AJCristóvão, Departamento Zoologia Universidade Coimbra 2003

MEDIÇÃO DOCRESCIMENTO DE E.COLI EM SISTEMA

FECHADO

MÉTODOS PARADETERMINAR A

DENSIDADE CELULAR

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Câmaras decontagem

• Fácil rápido ebarato

• Útil para contareucariotas eprocariotas

• Não distinguecélulas vivas dasmortas

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Contadoreselectrónicos

•Suspensão microbiana forçadaatravés dum pequeno orifício•O movimento das partículas(micróbio) através do orifício éconvertida num sinal eléctrico•Fragmentos são contados•Não se distingue as células vivasdas mortas•Rápido e de fácil uso•Útil para células grandes

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Contagem de célulasviáveis

• Mede o nº decélulas viáveis

• A população éexpressa emcolony formingunits (CFU)

Colocar diluições dapopulação num meio

sólido apropriadoØ

Contar nº de colóniasØ

Calcula o nº de células napopulação

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Métodos de filtraçãoatravés de membranas

Muito útil para amostras de água

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Diluições emsérie

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Medições de massamolecular

• Peso seco– Moroso e não muito sensível

• Quantificar um constituinte emparticular– e.g., proteína, DNA, ATP, útil se as quantidades são

constantes em cada célula• Medições turbidimétricas (dispersão

de luz)– Rápido, fácil e sensível

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MEDIÇÃO PORTURBIDIMETRIA

Usar a D.O. como Concentração?

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Fases docrescimento

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Parâmetrosmatemáticos do

crescimento

•Tempo de geração (tempo deduplicação)

– tempo necessário para umapopulação duplicar de tamanho

• taxa específica de crescimento(constante de crescimento)

– número de gerações por hora

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Um exemplo prático

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Tempo de geração etaxa de crescimento

lnN - lnN0 =µ (t-t0)

N0 = # células ao tempo t0N = # células ao tempo t

µ = taxa específica de crescimentog = tempo de geração

logN - logN0 =µ/2,303 (t-t0)

µ=2,303 (logN - logN0)/(t-t0)

lnN - lnN0 =µ (t-t0)

Se ln(N/N0) =2

Então ln 2 =µ g

Assim g=0,693/µ ou µ=0,693/g

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CURVA DE CRESCIMENTO DEUMA BACTÉRIA

Papel milimétricosemilogarítmico.Porquê?Pode usar papelmilimétrico normal?

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Cálculos:

µ= (log 0.06-log0.03) x 2,303/(2,5-1,5)µ= (-1,22- (-1,522))x 2,303/1µ= 0,696 h-1

Taxa específica de crescimento:

g= 0,693/0,696g= 1 h

Tempo de geração:

N=N0 10µ(t-t0)/2,303

N= 104 x 100,696X5/2,303

N= 323594

Qual o nº de células ao fim de 5 horasSabendo que inicial era 104 células?:

Valores:t=1,5-->D.O.=0,03t=2,5-->D.O.=0,06

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EXERCÍCIOS

1,158

17

0,957,5

0,8556

0,6805,5

0,8865,50,4725

0,40540,3624,5

0,2923,50,2734

0,21730,2083,5

0,13720,1523

0,09310,0852

0,0870,50,081

0,08100,070

D.O.Tempo (h)D.O.Tempo (h)

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PAPELSEMILOGARITMICO

1

10

100

0 1 2 3 4 5