prof.doutor josé cabeda genética molecular licenciatura em análises clínicas e saúde pública...
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Prof.Doutor José Cabeda
Genética Molecular
Licenciatura em Análises Clínicas e Licenciatura em Análises Clínicas e Saúde PúblicaSaúde Pública
Recombinação V(D)J:Recombinação V(D)J:
Os genes das Ig e do TCROs genes das Ig e do TCR
2002/2003 Prof. Doutor José Cabeda Imunologia
A codificação genética do TCR e Ig
NECESSIDADE BIOLÓGICA:NECESSIDADE BIOLÓGICA: Criar um número ilimitado de TCRCriar um número ilimitado de TCR
LIMITAÇÃO PRÁTICA:LIMITAÇÃO PRÁTICA: O Genoma é limitado, pelo que pode codificar O Genoma é limitado, pelo que pode codificar
um número limitado de Proteínasum número limitado de Proteínas
RESPOSTA BIOLÓGICA:RESPOSTA BIOLÓGICA: O mecanismo de recombinação somática cria O mecanismo de recombinação somática cria
uma diversidade ilimitada a partir de um número uma diversidade ilimitada a partir de um número limitado de elementos genéticos baselimitado de elementos genéticos base
2002/2003 Prof. Doutor José Cabeda Imunologia
Os receptores do antigénio são codificados por mais que
um gene IgIg
Cadeias Pesadas: IgHCadeias Pesadas: IgH Cadeias Leves: IgCadeias Leves: Ig e Ig e Ig
TCRTCR Cadeia Cadeia Cadeia Cadeia Cadeia Cadeia Cadeia Cadeia
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Os genes das Imunoglobulinas
Cromossoma 12
Cromossoma 6
Cromossoma 16
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Os genes do TCR
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Os genes do TCR são diferentes em células diferenciadas e células indiferenciadas
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O rearranjo somático
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Regulação da recombinação: as sequências sinal
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A recombinação somática segue a regra:A recombinação somática segue a regra: “ “ só rearranjam elementos com espaçadores de só rearranjam elementos com espaçadores de
comprimentos diferentes”.comprimentos diferentes”.
Regulação da recombinação
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Equação de recombinaçãoV
GTCCTCC.CACAGTG-12-ACAAAAACC
JGGTTTTTGT-23-CACTGTG.CTCAG
+
V J JUNÇÃO CODIFICANTE
JUNÇÃO SINAL
GTCCTCC GGTCAG
+
GGTTTTTGT-23-CACTGTG|CACAGTG-12-ACAAAAACC
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Tipos de recombinação
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As junções dos elementos V-D-J não são pré-definidas
Delecção de nucleótidos de cada Delecção de nucleótidos de cada elementoelemento
Adição de novos nucleótidosAdição de novos nucleótidos Nucleótidos P (origem numa Nucleótidos P (origem numa
estrutura palindrómica)estrutura palindrómica) Nucleótidos N (adicionados Nucleótidos N (adicionados
aleatoriamente pela enzima TdT)aleatoriamente pela enzima TdT) número potencial de 10número potencial de 101616-TCR e -TCR e
10101818 -TCR-TCR
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A origem dos nucleótidos PGTCA
GTCA
CATG
CATGGTAC
Nucleótidos "P"
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A origem dos Nucleótidos N
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Leitura dos segmentos D faz-se em 3 ordens de leitura
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Diversidade combinatorial
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Locais de diversidade de junção: os CDR
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Os CDR na estrutura proteica
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A recombinação origina novos genes e novos clones
Cada gene obtido é potencialmente diferente dos Cada gene obtido é potencialmente diferente dos restantesrestantes
Os genes do TCR de cada linfócito são diferentes Os genes do TCR de cada linfócito são diferentes dos de qualquer outra célula não linfóidedos de qualquer outra célula não linfóide
A recombinação V(D)J A recombinação V(D)J ocorre precocemente na ontogenia das célulasocorre precocemente na ontogenia das células determina a sua maturação na linhagem Tdetermina a sua maturação na linhagem T cada célula origina um clone de células Tcada célula origina um clone de células T
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Estimativas da diversidade
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Mutação somática dos genes das Ig
Ocorre no centros germinais Ocorre no centros germinais dos nódulos linfáticosdos nódulos linfáticos
Ocorre de forma aleatóriaOcorre de forma aleatória A selecção dirigida pelo A selecção dirigida pelo
antigénio causa antigénio causa predominância de mutações predominância de mutações nos CDRnos CDR
Resulta num aumento da Resulta num aumento da afinidade dos anticorposafinidade dos anticorpos
O TCR não sofre mutação somática
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O Gene TCR no locus TCR
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Aplicações no laboratório de análises clínicas