foram retiradas a cada 30 dias
para que os parmetros de pH, densidade, teor de Sb(III) e Sb total fossem medidos.
Paralelamente foram realizados o desenvolvimento e validao de metodologia analtica
utilizando HG-ICP-OES como tcnica alternativa preconizada pela Farmacopia
Brasileira 4 edio. Os resultados obtidos apontaram como formulaes mais adequadas,
para posterior implantao em escala industrial, as formulaes cujos veculos
apresentavam propilenoglicol/gua na proporo 20:80, pois a mesma apresentou menores
valores de Sb(III) mostrando que a reduo da constante dieltrica do meio capaz de
diminuir as reaes tipo redox no sistema. Essas formulaes tambm mostraram menor
variao com relao aos teores de Sb(III) durante o tempo de estudo. A utilizao de
tampo se mostrou desnecessria para estabilizar a formulao, bem como no se verificou
influncia da autoclavao na qualidade do produto, indicando ser seu processo futuro de
fabricao mais robusto. Quanto metodologia analtica os resultados apontaram para o
mtodo proposto como alternativa eficiente para determinao de Sb(III) na presena de
grandes quantidades de Sb(V) em solues injetveis de antimoniato de meglumina, de
forma seletiva, linear, exata e precisa, alm de apresentar baixo limite de quantificao,
menor interferncia de matriz e maior robustez com relao s tcnicas em batelada,
atualmente proposta na Farmacopia Brasileira.
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viii
ABSTRACT
This dissertation was based on the studies of the development of eight injectable
medication of Meglumine Antimoniate as well as the analytical methodology used to
determine the Sb(III) and total Sb of this active principle by HG-ICP-OES and ICP OES,
respectively. The research aimed at a post- implementation of the production of this drug at
a state laboratory, due to its strategic importance to public health and the negligence of
private health care industries in relation to its production and commercialization. In order
to achieve that objective, excipients with anti-oxidation/ stabilizing functions such as
sodium metabissulfite and EDTA were used. At the same time, the use of phosphate buffer
pH 6,5 was evaluated so as to verify its impact in the stability of the formulation. The
effect of the autoclavation and the presence of vehicles containing propylene glycol in
proportions of 20:80 and 50:50 in water, as compared to watery vehicles, were also
observed with the aim of evaluating the stability of the oxi-reduction processes through the
reduction of the dielectric constant of the environment or the degradation of the active
substance. The formulations were kept in a heater at 40C for 90 days and samples were
withdrawn every 30 days so that the parameters of pH, density, Sb(III) and total Sb dosage
were measured. Parallel to this, the development and the validation of the analytical
methodology were assessed using HG-ICP-OES as alternative techniques to the one
recommended by the 4th edition of the Brazilian Pharmacopeia. The obtained results
pointed to the formulations whose vehicles showed propylene glycol/water in the
proportion 20:80 as the most adequate to a later implementation in industrial scale since
they showed inferior quantities of Sb(III). This revealed that the reduction of the dielectric
constant can diminish redox reactions in the system. These formulations also showed
minor variation in relation to the dosage of Sb(III) during the study time. Not only did the
use of the buffer show to be useless to stabilize the formulation but the influence of the
autoclavation in the product quality was not registered as well, indicating that its future
process of production is more robust. In relation to the analytical methodology, the results
pointed to the proposed method as an efficient alternative to the determination of Sb(III) in
the presence of great quantities of Sb(V) in injectable solutions of Meglumine
Antimoniate, in a selective, linear, exact and accurate way. In addition to that, it showed a
low limit of quantification, less interference of the matrix and a higher robustness in
relation to the techniques in batch, currently proposed by the Brazilian Pharmacopeia.
-
ix
LISTA DE TABELAS Tabela 1- Formulaes propostas para o produto Antimoniato de meglumina ............... 23
Tabela 2- Parmetros operacionais instrumentais relevantes do ICP-OES e HG-ICP-
OES...................................................................................................................................
25
Tabela 3- Frmula do placebo utilizado na preparao da amostra para teste de
exatido.............................................................................................................................
28
Tabela 4- Percentual e concentrao de padro utilizada para construo da curva para
linearidade de Sb total.....................................................................................
30
Tabela 5- Percentual em relao s concentraes tericas de de Sb(V) no
produto..............................................................................................................................
30
Tabela 6- Intensidades (CPS) e seus respectivos desvios padro para as diversas
concentraes de cido ctrico. Concentrao de borohidreto de sdio=1%....................
36
Tabela 7- Valor de t calculado para cada par de concentraes de cido ctrico t crtico 0,01,4= 4,604..............................................................................................................
41
Tabela 8- Intensidades (CPS) e seus respectivos desvios padro para as diversas
concentraes de borohidreto de sdio.............................................................................
42
Tabela 9- Intensidades de emisso tica (CPS) e seus respectivos desvios padro para
os diversos tamanhos de reatores helicoidais ..................................................................
43
Tabela 10- Intensidades (CPS) e desvios relativos aos pontos da curva de
calibrao.....................................................................................................................
44
Tabela 11- Linearidade na determinao de Sb(III)......................................................... 44
Tabela 12- Exatido do Mtodo HG-ICP OES para determinao de Sb(III).................. 45
Tabela 13- Concentraes e desvios encontrados para o teste de repetibilidade para
Sb(III)...............................................................................................................................
46
Tabela 14- Concentraes e desvios padro encontrados para o teste de preciso
intermediria para Sb(III).................................................................................................
47
Tabela 15- Limite de quantificao para Sb(III).............................................................. 48
Tabela 16- Intensidade (CPS) e os respectivos desvios relativos para cada ponto da
curva de calibrao...........................................................................................................
49
Tabela 17- Parmetros de linearidade para Sb total......................................................... 50
Tabela 18- Exatido do Mtodo para Sb total.................................................................. 50
-
x
Tabela 19- Concentraes e desvio encontrados para o teste de repetibilidade de Sb
total...................................................................................................................................
51
Tabela 20- Concentraes e desvios padro encontrados para o teste de preciso
intermediria para Sb total................................................................................................
52
Tabela 21- Limite de quantificao para Sb total............................................................ 54
Tabela 22 - Valores de pH e os respectivos desvios padro para as 8 formulaes
40C.................................................................................................................................. 56
Tabela 23- Valores de t calculado para os seis pares de tempo.t critico 0,01;2 = 9,925 K=
6 = 95%(0,05) N= 2 ' =0,01........................................................................................
57
Tabela 24 - Valores de densidade e os respectivos desvios padro para as 8
formulaes.......................................................................................................................
58
Tabela 25- Valores de t calculado para os seis pares de tempo. t critico 0,01;2 = 9,925;
K= 6 = 95%(0,05); N= 2; ' =0,01..............................................................................
59
Tabela 26- Valores de Sb(III) (mg/mL) encontrados para as 8 formulaes durante os
90 dias.......................................................................................
59
Tabela 27- Valores de t calculados para os quatro pares de formulaes. t crtico 0,05;2=
4,303. F1 = Formulao 1; F2 = Formulao 2; F3= Formulao 3 e F4 = Formulao
4 F5 = Formulao 5; F6 = Formulao 6; F7= Formulao 7 e F8 = Formulao 8......
60
Tabela 28- Valores de t calculados para os dois pares de formulaes. t crtico 0,05;2=
4,303. F1= Formulao 1; F2 = Formulao 2; F3 = Formulao 3 e F4 =
Formulao 4....................................................................................................................
61
Tabela 29- Valores de Sb total (mg/mL) e Sb(III) (mg/mL) encontrados para as 8
formulaes durante os 90 dias......................................................................................... 63
Tabela 30- Concentrao de metais (mg/L) encontrados nas trs matrias-primas
analisadas.........................................................................................................................
65
Tabela 31- Concentraes de Sb(III) e Sb total encontrados nas trs matrias-primas
analisadas..........................................................................................................................
66
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xi
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 - Fmea do Flebotomneo (vetor de transmisso da leishmaniose).................. 01
Figura 2- (a) Forma lcero-vegetante extensa, acometendo ndegas e membros
inferiores, (b) Leso lcero custosa localizada na regio frontal, (c) Destruio do
septo nasal com infiltrao local.....................................................................................
02
Figura 3- Paciente com LV (paciente com hepatoesplenomegalia)................................ 03
Figura 4- Reao entre composto de antimnio e dimercaprol....................................... 05
Figura 5- Frmula estrutural do antimoniato de meglumina (C7 H18 N 08 Sb), PM:
365,98..............................................................................................................................
10
Figura 6 - ICP-OES modelo ULTIMA-2 (JOBIN YVON)............................................. 20
Figura 7 - Amostrador automtico modelo AS 421 (JOBIN YVON)............................. 20
Figura 8- Equao que expressa o limite de quantificao............................................. 29
Figura 9 - Diagrama dos aparatos utilizados para gerao de hidretos em fluxo
contnuo...........................................................................................................................
34
Figura 10- Efeito da concentrao de cido ctrico no sinal para HG-ICP-OES............ 36
Figura 11 - Efeito da concentrao do sdio borohidreto na HG-ICP-OES................... 42
Figura 12- Efeito do comprimento do reator helicoidal no HG-ICP-OES...................... 43
Figura 13- Curva de calibrao para verificao da linearidade na determinao de
Sb(III)..............................................................................................................................
44
Figura 14- Curva obtida para determinao do limite de quantificao do Sb(III)........ 48
Figura 15- Curva de calibrao para linearidade de antimnio total... 49
Figura 16- Curva obtida para determinao do limite de quantificao do Sb total....... 53
Figura 17- Box Plot das oito formulaes F1= Formulao 1; F2 = Formulao 2;
F3 = Formulao 3; F4 = Formulao 4; F5= Formulao 5; F6 = Formulao 6; F7=
Formulao 7; F8 = Formulao 8..................................................................................
62
-
xii
LISTA DE ABREVIATURAS, SMBOLOS OU SIGLAS. ANVISA: Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
BPF: Boas prticas de Fabricao
CE-ICP-MS: Capillary Electrophoresis- Inductively Coupled Plasma- Mass Spectrometry
Na2EDTA: Etileno Diamino Tetracetato dissdico
DRX: Difrao de raio- X
FB: Farmacopia Brasileira
FIOCRUZ: Fundao Oswaldo Cruz
FUNASA: Fundao Nacional de Sade
H0: Hiptese nula
HG-AAS: Hydride Generation- Atomic Absorption Spectrometry
HG-AES: Hyidride Generation- Atomic Emission Spectrometry
HG-AFS: Hydride Generation- Atomic Fluorescence Spectrometry
HG-ICP-OES: Hydride Generation- Inductively Coupled Plasma- Optical Emission
Spectrometry
HG-ICP-MS: Hydride Generation- Inductively Coupled Plasma- Mass Spectrometry
HPLC: High Performance Liquid Chromatography
HPLC-HG- AAS: High Performance Liquid Chromatography- Hydride Generation Atomic
Absorption Spectrometry
HPLC-HG- AFS: High Performance Liquid Chromatography- Hydride Generation Atomic
Fluorescence Spectrometry
IC: Intervalo de confiana
ICP-OES: Inductively Coupled Plasma- Optical Emission Spectrometry
INCQS: Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade
LC: Leishmaniose cutnea
LD: Limite de deteco
LM : Leishmaniose mucosa
LQFEx: Laboratrio Qumico Farmacutico do Exrcito
LTA: Leishmaniose Tegumentar Americana
LV: Leishmaniose visceral
nm: nanmetros
OMS: Organizao Mundial de Sade
RMN: Ressonncia Magntica Nuclear
RSD: Relative Standard Deviation
-
xiii
SD: Standard Deviation
UFF: Universidade Federal Fluminense
UFRJ: Universidade Federal do Rio de Janeiro
USP: The United States Pharmacopeia
WFI: gua para injetveis
-
xiv
SUMRIO
AGRADECIMENTOS................................................................................................ vi
RESUMO..................................................................................................................... vii
ABSTRACT................................................................................................................. viii
LISTA DE TABELAS................................................................................................ ix
LISTA DE FIGURAS................................................................................................. xi
LISTA DE ABREVIATURAS, SMBOLOS OU SIGLAS..................................... xii
1 INTRODUO..................................................................................................... 01
1. 1 Generalidades...................................................................................................... 01
1. 2 Epidemiologia..................................................................................................... 03
1. 3 Tratamento.......................................................................................................... 04
1. 4 Farmacologia....................................................................................................... 05
1.4.1 Dose.................................................................................................................... 06
1.4.1.1 Leses Cutneas................................................................................................ 06
1.4.1.2 Leses Mucosas................................................................................................ 07
1.4.1.3 Visceral............................................................................................................. 07
1.4.2 Efeitos colaterais................................................................................................. 07
1.4.3 Reaes Adversas............................................................................................... 07
1. 5 Formulaes........................................................................................................ 08
1.5.1 Estabilidade de formulaes............................................................................... 10
1.5.2 Anlise de formulaes....................................................................................... 12
1. 6 Justificativa......................................................................................................... 13
2 OBJETIVOS.......................................................................................................... 17
3 MATERIAIS E MTODOS................................................................................. 18
3. 1 Materiais............................................................................................................... 18
3. 1.1 Formulaes....................................................................................................... 18
3. 1.2 Metodologia analtica....................................................................................... 19
3. 1.3 Caracterizao do princpio ativo..................................................................... 21
3. 1.3.1Solubilidade..................................................................................................... 21
3. 1.3.2Difrao de raios-x (DRX).............................................................................. 21
3.1.3.3 Determinao de metais pesados..................................................................... 21
3. 2 Mtodos................................................................................................................ 22
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xv
3. 2.1 Formulaes........................................................................................................ 22
3. 2.2 Validao da metodologia analtica.................................................................... 24
3. 2.2.1 Determinao de Sb (III).................................................................................. 25
3. 2.2.1.1 Determinao da seletividade....................................................................... 26
3. 2.2.1.2 Determinao da Linearidade....................................................................... 27
3. 2.2.1.3 Determinao da exatido............................................................................. 28
3. 2.2.1.4 Determinao da preciso............................................................................. 28
3. 2.2.1.5 Determinao do Limite de quantificao.................................................... 29
3. 2.2.2 Determinao de Sb (V)................................................................................... 29
3. 2.2.2.1 Determinao da Linearidade....................................................................... 30
3. 2.2.2.2 Determinao da exatido............................................................................. 31
3. 2.2.2.3 Determinao da preciso............................................................................. 31
3. 2.2.2.4 Determinao do Limite de quantificao.................................................... 32
3. 2.3 Caracterizao do princpio ativo........................................................................ 32
3. 2.3.1 Solubilidade...................................................................................................... 32
3. 2.3.2 Difrao de raios-x (DRX)............................................................................... 32
3. 2.3 3 Determinao de metais pesados..................................................................... 32
3. 2.3 4 Determinao dos teores de Sb (III) e Sb (V).................................................. 33
4 RESULTADOS E DISCUSSES.......................................................................... 34
4.1 Validao do Mtodo analtico............................................................................... 34
4.1.1 determinao de Sb (III)....................................................................................... 34
4.1.1.1 Seletividade....................................................................................................... 35
4.1.1.1.1 O efeito da concentrao do cido ctrico...................................................... 35
4.1.1.1.2 O efeito da concentrao do borohidreto de sdio........................................ 41
4.1.1.1.3 O efeito do comprimento do reator helicoidal.............................................. 42
4.1.1.2 Linearidade....................................................................................................... 44
4.1.1.3 Exatido............................................................................................................ 45
4.1.1.4 Preciso............................................................................................................. 46
4.1.1.4.1 Repetibilidade................................................................................................ 46
4.1.1.4.2 Preciso Intermediria................................................................................... 46
4.1.1.5 Limite de quantificao................................................................................... 48
4.1.2 determinao de Sb total.................................................................................... 49
4.1.2.1 Seletividade....................................................................................................... 49
-
xvi
4.1.2.2 Linearidade....................................................................................................... 49
4.1.2.3 Exatido............................................................................................................ 50
4.1.2.4 Preciso............................................................................................................. 51
4.1.2.4.1 Repetibilidade................................................................................................ 51
4.1.2.4.2 Preciso Intermediria................................................................................... 52
4.1.2.5 Limite de quantificao.................................................................................... 53
4.2 Formulaes............................................................................................................ 54
4.2.1 pH......................................................................................................................... 54
4.2.2 Densidade............................................................................................................. 57
4.2.3 Teor de Sb (III).................................................................................................... 59
4.2.4 Teor de Sb total.................................................................................................... 62
4.3 Caracterizao do princpio ativo........................................................................... 64
4.3.1 Solubilidade............. 64
4.3.2 Difrao de raios-x (DRX).................................................................................. 64
4.3.3 Determinao de metais pesados......................................................................... 64
4.3.4 Determinao dos teores de Sb (III) e Sb (V)...................................................... 65
5 CONCLUSES....................................................................................................... 67
6 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.................................................................. 68
-
1 INTRODUO 1.1 Generalidades
A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) e a Leishmaniose Visceral (Calazar) so doenas infecciosas, no contagiosas, causadas por protozorios do gnero
Leishmania, que acomete pele, mucosas e vsceras respectivamente. As leishmanioses so
consideradas primariamente como uma zoonose podendo acometer o homem, quando este
entra em contato com o ciclo de transmisso do parasito, transformando-se em uma
antropozoonose. Atualmente, encontra-se entre as seis endemias consideradas prioritrias
no mundo (BRASIL. Ministrio da Sade, 2000).
As Leishmanias so transmitidas entre animais silvestres ou de animais silvestres
para o homem por meio da picada de insetos hematfogos Phlebotominae de diferentes
gneros (Psychodopygus, Lutzomya) (VIANNA, WILLIAMS & FALCO, 1978) (Figura
1).
Figura 1 - Fmea do Flebotomneo (vetor de transmisso da leishmaniose)
A Leishmania um protozorio que pertence famlia Trypanosomatdae (com
duas formas principais: uma flagelada ou promastigota, e outra aflagelada ou amastigota, a
primeira encontrada no tubo digestivo do inseto vetor e em alguns meios de cultura
artificiais, e a segunda vista nos tecidos dos hospedeiros vertebrados (homem e outros
animais superiores). No homem o perodo de incubao da doena , em mdia, de 2
meses, podendo apresentar perodos mais curtos (duas semanas) e mais longos, (2 anos)
(BRASIL. Ministrio da Sade, 2000).
A leishmaniose tegumentar americana (LTA), inclui a leishmaniose cutnea (LC) e
a leishmaniose mucosa (LM) (BRASIL, 2000) (Figura 2).
-
A leishmaniose causa incapacitao e muitas vezes leses mutilativas, podendo
levar a morte.
A leishmaniose visceral a forma mais severa da doena e ataca bao, fgado e
nodos linfticos. (Figura 3)
2
(a)
(b)
(c)
Figura 2- (a) Forma lcero-vegetante extensa, acometendo ndegas e membros inferiores, (b) Leso lcero custosa localizada na regio frontal, (c) Destruio do septo nasal com infiltrao local.
-
Figura 3- P (paciente
com hepatoesplenomegalia)
1.2 Epi
crianas.
Acredita-se e
de leishmaniose visceral ocorrem em Bangladesh, Brasil,
sos de leishmaniose mucocutnea ocorrem na Bolvia, no Brasil
m no Afeganisto, no Brasil,
as rurais
o que v
onfirmados e a LV de notificao obrigatria para casos suspeitos (BRASIL,
2003).
aciente com LV
demiologia
Atualmente, segundo dados da Organizao Mundial de Sade (OMS), a
leishmaniose endmica em 88 pases, onde 72 so pases em desenvolvimento, dos cinco
continentes, ameaando 350 milhes de pessoas entre mulheres, homens e
qu no mundo inteiro 12 milhes de pessoas sofrem de leishmaniose.
90% dos casos
ndia e Sudo;
90% dos ca
e no Peru;
90% dos casos de leishmaniose cutnea ocorre
no Iran, no Peru, na Arbia saudita e na Sria.
Nos ltimos dez anos as regies endmicas tm se expandido alm das zon
em causando um aumento significativo de casos da doena (WHO, 2004).
Somente em 33 dos 88 pases afetados pela leishmaniose a notificao
obrigatria. Dos dois milhes de novos casos estimados anualmente, somente 600.000 so
oficialmente relatados (WHO, 2004). No Brasil a LTA de notificao obrigatria para os
casos c
3
A existncia de animais silvestres como fonte natural de infeces, ainda
insuficientemente estudada, no explica a totalidade dos casos humanos encontrados. Este
aspecto leva a supor que outros ciclos, onde o homem e animais domsticos participam,
-
4
bilitando o envolvimento de animais domsticos
(MARZ
tas, estando relacionadas a aspectos clnico-epidemiolgicos diferentes
(BRAS
resenta distribuio mais restrita
s rea
bm podem
apresen
cursos laboratoriais o diagnstico deve ser clnico e epidemiolgico
(BRASIL, 2000).
ente. A OMS recomenda que a
dose de
e nos pases de lngua francesa (FIGUEIREDO, COSTA E SILVA &
BRASI
estariam sendo instalados com risco de acometer populaes bem mais numerosas do que
aquelas que eventualmente penetram nas matas. Na regio sudeste do Brasil, apresenta um
carter de transmisso peri-domiciliar, principalmente pela adaptao do inseto vetor aos
ambientes naturais modificados possi
OCHI & MARZOCHI, 1994).
Em diferentes regies do Brasil (Bahia, Amazonas, Par, Rondnia, Mato Grosso,
Minas Gerais e So Paulo) variadas espcies de Leishmanias tm sido isoladas de casos
humanos, caninos, roedores e marsupiais, as quais apresentam caractersticas biolgicas e
bioqumicas distin
IL, 2000).
As leishmanioses se estendem, em nosso pas, por extensas reas das regies Norte,
Nordeste, Sudeste e Centro Oeste. Enquanto a forma tegumentar mais amplamente
distribuda por quase todos os estados, a forma visceral ap
s do Nordeste e sudeste do pas (LUZ et al., 2003).
O teste intradrmico de Montenegro de grande valia no diagnstico imunolgico
da LTA. feita a aplicao intradermica do antgeno da Leishmania e aps 48 horas feita
medida da resposta. Praticamente todos os indivduos com leso apresentam reao
positiva ao teste, no entanto, pessoas provenientes de regies endmicas tam
tar reao positiva (LOUREIRO, DADALTI & GUTIERREZ, 1998).
Sempre que possvel o diagnstico deve ser clnico, epidemiolgico e laboratorial.
Se no houver re
1.3 Tratamento
A droga de primeira escolha o antimonial pentaval
ste antimonial seja calculada em mg/Sb(V)/Kg/dia.
O Stibogluconato de sdio e o antimoniato de meglumina so os dois tipos de
antimoniais pentavalentes que podem ser utilizados na teraputica da leishmaniose, sendo
que o primeiro utilizado nos pases de lngua inglesa e o segundo na Amrica latina,
incluindo Brasil,
L, 1999).
O antimoniato de meglumina apresenta-se comercialmente em frascos de 5 mL que
contm 1,5 g do antimoniato bruto, correspondente a 405 mg de Sb(V). Portanto, 1 ampola
com 5 mL tem 405 mg de Sb(V), e cada mL contm 81 mg de Sb(V). Este antimonial
-
5
tas e maior
possibi
so a resposta ao antimoniato pentavalente no seja
satisfatria (MARSDEN, 1999).
ento por antimnio e arsnio (KOROLKOVAS & BURCKHALTER, 1982)
(figura 4).
Figura 4- Reao entre composto de antimnio e dimercaprol
indicado para o tratamento de todas as formas de leishmaniose tegumentar, embora as
formas mucosas exijam maior cuidado, podendo apresentar respostas mais len
lidade de recidivas (ANTIMONIATO DE MEGLUMINA: bula, [s.d.]).
As drogas de segunda escolha so a anfotericina B e a pentamidina, que devem ser
introduzidas na teraputica ca
1.4 Farmacologia
Em 1912 se utilizou o tartarato de potssio antimnico (trtaro emtico), um
antimonial trivalente, na Leishmaniose cutnea com sucesso. Logo aps ele foi utilizado
tambm no tratamento da leishmaniose visceral (Calazar). Muitos outros antimoniais
trivalentes, em especial o tartarato de sdio antimnico, foram experimentados.
Posteriormente, estes foram substitudos pelos antimoniais pentavalentes, que eram to
eficazes quanto o trtaro emtico e muito menos txicos, permitindo a utilizao de doses
maiores, reduzindo desta forma o tempo de tratamento. Estudos com antimoniais
pentavalentes in vitro demostraram pouco efeito sobre os leptomnades que se
desenvolvem na cultura de tecidos, esta diferena entre a sua atividade in vitro, sugere
que a reduo do antimnio para a forma trivalente necessria para a atividade. Provas
nesse sentido so fornecidas pelo fato de que o dimercaprol antdoto para o
envenenam
CH2-SH CH2-S
Sb-R
CH-SH + Sb-R CH -S
CH2-OH CH2-OH
dimercaprol
-
6
ros 80 vezes menos sensvel do que as enzimas do parasita fazendo com que ele
o concentraes muito maiores no plasma do que
s compostos trivalentes. Conseqentemente so eliminados muito mais rapidamente pelo
AN & GILMAN, 1983).
Apr g Sb(V) por mL.
Dose m
Adultos: trs ampolas ou 1.215 mg Sb(V).
os metade da dose mxima de adultos.
er repetido,
prolongando-se, desta vez, a durao da srie para 30 dias. Em caso de no resposta,
tilizar uma das drogas de segunda escolha (BALANA-FOUCE et al., 1998).
Os compostos antimoniais por serem pouco absorvidos no trato gastro intestinal e
irritantes para mucosa intestinal, so administrados parenteralmente.
Estudos indicam que os antimoniais trivalentes inibem a fosfofrutoquinase, esta
enzima catalisa a converso da frutose-6-fosfato a frutose-1,6-difosfato nas vias
glicolticas. Agem combinando-se com grupos sulfidrilas (tais como o da cistena)
presentes na enzima, por meio de ligaes covalentes reversveis exercendo seus efeitos
txicos nas clulas do parasita e dos mamferos, entretanto a fosfofrutoquinase dos
mamfe
exera seus efeitos txicos de forma seletiva (KOROLKOVAS & BURCKHALTER,
1982).
Os antimoniais trivalentes possuem alta afinidade pelos eritrcitos, deixando
rapidamente o plasma. No entanto continuam na circulao ligados de alguma forma aos
eritrcitos onde interferem com a funo da hemoglobina. A eliminao renal baixa
provavelmente devido a baixas concentraes plasmticas. Os antimoniais pentavalentes
no so ligados aos eritrcitos, atingind
o
rim (GOODM
1.4.1. Dose:
esentao = Frascos com 5 mL, contendo 81 m
xima diria (BRASIL, 2000):
Crianas at 12 an
1.4.1.1 Leses Cutneas
Para as formas cutnea localizada e disseminada a dose recomendada varia entre 10
a 20 mg Sb(V)/Kg/dia. Sugere-se 15 mg Sb(V)/Kg/dia, tanto para o adulto quanto para
crianas, durante 20 dias seguidos. Nunca deve ser utilizada dose superior a trs
ampolas/dia ou 15 mL/dia para o adulto. Se no houver cicatrizao completa aps trs
meses (12 semanas) do trmino do tratamento, o esquema dever s
u
-
7
s (12 semanas) do trmino do tratamento, o
esquem dever ser repetido apenas uma vez. Em caso de no resposta, utilizar uma das
a escolha (BRASIL, 2000).
b(V) kg/dia, com aplicao endovenosa ou intramuscular, por no mnimo 20 e no
ximo 40 dias, utilizando-se o limite mximo de 2 a 3 ampolas/dia do produto (BRASIL,
atamento.
Por iss
ado e com possibilidade de realizar traqueotomia de
rgncia. Os corticides por via sistmica podem ser utilizados nos quadros de
IL, 2000).
as leishmanioses. Este frmaco um produto que requer administrao
1.4.1.2 Leses Mucosas
Em todas as formas de acometimento mucoso a dose recomendada de 20
mg/Sb(V)/Kg/dia, durante 30 dias seguidos, de preferncia em ambiente hospitalar. Se no
houver cicatrizao completa aps trs mese
a
drogas de segund
1.4.1.3 Visceral
No Brasil recomenda-se o tratamento da leishmaniose visceral com a dose de 20
mg de S
m
2003).
1.4.2. Efeitos colaterais possvel que ocorra um ou mais efeitos colaterais, na seguinte ordem de
frequncia: artralgia, mialgia, inapetncia, nuseas, vmitos, plenitude gstrica,
epigastralgia, pirose, dor abdominal, prurido, febre, fraqueza, cefalia, tontura, palpitao,
insnia, nervosismo, choque pirognico, edema e insuficincia renal aguda. Essas queixas
so, geralmente discretas ou moderadas e raramente exigem a suspenso do tratamento.
Porm, nas doses de 20 mg/Sb(V)/Kg/dia, o antimonial pode atingir o limiar de toxicidade,
podendo levar a alteraes cardacas ou renais que obriguem a suspenso do tr
o, deve-se proceder acompanhamento eletrocardiogrfico semanal e avaliao da
funo renal, especialmente em pacientes acima de 50 anos (MARSDEN, 1985).
Em casos de leses de laringe e faringe, podem ocorrer edema e insuficincia
respiratria aguda. Por isso, aconselhvel que a medicao seja administrada por equipe
especializada, em paciente hospitaliz
u
hipersensibilidade (BRAS
1.4.3 Reaes Adversas
O antimoniato de N-metil meglumina o frmaco de primeira escolha para o
tratamento d
-
8
cautelo
o produzidas mais freqentemente pelos
po
stas alteraes esto ligadas
into
lnicos tm evidenciado aumento das enzimas hepticas. So observados ainda
citos, bem como a queda do nvel de hematcrito.
A conc
ado a presena do antimnio trivalente nos
eritrci
ostraram que parece existir uma correlao entre o aumento da
osmolalidade do produto e a variao das respostas teraputicas (WILLIAM, WALTER &
umica bem determinada,
N-
tilgl
sa, sob acompanhamento clnico e laboratorial, por ser cardiotxico, hepatotxico e
nefrotxico.
As reaes adversas dos antimoniais s
com stos trivalentes do que pelos pentavalentes, no entanto so qualitativamente
semelhantes (GOODMAN & GILMAN, 1983).
provvel que se desenvolva tosse grave acompanhada de vmitos. A artrite
aguda geralmente envolvendo articulaes do pulso, joelho e tornozelos, uma reao
menos comum. Pode ocorrer ocasionalmente bradicardia acentuada, ocorrem alteraes
significativas no ECG de pacientes tratados com antimoniais. E
a s mas cardiovasculares que normalmente desaparecem de 30 a 60 dias aps
interrupo do tratamento (GOODMAN & GILMAN, 1983).
A funo heptica poder estar deprimida em pacientes fazendo uso de antimoniais.
Estudos c
cefalia, desmaios, dispnia, apnia, edema, dor abdominal, colapso vascular e erupes
brandas.
J foram evidenciados casos de pneumonia com uso de antimoniais trivalentes,
porm no foram encontrados com os pentavalentes. Estudos realizados mostraram que
ocorre reduo da hemoglobina nos eritr
luso foi que a gravidade deste efeito txico varia com a preparao e a dose
administrada (ALKHAWAJAH, 1992).
Estudos in vitro tm demonstr
tos. Existe a hiptese de que o antimnio possa ser trocado com o ferro trivalente
da hemoglobina (BERG & KNUT, 1998).
Estudos m
PETRIE, 1998).
1.5 Formulaes
O antimoniato de meglumina no possui uma estrutura q
sabe-se que formada pela sntese entre o xido de antimnio V (Sb2O5) e a
me ucamina, podendo se apresentar na forma de oligmeros.
solvel em gua, praticamente insolvel em etanol, ter etlico e clorofrmio.
-
9
com dois grupos hidroxilas sugerindo que esta estrutura se comporta como um
rao do Sb(V) (CARRI et
al., 200
esponde a forma geral (NMG-Sb)n
NMG. Esses resultados sugerem que esse agente uma mistura complexa que existe em
equilbrio na soluo aquosa (WILLIAM, WALTER & PETRIE, 1998). A figura 5 mostra
a frmula estrutural do antimoniato de meglumina.
O produto encontrado no mercado Glucantime do Laboratrio Aventis uma
soluo aquosa que possui 1,5 g de antimoniato de meglumina equivalente a 405 mg de
antimnio pentavalente por ampola de 5 mL.
Estudos realizados na estrutura do produto encontrado no mercado sugerem que ela
consiste numa mistura de componentes com diferentes pesos moleculares, na qual o
antimnio e a metilmeglumina se alternam, e que cada antimnio se liga de forma
coordenada
acetal, e facilmente quebrada em cidos diludos. Em baixos valores de pH as ligaes
so quebradas, com conseqente hidrlise da estrutura e libe
0).
fundamental que a formulao mantenha seu pH na faixa de 5,5 e 7,5, pois o pH
parece ter grande importncia na estabilidade da preparao.
A determinao do contedo de antimnio no p de antimoniato de meglumina,
atravs do estudo da sua estrutura e composio, indicou uma razo molar de 1:1,37 de
antimnio para N-metil-D-glucamina. Osmolalidade avaliada em solues de antimoniato
de Meglumina demonstrou uma mdia de 1,43 tomos de antimnio por molcula de
antimoniato de meglumina. A osmolalidade de uma soluo diluda 1:10 de antimoniato de
meglumina aumentou cerca de 45% durante 8 dias, sugerindo hidrlise a espcies de
complexos menores. Foi evidenciada, ainda, a presena de complexos coordenados entre
antimnio e cada hidroxila do N-metil-D-glucamina. Atravs da utilizao da
espectrometria de massa, com vrios procedimentos de derivao, ficou evidenciado que
mais de quatro hidroxilas do N-metil-D-glucamina esto coordenadas com cada antimnio.
Uma srie de oligmeros foi observada, a maioria com uma massa molecular de 507
unidades de massa atmica e consiste de NMG-Sb-NMG, onde Sb representa o antimnio
e NMG representa a N-metil-D-glucamina e corr
-
10
lidade de formulaes
a proteger a droga. Sistemas abertos requerem
con n
o do
meio de forma que ele no possa agir como catalisador. O sal di-sdico do cido
+
CH 2 N C H H 3|
O - H - C OH || |
.(OH) - Sb O HO C H |
H - C OH
| H - C - OH
| C H2 OH
Figura 5- Frmula estrutural do antimoniato de meglumina (C7 H18 N 08 Sb), PM: 365,98. 1.5.1 Estabi
Em estudos realizados com diferentes ampolas do produto encontrado no mercado
(Glucantime) foram encontrados diferentes percentuais de Sb(III) e Sb(V) (FRANCO et
al., 1995).
Esses estudos sugerem grandes variaes entre as formas oxidadas do Sb. Desta
forma a soluo deve ser estabilizada com coadjuvantes antioxidantes e estabilizadores,
visando diminuir processos de oxi-reduo no produto. Para aumentar a ao antioxidante
s vezes necessria a adio de mais de um agente antioxidante. Antioxidantes so
materiais que agem por serem mais facilmente oxidados que os agentes que eles esto
protegendo. Desta forma em sistemas fechados como em ampolas eles podem consumir
todo o oxignio presente e desta form
ce traes maiores de antioxidantes que sistemas fechados. Antioxidantes tambm
podem funcionar por serem inibidores de radicais livres, ou seja, eles fornecem H+ ou um
eltron para quebrar a cadeia de reao.
Pode-se utilizar a combinao de um antioxidante com agente quelante de metais.
Metais ionizados e solubilizados na frmula farmacutica podem catalisar as reaes de
oxidao. Considerando-se que nem todos os antioxidantes so capazes de inibir a
atividade cataltica dos metais, em vrios casos, necessrio associar ao sistema de
proteo os agentes quelantes cuja funo especfica de seqestrar o on metlic
-
11
etileno
86).
elantes mais utilizados para solues aquosas, encontrados na
lite u CEUTICAL EXCIPIENTS, 1986):
rico
inotetracetato di-sdico
es antioxidantes que podem ser utilizados em solues aquosas:
o
o de sdio
so comumente usados, na sua ao antioxidante os sulfitos podem dar origem a
sulfato
es de
decom
ropriada de quantidades de antimnio trivalente nos medicamentos estudados
pode se
diaminotetracetico (Na2EDTA) tem sido usado como agente quelante em
formulaes farmacuticas com sucesso (CONNORS, AMIDON & STELLA, 19
Os agentes qu
rat ra, so (HANDBOOK OF PHARMA
cido ct
etilenodiam
cistena
quinosol
sorbitol
cido tartrico
Alguns dos agent
bissulfito de sdio
cido ascrbico
cido isoascrbic
metabissulfit
sulfito de sdio
thioglicerol
cido tiogliclico
thiosorbitol
As concentraes de antioxidantes geralmente utilizadas variam de 0,01% a 1%. Os
sulfitos
s cidos que podem causar queda de pH (CONNORS, AMIDON & STELLA,
1986).
Outro aspecto importante a escolha do solvente. Os solventes so necessrios para
a solubilizao de substncias, entretanto, eles podem acelerar ou retardar rea
posio. Geralmente, polilcoois como polietilenoglicis, propilenoglicol ou glicerol
funcionam como agentes anti-hidrolticos em formulaes (TURCO; KING, 1997).
A instabilidade da forma oxidada dos antimoniais foi estudada (MARSDEN, 1986)
e sabe-se que pode sofrer transformaes importantes, sendo a mais perigosa a reduo a
Sb trivalente que constitui uma espcie qumica muito mais txica (MARSDEN, 1985). A
presena inap
r responsvel em parte pela variabilidade da resposta ao tratamento com compostos
antimoniais.
-
12
bter concluses definitivas devido ao nmero limitado de medies e a
ariabilidade da osmolaridade entre as ampolas mantidas na mesma condio de
uivalentes de iodo. O iodo liberado eliminado pelo
aquecim
m maior potencial redox com a formao de
terminaes indiretas, so pouco viveis para serem
Romero et al. (1996) estudaram as caractersticas fsico-qumicas do antimoniato de
meglumina em diferentes condies de armazenamento (4 C, 37C e temperatura
ambiente) e avaliaram os parmetros de pH e osmolaridade, concluram que no foi
demonstrada variao significativa de pH nas condies estudadas, encontrando, porm
variaes significativas na osmolaridade das solues. No entanto, os autores no
conseguiram o
v
temperatura.
1.5.2 Anlise das formulaes
Diferentes metodologias j foram propostas para dosagem dos antimnios
trivalentes e pentavalentes em preparaes do antimoniato de meglumina. Nveis de
antimnio total podem ser determinados pelo mtodo iodomtrico. O mtodo baseado na
pr-reduo do antimnio pentavalente a antimnio trivalente pelo excesso de iodeto; o
iodeto exerce uma ao redutora sobre sistemas com maior potencial redox com a
formao de quantidades eq
ento da soluo at ebulio. A soluo ento titulada com soluo padronizada
de I2 (FRANCO et al., 1995).
O antimnio trivalente pode ser especificamente determinado por mtodos
polarogrficos (YOUSSEF et al., 1987).
O Sb(V) pode ser determinado tambm pelo mtodo iodomtrico. O mtodo
baseado na reduo do antimnio pentavalente a antimnio trivalente pelo iodeto; o iodeto
exerce uma ao redutora sobre sistemas co
quantidades equivalentes de iodo. O iodo liberado titulado com soluo padronizada de
tiosulfato de sdio (FRANCO et al., 1995).
As tcnicas hifenadas permitem simultaneamente separar e quantificar as espcies
Sb(III) e Sb(V) e organoantimoniais, onde se destaca entre essas a eletroforese capilar com
espectrometria de massa com fonte de plasma acoplado indutivamente (CE-ICP-MS),
cromatografia lquida de alta eficincia com espectrometria de fluorescncia atmica com
gerao de hidretos (HPLC-HG-AFS) e a cromatografia lquida de alta eficincia com
espectrometria de absoro atmica e gerao de hidretos (HPLC-HG-AAS) (KRACHLER
& EMONS, 2001). Embora esses mtodos sejam os mais adequados para anlise de
especiao do antimnio, pois capaz de separar as espcies e quantific-las, diminuindo
desta forma o erro introduzido nas de
-
13
empreg
s de doseamento como
tulom
pelo mesmo mtodo atravs de gerao de hidreto (WANG
de anlise, a
rmao de estibina proveniente da espcie trivalente sem a interferncia do antimnio
smo este em grandes concentraes (FLORES et al., 2003).
s e nas articulaes e reaes alrgicas em
Arsnio (REAES ADVERSAS GRAVES
ados na rotina do controle de qualidade de medicamentos onde se deseja mtodos
simples, e de custos mais acessveis.
Existem ainda descritos na literatura outros mtodo
ti etria pelo permanganato de potssio, HPLC de fase reversa, espectrofotometria,
entre outros (BRODERSEN, HASSEN & HASSAUNA, 1997).
Excelentes resultados tm se conseguido com o mtodo de espectrometria de
absoro atmica que consiste em submeter soluo de antimoniato de meglumina
diluda em cido tartrico 0,5% em chama de ar + acetileno, utilizando comprimento de
onda 217,6 nm. Este mtodo permite a dosagem do antimnio total uma vez que requer a
reduo das formas oxidadas do antimnio ao seu estado fundamental. O antimnio
trivalente pode ser determinado
& CHAO, 2001; FARMACOPIA BRASILEIRA, 2002). Este o mtodo descrito pela
Farmacopia Brasileira 4 ed.
Estudos realizados para a determinao de antimnio trivalente e antimnio total
utilizando espectrometria de absoro atmica por gerao de hidretos em batelada e
utilizando injeo em fluxo j foram realizados. O mtodo baseado na complexao
seletiva das espcies de antimnio de forma a permitir, nas condies timas
fo
pentavalente, me
1.6 Justificativa
A soluo injetvel de antimoniato de meglumina distribuda pelo Ministrio da
Sade para cerca de 40.000 pacientes por ano.
Em outubro de 2000 a Fundao Nacional de Sade, FUNASA, por meio do Centro
Nacional de Epidemiologia, recebeu notificaes de eventos adversos de severidade grave
(abscessos estreis, intensas dores musculare
pacientes que se encontravam fazendo uso do antimoniato de meglumina injetvel
produzido por um Laboratrio Nacional (X).
Estudos epidemiolgicos mostraram claramente uma associao significativa entre
o desenvolvimento dessas reaes e o uso do produto fabricado pelo Laboratrio (X).
Exames laboratoriais mostraram que esse medicamento apresentava altos nveis de
antimnio, pH abaixo do valor de referncia e se encontrava intrinsecamente contaminado
com altos nveis de Chumbo e
-
14
s medicamentos atravs de programas governamentais, pois a
ishm
s no eram descritos em compndios oficiais os limites de
ontam
ole sanitrio de produtos se d atravs
m
armacopias limita-se a inscrever os insumos autorizados para
outros produtos para sade, em
ASSOCIADAS COM O USO DE ATIMONIATO DE MEGLUMINA COTAMINADO
COM ARSNIO E CHUMBO, 2001).
Em junho de 2002 a Anvisa divulgou alerta sobre falha teraputica ocorrida com o
antimoniato de meglumina (Glucantime) devido a possveis erros de posologia.
A realidade que a industria farmacutica de capital estrangeiro pouco tem
investido em pesquisas de desenvolvimento de frmacos e produtos destinados as
chamadas doenas rfs. No existe por parte das indstrias multinacionais interesse
comercial na produo de frmacos destinados a pacientes que na sua maioria so de baixa
renda e recebem esse
le aniose uma doena endmica tropical que atinge populaes pobres de diversas
regies de nosso Pas.
A soluo de injetvel de antimoniato de meglumina apesar de ser utilizada a mais
de 60 anos, s no ano de 2003 que sua monografia foi publicada na Farmacopia
Brasileira. At um ano atr
c inantes permitidos deste produto nem de sua matria-prima, nem metodologias
analticas para sua deteco.
A lei 8.078/90 (Cdigo de Defesa do Consumidor), reafirma a responsabilidade do
produtor pela qualidade do produto e do servio. O Cdigo introduziu a inverso do nus
da prova, isto , em caso de alegao de impropriedade, cabe ao fabricante provar ser o
produto bom para o consumo. Por outro lado, o contr
de vrias aes, entre as quais se inclui a submisso das indstrias a normas estabelecidas
para registro de produtos destinados ao uso humano.
No fato ocorrido em outubro de 2000 com a soluo injetvel de antimoniato de
meglumina, os Laboratrios Oficiais destinados ao controle sanitrio de produtos tivera
dificuldades em comprovar a impropriedade do medicamento, pois, na ocasio, no
existiam limites de contaminantes estabelecidos em compndios oficiais para o mesmo.
As Farmacopias constituem os cdigos mais tradicionais que definem a qualidade
dos insumos autorizados a serem utilizados na manipulao e produo industrial de
medicamentos. O papel das f
uso no pas, estabelecendo os ensaios que permitem controlar as impurezas e avaliar as
caractersticas dos mesmos.
Os insumos farmoqumicos includos em farmacopias so homologados por
rgos responsveis pelo registro de medicamentos e de
-
15
o do Ministrio da
lues do Ministrio da Sade,
ento das diretrizes estabelecidas pelo "GUIA DE
BOAS
tem
por si
do documentao pertinente de suas matrias-primas
ente
cada pas. No entanto, esses mesmos rgos durante anos, admitiram para uso na
teraputica, substncias no includas nas Farmacopias.
A Lei 6360 de 1976 e o decreto 79094 de 1977 so respectivamente a legislao e a
regulamentao, em vigor no Brasil, que disciplina o registro de frmacos e a autorizao
de funcionamento das empresas que se dedicam atividade de produo de matrias-
primas. Na legislao consta como sinonmia os termos, matria-prima, droga, insumo
ativo, princpio ativo, farmoqumico, dentre outros. A referida legislao determina que a
as matrias-primas farmacuticas sejam registradas junto a um rg
Sade, da mesma forma que os medicamentos, correlatos, produtos de higiene, cosmticos,
perfumes, saneantes domissanitrios e outros definidos nos mesmos.
No entanto, cabe ressaltar que as Portarias e Reso
que tem por objetivo implementar o disposto na legislao, liberam a exigncia do registro
das matrias-primas para todas as categorias de produtos.
A Portaria n 15, de 4 de abril de 1995 determinou a todos os estabelecimentos
produtores de farmoqumicos o cumprim
PRTICAS DE FABRICAO PARA INDSTRIAS FARMOQUMICAS",
acordado pelo Mercosul.
No ano passado a ANVISA publicou a RDC n 35, de 25 de fevereiro de 2003, que
prev as boas prticas de armazenagem e fracionamento para insumos farmacuticos. Esta
Resoluo, juntamente com a Portaria n 15 vieram da necessidade de regular o mercado
farmoqumico no sentido de qualific-lo. No entanto, esta recente regulamentao
abranger apenas parte da cadeia dos insumos farmacuticos, pois as boas prticas de
fracionamento e armazenamento, bem como as boas prticas de fabricao, no garan
s a qualidade dos insumos farmacuticos, pois como ocorre para os produtos
farmacuticos, os farmoqumicos tambm deveriam ser registrados junto a ANVISA.
Nos Pases Europeus e nos Estados Unidos existe o controle da qualidade dos
insumos consumidos pela indstria farmacutica instalada. Na Europa os fabricantes
certificam seus insumos apresentan
Drug Master File Farmacopia Europia, as quais so analisadas por peritos que as
certificam quanto a sua qualidade.
A Leishmaniose Tegumentar Americana encontra-se, segundo a organizao
mundial de sade (OMS), entre as seis doenas infectoparasitrias de maior importncia.
Distribui-se amplamente no continente Americano, estendendose do sul dos
Estados Unidos at o norte da Argentina. No Brasil, tem sido assinalada em praticam
-
16
todos o
(REAES ADVERSAS GRAVES ASSOCIADAS COM O USO DE
moniais, sob a forma de sais pentavalentes, so as drogas de
1920, devido alta toxicidade dos compostos
mo
l desde a retirada do comrcio do antimoniato de meglumina de
m
latam maior nmero de efeitos colaterais
de
qualidade, que permitam detectar com alto grau de preciso estas formas. Desta forma,
seria possvel se modular a toxicidade do produto atravs de formulaes mais estveis.
s Estados. No Rio de Janeiro foram registrados em 2003 vrios casos da doena na
rea urbana em Seropdica e em 2004 no municpio de Nova Iguau (NOVIS, 2004).
O perfil dos pacientes apresenta mudanas, atingindo pessoas de todos os sexos e
idades
ATIMONIATO DE MEGLUMINA COTAMINADO COM ARSNIO E CHUMBO,
2001).
Os compostos anti
escolha a mais de 60 anos para o tratamento da Leishmaniose em todo o mundo
(ALKHAWAJAH, 1992).
Em 1912 se tratou no Brasil o primeiro caso de Leishmaniose cutnea com
antiemtico antimonial trivalente. Em
anti niais trivalentes, eles foram substitudos pelos compostos antimoniais pentavalentes,
menos txicos (KIRK & SATI, 1947).
Existem atualmente, somente duas formulaes disponveis comercialmente: o
estibugluconato de sdio e o antimoniato de meglumina, ambos na forma injetvel por
serem irritantes da mucosa intestinal e a sua baixa absoro por esta via (GOODMAN &
GILMAN, 1983). No momento, o Ministrio da Sade adquire o antimoniato de
meglumina (Glucantime) da Aventis Pharma que se tornou o nico produtor deste
medicamento no Brasi
orige nacional pela ANVISA, devido contaminao do mesmo por metais pesados (Pb
e As) (SILVA, 2001).
No passado, o Brasil j adquiriu atravs de licitao internacional, o
estibugluconato de sdio BP88 produzido na China pela Ihandong Xinhua. Existem
estudos realizados por Saldanha et. al (36), que re
em grupos tratados com BP88 em relao aos tratados com o antimoniato de meglumina
( SALDANHA, ROMERO & GUERRA, 2000).
Goodwin e Page (1943) sugeriram que os antimoniais pentavalentes tm que se
converter em trivalentes no interior dos macrfagos para poder exercer sua ao.
Reconhecendo a importncia do estado de oxidao dos antimoniatos para o
entendimento dos seus efeitos txicos e da sua ao, vislumbramos a necessidade do
estudo de tcnicas galnicas que visam estabilizar este produto, bem como um rigoroso
estudo comparativo das metodologias analticas a serem utilizadas em seu controle
-
17
rcito,
pertenc
grande importncia
para o no
populao, con
2. ntes
3.
duo da constante dieltrica do meio diminuindo desta forma
4.
nio como tcnica alternativa
preconizada pela Famacopia Brasileira 4 ed. para a implementao desta
tcnica na rotina de controle de qualidade.
2 OBJETIVOS A proposta do estudo de modulao da toxicidade de injetveis de antimoniato de
meglumina tomou por base o estudo de desenvolvimento de novas formulaes
farmacuticas bem como o estudo e validao de mtodo analtico capaz de quantificar as
diferentes espcies de antimnio presentes no produto, tendo a finalidade de contribuir
com o desenvolvimento da formulao e controle de qualidade, para posterior produo em
escala industrial, deste medicamento pelo Laboratrio Qumico Farmacutico do Ex
ente Rede de Laboratrios Oficiais, o qual produz medicamentos com objetivo de
apoiar programas governamentais, atravs de convnio com o ministrio da Sade.
Visando a auto-suficincia na produo de um medicamento de
sso Pas, levando a melhoria do acesso de medicamentos antiprotozorios
sideraram-se como principais objetivos deste trabalho:
1. Caracterizar trs princpios-ativos de origens diferentes a fim estabelecer a
importncia da origem do frmaco utilizado na qualidade do produto final;
Ajustar a formulao atravs da experimentao de diferentes excipie
com funes antioxidante/estabilizante e tamponantes com objetivo de
evitar a reduo da molcula de antimoniato de meglumina em soluo.
Ajustar a formulao atravs da experimentao de diferentes veculos
visando a re
reaes radicalares que podem contribuir com os processos de oxi-reduo
no produto.
Estudar a otimizao e validao de metodologia analtica utilizando ICP-
OES para anlise de especiao de antim
-
18
armacutica da Universidade Federal do Rio de
) e no Laboratrio de Espectroanaltica, Automao e Ambiental da
l Fluminense (UFF).
farmac dncias:
ainville France lote
R 710201;
cante FARMOS lote 97-9716;
passo a
qual n
polas utilizadas para envase do produto foram fornecidas pela SHOTT glass
made o
a FISATOM modelo 713 D.
AG 200.
3 MATERIAIS E MTODOS O presente trabalho foi realizado no Laboratrio Qumico Farmacutico do Exrcito (LQFEx), no Laboratrio de Tecnologia F
Janeiro (UFRJ
Universidade Federa
3. 1 Materiais
3. 1.1 Formulaes
Toda a matria-prima utilizada na preparao das formulaes foi de grau
utico das seguintes proce
N-metil Glucamina antimoniato da Aventis Pharma Rom
301754 (Glucantime);
Metabissulfito de sdio do fabricante BASF lote
Etilenodiaminotetracetato dissdico do fabri
Metilparabeno (nipagim) USP PROQUMICA;
Hidrxido de sdio do fabricante MERCK;
Fosfato monobsico de potssio KH2PO4 do fabricante VETEC;
Propilenoglicol do fabricante DOW QUMICA S.A.
A gua utilizada no preparo das formulaes foi a gua para injetveis (WFI) que
obtida, a partir da gua purificada, por destilao ou osmose reversa com duplo
o deve conter aditivo (THE UNITED STATES PHARMACOPEIA, 2000). Esta
gua foi avaliada previamente quanto presena de metais pesados e antimnio.
As am
f ideas de qualidade, vidro tipo I, preconizado para envase de injetveis pela USP
XXIV.
As formulaes foram preparadas em recipientes de vidro PIREX e a agitao
realizada em agitador mecnico da marc
A balana utilizada para pesar as matrias-primas foi a analtica de quatro casas
decimais da marca GEHAKA
Para a filtrao esterilizante realizada em 6 formulaes foi utilizado o cartucho de
0,22 m da marca Millipore.
-
19
rada de acordo
com as
polas contendo o produto foram colocadas para estudo acelerado de
estabilidade em cmara climtica da marca MS-MISTURA modelo MSM 013/RS
alificada de acordo com normas ISO 17025 (NBR ISO/IEC
17025,
C4H4O6 + 0,5 H2O) Merck, titrisol em gua ultra
pura m
rivalente e metais pesados, foi
utilizad
LS 3 GILSON e para drenar o liquido da
cmara separadora gs/lquido para o descarte foi da marca LAB CRAFT MOD. HYDRIS
05, ambas ligadas cmara de separao gslquido, destinada gerao de hidretos,
atravs de tubos de PVC flexvel.
A autoclave utilizada para esterilizao das formulaes 1 e 2 foi a horizontal,
dupla porta da marca SERCOM e estava devidamente qualificada e calib
normas vigentes de Boas Praticas de Fabricao (BPF).
A mquina utilizada para envase do produto foi da marca Martinez taboada sem
utilizao de nitrognio, pois no havia disponibilidade dessas instalaes.
As am
devidamente calibrada e qu
2001).
3.1.2 Metodologia analtica
Para otimizao e validao do mtodo analtico as amostras utilizadas foram os
padres inorgnicos de Sb(III) (K(SbO)
illi-Q (18.2 M) e de Sb(V) KSb(OH)6 Sigma-Aldrich em gua Milli-Q (18.2 M)
e ampolas do antimoniato de meglumina do mercado, fornecidas pela Farmcia do
Hospital Universitrio Antnio Pedro.
Para a quantificao do antimnio total, antimnio t
o o espectrmetro de emisso tica usando plasma indutivamente acoplado (ICP-
OES) modelo ULTIMA-2 (JOBIN YVON) (figura 6), acoplado a um amostrador
automtico do modelo AS 421 (JOBIN YVON) (figura 7).
A bomba peristltica utilizada para a introduo das solues de borohidreto de
sdio e de cido ctrico foi da marca MINIPU
-
Figura 6 - ICP-OES modelo ULTIMA-2 (JOBIN YVON)
Figura 7 - Amostrador automtico modelo AS 421 (JOBIN YVON)
20
-
21
Reagentes de grau pr-anlise foram utilizados no preparo das solues analticas e
das amostras. Em todos os procedimentos utilizou-se gua milli-Q (> 16 M cm)
previamente destilada e deionizada. As solues analticas foram preparadas a partir de
soluo estoque de 1000 mg/L de antimnio pentavalente KSb(OH)6 Sigma-Aldrich e
antimnio trivalente (K(SbO)C4H4O6 + 0,5 H2O) Merck, titrisol em gua, uma vez que
no existe disponvel no mercado materiais de referncia certificados das espcies
inorgnicas de antimnio, nem to pouco do antimoniato de meglumina.
A balana analtica utilizada para pesagem, dos padres e reagentes foi da marca
SARTORIUS BL 210 S que possui preciso de 0,2 mg.
Para determinao de Sb(III) o agente redutor usado foi NaBH4 2% (P.A.VETEC)
estabilizado com NaOH 0,01M (P.A. MERCK). Como agente complexante foi utilizado
cido ctrico a 30% (P.A. MERCK) preparados sempre no dia da anlise.
Para determinao de Sb total as solues foram diludas em cido tartrico 0,5%
(MERCK) preparados no dia da anlise.
A densidade das preparaes foi medida em picnmetro de vidro da marca
SCHOTT.
A determinao e controle do pH das formulaes foram feitos em pHmetro da
marca QUIMIS aparelhos cientficos Ltda, modelo Q 400 M.
3.1.3 Caracterizao do princpio ativo
3.1.3.1 Solubilidade
Para verificao da solubilidade utilizou-se gua destilada, ter etlico, clorofrmio
e ter etlico todos de grau analtico da marca MERCK.
3.1.3.2 Difrao de raios-x (DRX)
As amostras de antimoniato de meglumina provenientes de trs fabricantes
diferentes foram analisadas em Difratmetro de Raios-X operado a 40KV e 30mA. O
ngulo de difrao 2 foi registrado de 2 a 10 em temperatura ambiente e a radiao CuK foi utilizada como fonte dos raios-X. Foi utilizado o difratometro de raios-X da marca
Philips modelo 1970 (manual) da UFRJ.
3.1.3.3 Determinao de metais pesados
Os padres utilizados para determinao de metais pesados (Al; As; Bi; Cd; Cr; Cu;
Mn; Ni; Pb; Hg e Zn) foram todos padres de referncia ASSURANCE Spex Certiprep.
-
22
Foi utilizado o banho ultra-snico da marca THORNTON, modelo USC 700 para
dissoluo dos padres e das amostras.
3. 2 Mtodos
3. 2.1 Formulaes
Para o nosso trabalho optou-se por ajustar a formulao atravs da experimentao
de diferentes excipientes com funo antioxidante/estabilizante com objetivo de evitar a
reduo da molcula de antimoniato de meglumina em soluo. Para todas as formulaes
utilizamos como antioxidante o metabissulfito de sdio na concentrao de 0,05% e o
Na2EDTA 0,1% como sequestrante auxiliando na reduo do processo de oxidao. Para
as solues 2, 4, 6 e 8 foram utilizados tampo fosfato pH 6,5 a fim de verificar a
influncia deste na estabilidade do pH da soluo. Em todas as formulaes foi utilizado o
nipagim 0,1% como conservante para evitar possveis contaminaes que poderiam
interferir nos resultados. Como veculo foi utilizada a gua para as formulaes 1, 2, 3, 4 e
para as formulaes 5 e 6 uma mistura de gua e propilenoglicol na proporo de 20:80 e
nas formulaes 7 e 8 a mesma mistura nas proporo de 50:50. A escolha do
propilenoglicol se fez por ser este um veculo com menor constante dieltrica que da gua,
visando diminuir reaes radicalares que podem contribuir com os processos de oxi-
reduo no produto.
Foram preparadas 600 mL de cada oito formulaes sendo seis diferentes de acordo
com tabela 1.
-
23
Tabela 1- Formulaes propostas para o produto Antimoniato de Meglumina
MATRIA-PRIMA F1
(%)
F2
(%)
F3
(%)
F4
(%)
F5
(%)
F6
(%)
F7
(%)
F8
(%)
Antimoniato de
meglumina
29,78 29,78 29,78 29,78 29,78 29,78 29,78 29,78
Metabissulfito de
sdio
0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
EDTA 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
Nipagim 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10
NaOH 0,09 0,09 0,09 0,09
KH2PO4 1,05 1,05 1,05 1,06
Propilenoglicol 14,0 13,83 34,83 34,4
gua 69,97 68,83 69,97 68,83 56,0 55,17 34,83 34,4
As formulaes 1 e 2 foram feitas em duplicatas. Metade foi submetida a
autoclavao a 121C por 15 minutos e metade foi submetida filtrao esterilizante para
que pudssemos avaliar a influncia da autoclavao na estabilidade das preparaes. As
formulaes foram preparadas em escala farmacotcnica utilizando-se recipiente de vidro a
fim de minimizar a incorporao de metais pesados que poderia por ventura ser cedido
pelo recipiente de ao inox.
Para o preparo das formulaes 1 e 3 aqueceu-se 200 mL de gua para dissoluo
do nipagim, em outro recipiente foi dissolvido o metabissulfito e o Na2EDTA em 50 mL de
gua. A soluo do metabissulfito e Na2EDTA foi adicionada soluo de nipagim aps
a mesma atingir a temperatura ambiente. Logo em seguida foi adicionado, sob agitao, o
antimoniato de meglumina at completa dissoluo.
Para o preparo das formulaes 2 e 4 procedimento semelhante ao preparo das
formulaes 1 e 3 foram tomados, sendo o NaOH e o KH2PO4 foram dissolvidos em 20
mL de gua e adicionados a soluo de nipagim.
Para o preparo da formulao 5 procedeu-se da seguinte maneira: dissolveu-se o
nipagim em parte do propilenoglicol (40 mL). O Na2EDTA e o metabissulfito foram
dissolvidos em parte da gua (160 mL). Uma mistura propileno/gua foi feita com o
restante da gua e propilenoglicol (44 mL/176 mL). As solues iniciais foram
-
24
adicionadas parte desta mistura. Logo aps o antimoniato de meglumina foi adicionado
sob constante agitao at completa dissoluo para ento ser avolumado com o restante
da mistura propilenoglicol/gua.
A formulao 6 foi preparada de forma semelhante formulao 5, sendo que em
uma parte da gua (60 mL) foi adicionado o metabisulfito de sdio e o Na2EDTA e em
outra parte (100 mL) foi adicionado o NaOH e o KH2PO4.
As formulaes 7 e 8 foram preparadas de forma semelhante s formulaes 5 e 6,
sendo que a proporo propilenoglicol/gua variou de 20:80 para 50:50.
As formulaes 1 e 2 foram autoclavadas a 121C por 15 minutos e as demais
foram submetidas filtrao esterilizante. Logo aps as formulaes foram envasadas em
ampolas de vidro incolor do tipo I. No processo de envase houve perda de cerca de 30%
das ampolas.
Logo aps as formulaes foram identificadas e colocadas na cmara climtica a
40 C por 90 dias. A cada 30 dias, amostras de cada formulao foram retiradas e os
parmetros de pH, densidade e teor de Sb (III) e Sb total foram avaliados. Quatro ampolas
de cada formulao foram retiradas para cada teste.
Os teores de Sb (III) e Sb total nas formulaes foram determinados no laboratrio
de Qumica ambiental da Universidade Federal de Santa Maria. O mtodo utilizado foi o
HG-AAS e AAS respectivamente descritos na Farmacopia Brasileira 4 ed.
(FARMACOPIA BRASILEIRA, 2002). A terceirizao foi necessria uma vez que a
metodologia proposta por este trabalho ainda se encontrava em fase de validao e no se
dispunha de tempo til para proceder as anlises aps o trmino da validao.
O programa Microsoft Excel foi utilizado para obteno dos clculos estatsticos
deste trabalho. O Box Plot foi utilizado como ferramenta auxiliar na avaliao das
formulaes. Para construo do Box Plot foi utilizado o Softwear Statsoft company.
3.2.2 Validao da metodologia analtica
Para validao analtica foi seguido o Guia para validao de metodologia analtica
segundo RE n 899, 29 de maio de 2003 da ANVISA.
O instrumento utilizado (ICP-OES), para determinao de Sb (III) e Sb total, possui
resoluo na ordem de 4 a 6 picmetros o que permite a obteno de seletividade
espectral e baixos limites de deteco. O equipamento foi otimizado e avaliado quanto
ao sistema depersivo (medida de resoluo UV e VIS) atravs da relao do sinal das
linhas Mg II/Mg I; quanto colimao (limpeza da lente) atravs da medida do fundo
-
25
nas linhas do Ba 455/233; quanto a nebulizao (medida de eficincia do nebulizador)
atravs da relao do sinal Mg 285/fundo 285; quanto preciso (medidas de
repetibilidade e reprodutibilidade) atravs das medidas dos RSD e RSD Mg (I) 285,
respectivamente, e avaliao do sistema ICP-OES (medida de limite de deteco),
atravs do LD Ba 233 e Zn 206.
Os parmetros operacionais instrumentais relevantes so mostrados na tabela 2.
Tabela 2-Parmetros operacionais instrumentais relevantes do ICP-OES e HG-ICP-OES
ICP HG-ICP-OES
(nebulizao convencional)
Potencia (w) 1200 1200
Vazo de argnio (L/min)
Nebulizador: 0,48
Gs de arraste: 0,2
Plasma: 15 1,5
Gs auxiliar: 0 0
Sheath gas: 0,2 0,4
Nebulizador Meinhard com cmara ciclnica
Presso de nebulizao 2,73
(bar)
Vazo do cido ctrico
(mL/min) 0,6
Vazo do borohidreto de sdio
(mL/min) 1,7
Vazo da amostra 1,3
(mL/min)
3. 2.2.1 Determinao de Sb(III)
Para determinao da espcie Sb(III) nas formulaes das solues injetveis de
antimoniato de meglumina o mtodo escolhido para validao foi o de gerao de hidretos
por espectrometria de emisso tica usando plasma indutivamente acoplado (HG-ICP-
OES). Este mtodo consiste, na formao de estibina (SbH3), atravs da reduo do
-
26
Sb(III) pelo borohidreto de sdio (NaBH4) em meio cido, o qual por ser voltil
facilmente transportado pelo argnio para o plasma.
Thompson, Pahlavanpour e Kierkbright, (1978) relataram o uso da gerao de
hidretos para a determinao de As, Bi, Se e Te por ICP-OES, tendo sido os hidretos
continuamente gerados pela reao com o NaBH4, introduzidos diretamente no plasma e os
elementos detectados simultaneamente. Nesta tcnica, os limites de deteco so melhores
em pelo menos uma ordem de grandeza em relao a nebulizao convencional.
Sistemas de fluxo so preferidos aos de batelada no que se refere a estabilizao
contnua do fundo gerado pelos subprodutos da reao (H2 e H2O) pois esses so
produzidos em fluxo constante no primeiro, ao contrrio do que ocorre no segundo sistema
(CMARA & GUNTINAS, 1991).
Em relao s interferncias na cintica de reduo sabe-se, por exemplo, que o Sb,
pode existir, em soluo, em dois estados de oxidao: Sb(III) e Sb(V) e que estados de
oxidao mais altos apresentam velocidade de reduo mais lenta. No caso do grupo 15 da
tabela peridica (As, Sb e Bi), o estado +5 leva a sinais menores que o estado +3. Estas
propriedades distintas dos diferentes estados de oxidao so teis na especiao qumica,
permitindo, por exemplo, determinaes seletivas Sb(III) e Sb(V), por diferena (APTE &
HOWARD, 1986).
Como na soluo de antimoniato de meglumina pode ocorrer presena das
espcies Sb(III) e Sb(V) onde a espcie pentavalente poder est presente em propores
de at 40 vezes maior que a anterior, testes de seletividade, tiveram que ser realizados a
fim de verificarmos a interferncia do elemento pentavalente na quantificao do
trivalente.
Neste mtodo o cido ctrico foi utilizado para promover a complexao seletiva da
espcie pentavalente permitindo que o Sb(III) fique livre para formar a estibina de forma
seletiva (MOHAMMAD et al., 1990).
Como o tempo de contato entre a amostra e o cido ctrico fundamental para que
ocorra a complexao, ns utilizamos um reator helicoidal construdo com tubo de
polietileno.
3. 2.2.1.1 Determinao da seletividade:
Inicialmente foram realizadas medidas com solues de cido ctrico nas
concentraes de 2%; 4%; 10%; 15%; 20%; 25%; e 30% e a mdia das intensidades de
-
27
emisso das trs medidas para cada concentrao foram registradas para avaliao da
influncia das concentraes do cido ctrico no mtodo proposto. Solues de
borohidreto de sdio nas concentraes de 1%; 2%, 3%; 4%; 5% e 6% foram preparadas a
fim de avaliarmos a sua influncia nas intensidades de emisso medidas, nesta etapa a
concentrao de cido ctrico empregada foi mantida em 30%.
Por ltimo, comprimentos de reatores confeccionados com tubos de polietileno de
1m; 2m; 5m e 6m, foram testados utilizando-se cido ctrico 30% e borohidreto de sdio
2% em NaOH 0,01M com a finalidade de avaliarmos a influncia do tempo de contato
entre a amostra e a soluo de cido ctrico nas intensidades de emisso.
Para estes testes foram utilizados padres inorgnicos de Sb(III) (tartarato de
antimnio e potssio) na concentrao de 0,5 mg/L em gua, padro inorgnico de Sb(V)
(hexamonato de antimnio e potssio) na concentrao de 20 mg/L e uma soluo
contendo os dois padres de Sb(III) e Sb(V) nas concentraes de 0,5 mg/L e 20 mg/L
respectivamente.
Para os testes do comprimento dos reatores foi utilizada alm dos padres
inorgnicos de Sb(III) 0,5 mg/L e Sb(V) 20 mg/L, amostra comercial diluda 4000 vezes.
Atravs dos resultados obtidos no teste de seletividade, os parmetros da anlise
foram estabelecidos. Utilizando estes, foram ento avaliadas a linearidade, exatido
preciso e limite de quantificao a fim de validarmos o mtodo.
3. 2.2.1.2 Determinao da Linearidade:
Foi determinada pela anlise de cinco concentraes diferentes compreendendo
zero como nvel de Sb(III) esperado at 120% do limite mximo especificado que de
4000 mg/L, conforme Farmacopia Brasileira 4 edio. Considerando-se a diluio
utilizada nos trabalhos de 5000 vezes.
4000 mg/L /5000 = 0,8 mg/L
0,8 mg/L X 120% = 0,96 mg/L
As concentraes utilizadas para construo da curva foram: zero; 0,1; 0,25; 0,5 e 1
mg/L, correspondendo a 0, 12,5%; 31,2%; 62,5% e 125% do valor mximo. Este intervalo
de concentrao compreende o menor valor esperado de Sb(III) at 120% do valor
mximo que 0,96 mg/L.
Os valores das intensidades compreendem a mdia de trs medidas para cada
concentrao.
-
28
Para verificao da linearidade, mtodos estatsticos foram utilizados para
determinao do coeficiente de correlao, interseo com o eixo Y, coeficiente angular, e
desvio padro relativo.
3. 2.2.1.3 Determinao da exatido:
A exatido foi determinada a partir da adio de quantidade conhecida de Sb(III) na
forma do padro inorgnico tartarato de antimnio e potssio a uma mistura dos
componentes do medicamento incluindo a adio de quantidades de Sb(V) na forma do
padro inorgnico hexahidrxido de antimnio e potssio na proporo de 20 vezes mais a
quantidade de Sb(III) adicionada, (placebo contaminado). A frmula do placebo encontra-
se na tabela 3.
Tabela 3- Frmula do placebo utilizado na preparao da amostra para teste de exatido
EXCIPIENTE QUANTIDADE
Metabissulfito de sdio 0,25 g
Na2EDTA 0,5 g
Nipagim 0,5 g
gua para injetveis qsp 500 mL
A exatido foi calculada como porcentagem de recuperao da quantidade
conhecida de Sb(III) adicionado ao placebo.
A exatido do mtodo foi verificada a partir de nove determinaes, ou seja, trs
concentraes com trs replicatas cada, quais sejam: 3,200mg/mL (80%), 4,000 mg/mL
(100%) e 4,800 mg/mL (120%) do valor declarado como mximo pela FB 4 ed.
Aos resultados encontrados foi aplicado o teste t de Student para verificar se as
concentraes encontradas eram estatisticamente ig