Resumo: 09.001

INIBIÇÃO DA CALCINEURINA E DA ATIVAÇÃO MICROGLIAL ALTERA A PLASTICIDADE RETINOTECTAL INDUZIDA POR ENUCLEAÇÃO MONOCULAR DE MANEIRA REVERSÍVEL

Autores 1CHAGAS, L. S.

1,2, TRINDADE, P.

1, MELIBEU, A. C. F.

1, CAMPELLO-COSTA, P.

1, SERFATY,

C. 1 NEUROBIOLOGIA - UFF,

2 Department of Pediatrics - UM

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ, PRONEX-MCT

Resumo Introdução Alguns tipos de lesão são capazes de induzir a plasticidade em circuitos intactos do sistema nervoso central. Progressos foram feitos para compreender os mecanismos compartilhados pela ativação do sistema imune e a plasticidade induzida por lesão. Nosso modelo experimental utiliza projeções retinotectais para estudar a correlação entre plasticidade e ativação microglial durante o período crítico do desenvolvimento sináptico. Objetivos Para tanto, investigamos o papel da calcineurina (CaN), fosfatase envolvida em ambos os fenômenos de estabilização sináptica e ativação imunológica, e avaliamos os efeitos da inibição da ativação microglial sobre a plasticidade induzida por lesão. Código de Experimentação Animal Protocolo nº. 0015109 aprovado pela CEUA/UFF Código de Experimentação Humana Métodos No décimo dia pós natal (DPN10), durante o período crítico, a enucleação monocular em ratos Lister Hooded induz um brotamento robusto dos axônios intactos por todas as camadas visuais do colículo superior (CS), com efeito mais intenso 24h após a lesão. Técnicas de imunofluorescência com marcadores Iba-1 e IB-4 foram utilizadas para mostrar como se dá a ativação microglial em animais enucleados com diferentes sobrevidas (6h, 24h, 72h e 7 dias). A participação da atividade microglial na plasticidade retinotectal foi avaliada com o uso de um inibidor específico da sua ativação, a minociclina. Animais DPN 10 foram submetidos à encucleação monocular com 24 horas de sobrevida após tratamentos sistêmicos com doses agudas de Ciclosporina A (50mg/kg) e Minociclina (125 mg/kg) por via subcutânea, 4 horas após a lesão. Os animais também receberam injeções intraoculares de traçador anterógrado peroxidase(HRP) para processamento posterior. A marcação anterógrada dos axônios retinocoliculares com HRP também foi feita em animais tratados com CsA e Minociclina 4h após a lesão, porém com sobrevida longa (7 dias). Resultados Os dados da imunofluorescência mostraram que a ativação microglial em animais enucleados com diferentes sobrevidas ocorre de forma progressiva, com aumento no número de células a partir de 6h e alterações morfológicas associadas à ativação microglial, são observadas em 72h ou antes. Dados de marcação com HRP dos animais tratados com minociclina e CsA promoveram redução da arborização nas camadas mais dorsais do CS. A imunofluorescência também mostra que ambos os tratamentos interferem com a ativação microglial, gerando uma notável redução no número de células ativadas no CS contralateral à lesão, além de impedirem que a o nº de células ativadas (forma amebóide) aumentasse, quando comparados ao grupo controle. Os dados do tratamento com sobrevida longa apontam para uma reversão do efeito promovido pela inibição direta e indireta da ativação microglial

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Conclusão Os resultados sugerem que a administração sistêmica de CsA e o uso de inibidores microgliais específicos após a lesão interferem na reorganização plástica no CS, reduzindo a plasticidade induzida pela lesão ao mesmo tempo em que reduziu a população microglial ativada. Além disto, os dados preliminares mostraram que o efeito nas projeções retinotectais é reversível. Os dados sustentam a hipótese de um possível envolvimento da ativação microglial, mediada pela CaN, na regulação da plasticidade induzida por enucleação monocular durante o período crítico de desenvolvimento do sistema visual.

Palavras-chaves: microglia, calcineurina, retinotectal, plasticidade, colículo superior

Resumo: 09.002

Phoneutria nigriventer venom alters VEGF/Flt-1/Flk-1 system in the cerebellum of Wistar rats

Autores 1MENDONÇA, M. C. P.

2, SOARES, E. S.

2, STÁVALE, L. M.

1,2, CRUZ-HÖFLING, M. A.

1

Farmacologia - UNICAMP, 2 Histologia e Embriologia - UNICAMP

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPESP

Resumo Introdução A number of studies have been made to characterize neurovascular changes which follow the blood-brain barrier breakdown (BBBb). The vascular endothelial growth factor (VEGF) is an important cytokine which is associated with BBBb, and also with neuroprotection, angiogenesis and regeneration. Objetivos The aim of this study is to examine the time-course changes in the expression of VEGF and its tyrosine kinase receptors, Flt-1 and Flk-1, in neonate (P14) and adult (8-10 week-old) rats’ cerebellum after BBBb induced by Phoneutria. nigriventer venom (PNV). Código de Experimentação Animal 2403-1 Código de Experimentação Humana Métodos P14 (~30g) and 8-10 week-old (250-350g) male Wistar rats (Rattus norvegicus) received a single intraperitoneal injection of PNV (1.7 mg/kg in 0.5 ml of 0.9% saline), while the control group was given the same volume of vehicle. Two, 5 and 24 hours after saline or PNV injection (n=4-6/time), the animals were anesthetized and the cerebellum removed for Immunohistochemistry, Western blotting (WB) and qPCR analyses (CEUA/IB/Unicamp, protocol no. 2403-1). Statistics used unpaired Student's t-test; data were expressed as the mean ± SEM with p

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Resultados Purkinje neurons showed VEGF, Flt-1 and Flk-1 immunoreactivities and PNV increased them. WB data showed that PNV increased significantly VEGF (5 h) and Flt-1 (in all periods) (p Conclusão PNV increased components of the VEGF/Flt-1/Flk-1 system whose expression exhibited time and age dependent dynamics. Purkinje neurons were the principal immunoreactive cells suggesting a key-role in the response to PNV toxicity to these neurons. Further studies will clarify whether these events were consequence and not driver directed to protect the cerebellum from damage.

Palavras-chaves: Age/time dependency, Blood-brain barrier, mRNA, Purkinje neurons

Resumo: 09.003

O ESTUDO TEMPORAL DA EXPRESSÃO GÊNICA DE S100β NO ENCÉFALO DE RATOS NEONATOS SUBMETIDOS À ANÓXIA.

Autores 1HAMASAKI, M. Y.

2, HIRATA, M. H.

2, HIRATA, R. D. C.

1, BATAGELLO, D. S.

1, NOGUEIRA,

M. I. 1 Anatomia - ICB/USP,

2 Análises Clinicas e Toxicológicas - FCF/USP

Apoio Financeiro: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Resumo Introdução Clinicamente, o diagnóstico atribuído aos distúrbios hipóxicos/anóxicos que ocasionam agressões ao sistema nervoso central (SNC) é denominado encefalopatia hipóxico-isquêmica (EHI). Em recém-nascidos, na maior parte das vezes, esse diagnóstico é decorrente do comprometimento multissistêmico gerado por asfixia perinatal. A EHI, considerada problema clínico mundial, é uma das mais importantes e frequentes causas de lesão encefálica neonatal. A avaliação precoce da gravidade de uma lesão cerebral aguda, secundária a privação de oxigênio, proporciona uma base extremamente útil para a prevenção e terapêutica em pacientes pediátricos. Por esta razão, durante a última década, os marcadores bioquímicos do sistema nervoso central têm chamado a atenção do meio científico, com destaque para a proteína S100β. Apesar da crescente investigação científica sobre aspectos distintos envolvendo a relação da proteína S100&beta com a EHI, atualmente são escassos os estudos que abrangem a análise da expressão de S100&beta diretamente no tecido nervoso . De forma similar, poucos estudos avaliam diferentes áreas do encéfalo acometidos por este tipo de encefalopatia. Dados desta natureza tornam-se essenciais uma vez que o acometimento encefálico na grande maioria dos casos é extenso, ocasionando lesões em múltiplas regiões encefálicas. Ademais, a investigação dos teores de mRNA do gene S100&beta de forma temporal, em regiões encefálicas distintas, constitui um alicerce extremamente útil no que se refere ao papel desta proteína na fisiopatologia da EHI neonatal. Objetivos O presente trabalho objetivou explorar a eventual variação da expressão do mRNA do gene S100&beta no hipocampo, cerebelo e córtex cerebral de ratos neonatos pós-natais de quatro dias (P4) em condições de anóxia, comparativamente à condições controle por meio da técnica de RT-PCR.

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Código de Experimentação Animal 190/2012 Código de Experimentação Humana Métodos Os procedimentos realizados neste trabalho foram aprovados pelo comitê de ética do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo (ICB/USP), registrado sob o número 190/2012. Este estudo foi desenvolvido em ratos albinos ( < i > Rattus norvergicus < /i > , linhagem Wistar), machos e fêmeas, divididos em dois grupos: o grupo Experimental Anóxia (EA) e o grupo Experimental Controle (EC), que por sua vez foram subdivididos em tempos de 2, 4, 6, 12 e 24 horas no que se refere à coleta de amostras após a aplicação dos estímulos pré-estabelecidos para cada grupo. A fim de efetuar a estimulação dos grupos EA e EC foi utilizado de um sistema adaptado e validado em nosso laboratório (J Neurosci Methods. 198:62, 2011). Para análise estatística da expressão gênica foi empregado o teste de ANOVA de dois fatores (tempo e estímulo), seguida por comparações múltiplas pelo método de Tukey. O nível de significância adotado foi p≤0,05. Resultados Dos períodos avaliados, nossos resultados indicaram que a anóxia proporcionou um pico na expressão de S100&beta após duas horas nas áreas do hipocampo (n=51) e cerebelo (n=57). O córtex cerebral do grupo EA (n=26) quando comparado ao grupo EC (n=27), não apresentou nenhum aumento significante de S100&beta nos períodos avaliados. Conclusão Os resultados obtidos contribuem de forma crucial para elucidação do papel da proteína S100&beta como biomarcadora na EHI, bem como no esclarecimento da função deste gene com relação à fisiopatologia da doença.

Palavras-chaves: Anóxia neonatal, Encefalopatia hipóxico-isquêmica, Expressão gênica, RT-PCR, S100beta

Resumo: 09.004

Efeito do tratamento crônico com lítio sobre a proteína cyclin-dependent kinase 5 (CDK5) e proteína Tau em cultura primária de neurônios corticais

Autores 1CARVALHO, M. P. F.

1, FORLENZA, O. V.

1, De PAULA, V. J. R.

1 Psiquiatria - HCFMUSP

Apoio Financeiro: CNPq

Resumo Introdução Nos últimos anos tem-se dado atenção especial aos possíveis efeitos neuroprotetores do lítio, especialmente pela descoberta de seus efeitos reguladores sobre proteínas pró e antiapoptóticas. O lítio aumenta substancialmente a expressão de proteínas citoprotetoras no sistema nervoso central (SNC), tanto em córtex de rato quanto em células

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humanas de origem neuronal. Além de ações neuroprotetoras, ele também auxilia na regeneração de axônios no SNC de mamíferos. O lítio regula negativamente a expressão e atividade da enzima glicogênio sintase kinase 3β (GSK3β) e da Cyclin-dependent kinase 5 (CDK5). A CDK5 é um membro incomum da família das CDKs, uma vez que diferentemente das outras CDKs, esta serina-treonina kinase não exerce um controle direto sobre o ciclo celular. A maioria de suas ações conhecidas está associada com a sua atividade no SNC. Um papel importante da CDK5 é na corticogênese. Esta kinase promove migração, agindo positivamente em sinais pró-migratórios, e possivelmente antagonizando sinais anti-migratórios. Fato que, entre os substratos da CDK5 existem diversas proteínas envolvidas no transporte axonal, como a proteína Tau. Objetivos Avaliar o efeito neuroprotetor do tratamento crônico com cloreto de lítio em doses subterapêuticas (0,02mM; 0,2mM) e terapêutica (2mM) em neurônios corticais. Avaliar a expressão protéica das proteínas CDK5 e proteína Tau nas suas 6 isoformas. Código de Experimentação Animal 209/11 Código de Experimentação Humana Métodos Culturas primárias de neurônios corticais foram tratadas após quatro dias em cultura (DIC) e incubadas (37ºC, 5% CO2) com concentrações diferentes de cloreto de lítio até o décimo dia em cultura. As concentrações de lítio utilizadas foram de 0,02mM; 0,2mM e 2mM. Os efeitos do lítio nas proteínas Tau e CDK5 foram determinadas por Western-blot, utilizando anticorpos específicos para detecção das proteínas de interesse. Resultados A expressão da proteína Tau mostrou uma redução nos três tratamentos em comparação com o controle, de 18%, 23% e 20%, respectivamente. A expressão da CDK5 aumentou em 35% no tratamento de 0,02mM e 33% no de 0,2mM, enquanto que teve sua atividade reduzida em 10% na concentração de 2mM de cloreto de lítio, mantendo a relação com o controle. Conclusão O tratamento crônico com cloreto de lítio em doses subterapêuticas mostrou ser eficaz promovendo corticogênese, neuritogênese, além de conferir plasticidade neuronal pela proteína Tau, permitindo que a CDK5 exerça o seu papel na maturação dos neurônios, conferindo a neuroproteção esperada pelo cloreto de lítio.

Palavras-chaves: cyclin-dependent kinase 5, lítio, proteína Tau

Resumo: 09.005

Possível efeito preventivo do exercício físico e do BDNF na neurotoxicidade induzida pela injeção de 6-hidroxidopamina em ratos.

Autores 1REAL, C. C.

1, GARCIA, P. C.

2, PIRES, R. S.

1, BRITTO, L. R.

1 Instituto de Ciências Biomédicas -

USP, 2 Programa de Mestrado em Fisioterapia - UNICID

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq, CAPES e USP- NAPNA.

Resumo Introdução A Doença de Parkinson (DP) acomete milhões de pessoas; assim, é alvo de intensas pesquisas no sentido de desenvolver possíveis estratégias preventivas. O exercício físico, por sua vez, participa de efeitos benéficos sobre o sistema nervoso, estando, na maioria das vezes, o fator neurotrófico derivado do encéfalo (BDNF) envolvido nestes mecanismos. Objetivos O objetivo deste estudo foi investigar o possível papel preventivo do exercício em esteira no desenvolvimento do modelo unilateral da DP induzida pela injeção intra-estriatal de 6-hidroxidopamina, e o envolvimento do BDNF nas respostas encontradas. Código de Experimentação Animal nº 014/09 Código de Experimentação Humana Métodos Os animais foram divididos em 4 grupos: animais sedentários (SED); animais treinados (EX), SED parkinsonianos (SED+DP); EX parkinsonianos (EX+DP). Para analisar o efeito do BDNF, os animais foram divididos em dois grupos, sendo eles (1) aqueles que receberam a injeção de K252a (inibidor de TrkB – receptor de BDNF); (2) aqueles que não receberam K252a (Comitê de Ética nº 014/09). O protocolo de exercício consistiu de treino em esteira (10 m/min, 3x/semana, 40 minutos por 4 semanas antes da indução da DP). No 29º dia após a indução da DP realizou-se avaliação dos aspectos comportamentais pelo teste rotacional induzido por apomorfina. No 7º e 30º dias, os encéfalos foram coletados para análise da expressão de tirosina-hidroxilase (TH) pelas técnicas de imuno-histoquímica e immunoblotting na substância negra pars compacta (SNc) e no estriado (CPu). Os resultados foram submetidos a análise estatística (ANOVA e pós-teste de Tukey, quando apropriado). Adotou-se nível de significância de 5%. Resultados O teste rotacional revelou um acréscimo da assimetria rotacional nos animais parkinsonianos, sendo mais acentuado nos animais sedentários (SED+DP–1400%, p=0,0001/ EX+DP–ca. 500%, p=0,0003). Os resultados para TH em ambas as estruturas revelaram de modo geral um decréscimo na expressão no grupo SED+DP. Assim, os dados de imuno-histoquímica no 7º dia de lesão revelaram queda na marcação de células TH-positivas na SNc (ca. 39%, p=0,005) e na densidade óptica no CPu (ca. 25%, p=0,01) no grupo SED+DP em relação aos demais grupos estudados. Os dados de immunoblotting foram semelhantes aos descritos anteriormente. Porém, no CPu houve uma queda no grupo EX+DP em relação aos animais não parkinsonianos (ca. 51%, p=0,0004), porém a expressão continuou maior se comparada ao grupo SED+DP (ca. 160%, p=0,008). No 30º dia notamos uma maior perda de neurônios dopaminérgicos na SNc (ca. 72%, p=0,0001) e no CPu (50%, p=0,0001) no grupo SED+DP. Além disso, notamos queda na expressão na SNc no grupo EX+DP que não foi observada com 7 dias de lesão (ca. 47%, p=0,0001), porém o grupo EX+DP apresentou 90% mais células TH-positivas em relação ao grupo SED+DP (p=0,0003). Por outro lado, a adição de K252a revelou piora nos níveis de TH, onde a porcentagem de morte celular na SNc no grupo EX+DP+K252a foi semelhante à encontrada nos animais do grupo SED+DP (ca. 50%, p=0,0003) e SED+DP+K252a (ca. 70%, p=0,0001), assim como no CPu (ca. 70%, p=0,0001). Conclusão Assim, os resultados obtidos revelaram, de modo geral, que o protocolo de exercício intermitente foi capaz de prevenir os danos causados ao sistema dopaminérgico dos ratos injetados com 6-OHDA, sendo capaz de recuperar o comportamento motor dos animais parkinsonianos. Demonstramos ainda que o beneficio promovido pelo exercício intermitente parece ter o

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envolvimento do sistema BDNF-TrkB, sugerindo ser esse um importante sistema de prevenção na DP.

Palavras-chaves: Exercício intermitente em esteira, Doença de Parkinson, neuroinflamação, neuroprevenção, BDNF

Resumo: 09.006

EFEITOS NÃO SINAPTICOS DO STATUS EPILEPTICUS INDUZIDO PELA ADMINISTRAÇÃO DE ÁCIDO CAÍNICO EM RATOS

Autores 1NOGUEIRA, G. S.

1, ALMEIDA, A. C. G.

1, RODRIGUES, A. M.

1, SANTOS, L. E. C.

1,

FERREIRA, K. A. 1, VIEIRA, D.

1, ALMEIDA, A. C. G.

1 DEPEB - UFSJ

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq e FAPESP/FAPEMIG (EDT 187/09)

Resumo Introdução A indução de < i >status epilepticus< i > (SE) pelo ácido caínico (AC) representa um importante modelo de epilepsia do lobo temporal mesial. O registro das atividades epileptiformes não sinápticas (AENS) hipocampais permite inferir sobre a organização hipocampal e os mecanismos envolvidos no estabelecimento da homeostase iônica e excitabilidade neuronal. Objetivos Avaliar o efeito do SE induzido por AC nas AENS de fatias do hipocampo de rato, bem como as alterações morfológicas hipocampais associadas. Código de Experimentação Animal 37/2010 Código de Experimentação Humana Métodos Todos os procedimentos foram aprovados pela Comissão de Ética em Pesquisa Envolvendo Animais – CEPEA / UFSJ, processo n°.37/2010. Ratos Wistar machos (200-250g) foram tratados com doses seriais de ácido caínico (5mg/Kg/h; ip) ou salina (NaCl 0,9%) até a deflagração de SE e avaliados 7 dias após os tratamentos. As AENS foram induzidas por protocolo zero cálcio e alto potássio (Underlying Mechanisms of Epilepsy 189-218,2011). Variáveis: DE=duração do evento (s); IE=intervalo entre eventos (s), PS=amplitude média dos population spikes (mV), PSmax=amplitude máxima dos population spikes (mV). Marcações imuno-histoquímicas (CD11b, GFAP, NKCC1 e Ki67) foram realizadas pelo método do complexo avidina biotina peroxidase (ABC) ou imunofluorêscencia. Leitura e análise de arquivos incluindo análise de densidade celular e densitometria óptica foram realizadas em Matlab. Testes t ou Mann Whitney (&alpha=0,05) foram utilizados para análise estatística. Resultados

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No sétimo dia após SE nenhuma AENS foi registrada na região de CA1. No giro dentado, lâmina infrapiramidal (IP) as atividades foram mais pronunciadas com os seguintes parâmetros: DE(24.55±1,47,n=42), DC(7,24±0,3,n=42), PS(0,58±0,03,n=42) e PSmax(10,71±0,5,n=42), estatisticamente diferentes (p < 0,05;Mann-Whitney) em relação ao grupo controle: DE(17,25±0,69,n=42), DC(5,87±0,31,n=42), PS(0,41±0,04,n=42) e PSmax (6,03±0,63,n=42). Em CA1, a análise por densitometria óptica evidenciou aumento de CD11b (0,28±0,012,n=30), NKCC1 (0,2±0,014,n=35) e GFAP (0,21±0,01,n=25) em relação ao grupo controle: CD11b (0,11±0,005, n=30), NKCC1 (0,11±0,003,n=35) e GFAP (0,19±0,006,n=25). A densidade celular foi significativamente menor em CA1 (504538,6±23748,73cel/mm3,n=48) em relação ao controle (637933,7±12286,16cel/mm3,n=78). No giro dentado registrou-se aumento de CD11b (0,17±0,008,n=30) e NKCC1(0,13±0,005,n=39) em relação ao grupo controle: CD11b (0,14±0,007,n=30) e NKCC1 (0,10±0,005,n=39). A marcação de Ki67 mostrou um nítido aumento de células em proliferação em CA1, CA3 e na zona proliferativa subgranular. Conclusão 7 dias após SE induzido por AC, o hipocampo de rato exibe características bastante semelhantes à esclerose hipocampal humana, como morte seletiva de neurônios, proliferação de células gliais e alteração na expressão de cotransportadores cátion-cloreto. A região de CA1 apresenta significativa redução na densidade celular e relevante processo inflamatório, deixando de expressar AENS. Enquanto isso, o giro dentado permanece preservado sendo capaz de sustentar AENS robustas. Esses resultados sugerem que o giro dentado representa um potencial alvo terapêutico no estudo das epilepsias.

Palavras-chaves: Epilepsia, Ácido caínico, Status epilepticus, Atividades não sinápticas, Giro dentado

Resumo: 09.007

INTERAÇÕES NÃO SINÁPTICAS ENTRE SÍTIOS AFASTADOS DO HIPOCAMPO.

Autores 1CIACCI, L. S.

1, RODRIGUES, A. M.

1, ALMEIDA, A. C. G. D.

1, MIRANDA, M. F.

1

Departamento de Engenharia de Biossistemas - UFSJ

Apoio Financeiro: CAPES

Resumo Introdução O hipocampo de rato é estudado em importantes modelos experimentais de epilepsia. A relevância das conexões não-sinápticas foi mostrada a partir da indução de atividades epileptiformes (AE´s) com supressão das conexões sinápticas por meio de solução contendo baixo Ca+2 (Science, v. 218, p. 810-812, 1982). AE`s obtidas em nosso laboratório apresentaram indícios de interação entre atividades de áreas diferentes, como a aparição de eventos interictais com DC positivo no giro dentado (GD), talvez associados com atividades da área CA1. A hipótese seria de que os disparos em CA1 atuariam como estímulo, modulando a atividade no GD. Objetivos Verificar se existem interações entre sítios afastados do hipocampo (CA1 e GD) durante as AE´s não sinápticas. Código de Experimentação Animal 043/2012

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Código de Experimentação Humana Métodos Os procedimentos realizados foram avaliados e aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais da Universidade Federal de São João del-Rei, sob o parecer nº 043/2012. Foram utilizados ratos machos da linhagem Wistar com 4 semanas de idade e aproximadamente 150g, provenientes do Biotério da UFSJ. A metodologia utilizou registros eletrofisiológicos extracelulares simultâneos nas regiões CA1 – GD, divididos em dois grupos: Grupo I (fatia hipocampal inteira) e grupo II (áreas isoladas). A indução de AE´s não sinápticas se deu pelo protocolo alto-K+zero-Ca+ e, em todos os registros foi observada atividade simultânea em CA1 e GD. Os experimentos foram conduzidos mediante um delineamento experimental inteiramente casualizado para avaliar as alterações eletrofisiológicas – amplitude da componente DC (DC), duração dos eventos (DE), intervalo entre eventos (IE) e population spikes(PS). Após análises de verificação de normalidade, mediante o teste de Anderson-Darling, foi realizada uma análise não paramétrica. Resultados Para identificar as alterações na morfologia do Potencial Elétrico entre os grupos, DC (mV), PS (mV), DE (s) e IE (s) foram medidos. Foi utilizado o teste de Mann-Whitney, com significância α=0,05 para um total de 51 AE´s analisadas em cada grupo. Os valores médios e desvios-padrão são mostrados para os grupos I e II, respectivamente. O DC foi de 5,078 ± 1,230 e 5,451 ± 0,8789, não havendo diferença entre os grupos. A DE foi de 25,49 ± 7,484 e 26,20 ± 8,429, não havendo diferença entre os grupos. A amplitude dos PS foi de 5,040 ± 2,176 e 5,880 ± 2,336, não havendo diferença entre os grupos. O IE foi de 38,47 ± 10,43 e 34,31 ± 10,90, sendo o único parâmetro que apresentou diferença. Qualitativamente, foi nítida a presença de atividades com DC positivo em 100% dos registros em GD do grupo I e ausência das mesmas em 100% dos registros do grupo II. Conclusão Os resultados mostram que não há diferenças morfológicas entre AE´s do grupo I e AE´s geradas em fatias com GD isolado de CA1. A ausência de atividades interictais com DC positivo no grupo II sugere que a origem destas seja um efeito de campo distante exclusivo sobre a atividade de registro, contudo, sem qualquer interferência de interação entre sítios.

Palavras-chaves: Atividades epileptiformes, Eletrofisiologia, Hipocampo, Mecanismos não sinápticos

Resumo: 09.008

OCLUSÃO UNILATERAL DA ARTÉRIA CEREBRAL MÉDIA PROVOCA ALTERAÇÕES NO LADO CONTRALATERAL

Autores

1FERREIRA, K. A.

1, NOGUEIRA, G. S.

1, CARDOSO, J. P.

1, ALMEIDA, A. C. G. D.

1,

RODRIGUES, A. M. 1, SILVEIRA, G. A. D.

1, COTA, V. R.

1, DUARTE, M. A.

1 Departamento de

Engenharia de Biossistemas - UFSJ

Apoio Financeiro: Capes; Fapemig; UFSJ

Resumo

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Introdução A Oclusão da Artéria Cerebral Média (OACM) é um modelo in vivo de Acidente Vascular Encefálico (AVE) padrão empregado com o intuito de causar isquemia focal. Os AVEs vem sendo reconhecidos como causa comum de crises epilépticas, sendo razão corriqueira de convulsões em idosos (Epilepsy Res. 87(1) 1-11. 2009). Estudos em modelos animais têm fornecido contribuições para a compreensão de crises decorrentes de injúrias encefálicas (Neurochem. Int. 52 935–947. 2008). No encéfalo de roedores, uma das regiões corticais mais utilizadas para indução de epilepsia é o hipocampo que é uma estrutura suscetível a crises epilépticas. O hipocampo de ratos está situado dentro da região de injuria em modelos de OACM (Epilepsy Curr. 2(6). 173–177. 2002). O conhecimento a respeito das propriedades de membrana neuronal e da fisiologia não sináptica do hipocampo é crítico para a compreensão das bases celulares para geração de crises. Neste, sobretudo na região do Giro Dentado (GD), o empacotamento denso de corpos celulares constitui um substrato adequado para as conexões não sinápticas, podendo induzir crises sustentadas (J.Neurophysiol. 75(1) 124-132. 1996). Objetivos Investigar as consequências eletrofisiológicas não sinápticas da isquemia transitória, sete dias após o insulto. Código de Experimentação Animal 10/2010-CEUA/UFSJ Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizados 24 ratos wistar de 28 dias de vida dos quais 12 sofreram isquemia unilateral (grupo isquemia) e 12 participaram do grupo Sham operatório. Em cada grupo, seis ratos eram destinados à eletrofisiologia e seis à técnica histológica de Nissl . O procedimento cirúrgico de OACM foi realizado conforme descrito (Stroke. 20. 84-91. 1989), com tempo médio de oclusão de 120 minutos. Os procedimentos experimentais para indução das atividades epileptiformes não sinápticas foram executados de acordo com (Underlying Mechanisms of Epilepsy. 189-218. 2011). Para análise quantitativa do Potencial Elétrico (PE) não sináptico, utilizou-se os parâmetros amplitude da Componente DC (DC), em milivolts e Duração dos Eventos (DE), em segundos. A técnica de Nissl foi realizada conforme procedimento padrão e a mensuração da densidade celular (células/mm3) feita com o auxílio de um programa de densitometria ótica. Os resultados histológicos deram suporte à eletrofisiologia. O programa Graph Pad Prism versão 5 Demo foi empregado para as análises estatísticas dos dados. Resultados Foi possível observar redução na camada de corpos celulares do GD no grupo isquemia, confirmado pela análise estatística (P Sham (569755,5 ± 12092,51). Quanto ao PE analisado, o grupo isquemia (contralateral: 4,96 ± 0,28; ipsilateral: 4,65 ± 0,36) apresentou valores de componente DC estatisticamente (P Sham (6,15 ± 0,29). Por outro lado, o parâmetro DE aponta para aumento estatístico (P Sham . Conclusão A indução de isquemia unilateral causou sérias alterações eletrofisiológicas e histológicas em regiões remotas ao insulto. Embora existam consideráveis relatos de mesmo caráter na literatura, existem poucas discussões sobre a origem bem como das consequências geradas por tais insultos.

Palavras-chaves: Atividades não sinápticas, Epilepsias, Oclusão da Artéria Cerebral Média

Resumo: 09.009

DESEMPENHO DE RATAS LACTANTES NO TESTE DE PREFERÊNCIA AOS FILHOTES

Autores 1OLIVEIRA, L. G. M.

1, MARTHOS, G. C. P.

1, MATOSO, D. E. C.

1, ÁVILA, M. A. P.

1, GIUSTI-

PAIVA, A. 1, VILELA, F. C.

1 ICB-Departamento de Ciências Fisiológicas - Unifal-MG

Apoio Financeiro: Fapemig, Capes, Finep.

Resumo Introdução Alterações fisiológicas que ocorrem principalmente no final da gestação são responsáveis pelo aparecimento do comportamento materno e por suprimir outros comportamentos, como por exemplo, o comportamento sexual. Contudo, o perfil de preferencia aos filhotes não é bem estabelecido durante o período de lactação. Objetivos Verificar a preferência aos filhotes de ratas lactantes durante o período de lactação. Código de Experimentação Animal CEUA 498/2013 Código de Experimentação Humana Métodos Para avaliação da preferência aos filhotes, foram utilizadas ratas lactantes (n=6) com ninhadas padronizadas (4 machos e 4 fêmeas) a partir do 2º dia de lactação (2ºDL). Foi utilizada uma arena com dimensões de 50 cm de largura por 100 cm de comprimento por 50 cm de altura, e com cantos arredondados, contendo 2 zonas, diametralmente opostas, com 20 cm x 30 cm que permitiam apenas contato olfativo e visual com os filhotes ou com um rato macho sexualmente experiente que foram colocados em gaiolas do lado externo da arena. As ratas lactantes foram colocadas 15 min antes do início do experimento para habituação com o aparato sem a presença das iscas. As iscas foram então colocadas em suas respectivas zonas e as lactantes a serem testadas foram colocadas individualmente no centro da arena e observadas por 20 minutos. Foram avaliados os seguintes parâmetros: tempo de permanência nas zonas de incentivo dos filhotes (ZIF) e do macho (ZIM), frequência de visitas a cada ZI (número de vezes que o animal entra com as quatro patas na ZIF ou ZIM). Os experimentos foram realizados na fase escura do ciclo e durante os 21 dias de lactação. Todos os procedimentos foram previamente aprovados pelo comitê de ética em uso de animais (498/2013). Resultados O tempo de permanência na ZIF no 2º DL foi de 515.40±63.91s, que foi reduzido a partir do 7ºDL para 326.20±90.88s (p Conclusão A partir da primeira semana de lactação ocorreu um decréscimo na motivação da preferencia pelo filhote e um aumento da preferência pelo macho adulto. Esta alteração comportamental pode estar relacionada com a redução do comportamento materno e com o aumento da expressão de outros comportamentos.

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Palavras-chaves: comportamento materno, filhotes, lactação

Resumo: 09.010

PAPEL DOS RECEPTORES OPIÓIDES μ E κ DA SUBSTÂNCIA CINZENTA PERIAQUEDUTAL NA SELEÇÃO DE COMPORTAMENTOS MATERNO E PREDATÓRIO

Autores 1,2

KLEIN, M. O. 1, CRUZ, A. D. M.

1, FELICIO, L. F.

1 Departamento de Patologia - FMVZ-USP,

2

Departamento de Farmacologia - ICB-USP

Apoio Financeiro: FAPESP (2010/06774-0).

Resumo Introdução Opióides interferem na expressão do comportamento materno e a substância cinzenta periaquedutal rostro-lateral (PAGrl) tem papel importante na seleção de comportamentos materno e predatório. Objetivos O objetivo deste trabalho foi determinar o papel dos receptores opióides μ e κ da PAGrl na seleção dos comportamentos materno e de caça predatória durante a lactação. Para isso, foram realizados 4 experimentos com ratas Wistar lactantes com cânula guia implantada na PAGrl (CEUA-FMVZ-USP 1960/2010). Código de Experimentação Animal CEUA-FMVZ-USP 1960/2010 Código de Experimentação Humana Métodos Exp.1: Significado comportamental da ativação na PAG de receptores μ e κ e morfina. No 5º dia de lactação, 30 minutos após a injeção das drogas, as ratas foram expostas a 8 filhotes e 5 baratas simultaneamente e seu comportamento foi analisado durante 30 min; grupos: MOR n=13 (7,9nmol de sulfato de morfina), μ n=12 (10nmol DAMGO), κ n=12 (10nmol U69593), CS n=10 (0,6μL de solução salina). Exp.2: Análise comportamental do bloqueio μ e κ na presença de morfina; grupos: MOR n=13 (7,9nmol), NμM n=11 (10nmol CTAP + 7,9nmol morfina), NκM n=12 (10nmol nor-binaltorfimina + 7,9nmol morfina), CS n=10. O experimento seguinte foi desenhado para avaliar o papel da transmissão opioidérgica endógena nesse contexto. Exp.3: Seleção comportamental frente a injeção de antagonistas dos receptores μ e κ opióides na PAGrl; grupos: Nμ n=12 (10nmol CTAP), Nκ n=11 (10nmol nor-binaltorfimine), CS n=10. Exp.4: Avaliação da ativação dos receptores opióides μ e κ nos 8 diferentes grupos. Para tal foram usados anticorpos conformação-específica para detecção dos receptores ativados na PAGrl. One-way ANOVA seguido do Teste de Tukey, p≤0,05. Resultados Exp.1: não houve diferenças significativas nos parâmetros predatórios, entretanto o grupo MOR apresentou prejuízo do

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comportamento maternal comparado ao CS e κ (latência para busca dos filhotes CS: 331,7±206,8; MOR: 1307±199,5*; μ: 673,9±246,1; κ: 412,7±161,5). Exp.2: o bloqueio do receptor opióide μ na presença de morfina (NμM) prejudicou a expressão do comportamento predatório comparado aos grupos MOR e CS (n.º de baratas capturadas CS: 3,6±0,6; MOR: 3,8±0,5; NμM: 1,1±0,6*; NκM: 2,2±0,7). Todos os grupos que receberam morfina tiveram prejuízo da expressão do comportamento materno em relação ao CS (latência para busca dos filhotes CS: 488,8±236,9; MOR: 1429±180,3*; NμM: 1484±212,3*; NκM: 1456±229,7*). Exp.3: houve prejuízo da expressão da caça predatória nos animais do grupo Nμ, enquanto que os animais do grupo Nκ tiveram esse comportamento facilitado (latência para captura das baratas CS: 1035±248,8; Nμ: 1434±168,5*; Nκ: 407,8±163,0*). Exp.4: a morfina ativou significativamente mais receptores μ e κ na PAGrl em relação à ativação do CS (receptor μ – CS: 100%; MOR: 214,8%*; μ: 116,0%; κ: 112,2%; receptor κ – CS: 100%; MOR: 193,7%*; μ: 138,7%; κ: 123,3%), a injeção de antagonistas opióides na presença de morfina reverteu a ativação causada pela morfina em relação ao CS (receptor μ - CS: 100%; MOR: 214,8%*; NμM: 135,9%; NκM: 96,97%; receptor κ - CS: 100% MOR: 193,7%*; NμM: 97,22%; NκM: 119,5%), e a injeção do antagonista κ causou uma maior ativação do receptor μ no grupo Nκ comparado ao CS e Nμ (receptor μ CS: 100%; Nμ: 75,5%; Nκ: 140,4%*). Conclusão Portanto, a morfina parece agir em mais de um tipo de receptor opióide simultaneamente na PAGrl para causar prejuízo ao comportamento materno, enquanto que a ativação endógena do receptor μ parece ser fundamental para a exibição do comportamento de caça predatória.

Palavras-chaves: comportamento materno, comportamento predatório, seleção comportamental

Resumo: 09.011

ESTUDO DO PAPEL DA VIA NO-GMPC NA NEUROINFLAMAÇÃO INDUZIDA PELO VENENO DA ARANHA Phoneutria nigriventer em CEREBELO DE RATO.

Autores

1CUNHA, W. F.

1, SOUZA, J. P. S.

1, Rapôso,C.

1,2, NUNES, A. K. D. S.

2, PEIXOTO, C. A.

3,

KALAPOTHAKIS, E. 1, CRUZ-HÖFLING, M. A.

1 Departamento de Histologia e Embriologia -

UNICAMP, 2 Departamento de Entomologia - CPqAM,

3 Departamento de Farmacologia - UFMG

Apoio Financeiro: CAPES/CNPq/FAPESP/FACEPE/FAEPEX-UNICAMP

Resumo Introdução A via óxido nítrico-guanilato ciclase solúvel-monofosfato de guanosina cíclico (NO-GCs-GMPc) tem sido reconhecida como mediadora de fenômenos neuropatológicos em condições como epilepsia, derrame cerebral e desordens neurodegenerativas. Nessas condições, a via NO-GMPc pode contribuir para a morte celular excitotóxica e dano celular por neuroinflamação. Por outro lado, tem sido demonstrado que o acúmulo de AMPc e GMPc pode inibir a inflamação protegendo os tecidos contra danos causados por esse processo. O veneno da aranha Phoneutria nigriventer (PNV) induz permeabilização da barreira hematoencefálica e neuroinflamação, entretanto pouco se sabe sobre os mecanismos mediadores desses efeitos. Objetivos Investigar a participação da via NO-GCs-GMPc na expressão de proteínas marcadoras de gliose reativa, neuroinflamação, uso do cálcio com envolvimento de astrócitos, micróglia e neurônios no cerebelo de ratos em resposta à presença

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sistêmica do PNV. O estudo também tem como objetivo usar o veneno como ferramenta para esclarecer o papel da via NO-GMP no processo de neuroinflamação. Código de Experimentação Animal Protocolo 2523-1 Código de Experimentação Humana Métodos (CEUA/IB/UNICAMP; Protocolo 2523-1): Ratos (Rattus norvegicus) Wistar machos (6 semanas, 200-280 g) foram divididos em 7 grupos (n = 5/grupo) e tratados (i.p.) com inibidor de GCs (ODQ, 10 mg/Kg), inibidor de nNOS (7-nitroindazole-7Ni, 40 mg/Kg), doador de NO (nitroprussiato de sódio-NTP, 3 mg/Kg) ou inibidor de PDE5 (phosphodiesterase tipo 5, sildenafil, 10 mg/Kg), 30 minutos antes da injeção sistêmica (i.v.) do PNV (0,85 mg/ml). Solução salina (0,9%, i.v.), DMSO e PNV sozinhos foram usados como controle. Uma e cinco horas após a administração do PNV, os animais foram sacrificados e os cerebelos, dissecados e processados para as técnicas de imunofluorescência e western blotting para as proteínas GFAP, Iba-1, TNF-α, IFN-γ, calbindina e sGC. Os tempos foram definidos em função da condição clínica severa (1 hora) e início de recuperação dos animais (5 horas). Resultados O PNV aumentou a expressão de GFAP, Iba-1, IFN-γ;, calbindina e sGC, em relação ao controle salina, indicando ativação de astrócitos e microglia, neuroinflamação e aumento de Ca2+ intracelular. A inibição de sGC pelo ODQ intensificou os efeitos do PNV, exacerbando a expressão de GFAP, Iba-1 e IFN-γ;, indicando que o veneno pode agir inibindo a via GCs-GMPc. O acúmulo de GMPc induzido pelo sildenafil inibiu os efeitos do PNV, diminuindo a expressão de GFAP, Iba-1, IFN-γ, TNF-α e calbindina, confirmando a hipótese de que o veneno inibe a via GCs-GMPc. Conclusão O acúmulo de GMPc pode estar relacionado a provável atividade neuroprotetora durante o envenenamento por P. nigriventer, fato que requer comprovação. A via GCs-GMPc pode ser inibida pelo PNV, induzindo as reações gliais e neuroinflamação. O PNV parece ser um instrumento para modular a via GCs-GMPc e pode ser um modelo in vivo útil para estudos sobre a regulação da glia.

Palavras-chaves: Aranha Armadeira, Astrócito, Calbindina, Micróglia, Vias de Sinalização

Resumo: 09.012

Alterações moleculares em gliomas avaliadas através do sequenciamento em larga escala de mRNAs associados a polirribossomos

Autores 2LUPINACCI, F. C. S.

2, ROFFÉ, M.

3, FERREIRA, E. N.

2, MARTINS, V. R.

3, CARRARO, D.

2,

HAJJ, G. N. 2 Biologia celular e molecular - Acccc,

3 Oncogenética molecular - Acccc

Apoio Financeiro: FAPESP

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Resumo Introdução O glioblastoma (GBM) está entre os tipos tumorais mais agressivos e de menor resposta a agentes quimioterápicos, deste modo, compreender melhor o comportamento destes tipos tumorais pode ajudar a desenvolver novos tipos de tratamento para esta doença. Atualmente, muitos projetos de larga-escala buscam definir padrões gerais de expressão gênica baseados em técnicas de sequenciamento ou em “microarrays” de populações de mRNA total. No entanto, essa abordagem fornece pouca informação sobre os mediadores moleculares das alterações tumorais, pois o nível de expressão de mRNAs não necessariamente reflete os níveis de proteínas expressos. Por outro lado, a identificação de mRNAs alvo do descontrole traducional em tumores pode levar ao delineamento de perfis de expressão gênica que melhor reflitam a população de proteínas, definindo vias alteradas durante o processo de tumorigênese do GBM Objetivos Realizar sequenciamento em larga escala de mRNAs associados a polissomos para definir perfis de transcritos preferencialmente traduzidos em GBM. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana Métodos Polissomos foram isolados a partir de lisados da linhagem celular de GBM LN18 através de ultracentrifugação em gradiente contínuo de sacarose 5-47%. RNA total ou das frações polissomais foi extraído com TRIzol e o RNA ribossomal depletado com o kit RiboMinus da Invitrogen. A partir do RNA purificado foram feitas bilbliotecas de cDNA com o kit do Ion Torrent, que foram submetidas a sequenciamento em larga escala no equipamento Ion PGM (Invitrogen). Resultados Células LN18 foram tratadas ou não com BI-D1870, um inibidor seletivo da quinase RSK, envolvida no controle traducional. Fomos capazes de isolar polissomos das células em ambas as condições e isolar 1 μg de RNA total e 0,5 μg de RNA polissomal. A depleção de rRNA teve uma eficiência de 15% para as amostras controle e 1% para as amostras polissomais. Foi realizado o sequenciamento pelo Ion PGM com sucesso, com 84% de beads aneladas e um total de 36% de sequências lidas, com 3.163.212 de leituras no total. Obtivemos mRNAs diferencialmente traduzidos em resposta ao tratamento com o inibidor de RSK. Conclusão Fomos capazes de estabelecer com sucesso a técnica de sequenciamento em larga escala de mRNAs polissomais e observar mRNAs diferencialmente traduzidos. Esses resultados não somente nos permitirão definir perfis de expressão que se correlacionem com caracteristicas tumorais, mas também orientarão a descoberta de proteínas com expressão alterada que poderiam ser importantes mediadores de processos tumorais.

Palavras-chaves: Polissomos, Câncer, Gliomas, Translatômica

Resumo: 09.013

INFLUÊNCIA DA EXPOSIÇÃO CRÔNICA E PASSIVA DA FUMAÇA DO CIGARRO NAS ARTÉRIAS BASILAR E CEREBRAL MÉDIA DE RATOS

Autores

1ROBELLO, E. C.

1, BALESTRA, L.

1, BARROS, A. V. C.

1, LYRA, A. C.

1, MORAIS, M. P.

1,

FROLLI, N. 1, GATTO, L.

1, CUNHA, M. R.

1, SILVA, R. E.

1, FABREGA-CARVALHO, C. A.

1

DEPARTAMENTO DE MORFOLOGIA E PATOLOGIA BÁSICA - FMJ

Apoio Financeiro: CAPES

Resumo Introdução A delgada parede das artérias cerebrais pode ser considerada, naturalmente, um fator de risco a rupturas, quando comparada às demais artérias. Estudos têm demonstrado que fumantes tem maior probabilidade de degradação dos componentes da parede das artérias cerebrais, tornando-as mais delgadas e, portanto, susceptíveis a dilatações e rupturas. Objetivos Comparar diâmetro e espessura das paredes das artérias basilares e cerebrais média de ratos expostos cronicamente à fumaça do cigarro. Código de Experimentação Animal Protocolo nº130/2011 Código de Experimentação Humana Métodos Parecer favorável do Comitê de Ética em Pesquisa da Faculdade de Medicina de Jundiaí: (protocolo nº130/2011). Ratos machos (Rattus norvegicus) com 6 semanas, pesando em média 200 gramas, foram divididos nos grupos, controle (GC, n=10) e tabagista (GT, n=10). Os animais do GT foram expostos, diariamente, por um período de 90 dias, à fumaça de 20 cigarros (alto teor). Os animais do GC foram manipulados nas mesmas condições experimentais do GT, sem exposição à fumaça do cigarro. Findo o período experimental, os animais de ambos os grupos foram sacrificados com overdose de anestésico. Em seguida realizou-se a craniotomia e dissecação do encéfalo. Mesossecções coronais do encéfalo foram embebidas em Tissue-tek® e congeladas. Posteriormente as amostras congeladas e seccionadas no criostato, colocadas em lâminas silanizadas e coradas com HE. Os cortes foram analisados e digitalizados em microscópio (MoticBS210) sob luz normal. Os cálculos estereológicos foram realizados através do programa Motic Images Plus® 2.0. Os valores obtidos foram tratados estatisticamente no programa BioStat 5.0. Resultados As espessuras das paredes das artérias, basilar (AB) e cerebral média (ACM), do GT apresentaram diferenças significativas em relação ao GC. Na espessura de ambas as artérias, houve uma diminuição no GT quando comparado ao GC (AB: GT=12,8±1,77/ GC=18,76±2,33-p < 0,01 e ACM: GT=20,42±3,00/GC=11,62±2,54-p < 0,01); o mesmo resultado foi observado na túnica média (AB: GT=6,64±0,77/GC=11,92±1,42-p < 0,01 e ACM: GT=7,42±3,02/ GC=13,04±1,66-p < 0,01). Entretanto, na comparação da espessura da túnica adventícia, houve um aumento no GT em relação ao GC (AB: GT=7,26±2,78/GC=3,9±1,46-p < 0,05 e ACM: GT=7,3±3,49/GC=3,56±0,93-p < 0,05). Aumento no GT também foi encontrado na túnica íntima (AB: GT=1,26±0,63/GC=0,4±0,29-p < 0,05 e ACM: GT=1,06±0,51/GC=0,38±0,19-p < 0,05). Não houve diferença significativa do diâmetro das artérias estudadas entre os grupos.

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Conclusão O aumento das espessuras das túnicas adventícia e íntima das artérias, basilar e cerebral média, e a diminuição da túnica média permitem inferir a seguintes significados funcionais: 1) a ação da nicotina circulante provocou resposta inflamatória endotelial levando ao aumento de sua espessura; 2) em razão dos prováveis altos níveis de CO2 circulantes houve hipóxia da túnica média promovendo diminuição do volume das células musculares lisas; 3) o aumento da túnica adventícia se deu pela provável deposição de colágeno como resposta local de reestruturação. Conclui-se que a exposição crônica à fumaça passiva do cigarro provoca diminuição na espessura da parede das artérias encefálicas, o que supostamente leva ao aumento considerável da fragilidade de sua parede, tornando-as susceptíveis a dilatações e rupturas.

Palavras-chaves: ARTÉRIA BASILAR, ARTÉRIA CEREBRAL MÉDIA, COLÁGENO, NICOTINA, TABAGISMO PASSIVO

Resumo: 09.014

Role of the Interaction between Prion Protein and Stress-inducible Protein 1 in the Self-renewal in vitro of Neural Precursors from Adult Brain

Autores 1DA SILVA, C. M. C.

2, SANTOS, T. G.

2, MARTINS, V. R.

1, LOPES, M. H.

1 Cell and

Developmental Biology - ICB, 2 Cell and Developmental Biology - CIPE

Apoio Financeiro: FAPESP and NAP/USP

Resumo Introdução The ocurrence of neurogenesis in adult brain was disbelieved for several years. Nowadays, it is recognized the existence of neurogenic niches in mammalian adult brain, sites where new neurons are generated throughout life, being the best studied the ventricular-subventricular zone (V-SVZ) and subgranular zone (SGZ). These niches harboring adult multipotent neural stem cells (adNSCs) that give rise to new neurons and glial cells. While science has evolved into acceptance of neurogenesis, important studies have reported the cellular prion protein (PrPC), a membrane glycoprotein highly expressed in the central nervous system (CNS) and widely conserved during evolution, as an important factor in neurogenesis and biology of adNSCs. Steele and colleagues reported the PrPC as important factor in neurogenesis during development and adulthood. Moreover, our group identified as PrPC ligand, the co-chaperone called stress-inducible protein one (STI1), which interaction promotes neuritogenesis, neuroprotection, formation of short-term memory (STM), long-term memory (LTM) consolidation and self-renewal of fetal neural stem cells. Given these findings, it becomes important to know if the PrPC-STI1 complex also acts similarly in adNSCs. This study provide a better understanding of mechanisms that mediate neurogenesis and plasticity in the adult CNS, as well as novel strategies for the treatment of neurological disorders. Objetivos To evaluate the role of the PrPC-STI1 complex in the self-renewal, proliferation and differentiation of adNSCs from V-SVZ murine brain. Código de Experimentação Animal 025/08

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Código de Experimentação Humana Métodos Neurosphere primary cultures of adNSCs derived from the V-SVZ from wild-type adult animals ( PrPn +/+) or knockout ( Prpn 0/0) for PrPC have been performed in the presence of absence of recombinant STI1 in self-renewal or proliferation assays. This study was approved by Animal Ethic Committe from A.C. Camargo Hospital (protocol 025/08). Resultados Preliminary results indicate that STI1 is able to promote self-renewal and proliferation in murine adNSCs in a PrPC-dependent manner. Conclusão Additional experiments should be performed to confirm the participation of PrPC-STI1 complex upon proliferation and self-renewal of adNSCs.

Palavras-chaves: PrPC, STI1, Neural stem cells, Neural precursors, Self-renewal

Resumo: 09.015

Resposta de Neurocircuitos da Resposta de Estresse à Ingestão Crônica e Retirada do Álcool

Autores 1WSCIEKLICA, T.

1, ANDRADE, J. S.

1, VIANA, M. D. B.

1, SPADARI, R. C.

1, CÉSPEDES, I. C.

1

Biociências - UNIFESP

Apoio Financeiro: CNPq

Resumo Introdução A dependência de álcool desenvolve-se a partir de características neurobiológicas e ambientais que promovem a caracterização de diversos fenótipos para a dependência. Dos fatores ambientais, os fatores estressantes são os mais importantes. Dos fatores biológicos, os mecanismos neurais envolvidos no processo de dependência de álcool dividem-se de forma geral em duas categorias principais. Primeiro, de forma similar a outras drogas de abuso, o álcool pode ativar as vias cerebrais da recompensa levando a um reforço positivo pela busca e uso do álcool. Secundariamente, o álcool pode suprimir emoções negativas que resultam do estresse ou da retirada do álcool em si (ansiedade e disforia), definindo assim o cenário para o uso do álcool como reforço negativo. Objetivos Analisar parâmetros comportamentais nos testes de Labirinto em Cruz Elevado (LCE) e Campo Aberto (CA), assim como a imunorreatividade à proteína fos nos circuitos neurais associados ao estresse, em ratos submetidos à ingestão crônica de álcool e sua retirada em comparação a um estímulo de estresse psicogênico.

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Código de Experimentação Animal 0089/12 Código de Experimentação Humana Métodos 32 ratos Wistars adultos machos foram divididos em quatro grupos: Controle (CO); estresse por Restrição (R) durante 3 dias, 30min/dia ao final da manhã; Álcool (A), com ingestão oral crônica e crescente através do uso do paradigma das duas garrafas; Retirada (RA) após ingestão crônica de álcool, retirada por três dias. Resultados No teste do CA o grupo A apresentou no parâmetro Rearing aumento em relação aos demais grupos e no parâmetro Grooming aumento no grupos R e RA em relação aos grupos CO/A. Na análise no LCE a percentagem de entradas no Braço Aberto no grupo R apresentou diminuição quando comparado aos demais, e na percentagem de permanência no Braço Aberto, o grupo R apresentou diminuição quando comparado ao A. No parâmetro Grooming neste teste, o grupo R apresentou aumento quando comparado aos demais grupos. O número de neurônios Fos -ir no Núcleo Paraventricular do Hipotálamo foi menor no grupo CO quando comparado com os demais; no Núcleo Mediano da Rafe houve aumento no grupo R quando comparado ao grupo CO, e RA quando comparado ao grupo A; no Núcleo Intersticial da Estria Terminal houve aumento do grupo R e RA quando comparado aos grupos CO/RA; na Amígdala Central onde houve diminuição entre CO e os demais grupos (* p < 0,05 ANOVA com pós teste de Newmam-Keuls). Conclusão Nas áreas associadas à resposta central de estresse analisadas, o NPV e o AMIce são ativados pela ingestão crônica de álcool assim como em sua retirada, de forma equivalente a um potente estressor crônico psicogênico como a restrição. O MRN ativou-se mais expressivamente no grupo retirada, e no grupo álcool de forma equivalente ao estresse por restrição. Já o BNST ativou-se de forma significativamente maior no período de retirada do álcool, maior ainda que a ativação promovida pelo estressor psicogênico aplicado. Estas duas últimas áreas podem assim estar mais envolvidas na recaída à ingestão de álcool após sua retirada e as duas primeiras áreas também envolvidas nos efeitos promovidos pelo álcool durante a sua ingestão crônica. Observa-se nos testes comportamentais a ausência de efeitos ansiogênico e locomotor nos grupos álcool e retirada, porém com o esperado efeito ansiogênico no grupo restrição nos parâmetros avaliados.

Palavras-chaves: Álcool , alcoolismo, CRF, Ingestão , Retirada

Resumo: 09.016

Administração crônica de cafeína melhora memória de reconhecimento em ratos adolescentes: papel das neurotrofinas e do circuito sináptico.

Autores 1ARDAIS, A. P.

1,2, BORGES, M. F.

1, ROCHA, A.

1, SALLABERRY, C.

1, SOUZA, D. O. G. D.

1,

PORCIÚNCULA, L. D. O. 1 Bioquímica - UFRGS,

2 Graduação - UFCSPA

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES.

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Resumo Introdução A cafeína é a substância psicoativa mais consumida mundialmente. Nos últimos anos observou-se na população adolescente um aumento no consumo de bebidas energéticas, as quais contém quantidades elevadas de cafeína. Os efeitos que essa substância pode causar nesse período do desenvolvimento cerebral ainda são desconhecidos. Porém, já existem relatos na literatura alertando para possíveis efeitos colaterais do consumo de quantidades elevadas de cafeína nesse período do desenvolvimento. Objetivos Avaliar o efeito do consumo de diferentes doses de cafeína sobre a memória de reconhecimento e o imunoconteúdo do BDNF, receptor TrkB , GFAP e SNAP-25 no córtex e hipocampo. Código de Experimentação Animal 20332 Código de Experimentação Humana Métodos Ratos machos (CEUA - UFRGS, Protocolo nº 20332) de 28 dias consumiram água ou cafeína (0.1, 0.3, ou 1.0 g/L) durante 25 dias. A memória de reconhecimento foi avaliada pela tarefa de reconhecimento de objetos (n= 10-13). Após a tarefa comportamental, os animais foram eutanasiados ou perfundidos para análises do imunoconteúdo de BDNF, TrkB, GFAP e SNAP-25 (n=7-10) ou imunohistoquímicas para GFAP e SNAP-25 do córtex e hipocampo (n=5). A análise estatística da tarefa de reconhecimento de objetos utilizada foi o teste t pareado e de imunoblotting e imunohistoquímica ANOVA de uma via seguida de comparação múltipla de Newman-Keuls. Resultados Animais tratados com cafeína 0.3 e 1.0g/L apresentaram melhor desempenho na tarefa de reconhecimento de objetos quando comparados com animais que receberam água (t=2.92 e t=3.866, respectivamente; p Conclusão Os resultados sugerem que a cafeína melhora a memória de reconhecimento de ratos adolescentes, e que este efeito envolveu modificações em proteínas sinápticas.

Palavras-chaves: Cafeína, Neurotrofinas, memória, proteínas sinápticas

Resumo: 09.017

EFEITO DA ISQUEMIA SOBRE A REGIÃO DO GIRO DENTADO NO HIPOCAMPO DE RATO

Autores 1CARDOSO, J. P.

1, FERREIRA, K. A.

1, VIEIRA, A. P. F.

1, SILVEIRA, G. A. D.

1, ALMEIDA, A.

C. G. 1, RODRIGUES, A. M.

1, DUARTE, M. A.

1 DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA DE

BIOSSISTEMAS - UFSJ

Apoio Financeiro: Fapemig; UFSJ; CNPq; Capes.

Resumo Introdução O termo epilepsia se refere a um distúrbio da atividade cerebral caracterizada pela ocorrência periódica e espontânea de atividade elétrica altamente sincronizada, acompanhada de manifestações comportamentais (Cult.:R. IMAE. 5(11):48, 2004). As doenças cerebrovasculares estão entre as causas mais comuns de epilepsia sintomática contabilizando 11% dos casos (Epilep. 48(2):13, 2007). Tem sido sugerido que mais de 80% de todos os Acidentes Vasculares Encefálicos resultem de danos isquêmico na área da Artéria Cerebral Média (ACM). O modelo experimental de oclusão dessa artéria em ratos, além de ser o mais utilizado para estudos de lesão isquêmica é também o mais relevante clinicamente. Em roedores, o hipocampo está situado dentro da região de injuria isquêmica por ser perfundido pela Artéria Cerebral Posterior que pode ser bloqueada pela oclusão da ACM. Objetivos Verificar o efeito eletrofisiológico e histológico da oclusão da ACM sobre o Giro Dentado do hipocampo de ratos após 30 dias do insulto isquêmico. Código de Experimentação Animal Protocolo 30/2011-CEUA/UFSJ Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizados seis animais para os grupos experimentais ISQ-E (lado esquerdo: ipsilateral à lesão) e ISQ-D (lado direito: contralateral à lesão) e 12 para o grupo SHAM (controle), e os valores apresentados são referentes à média ± erro padrão da média, respectivamente. O modelo de oclusão da ACM já descrito (Stroke. 20. 84-91. 1989), com tempo médio de oclusão de duas horas, foi utilizado para indução de isquemia em ratos Wistar machos, com 63 dias de idade e peso em torno de 270 gramas. O registro do Potencial Elétrico (PE) não sináptico realizado segundo (Underlying Mechanisms of Epilepsy. 189-218. 2011)utiliza amplitude da componente DC (milivolts) e Duração dos Eventos (segundos)como parâmetros. As marcações histoquímicas pelo método de Nissl foram realizadas de conforme procedimento padrão. Os métodos foram avaliados 30 dias após a OACM. Foram utilizados os testes D'Agostino & Pearson para normalidade e Tukey para análise de variância seguidos de um pós-teste, ao nível de significância de 5%. Resultados Os resultados da quantificação celular (células/mm³) não apontam para diferenças estatísticas significativas entre o grupo controle (784.402±22560) e os grupos experimentais (ISQ-E 790.052±39810; ISQ-D 703.656±28110). Com a análise do registro do PE foi possível observar que houve redução na amplitude da componente DC, tanto no ISQ-E (5.033±0,2216) quanto ISQ-D (4.766±0,2964) em relação ao SHAM (6.038±0,2622). Houve aumento na Duração dos Eventos no lado ipsilateral (19,10±1,584) e no grupo SHAM (16,31±0,5112) em relação ao contralateral (11,45±0,9130). Conclusão Foi possível perceber claramente que o lado contralateral apresenta respostas similares àquelas do lado ipsilateral à lesão isquêmica, mesmo não sendo diretamente atingido por ela. Provavelmente após 30 dias do insulto isquêmico a neurogênese tenha compensado a apoptose que geralmente ocorre em tecidos danificados. Isso explicaria os resultados obtidos nesse trabalho para a densidade celular no Giro Dentado.

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Palavras-chaves: Artéria Cerebral Média, Epilepsia, Giro Dentado

Resumo: 09.018

A via NO-GCs-GMPc-PKG e o veneno de Phoneutria nigriventer em astrócitos

Autores

1RAPOSO, C.

2, SIMÕES, G. F.

2, INACIO, R. F.

2, OLIVEIRA, A. L. R.

3, NUNES, A. K. S.

4,

KALAPOTHAKIS, E. 1, CRUZ-HÖFLING, M. A. D.

1 Departamento de Histologia e Embriologia, IB

- UNICAMP, 2 Departamento de Biologia Estrutural e Funcional, IB - UNICAMP,

3 Laboratório de

Ultraestrutura - CPqAM/FioCruz, 4 Departamento de Farmacologia, ICB - UFMG

Apoio Financeiro: FAPESP/CNPq/CAPES/FACEPE/FAEPEX-UNICAMP

Resumo Introdução O veneno da aranha Phoneutria nigriventer (PNV) induz quebra da barreira hematoencefálica, gliose reativa e neuroinflamação em ratos, quando injetado sistemicamente. Os mecanismos envolvidos e o papel dos astrócitos na neurotoxicidade do PNV são obscuros. Vias mediadas pelo monofosfato de guanosina cíclico (GMPc) parecem regular o fenótipo glial reativo e a expressão de genes pró-inflamatórios e tem sido descrito que o acúmulo de GMPc exerce papel anti-inflamatório e protetor. Objetivos O objetivo do presente trabalho foi investigar a via óxido nítrico (NO)-guanilato ciclase solúvel (GCs)-GMPc-proteína quinase dependente de GMPc (PKG) na ativação de astrócitos induzida pelo PNV. Código de Experimentação Animal CEUA/UNICAMP; Protocolo 2523-1 Código de Experimentação Humana Métodos Células (3 x 104) de cultura primária de astrócitos corticais de ratos Wistar machos (0-2 dias) foram lançadas em placas de 24 wells. Após 95% de confluência, as células foram incubadas com inibidor de GCs (ODQ, 1 mg/ml), inibidor de PKG (KT5823, 2 µmol/L), doador de NO (nitroprussiato de sódio, NTP, 0,05 mg/ml), inibidor de PDE5 (Sildenafil, 0,2 mg/ml) ou análogo de GMPc (8’-Br-GMP, 50µmol/L), simultaneamente ao PNV (14,6 mg/ml). PNV apenas, DMSO e DMEM foram usados como controles. Após 5 hs (experimentos em triplicata), as células foram fixadas e foi feito imunofluorescência para avaliar a expressão de GFAP, PKG, NFκB (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells), TNF-α e Cx43 (Connexin-43). A quantificação da reação foi através do programa Image J 1.38 e a análise estatística foi feita pelo GraphPad Prism 5.0. Resultados

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O PNV aumentou GFAP, Cx43 e TNF-α e diminuiu PKG e NFκB, em relação ao controle DMEM; a inibição da PKG pelo PNV foi mantida após tratamento com ODQ e KT5823 (p≤0.01), e revertida pós-tratamento com NTP, sildenafil e 8-Br-GMP, sugerindo que o PNV pode inibir a via NO-GCs-GMPc-PKG. O PNV aumentou GFAP (gliose reativa), que permaneceu alto após os tratamentos com os inibidores ODQ e KT5823, relativo ao DMEM (p≤0.05); porém os tratamentos com NTP, sildenafil e 8-Br-GMP diminuíram a expressão do GFAP, sugerindo que a ativação da via NO-GCs-GMPc-PKG diminui a reação astrocitária. O PNV aumentou Cx43, sugerindo que o envenenamento aumenta a comunicação entre astrócitos. Curiosamente, o aumento de Cx43 pelo PNV foi abolido pelo tratamento com KT5823 sugerindo interferência da PKG. Outros moduladores da via não interferiram na expressão da Cx43. O aumento de TNF-α e a diminuição de NFkB pelo PNV não foram influenciados pelos moduladores da via. Conclusão A via NO-GCs-GMPc-PKG modula alguns dos efeitos tóxicos do PNV em astrócitos in vitro, uma vez que o acúmulo de GMPc pelo sildenafil e o análogo de GMPc inibem os efeitos do PNV, enquanto o inibidor de GCs, ODQ, e o inibidor de PKG, KT5823, mantêm os efeitos. É possível que o PNV aja através da PKG na modulação das junções comunicantes. O veneno de P. nigriventer pode ser ferramenta potencial para investigar vias que modulem a atividade de astrócitos em processos de injúria e degeneração no SNC.

Palavras-chaves: Astrogliose, Via de sinalização, PKG

Resumo: 09.019

EFEITO DA ASSOCIAÇÃO DO ÁLCOOL E CIGARRO SOBRE A PROLIFERAÇÃO CELULAR HIPOCAMPAL E MEMÓRIA EM RATOS

Autores

1HUF, F.

3, BANDIERA, S.

3, SCHNEIDER, R.

3, QUINTEROS, D.

3, PULCINELLI, R. R.

3,

CLARIMUNDO, V. S. 3, SANTOS, C. F.

3, WIECZOREK, M. G. G.

1, FERNANDES, M. D. C.

2,3,

GOMEZ, R. 1 Patologia - UFCSPA,

2 Farmacologia - UFRGS,

3 Laboratório de Álcool e Tabaco -

UFRGS

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, UFRGS, UFCSPA

Resumo Introdução Álcool e cigarro são frequentemente utilizados em associação e representam risco para a saúde por seus efeitos nocivos sobre sistemas periféricos e sistema nervoso central (SNC). Estudos mostram que álcool ou nicotina, isoladamente afetam a neurogênese hipocampal. Dentre as populações de neurônios hipocampais, as células granulares do giro denteado (GD) apresentam a propriedade de neurogênese pós-natal em cérebros de roedores a primatas. A exposição crônica ao álcool ou ao cigarro pode aumentar ou diminuir a neurogênese no GD de indivíduos adultos, indicando que esse fenômeno pode ser importante para a função hipocampal, interferindo sobre mecanismos de memória entre usuários. Objetivos Avaliar a proliferação celular no hipocampo de ratos expostos cronicamente ao álcool, à fumaça do cigarro ou sua associação, bem como avaliar a memória de trabalho e memória de longa duração.

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Código de Experimentação Animal CEUA-UFRGS, # 21876 Código de Experimentação Humana Métodos (CEUA-UFRGS, # 21876). Ratos Wistar, machos-adultos (280 a 300g) foram divididos em grupos a) TAB (n = 10): expostos diariamente à fumaça da queima de 6 cigarros, por 2 h, em câmara hermética com circulação de ar controlada (10 L/min), 2 vezes ao dia; b) ALC (n = 10): administrados com etanol, 2g/kg (20% w/v), via gavagem (VO), 2 vezes ao dia (9 e 14h), mantidos por 2 h em câmara com circulação de ar ambiental controlada; c) ALCTAB (n = 10): administrados com etanol (2g/kg),VO, e imediatamente após expostos à fumaça de 6 cigarros, por 2 h, 2 vezes ao dia e d) CTR (n = 10), administrados com salina, VO, mantidos por 2 h em câmara com circulação de ar ambiental. No 25º dia do início do experimento foram avaliados para memória de trabalho no teste de reconhecimento espontâneo de objetos e no 28º e 29º para memória de longa duração no teste da esquiva inibitória. No 34º dia do início do experimento os ratos foram anestesiados com cetamina (50 mg/kg) e xilazina (10 mg/kg) após 2 administrações de 100 mg/kg de 5-bromo-2-deoxyuridine, via intraperitoneal, 24 e 2 h antes do sacrifício. Iniciou-se então a perfusão transcardíaca para fixação do encéfalo e posterior inclusão em parafina. Células imunorreativas (cor marrom) foram quantificadas na camada granular e zona subgranular do giro denteado do hipocampo dos ratos. Os resultados foram analisados por análise de variância (ANOVA) de uma via, seguida do teste de Bonferroni para detecção de diferença entre os grupos. Os resultados foram representados como média ± erro padrão, sendo considerados significativos os resultados com P <0,05. Resultados Associação entre álcool e tabaco ou álcool isoladamente reduziram significativamente a proliferação celular do GD de ratos (CTR: 44,7Mais e menos7,8; *ALC: 24,5Mais e menos5,2; TAB: 33,2 Mais e menos 10,9; *ALCTAB: 18,6 Mais e menos 6,0 células imunorreativas; P = 0,006; *diferente de CTR e TAB). Sob nossas condições experimentais álcool, tabaco ou sua associação não afetaram a memória de trabalho (índice de memória (%) - CTR: 56,6Mais e menos7,3; ALC: 57,3Mais e menos12,0 TAB: 50,3 Mais e menos 10,1 e ALCTAB: 68,7 Mais e menos 10,7; P > 0,05) ou a memória de longa duração (índice de memória (%) - CTR: 59,6 Mais e menos 6,2; ALC: 66,2 Mais e menos7,4; TAB: 71,1 Mais e menos 6,2; ALCTAB:75,4 Mais e menos5,3; P > 0,05) Conclusão A associação entre álcool e tabaco reduz em cerca de 60% a proliferação celular do GD, enquanto álcool isoladamente reduz em 40%, indicando efeito deletério pelo uso do álcool ou sua associação sobre o SNC de ratos. Porém, sob as nossas condições experimentais essas drogas não afetaram memória de trabalho ou memória de longa duração.

Palavras-chaves: Álcool , Cigarro , Associação, Neurogenêse , Hipocampal

Resumo: 09.020

Análise da produção de melatonina induzida por LPS em culturas de células nervosas de diferentes regiões encefálicas.

Autores 1TREVIZAN, I. L.

1, TSUBOY, MS

1, MONTANHA, C. C.

1, PINATO, L.

1 Fisioterapia e Terapia

Ocupacional - UNESP

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Apoio Financeiro: FAPESP

Resumo Introdução Em mamíferos a liberação de noradrenalina noturna induz a síntese da melatonina na pineal e desta forma, a existência do pico plasmático de melatonina é traduzida como noite. Este paradigma, antes conhecido como o único que controlava a atividade pineal tem sido complementado nos últimos anos, já que moléculas que sinalizam injúria tais como citocinas pró-inflamatórias, e padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs), podem suprimir a produção de melatonina pela glândula pineal e induzir a síntese desta indolamina por células imunocompetentes. Objetivos Determinar quais células do sistema nervos central (SNC) produzem melatonina e estabelecer as bases moleculares que promovem a essa produção no SNC. Código de Experimentação Animal 064 fl129 livro02/2012 Código de Experimentação Humana Métodos Aprovado no comitê de ética proc 064 fl129 livro02/2012. Foram utilizadas culturas de células primárias a partir de encéfalos de ratos Wistar. Células da glia e neurônios provenientes do córtex e cerebelo foram mantidas em meio de cultura de células (Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) suplementado com SFB 10%, HEPES 25 mM, l-glutamina 2 mM, penicilina 100 U/ml e streptomicina 100 µg/ml em incubador humidificado a 37°C sob 5% CO2. Os Astrócitos da cultura foram identificados pela técnica de imunofluorescência utilizando-se o anticorpo anti-GFAP e a microglia por anticorpo anti-IBA. As células foram desafiadas com LPS (1 ng/ml por 2 horas, 6 ou 12 horas) e as concentrações de melatonina nos meios de culturas foram avaliadas. Resultados No cerebelo, LPS nas concentrações de 30 e 100 ng/mL induziram o aumento do conteúdo de melatonina no meio de cultura de 13,3 ± 1,2 do controle para 29,29 ± 1,45 e 39,6 ±14,0 respectivamente. No córtex somente a dose de 300ng/mL foi capaz de induzir a produção de melatonina pelas células nervosas de 16,4 ± 4,2 do controle para 67,4 ± 15,6 (LPS 300 ng/ml). Conclusão Células do SNC possuem a capacidade de, quando estimuladas por LPS in vitro, passar a produzir melatonina. Apoio Financeiro: Fapesp- proc. JP 2011/51495-4; proc.2012/11909-7.

Palavras-chaves: Neuroinflamação, Neuroproteção, Melatonina, LPS, Citocinas

Resumo: 09.021

O AMBIENTE ENRIQUECIDO REVERTE AS ALTERÇÕES CAUSADAS PELA DESNUTRIÇÃO PRECOCE SOBRE O COMPORTAMENTO ALIMENTAR DE RATOS ADULTOS

Autores

1ISIDRO, M. F.

1, TAVARES, C. E. M.

2, SANTOS, E. K. R.

3, VIEIRA, P. M. F.

3, SILVA, M. C.

4,

Lopes-de-Souza, S. 5, MATOS, R. J. B.

1 PROGRAMA DE PÓS GRADUAÇÃO EM NUTRIÇÃO -

UFPE, 2 Departamento de Ciências Biológicas - UFPE,

3 Núcleo de Nutrição - CAV/UFPE,

4

DEPARTAMENTO DE ANATOMIA - UFPE, 5 Núcleo de Educação Física e Ciências do Esporte -

CAV/UFPE

Apoio Financeiro: FACEPE, CAPES e CNPq

Resumo Introdução A desnutrição durante o período crítico de desenvolvimento tem sido associada à maior risco de doenças crônicas ao longo da vida, como diabetes e obesidade. A programação nutricional promovida pela restrição proteica no período perinatal desencadeia alterações no comportamento alimentar em animais adultos, como por exemplo, hiperfagia e retardo no aparecimento da saciedade, e assim pode favorecer a obesidade. Por outro lado, outro fator ambiental, o ambiente enriquecido (AE) tem-se demonstrado capaz de modular o comportamento alimentar por promover modificações em áreas encefálicas do controle homeostático. Objetivos Assim, avaliaram-se os efeitos a longo prazo da desnutrição proteica perinatal e a influência do ambiente enriquecido sobre o comportamento alimentar de ratos adultos. Código de Experimentação Animal 23076.018667/2012/22 Código de Experimentação Humana Métodos A pesquisa foi aprovada pela Comissão de ética no uso de animais da UFPE sob o número do processo 23076.018667/2012/22. Utilizou-se, 66 ratos machos Wistar, divididos em grupos de acordo com a dieta recebida na gestação e lactação: controle (C, 17% de caseína, n=34) e desnutrido (D, 8% de caseína, n=32), e subdivididos de acordo com a exposição ao AE: controle sem AE (Csae n= 16), controle com AE (Cae, n=18), desnutrido sem AE (Dsae, n=16) e desnutridos com AE (Dae, n=16). Após o desmame, os filhotes receberam dieta padrão e foram expostos ao AE ou gaiola padrão dos 30 até 90 dias de vida. Todos os animais foram pesados regularmente para acompanhamento da evolução ponderal. Aos 30 e 75 dias, foram submetidos ao teste de sequência comportamental de saciedade (SCS), onde após 4 horas de jejum, analisou-se o consumo alimentar e o tempo de alimentação, limpeza e descanso em um período de 1 hora. Dados representados em média em g, ou g/100g de peso corporal, ou percentual ± DP. Para comparação de dois grupos, foi utilizado t-test e para comparações múltiplas o ANOVA two-way seguido do post-hoc de Bonferroni, considerando nível de significância p < 0,05 para as médias dos valores. Resultados As análises das médias dos grupos revelaram na evolução ponderal que a desnutrição provocou uma diminuição no peso ao nascer que persistiu até os 90 dias de vida (C1=6,50±0,61g; D1=5,90±0,47g, p < 0,001; Csae90=334,50±34,44g; Dsae90=299,30±17,37g, p < 0,01). Após a exposição ao AE, aos 80 dias, o grupo Dae recuperou o peso (Cae80=312,60±43,20g; Dae80=289,9±25,31g, p > 0,05). Na análise de SCS aos 30 dias, o grupo D que apresentou peso corporal reduzido (C=87,59±9,75g; D=66,04±7,14g, p < 0,0001) obteve maior ingestão alimentar (C=2,82±0,85g;

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D=3,47±1,36g, p=0,02) e permaneceu mais tempo em alimentação (C=32,16±8,07%; D=38,08±8,07%, p=0,02), demonstrando um retardo no aparecimento da saciedade. Aos 75 dias, após exposição ao AE, os grupos desnutridos continuaram com peso reduzido (Csae=316,5±33,63; Dsae=285,4±33,14, p=0,010; Cae=298,4±48,26; Dae=267,5±19,82, p=0,009), Dsae permaneceu com hiperfagia (Csae=1,79±0,62; Dsae=2,30 ±0,47, p=0,009) e o consumo do grupo Dae retornou ao níveis do controle (Csae=1,79±0,62; Cae=1,88 ±0,53; Dae=2,01±0,55, p > 0,05), nos outros comportamentos não houve diferença (p > 0,05). Conclusão Portanto, a desnutrição proteica perinatal causou redução do peso corporal neonatal até a fase adulta, hiperfagia e retardo no aparecimento da saciedade. A exposição ao ambiente enriquecido foi capaz de atenuar os efeitos da desnutrição sobre o comportamento alimentar, demonstrando ser uma alternativa de prevenção e terapêutica para as doenças crônicas na vida adulta.

Palavras-chaves: ambiente enriquecido, comportamento alimentar, consumo alimentar, programação, sequencia comportamental de saciedade

Resumo: 09.022

COCAÍNA MODULA O TRANSPORTADOR DE GABA VIA ATIVAÇÃO DE RECEPTOR β-ADRENÉRGICO NO CÓRTEX PRÉ-FRONTAL DE CAMUNDONGOS

Autores

1GRIGORIO, I F

1, CARVALHO, M. P

1, SATHLER, M.

1, PECCINALI, N R

2, MANHÃES, A. C.

1,

KUBRUSLY, R. C. C. 1 Departamento de Fisiologia e Farmacologia - UFF,

2 Instituto de Biologia

Roberto Alcantara Gomes (IBRAG) - UERJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq, INCT, PROPPi, PRONEX

Resumo Introdução A cocaína é um psicoestimulante que leva ao desequilíbrio da homeostasia, gerando sintoma clássico como a ansiedade. A transmissão sináptica colinérgica tem sido relacionada à ansiedade, assim como as circuitarias noradrenérgica, gabaérgica as e seus receptores. Objetivos Avaliar os aspectos neuroquímicos relacionados à atividade do sistema GABAérgico após estímulo agudo de cocaína (COC) Código de Experimentação Animal CEUA/065/2012 Código de Experimentação Humana

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Métodos Camundongos de 2, 20, 40, 60 100 e 120 dias pós-natal foram desafiados com uma dose única de COC (10mg/Kg/ip) antes da eutanásia com isofluorano seguida de deslocamento cervical. O córtex pré- frontal foi dissecado e os níveis de AMPc induzidos após a ativação de receptores βadrenérgicos em animais controles ou desafiados com COC foram acumulados na presença de um inibidor de fosfodiesterase (IBMX, 0,5mM) por 30 minutos. A reação foi interrompida com a adição de TCA 10% e os níveis intracelulares de AMPc foram dosados de acordo com o metodo de Guilman. Para a identificação da atividade do transportador de GABA (GAT) foi realizada a captação de [3H]-GABA em aninais expostos à cocaína ou salina. A expressão de receptores βadrenérgicos foi avaliada por imunoblot. Os resultados foram analisados pelo teste ANOVA seguido de pós-teste Bonferroni, expressos como média±EPM, considerando o nível de significância p <0.001 Resultados Na idade de P40 há aumento na captação de 3H-GABA após estímulo com cocaína em relação aos controles (Coc:192,5±11,05 fmol/mg ptn/hora e Basal:122,5±7,50 fmol/mg ptn/hora; n=4). O inibidor de transportador neuronal (NO-711) preveniu a captação de [3H]-GABA após exposição à COC (NO711+COC:131,7±13,52 fmol/mg ptn/hora; n=6; COC:327,5±16,5 fmol/mg/pt/hora, n=4). A Norepinefrina aumentou a captação de [3H]-GABA (NE:606 ± 131 fmol/mg/ptn/hora; n=4; Basal:150±20,30 fmol/mg ptn/hora; n=4). A Norepinefrina e o agonista βadrenérgico Isopoterenol foram capazes de elevar os níveis de AMPc (NE:40,03±2,27 fmol/mg/ptn/hora, n=3; Iso:37,43±4,94 fmol/mg/ptn/hora, n=3; Basal:17,63±0,93 fmol/mg/ptn/hora; n=3). A COC promoveu o aumento na expressão de receptor β1-adrenérgico. O bloqueador de receptores β1-adrenérgicos Metoprolol preveniu o aumento dos níveis de AMPc (Metoprolol+COC:40±2,9 pmol/mg/hora; n=4). O Isoproterenol mimetizou os efeitos da COC (Iso:719±37,50 fmol/mg/ptn /hora, n=4) e o Metoprolol preveniu a captação de [3H]-GABA (COC:355±23.98; Metoprolol+COC:230±28,58 fmol/mg/ptn/hora). O inibidor da PKA H89 preveniu o aumento da captação de [3H]-GABA induzido pelo Isoproterenol (Iso+H89:525,8±68 fmol/mg/ptn/hora, n=3; Iso:756±37 fmol/mg/ptn/hora, n=3). O quelante de Ca2+ intracelular, BAPTA-AM, inibiu a captação de [3H]-GABA após estímulo agudo de COC (BAPTA-AM+COC:58,30±14,36; n=4; COC:316,7±65,06; n=4) Conclusão Os resultados sugerem que a ação da COC na circuitaria noradrenérgica é capaz de modular a funcionalidade do transportador de GABA. O bloqueio dos receptores β1-adrenérgicos, assim como o bloqueio da PKA foram capazes de prevenir o aumento da captação de [3H]-GABA assim como, a retirada de Ca2+. Como os sistemas noradrenérgico e GABAérgico estão relacionados à respostas associadas a geração de ansiedade, intervenções neuroquímicas nestes sistemas representam interesse no papel da cocaína na geração de ansiedade

Palavras-chaves: cocaína, GABA, noradrenalina, córtex cerebral

Resumo: 09.023

SINALIZAÇÃO EXCITATÓRIA DO GABA E A SINAPTOGÊNESE DURANTE A INDUÇÃO DE ATIVIDADES EPILEPTIFORMES - SIMULAÇÃO COMPUTACIONAL

Autores 1FRANÇA, K. L. A.

1, SILVA, D. B.

1, MIRANDA, M. F.

1, ALMEIDA, A. C. G.

1, RODRIGUES, A.

M. 1 Engenharia de Biossistemas - UFSJ

Apoio Financeiro: FAPEMIG, UFSJ, CNPq

Resumo

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Introdução Alterações na sinalização GABAérgica (SG) de inibitória para excitatória, causadas pelo acúmulo de Cl- em neurônios, tem sido frequentemente observadas durante as primeiras semanas do período latente que antecede as crises convulsivas em protocolos experimentais (J. Neurosc. 27, 14012:22, 2007). Objetivos O objetivo do presente trabalho foi investigar, por meio de simulação computacional, a influência do GABA excitatório (GE) sobre a sinaptogênese durante a indução de atividades epileptiformes (AE), no giro dentado do hipocampo de rato Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana Métodos O modelo segue o formalismo McCulloch-Pitts (Bulletin of Math Biophys., 5, 115:33, 1943) e descreve o efeito de mecanismos não-sinápticos sobre a atividade neuronal. A rede neuronal é composta por células granulares (CG), células musgosas (CM) e interneurônios (IN). A teoria da Compensação (TC) (Synergetics of the Brain, 50:59, 1983) e as regras de Hebb e anti-Hebbiana (RH) são usadas para descrever as alterações de conectividade sináptica (CS) em função das atividades dos neurônios. Simulando protocolos de indução de AE, inicialmente, a rede é estimulada para induzir a máxima ativação dos neurônios, representando o status epilepticus. Depois, sinapses inibitórias são alteradas para excitatórias, para descrever o GE. O efeito do GE sobre a sinaptogênese durante a indução das AE foi estudado variando: (i) o número de células granulares (NCELL) em que ocorre o GE; e (ii) a intensidade (ω) do efeito excitatório do GABA para cada neurônio, que representa diferentes níveis de Cl- intracelular. Resultados Nas simulações, o surgimento de AE, representada pela ocorrência de eventos caracterizados pela máxima atividade espontânea (MAE), é favorecido pelo aumento da CS que os IN enviam para os demais tipos celulares durante o período de GE. No fim desse período, a inibição mais eficiente causa um maior decaimento da atividade neuronal e, consequentemente, aumenta as taxas da TC e RH responsáveis pelo aumento da CS das CG, que representa o brotamento anormal de fibras musgosas (BFM). O BFM intensifica a atividade neuronal e induz as MAE’s. O aumento de NCELL, por elevar a CS enviada pelos IN durante o GE, reduziu o período de latência para a ocorrência das AE, e elevou o número de MAE na rede de neurônios, devido ao aumento da atividade e CS das CG e CM. Foi observado também um aumento no número de MAE para maiores valores de ω, associado com o aumento da CS das CG e CM. Porém, esse aumento da CS foi menos intenso do que o observado para a variação de NCELL, resultando numa maior latência para surgir as AE. Conclusão As simulações permitem propor que o GE, por alterar a atividade neuronal, intensifica as CS’s excitatórias das CG e CM, por meio das TC e RH. Com as CS’s mais intensas, o nível de atividade neuronal aumenta, e surgem as AE. Além disso, as simulações sugerem que o número de células (NCELL) em que ocorre o GE contribui mais para a indução de AE do que a intensidade (ω) da excitação causada pelo GABA durante as semanas iniciais do período de latência para ocorrência das AE.

Palavras-chaves: GABA excitatório, Sinaptogênese, Atividades epileptiformes

Resumo: 09.024

EFEITO DA AMILORIDA SOBRE AS ATIVIDADES EPILEPTIFORMES NÃO-SINÁPTICAS.

Autores

1MIRANDA, M. F.

1, FRANÇA, K. L. A.

1, CIACCI, L. S.

1, SILVA, D. B.

1, AARÃO, M. C.

1,

LOPES, M. R. 1, MADUREIRA, A. P.

1, RODRIGUES, A. M.

1, ALMEIDA, A. C. G.

1 Engenharia de

Biossistemas - UFSJ

Apoio Financeiro: CAPES, FAPEMIG, CNPq

Resumo Introdução Evidências recentes sugerem que a amilorida, um potente bloqueador do trocador de sódio e hidrogênio (NHE), pode ser uma alternativa à redução de crises epilépticas em diferentes modelos animais de epilepsia (Brain Res.; 1222; 230:32, 2008). No entanto, não existem relatos na literatura sobre o papel desse bloqueador durante a indução de epilepsia experimental sustentada por mecanismos não-sinápticos. Objetivos O objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito da amilorida durante as atividades epileptiformes não-sinápticas (AENS). Código de Experimentação Animal protocolo 33/2010 Código de Experimentação Humana Métodos Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais da Universidade Federal de São João del-Rei, sob o protocolo nº 033/2010. Foram utilizados 6 ratos machos da linhagem Wistar pesando entre 220 e 280 gramas. Os animais foram eutanasiados e submetidos à indução de AENS utilizando o modelo alto-K+ (8 mM) e zero-Ca +2 adicionado. O registro do potencial extracelular (PE) foi realizado a partir de dois eletrodos (E1 e E2) posicionados na camada granular do giro dentado. Após 25 minutos de registro do PE as fatias foram perfundidas com solução de indução na presença de 0,5 mM de amilorida durante 20 minutos, e, posteriormente, reperfundidas com zero-Ca +2 adicionado. Para as análises estatísticas foi utilizado o teste de Wilcoxon com nível de significância α=0,05. Resultados Durante a perfusão com amilorida observaram-se mudanças na morfologia do PE extracelular e no nível de sincronização. Após a perfusão com amilorida pode-se observar uma redução estatisticamente significativa em todos os parâmetros do PE, períodos ictais 27,29 ± 6,5 s e 3,38 ± 1,7 s, amplitude da componente DC 7,42 ± 2,3 mV e 4,54 ± 1,2 mV, population spikes 12,47 ± 4,0 mV e 0,29 ± 0,1 mV e intervalos interictal 51,75 ± 6,9 s e 1,84 ± 1,3 s, antes e durante a perfusão com amilorida, respectivamente. Os resultados demonstraram também que os eventos epileptiformes não-sinápticos foram suprimidos e o sinal apresentou-se como uma oscilação com frequência de 0,254 ± 0,104 hz. Para verificar as alterações no nível de sincronismo, calculou-se a correlação cruzada entre os registros de E1 e E2. A defasagem entre E1 e E2 antes e durante a perfusão com amilorida foi, respectivamente, de: (1,00 ± 0,64 ms) e (135,50 ± 105,10 ms). Comparando-se as defasagens, observou-se uma dessincronização estatisticamente significativa entre os sinais durante a perfusão com amilorida quando comparados com os registros antes da perfusão.

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Conclusão As análises permitiram inferir que a perfusão com a amilorida, devido ao seu efeito bloqueador de trocadores NHE, promove a dessincronização da atividade não-sinápica reduzindo o recrutamento neuronal. A ação não-sináptica dessa droga tem grande potencial no tratamento de epilepsias refratárias aos medicamentos usuais, normalmente de ação sináptica.

Palavras-chaves: amilorida, atividades Epileptiformes, não-sinápticas

Resumo: 09.025

REGULATION OF Nrf2 TRANSCRIPTION FACTOR IN THE RETINA BY CHLOROGENIC ACID.

Autores

1DOMITH, I.C.L.

1, SOCODATO, R.

1, PORTUGAL, C. C.

2, COSSENZA, M.

1, PAES-DE-

CARVALHO, R. 1 Departamento de Neurobiologia - UFF,

2 Departamento de Fisiologia e

Farmacologia - UFF

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ, PRONEX-MCT.

Resumo Introdução The retina is an excellent model to study CNS physiology since all major classes of neurotransmitters and neuromodulators are expressed within it since early stages of its development. Moreover, the retina is a tissue well known to be resistant to oxidative damage; however, retinal degeneration has been associated with increased ROS production as occurs in diabetic retinopathy. Regardless, recent studies have provided evidence that moderate coffee consumption is associated with reduced risk for several chronic diseases like cancer and mood disorders. This information matches recent reports showing that brewed coffee components can mitigate ROS activity. In addition, coffee contains a large proportion of chlorogenic acid (CGA), a phenolic bioactive compound that has been identified as a potent activator of anti-oxidant elements within the cell. The nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf2) is a transcription factor that regulates gene expression associated with cellular protection in response to oxidative stress. In such way, Nrf2 activation upregulates antioxidant programs by inducing antioxidant responsive elements (AREs)-dependent expression of Phase II enzymes. This activity protects nerve cells from oxidative insults, inclusive in neurodegenerative conditions. Objetivos Therefore, here we studied the modulatory effects of CGA upon Nrf2 dynamics in cultured retinal cells. Código de Experimentação Animal 00146/09 Código de Experimentação Humana Métodos

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Retinal cell cultures were prepared using 8-day-old chicken embryos. For high-resolution quantitative confocal data, images were acquired using a Leica TCS SP5 II confocal microscope. Pixel intensities and distribution in each raw image was developed by the LAS AF software and statistically evaluated by GraphPad Prism software. Data were expressed as the mean ± S.E.M. of at least 3 independent experiments. Resultados Cultured retinal cells were treated at C3/C4 with CGA (100μM) for 3 hours and this treatment increased the number of nuclei positive for Nrf2 staining (176.6±16.2% n=3). Interestingly, treatment with CGA increased both the total Nrf2 intensity throughout the cell (170.4±8.3% n=3) and its specific intensity within the cell nucleus (398.5±79% n=3). Still, the rate of Nrf2 nuclear/cytoplasmic shutting was also increased upon CGA treatment (231.2±34.9% n=3). Remarkably, Nrf2 formed cluster-like structures within the cell nucleus, which could easily be resolved in quantitative terms using high-resolution confocal microscopy. Likewise, CGA treatment increased both the area and intensity of Nrf2 nuclear clusters in cultured retinal cells (159.7±23.1% n=3; 210.2±20.3% n=4; respectively). Conclusão We showed that CGA is an important regulator of Nrf2 in retinal cells. Furthermore, given the importance of Nrf2 to the anti-oxidant defenses of neuronal cells and that CGA is the most abundant substance in Brazilian coffee, studying Nrf2 modulation upon CGA administration would be therefore an strategic theme in neurodegenerative conditions associated with a misbalance of the neuronal redox environment.

Palavras-chaves: Neuron, Nrf2, Chlorogenic acid, Retina

Resumo: 09.026

Linalol Inibe as Correntes de Sódio no Gânglio da Raiz Dorsal.

Autores 1,2

VIEIRA, D. C. O. 1, LEAL-CARDOSO, J. H.

2, BEIRÃO, P. S. L.

1 Fisiologia - ISCB-UECE,

2

Departamento de Bioquímica e Imunologia - ICB-UFMG

Apoio Financeiro: FUNCAP, PRONEX, CNPq

Resumo Introdução Linalol é um constituinte de óleos essenciais encontrado em diversas plantas presentes nas regiões Norte e Nordeste do Brasil tais como Aniba rosaeodora e Ocimum basilicum L. ,conhecidos como pau-rosa e manjericão respectivamente, e que possui diversas atividades biológicas e farmacológicas já descritas. Leal-Cardoso et al. (2010) mostraram que o linalol bloqueia a geração do potencial de ação no nervo ciático e nos neurônios do gânglio da raiz dorsal (DRG). Eur J Pharmacol 25: 86, 2010. Objetivos O objetivo desse trabalho foi estudar a ação do linalol sobre as correntes de Na+ dependentes de voltagem nos neurônios do gânglio da raiz dorsal.

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Código de Experimentação Animal 115166653-0/64 Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizados ratos albinos, Rattus norvegicus, variedade Wistar, com massa corporal entre 250-350 g. O projeto foi aprovado pelo CEUA-UECE, nº de protocolo 115166653-0/64. Os DRG passaram por uma dissociação enzimática com colagenase 1A (75 min a 37ºC) e Tripsina/EDTA (15 min a 37ºC), e por dissociação mecânica para isolar as células. As correntes de Na+ foram registradas através da técnica de patch clamp no modo Whole-cell voltage-clamp, onde é possível manter constante o potencial da membrana em um valor definido de acordo com o experimento e registrar a corrente gerada por toda a população de canais presentes na membrana da célula. Foi utilizado o teste t de Student pareado ou não pareado.Para comparação de mais de dois grupos experimentais foi utilizado ANOVA. Nível de significância foi de 5%. Resultados O linalol reduziu o pico das correntes de Na+ com CI50 de 0,38 ± 0,17 mM (n> 5 para cada concentração), e o valor calculado para o coeficiente de Hill foi de 0,77 ± 0,30, sugerindo uma interação 1:1 do ligante com o seu sítio de interação. O linalol não alterou o potencial de reversão das correntes de Na+ (Controle: 31,7 ± 1,4 mV (n=5), Linalol (0,6 mM): 32,5 ± 5,1 mV (n=3). A condutância máxima (Gmáx) foi reduzida de 198,1 ± 27,5 nS (n=5) no controle para 73,0 ± 11,3 nS (n=3, p Conclusão Os dados permitem concluir que o linalol bloqueia, de modo dependente de frequencia, as correntes de Na+ dependentes de voltagem em neurônios isolados do gânglio da raiz dorsal de ratos. O efeito foi dependente de concentração e parcialmente reversível. Linalol diminuiu a condutância máxima para os canais de Na+. Com base nos resultados obtidos sugere-se que o linalol apresente mecanismos análogos aos dos anestésicos locais.

Palavras-chaves: Linalol, Canal de Sódio, Patch Clamp

Resumo: 09.027

MECANISMOS RESPONSÁVEIS PELO EFEITO DO 4-AMINO-3-(4-CLOROFENIL)-ACIDO BUTANOICO SOBRE AS ATIVIDADES EPILEPTIFORMES NÃO SINÁPTICAS

Autores 1COSTA, V. D. C.

1, SANTOS, L. E. C.

1, RODRIGUES, A. M.

1, SILVEIRA, G. A. D.

1, ALMEIDA,

A. C. G. D. 1 Departamento de Engenharia de Biossistemas - UFSJ

Apoio Financeiro: UFSJ/CAPES

Resumo Introdução O baclofeno é um agonista dos receptores GABAB capaz de bloquear as atividades epileptiformes (AEs) temporariamente,

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característica considerada anti epileptogênica. Entretanto, a dessensibilização dos receptores GABAB, promove o retorno das atividades com incremento nas variáveis relacionadas ao potencial extracelular (PE), o que confere características pró epileptogênica. Para investigar essas propriedades do baclofeno, o presente trabalho reporta o seu efeito nas AEs não sinápticas, nos receptores e mecanismos celulares envolvidos. Foram feitos registros do PE, análise imagens de variação espaço temporal do sinal óptico intrínseco (VET) de secções hipocampais de ratos e simulações computacionais por meio do modelo computacional de (Epilepsia. 49:1, 2008). Objetivos Evidenciar os mecanismos de ação do baclofeno durante as AEs mediadas por mecanismos não sinápticos. Código de Experimentação Animal CEUA/UFSJ - 040/2011 Código de Experimentação Humana Métodos Os procedimentos realizados foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais da Universidade Federal de São João del-Rei, parecer nº 040/2011. Foram utilizados ratos machos da linhagem < i > Wistar < /i > de 4 semanas. As AEs foram evocadas por mecanismos não sinápticos por meio do protocolo Zero Ca2+/Alto K+. Os registros eletrofisiológicos e das VETs foram realizados: (i) 20 min após o aparecimento das primeiras atividades; (ii) 40 min durante a aplicação do baclofeno e (iii) 20 min após a retirada do baclofeno da solução de indução. As simulações computacionais (SC) foram processadas de acordo com o modelo de (Epilepsia. 49:1, 2008). Resultados Os registros eletrofisiológicos (n=6) permitiram quantificar os parâmetros eletrográficos antes (a), durante (d) e após retirada (r) do baclofeno (100µM). Para identificar as alterações do PE entre os grupos, diante da não normalidade dos dados (teste de D’Agostino/Pearson), foi realizada comparação múltipla dos postos (teste post-hoc de Dunn, após a análise de variância de Kruskal-Wallis, nível de significância de 5%). Variações significativas foram evidenciadas na amplitude da componente DC (mV) (medianas: (a) 6,0; (d) 7,5 e (r) 6,9 mV), amplitude dos populations spikes (medianas: (a) 0,4; (d) 0,9 e (r) 0,7 mV) e intervalo entre eventos (medianas: (a) 58,1; (d) 92,8; (r) 59,4 s). As VETs mostraram não haver recrutamento neuronal. As SC indicam que a ação do baclofeno provoca uma hiperpolarização suficiente para reduzir a excitabilidade e, portanto, causar a supressão dos eventos epileptiformes. Quando os eventos ressurgem, as alterações nos gradientes iônicos transmembranares fazem com que os fluxos iônicos pelos canais sejam mais intensos, justificando as maiores amplitudes dos < i > population spikes < /i > . Em relação ao período inter-ictal, o principal mecanismo que o aumenta na presença do baclofeno é a corrente inibitória devido à abertura dos canais de K+ associados aos receptores GABAB. Conclusão Ao contrário das hipóteses descritas na literatura (Neuroph. 40:131, 2001), nossos resultados indicam que o baclofeno não é um agente pró epileptogênico, uma vez que não é capaz de promover recrutamento neuronal e aumentar o sincronismo.

Palavras-chaves: Baclofeno, Eletrofisiologia, Não sináptico , Potenciais eletrofisiológicos , Simulação computacional

Resumo: 09.028

Carvacrol altera a inativação dos canais para sódio dependentes de voltagem em neurônios periféricos

Autores

1JOCA, H. C.

1,2, VIEIRA, D. C. O.

3, VASCONCELOS, A. P.

3, ARAÚJO, D. A. M.

1, CRUZ, J. S.

1

Bioquímica e Imunologia - UFMG, 2 Instituto Superior de Ciências Biomédicas - UECE,

3 Centro de

Biotecnologia - UFPB

Apoio Financeiro: CNPq, FAPEMIG, CAPES.

Resumo Introdução O monoterpeno carvacrol está presente em diversos óleos essenciais de plantas e apresenta uma grande variedade de atividades biológicas, especialmente a sua atividade analgésica e efeito depressor da excitabilidade neuronal relacionado à inibição da corrente de sódio dependente de voltagem (INa), no entanto, seu mecanismo de ação permanece desconhecido. Objetivos O presente estudo teve como objetivo explorar os mecanismos pelos quais o carvacrol produz os seus efeitos na INa total e resistente a tetrodotoxina (TTX-R) nos neurônios periféricos através da analise dos parâmetros de ativação e inativação dessa corrente. Código de Experimentação Animal CEUA-UECE 10726562-1/23 Código de Experimentação Humana Métodos Os registros foram obtidos através da técnica do patch-clamp em modo whole-cell, utilizando neurônios dissociados do gânglio da raiz dorsal (GRD). As correntes foram obtidas usando o clampeamento de voltagem com diversos estímulos despolarizantes de amplitude variável para obtenção das relações corrente x voltagem e da recuperação da inativação. Resultados O carvacrol na concentração de 300 μM reduziu a densidade da INa total em aproximadamente 50% no pico da corrente (-10 mV) de -315,96 ± 45,75 pA/pF (Controle) para -164,63 ± 28,42 pA/pF (n = 6). Entretanto, não houve diferença na dependência de voltagem para ativação na situação controle e na exposição ao carvacrol (V1/2: -23,61 ± 1,81 e -25,35 ± 2,11 mV, respectivamente). Já na dependência de voltagem para inativação estacionaria, o carvacrol causou um desvio significativo para potenciais mais negativos no V1/2, os valores foram de -42,64 ± 7,95 mV no controle e -53,85 ± 7,58 mV quando exposto ao carvacrol (n = 6; p Conclusão Em conclusão, demonstramos que o carvacrol reduz a densidade INa total e TTX-R em neurônios periféricos e essa inibição está associada à diversas alterações na cinética e dependência de voltagem da inativação sem qualquer modificação no processo de ativação dos canais envolvidos. Entretanto, o carvacrol apresenta potencia farmacológica diferenciada entre correntes resistentes e sensíveis à tetrodotoxina.

Palavras-chaves: Carvacrol, Canais para sódio dependentes de voltage, Neurônios, Gânglio da raiz dorsal

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Resumo: 09.029

POSSÍVEL MECANISMO NOCICEPTIVO DA CICLOSPORINA A (CSA) MEDIANTE EXPRESSÃO DE NGF.

Autores 1JESUS, J. B.

1, BLOIS, R. A. N.

1, NASCIMENTO, J. L. M.

1, SENA, C. B. C.

1 Instituto de Ciências

Biológicas - UFPA

Apoio Financeiro: UFPA - GRANJA MAKARU

Resumo Introdução Pacientes hansenianos com dor neuropática crônica após um mês de tratamento com ciclosporina A (CsA) (5mg/kg/dia) mostraram diminuição nos níveis de auto-anticorpos contra o Fator de Crescimento de Nervo (NGF) e controle da dor neural (Lepr. Rev. 77;121, 2006). Estes resultados nos levam a questionar o possível papel da CsA, um imunomodulador que inibe a atividade da calcineurina, no controle da dor neural periférica. Objetivos Avaliar a ação da CsA utilizando o modelo in vitro de neurônios nociceptivos do Gânglio da Raiz Dorsal (GRD) do Sistema Nervoso Periférico (SNP) oriundos do embrião de galinha. Código de Experimentação Animal 100/2010 (CEUA/UENF) Código de Experimentação Humana Métodos Células neuronais foram obtidas de embriões de galinha ( Gallus gallus ). Para o cultivo de células nociceptivas, utilizamos meio condicionado, rico em fatores de crescimento, proveniente do cultivo de células da glia (células de Muller) da retina dos embriões (E9), obtidas após a morte de células neuronais por acidificação espontânea do meio de cultura. Para avaliar a formação de neuritos em células nociceptivas, GRD integros de embriões (E10), foram tratados com CsA (10, 20 e 40 μM) por três dias. Para verificar a ação da CsA em células individuais, o GRD foi dissociado em 0,05% de tripsina, separados por decantação, e tratados com CsA (40 μM) nas mesmas condições anteriores. O papel de neurotrofinas após tratamento com CsA (40 μM) foi analisado por imunofluorescência usando anticorpos anti-NGF. Resultados Não observamos diferença significativa na formação de neuritos utilizando GRD integro e tratados com 10, 20 e 40 μM de CsA, porém culturas de neurônios nociceptivos isolados revelou uma considerável diminuição da circuitaria neuronal após tratamento com CsA (40 μM). Esses resultados sugerem um efeito protetor proveniente das células da glia durante o tratamento com CsA. Este efeito foi melhor interpretado por imunofluorescência, tratando culturas mistas de neurônios e glia com 40μM de CsA por três dias. Observamos que o tratamento com CsA promoveu uma significativa formação

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dendrítica com consequente acumulo vacuolar de NGF na região perinuclear, diferentemente do grupo controle (sem tratamento com CsA) que obteve um desenvolvimento dendrítico rudimentar, sem acumulo citoplasmático de NGF. Conclusão Estes dados sugerem que a CsA pode favorecer o desenvolvimento e a formação da arborização de neuritos por ação indireta de células da glia. Após o tratamento com 40 μM de CsA, as células da glia apresentam-se estimuladas a produzir neurotrofinas, como o NGF, que favorece o desenvolvimento e diferenciação de neurônios nociceptivos. Por outro lado, a ausência das células da glia favorece um efeito prejudicial, diminuindo a circuitaria neuronal. Estes dados podem sugerir um possível mecanismo de controle da dor crônica observado em pacientes hansenianos tratados com CsA.

Palavras-chaves: Ciclosporina A, NGF, Gânglio da Raiz Dorsal

Resumo: 09.030

AVALIAÇÃO DO EFEITO NEUROPROTETOR DA APITOXINA EM MODELO ANIMAL DA DOENÇA DE PARKINSON.

Autores

1,2DANTAS, C. G.

1,2, PAIXÃO, A. O. D.

1,2, NUNES, T. L. G. M.

1,2, JÚNIOR, R. L. C. D. A.

1,2,

GRAMACHO, K. P. 1,2

, GOMES, M. Z. 1 Departamento de Pós-Graduação - Unit,

2 Laboratório de

Morfologia e Biologia Estrutural - ITP

Apoio Financeiro:

Fundação de Amparo à Pesquisa e à Inovação Tecnológica do Estado de Sergipe/

FAPITEC-SE e Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e

Tecnológico/ CNPq.

Resumo Introdução A doença de Parkinson (DP) é uma enfermidade neurodegenerativa progressiva caracterizada pela perda de neurônios dopaminérgicos na substância negra compacta. Abelhas do gênero Apis apresentam veneno composto por uma complexa mistura de enzimas, peptídeos e aminoácidos e apresenta efeitos neuroprotetor e antiinflamatório, descritos na literatura. Objetivos No presente estudo, objetivou-se avaliar o efeito do tratamento com veneno de abelha, a apitoxina, e seu principal componente, melitina, na progressão da morte neuronal após aplicação de 6-hidroxidopamina (6-OHDA), modelo experimental da DP. Código de Experimentação Animal 050511 Código de Experimentação Humana Não se aplica

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Métodos O trabalho foi submetido ao Comitê de Ética local e aprovado mediante protocolo n°.050511. Todos os procedimentos ocorreram em conformidade com as normas do Colégio Brasileiro de Experimentação Animal. Camundongos suíços (n=45), machos, com seis semanas e massa corporal aproximada de 25 a 30g, foram submetidos à cirurgia estereotáxica, onde receberam micro-injeção intra estriatal da neurotoxina 6-OHDA ou do veículo (salina). A apitoxina (0,1; 0,6 e 1,2 mg/kg) e a melitina (0,2 mg/kg) foram administradas via subcutânea (s.c.) durante três semanas consecutivas à cirurgia, uma vez a cada dois dias. Os animais foram submetidos aos testes de campo aberto (avaliação das explorações horizontais, verticais e grooming ) e comportamento rotatório 30 dias após a lesão. Os dados foram analisados através do teste análise de variância de uma via (ANOVA), seguido do pós-teste de Duncan, (p Resultados No teste campo do aberto, os grupos 6-OHDA/ salina e 6-OHDA/ apitoxina (0,6 mg/Kg) apresentaram redução significativa nas explorações horizontais (EH) (F8-48=3,005; p=0,010). Por outro lado, este efeito foi revertido nos grupos que receberam 6-OHDA/ apitoxina (0,1 mg/ Kg) e 6-OHDA/ melitina. Nas explorações verticais (EV), os grupos 6-OHDA/ salina e 6-OHDA/ apitoxina (0,1 mg/ Kg) apresentaram diminuição significativa em relação ao grupo controle (salina/ salina) (F8-48=1,486; p=0,05). No que se refere ao grooming , o grupo 6-OHDA/ apitoxina (1,2 mg/ Kg) apresentou elevação com tendência significativa (2,0±0,45) em relação aos grupos salina/ apitoxina (0,1 mg/ Kg) (1,0±0,0), salina/ apitoxina (1,2 mg/ Kg) (1,0±0,0), 6-OHDA/ salina (1,10±0,18), 6-OHDA/ apitoxina (0,1 mg/ Kg) (1,0±0,0) e 6-OHDA/ apitoxina (0,6 mg/ Kg) (1,0±0,0) (F8-48=1,933; p=0,06). No teste de comportamento rotatório, o grupo 6-OHDA/ salina, realizou média de 70 (±9,42) rotações, enquanto o grupo 6-OHDA/ apitoxina (0,1 mg/ Kg), teve o número de giros reduzido a zero. Animais que receberam 6-OHDA/ melitina, apresentaram média de 348 (±160) rotações. Conclusão Os achados comportamentais do presente estudo permitem concluir que a apitoxina na concentração de 0,1 mg/Kg induz melhora na recuperação motora e sugerem um possível efeito neuroprotetor sobre a morte neuronal induzida por 6-OHDA. Os resultados sugerem ainda possível toxicidade da melitina quando administrada de forma isolada.

Palavras-chaves: Apis mellifera, doença de Parkinson, melitina

Resumo: 09.031

EFEITOS DA DEFICIÊNCIA DE TIAMINA “IN VITRO” SOBRE AS CORRENTES DE CÁLCIO DE NEURÔNIOS GRANULARES DO CEREBELO.

Autores 1Moreira-Lobo, D.C.

1, HOFNER, M.G.

2, Oliveira F.A

1, CRUZ, J.S.

1 Departamento de Bioquiímica e

Imunologia - UFMG, 2 Departamento de Ciências Biológicas - UNIFESPE

Apoio Financeiro: Capes, CNPq

Resumo Introdução A deficiência de tiamina (DT) em humanos provoca a perda de neurônios em diversas áreas do sistema nervoso central (incluindo o cerebelo) levando a condição conhecida como encefalopatia de Vernicke. A DT pode ser reproduzida em modelos animas “in vivo” ou “in vitro” e nessas condições se observa estresse oxidativo nas células afetadas, um fator

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comum em varias doenças neurodegenerativas de humanos como Alzheimer, Parkinson e esclerose múltipla. Objetivos Considerando a papel do cálcio como um sinalizador de morte celular, investigar possíveis efeitos da deficiência de tiamina “in vitro” nas correntes de cálcio acionadas por voltagem (VGCC) de neurônios granulares do cerebelo (NGC) Código de Experimentação Animal 04/2010 Código de Experimentação Humana Métodos Culturas de NGC foram realizadas com os cerebelos de ratos wistar neonatos (p5-7) (Comitê de Ética em Experimentação Animal - UFMG: 4/2010), após dissociadas, as NGC foram plaqueados em laminas de 22x22 mm previamente tratadas com poli-d-lisina e mantidas em meio DMEM com (4mg/l) ou sem tiamina (renovado a cada 3 dias) numa atmosfera de 5% CO2 (370C) por 8 dias antes dos experimentos de patch clamp. Os experimentos de path clamp foram realizados com um eletrometro HEKA EPC9. A aquisição dos dados foi feita com o software pulse (HEKA eletronik). A neutralização de capacitância foi feita automaticamente pelo EPC9, utilizou-se 70% de compensação da resistência em série (pipetas 3-5mΩ) e um protocolo p4 para subtração da corrente de vazamento. Foram realizados protocolos de rampa (-100mV → 50mV), IV( -50mV → 50mV, passos de 5mV) e H-infinito (-100mV → 0mV, passos de 5mV). As voltagens para 50% de ativação ou inativação (V1/2) foram obtidas do ajuste pela equação de bolztmann das curvas normalizadas de condutância ou corrrente obtidas nos protocolos de IV ou H-infinito. A densidade de corrente foi obtida pelo quociente entre a corrente máxima (IV ou rampa) pela capacitância. As constantes de tempo foram obtidas pelo ajuste das correntes (IVs) por um modelo m2h ou individualmente (ativação ou inativação) por uma exponencial simples em cada trecho. A analise estatística foi feita com o software sigma plot, utilizou-se teste t de student em todos resultados e os mesmos estão expressos na forma de média ± erro padrão. Resultados A DT aumentou a densidade das VGCC nas rampas (-0.0645 ± 0.0313 nA/pF controle e -0.0942 ± 0.00765 nA/pF deficiente) e em todas as voltagens acima de -15mV nas IVs (máximos: -0.0544 ± 0.0162 nA/pF controle(-5 mV) e -0.103 ± 0.0360 nA/pF deficiente (0 mV)). A DT também afetou a dependência de voltagem da ativação tornando o V1/2 no grupo deficiente mais positivo: -46.498 ± 0.188 controle e -40.863 ± 3.679 deficiente. A DT não alterou as constantes de tempo da ativação e inativação em quaisquer das voltagens testadas (no modelo m2h - 0mV: ativação: 0.532 ± 0.0844 ms controle e 0.587 ± 0.190 ms deficiente, inativação: 420.241 ± 143.908 ms controle e 501.476 ± 50.446 ms deficiente. Nossos dados são insuficientes para avaliar o efeito da DT na dependência de voltagem da inativação: -46.498 (n=2) controle e -40.863 ± 3.679 deficiente. Conclusão A DT aumenta a densidade das VGCC de NGC e desloca para potenciais mais positivos a voltagem de ativação das mesmas. A DT não altera as constantes de tempo das VGCC de NGC.

Palavras-chaves: Tiamina, Cerebelo, Patch Clamp, Cálcio

Resumo: 09.032

Distribuição e morfologia de neurônios reativos a proteínas ligantes de cálcio após implante crônico de eletrodos

Autores

1FREIRE, M. A. M.

1, MORYA, E.

2,1, FABER, J.

3,1, SANTOS, J. R.

1, LEMOS, N. A. M.

1,4,5,6,

NICOLELIS, M. A. L. 1 Programa de Pós-graduação em Neuroengenharia - IINN-ELS,

2

Departamento de Engenharia Biomédica - UNIFESP, 3 Departamento de Biologia - UFS,

4 Department

of Biomedical Engineering - DU, 5 Department of Neurobiology - DU,

6 Center for Neuroengineering -

DU

Apoio Financeiro: AASDAP; MCT/CNPq; CAPES; Duke University

Resumo Introdução O desenvolvimento de terapias voltadas para a melhoria de vida de pessoas acometidas por paralisias motoras é um dos principais desafios médicos nos dias atuais. Nesse sentido, a Interface Cérebro-Máquina (ICM) emerge como um potencial candidato. No entanto, antes de testes em pacientes humanos, uma avaliação completa de seus impactos no sistema nervoso precisa ser efetuada, especialmente quando envolve técnicas invasivas como o implante de eletrodos. Objetivos O objetivo do presente trabalho é avaliar o impacto do implante crônico de multieletrodos na distribuição e morfologia dos neurônios reativos às proteínas ligantes de cálcio calbindina (CB), calretinina (CR) e parvalbumina (PV) no córtex motor do rato. Código de Experimentação Animal # 13/2011 – CEUA IINN/ELS Código de Experimentação Humana Métodos Quinze ratos machos adultos da linhagem Wistar foram utilizados (projeto aprovado pelo Comitê de Ética da Associação Alberto Santos Dumont para Apoio à Pesquisa - ID # 13/2011). Os animais foram anestesiados com uma mistura de cloridrato de cetamina (100mg/kg) e cloridrato de xilazina (4 mg/kg), após uma prévia indução anestésica com isofluorano a 2,5%. Após craniotomia, uma matriz de 32 microeletrodos (35 micrômetros de diâmetro) foi implantada no córtex motor primário do hemisfério esquerdo. A atividade eletrofisiológica foi registrada semanalmente, com os animais sendo divididos em três grupos: 1, 3 e 6 meses de registro. Ao final dos tempos especificados os animais foram perfundidos com solução salina 0,9% e paraformaldeído a 4% e o tecido nervoso foi seccionado a 30 micrômetros, sendo então submetido às imunohistoquímicas para avaliação da distribuição dos neurônios reativos às proteínas ligantes de cálcio (CB, CR e PV) na região do implante, que foram comparados com o hemisfério contralateral. Os registros eletrofisiológicos foram avaliados em relação ao formato e quantidade de potenciais de ação individuais por microeletrodo em função do tempo. Resultados O implante de eletrodos e sua manutenção crônica no tecido nervoso não alteraram a morfologia e a distribuição dos neurônios reativos aos ligantes de cálcio. Os neurônios reativos a CB localizaram-se preferencialmente nas camadas infragranulares do córtex, com arborização dendrítica bipolar ou multipolar. Já os neurônios reativos a CR e a PV possuíam uma distribuição mais homogênea. Os primeiros tinham morfologia notadamente bipolar e multipolar, enquanto os últimos eram predominantemente multipolares. Conclusão

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A presença de matrizes crônicas de eletrodos não alterou a fisiologia do tecido implantado de maneira significativa, sugerindo sua aplicabilidade em futuras intervenções terapêuticas em humanos.

Palavras-chaves: Ligantes de cálcio, Eletrodos, Eletrofisiologia

Resumo: 09.033

GUANOSINE INDUCES FUNCTIONAL RECOVERY AND DECREASES NEURONAL DEATH IN CEREBRAL FOCAL ISCHEMIA BY THERMOCOAGULATION ON RATS.

Autores 1,2

GUELLA, F. L. 2, TONON, A. C.

1,2, TELES, M. V.

2, HANSEL, G.

1 DEPARTAMENTO DE

CIÊNCIAS BÁSICAS DA SAÚDE - UFCSPA, 2 BIOQUÍMICA - UFRGS

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERGS, FINEP–IBN Net, INCTEN.

Resumo Introdução Ischemic stroke is the second most common cause of death and the major cause of disability worldwide. Disruption of brain metabolism is clearly a key element in stroke, resulting in a cellular damage and loss of neurological function. It has been demonstrated that Guanosine (GUO), a guanine-based purine, plays important roles in Central Nervous System (CNS) in physiological and pathological conditions and involvement in brain plasticity. Studies showed that endogenous GUO increased after 2 h of focal stroke and remained at high levels for 7 days. This finding led to the investigation of the effects of exogenously administered GUO in stroke models. Objetivos Evaluate the role of GUO in cerebral focal ischemia induced by thermocoagulation, analyzing functional forelimb recovery, neuronal death and cellular morphological changes. Código de Experimentação Animal 19283 Código de Experimentação Humana Métodos Animals: Wistar male adult rats (90–100 days old, weighing 300–350g). Permanent focal ischemia: Ischemic lesion was induced by thermocoagulation of the blood in the pial blood vessels of motor and sensorimotor cortices by the stereotaxic surgery (+ 2 to − 6 mm A.P. from bregma. Experimental groups: Sham Saline (SS), Sham GUO (SG), Ischemia Saline (IS) and Ischemia GUO (IG). The GUO dose (60mg/Kg diluted in saline) was chosen based on the dose response curve performed prior the study. All groups received a 1 mL/kg i.p. administration of the drugs immediately, 1 h, 3 h and 6 h after surgery. Cylinder test: is based at the spontaneous exploratory behavior. Animals were placed into cylinder and 20 touches were counted. Percentage relative to the total number of uses (ipsilateral + contralateral + simultaneous) was calculated.

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The test was performed before the induction of ischemia and after 24 h. Immunohistochemistry: After 24 h of ischemia, animals were anesthetized and sacrificed by perfusion. Brains are placed in a paraformaldehyde solution for 24 h, then later in the saccharose 30% and sliced (50uM) on the vibratome. The brain slices are incubated with anti-NeuN (neurons), anti-IBA-1 (microglia), DAPI (nuclear marker) and Fluorojade-C (neuronal death marker) and analyzed by Image J software. Statistical analysis: Two-way ANOVA, Tukey´s post test or t-test. Resultados At ischemia, GUO treatment led to a partial recovery in the functional of the impaired forelimb (in percentage- SS: 77.22±6,9; SG: 71.25±3,9; IS: 26.15±3,3; IG: 49.2±3,0; n=10). Ischemia treated with GUO lowered FluoroJade C positive cells (number of cells- IS: 150.0±14.1 mm2; IG: 94.6±8.6 n=4). Both ischemia and the GUO treatment had no effect in DAPI. Ischemia decreases IBA-1 but GUO treatment did not revert this effect (Cells/ROI-SS: 6.3±0.5; SG: 5.6±0.6; IS:2.8±0.5; IG: 3.6±0.4; n=4/group). Ischemia decreases NeuN and GUO treatment was able to revert this effect (Cell/ROI- SS: 62.1±3.9; SG: 51.1±2.6; IS: 28.5±3.9; IG: 48.2±6.1; n=4/group). Conclusão After 24 h of ischemia, the GUO treatment recovery the functional of the impaired forelimb in the ischemia and this recovery could be attributed by the reduction of neuronal death, but more analysis are necessary.

Palavras-chaves: GUANOSINE, FOCAL ISCHEMIA, NEUROPROTECTION

Resumo: 09.034

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE LOCOMOTORA ESPONTÂNEA DE SAGUIS (Callithris jacchus) MANTIDOS EM CATIVEIRO

Autores

1ARAÚJO, M. F. P.

1,2, SANTANA, M. B.

1, BRASIL, F. L.

1, MOIOLI, R. C.

1, FUENTES, R.

1,3,5,6,

NICOLELIS, M. 1, MORYA, E.

1 Pós graduação em Neuroengenharia - IINN-ELS,

2 Pós graduação

em Psicobiologia - UFRN, 3 Biomedical Engineering - Duke Univ.,

4 Durham, NC 27708 USA - Duke

Univ., 5 Department of Neurobiology - Duke Univ.,

6 Department of Psychology and Neuroscience -

Duke Univ.

Apoio Financeiro: AASDAP, FINEP, INCT incemaq, FAPERN, CAPES

Resumo Introdução O registro da locomoção espontânea de saguis (Callithrix jacchus) é uma medida objetiva de avaliação da atividade motora, podendo ser facilmente incorporado a diversas áreas de Neurobiologia, como em pesquisas de Neurociência Social e em modelos animais de doenças que afetam a atividade motora, como o mal de Parkinson. No entanto, variações diárias e intraespecíficas de locomoção espontânea podem influenciar os resultados e a interpretação dos experimentos. Desse modo, é essencial caracterizar tais diferenças para que esse parâmetro possa ser modelado de forma a permitir ajustes de curvas comportamentais robustas. Objetivos

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Modelar variações diárias e individuais na atividade locomotora espontânea de saguis mantidos em cativeiro. Código de Experimentação Animal 08/2011 Código de Experimentação Humana Métodos Neste trabalho, foram utilizados 4 saguis machos adultos pesando 350 - 550 g. Dois animais viviam na mesma gaiola (K e C) e dois viviam sozinhos (P e Z). Os animais foram mantidos em cativeiro, no Centro de Pesquisa de Macaíba do Instituto Internacional de Neurociências de Natal - Edmond e Lily Safra, sob condições de iluminação e temperatura próprias do habitat natural do sagui. Todos os procedimentos foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais da AASDAP (protocolo 08/2011) e pelo IBAMA - SISBIO (protocolo 207095-2). Actímetros (Actiwatch Mini, CamNtech Ltd) programados para salvar dados a cada 2 s foram utilizados para registrar a atividade motora desses animais durante 3 semanas (entre novembro/2012 e janeiro/2013). Eles foram colocados em uma mochila de pano presa ao corpo dos animais. Para cada sujeito, foi determinada a atividade locomotora diária total. Os dados foram divididos em 3 tipos de dia: sábado, domingo e feriado, e demais dias da semana. A análise de variância (ANOVA 2-way, p = 0,05) foi utilizada para comparar a atividade locomotora diária total entre os 4 sujeitos e os 3 tipos de dia. Nos casos em que foram encontradas diferenças significativas, o teste post hoc de Bonferroni (p = 0,05) foi aplicado. Resultados A análise de variância da atividade locomotora total indicou diferenças significativas entre sujeito [F(3,64) = 35.0725, p < 0,01 e tipos de dia [F(2,64) = 11.2135, p < 0.01], além de uma interação significativa entre os fatores sujeito e tipo de dia [F(6,64) = 3,0999, p = 0.01]. A atividade total de C e K, que viviam juntos, foi significativamente maior que a de P e Z (p < 0,01). Além disso, a atividade total nos domingos foi significativamente diferente da atividade total nos sábados (p < 0,01) e demais dias da semana (p < 0,01). Os sujeitos K, P e C se movimentaram menos aos domingos, mas essa diminuição foi significativa apenas para o sujeito C. Conclusão Os dados mostram diferenças na atividade motora de saguis mantidos em cativeiro em diferentes dias da semana: os animais que viviam juntos se movimentaram mais que os que viviam sozinhos, mas se movimentaram menos aos domingos do que nos outros dias da semana. Esses resultados permitem modelar o uso desse parâmetro em diversos estudos comportamentais.

Palavras-chaves: actimetria, comportamento locomotor, sagui comum

Resumo: 09.035

EFEITO DA N-ACETILCISTEINA SOBRE A DENSIDADE CELULAR NAS REGIÕES CA1, CA3 E GIRO DENTADO NO MODELO DE STATUS EPILEPTICUS INDUZIDO POR PILOCARPINA

Autores 1SILVA, D. B.

1, FRANÇA, K. L. D. A.

1, MIRANDA, M. F.

1, MACIEL, R. M.

1, RODRIGUES, A.

M. 1, ALMEIDA, A. G. D.

1 Depatamento de Engenharia de Biossistemas - UFSJ

Apoio Financeiro: CNPq, FAPEMIG, CAPES/REUNE

Resumo Introdução A epilepsia é um distúrbio crônico cerebral caracterizado pela presença de crises epilépticas espontâneas e recorrentes (Epilepsia, 42, 796-803, 2001) em que o tecido nervoso fica vulnerável ao estresse oxidativo (EO). Estudos experimentais demonstram que a n-acetilcisteína (NAC) pode inibir vários elementos relacionados ao EO ao atuar no sistema nervoso e reduzir a morte neuronal (J Neurochem, 84, 1173–83, 2003). Objetivos O objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito da NAC sobre a densidade celular em fatias de hipocampo de ratos submetidos ao protocolo de indução de crises por aplicação sistêmica de pilocarpina (PILO). Código de Experimentação Animal CEUA da UFSJ (parecer nº 056/2011) Código de Experimentação Humana Métodos Os procedimentos foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais da UFSJ (parecer nº 056/2011). Foram utilizados 22 ratos (Wistar) machos com 5 semanas de vida, distribuídos em três grupos: grupo I (Controle – 6 animais), grupo II (tratados com PILO e salina – 8 animais), e grupo III (tratados com PILO e NAC – 8 animais). Os grupos II e III receberam PILO (IP) (360mg/kg) (Behav Brain Res, 9, 315-35, 1983). A aplicação de NAC foi via oral (100mg/Kg) no grupo III, e para o grupo I foi administrada somente salina ip volume equivalente em substituição à PILO. Os animais foram sacrificados 80 dias após status epilepticus, e seus tecidos submetidos aos procedimentos de coloração por método de Nissl. Para verificar possíveis perdas neuronais foi realizada a quantificação da densidade celular nas regiões CA1, CA3 e giro dentado (GD). Para a análise estatística foi utilizado o teste ANOVA um critério, com teste post-hoc de Bonferroni, e nível de significância α=0,05. A variação dos dados é representada em suas médias ± desvio-padrões. Resultados Considerando a região CA1, a densidade celular (nº cel/mm3) nos grupos I a III foi, respectivamente: 505.865,80 ± 88.764,13; 141.090,80 ± 21.177,72; e 259.627,20 ± 51.193,93. Nessa região, houve diferenças entre todos os grupos analisados, indicando que o tratamento com a NAC reduziu os danos celulares causados pelo tratamento com a PILO. Para CA3, a densidade celular encontrada foi: I (475.032,20 ± 19.224,62), II (282.017,00 ± 116.313,40) e III (285.858,50 ± 64.986,73). Para essa região, foram observadas diferenças entre os grupos I-II e I-III, indicando que a aplicação de NAC não causou alterações na densidade celular. E, para o GD, a densidade celular encontrada para os grupos I a III, foi respectivamente: 527.607,5 ± 43.215.14; 287.185,6 ± 46.176,48; 403.015,7 ± 88.166,96. Similarmente à região CA1, houve diferenças entre todos os grupos analisados. Conclusão Os resultados indicaram que a NAC tem a capacidade de reduzir os danos causados pela PILO no GD e CA1. Esses achados e evidências experimentais apontadas na literatura sugerem que a NAC atua reduzindo os radiais livres e, por conseguinte, a perda neuronal. Adicionalmente, os resultados indicam que o efeito da NAC depende da região cerebral, uma vez que não houve efeitos citoprotetores na região CA3.

Palavras-chaves: N-Acetilcisteina, densidade celular, status epilepticus, pilocarpina

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Resumo: 09.036

Spontaneous spatiotemporal activity pattern in rat primary motor sensory cortex

Autores

1MORYA, E.

2, MONTEIRO, T.

3, ALBUQUERQUE, V.

4, SAMESHIMA, K.

1, MOIOLI, R.

1,

BRASIL, F. 1, FREIRE, M.

1,5,6,7, NICOLELIS, M.

1 Neuroengineering Graduate Program - IINN-ELS,

2 Technological Science Center - Unifor,

3 Applied Informatics Grad Prog - Unifor,

4 Detp. of

Radiology - USP, 5 Biomedical Engineering - DUKE,

6 Ctr. for Neuroengineering, - DUKE,

7 Dept. of

Neurobiology - DUKE, 8 Dept. of Psychology and Neuroscience - DUKE

Apoio Financeiro: AASDAP, FINEP, INCT Incemaq, FAPERN, CAPES

Resumo Introdução Spontaneous neuronal activity recording can define dynamic patterns of motor sensory cortex during several behaviors, and explain the information integration for the input and output of motor control. Objetivos Evaluate offline sorting methods to extract spontaneous spatiotemporal neuronal activity as function of individual cells. Código de Experimentação Animal 13/2011 Código de Experimentação Humana Métodos The project was approved by the local Ethical Committee and performed in accordance with NIH guidelines. 25 Wistar rats, 3 months old and 250g at the surgery procedur, were used to implant a microarray of 4 by 8 Teflon coated tungsten sharp microwire electrodes (50 micro diameter separated by 50 micro) in the left motor sensory cortex (1.0-3.5 mm rostral to bregma, 2.0-4.0 micro lateral to bregma, 1.8 micro depth for layer V of M1 and according to recording during the surgery). Rats were anesthetized with Ketamine (100 mg/kg) and Xylaxine (5 mg/kg) following induction with Halothane. Single-cell and multiunit activity were recorded (MAP Plexon) during the implant in a stereotaxic. Cyanoacrylate adhesive was used to fixate firmly the set (a printed circuit board connected to the microwire electrodes and a miniature connector attached to the printed circuit board) to the skull bone. Freely behaving rats were recorded once a week during 30-45 minutes. Only cells that had a clearly identified waveform were considered (off line sorting PCA, K-means, OPF, SVM, SOM and T distribution). Resultados PCA, K-means, OPF, SVM, SOM and T distribution analysis in parallel showed a robust offline sorting tool with individual bias. In average 74 (sd ±21) different cells were identified in each recording session using 4x8 microelectrodes microarray in layer V of MI. Conclusão

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Local field potential patterns were identified according to freely behaving states, as well as spatiotemporal spike activity within 32 microelectrodes. These results suggest a dynamic network integration mechanism for information integration and movement control in motor sensory cortex.

Palavras-chaves: cortex, motor sensory, neuronal activity

Resumo: 09.037

Estudo da neuropatia no modelo experimental de indução ao diabetes juvenil em ratos Wistar.

Autores 1MACEDO, F. H. P.

1, OQUENDO, M. B.

1, FERREIRA, V. M. S.

1, LIMA, V. F.

1, Leal-Cardoso, J.

H. 1 Laboratório de Eletrofisiologia - UECE

Apoio Financeiro: CAPES e FUNCAP

Resumo Introdução O Diabetes Mellitus é um problema de saúde pública mundial, caracterizado por hiperglicemia devido à deficiência na secreção e/ou ação da insulina. A neuropatia, uma complicação grave, atinge mais de 50% dos diabéticos e é responsável por 8 em cada 10 amputações não-traumáticas. Objetivos Devido a essa realidade, torna-se importante a melhor compreensão desta patologia. Código de Experimentação Animal 12637043-5 Código de Experimentação Humana Métodos Para tal foram utilizados ratos Wistar machos, divididos em dois grupos: diabético (GD) e controle (GC). O manuseio dos animais foi aprovado pela Comissão de Ética para o uso de Animais da UECE sob protocolo nº 12637043-5. O GD foi submetido à indução por estreptozotocina (75 mg/kg, i.p.) diluída em solução veículo de citrato de sódio a 10 mM, pH 4.5, após 12 horas de jejum. Os animais do GC receberam apenas a solução veículo. Após sete dias a glicemia foi aferida via glicosímetro (Accu-Chek Active; Roche), sendo aqueles com glicemia> 200 mg/dL considerados diabéticos. Quinzenalmente, os animais tiveram aferidas sua massa corpórea, consumo de água, ração e fluxo urinário (por gaiola metabólica) e submetidos ao teste de Von Frey para avaliação da sensibilidade nociceptiva (medidas do Dia 0 foram obtidas no intervalo de 1 a 2 dias antes da indução). Após 8 semanas (60 dias), os animais foram sacrificados por CO2 e tiveram dissecados seus nervos ciáticos para registro do Potencial de Ação Composto (PAC) (Leal-Cardoso et al., 2010, DOI 10.1016/j.ejphar.2010.07.014). Os dados foram expressos como média ± erro padrão da média e foram utilizados os testes One Way ANOVA e t-Student.

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Resultados Houve aumento estatisticamente significante da glicemia (em mg/dL) do GD (dia 0: 85,67 ± 3,32; dia 60: 450,3 ± 10,66354 ; n=6) em comparação com o GC (dia 0: 94,33 ± 11,88; dia 60: 125,67 ± 6,82; n=6) (p Conclusão Os animais diabéticos apresentaram semelhanças clínicas com o diabetes humano como hiperglicemia crônica, perda de massa corpórea, maior sensibilidade tátil e tendência aos sintomas de polidipsia, poliúria e polifagia.

Palavras-chaves: Diabetes Mellitus, Neuropatia Diabética, Metabolismo do Diabetes, Diabetes Juvenil, Potencial de Ação Composto

Resumo: 09.038

Oxidative stress in Substantia Nigra of aged rats exposed to low concentrations of rotenone submitted to moderate aerobic exercise

Autores 1SILVA, C. M.

1, ALMEIDA, M. F.

1, FERRARI, M. F. R.

1 Genética e Biologia Evolutiva - USP

Apoio Financeiro: Fapesp

Resumo Introdução Aging is frequently associated with neurodegenerative diseases such as Parkinson’s disease. However, the susceptibility to develop this pathology is associated to increase in oxidative stress and decrease in antioxidants enzymes. Therefore, control these features can be one strategy for preventing or delaying disease progression. We hypothesize that physical exercise might act in the oxidative stress pathway during neurodegenerative processes. Objetivos Examine the effects of moderate aerobic exercise on hydrogen peroxide (H2O2) production, the activity of superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) and redutase (GR) in the Substantia Nigra. Código de Experimentação Animal 137/2011 Código de Experimentação Humana Métodos All procedures were performed in accordance with the International Guideline for Animal Experimentation care and use, as well as respecting the Brazilian federal law 11794/08 for animal welfare and approved by the institutional ethics committee (nº137/2011) of Department of Genetics and Evolutionary Biology, Institute for Biosciences, University of Sao Paulo. Aged

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male Lewis rats (10 months old, ±300g, n=20) were implanted with osmotic minipumps that delivered either rotenone at the rate of 1mg/kg/day or DMSO (control) during two months. After one month of rotenone (n=5) or DMSO (n=5) exposure, rats were submitted to mild treadmill exercise five times a week, forty minutes a day, during six weeks. Sedentary groups (n=5 for each drug, rotenone or DMSO) were in contact with the treadmill switched off during the same experimental period. Substantia Nigra was excised and immediately homogenized to quantify H2O2 production, the activity of GPx, GR and SOD. Data were analyzed using two-way anova and considering p Resultados Moderate aerobic exercise reduced H2O2 in SN 51% in the rotenone group compared to DMSO and 43% compared to sedentary rotenone group. GPx activity was not altered in trained rotenone group compared to DMSO, however it was decreased by 6% compared to sedentary rotenone group. GR activity was increased in trained rotenone group compared to DMSO, as well as compared to sedentary rotenone group (17% and 14%, respectively). Treadmill exercise increased SOD activity in 5% in the rotenone group compared to DMSO and 11% compared to sedentary rotenone group. Conclusão Data suggest that moderate aerobic exercise regulate oxidative stress parameters. Although exercise was able to decrease H2O2 in SN, the results of antioxidants enzymes are difficult to interpret suggesting that decrease in oxidative stress may be modulated by another enzymes. Nevertheless the exercise appears to be a therapeutic approach to delay Parkinson Disease features.

Palavras-chaves: Exercise, Oxidative stress, Parkinson, Rotenone

Resumo: 09.039

Somatosensory cortex neuronal firing rates during active tactile discrimination in rats

Autores

1KUNICKI, A. C. B.

1, FUENTES, R.

1,2,3,4, NICOLELIS, M.

1, MORYA, E.

1 Pós-Graduação em

Neuroengenharia - IINN-ELS, 2 Biomedical Engineering - Duke,

3 Neuroengineering - Duke,

4

Neurobiology - Duke, 5 Psychology and Neuroscience - Duke

Apoio Financeiro: AASDAP, FINEP, INCT Incemaq, FAPERN, CAPES, CNPq

Resumo Introdução The barrel somatosensory cortex, which receives and processes tactile information from rat whiskers, is an excellent system to study the tactile input in the context of the precise laminar and columnar cortical organization. Objetivos Here we investigated the electrophysiology underlying the complex neuronal responses to stimuli in the rodent barrel cortex, while rats performed an active aperture discrimination task. Código de Experimentação Animal CEUA AASDAP 2012/01

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Código de Experimentação Humana Métodos Long-Evans rats were trained to discriminate between a wide or narrow aperture using only their large mystacial vibrissae to receive a water reward. Behavioral training consisted of three phases. In the first two phases, rats were trained to perform the basic procedure of the task. Phase 3 of training required rats to discriminate between different aperture widths to receive a water reward. In phase 1, rats were trained to poke their nose into either the left or right reward nose poke to receive a 50 ml water reward. In phase 2 of training, rats were trained to enter the center discrimination chamber, poke their nose into the center nose poke, and then back out into the outer reward chamber and poke their nose into either the left or right nose poke to receive a water reward. Phase 3 of training was similar to phase 2 except that, in this phase, rats had to discriminate between the wide and narrow apertures to receive a water reward. Resultados A total of 1.152 single units were recorded in 24 behavioral sessions from the 32 microelectrodes implanted in barrel cortex. We defined a trial as the 2-second period centered around the moment the rat broke the photo beam at the discrimination bars and compared the average firing rate before (anticipatory period: -1.0 > t < 0 s), during (discriminatory period: t > 0 < 1), and after the whiskers contacted the bars(t > 1). Statistical significance of neural responses was evaluated using a cumulative summed spike counts method (Neuroexplorer). Depending on the firing rate change, responses were classified as increased, decreased or multiphasic (i.e., a combination of rate increases and decreases). Statistically significant modulations of firing rates were found in a large proportion (72%) of neurons in all regions tested. This allowed us to quantify the variation in the ensemble mean firing rate during behavioral task. We found patterns of anticipatory firing modulations in 40.19% of the S1 units. The magnitude of anticipatory firing in S1 was 2.51 ± 0.1 spikes per trial, and its duration was 187.4 ± 12.93 ms. Conclusão Our results demonstrated the occurrence of anticipatory responses in the S1 neuronal activity, consistent with previous findings that suggest that anticipatory activity does not result from whisker or head movements, or from whiskers contacting the surfaces of objects in the recording box, but most probably arises from the peripheral input, which is able to modulate the overall neuronal activity from barrel cortex.

Palavras-chaves: Somatosensory cortex, tactile discrimination , firing rates

Resumo: 09.040

Decision between Cellular Survival or Death in Retinal Acute Degenerative Disorders

Autores 1SOUSA, É. D.

1, HIGA, G. S.

1, WALTER, L. T.

1, PASCHON, V.

1, KIHARA, A. H.

1 Núcleo de

Cognição e Sistemas Complexos - UFABC

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq, UFABC

Resumo

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Introdução The voltage-dependent anion channel (VDAC) is a mitochondrial porin family that comprises three isoforms. VDAC1, the most abundant, is located in the outer mitochondrial membrane, permitting the communication of the organelle with cytosol. In diseases, VDAC1 receives signals for cellular death and survival and there are many evidences that this protein, through oligomerization, allows passage of Cytochrome c, an essential element for apoptosis induction. It is known that VDAC1 acts in apoptosis induction in neurodegenerative disorders, nevertheless, its therapeutic potential is underestimated in neurodegenerative diseases, especially in acute disorders. Objetivos Evaluating VDAC1 gene expression, protein abundance and distribution and its mechanisms of control in the retina after mechanical trauma. Código de Experimentação Animal CEUA.069/2012 Código de Experimentação Humana Métodos This study was approved by the Ethics Committee in Animals Use of the Institute of Biomedical Sciences of University of São Paulo (CEUA.069/2012). Male rats ( Rattus norvegicus ) with two months and approximately 400 g were anesthetized with ketamin (87 mg/kg) and xylazin (13 mg/kg) and mechanical injuries were performed in their ocular globes with an insulin needle (28-gauge, 12.7 mm) and euthanized with lethal dose of urethane in five periods after lesion (2h, 6h, 1d, 3d and 7d). The retinas were rapidly dissected for Immunohistochemistry (n=4), Western Blot (n=6) and PCR Real Time (n=6). The RegRNA 2.0 software were used for evaluating motifs of regulation in Vdac1 mRNA, especially by microRNAs (miRNAs) and the gene network formed by VDAC isoforms, VDAC1 pseudogenes and miRNAs were modeled using the GeneNetwork server. Resultados VDAC1 gene expression was up-regulated in three (2.47 fold, p Conclusão VDAC1 rapidly answers the insult in the mechanical trauma at retina, a condition similar to retinal detachment. Because this protein is a point of convergence of death and survival signals and has important roles in the decision for cellular death, this regulation is important for tissue homeostasis after the injury, controlling secondary neuronal loss. All these data suggest that this protein could be a target for therapy in neurodegenerative diseases.

Palavras-chaves: Cell death, Neurodegeneration, Retina

Resumo: 09.041

Efeito atencional em tarefas de tempo de reação e o uso de uma condição neutra

Autores 1SAIS, F. A.

1, RIBEIRO-DO-VALLE, L.R.

1 Departamento de Fisiologia e Biofísica - ICB-USP

Apoio Financeiro: FAPESP

Resumo Introdução A maior parte dos estudos utiliza como medida do efeito atencional uma comparação entre os tempos de reação quando um estímulo precedente aparece na mesma posição de um estímulo alvo e os tempos de reação quando um estímulo precedente aparece em posição diferente daquela do estímulo alvo. No entanto, frequentemente os resultados desses estudos não permitem concluir se o efeito observado se deve a efeitos facilitadores ou inibidores do estímulo precedente sobre o processamento do estímulo alvo. Objetivos Para melhor compreender a natureza do efeito atencional observado em tarefas de tempo de reação, utilizamos nesse estudo uma condição neutra em dois experimentos. O Experimento 1 foi uma replicação de um resultado da literatura em que o efeito atencional é observado, com a utilização de posições demarcadas na tela; o Experimento 2 foi uma replicação de um resultado do nosso laboratório em que o efeito atencional não foi observado, quando não utilizamos posições demarcadas na tela. O objetivo era verificar como o estímulo precedente afeta os tempos de resposta nos dois experimentos em relação à condição neutra. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana 1027/CEP Métodos Parecer 1027/CEP da Comissão de Ética em Pesquisas com Seres Humanos do ICB/USP. Utilizamos 10 voluntários no Experimento 1 (6 homens e 4 mulheres, idade média 26,8 anos) e 9 voluntários no Experimento 2 (5 homens e 4 mulheres, idade média 24,11 anos). O procedimento foi adaptado a partir do experimento clássico de Folk et al. (J Exp Psychol Hum Percept Perform.; 18, 1030, 1992), com a adição de uma condição neutra como controle. No Experimento 1 havia quadrados demarcando os locais de aparecimento dos estímulos, no Experimento 2 os estímulos foram apresentados numa tela com fundo preto, sem demarcações. Resultados No Experimento 1 observamos uma diferença média entre os tempos de reação na condição mesma e diferente de 33 ms (e.p.m. = 2, p=0,0008), entre mesma e neutra de 14 ms (e.p.m. = 2, p=0,06) e entre neutra e diferente de 19 ms (e.p.m. = 2, p=0,02) e, no Experimento 2, uma diferença média entre mesma e diferente de 14 ms (e.p.m. = 2, p=0,07), neutra e mesma de 1 ms (e.p.m.=2, p=0,9) e neutra e diferente de 13 ms (e.p.m. = 2, p=0,04). Conclusão Quando utilizamos demarcações, há um efeito atencional significativo, e observamos tanto um efeito de custo como um efeito de benefício do estímulo precedente. Quando não utilizamos demarcações, o estímulo precedente parece exercer apenas um efeito de custo significativo. Uma vez que existe um custo de reorientação da atenção para o local de aparecimento do estímulo alvo, esse resultado indica que a atenção pode ser mobilizada pelo estímulo precedente na ausência de demarcações. No entanto, o efeito de benefício não é observado, possivelmente devido a um efeito inibitório do estímulo precedente sobre o processamento do estímulo alvo quando ambos aparecem no mesmo local.

Palavras-chaves: atenção, atenção visual, atenção espacial

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