mÉtodos clÁssicos de doseamento

MÉTODOS CLÁSSICOS DE DOSEAMENTO

DOSEAMENTO

TEOR DE SUBST. ATIVA

ANÁLISES QUALITATIVAS E QUANTITATIVAS

GARANTIR M.P ESPECIFICAÇÕES

PRODUTO FINAL C/ QUALIDADE


DETERMINAÇÃO DE TEOR

DIFERENTES MÉTODOS OFICIAIS OU NÃO OFICIAIS

AS GRANDES INDÚSTRIAS FARMACÊUTICAS USAM EM GRANDE ESCALA OS MÉTODOS

CROMATOGRÁFICOS COMO SENDO OS OFICIAIS DE DOSEAMENTO, ESPECIALMENTE PARA

PRODUTOS ACABADOS.DESTACA-SE A FARMACOPÉIA AMERICANA QUE

INDICA MÉTODOS HPLC-UV PARA O DOSEAMENTO DA GRANDE MAIORIA DE SUAS

MONOGRAFIAS.


OUTRAS FARMACOPÉIAS SÃO MAIS

DIVERSIFICADAS, APRESENTANDO

DOSEAMENTOS ALTERNATIVOS:

VOLUMETRIA EM MEIO NÃO AQUOSO,

TITULAÇÕES POTENCIOMÉTRICAS,

ESPECTROMETRIA NO UV-VISÍVEL,

ETC.


ESCOLHA DO MÉTODO:

• CRITERIOSA• SEM FALHAS• GERAR RESULTADOS FIDEDIGNOS

ASPECTOS CONSIDERADOS:

• TEMPO DE ANÁLISE• CUSTO• EXATIDÃO• PRECISÃO


OUTROS FATORES:a)Natureza das informações desejadasb)Quantidade de amostra e % do que será determinadoc)Utilização dos resultados da análise

As análises químicas podem ser classificadas em quatro tipos de acordo com os dados gerados:


a) ANÁLISE APROXIMADA: QUANTIDADE DE CADA ELEMENTO EM UMA AMOSTRA

b) ANÁLISE PARCIAL: DETERMINA ALGUNS CONSTITUINTES DA AMOSTRA

c) ANÁLISE DE TRAÇOS: É CARACTERIZADA COMO UM TIPO DE ANÁLISE PARCIAL, PRÉM A ANÁLISE CONSISTE EM DETERMINAR OS CONSTITUINTES DE UMA AMOSTRA NA ESCALA DE TRAÇOS, MICROTRAÇOS E NANOTRAÇOS


d) ANÁLISE COMPLETA: EM QUE SE DETERMINA A PROPORÇÃO DE CADA COMPONENTE DA AMOSTRA.

QANTO AO TAMANHO DA AMOSTRA, OS MÉTODOS ANALÍTICOS SE CLASSIFICAM EM :

a) MACRO: PARA ANÁLISE DE QUANTIDADES IGUAIS OU SUPERIORES A 0,1g

b) MESO (SEMIMICRO): QUANTIDADES ENTRE 10-2 E 10-1g;


c) MICRO: QUANTIDADES ENTRE 10-3 E 10-2gd) SUBMICRO: QUANTIDADES ENTRE 10-4 E

10-3ge) ULTRAMICRO: QUANTIDADES INFERIORES

A 10-4gf) TRAÇOS: QUANTIDADES ENTRE 102 E 104

mcg/g (10 A 10.000 PARTES POR MILHÃO);g) MICROTRAÇOS: QUANTIDADES ENTRE 10-1

E 102 pg/g (10-7 a 10-4 partes por milhão) **


h) NANOTRAÇOS: QUANTIDADES ENTRE 10-1 E 102 fg/g (10-10 A 10-7 PARTES POR MILHÃO) **

** miligrama (mg) = 10-3g micrograma (mcg) = 10-6g nanograma (ng) = 10-9g picograma (pg) = 10-12g fentograma (fg) = 10-15g atomograma (atg) = 10-18g


PARA O DOSEMANTO OU IDENTIFICAÇÃO DE FÁRMACOS, AS PRINCIPAIS TÉCNICAS UTILIZADAS EM ANÁLISE QUANTITATIVA SE BASEIAM EM:A)REPRODUTIBILIDADE DE REAÇÕES QUÍMICAS ADEQUADASB)MEDIDAS ELÉTRICAS (EX. POTENCIOMETRIA E CONDUTIMETRIA)C)PROPRIEDADES ESPECTROSCÓPICAS (ESPECTROS DE ABSORÇÃO POR EXEMPLO)D)DESLOCAMENTO CARACTERISTICO, SOB CONDIÇÕES CONTROLADAS (EX. CROMATOGRAFIA)


OS MÉTODOS DE DOSEAMENTO PODEM

SER DIVIDIDOS EM DOIS GRANDES

GRUPOS:

A)MÉTODOS CLÁSSICOS

B)MÉTODOS INSTRUMENTAIS


MÉTODOS CLÁSSICOS

•Equilíbrio químico•Ponto de viragem•Uso de indicadores

MÉTODOSINSTRUMENTAIS

•Uso de instrumento apropriado•Algumas vantagens como rapidez da análise e aplicação do método em amostras com concentrações muito pequenas


MÉTODOS VOLUMÉTRICOS: A volumetria pode também ser chamada de Titulometria ou Análise titrimétrica - deve-se escolher vidrarias adequadas, solução titulante padronizada, padrões primários, balança analítica (+/- 0,0001g) e solução indicadora.• Útil no doseamento de fármacos• método simples, preciso e custo baixo


APARELHOS VOLUMÉTRICOS:É fundamental a escolha dos aparelhos volumétricos; são instrumentos de medidas exatas, podendo apresentar alguns fatores negativos como por ex. aderência nas paredes internas do recipiente.


O escoamento de líquidos dependerá de alguns pontos:• limpeza da superfície interna• tempo de drenagem• viscosidade do líquido• tensão superficial do líquido• ângulo do aparelho em relação ao solo


EM UM LABORATÓRIO DE CQ, BASICAMENTE DEVE HAVER DOIS TIPOS DE FRASCOS VOLUMÉTRICOS:a)TC: APARELHOS CALIBRADOS PARA CONTER UM CERTO VOLUME, O QUAL, NÃO SERÁ TOTALMENTE TRANSFERIDO.b) TD: APARELHOS CALIBRADOS PARA TRANSFERIR UM DETERMINADO VOLUME, DENTRO DE CERTOS VOLUMES DE PRECISÃO.


PROVETAS OU CILINDROS GRADUADOS são equipamentos utilizadas em medidas aproximadas de volume. No comércio são encontrados desde 5 mL até X Litros. De um modo geral, o desvio-padrão da medida de volume feita com esses aparelhos é de 1%.


PIPETAS: Instrumentos volumétricos utilizados para transferência de certos volumes.a)Graduadas: apresentam graduação até a extremidade; possuem menor exatidão que as volumétricasb) Volumétricas: apresentam graduação única; medem só o volume indicado, apresentando maior exatidão


PIPETAS VOLUMÉTRICAS

PIPETAS GRADUADAS


BURETAS: São frascos volumétricos, usadas para escoar volumes variáveis de líquido e empregada geralmente em titulações.

MÉTODOS CLÁSSICOS DE MÉTODOS CLÁSSICOS DE DOSEAMENTODOSEAMENTO

BALÕES VOLUMÉTRICOS: Aparelhos construídos para conter um certo volume de líquido exatamente em uma determinada temperatura


SOLUÇÃO PADRÃO

•Usada em doseamento;•Preparada a partir de um padrão primário;

PADRÃO PRIMÁRIO

•Deve ser de fácil obtenção, purificação, secagem e preservação em estado puro;•Não higroscópico, composição invariável•Massa molecular elevada, para que os erros de pesagem sejam desprezíveis;•Facilmente solúvel


ENTRE OS PRINCIPAIS DOSEAMENTOS

DE FÁRMACOS, ESTÃO AS REAÇÕES DE:

•NEUTRALIZAÇÃO

• COMPLEXAÇÃO

•OXIRREDUÇÃO

• PRECIPITAÇÃO


Principais reações:

NEUTRALIZAÇÃO: Na2CO3 (Carbonato de Sódio), Na2B4O2 (Tetraborato de Sódio), KH(C8H4O4) (Hidrogenoftalato de Potássio, C6H5COOH (Ácido Benzóico)


COMPLEXAÇÃO E PRECIPITAÇÃO: AgNO3 (Nitrato de Prata), NaCl e outros


OXIRREDUÇÃO: K2Cr2O7 (Dicromato de Potássio), KBrO3 (bromato de Potássio), KIO3, (Iodato de Potássio), Na2C2O4 (Oxalato de Sódio), etc.


A determinação do ponto final de uma titulação é feita com auxílio de instrumentos. Em se tratando de métodos clássicos, principalmente na titulometria de neutralização, é necessário o uso de indicadores específicos para a detecção do ponto final da reação.


MÉTODOS GRAVIMÉTRICOS medida indireta da massa de um (ou mais) constituinte da amostra; ou seja, converte-se uma espécie química em uma forma separável do meio em que se encontra para que se possa recolher e através de cálculos estequiométricos, determinar a quantidade real do elemento ou composto químico da amostra


PODE SER DIVIDIDA EM:

PRECIPITAÇÃOVOLATILIZAÇÃO

DE UM MODO GERAL, O MÉTODO DA PRECIPITAÇÃO SEGUE A SEGUINTE ORDEM:PRECIPITAÇÃOPRECIPITAÇÃOFILTRAÇÃOFILTRAÇÃOLAVAGEMLAVAGEMAQUECIMENTOAQUECIMENTOPESAGEMPESAGEM


PARA SER REALIZADA A SEPARAÇÃO:• SE ADICIONA UM AGENTE PRECIPITANTE;• OCORRE CONVERSÃO DO ÍON EM FORMA INSOLÚVEL;• SURGIMENTO DE FASES;• RECOLHIMENTO POR MEIOS FILTRANTES EM ANÁLISE;• RECONVERSÃO NA FORMA DE PESAGEM.


EXISTEM SAIS QUE SÃO MUITO HIGROSCÓPICOS, ABSORVENDO ASSIM GRANDE QUANTIDADE DE ÁGUA ATMOSFÉRICA; DESSA MANEIRA NÃO PERMITEM A MEDIDA CORRETA DE SUAS MASSAS. DA MESMA FORMA, PRECIPITADOS GELATINOSOS ARRASTAM MUITA ÁGUA E AO EVAPORAR LEVAM IMPRECISÃO NA HORA DE EFETUAR A LEITURA.


POR ESTE MOTIVO, ALGUNS

PRECIPITDOS SÃO CONVERTIDOS EM

OUTRAS ESPÉCIES QUÍMICAS. COMO

REGRAS PARA EFETUAR A PESAGEM DE

UM PRECIPITADO, CONSIDERA-SE:


a) COMPOSIÇÃO QUÍMICA CONHECIDA;

b) FORMA DE PESAGEM – TEMPERATURA

BAIXA E ESTÁVEL;

c) NÃO SER HIGROSCÓPICA;

d) DEVE POSSUIR PARTICULAS DE

DIMENSÕES QUE NÃO PASSEM PELO

MEIO DE FILTRAÇÃO


AS VANTAGENS DESSE MÉTODO ESTÁ

NA S OPERAÇÕES UNITÁRIAS QUE SÃO

DE FÁCIL EXECUÇÃO E DE BOA

REPRODUTIBILIDADE E O USO DE

EQUIPAMENTOS SIMPLES E DE BAIXO

CUSTO.


AS DESVANTAGENS:

• TEMPO NECESSÁRIO PARA EXECUÇÃO;

• GRANDE Nº DE OPERAÇÕES NECESSÁRIAS;

• ERROS

•IMPOSSIBILIDADE DE DETERMINAR

MICRONUTRIENTES EXISTENTES NA

AMOSTRA, PRINCIPALMENTE NA ESCALA

P.P.M.


MÉTODOS INSTRUMENTAIS DE MÉTODOS INSTRUMENTAIS DE DOSEAMENTODOSEAMENTO

OS MÉTODOS INSTRUMENTAIS:•MAIOR SENSIBILIDADE•ESPECTROSCOPIA DE ABSORÇÃO UV VISÍVEL E INFRAVERMELHO• ESCTROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA (FUORIMETRIA)• POLARIMETRIA (ROTAÇÃO ÓTICA)• REFRATOMETRIA (ÍNDICE DE REFRAÇÃO)


•TÉCNICAS ELETROANALÍTCAS (VOLTAMETRIA, POLAROGRAFIA, POTENCIOMETRIA DIRETA E INDIRETA, ETC.• ABSORÇÃO ATÔMICA • HPLC-UV• CROMATOGRAFIA GASOSA•OUTRAS TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS


MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS:

A seletividade e sensibilidade desses métodos dependem da:• concentração da amostra• estrutura química • intensidade ou freqüência da energia utilizada.


ESPECTROMETRIA DE ABSORÇÃO NO UV-VISÍVEL

Técnica aperfeiçoada continuamente – útil instrumento de medida

Absorção e emissão de energia eletromagnética dos átomos e moléculas

Determinação quantitativa de substâncias por luzes em soluções coloridas


Solução de luz branca cor resultante da absorção dos vários comprimentos de onda. A absorção depende de: K – Natureza da substância C – ConcentraçãoL – Caminho ótico (espessura da solução que é atravessada pela luz).

Solução “sem cor” podem absorver energia eletromagnética, cuja freqüência é maior ou o comprimento de onda é menor.


LEIS DA FOTOMETRIA:

Quando um raio de energia atravessa uma solução, a energia radiante incidente (Io) SERÁ MAIS INTENSA QUE A ENERGIA EMERGENTE (I), e a intensidade de energia fica mais atenuada, devido a:


a) Reflexões das interfaces entre o ar e a parede do recipiente (cubeta)

b) Dispersão por partículas presentes na solução

c) Absorção da energia pelo meio

I0 I


LEI DE LAMBERT:

1ª LEI DA FOTOMETRIA

QUANDO A ENERGIA RADIANTE ATRAVESSA

SOLUÇÃO, QUANTIDADE DE ENERGIA

TRANSMITIDA DIMINUI EXPONENCIALMENTE,

EM RELAÇÃO AO AUMENTO DA ESPESSURA

ATRAVESSADA.


ASSIM: IO = Intensidade luz incidente I = Intensidade de luz transmitida

LOG IO = a . b a = constante da solução I b = espessura (cm) da

camada atravessada pela luz


TRANSMITÂNCIA (T): É o coeficiente entre a intensidade de luz que atravessa a solução e a intensidade da luz incidente:

T = I Io • a transmitância INDEPENDE do valor absoluto da luz incidente e a fração desta luz, que é absorvida por um meio, é proporcional à espessura do meio atravessado, INDEPENDENDO da intensidade da luz incidente.


Io e I terão o mesmo valor: Quando a solução não absorver energia, logo será igual a 1; ou seja, 100%

Conclui-se que: qualquer solução que absorva energia terá transmitância menor que 1 (porque I, neste caso, é menor que Io).


A correlação entre energia e concentração veio com a Lei de BEER:

Quando a energia radiante atravessa uma solução, a quantidade de energia transmitida diminui exponencialmente, com o aumento da concentração da solução.


CURVA DE CALIBRAÇÃO

SOLUÇÕES PADRÕES: Parte importante da análise quantitativa no laboratório e usada nas dosagens de amostras desconhecidas. Apresenta concentração exata de uma substância que servirá como referência na determinação fotométrica de ma substância desconhecida, tendo grande importância na curva de calibração.



USO DOS BRANCOS: utilizado na espectrofotometria para estabelecer o Zero de absorvância ou 100% Transmitância. Em algumas dosagens, obtêm-se brancos com elevada absorbância, o que dificulta o acerto do zero em muitos aparelhos; neste caso a leitura do branco e do teste, é realizada, acertando o zero com água destilada e a seguir determina-se as diferenças entre o branco e o teste.


CURVA DE CALIBRAÇÃOimportante no trabalho fotométrico. OBTENÇÃO DA CURVA DE CALIBRAÇÃO:1)Preparar uma série de padrões exatos, cobrindo a faixa de trabalho desejada ou indicada, usando o padrão recomendado para o método a ser calibrado.2)Dosar todos os padrões de acordo com a técnica recomendada; efetuar as leituras usando o branco apropriado e também o comprimento de onda recomendado pela literatura ou pela curva de absorção do espectro previamente realizada


CURVA DE CALIBRAÇÃO3) Ao fazer as leituras em transmitância, recorrer à tabela de conversão transformando os resultando em absorbância. Plotar os resultados relacionando absorbância (ordenada) com as concentrações dos padrões (abscissa). Examinar os pontos obtidos e decidir se serão cobertos por uma linha reta. Se isso ocorrer, traçar a curva de modo que mais se aproxime de todos os pontos obtidos. A curva deve ser interpolada por meio dos pontos.



4) A curva de calibração deve ter ângulo de 45º em relação ao ponto de origem. Curvas de ângulos muito agudos ou obtusos não devem ser utilizadas porque não têm sensibilidade ideal.


A

B

C

A – Curva muito sensívelB – Curva Ideal 45ºC – Curva pouco sensível


A equação da reta de calibração y = bx + a, e o coeficiente de correlação (R) podem ser obtidos pelo método dos mínimos quadrado.Existe uma relação entre a curva de calibração e a lei de Lambert-Beer; e através dessa equação (relação) verifica-se que a absorbância (A) é diretamente proporcional a concentração (c).


ESPECTROMETRIA NO INFRAVERMELHO

Uma das principais técnicas em ensaios de

identificação e análises qualitativas

Não é muito utilizada em doseamento


CROMATOGRAFIA

Um dos métodos mais utilizados na indústria farmacêutica em doseamento de fármacos. Entre eles, a HPLC – cromatografia líquida de alta eficiência está presente como método da escolha para mais de 90% dos produtos.


CROMATOGRAFIA

O sucesso da HPLC:

•Boa sensibilidade

•Baixa vulnerabilidade a interferências


CROMATOGRAFIA

A cromatografia gasosa (CG) também é utilizada; embora apresente ótima resolução e sensibilidade, não se aplica a produtos de baixa estabilidade térmica e/ou volatilidade.


CROMATOGRAFIA

A cromatografia de camada delgada (CCD) – ampla aplicação em ensaios de identificação, mas não apresenta precisão e sensibilidade compatíveis aos ensaios quantitativos.


CROMATOGRAFIA

HPLC E CG

• Gráficos com picos: representam a passagem do analíto pelo detector.

•O pico apresentado pode ser relacionado com a concentração do analíto desde que se tenha a curva de calibração com padrões.


CROMATOGRAFIA

Para se estabelecer uma correlação

pico/concentração é necessário

determinar a altura ou área dos picos

cromatografados.


GRÁFICOS DE CALIBRAÇÃO ou Curva Analítica, ou Curva de Calibração: • relação entre a resposta do instrumento e uma concentração do analíto.

LINEARIDADE: determina até que ponto essa relação se mantém linear.

Os gráficos de calibração são construídos pela análise de alíquotas de solução padrão, realizadas em replicatas.


Plota-se os valores no eixo das ordenadas

(alturas dos picos) e no eixo das abscissas

(concentrações).

Encontra-se os pontos – a melhor relação se

dá entre os pontos quando obtida por

regressão linear (forma de encontrar a melhor

linha reta por pontos experimentais que

possuem alguma dispersão).


Através da regressão linear pode-se chegar no

(r): COEFICIENTE DE CORRELAÇÃO LINEAR –

mede o afastamento angular entre duas retas

de regressão; ou seja, expressa o “quanto” os

pontos avaliados caem sobre a reta

estabelecida.


Quando o r = +/- 1, as declividades das retas

serão idênticas e, portanto, haverá correlação

linear perfeita entre elas.

Quando r = 0, significa que as retas estão em

ângulo reto e não existe correlação linear entre

elas. Coeficientes de correlação acima de 0,95

são aceitáveis para a maioria dos métodos

analíticos.

mÉtodos clÁssicos de doseamento

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