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Resumo: 26.001

INFLUÊNCIA DO LASER DE BAIXA POTÊNCIA NA VIABILIDADE DE CÉLULAS MUSCULARES SUBMETIDAS À LESÃO POR VENENO DA SERPENTE BOTHROPS JARARACUSSU.

Autores 1SILVA, C. A. A. D.

1, ROCHA, C. R.

1, SILVA, L. M. G.

1, FERRARI, R. A. M.

1, ZAMUNER, S. R.

1 Programa de Mestrado e Doutorado em Ciências da Reabilitação - UNINOVE

Apoio Financeiro: Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP).

Processo:2011/04660-0 e 2011/14376-7.

Resumo Objetivos O presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito do laser de baixa potência na viabilidade de células musculares submetidas à lesão por veneno da serpente Bothrops jararacussu. Métodos As células musculares de linhagem C2C12 foram cultivadas em meio de cultura DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino e incubadas em estufa a 37ºC e 5 % de CO2 por 24 horas para adesão celular. Após esse período foi realizado o ensaio de curva dose-resposta, em que as células receberam o veneno da serpente Bothrops jararacussu nas dosagens 1, 6, 12.5, 25 e 50 µg/mL e incubadas por 15, 30 e 60 minutos. No ensaio de curva dose-resposta avaliamos a viabilidade e o descolamento celular pelo método MTT e Cristal Violeta, respectivamente. Para a análise da influência do laser de baixa potência, utilizamos o ensaio de viabilidade, no qual as células foram irradiadas imediatamente após a adição do veneno (12,5 µg/mL), de forma pontual por 13 segundos, nos comprimentos de onda 685nm e 830 nm, usando a densidade de energia 4 J/cm2, potência 100 mW e incubadas por 15, 30 e 60 minutos. As células que não receberam veneno e nem a irradiação serviram como controle. A viabilidade celular foi analisada utilizando o leitor de Elisa e os dados submetidos à análise estatística ( p < 0,05 ANOVA/Tukey). Resultados Nossos resultados demonstraram que no ensaio de curva dose-resposta o veneno causou uma diminuição na viabilidade celular nas doses 12.5, 25 e 50 µg/mL de forma dose e tempo-dependente quando comparado ao grupo controle. Verificou-se também um aumento na porcentagem de descolamento celular de forma dose e tempo-dependente nos grupos que receberam o veneno e este efeito foi acentuado nas dosagens 25 e 50 µg/mL promovendo 100% de descolamento celular nos períodos de 30 e 60 minutos. O laser de baixa potência aumentou a viabilidade celular em 90% e 100% de mioblastos C2C12 nos comprimentos de onda de 685nm e 830 nm no período de 15 minutos de incubação e 86% e 92% em ambos comprimentos de onda, respectivamente no período de 30 minutos após a adição do veneno. Entretanto no período de 60 minutos houve aumento na viabilidade celular em 54% apenas no comprimento de onda 830 nm. Conclusão O veneno da serpente Bothrops jararacussu é citotóxico para as células musculares de maneira dose e tempo-dependente e o laser de baixa potência foi capaz de proteger as células musculares C2C12 contra a lesão causada pelo veneno. A utilização do laser de baixa potência deve ser considerada como uma abordagem terapêutica potencialmente útil para o tratamento dos efeitos locais de acidentes botrópico.

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Resumo: 26.002

Long-term diet exposure to cadmium increases the anxiety-like behavior in rats

Autores

1COSTA, P. *

2, GONÇALVES, J. F. **

1, CARVALHO, F. B. **

1, RIBEIRO, D. A. **

1,

ABDALLA, F. H. ** 1, GIRARDI, B. A. *

1, FERREIRA, R. D. *

1, RUBIN, M. A.

1, SCHETINGER,

M. R. C. 1, MORSCH, V. M.

1 Departamento de Química - UFSM,

2 Departamento de Bioquímica -

UFRGS

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, Fapergs

Resumo Objetivos The objective of this study was to investigate whether Cd intoxication would affect anxiety performance of rats subjected to long-term exposure to diet with low levels of Cd salt or with Cd from contaminated potato tubers measured on elevated plus maze tests. Métodos Potato plantlets ( < i>Solanum tuberosum L., cv. Macaca) for tissue culture were obtained from the Potato Breeding and Genetics Germplasm Program, Universidade Federal de Santa Maria, RS, Brazil. CEUA 031/2011. Male Wistar rats (3-week-old weighing 85.5±5.3 g) from the Central Animal House of the Universidade Federal de Santa Maria (UFSM) were randomly distributed among the six experimental groups (10 rats per treatment) and fed with the different diets during 5 months: control (only diet), pot (10% of diet composed of tuber powder from potatoes grown without Cd), pot + Cd (10% of diet composed of tuber powder from potatoes grown with Cd), 1, 5 or 25 mg/kg Cd (diet mixed with 1, 5 or 25 mg/kg of CdCl2 salt dissolved in water). Anxiolytic-like behavior was evaluated using the task of the elevated plus maze as previously described Frussa-Filho et al. and Rubin et al. (Psychopharmacol. 147; 168-73, 1999; Braz. J. Med. Biol. Res. 33; 1069-73, 2000). Statistical analysis were analyzed evaluated using one-way ANOVA, followed by Student–Newman–Keuls (SNK), where p < 0.05 was considered to represent a significant difference in all experiments. Resultados Anxiety studies using an elevated plus maze showed a lower anxiety in rats fed potato diet as these rats spent more time in the open arms (10.7±3.3, 83% increased), spent less time in the closed arms (168.2±13.1; 27% decreased), and entered the open arms more times (2.3±0.5; 62% increased) compared with those of the other groups (5.8±2.1; 229.4±5; 1.4±0.5; respectively). On contrary, rats fed 25 mg/kg Cd diet showed a higher anxiety as these rats spent less time in the open arms (0.6±0.3; 89% decreased), spent more time in the closed arms (269.4±4.9; 17% increased), and entered the open arms less times (0.2±0.1; 86% decreased), compared with those of the other groups (5.8±2.1; 229.4±5; 1.4±0.5; respectively). There were no significant alterations in the number of entries in the closed arms and also, in the total number of entries in arms among the experimental groups. Conclusão Taken together, although all the proposed mechanisms by which Cd especially affects behavior continue to engender controversy, from the present study it is clear that long-term exposure to diet with 25 mg/kg Cd salt was harmful to animals as observed by enhanced anxiety-like behavior displayed by Cd-intoxicated rats. Moreover, additional studies about potato tubers would be desirable to determine its influence on anxiety process since there are scarce reports about the anxiolitic properties exhibited by this plant.

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Resumo: 26.003

Papel protetor da hidroxiapatita sobre o tecido ósseo de ratos contaminados com chumbo

Autores 1PASTOR, F. A.C.

1, WANG, C.C.

1, FERREIRA, J.A.

1, FABRÍCIO, V.

1, BOGNI, F. H.

1,

NONAKA, K. O. 1, RUFFONI, L. D.G.

1, NONAKA, K.O.

1 Ciências Fisiológicas - UFSCar

Apoio Financeiro: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico

Resumo Objetivos Chumbo (Pb) é um poluente ubíquo no ecossistema cuja distribuição ambiental é principalmente antropogênica, oriunda da queima de combustíveis fósseis, mineração e fabricações industriais diversas. Há pouco conhecimento do envolvimento do Pb e seus compostos sobre o metabolismo ósseo bem como das potenciais terapias quelantes para quadros de contaminação relacionadas ao chumbo. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações ósseas causadas pelo acetato de chumbo correlacionando-as aos efeitos de quelação da hidroxiapatita em ratos adultos contaminados com acetato de chumbo. Métodos Foram analisados os parâmetros biomecânicos ósseos. Os animais foram distribuídos em 4 grupos com 8 ratos cada: controle (S), tratados com salina 0,9% (0,1 ml/100g MC), hidroxiapatita (H), tratados com hidroxiapatita (100mg/kg MC), contaminado (C), tratados com acetato de chumbo (250mg/kg MC), contaminado + hidroxiapatita (CH), tratados com acetato da chumbo (250mg/kg MC) e hidroxiapatita (100mg/kg MC), 1 vez por semana, por 8 semanas, pelo método de gavagem gástrica. As propriedades biomecânicas dos fêmures foram obtidas pelo teste de flexão a três pontos e das quintas vértebras lombares pelo teste de compressão. Os dados obtidos em cada grupo (média ± desvio padrão) foram comparados entre si por meio do teste paramétrico One Way Anova e o teste de comparações múltiplas Bonferroni. Protocolo do comitê de ética: 005/2008-UFSCar. Resultados Para o parâmetro biomecânico carga máxima (em N) de fêmures e vértebras (S:143,6±12,08; H:145,0±8,72; C:127,1±8,33; CH:141,9 ± 7,51 e S:171,3±36,49; H:172,1±46,81; C:98,1±10,31; CH:153,3±27,23, respectivamente) houve redução significativa do grupo contaminado em relação a todos os outros grupos: controle, hidroxiapatita e contaminado + hidroxiapatita. Para o parâmetro rigidez dos fêmures (S:300,6±23,37; H:289,9±22,95; C:258,4±18,52; CH:291,14±25,88) houve redução significativa do grupo contaminado em relação ao grupo controle e contaminado + hidroxiapatita e da rigidez das vértebras (S:442,1±70,78; H:498,9±110,38; C:382,7±17,63; CH:458,0±80,38) houve redução, entretanto não significativa do grupo contaminado em relação a todos os outros grupos: controle, hidroxiapatita e contaminado + hidroxiapatita. Portanto, houve redução dos parâmetros biomecânicos do grupo contaminado em relação aos grupos controle e hidroxiapatita, sendo importante ressaltar que na comparação entre os grupos contaminado+hidroxiapatita e controle, não houve diferença significativa. Conclusão A dose de 250 mg de acetato de chumbo/kg MC provocou redução da resistência óssea de fêmures e vértebras analisadas. O tratamento com 100 mg/kg MC de hidroxiapatita preveniu os efeitos deletérios da contaminação com chumbo na dose proposta. Portanto, os resultados apontam a hidroxiapatita como potencial agente quelante no tratamento da contaminação com chumbo, evitando os prejuízos à qualidade do tecido ósseo provocadas por este elemento.

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Resumo: 26.004

Analysis of oxidative effects in the inflammatory response of trachea in rats exposed to different formaldehyde concentrations

Autores 1LIMA, L. F.

1, MURTA, G. L.

1, DINIZ, M. F.

1, LEAL, S. F.

2, SILVA, M. E.

2, LIMA, W. G.

1,

BEZERRA, F. S. 1 Ciências Biológicas (DECBI) - UFOP,

2 Escola de Nutrição - UFOP

Apoio Financeiro: UFOP

Resumo Objetivos The current study aimed to evaluate inflammatory process and oxidative damage caused to trachea in animals exposed to formaldehyde, a toxic substance. Methods: The study was approved for the Commission of Ethics in the Use of Animals of the Federal University of Ouro Preto (CEUA 2011/01). Métodos Male Fischer rats (n = 28), adults, 300 – 400 grams, were divided in four groups: control (GC), exposed to ambient air and groups with the following formaldehyde solutions: 1% (FA1), 5% (FA5) and 10% (FA10). A ultrasonic nebulizer (Ultra-Relief Inhaler Multipower - Unique Group) coupled to a chamber was used to produce formaldehyde 1%, 5% and 10% air suspension during twenty minutes, three times per day during five days. After twenty four hours last exposition animals were sacrificed and trachea collected for oxidative damage analysis (reactive substances to thiobarbituric acid - TBARS), as well as semi-quantitative histological analysis of the cellular influx. The normality of all data has been tested using the Kolmogorv-Smirnov test. Data were expressed as mean ± SEM and analyzed by Prism 5.0 software. For statistical analysis were used table of variance ANOVA and post Tukey test. CEUA 2011/01 Resultados The analysis of lipid peroxidation (nmol/mg protein) in trachea showed an increase in FA1 (0,45 ± 0,05 ) and in FA5 (0,48 ± 0,10 ) in relation to GC (0,16 ± 0,02) and to FA10 (0,2 ± 0,02), (p=0,0017). Semi-quantitative histological analysis revealed small inflammatory focus in animals exposed to formaldehyde. Conclusão Preliminary results indicate potential toxicity of formaldehyde by inducing inflammatory and oxidative processes in trachea. Further analysis such as activity of antioxidant enzymes are being conducted to understand the inflammatory mechanisms associated with exposure to formaldehyde.

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Resumo: 26.005

MECANISMO DE TOXICIDADE DA ABAMECTINA NO FÍGADO DE RATO

Autores 1,2

GUELFI, M. 2, MEDEIROS, H. C. D.

2, MAIOLI, M. A.

2, MINGATTO, F. E.

1 Ciências Biológicas

- UNIFADRA, 2 Laboratório de Bioquímica Metabólica e Toxicológica (LaBMeT) - Unesp-Dracena

Apoio Financeiro: FAPESP

Resumo Objetivos Estudar a toxicidade da abamectina (ABA) sobre o fígado de rato avaliando os efeitos sobre a bioenergética e o sistema antioxidante em homogenato de fígado. Métodos Todos os procedimentos foram aprovados pela Comissão de Ética em Experimentação Animal do Campus de Dracena (Protocolo 03/2010). Ratos Wistar machos com peso entre 200 e 240 g foram submetidos a diferentes tratamentos, usando diferentes vias de aplicação, subcutânea e oral, nas concentrações de 5 e 50 mg/kg, respectivamente, e o período de exposição variou de 24 h (oral) a 21 dias (subcutânea). Foram formados quatro grupos de 6 animais: G1: recebeu óleo de gergelim (1 mL/kg) por gavagem e permaneceu em jejum por 24 h; G2: recebeu ABA (50 mg/kg) preparada em óleo de gergelim e permaneceu em jejum por 24 h; G3: recebeu injeção subcutânea de dimetilsulfóxido (DMSO) (1 mL/kg) durante 21 dias; G4: recebeu ABA (5 mg/kg) dissolvida em DMSO durante 21 dias. Os animais foram eutanasiados por decapitação, sendo coletadas amostras de sangue e fígado. A partir do sangue foi obtido o soro e o fígado foi homogeneizado em homogeneizador tipo Potter-Elvehjem. No soro foram avaliadas as atividades das enzimas alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST) por meio de “kit” comercial para monitorar a citotoxicidade. No homogenato foram avaliados: nível de glutationa reduzida (GSH) e glutationa oxidada (GSSG) (Anal. Biochem. 74:214, 1976); lipoperoxidação (Methods Enzymol. 52:302, 1978); quantidade de ATP utilizando o complexo enzimático luciferina-luciferase (Eur. J. Biochem. 67:1, 1976) e nível NADPH monitorado por alterações em sua fluorescência. Resultados A atividade da ALT do grupo tratado G2 (31,9 ± 2,7 U/L) mostrou-se estatisticamente diferente (P < 0,05) em relação ao controle G1 (23,95 ± 3,28 U/L), e não houve diferença entre a atividade da AST desses grupos (G1, 137,5 ± 11,5 e G2, 132,9 ± 14,98 U/L). No grupo tratado G4 a atividade da ALT (36,42 ± 8,33 U/L) não apresentou diferença em relação ao controle G3 (41,76 ± 2,28 U/L), enquanto que a atividade da AST foi significativamente diferente (P < 0,05) entre esses grupos (G3, 125,2 ± 23,5 e G4, 157,6 ± 16,5 U/L). A ABA não promoveu alteração significativa no nível de GSH no fígado dos animais tratados em relação ao grupo controle em nenhum dos tratamentos (G1, 1,17 ± 0,26 e G2, 1,34 ± 0,22; G3, 1,63 ± 0,10 e G4, 1,57 ± 0,13 nmol/mg proteína),indicando que o fármaco não induz a oxidação da GSH gerando seu homodímero GSSG. Esse resultado foi confirmado pela ausência de efeito dos tratamentos em relação ao nível de GSSG (G1, 0,14 ± 0,01 e G2, 0,12 ± 0,02; G3, 0,18 ± 0,02 e G4, 0,17 ± 0,01 nmol/mg proteína). Os níveis de NADPH não diferenciaram entre si em nenhum dos tratamentos (G1, 20,27 ± 4,19 e G2, 18,72 ± 1,25; G3, 18,95 ± 1,02 e G4, 16,58 ± 2,70 URF). A ABA estimulou a peroxidação dos lipídeos de membrana apenas no tratamento 5 mg/kg por 21 dias com aplicação subcutânea (G1, 2,39 ± 0,19 e G2, 2,58 ± 0,30; G3, 1,39 ± 0,20 e G4, 1,72 ± 0,05 nmol/mg proteína). A produção de ATP não foi afetada pela ABA nas doses e tratamentos testados (G1, 2,09 ± 0,40 e G2, 2,0 ± 0,34; G3, 1,95 ± 0,11 e G4, 1,96 ± 0,22 nmol/mg proteína). Conclusão Os resultados indicam que a ABA é capaz de provocar toxicidade ao fígado de ratos in vivo e que os efeitos são dependentes da dose e via de administração utilizada, e ainda, que a peroxidação dos lipídios de membrana pode ser um dos mecanismos envolvidos.

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Resumo: 26.006

EFEITO DO EXTRATO AQUOSO DE FOLHAS DE Indigofera suffruticosa SOBRE OS TÚBULOS RENAIS DE CAMUNDONGOS PORTADORES DE SARCOMA 180.

Autores 1*SILVA, I. B. D.

1, LIMA, I. R.

1, LEITE, R. M. P.

1, VIANA, M. T.

1, LEITE, S. P.

1 Departamento

de Histologia e Embriologia - UFPE/PE

Apoio Financeiro: CNPq

Resumo Objetivos Investigar o efeito do extrato aquoso de folhas de I. suffruticosa sobre a histomorfometria dos túbulos renais de camundongos portadores de sarcoma 180. Métodos Camundongos albinos suíços (Mus musculus), machos, adultos-jovens, 60 dias de idade, pesando em média 30 a 40g, foram divididos em 3 grupos de 6 animais: G1-animais portadores de Sarcoma 180 tratados com extrato aquoso (50 mg/kg, via intraperitoneal (ip.)), G2-animais portadores do sarcoma 180 tratados com salina (15 ml/kg, via ip.) e G3-animais sem sarcoma 180 tratados com salina (15 ml/kg, via ip.). Para induzir a forma ascítica do sarcoma 180 nos grupos G1 e G2, foi injetada na área axilar direita dos animais 0,3 ml (aproximadamente 3x10 6 de células cancerígenas). Após 48 horas de implantação tumoral, o tratamento foi iniciado durante 7 dias consecutivos com extrato aquoso (50 mg/kg; i.p.) no grupo G1, enquanto os grupo G2 e G3 receberam salina (15 ml/kg). Após o tratamento, os animais foram pesados, eutanasiados por deslocamento cervical e fragmentos dos tecidos renais dos grupos analisados foram fixados em álcool 70% e corados através da técnica de Hematoxilina e Eosina (H.E.). A observação histológica das preparações e a obtenção das fotomicrografias foram realizadas através do microscópio óptico com câmera acoplada. As imagens foram projetadas e ampliadas apresentando um aumento final de 790µm. A análise morfométrica dos perímetros dos túbulos proximais renais foi realizada usando o software SCION. Para as análises estatísticas foi aplicado o teste t de Student ( p < 0,05) e os dados foram representados pela média e desvio padrão. Os experimentos foram realizados com a aprovação do comitê de ética em experimentação animal da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) sob ofício de número 34/05 de julho de 2005. Resultados Não houve alterações histológicas nos túbulos renais dos grupos G1, G2 e G3. Quando comparados os perímetros dos túbulos proximais renais dos grupos (G1 x G2 p = 0,90), (G1 x G3 p = 0,63) e (G2 x G3 p = 0,58) não foi observado diferença estatística. Conclusão O tratamento sub-crônico com o extrato aquoso de folhas de I. suffruticosa na dose de 50 mg/kg (ip) não mostrou alterações histológicas nos túbulos renais dos camundongo portadores de sarcoma 180.

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Resumo: 26.007

PAPEL DA MITOCÔNDRIA E DA BIOTRANSFORMAÇÃO NA TOXICIDADE DA ABAMECTINA EM HEPATÓCITOS ISOLADOS DE RATO

Autores

1MINGATTO, F. E.

1, MAIOLI, M. A.**

1, MEDEIROS, H. C. D.*

2,1, GUELFI, M.*

1 Laboratório de

Bioquímica Metabólica e Toxicológica (LaBMeT) - Unesp-Dracena, 2 Ciências Biológicas -

UNIFADRA

Apoio Financeiro: FAPESP

Resumo Objetivos Caracterizar os mecanismos bioquímicos de ação da abamectina (ABA) sobre parâmetros relacionados à bioenergética em hepatócitos isolados de rato e averiguar se o processo de biotransformação altera a toxicidade do fármaco. Métodos O presente trabalho foi aprovado pela Comissão de Ética em Experimentação Animal do Campus de Dracena (Protocolo 05/2010). Os hepatócitos foram isolados de ratos Wistar machos com peso entre 200 e 240 g por meio de perfusão com colagenase IV. Em alguns experimentos (potencial de membrana, concentração intracelular de ATP e viabilidade celular) os hepatócitos foram incubados com concentrações de ABA que variavam de 25 a 100 µM na ausência ou presença de 100 µM de proadifen, um inibidor das enzimas do citocromo P450, durante 120 min. A respiração mitocondrial foi monitorada utilizando um eletrodo medidor de oxigênio do tipo Clark. O potencial de membrana foi avaliado por meio da sonda fluorescente tetrametilrodamina metil éster. A concentração intracelular de ATP foi determinada pelo sistema enzimático luciferina-luciferase. Resultados Nas concentrações 5, 10, 15 e 25 µM, a ABA apresentou inibição dose-dependente significativa no consumo de oxigênio no estado 3 da respiração mitocondrial (n=5) tanto em células energizadas com substrato do complexo I da cadeia respiratória (glutamato e malato) (42,46 ± 2,25 nmol de O2/10 6 células para o controle; 28,35 ± 2,05, 25,19 ± 1,77, 21,94 ± 1,41 e 19,72 ± 1,35 nmol de O2/10 6 células para as concentrações 5, 10, 15 e 25 µM, respectivamente) como em células energizadas com substrato do complexo II (succinato) (59,56 ± 1,22 nmol de O2/10 6 células para o controle; 50,23 ± 3,24, 28,82 ± 1,61, 22,38 ± 1,88 e 19,86 ± 2,96 nmol de O2/10 6 células para as concentrações 5, 10, 15 e 25 µM, respectivamente). A ABA inibiu a formação do potencial de membrana dos hepatócitos (n=6) sendo o início do efeito observado, tanto em hepatócitos com metabolismo normal como nos inibidos por proadifen, aos 30 min de incubação nas concentrações de 100 µM (80,06 ± 6,44% do controle) e 50 µM (87,84 ± 3,28% do controle), respectivamente, sendo a redução máxima observada aos 120 min na concentração 100 µM (56,63 ± 4,30% do controle) para células normais e 75 µM (44,27 ± 4,79% do controle) para os hepatócitos tratados com proadifen. A diminuição da concentração intracelular de ATP (n=4) em células normais teve início aos 60 min (19,89 ± 1,42 nmol de ATP/10 6 células para o controle; 6,63 ± 0,54 nmol de ATP/10 6 células para 100 µM), atingindo o efeito máximo aos 120 min (20,08 ± 1,5 nmol de ATP/10 6 células para o controle; 0,7 ± 0,25 nmol de ATP/10 6 células para 100 µM), já para células tratadas com proadifen o início da redução da concentração de ATP ocorreu aos 30 min (13,05 ± 1,04 nmol de ATP/10 6 células para o controle; 5,52 ± 0,83 nmol de ATP/10 6 células para 100 µM) atingindo efeito máximo aos 60 min (12,88 ± 0,19 nmol de ATP/10 6 células para o controle; 0,36 ± 0,12 nmol de ATP/10 6 células para 100 µM). Conclusão A ação citotóxica da ABA nos hepatócitos isolados de rato ocorre por meio da inibição da bioenergética mitocondrial, alterando a homeostase intracelular devido à diminuição da quantidade de ATP disponível para os processos dependentes de energia. Além disso, o metabolismo do fármaco reduz sua toxicidade, pois os efeitos da ABA nos hepatócitos incubados com proadifen foram mais pronunciados quando comparados aos observados nas células com atividade metabólica normal.

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Resumo: 26.008

GALLIC ACID PROTECTS VACUOUS CHEWING MOVEMENTS INDUCED BY RESERPINE IN RATS

Autores

1RECKZIEGEL, P.

1, FERRARI, M. C.

2, PEROZA, L. R.

1, SCHAFFER, L. F.

1, BÜRGER, M. E.

1,

FACHINETTO, R. 1, BAUERMANN, L. D. F.

1 DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA E

FARMACOLOGIA - UFSM, 2 DEPARTAMENTO DE QUÍMICA - UFSM

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS, FIPE-UFSM.

Resumo Objetivos Involuntary movements are related to several diseases and pharmacological conditions, like Parkinson’s disease and tardive diskynesia, respectively. It is believed that oxidative stress is related to the development of these movements. Because it has not an efficient treatment for them, several compounds have been tested in animal models of involuntary movements. Gallic acid (GA) is a natural product of tannins hydrolysis with potent antioxidant, antimutagenic and anticarcinogenic activity. Here we evaluated the action of GA in an animal model of involuntary movements (vacuous chewing movements, VCMs) induced by reserpine in rats. Métodos Male Wistar rats weighing 250±20g (about 2-month-old) were treated with reserpine (1 mg/Kg, i.p.) or saline (1 mL/Kg, i.p.) for 3 days, followed by 3 days of treatment with GA (13.5 mg/Kg, p.o.) or water (1 mL/Kg, p.o.). Thus, the experimental groups of the present study were: control (C, n=5), reserpine (R, n=9), GA (n=6) and reserpine+GA (R+GA, n=10). Twenty-four hours after the last treatment, VCM frequency of the animals was evaluated during 6 min. Then, the animals were euthanized by decapitation. Brain was dissected and striatum and cortex were used to biochemical assays. This protocol was submitted and approved by Ethical Intern Commission of UFSM sob number 010/2012. Data were analyzed by two-way ANOVA followed by Duncan’s test ( p < 0.05). Results are expressed as mean±S.E.M. Resultados It was observed an increase in VCM frequency in the animals treated with reserpine in relation to the control ones (C=6.4±1.0, R=32.4±4.5, p < 0.05). GA protected this increase in VCM frequency induced by reserpine (R+GA=16.1±2.2), and it did not change VCM frequency per se (GA=10.5±2.4). In relation to the biochemical assays, any difference was observed in 2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate oxidation (DCF, a parameter of reactive oxygen species levels) (C=70±11, R=97±16, GA=75±7 and R+GA=67±3 in striatum; C=76±4, R=80±6, GA=84±8 and R+GA=74±3 in cortex - results are expressed as DCF oxidation) and in proteic thiol (C=60±4, R=57±1, GA=57±4 and R+GA=61±2 in striatum; C=64±2, R=62±1, GA=64±2 and R+GA=65±2 in cortex - results are expressed as μmol proteic thiol/ g tissue) and non-proteic thiol (C=7.6± 0.5, R=8.2±0.4, GA=7.7±0.4 and R+GA=7.2± 0.7 in striatum; C=8.5±0.8, R=7.4±0.5, GA=7.7±0.8 and R+GA=8.4±0.7 in cortex - results are expressed as μmol non-proteic thiol/ g tissue) (non-enzymatic antioxidants) and in thiobarbituric acid reactive substances (C=15.7±1.6, R=12.2±1.0, GA=8.1±1.3 and R+GA=8.72±0.9 in striatum; C=11.5±0.8, R=12.2±1.0, GA=14.1±1.4 and R+GA=13.9±1 in cortex – results are expressed as nmol MDA/g tissue) (a parameter of lipid peroxidation) levels. Conclusão Reserpine was able to increase VCM frequency in the animals, and this event is probably not related to oxidative stress development. Gallic acid may have promissory use in the treatment of involuntary movements. More studies to investigate the mechanisms of involuntary movement development and gallic acid protective action are necessary.

FeSBE 2012

Resumo: 26.009

PERFORMANCE OF APOCYNIN ON THE INCREASE IN CONTRACTILE RESPONSE TO PHENYLEPHRINE IN RATS CHRONICALLY EXPOSED TO MERCURY

Autores

1RIZZETTI, D. A.

1, TORRES, J. G. D.

1, ESCOBAR, A. G.

1, PEÇANHA, F. M.

2, VASSALLO, D.

V. 1,2

, PEÇANHA, G. A. W. 1 LABORATÓRIO DE FISIOLOGIA - UNIPAMPA,

2 LABORATÓRIO

DE ELETROMECÂNICA CARDÍACA - UFES

Apoio Financeiro:

Resumo Objetivos The aim of this study was to investigate whether treatment with antioxidant apocynin, a selective inhibitor of NADPH oxidase, is able to prevent the effects caused by chronic intoxication by low concentrations of mercury in conductance vessels. Métodos Four groups of 8-week-old Wistar male rats (200 g) were treated for 30 days with: a) Mercury group - HgCl2 (treated with intramuscular injections – im - of HgCl2- 1st dose 4.6μg/kg, subsequent dose 0.07 μg/kg/day, i.m. to cover daily loss, (model described in Am J Physiol Heart Circ Physio, 295:1033, 2008); b) Control group - Ct (im injection with saline); c) Apocynin group - Apo (treated with 1.5mM of apocynin in drink water plus im injection with saline) and d) ApoHg group - treated with apocynin (1.5mM in drink water) plus HgCl2 (im injection). The vascular reactivity experiments were performed in an organ bath, where we analyzed the vasoconstrictor response to PHE in the presence and absence of endothelium, in the presence of non-selective COX inhibitor (indomethacin) and NOS inhibitor (L-NAME). Data were analyzed by Analysis of Variance (ANOVA) followed by a Bonferroni test. The research was approved by the Ethics Committee on Animal Use at the EMESCAM - Vitória, Brazil, with the protocol number 010/2011. Resultados Mercury increased the contractile response to PHE, increased the involvement of ROS, COX vasoconstrictor prostanoids and reduced the endothelial and NO participation. Co-treatment with apocynin did not prevent the increased contractile response to PHE elicited by mercury. However, this co-treatment increased endothelial and NO involvement, attenuated participation of ROS, but did not alter the COX vasoconstrictor prostanoids generation. Conclusão Mercury increases the vasoconstrictor response to PHE by reducing the contribution of endothelium, NO bioavailability and increases the involvement of ROS and COX constrictor prostanoids. Apocynin protects the vessel from the deleterious effects caused by NADPH oxidase, but not from those caused by COX, demonstrating two-way action.

FeSBE 2012

Resumo: 26.010

PROTECTIVE EFFECTS OF APOCYNIN ON THE OXIDATIVE DAMAGE CAUSED BY CHRONIC EXPOSURE TO LOW CONCENTRATIONS OF MERCURY

Autores

1TORRES, J. G. D.

1, RIZZETTI, D. A.

1, ESCOBAR, A. G.

1, PEÇANHA, F. M.

2, VASSALLO, D.

V. 1,2

, PEÇANHA, G. A. W. 1 LABORATÓRIO DE FISIOLOGIA - UNIPAMPA,

2 LABORATÓRIO

DE ELETROMECÂNICA CARDÍACA - UFES

Apoio Financeiro:

Resumo Objetivos The aim of this study was to investigate if apocynin (selective inhibitor of NADPH oxidase) treatment can prevent oxidative damage caused by mercury exposition. Métodos Four groups of 8-week-old Wistar male rats (200 g) were treated for 30 days with: a) Mercury group - HgCl2 (treated with intramuscular injections – im - of mercury chloride - 1st dose 4.6μg/kg, subsequent dose 0.07 μg/kg/day, i.m. to cover daily loss, according to the model described by Wiggers et al. in Am J Physiol Heart Circ Physio, 295:1033, 2008); b) Control group - Ct (im injection with saline); c) Apocynin group - Apo (treated with 1.5mM of apocynin in drink water) and d) ApoHg group - treated with HgCl2 (im injection) plus apocynin (1.5mM in drink water). We analyzed plasma levels of lipid peroxidation (TBARS) and thiol groups (SH). Data were analyzed by Analysis of Variance (ANOVA) followed by a Bonferroni test. The research was approved by the Ethics Committee on Animal Use at the EMESCAM - Vitória, Brazil, with the protocol number 010/2011. Resultados The HgCl2-treated group showed increased levels of plasma malondialdehyde (MDA) compared with controls (Ct:n=7 - 20.7±6.2 vs HgCl2:n=7 - 27.6±5.2 nmol/mL – p < 0.05), indicating increased lipid peroxidation. Apocynin treatment prevented the oxidative damage caused by mercury (Apo:n=6 - 25.9±9.2 vs ApoHg:n=9 - 20.6±7.0 nmol/mL). The mercury exposition plus co-treatment with apocynin increased levels of SH groups (Ct: n=7 - 41.5±5.5 vs ApoHg: n=7 - 64.9±9.6 nmol/mL – p < 0.01). Conclusão These results demonstrated for the first time that co-treatment with apocynin prevents oxidative stress caused by chronic exposition to small doses of mercury.

FeSBE 2012

Resumo: 26.011

PACIENTES COM ESCLEROSE MÚLTIPLA APRESENTAM ALTERAÇÃO NA ATIVIDADE DA ACETILCOLINESTERASE EM SANGUE TOTAL

Autores

1POLACHINI, C. R. N.

1, OLIVEIRA, L. S.

2, SPANEVELLO, R. M.

1, ZANINI, D.

1, THOMÉ, G. R.

1, BALDISSARELLI, J.

1, SCHETINGER, M. R. C.

1, MORSCH, V. M.

1 Departamento de

Química/Programa de Pós Graduação em Bioquímica Toxicológica - UFSM, 2 Programa de Pós

Graduação em Bioquímica e Bioprospecção - UFPel

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS

Resumo Objetivos A Esclerose Múltipla (EM) é uma doença inflamatória desmielinizante, caracterizada por neuroinflamação e neurodegeneração no sistema nervoso central. O presente estudo teve por objetivo verificar a atividade de uma das principais enzimas regulatórias do sistema colinérgico, a acetilcolinesterase(AChE, EC.3.1.1.7), através da sua análise em sangue total de pacientes com Esclerose Múltipla. Pelo fato da acetilcolina (ACh) estar relacionada com eventos anti-inflamatórios e sua concentração plasmática ser regulada pela atividade da AChE, considera-se relevante a avaliação de sua atividade em pacientes com EM. Métodos Foram selecionados 25 pacientes com diagnóstico clínico de EM e 25 controles. Amostras de sangue total foram coletadas através de punção venosa usando EDTA como anticoagulante e a atividade da AChE de sangue total foi determinada pelo método de Ellman et al.(Biochemical Pharmacology 7:88, 1961), modificado por Worek et al.(Clin Chim Acta.288:73,1999). A atividade da enzima foi medida através do quociente entre a atividade da AChE e o conteúdo de hemoglobina, sendo os resultados expressos em mU/μmol de sangue total. O protocolo para a realização desse experimento foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de Santa Maria,conforme parecer número 23081.007854/2007-44. Todos os indivíduos que participaram da presente pesquisa assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Para a análise estatística foi utilizado o programa Prisma,os dados com distribuição normal foram analisados pelo teste t de Student. Considerou-se um nível de significância de 5% ( p < 0,05). Resultados Os pacientes com EM apresentaram média de idade de 46,24±9,30 anos, sendo que 76% eram do sexo feminino. Já, no grupo controle a média de idade foi de 42,64±7,46 anos e 80% dos participantes eram mulheres. Os resultados demonstraram que a atividade da AChE em sangue total de pacientes com EM (449,5±21,49; p < 0,005) apresenta-se elevada quando comparada com indivíduos do grupo controle (384,5±17,82; p < 0,005). Conclusão Com o aumento da atividade da AChE em sangue total dos pacientes com EM a ACh é degradada mais rapidamente e por conseguinte, seus níveis plasmáticos diminuem. Sabendo-se que a ACh apresenta propriedades neuroprotetoras e anti-inflamatórias, esses efeitos benéficos da mesma não estariam sendo observados nos pacientes referidos anteriormente. Desse modo, o aumento na atividade da AChE pode facilitar a ocorrência de dano no tecido encefálico de pacientes com EM.

FeSBE 2012

Resumo: 26.012

ATIVIDADE DAS ENZIMAS QUE HIDROLISAM NUCLEOTÍDEOS DE ADENINA EM PLAQUETAS DE RATOS COM HIPOTIREOIDISMO INDUZIDO POR METIMAZOL

Autores

1BALDISSARELLI, J.

1, PELINSON, L. P.

1, SANTI, A.

1, MARTINS, C.

1, ZANINI, D.

1,

MURUSSI, C. 1, POLACHINI, C. R. N.

1, DIAS, G.

1, LORO, V. L.

1, SCHETINGER, M. R. C.

1

Departamento de Química - UFSM

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES

Resumo Objetivos O hipotireoidismo é uma patologia relativamente comum resultante da redução da síntese dos hormônios tireoidianos ou da ação destes nos tecidos, o que leva a uma significativa redução da sua performance física e mental. Os nucleotídeos de adenina ATP, ADP e AMP e o seu nucleosídeo adenosina são importantes moléculas sinalizadoras que regulam processos relacionados à tromboregulação, modulam respostas imunes e sinalizam vias que são importantes para o funcionamento e desenvolvimento do sistema nervoso (Burnstock, G. Clin. Med., v. 2, p. 45-53, 2002). A NTPDase hidrolisa ATP para ADP e este para AMP e a 5'-Nucleotidase hidrolisa o AMP, gerando adenosina, e assim, completa o metabolismo do ATP (ZIMMERMANN, H. Drug Dev. Res., 52:44-56, 2001). Dessa forma o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade das enzimas que hidrolisam nucleotídeos de adenina em plaquetas de ratos machos adultos com hipotireoidismo induzido por Metimazol. Métodos Todos os procedimentos com os animais foram aprovados pelo Comitê Interno de Ética em Experimentação Animal da Universidade Federal de Santa Maria – CIETEA/UFSM (protocolo sob o número: 029/2011). Foram utilizados ratos Wistar machos adultos (n=20) (150 – 250g) obtidos do Biotério Central da Universidade Federal de Santa Maria (Santa Maria, RS, Brasil). Os animais foram divididos em dois grupos: controle (n=10) e hipotireoidismo (n=10). O Metimazol foi administrado ad libitum na água de beber do grupo hipotireoidismo, a uma concentração de 0,02% durante os 30 dias de tratamento. O grupo controle recebeu somente água. Após o tratamento, os ratos foram submetidos à eutanásia e o plasma foi utilizado para a separação das plaquetas em que a dosagem da atividade das enzimas foi realizada. A indução do hipotireoidismo pelo metimazol foi confirmada por método imunoenzimático (AxSYM®), sendo que o grupo com hipotireoidismo apresentou níveis reduzidos de T3 e T4, quando comparado ao grupo controle. Resultados A análise estatística foi realizada por ANOVA de uma via seguida pelo teste de Duncan ( p < 0,05). A atividade da NTPDase (substrato ATP) foi significativamente maior no grupo II (24.97 ± 2.723) em relação ao grupo I (13.64 ± 1.247). A atividade da NTPDase (substrato ADP) foi significativamente maior no grupo II (10.98 ± 0.8167) em relação ao grupo I (5.744 ± 0.5768). E, a atividade da enzima 5’-nucleotidase (substrato AMP) foi significativamente maior no grupo II (7.206 ± 0.5788) em relação ao grupo I (2.802 ± 0.3352). Conclusão Observou-se que o hipotireoidismo induzido pelo Metimazol aumentou a hidrólise dos nucleotídeos de adenina em plaquetas. O aumento na hidrólise de ATP faz com que uma menor quantidade dessa molécula fique disponível no meio extracelular, podendo ocorrer uma diminuição da atividade metabólica do organismo. Além disso, o aumento na hidrólise dos nucleotídeos ATP, ADP e AMP pode elevar os níveis de adenosina, uma importante molécula protetora. Pode-se sugerir que esse aumento seja uma forma de compensação aos danos causados pela patologia ao organismo.

FeSBE 2012

Resumo: 26.013

OXIDANTS EFFECTS OF EXPOSURE TO CIGARETTE SMOKE DURING PREGNANCY IN THE LUNGS OF NEWBORN MICE

Autores 1CAMPOS, K. K.

1, DOURADO, V. A.

1, FERREIRA, B. S. B.

1, SILVA, M. E.

1, Pedrosa, M. L.

1,

LIMA, W. G. 1, BEZERRA, F. S.

1 DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLOGICAS - UFOP

Apoio Financeiro: FAPEMIG/UFOP

Resumo Objetivos Cigarette smoke contains a large variety of compounds, including many oxidants and free radicals that are capable of initiating or promotes imbalance oxidative associated several tissue damage. We aim to evaluate the enzyme activity and the lipid peroxidation in lung of mice C57BL6 newborn exposed to cigarette smoke in uterine life. Métodos Fifteen C57BL6 mice tree months old, weighing approximately 20g, were placed in two females per male in 5-day for mating. The female pregnancy was confirmed by vaginal plug and vaginal smear. Pregnant females were divided in two groups. The first group (CS) of five female was exposed three times a day to four cigarettes during 21 days. The exposition was performed in inhalation chamber for six minutes daily, tree times by day. The second, control group (CG), was composed of five female exposed to ambient air. Six newborn mice of CS and CG were euthanized after 24 hours of life. Lung fragments were collected and weight. The activity of catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) were determined by spectrophotometry. The lipid peroxidation was accessed by TBARS (Thiobarbituric acid reactive substances) assay. The dates were analyzed by Kolmogorov-Smirnov normality test and after T-student test in Prism software and the statistical significance level was 5%. CEUA 2010/47 Resultados The total mass of lung in CS and CG was not different. The corporeal mass of CS (1.18±0.02 g) was decreased compared with CG (1.29±0.06 g, p=0.0055). Anatomically was not observed changes in color and consistency of organ. The CAT (U/mg ptn) also was not different in CS (69.43±5.44) and CG (87.23±9.75; p < 0.05). The SOD (U SOD/mg ptn) activity was decreased in animals of CS (34.51±9.295 U SOD/mg ptn) compared with CG animals (73.54±14.86 U SOD/mg ptn; p=0.0001). The TBARS assay showed increase of lipid peroxidation in animals CS (1.12±0.34 U/mg ptn) compared with CG (0.70±0.12 U/mg ptn; p=0.046). Conclusão In our animal model, the uterine cigarette exposition changes the mice birth weight. Moreover the activity of antioxidant enzyme CAT also was not altered. On the contrary, the antioxidant activity of SOD was decreased in CS animals associated to higher tissue lung damage. We propose that cigarette smoke is able to promote several biochemical and histological changes with severe repercussions for the entire life of the person exposed.

FeSBE 2012

Resumo: 26.014

ATIVIDADE DA ACETILCOLINESTERASE EM LINFÓCITOS DE RATOS DIABÉTICOS TRATADOS COM ÁCIDO GÁLICO

Autores

1OLIVEIRA, L. S.

1, THOMÉ, G. R.

1, ZANINI, D.

1, SCHMATZ, R.

1, CARDOSO, A. M.

1,

POLACHINI, C. R. N. 1, MORSCH, V. M.

1, SCHETINGER, M. R. C.

1 Departamento de Quimica -

UFSM

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq e FAPERGS.

Resumo Objetivos O Diabetes Mellitus (DM) é uma doença metabólica crônica caracterizada por hiperglicemia associada à deficiência, absoluta ou relativa, na ação ou secreção da insulina. A ocorrência de processos inflamatórios e o envolvimento desses processos nas complicações diabéticas são foco de estudo na atualidade, sendo que, o envolvimento da enzima acetilcolinesterase (AChE) linfocitária apresenta destaque nesses eventos por seu importante papel na regulação desses processos.As terapias convencionais utilizada para DM apresentam o inconveniente de provocarem uma série de efeitos colaterais Neste contexto, destaca-se a utilização de compostos polifenólicos como o ácido gálico (AG), que apresentam eficácia semelhante aos fármacos antidiabéticos, possuindo poucos ou nenhum efeito colateral em comparação às drogas convencionais (Punithavathi,V.R et al. European Journal of Pharmacology 650465 –471,2011). Desta forma, o presente estudo, in vivo, teve por objetivo avaliar a atividade de enzima AChE em linfócitos de ratos diabéticos tratados com AG na dose de 30mg/kg/dia Métodos Neste experimento foram utilizados 20 ratos wistar machos, com aproximadamente 90 dias e peso médio de 200g. Os animais foram divididos aleatoriamente em quatro grupos (n=5): Grupo I, controle; Grupo II, AG 30mg/kg; Grupo III, diabético induzido com streptozotocina (DIS) 55mg/Kg; Grupo IV, DIS tratado com AG 30mg/kg. O período de tratamento foi de 21 dias e as administrações foram realizadas via gavagem.. Os animais foram mantidos em um ciclo de 12 horas claro/escuro e tiveram livre acesso à comida e água. Após o período de tratamento, os ratos foram anestesiados com halotano e submetidos à eutanásia. Os linfócitos foram separados segundo o método de BOYUM, A. (J. clin. Lab. Invest. 21; 77, 1968), e atividade da AChE foi determinada de acordo com Pilla et al.(Platelets 7;225– 230, sendo expressa em umol AcSCh/h/mg proteína. Os dados foram submetidos à análise de variância (One-way ANOVA), seguida pelo teste de Tukey .O p < 0,05 foi considerado para representar uma diferença significativa entre os grupos. Todos os dados foram expressos como média±S.E.M. CEUA 23081006211/2008-64. Resultados A atividade da AChE foi significativamente diminuída no grupo III (2,351±0,2646) quando comparada ao grupo I (7,977±0,8296)( p < 0,05). No entando, a atividade da AChE para os grupos II(7,334±1,498) e IV(5,998±2,072) não diferiram significativamente quando comparados ao grupo I (7,977±0,8296) ( p < 0,05). Conclusão Os resultados obtidos neste estudo sugerem que o DM promove significativa diminuição na atividade da AChE linfocitária e, desse modo, há um provável aumento dos níveis plasmáticos de acetilcolina (ACh). Esse evento pode ser justificado como um mecanismo compensatório do organismo, que é desenvolvido com o intuito de diminuir a intensidade dos processos inflamatórios, que são comumente verificados durante a progressão do DM, já que, a molécula de ACh apresenta importante atividade anti-inflamatória. Em contrapartida, quando o grupo de ratos Diabéticos foi tratado com AG foi possível observar que a atividade da AChE retornou aos níveis dos Controles, sendo possível inferir que a potente atividade anti-inflamatória do AG pode estar prevenindo a ocorrência dos processos inflamatórios observados no estado diabético e, assim, a sobrecarga sobre a atividade da AChE diminuiu.

FeSBE 2012

Resumo: 26.015

EFEITO DA ADMINISTRAÇÃO AGUDA DE DIFERENTES DOSES DE PARACETAMOL NA ATIVIDADE DAS TRANSAMINASES DE CAMUNDONGOS

Autores

1Nunes de Almada, C.**

1, ALMADA, C. N.**

1, RIBEIRO, S. A. *

1, LIMA, B. S. **

1, BEZERRA,

C. F. ** 3, SILVA, A. C. M.

2, MOTA, E. F.

1, MELO, D. F. D.

1 Departamento de Bioquímica e

Biologia Molecular - UFC, 2 Departamento de Biologia - UFC,

3 Departamento de Biologia - FIC

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES e FUNCAP

Resumo Objetivos Esse trabalho teve como objetivo comparar o comportamento das transaminases de camundongos submetidos à administração de diferentes doses de paracetamol. Métodos Camundongos "swiss" fêmeas pesando 25-30g, mantidos sob-regime alimentar conveniente, água ad libitum com ciclos de 12 horas no escuro e 12 horas no claro e condições de temperatura e umidade controlada foram usados. O protocolo do experimento foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa com Animal (CEPA) da UFC com número 93/2011. Os animais foram divididos em quatro grupos (n= 7/grupo) e tratados por via oral: Grupo 1 (controle) recebeu dose única de água destilada, grupos 2 (P250), 3 (P400) e 4 (P500) receberam dose única de paracetamol de 250, 400 e 500 mg/Kg dissolvido em água, respectivamente. Após 24 horas da administração do paracetamol, amostras de sangue foram coletadas pelo plexo retro-orbital e centrifugadas para obtenção de amostras de soro que foram usadas para as análises de ALT e AST usando kits enzimáticos (Lab test) de acordo com as instruções do fabricante. Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão e analisados usando o teste de Tukey ( p < 0,05). Resultados O paracetamol é uma droga amplamente utilizada como analgésico e antipirético, quando usada dentro dos limites de posologia, mostra-se segura. No entanto, o uso excessivo e inadequado desse medicamento pode levar a injúrias de diversos órgãos, principalmente o fígado. No presente estudo, os animais tratados com paracetamol exibiram uma elevação nas atividades de ALT e AST, quando comparados com o grupo controle. A elevação da atividade da ALT foi significativa nos grupos P250 e P400 (107,6 ± 16,4 unidades/mL; 131,6 ± 23,82 unidades/mL, respectivamente) em relação ao controle (85,79 ± 15,9 unidades/mL). O grupo P500 mostrou um aumento significativo tanto na atividade da ALT como na AST (136,5 ± 19,88 unidades/mL; 223,5 ± 20,48 unidades/mL, respectivamente) quando comparado com o grupo controle (85,79 ± 15,9 unidades/mL; 190,1 ± 20,62 unidades/mL, respectivamente). Estudos têm relatado que altas doses de paracetamol aumentam a atividade de aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT) no soro, que são biomarcadores séricos que avaliam a atividade hepática (Journal of Ethnopharmacology 120:226, 2008; Food Chemistry 125:719, 2011). Parece existir uma correlação entre a concentração da droga e a atividade das enzimas, com um comportamento dose dependente, as atividades enzimáticas elevaram-se com o aumento da dose de paracetamol, revelando os maiores valores para o grupo P500. Conclusão Houve diferenças nas atividades das enzimas transaminases (ALT e AST) dependendo da dose de paracetamol administrada.

FeSBE 2012

Resumo: 26.016

INFLUÊNCIA DAS VIAS DE SINALIZAÇÃO PKC, PKA E P38 MAPK NA REVERSIBILIDADE DA NEFROTOXICIDADE DA ANFOTERICINA B.

Autores 1FRANÇA, F. D.

1, FERREIRA, A. A.

2, TAGLIATI, C. A.

1, CHAVES, M. M.

1 Bioquímica e

Imunologia - UFMG, 2 Análises Clínicas e Toxicológicas - UFMG

Apoio Financeiro: FAPEMIG, PRPq/UFMG, CNPq e CAPES.

Resumo Objetivos Estudos detalhados das doses e do tempo de exposição de fármacos, juntamente com as observações da reversibilidade podem fornecer informações importantes sobre os mecanismos de toxicidade (Eisenbrand et al., 2002). Assim, o objetivo do trabalho foi avaliar se as vias de sinalização PKC, PKA e p38 MAPK estão envolvidas na capacidade das células em reverter a nefrotoxicidade ocasionada pela Anfotericina B. Métodos Foram preparadas 4 placas de 96 poços e as células renais BGM (5,0 x 103 células/poço) foram pré-incubadas por 30 minutos com os inibidores das vias de sinalização PKC (Calphostin C – 0.15 µM), PKA (H89 – 1 µM) e p38 MAPK (PD169316 – 10 µM). Em seguida, as células foram expostas a Anfotericina B (30 ug/mL) por 18 horas. Em seguida, as 4 placas foram lavadas com PBS e foram adicionados 200 uL de meio de cultura. Na primeira placa a avaliação da viabilidade celular foi realizada após 18 horas de incubação com a droga. Nas outras três placas a viabilidade celular foi analisada decorrida 24, 48 e 72 horas da retirada do fármaco. O método empregado foi o Vermelho Neutro. O objetivo foi comparar a capacidade de reversibilidade das células após 24, 48 e 72 horas da retirada da droga e verificar se as vias PKC, PKA e p38 MAPK estão envolvidas nesse processo. Resultados Com 18 horas de exposição à Anfotericina B a viabilidade celular foi de 60% e somente após 72 horas da retirada da Anfotericina B ocorreu um aumento significativo ( p < 0,05) da viabilidade celular, sendo que esta passou a ser 85%. Após 72 horas da retirada da Anfotericina B, quando as vias PKC e p38 MAPK estavam inibidas a viabilidade celular foi de 88% e 78% respectivamente e não houve diferença significativa quando comparada a viabilidade das células sem as vias inibidas nesse mesmo tempo. Entretanto, com a via PKA inibida a viabilidade celular foi de 68% ( p < 0,05). A análise estatística foi feita pelo teste de “Mann e Whitney”. Conclusão A nefrotoxicidade da Anfotericina B foi revertida somente após 72 horas da retirada do fármaco, sendo que a inibição das vias PKC e p38 MAPK não influenciam a capacidade de recuperação celular. Quando a via PKA estava inibida a recuperação celular foi prejudicada, o que mostra como tal via exerce influência na capacidade de recuperação das células diante dos efeitos tóxicos da Anfotericina B. A PKA participa da regulação do ciclo celular, proliferação e diferenciação (Bichet, 2006). Assim, as vias de sinalização celular atuam de diferentes maneiras na reversibilidade dos efeitos tóxicos da Anfotericina B.

FeSBE 2012

Resumo: 26.017

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE DO EXTRATO ETANÓLICO DE FOLHAS DE AZEITONA DA TERRA (Syzygium cumini L.)

Autores

1ALMADA, C. N.**

1, Nunes de Almada, C.**

1, ANDRADE, M. A. F. *

2, MATEUS, L. K. M. *

4,

SILVA, A. C. M. 2, TREVISAN, M. T. S.

3, MOTA, E. F.

1, MELO, D. F.

1 Departamento de

Bioquímica e Biologia Molecular - UFC, 2 Departamento de Química Orgânica e Inorgânica - UFC,

3

Departamento de Biologia - UFC, 4 Departamento de Biologia - FIC

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES e FUNCAP

Resumo Objetivos Esse trabalho teve como objetivo avaliar a toxicidade do extrato etanólico de folhas de Syzygium cumini (L.) quando administrado por via oral em animais. Essa planta tem origem na Índia e adaptou-se muito bem no Brasil, sendo popularmente conhecida como azeitona da terra, jambolão, ameixa preta, Jamun e Jamu. Métodos Como material vegetal, foi utilizado o extrato etanólico de folhas de azeitona da terra, fornecido pelo Departamento de Química Orgânica e Inorgânica da UFC. Camundongos "swiss" machos pesando 30 g, mantidos sob-regime alimentar conveniente, água ad libitum com ciclos de 12 horas no escuro e 12 horas no claro e condições de temperatura e umidade controlada foram usados. O protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa com Animal da UFC com número 20/2012. Os animais foram divididos em seis grupos (n=10/grupo) e receberam diferentes tratamentos por via oral durante 8 dias consecutivos: Grupo 1 (controle) recebeu 200 µL de solução salina; Grupo 2 recebeu 200 µL de DMSO 5%; Grupos 3 (EE150), 4 (EE300), 5 (EE600) e 6 (EE1200) receberam 200 µL de extrato etanólico de azeitona da terra, nas concentrações de 150, 300, 600 e 1200 mg/Kg, respectivamente, dissolvidos em DMSO 5%. Em todo o período do experimento foram observados sinais de toxicidade e mortalidade, como distintos parâmetros comportamentais e fisiológicos, tais como frequências respiratória e cardíaca, diarréia, lacrimejamento, sialorréia, eriçamento de pelos e peso. No oitavo dia, após 1 hora da administração dos tratamentos, amostras de sangue foram coletadas pelo plexo retro orbital e estas foram centrifugadas para obtenção de amostras de soro que foram usadas para as análises de ALT e AST usando kits enzimáticos (Lab test) de acordo com as instruções do fabricante. Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão e analisados usando o teste de Tukey ( p < 0,05). Resultados A azeitona da terra possui diversos fitoquímicos benéficos para a saúde, tais como compostos fenólicos e carotenoides, mas não há nenhum estudo confirmando a segurança do uso do extrato etanólico de folhas dessa planta, o que nos despertou o interesse em avaliar possível toxicidade desse extrato. Após os diferentes tratamentos, não se observou qualquer sinal de toxicidade ou morte e não houve alteração significativa no peso do corpo dos animais tratados com o extrato nas concentrações variadas (150, 300, 600 e 1200 mg/Kg). Ademais não foram observadas mudanças significativas nas atividades de ALT e AST nos grupos tratados com extrato: EE150 (192,4 ± 52,42 unidades/mL; 91,05 ± 20,20 unidades/mL, respectivamente), EE300 (192,1 ± 49,17 unidades/mL; 101,7 ± 21,17 unidades/mL, respectivamente), EE600 (172,9 ± 39,24 unidades/mL; 98,35 ± 17,45 unidades/mL, respectivamente) e EE1200 (144,5 ± 76,47 unidades/mL; 83,80 ± 25,29 unidades/mL, respectivamente), quando comparado com os grupos DMSO 5% (126,2 ± 38,69 unidades/mL; 79,90 ± 35,43 unidades/mL, respectivamente) ou controle (160,6 ± 32,62 unidades/mL; 92,55 ± 20,83 unidades/mL, respectivamente). Conclusão O extrato etanólico de folhas de azeitona da terra (Syzygium cumini L.) não se mostrou tóxico quando administrado

FeSBE 2012

oralmente em camundongos durante 8 dias.

FeSBE 2012

Resumo: 26.018

EFEITO DE DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ETANOL SOBRE A PEROXIDAÇÃO LIPÍDICA EM CAMUNDONGOS

Autores

1Nunes de Almada, C.**

1, ALMADA, C. N.**

1, ASSIS, A. L. C.*

1, HOLANDA, L. C. B. **

1,

SILVA, A. S.** 1, PEIXOTO, N. M.*

3, SILVA, A. C. M.

2, MOTA, E. F.

1, MELO, D. F.

1

Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular - UFC, 2 Departamento de Biologia - UFC,

3

Departamento de Biologia - FIC

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES e FUNCAP

Resumo Objetivos Esse trabalho tem como objetivo comparar a peroxidação lipídica em fígado de camundongos submetidos à administração de diferentes concentrações de etanol. O etanol é uma das drogas mais antigas usadas por seres humanos, seu consumo elevado e por longo prazo podem resultar em desenvolvimento de doenças hepáticas, dentre outros problemas. Métodos Camundongos "swiss" fêmeas pesando 25-30g, mantidos sob-regime alimentar conveniente, água ad libitum com ciclos de 12 horas no escuro e 12 horas no claro e condições de temperatura e umidade controlada foram usados. O protocolo do experimento foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa com Animal (CEPA) da UFC com número 45/2008. Os animais foram divididos em três grupos (n=10/grupo), que receberam diferentes tratamentos por via oral durante 8 dias consecutivos: Grupo 1 (controle) recebeu água destilada, grupos 2 (E20%) e 3 (E50%) receberam etanol 20% (5 g/Kg) e 50% (5 g/Kg), respectivamente. No oitavo dia, após 1 hora da administração do etanol os animais foram sacrificados por deslocamento cervical e os fígados foram removidos para análise da peroxidação lipídica. A peroxidação lipídica foi determinada pela estimativa de malondialdeído (MDA), usando o teste de ácido tiobarbitúrico (Neuroreport 10:1799, 1999). Esse método avalia o estresse oxidativo pela medida de MDA, que é o último produto da quebra dos lipídios causada pelo estresse oxidativo. A peroxidação lipídica foi avaliada espectrofotometricamente (532 nm) através da produção de MDA. Os níveis de MDA foram expressos como nmol/ g de fígado. Os resultados foram apresentados como média ± desvio padrão e analisados usando o teste de Kruskal-Wallis ( p < 0,05). Resultados A ingestão de etanol é capaz de elevar a peroxidação lipídica no fígado de camundongos. Estudos mostram que em animais, no estado de jejum, 30 minutos após a ingestão de álcool, já há absorção pelo trato digestivo com níveis sanguíneos altos; mais de 90% do álcool absorvido é oxidado no fígado e o restante excretado pelos pulmões e rins (Arq. Neuropsiquiatr. 60: 258, 2002). Os animais tratados com etanol (E20% e E50%) apresentaram uma elevação significativa nos níveis de MDA expressos em nmol/ g de fígado (E 20%= 5,915 ± 1,075; E50%= 6,404 ± 3,267) quando comparados com o grupo controle (4,119 ± 0,698). A elevação dos níveis de MDA reflete um aumento da peroxidação lipídica. Esta se mostrou dose dependente, aumentando com o aumento da concentração de etanol, sendo o maior valor apresentado pelo grupo E50%. Conclusão Os resultados sugerem que existem diferenças na peroxidação lipídica dos fígados de camundongos dependendo da concentração de etanol ingerida.

FeSBE 2012

Resumo: 26.019

Análise da integridade/fragmentação do DNA pelo ensaio Fluorimétrico Picogreen

Autores

1CADONÁ, F. C.

3, OLIVEIRA, R. M.

3, SILVA, T. O.

3, ASSMANN, C. E.

3, MACHADO, A. K.

1,

Manica-Cattani, M. F 3, BARBISAN, F.

3, SOARES, D. S.

2, GARCIA, L. F. M.

1, CRUZ, I. B. M.

1

Programa de Pós-Graduação Ciências Biológicas: Bioquímica Toxicológica - UFSM, 2 Programa de

Pós-Graduação em Farmacologia - UFSM, 3 Laboratório de Biogenômica, Departamento de

Morfologia, Centro de Ciências da Saúde - UFSM

Apoio Financeiro: Capes e CnPq

Resumo Objetivos O objetivo desse trabalho foi quantificar a integridade ou dano no DNA exposto a diferentes concentrações de vitamina C através do ensaio do Picogreen. Métodos Para realizarmos o teste foi utilizado DNA de timo de bezerro (Invitrogen) na concentração de 1µg/mL. O DNA foi exposto a diferentes concentrações de vitamina C (0,1µg/mL, 0,3µg/mL, 1µg/mL, 3g/mL e 10µg/mL), ao peróxido de hidrogênio (3M) e, foram realizados três tratamentos combinando as concentrações de vitamina C com o peróxido de hidrogênio. As amostras foram incubadas por um período de duas horas e, posteriormente, foi adicionado o reagente Picogreen (Invitrogen) e incubadas por mais cinco minutos. . As amostras foram quantificadas em fluorímetro nos seguintes comprimentos de ondas: emissão 480 e excitação 520. O ensaio do Picogreen consiste de uma análise por fluorometria no qual consegue detectar até 25 picogramas de DNA presente na amostra testada. Todas as análises foram realizadas utilizando o Statistical Package for Social Sciences (SPSS) versão 18.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). A comparação entre os tratamentos foi realizada utilizando análise de variância uma via, seguida pelo teste post hoc de Tukey. Todos os valores de p foram bicaudais. O valor de alfa foi definido como < 0 ,05 para determinar a relevância estatística. Resultados Os resultados mostraram que as quantidades de DNA nos tratamentos com diferentes concentrações de Vitamina C apresentaram similaridades com as do controle, ou seja, não tiveram efeito negativo. A análise do controle do Peróxido de Hidrogênio, indicou que este degrada em cerca de 40% o DNA. A concentração mais baixa de vitamina C (0,1µg/mL) na presença de peróxido de hidrogênio reverte a percentagem de degradação de DNA para níveis similares ao do controle (reversão total). As concentrações de 0,3µg/mL e 1µg/mL reverteram parcialmente a fragmentação do DNA. Entretanto as concentrações mais altas (3µg/mL e 10µg/mL) apresentaram menor percentagem de reversão da degradação do DNA. Conclusão O conjunto de resultados mostra uma potencial genoproteção da vitamica C em concentrações abaixo de 3µg/mL ao DNA exposto ao peróxido de Hidrogênio.

FeSBE 2012

Resumo: 26.020

GLIFOSATO-ROUNDUP® INDUZ ESTRESSE OXIDATIVO E ATIVA VIAS DE SINALIZAÇÃO DEPENDENTES DE FOSFOLIPASE C E PKC EM TESTÍCULOS DE RATOS PRÉ-PÚBERES

Autores

1CAVALLI, V. L. L. O.

1, CATTANI, D.

1, RIEG, C. E. H.

1, MAGNABOSCO, I. M.

2, PARISOTTO,

E. B. 2, MEDEIROS, G. S.

1, SILVA, F. R. M. B.

2, FILHO, D. W.

1, ZAMONER, A.

1 Bioquímica -

UFSC, 2 Departamento de Ecologia e Zoologia - UFSC

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, PIBIC-CNPq, FUNPESQUISA-UFSC, FAPESC, PGFAR, PPG-

BQA

Resumo Objetivos O Brasil é hoje o maior consumidor mundial de agrotóxicos e, de acordo com o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, desde o início 2010, de cada quatro produtos do agronegócio em circulação no mundo, um deles é brasileiro. A falta de conhecimento sobre o manejo adequado dos agroquímicos, o uso simultâneo de vários deles, geralmente em grandes quantidades, bem como as condições de vida do homem do campo, demonstram a urgência de se avaliar o impacto dessas substâncias sobre a saúde e o ambiente. O objetivo deste estudo é investigar as consequências da exposição “in vitro” ao pesticida glifosato-Roundup®, principal herbicida usado no Brasil e no mundo, sobre a indução de estresse oxidativo em testículos de ratos pré-púberes. Métodos Foram utilizados ratos Wistar machos de 30 dias de idade. No dia do experimento, os testículos foram rapidamente removidos, pesados, pré-incubados durante 15 min em Krebs-Ringer bicarbonato pH 7,4 e incubados por 30 min na presença ou ausência do pesticida glifosato-Roundup®. Após, os tecidos foram homogeneizados em tampão fosfato 20 mM contendo 0,1% de Triton X-100 1:20 (P:V) para determinação da atividade das enzimas glutationa redutase (GR), glutationa peroxidase (GPx), glutationa-S-transferase (GST) e catalase (CAT). Os testículos foram homogeneizados em tampão Tris-HCl pH 8,5 ou em pH 7,4 para avaliar a atividade da gama-glutamil transferase (GGT) ou glicose-6-fosfato-desidrogenase (G6PD), respectivamente. A dosagem de proteínas nos homogeneizados foi determinada. Para determinar os níveis de GSH, o tecido foi homogeneizado em TCA 12% gelado 1:10 (P:V). CEUA/UFSC protocolo PP00471. Resultados O glifosato-Roundup® provocou alterações em todos os parâmetros bioquímicos avaliados. Observou-se diminuição nos níveis de GSH induzida pelo agrotóxico, sugerindo indução de estresse oxidativo. Entretanto, a atividade de todas as enzimas envolvidas no “turnover” e/ou utilização da GSH (CAT, GR, GPx, GGT, GST, G6PD) apresentaram-se aumentadas. Considerando-se que alterações na atividade das enzimas antioxidantes podem estar ocorrendo em resposta a um insulto oxidativo, procurou-se entender os mecanismos envolvidos na ação do glifosato-Roundup® sobre a atividade enzimática da GGT, enzima envolvida no “turnover” da GSH, utilizando-se inibidores da via da fosfolipase C/PKC, assim como da ERK e PKA. Os resultados mostraram que o efeito do pesticida é dependente da ativação da fosfolipase C/PKC, assim como da ERK, mas independente de PKA. Conclusão O herbicida glifosato-Roundup® induz estresse oxidativo e ativa vias de transdução de sinais envolvendo fosfolipase C, PKC e ERK em testículos de ratos imaturos. Estes eventos podem estar associados as disfunções reprodutivas (infertilidade, por ex.) observadas em agricultores ocupacionalmente expostos, que são supostamente atribuídas a este agrotóxico.

FeSBE 2012

Resumo: 26.021

Atividade desacopladora do gossipol em mitocôndrias isoladas de testículos de rato

Autores

1SANTANA, A. T.**

1, MAIOLI, M. A.**

2,1, GUELFI, M.*

1, MINGATTO, F. E.

1 Laboratório de

Bioquímica Metabólica e Toxicológica (LaBMeT) - Unesp-Dracena, 2 Ciências Biológicas -

UNIFADRA

Apoio Financeiro: FAPESP

Resumo Objetivos Avaliar o efeito do gossipol, um importante subproduto presente no caroço do algodão que é utilizado na alimentação animal e que tem sido descrito como causador de infertilidade masculina, sobre a bioenergética de mitocôndrias isoladas de testículos de rato. Métodos O presente foi aprovado pela Comissão de Ética em Uso de Animais do Campus de Dracena (Protocolo 19/2012). Foram utilizados ratos Wistar machos com peso de aproximadamente 200 g e as mitocôndrias foram isoladas por centrifugação diferencial segundo Methods Cell, Biol, 20:411, 1978. A respiração mitocondrial foi determinada pelo monitoramento do consumo de oxigênio utilizando um eletrodo medidor de oxigênio do tipo Clark. O potencial de membrana foi monitorado por meio da sonda fluorescente safranina O. A significância estatística foi determinada pela análise de variância seguida pelo teste de Dunnet. Resultados O gossipol provocou um aumento significativo no consumo de oxigênio no estado 4 da respiração mitocondrial a partir da concentração de 0,5 µM até 1,5 µM (3,58 ± 0,1 nmol de O2/min. mg de proteína para o controle; 6,62 ± 0,41 nmol de O2/min . mg de proteína para 0,5 µM, e 6,84 ± 0,67 nmol de O2/min . mg de proteína para 0,75 µM; 8,05 ± 0,72 nmol de O2/min . mg de proteína para 1 µM, e 8,87 ± 0,93 nmol de O2/min . mg de proteína para 1,5 µM). O aumento do consumo de oxigênio promovido pelo gossipol foi inibido pelo KCN, um inibidor da cadeia de transporte de elétrons. O potencial de membrana mitocondrial sofreu uma redução significativa em concentrações inferiores das utilizadas na respiração (0,125 a 0,5 µM), visto que a adição de 0,5 µM de gossipol apresentou dissipação máxima (66,47 ± 4,11% em relação ao controle para o gossipol 0,125 µM; 45,91 ± 2,0% para gossipol 0,25 µM; 25,33 ± 2,03% para gossipol 0,375 µM; 13,19 ± 1,04% para gossipol 0,5 µM). Conclusão Os resultados indicam que o gossipol apresenta ação desacopladora nas mitocôndrias isoladas de testículo de rato, levando ao aumento no consumo de oxigênio no estado 4 da respiração mitocondrial com consequente dissipação do potencial de membrana afetando a síntese de ATP, e esse efeito pode estar associado à sua toxicidade.

FeSBE 2012

Resumo: 26.022

BIOCHEMICAL AND MORPHOLOGICAL ALTERATIONS INDUCED BY THE CRUDE VENOM OF Polybia paulista WASP ON WISTAR RAT LIVER.

Autores 1QUADROS, T.

1, NUNES, E. R. M.

1, KOCH, M. S.

1, PAES-OLIVEIRA, M. R.

1, WILLE, A. C. M.

1, APPEL, M. H.

1, BORBA, L. M.

1 Biologia Estrutural, Molecular e Genética - UEPG

Apoio Financeiro:

Resumo Objetivos The wasp venom study has great medical importance due to the possibility of sensitive people exhibit, after stung, symptoms that can evolve to anaphylaxis. Specific literature reports the hepatotoxic activity occurrence after envenomation with wasp from other countries. In this study we investigated the hepatotoxic effect from Brazilian wasp specie by using light microscopy, transmition electron microscopy and determination in the enzymes alanine transaminase (ALT) and aspartarte transaminase (AST). Métodos For this purpose, various venom doses (10, 20 and 30µg/g of rat) quantified by Coomassie Blue method were injected intraperitoneally in male Wistar rat weighing 150-250g. Liver fragments collected after 48h injection with venom (group treated) and with phosphate buffered saline (group control) were fixed in ALFAC solution, dehydrated in ethanol, embedded in paraffin, sliced and stained with hematoxilin-eosin and periodic acid-Schiff’s. For ultrastructural study liver treated with venom (30µg/g) were fixed in Karnovsky solution, post-fixed in osmium tetroxide and contrasted with uranyl acetate. Similarly, serum samples collected from the brachial plexus in the control group and treated with venom (in all the doses), were used for the determination of ALT and AST. processo n.1238/2006 Resultados Histopathological analysis of the liver reveled sinusoids capillaries congestion, increased of the Küppfer cells number and cytoplasmatic vesicles in the hepatocytes at all venom doses. Ultrastructural study showed a few sites of cytoplasmic degradation and absence of fat accumulation in the hepatocytes. The ALT serum activity has not suffered a significative increase (between 4% and 13%) in all doses analyzed (number of animals/group=5). In contrast, the AST presented significative increase of about 2.9x (n=3) and 5.0x (n=3) for the doses 20µg/g and 30µg/g of the venom, respectively. Already the dose 10µg/g of the venom showed slight increase the order of 13% (n=3). Conclusão The obtained data indicate that the crude venom of Polybia paulista wasp has hepatotoxic action, evidenced by morphological alterations and by the increase on the serum activity of the AST enzyme, although the venom main target is the striated skeletal muscle.

FeSBE 2012

Resumo: 26.023

HIPERTIREOIDISMO ALTERA A ATIVIDADE DAS METALOPROTEINASES DE MATRIZ E A MINERALIZAÇÃO ÓSSEA EM RATOS IMATUROS

Autores 1ANDRADE, C. M.

1, CATTANI, D.

1, MAGNABOSCO, I. M.

1, CAVALLI, V. L. D. L. O.

1, RIEG,

C. E. H. 1, ALMEIDA, B. A. N. D.

1, ZAMONER, A.

1 Bioquímica - UFSC

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, PIBIC-CNPq, FUNPESQUISA-UFSC, FAPESC, PGFAR, PPG-

BQA.

Resumo Objetivos Os hormônios da tireóide estão envolvidos no controle metabólico, na modulação do ciclo celular e na síntese protéica através de diversas vias de transdução de sinais, muitas delas envolvendo o cálcio. O hipertireidismo tem sido associado a disfunções no desenvolvimento do sistema nervoso, déficits de crescimento e alterações na morfologia óssea e dentária. Os objetivos deste estudo foram avaliar o efeito do hipertireoidismo induzido sobre os níveis de cálcio nos dentes molares superiores e na tíbia, assim como sobre a atividade de metaloproteinases de matriz extracelular (MMP) no soro de ratos Wistar machos de 15 dias de idade. Métodos O hipertireoidismo foi induzido pela administração i.p. de 80 μg T3/Kg de peso corporal durante 7 dias consecutivos a partir de 8 dias de idade. O experimento foi realizado quando os animais completaram 15 dias de idade. Os dentes molares superiores e a tíbia foram removidos e desmineralizados em solução com HCl 50%, centrifugados e o sobrenadante foi utilizado para determinar os níveis de cálcio através de teste colorimétrico. Os resultados foram expressos como μg de cálcio/mg de tecido ósseo ou dentário. O sangue foi coletado e o soro foi utilizado para determinar a atividade gelatinolítica das metaloproteinases de matriz –2 e –9 (MMP2 e MM9) pela técnica de zimografia. Alíquotas de soro foram submetidas à eletroforese sob condições não redutoras em gel de poliacrilamida a 10% contendo 0,5% de gelatina e as bandas onde observou-se a atividade gelatinolítica das amostras foram quantificadas. CEUA/UFSC protocolo PP00318. Resultados Os resultados mostraram aumento da atividade gelatinolítica do soro dos animais hipertireoideos, indicando aumento na atividade da MMP2 e MMP9. Estes dados sugerem um aumento mais significativo da degradação da matriz colágena secundária à elevação dos hormônios tiroidianos, sendo este um evento agravante nos processos de desmineralização óssea. Além disso, observou-se diminuição nos níveis de cálcio na tíbia dos animais submetidos ao hipertireoidismo, sugerindo desmineralização óssea. Entretanto, não foram observadas alterações significativas nos níveis de cálcio nos dentes molares nos ratos hipertireoideos. Conclusão Os resultados preliminares abrem diversas perspectivas de estudo com o intuito de verificar as conseqüências do excesso de hormônio da tireóide sobre morfologia óssea e dentária, assim como os níveis de outros minerais nestes tecidos. O conhecimento das alterações provocadas pelas disfunções hormonais sobre a mineralização pode demonstrar alvos eficazes para intervenção clínica em prol da saúde bucal e óssea e consequentemente na melhor qualidade de vida dos indivíduos.

FeSBE 2012

Resumo: 26.024

ALTERAÇÕES COMPORTAMENTAIS E INDUÇÃO DE DANO AO DNA APÓS ADMINISTRAÇÃO SUBCRÔNICA ORAL DE BENZO[A]PIRENO EM RATOS

Autores

1BECKER, G. C.

2, MACIEL, É. S.

2, SCHUNCK, R. V. A.

5, BRANCO, C. D. S.

3, SOUZA, F. A. D.

3, BRUCKER, N.

3, BULCÃO, R. P.

4, DALLEGRAVE, E.

5, SALVADOR, M.

3, GARCIA, S. C.

1,2,

LEAL, M. B. 1 Departamento de Farmacologia - UFRGS,

2 Programa de Pós-Gradução de

Neurociências - UFRGS, 3 Departamento de Análises - UFRGS,

4 Departamento de Ciências Básicas

da Saúde - UFCSPA, 5 Centro de Ciências Agrárias e Biológicas - UCS

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERGS, INCT- Instituto Nacional de Análise Integrada do

Risco Ambiental e PROPESQ/UFRGS.

Resumo Objetivos Poluentes ambientais orgânicos persistentes são resistentes à degradação com grande impacto na saúde humana. Dentre estes, o benzo[a]pireno (BaP), pertencente a classe de hidrocarbonetos policíclicos aromáticos, é encontrado como contaminante na água, em alimentos e nos solos. Apesar de ser um dos componentes mais conhecidos e estudados, ainda existem lacunas a respeito dos seus efeitos tóxicos sobre a saúde. Devido a presença de BaP nos alimentos e na água, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da administração subcrônica oral de benzo[a]pireno sobre parâmetros comportamentais e indução de danos ao ácido desoxiribonucléico (DNA) em ratos. Métodos Os experimentos foram realizados após a aprovação do comitê de ética da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (protocolo número 18287). Os ratos Wistar machos (120 dias, 360-480g) foram divididos em grupos de 6-8 cada e foram tratados com BaP (2 mg/kg) ou óleo de milho (grupo controle), via gavagem oral, uma vez ao dia, por 28 dias. Teste de avaliação da atividade locomotora (caixa de atividade locomotora Insight Equipamentos Ltda.) e memória de reconhecimento de objetos de curta duração foram usados para analisar alterações comportamentais após administração de BaP. Os animais foram anestesiados com xilazina e cetamina (10 mg e 75 mg/kg, respectivamente) e amostras de sangue da veia cava caudal foram coletadas para a análise de dano ao DNA (ensaio cometa). Após a coleta de sangue, os animais foram sacrificados por perfuração do diafragma. Os resultados da atividade locomotora e de danos ao DNA foram analisados através do teste estatístico “t de Student” e a memória de reconhecimento de objetos foi avaliada através do teste estatístico Mann-Whitney U teste. Resultados Foi observado um aumento significativo ( p < 0,05) na atividade locomotora dos animais tratados com BaP (7682,25mm±1123,56mm) em relação ao grupo controle (2935,71mm±1476,37mm). No teste de reconhecimento de objetos de memória de curta duração, o índice de reconhecimento dos animais tratados com BaP foi 38,6 [21,0/48,0] e dos animais do grupo controle 51,4 [43,6/59,9], apresentando assim uma tendência (p=0,064) de déficit na memória. Um efeito genotóxico (ensaio cometa) foi encontrado nos animais tratados com BaP em relação ao grupo controle (p=0,001). Danos ao DNA de classe três ( p < 0,001) e quatro ( p < 0,01) no grupo tratado com BaP foram maiores em relação ao grupo controle, que apresentou maior freqüência de células sem danos ( p < 0,01). Conclusão De acordo com os nossos resultados, benzo[a]pireno provocou mudanças comportamentais e induziu danos ao DNA quando administrado sub-cronicamente e em uma dose menor do que a encontrada usualmente na literatura. Em relação ao teste de memória de curta duração, apesar da tendência de déficit observada, mais testes são necessários para a confirmação desta hipótese.

FeSBE 2012

Resumo: 26.025

Análise de células bipolares PKCα-IR e células ganglionares da retina do peixe tropical Hoplias malabaricus intoxicado com baixas doses agudas de metilmercúrio.

Autores 1LIBER, A. M. P.

1, VENTURA, D. S. F.

1 Psicologia Experimental - IP-USP

Apoio Financeiro: FAPESP/CAPES

Resumo Objetivos Analisar os efeitos morfológicos e potenciais efeitos na acuidade visual causados pela intoxicação de baixas doses agudas de metilmercúrio (MeHg) na retina do peixe tropical Hoplias malabaricus (Traira). Métodos O projeto foi aprovado pela CEUA do IP/USP/2008. Traíras ( < i>Hoplias malabaricus) foram intoxicadas com baixas doses agudas de metilmercúrio (MeHg), através de uma única injeção intraperitoneal (0,01, 0,05, 0,1, 1,0 µg/g ), seguida por um período de 15 dias de depuração. As retinas foram dissecadas e fixadas em paraformaldeído 4% durante 3 h. Células bipolares ON da sublamina b da camada plexiforme interna (IPL) foram imunorreativas para a proteína quinase Cα (PKCα-ir) e células da camada de células ganglionares (CCG) foram coradas pela tecnica de Nissl. A contagem de células, realizada para estimar a densidade celular, foi realizada em montagens planas para análise quantitativa de células bipolares ON e células da CCG. Tais análises foram realizadas em 3 ou 4 retinas para cada uma das doses testada, assim como em retinas controle. Campos retinianos foram fotografados ao longo da retina, com espaçamento de 1 mm, com uma câmara digital acoplada a um microscópio e a um computador, com auxilio do software Axio Vision. Células bipolares ON e células da CCG foram quantificadas com a ajuda do software Scion Image NIH 2.0, nos campos retinianos amostrados. A densidade média (mm2) de ambos os tipos de células foi estimada para cada retina, nas quatro doses de MeHg testadas e comparada aos valores do grupo controle (teste t-Student). Com base nos valores do pico de densidade média das células da CCG, foi realizado o cálculo da estimativa teórica da acuidade visual (Hart, 2002), levando em consideração, a distância média entre células ganglionares S (S2=2/D*√3), o limite de Nyquist [v=1/(S*√3)] e a distância d subtendida por 1 grau na retina [d=(2pi PND)/360] onde PND é a distância nodal posterior. Resultados Células bipolares ON PKCα-IRs apresentaram características morfológicas deste tipo celular, tanto em retinas controle, quanto em retinas intoxicadas. A densidade média total de células estimada no grupo controle foi de 1780.672 ± 608.230 para as células bipolares ON e 5247,214 ± 2539,142 para células da CCG. A densidade de células bipolares ON não apresentou diferença significativa nas baixas doses agudas testadas. As células da CCG coradas com a técnica de Nissl (núcleos) também não mostraram perda celular significativa na densidade média estimada. No entanto, há uma tendência na diminuição do número de células em ambos os tipos de células analisadas, que pode ser vista nos mapas de isodensidade. A acuidade visual máxima encontrada para traíra ( < i>Hoplias malabaricus) com PND de 60% foi de 5,94 cpg e a mínima 3,11 cpg. Para PND de 35% a acuidade máxima foi de 3,46 cpg e a mínima 1,81 cpg. Conclusão Baixas doses agudas de MeHg não diminuem a densidade celular de células bipolares ON ou células da CCG, em qualquer uma das regiões retinianas, comparadas ao grupo controle. Este trabalho apoia resultados anteriores (Tanan et al. 2006), em que respostas eletrofisiológicas das células horizontais estavam presentes, embora em amplitude reduzida, em baixas doses, como as aqui tratadas, mas estavam completamente ausentes em doses mais elevadas. Também de acordo com tais resultados a análise da acuidade visual estimada a partir dos cálculos de densidade de células da CCG de Hoplias malabaricus não apresentou relação com as baixas doses agudas de MeHg testadas.

FeSBE 2012

Resumo: 26.026

HEPATOTOXICIDADE DOS ANTIMONIAIS PENTAVALENTES: POSSÍVEL PAPEL DOS METAIS-TRAÇOS ATRAVÉS DO ESTRESSE OXIDATIVO

Autores

1KATO, K. C.

6, MORAIS-TEIXEIRA, E.

6, RABELLO, A. L. T.

3, DEMICHELI, C. P.

4, ROCHA,

O. G. F. 5, JUNIOR, J. D. C.

1, FREZARD, F. J. G.

1, FREZARD, F. J. G.

1 Fisiologia e Biofísica -

UFMG, 3 Departamento de Química - UFMG,

4 Análises Químicas - CETEC-MG,

5 Morfologia -

UFMG, 6 laboratório Pesquisas Clínicas - CPqRR

Apoio Financeiro: CNPq/FAPEMIG/FIOCRUZ/CAPES

Resumo Objetivos Antimoniais pentavalentes como antimoniato de meglumina são fármacos de primeira escolha para o tratamento de leishmaniose no Brasil. Apesar de sua eficácia, os compostos apresentam efeitos colaterais como alterações hepáticas e cardíacas, o que favorece o abandono do tratamento. Foi proposto que os mecanismos de ação e toxicidade dos antimoniais poderiam estar relacionados à produção de espécies reativas de oxigênio. O objetivo do trabalho foi correlacionar a hepatotoxicidade dos antimoniais pentavalentes: AM e AM1 sintetizados pelo grupo da UFMG e AM comercial (Glucantime Aventis;) (Gluc) com a presença de metais-traços (As e SbIII) e a indução de atividade da peroxidase. Métodos Fêmeas Balb/c (n=5/grupo), 18-22g, infectadas com L.(L.) chagasi foram tratadas com antimoniais por via IP, na dose de 80mgSbV/kg/dia por 20 dias. O grupo controle recebeu salina. Ao final do tratamento, os animais foram eutanaziados (CEUA Fiocruz protocolo P-0321/06, licença L-0024/8). Fragmentos de fígados dos animais foram processados para histologia e corados com hematoxilina-eosina e/ou 3,3'-Diaminobenzidina. Dez imagens de cada lâmina de cada animal foram analisadas para observação de alterações pelo software Image Pro-plus. O fígado e baço foram homogeneizados e cultivados para semi-quantificação de parasitas pela técnica de diluição limitante (DL). O SbIII foi determinado baseado na interação de SbIII com vermelho de bromopirrogalol e o As foi determinado por espectroscopia de absorção atômica. A estatística foi realizada com o software Prism 5.0, utilizando Shapiro-Wilk para teste de normalidade, seguido de One-way ANOVA com pós-teste de Bonferroni, p < 0,05. Resultados A quantidade de SbIII (p/p) foi: 0,015% para Gluc, < 0 .002% para AM1 e para AM 0,118% . O teor de As (µg/g) foi: 92,5 para AM, Conclusão AM e Gluc induziram importantes alterações histopatológicas no fígado associadas à atividade de peroxidase. E AM1, com menor teor de metais-traços, apresentou alterações menos severas. O estudo aponta para o possível papel dos metais-traços na hepatotoxicidade dos antimoniais pentavalentes através da indução de estresse oxidativo.

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Resumo: 26.027

EXPOSIÇÃO A BISFENOL A EM MATRIZES (Mus musculus) DURANTE A LACTAÇÃO: EFEITO A LONGO PRAZO NOS PARÂMETROS ESPERMÁTICOS DOS FILHOTES

Autores 1WORST, M. R.

1, VARELA JUNIOR, A. S.

2, CORCINI, C. D.

2, SILVA, E. F.

1, MARTÍNEZ, P. E.

1 Instituto de Ciências Biológicas - FURG,

2 Faculdade de Veterinária - UFPEL

Apoio Financeiro: FAPERGS (Processo: 1013533), Capes e CNPQ.

Resumo Objetivos Verificar os efeitos da transferência vertical (durante a lactação) do xenoestrógeno Bisfenol A (BPA) sobre parâmetros espermáticos em camundongos ( < i>Mus musculus) adultos. Métodos 30 fêmeas ( < i>Mus musculus - Rodentia:Murideae) foram fornecidas pelo Biotério Central da FURG, acasaladas e mantidas em sala climatizada, com fotoperíodo de 12h claro⁄12h escuro, temperatura de 22±1°C, água e alimento ad libitum (ração comercial sem soja). O BPA foi preparado em azeite e administrado via gavagem diariamente durante a lactação (21 dias). Os grupos foram: Azeite (AZ), Solução fisiológica (SALINA), Dietilestilbestrol (DES) 6,5μg.kg -1 e BPA (40, 80 e 200 (μg.kg -1 )). 10 filhotes machos por grupo (10 meses de idade, peso 45-60g) foram sacrificados por deslocamento cervical. Os ductos deferentes e as caudas dos epidídimos foram retirados, sendo analisado os espermatozoides quanto a motilidade (MOT), morfologia (MORF), número de espermatozoides coletados por animal (NZPT), integridades de membrana (MEM), DNA, acrossoma (ACRO), funcionalidade mitocondrial (MIT), taxa de penetração in vitro (TXPEN) e número de espermatozoides penetrados⁄oócito fertilizado (NZPTOCI)[J. Exp. Zool. Part A, DOI:10.1002⁄jez.726, 2012}. Para análise estatística foi realizada estatísticas descritivas para todos os parâmetros de sêmen avaliados. Os resultados que respeitaram os pré-requisitos foram analisados por, ANOVA com posterior comparação das médias pelo teste de Tukey (p < 0,05). Kruskal-Wallis (p < 0,05) foi utilizado para os dados não-paramétricos. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão, sendo que as letras iguais não apresentaram diferenças significativas. Todas as atividades foram aprovadas pelo Comitê de Ética em Uso Animal (CEUA) da FURG, Protocolo Nº P006⁄2011, Processo Nº23116.002456⁄2011-73. Resultados Houve mudanças significativas na MOT (%) (81±2,77 a ; 83±2,13 a ; 29±3,79 c ; 42±5,54 bc ; 40±6,15 bc e 54±5,62 b ); na ACRO (%) (37,5±4,79 a ; 30±5,56 ab ; 8,87±2,0 c ; 28,4±4,27 ab ; 15,81±2,63 bc ; 19,85±5,59 abc ); na MEM (%) (80,1±2,55 a ; 78,9±3,51 a ; 37,5±6,25 c ; 51,9±8,05 bc ; 38,6±5,05 bc ; 60,9±6,05 ab ); na MIT (%) (86,1±2,15 a ; 67,8±5,71 ab ; 32,1±3,95 c ; 41,6±5,82 c ; 45,2±2,94 c ; 50,1±5,76 bc ) para os tratamentos AZ e SALINA, DES e BPA 40, 80 e 200, respectivamente. Quando analisados o dano de DNA, a MORFNOR, a TXPEN, o NZPT e NZPTOCI (nzpt⁄o) não foram verificadas alterações quando comparados os grupos controles AZ e SALINA com os grupos tratados DES e BPA 40, 80 e 200. Conclusão A transferência vertical de Bisfenol A durante a lactação provocou a longo prazo alterações na qualidade espermática dos filhotes.

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Resumo: 26.028

VIAS DE SINALIZAÇÃO CELULAR ENVOLVIDAS NO MECANISMO DE AÇÃO DO GLIFOSATO-ROUNDUP® SOBRE O HIPOCAMPO DE RATOS IMATUROS

Autores

1*RIEG, C. E. H.

2, **PIEROZAN, P.

1, **CATTANI, D.

1, *MAGNABOSCO, I. M.

1, **CAVALLI,

V. L. L. O. 1, *ALMEIDA, B. A. N.

2, PESSOA-PUREUR, R.

1, ZAMONER, A.

1 Bioquímica -

UFSC, 2 Bioquímica - UFRGS

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, PIBIC-CNPq, FUNPESQUISA-UFSC, FAPESC, PGFAR, PPG-

BQA

Resumo Objetivos Os agrotóxicos são amplamente utilizados na agricultura e alguns deles são considerados parcialmente seguros a saúde humana. O estresse oxidativo é um evento característico nas doenças neurodegenerativas, sendo, portanto alvo promissor para as ações de pesticidas. O objetivo deste estudo foi investigar as alterações bioquímicas em hipocampo de ratos imaturos após exposição “in vivo” ao glifosato-Roundup®. Métodos O glifosato-Roundup® foi administrado continuamente na água de beber das ratas a partir do 5º dia de gestação até os filhotes completarem 15 dias de idade. No dia do experimento o hipocampo foi removido, fatiado e homogeneizado em tampão Tris-HCl pH 8,5 ou em pH 7,4 para avaliar a atividade da gama-glutamil transferase (GGT) ou glicose-6-fosfato-desidrogenase (G6PD), respectivamente. Para avaliar as vias de sinalização envolvidas nas ações do pesticida, o tecido foi homogeneizado em tampão contendo SDS e processado para “Western blot” utilizando os anticorpos anti-JNK1/2, anti-Akt e anti-GSK3β para as formas total e fosforilada de cada uma das vias estudadas. CEUA/UFSC Protocolo PP00471. Resultados Os resultados mostraram que a exposição ao glifosato-Roundup® durante os períodos pré- e pós-natal aumentou a atividade da GGT e inibiu a atividade da G6PD no hipocampo de ratos imaturos, indicando provável indução de estresse oxidativo neste tecido. A inibição da G6PD pode estar comprometendo o suprimento de NADPH, essencial para a redução da glutationa. Por outro lado, o aumento da GGT, pode estar associado a elevado “turnover” da glutationa e/ou indução de estresse oxidativo. Além disso, observou-se que o pesticida induziu a ativação/fosforilação da Akt, JNK1/2 e GSK3β, demonstrando claramente que o glifosato-Roundup® leva a modulação de vias de transdução de sinais e consequentemente a importantes alterações neuroquímicas no cérebro dos animais expostos. Conclusão Os dados obtidos neste estudo sugerem que os mecanismos de neurotoxicidade relacionados ao glifosato envolvem indução de estresse oxidativo e modulação das vias de sinalização das MAPKs, da GSK3β e da Akt. A modulação destas vias pode estar, pelo menos em parte, associada à alta prevalência de distúrbios do humor, doenças neurodegenerativas e número de suicídios entre agricultores.

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Resumo: 26.029

EFEITO DA EXPOSIÇÃO MATERNA E PÓS-NATAL AO GLIFOSATO-ROUNDUP® SOBRE OS NÍVEIS DENTÁRIO E ÓSSEO DE CÁLCIO E MAGNÉSIO EM RATOS IMATUROS

Autores

1*ALMEIDA, B. A. N.

1, **CATTANI, D.

1, *GOULART, P. B.

1, **CAVALLI, V. L. L. O.

1,

*RIEG, C. E. H. 1, *MAGNABOSCO, I. M.

1, **ANDRADE, C. M.

1, ZAMONER, A.

1 Bioquímica -

UFSC

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, PIBIC-CNPq, FUNPESQUISA-UFSC, FAPESC, PGFAR, PPG-

BQA.

Resumo Objetivos A utilização de agrotóxicos está em crescente expansão, sendo que o Brasil é hoje o maior consumidor mundial destes produtos. Os agrotóxicos são amplamente utilizados no ambiente agrícola com o intuito de aumentar a produtividade, sendo o Roundup®, herbicida a base de glifosato, o pesticida mais vendido no mundo. Os objetivos deste estudo foram avaliar o efeito da exposição materna e pós-natal ao glifosato-Roundup® sobre a mineralização óssea e dentária dos filhotes. Foram analisados os níveis de cálcio é magnésio nos dentes incisivos e molares superiores assim como na tíbia de ratos Wistar machos de 15 dias de idade. Métodos O glifosato-Roundup® foi administrado continuamente na água de beber das ratas a partir do 5º dia de gestação até os filhotes completarem 15 dias de idade (Protocolo aprovado CEUA/UFSC 00471). No dia do experimento os dentes incisivos e molares superiores, assim como a tíbia foram removidos e desmineralizados em solução com HCl 50%, centrifugados e o sobrenadante foi utilizado para determinar os níveis de cálcio e magnésio através de testes colorimétricos. Os resultados obtidos foram calculados como μg de cálcio/ mg tecido dentário ou ósseo e em mg de magnésio/ mg de tecido ósseo ou dentário; e foram expressos em % do controle como média ± E.P.M. Resultados Os resultados obtidos demonstraram que a exposição gestacional e pós-natal ao glifosato-Roundup® diminui a calcificação óssea na tíbia (83,45% ± 1,91; N=10), assim como nos dentes incisivos (89,27% ± 3,02; N= 10) em relação ao grupo controle (100%). Entretanto, não afeta calcificação nos dentes molares (93,33% ± 6,87; N=10). Por outro lado, foram observados níveis elevados de magnésio nos dentes incisivos (134,82% ± 6,25; N=10), enquanto os níveis deste mineral não foram alterados nos dentes molares (98,7% ± 9,14; N= 10) nem na tíbia (99,50% ± 10,84; N=10)em relação ao grupo controle (100%). Os resultados preliminares abrem diversas perspectivas de estudo com o intuito de verificar as consequências da exposição ao pesticida sobre morfologia óssea e dentária, assim como os níveis de outros minerais nestes tecidos. Conclusão O conhecimento das alterações provocadas pelas disfunções provocadas pelo agrotóxico sobre a mineralização pode demonstrar alvos eficazes para intervenção clínica em prol da saúde bucal e óssea e consequentemente, na melhor qualidade de vida dos indivíduos ocupacional e cronicamente expostos.

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Resumo: 26.030

Avaliação das vias de sinalização celular envolvidas na citotoxidade da Anfotericina B em linhagens de células renais

Autores 1FERREIRA, A. F.

1, FRANÇA, F. D.

2, TAGLIATI, C. A.

1, VIANA, P. H. L.

1, GOMES, D. A.

1,

CHAVES, M. M. 1 Bioquímica e Imunologia - UFMG,

2 Análises Clínicas e Toxicológicas - FAFAR

Apoio Financeiro: FAPEMIG, CNPq, PRPq/UFMG

Resumo Objetivos A Anfotericina B é um dos agentes mais importantes do arsenal terapêutico no tratamento de infecções fúngicas sistêmicas, sendo também o fármaco de segunda escolha usado contra a Leishmaniose. Apesar disso, seu uso é limitado devido a sua alta nefrotoxicidade. Este trabalho tem como objetivo a verificação da hipótese da participação das vias de PKA (proteína cinase A) e de PKG (proteína cinase G) no processo de morte celular observado frente à exposição do tecido renal à Anfotericina B. Métodos MTT As células de duas linhagens renais (MDCK, cão, ducto coletor e LLCPK-1, porco, túbulo distal) foram incubadas em placas de 96 poços no número de 5x10^3 células por poço. Em seguida foram expostas a Anfotericina B isoladamente ou em associação a análogos comerciais de AMPc e GMPc. Os controles não foram expostos. Depois de 24 horas de incubação a 37 0C, com 5% de CO2, efetuou-se ensaio de MTT para verificação de viabilidade celular. Citometria de Fluxo As células de ambas as linhagens foram incubadas em placas de 24 poços no número de 5x10^4 células por poço. Em seguida foram expostas a Anfotericina B isoladamente ou em associação aos análogos comerciais de AMPc e GMPc. Procedeu-se período de incubação de 24 horas a 370 C com 5% de CO2. Em cada poço foi adicionado 1mL de solução hipotônica de Iodeto de propídeo que foi transferida para seu tubo correspondente. Procedeu-se leitura em citômetro de fluxo. A análise estatística se deu por teste não paramétrico de Mann-Whtney. Resultados Nossos resultados mostraram que na análise da viabilidade celular (ensaio de MTT) a linhagem LLCPK-1 e MDCK demonstraram uma queda na viabilidade celular ( p < 0,05) quando as células foram expostas a Anfotericina B associada ao GMPc (43% e 32% ) respectivamente, em comparação àquelas que foram expostas unicamente à Anfotericina B. Quando ambas as linhagens foram expostas ao fármaco em associação ao AMPc, no entanto, não houve diferença significativa na viabilidade celular em comparação ao grupo exposto somente à Anfotericina B. Nos ensaios de citometria de fluxo (que foi realizado com o objetivo de verificação de morte celular), não observamos aumento significativo da morte celular na linhagem LLCPK-1 no grupo exposto ao fármaco associado ao AMPc comparado ao grupo exposto à Anfotericina B isolada. Já na linhagem MDCK, há diminuição de 35% de morte celular quando exposta a Anfotericina B associada ao AMPc em relação ao grupo exposto somente ao fármaco. Nos grupos expostos à Anfotericina B em associação a GMPc, em ambas as linhagens, não se observa diferença significativa. Conclusão Como sugerem os resultados, áreas diferentes do néfron podem responder de maneira diferente à exposição da Anfotericina B, sendo que as cascatas de sinalização envolvidas nos processos de morte ou de preservação da integridade celular são diversas, variando de acordo com o metabolismo, a função e a localização das células, mesmo que sejam integrantes de um mesmo órgão.

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Resumo: 26.031

PROTECTIVE EFFECT OF MORPHINE AGAINST MERCURY INTOXICATION IN VITRO: INVOLVENMENT OF OPIATE RECEPTORS IN OXIDATIVE STRESS PROTECTION?

Autores 1MALAQUIAS, A. . C. **

1, ALMEIDA, M. B.

1, MAUÉS, L. A. L. **

1, NASCIMENTO, J. L. M. D.

1, HERCULANO, A. M.

1, LÓPEZ, M. E. C.

1 Instituto de Ciências Biológicas-ICB - UFPA

Apoio Financeiro: : CAPES, CRISTÁLIA, CNPq e FAPESPA

Resumo Objetivos Since last decade, in some situations, an antioxidant role for morphine was demonstrated by a receptor-independent effect. Thus, the purpose of this work was to evaluate a possible role for morphine against methylmercury (MeHg) toxicity (cell death and oxidative damage) and the role of opiate receptors. Métodos C6 glioma cells grown at 37°C and 5% CO2 in DMEM with 10% fetal bovine serum (FBS), 100 U/ml of penicillin and 100µg/ml of streptomycin. Treatment was carried by 24 hours with MeHg 0-11µM, morphine 0-10µM and/or naloxone 0-2.5µM in DMEM SBF free. Cell viability was measured by MTT assay (J. Immunol. Methods 65:55,1983). Malondialdehyde (MDA) formation (biomarker for lipid peroxidation, LPO) was analyzed using the tiobarbituric acid assay (Meth. Enzim. 105:299, 1984). Levels of intracellular free thiols were determined by Ellman’s method (Arch Biochem Biophy. 82:70, 1959). The protein level was studied by Bradford assay (Anal. Biochem. 72:248, 1976). Free radical scavenging activity was measured by the DPPH• assay (Pharm. Res. 49:59, 2004). One-way ANOVA test, following by post hoc Tukey test when appropriated, was used (significant values for p were set at 0.05). Results of MTT and DPPH• assays were expressed as mean ± standard deviation of percentage of control group. Levels of LPO and free thiols were showed as pMol MDA/mg protein and nMol –SH/mg protein, respectively. Resultados Morphine 0-10µM, naloxone 0-2,5µM or co-treatment with morphine and naloxone (1 and 2,5µM respectively) did not cause a significant difference in cell viability and MDA levels when compared with control group (N=3-6). Exposure to MeHg showed a decrease on cellular viability (DL50 6,96µM). MeHg 6 µM caused a loss of 40% of cell viability and co-treatment with morphine recovered it in 20% (n=4). MDA production in MeHg group was 9.5±1.02pMol MDA/mg protein, whereas co-treatment with morphine reduced it to 5.46±1.31pM MDA/mg protein. However, free thiols levels exhibited no difference after MeHg or morphine treatment, keeping at similar levels of control (152,17nM –SH/mg protein) (n=3). To check the hypothesis of a ROS scavenger effect the DPPH• assay was conducted. Results demonstrated no scavenger effect of morphine 1µM. Only treatments with 5 and 10µM of morphine showed a scavenger effect (inactivating 5% and 10% of DPPH• free radical content, respectively). To evaluate the role of opioid receptors on the protective effect, co-treatment with the mainly opioid receptor antagonist, naloxone, was carried out. Incubation with this antagonist eliminated the protective effect of morphine on cell viability and lipid peroxidation, showing similar results to MeHg treated group (60% ± of control viability and 9.5±1.02pMol MDA/mg protein). Conclusão This work for the first time, showed a protective role of therapeutic concentrations of morphine on oxidative damage and cell death by MeHg. In addition, we demonstrated that this protection is mediated by activation of opioid receptors.

FeSBE 2012

Resumo: 26.032

Caracterização farmacológica e tratamento com antiinflamatório do edema provocado pela peçonha de Vitalius dubius (Araneae, Theraphosidae) em ratos.

Autores 1ROCHA-E-SILVA, T. A. A.

1, LINARDI, A.

2, ANTUNES, E.

2, HYSLOP, S.

1 Ciências Fisiológicas

- FCMSCSP, 2 Farmacologia - FCM-UNICAMP

Apoio Financeiro: FAPESP, FAVC

Resumo Objetivos No Brasil as aranhas caranguejeiras são animais pouco agressivos, que muitas vezes tem contato com humanos em áreas urbanas. Não raro são mantidas em cativeiro como animais de estimação. Apesar de apresentar poucas complicações de maior gravidade, os acidentes envolvendo essas aranhas levam à dor e edema locais, além de possibilidade de infecção. Neste trabalho utilizamos a peçonha da aranha Vitalius sp., bastante comum na região de Campinas (SP), para investigar em animais de laboratório os mecanismos farmacológicos pelos quais o edema ocorre e propormos uma potencial abordagem terapêutica em casos de acidentes. Métodos Os protocolos experimentais foram aprovados pela Comissão de Ética em Experimentação Animal da UNICAMP, sob protocolos 1228-1, 1229-1 e 1230-1. A peçonha das aranhas foi extraída por eletroestimulação, liofilizada e armazenada a -80 o C. O extravasamento de plasma foi avaliado em pele de ratos comparando-se a injeção de veículo com 10 μg de peçonha por sítio e quantificado através da contagem de radiação gama da albumina-I 125 previamente administrada. Neste modelo foram testados os antagonistas: mepiramina, ciproheptadina, L-NAME, icatibant, SR140333, SR48968 e indometacina. O edema de pata foi realizado com a injeção de 20 μg de peçonha (ou veículo) no membro direito, com monitoramento do volume por hidropletismômetro após 30, 60, 90, 120 e 180 minutos. A variação do volume da pata foi obtida a partir da subtração do valor basal daqueles obtidos após a injeção da peçonha. Para avaliar a eficácia do cetoprofeno em diminuir o edema, foi testada no modelo de pata a administração da apresentação injetável comercial (20mg/Kg, i.p.) comparado com solução salina, quinze minutos após a aplicação da peçonha. Resultados O extravasamento plasmático provocado na pele não foi alterado na presença de mepiramina, icatibant ou SR48968, o que indica não haver influência das vias da histamina e bradicinina, ou ativação de receptores de neurocininas NK2. No entanto, L-NAME, SR140333 ou indometacina reduziram o extravasamento plasmático em níveis próximos ao sítio em que foi injetado apenas veículo. Com base nestes resultados, foi desenhado o experimento do edema de pata com tratamento com cetoprofeno, um inibidor da ciclooxigenase de uso estabelecido. O cetoprofeno administrado quinze minutos após a aplicação da peçonha não foi capaz de inibir o volume máximo de edema em 30 minutos (512 ± 25 μL para cetoprofeno; 502 ± 32 μL para salina), mas diminuiu significativamente o tempo de recuperação. Enquanto os animais que receberam solução salina apresentaram diminuição significativa do edema somente após 120 minutos (350 ± 30 μL), os animais que receberam o antinflamatório atingiram este resultado em 90 minutos (323 ± 15 μL). No tempo final de 180 minutos, os animais tratados apresentavam valores mais próximos àqueles que sofreram a injeção de veículo. Conclusão Com base nestes dados, concluímos que o edema provocado pela peçonha de V. dubius possui produtos da ciclooxigenase (por exemplo, prostaglandinas) como principais mediadores, confirmado pela diminuição do tempo de recuperação de envenenamento dos animais tratados com cetoprofeno. Estes dados podem vir a dar suporte para uma conduta terapêutica, em casos de acidentes com estes animais comumente encontrados em contato com seres humanos.

FeSBE 2012

Resumo: 26.033

GENOTOXICITY AND LIPID DAMAGE AFTER ACUTE ADMINISTRATION OF LIPID-CORE NANOCAPSULES IN RATS

Autores

1BULCÃO, R. P.

1, BUBOLS, G. B.

2, VENTURINI, C. G.

1, NASCIMENTO, S. N.

1, SAUER, E.

3,

CASSINI, C. 3, SALVADOR, M.

4, POHLMANN, A. R.

2, GUTERRES, S. S.

1, GARCIA, S. C.

1

Departamento de Análises - PPGCF/UFRGS, 2 Departamento de Produção e Controle de

Medicamentos - UFRGS, 3 Instituto de Biotecnologia - UCS,

4 Departamento de Química Orgânica -

UFRGS

Apoio Financeiro: PRONEX FAPERGS/CNPq and FUC/RS

Resumo Objetivos The ability of nanomaterials to interact with biological systems in adverse ways is creating a new field known as nanotoxicology. In order to verify the possible toxicological effects of a polymeric nanocarrier device,prepared with poly(&epsilon-caprolactone) (PCL) and polysorbate 80 (PS80), we performed an acute toxicity test after intraperitoneal and intradermal administration of lipid-core nanocapsules (LNC) in Wistar rats. Métodos LNC suspensions were prepared by polymer interfacial deposition and properly characterized (mean particle size, polydispersity index (PDI), zeta potential and pH). The toxic effects were determined after LNC single intraperitoneal (i.p.) administration (30, 60 and 120 mg•kg-1) and via intradermal (i.d.) administration (12 mg•kg-1), in male Wistar rats weighing 280 ± 37 g, aged 6-8 weeks (n=6/group), according to the OECD procedure. Saline solution and PS80 0.78% were used as controls in the i.p. treatment, and saline was used as control in the i.d. treatment. Lipid damage was evaluated by malondialdehyde (MDA) quantification (Grotto et al., 2007) and DNA damage through the single cell gel electrophoresis (SCGE) assay (Singh et al. 1988). Data were statistically analyzed (ANOVA, Tukey, p < 0.05) and expressed as means ± SD. Ethics committee approval no. 18427. Resultados All formulations had particle size < 250nm, PDI 0.05; after i.d. treatment, DI was 52% vs. 50% in saline group ( p > 0.05). Also, MDA levels were not significantly altered in i.p and i.d. treated groups in comparison to both saline and PS80 controls, however PS80 and 120 mg•kg-1 presented higher levels (9.7 and 9.8 µM) compared to saline (9.3µM) after i.p. treatment, although p > 0.05. Conclusão Acute toxicity test showed a slight increase in damage index and MDA levels in the high-dose group, even though this increase was not significant. Moreover, MDA appeared to be influenced by polysorbate. In summary, further investigations are required to confirm if these biodegradable nanocapsules do not present genotoxicity and lipid damage, especially by performing a repeated-dose test. References: Singh, et al (1988) Exp. Cell Res. 175, 184–191. Grotto D, et al. J Pharm Biomed Anal 2007;43:619-24. OECD Guidelines, 2001.

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Resumo: 26.034

ECOTOXICOLOGIA E RESPOSTAS HISTOPATOLÓGICAS EM GIRINOS DE RÃ-TOURO SUBMETIDOS AO ROUNDUP-ORIGINAL.

Autores

1OLIVEIRA, C. R.

2, SILVA-ZACARIN, E. C. M.

3, COSTA, M. J.

1, SILVA-ZACARIN, E. C. M.

1

Laboratório de Biologia Estrutural e Funcional - UFSCar, 2 Laboratório de Biologia Estrutural e

Funcional - UFSCar, 3 Laboratório de Fisiologia da Conservação - UFSCar

Apoio Financeiro:

Resumo Objetivos Diante dos reconhecidos efeitos que os pesticidas podem causar aos animais expostos a herbicidas, o objetivo do presente estudo foi analisar morfológica e histoquimicamente os efeitos do herbicida Roundup-Original® no fígado de girinos de rãs-touro ( < i>Lithobates catesbeianus) submetidos aos ensaios ecotoxicológicos. Métodos Girinos recém eclodidos de rãs-touro ( < i>Lithobates catesbeianus) foram obtidos e mantidos no Laboratório de Fisiologia da Conservação dentro de aquários de 38L em um sistema semi-estático, com circulação contínua de água (1,2 L/h),

aeração constante, temperatura ambiente e fotoperíodo natural (≅ 12h claro:12h escuro) até atingirem o estágio 25 de Gosner (Protocolo do PUICT – 113/2010). Em seguida, os girinos foram divididos aleatoriamente em aquários de 18L, sendo um grupo controle (CT; n = 10, com uma réplica, massa corpórea=1,4-4,5g) e um grupo exposto ao Roundup-Original® (RO; 1ppm do equivalente ácido; n = 10, com uma réplica, massa corpórea=1,7-3,6g) durante 96 horas, correspondente a exposição aguda A concentração subletal correspondente de 1 ppm do herbicida Roundup® é uma dose ambientalmente relevante, sendo observada em afluentes próximos a terrenos agrícolas. Após a exposição, os animais foram sacrificados por concussão cefálica e sua massa corpórea foi mensurada. Durante este procedimento, pesou-se a massa corporal do girino e a massa do fígado, para que se pudesse calcular o índice hepatossomático. Em seguida seus órgãos foram expostos por corte crânio-caudal e os fígados coletados. Adicionalmente, os fígados foram fixados, desidratados e rotineiramente processados para embebição e inclusão em historesina. Posteriormente, cortaram-se os blocos de historesina do fígado no micrótomo e confeccionaram-se lâminas histológicas. As lâminas histológicas foram submetidos à coloração de Hematoxilina e Eosina (HE) para análise morfológica e a Azul de Bromofenol, PAS (Ácido Periódico de Schiff) e Sudam Black para análises histoquímicas. Por fim, as lâminas histológicas foram analisadas no microscópio óptico e fotodocumentadas. Resultados Os dados morfológicos do fígado dos girinos rã-touro expostos ao herbicida evidenciaram o aumento no nível de compactação dos núcleos dos hepatócitos, bem como observou-se um aumento na frequência de células melanomacrofágicas que formavam células polinucleadas em relação ao grupo controle. Também foi visualizado áreas degeneradas nos ácinos dos hepatócitos no grupo exposto. Enquanto que na análise histoquímica comparativa entre os grupos controle e exposto observou-se semelhanças na distribuição de proteínas totais, glicogênio e lipídios nos hepatócitos do fígado dos animais analisados. O teste estátisco realizado foi o índice hepatossomático, os resultados do IHS (índice hepatossomático) não evidenciaram diferenças significativas entre os animais do grupo exposto e controle (P > 0,05, ou seja, p = 0,0634). Nos animais expostos ao Roundup Original® o erro padrão foi de 2,63 ± 0,199, enquanto que nos animais controle foi de 2,12 ± 0,158. Entretanto, percebe-se a tendência dos animais expostos a terem um aumento no IHS, provavelmente indicando um processo de resposta do órgão frente a exposição ao herbicida. Conclusão Conclui-se que a exposição à baixa dose de Roundup-Original induz a degeneração dos hepatócitos, a formação de células melanomacrofágicas polinucleadas a compactação cromatínica dos núcleos dos hepatócitos. Em contraste, não

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foram observadas alterações na citoarquitetura do parênquima hepático dos animais expostos e nem modificações no padrão de distribuição de proteínas e glicogênio no citoplasma dos hepatócitos e nem de lipídios no interior dos vacúolos.

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Resumo: 26.035

INFLUÊNCIA DO TABAGISMO PASSIVO E CRÔNICO EXPERIMENTAL NO ESTROMA DO LOBO ANTERIOR DA PROSTATA DE RATOS

Autores 1PISSOLATO, M.

1, ALVAREZ, D. A. P.

1, GENOVEZ., P. S. S. A.

1,2, CARVALHO, C. A. F.

1

Departamento de Morfologia e Patologia Básica - FMJ, 2 Departamento de Anatomia - USP

Apoio Financeiro: Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Resumo Objetivos A glândula prostática é o órgão masculino mais comumente afetado por neoplasias benignas e malignas. A incidência está diretamente associada à idade, mas, fatores extrínsecos podem acelerar o início da doença. Estudos experimentais recentes tem demonstrado que a nicotina provoca neoplasias prostáticas em ratos. Por outro lado, a literatura especializada tem demonstrado que o indivíduo exposto à fumaça que sai da ponta acesa do cigarro inala três vezes mais nicotina, além dos demais componentes. Considerando a associação de dois importantes problemas de saúde pública, o tabagismo e as neoplasias prostáticas, teve este estudo o objetivo de avaliar, experimentalmente, a possível influência negativa da fumaça do cigarro no estroma do lobo anterior da próstata de ratos. Métodos Ratos machos (Rattus norvegicus albinus), com idade de 4 semanas e peso médio de 470g, foram divididos nos grupos controle (GC, n=5) e tabagista (GT, n=5). Os animais do GT foram mantidos em uma estante modificada de 180 cm³ simulando ambiente de fumantes onde foram expostos à fumaça de 3 cigarros (alto teor – alcatrão: 10mg; nicotina: 0,8mg; monóxido de carbono: 10mg) diariamente por 30 semanas. Os animais do GC foram manipulados nas mesmas condições experimentais do GT, sem exposição à fumaça do cigarro. Findo o período experimental, os animais de ambos os grupos (GC, GT) foram sacrificados com overdose de anestésico e amostras do lobo anterior da próstata foram retiradas e submetidas a procedimentos histológicos rotineiros. Cortes semi-seriados de 5 a 10µm foram corados com H&E e Picrossirius Hematoxilina. A metodologia descrita foi submetida ao Comitê de Ética em Pesquisa da Faculdade de Medicina de Jundiaí e obteve parecer favorável à sua realização (protocolo nº 336/2010). Para o estudo estereológico, foi utilizado um retículo de integração de 100 pontos sobreposto às imagens digitalizadas e uma régua graduada acoplada à ocular de 10X e objetiva de 100X. Resultados Diferenças significativas ( P < 0,01) foram observadas nas densidades de: colágeno I (GC=43,60%±4,97/GT=71,21%±4,32), colágeno III (GC=56,40%±4,97 / GT=28,79%±4,32) e fibroblastos (GC=5,97%±2,47 / GT=10,55%±1,23). As quantidades médias de leucócitos (GC=84,2±15,40 / GT=189,4±46,58) e de vasos sanguíneos (GC=33,2±8,04 / GT=134,4±64,38) também foram relativamente diferentes ( P < 0,01). Os volumes nucleares (GC=3,32μm3±0,26 / GT=5,08μm3±0,19) das células musculares lisas apresentaram aumento significativo ( P < 0,01). Conclusão O aumento das densidades dos vasos e das fibras colágenas I e também da quantidade de leucócitos, sugerem um processo inflamatório local, resultado da influência negativa da fumaça do cigarro. Desta forma, é lícito concluir que a inalação da fumaça do cigarro provoca alterações no estroma prostático do lobo anterior, o que pode contribuir para as alterações precoces e aceleramento de neoplasias neste órgão. Porém mais estudos se fazem necessários para a compreensão dos mecanismos de ação da fumaça do cigarro, bem como sua relação com as patologias prostáticas.

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Resumo: 26.036

EXPOSIÇÃO DE CARPAS (Cyprinus carpio) AO QUINCLORAC SOB UMA DIETA CONTENDO SELÊNIO

Autores 1ZANATTA, A.

1, LÓPES, T.

1, MURUSSI, C. R.

1, SANTI, A.

1, CLASEN, B. E.

1, DALABONA, F.

1, MENEZES, C. C.

1, LORO, V. L.

1 QUÍMICA - UFSM

Apoio Financeiro: CAPES E CNPq

Resumo Objetivos Avaliar os efeitos de uma dieta suplementada com selênio, na forma de disseleneto de difenila (SePh)2 em carpas (Cyprinus carpio) sobre parâmetros de estresse oxidativo. Métodos Foram utilizadas carpas juvenis medindo 10±3 cm e pesando 16± 2 g, alimentadas duas vezes ao dia durante 60 dias com uma ração controle sem (SePh)2, e outra com 3 ppm de (SePh)2. Após o período de alimentação, os peixes foram divididos em 4 grupos: 1) controle (ração sem selênio), 2) selênio (ração com (SePh)2), 3) Quinclorac (Dieta sem selênio e expostoas a 1 mg/L de Quinclorac) e 4) Quinclorac + Selênio (ração com (SePh)2 e expostos a 1mg/L de Quinclorac). Nos tecidos muscular e hepático foi determinado os níveis de TBARS (nmol MDA/mg de proteína) e a carbonilação de proteínas (nmol carbonil/mg de proteína). No tecido hepático também foram determinadas as atividades das enzimas catalase (µmol/min/mg de proteína), superóxido dismutase (UI de SOD/proteína) e glutationa-S-transferase (µmol GS-DNB/min/mg de proteína). Os resultados foram analisados através da ANOVA seguido pelo teste de Duncan´s. Este projeto foi aprovado no comitê de ética e bem estar animal UFSM nº71/2009 Resultados Os níveis de TBARS em fígado dos grupos alimentados com 3 ppm de (SePh)2 (2,19±0,49) e o grupo quinclorac + selênio (2,17±0,42) diminuíram em relação ao controle (2,86±0,38). Este parâmetro aumentou no grupo do quinclorac (3,74±0,43). No músculo os níveis de TBARS diminuíram nos grupos selênio (0,72±0,16) e quinclorac + selênio (0,76±0,12) em relação ao controle (1,00±0,16). Os níveis de cabonilação de proteína no fígado diminuíram nos grupos alimentados com 3ppm de (SePh)2 (4,81±0,73) e quinclorac + selênio (3,10±0,63) em relação ao controle (5,96±0,99). No músculo houve uma diminuição da proteína carbonil nos grupos selênio (5,19±1,28) e quinclorac + selênio (4,05±0,46) quando comparados ao controle (6,66±1,12). A atividade da catalase em fígado diminuiu no grupo quinclorac + selênio (1,10±0,23) em relação ao controle (1,51±0,34) e as enzimas SOD e GST reduziram no grupo quinclorac (5,65±0,54) e (0,20±0,02) respectivamente, enquanto que o grupo selênio aumentou (11,26±0,77) e (0,30±0,02) respectivamente em relação aos controles (7,80±2,37) e (0,26±0,02). Conclusão Os resultados indicam que uma dieta suplementada com o disseleneto de difenila protege os tecidos contra a indução do estresse oxidativo provocado pelo herbicida quinclorac, e também age melhorando as defesas antioxidantes.

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Resumo: 26.037

O impacto no desenvolvimento neurocomportamental induzido pela exposição á valeriana durante a gestação.

Autores 1CAMPOS, M. L. D.

2, BRANDÃO, M. A. F.

1, GUERRA, M. O.

1 Centro de Biologia e Reprodução -

UFJF, 2 Faculdade de Farmácia e bioquímica - UFJF

Apoio Financeiro: FAPEMIG, rede toxifar: rede 173/08, rede bioterismo: rede 172/08

Resumo Objetivos A valeriana é moderadamente sedativa e usada no tratamento da ansiedade e distúrbios do sono (Miyasaka et al.,Cochrane Database of Syst. Rev. 18, 2006). Durante a gestação a barreira hemoencefálica ainda não está estabelecida, o que permite a passagem de fármacos, via placenta, ao organismo fetal e ao cérebro, caso haja afinidade por esse órgão (Yang, et.al.,Birth Defects Res. 89:5, 2010). Assim, fitoterápicos que tenham potencial como ansiolítico, antidepressivo, anticonvulsivante e outros podem, potencialmente, chegar ao cérebro do feto. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito que a administração do extrato de Valeriana durante a gestação possa ter sobre o desenvolvimento físico e reflexológico dos filhotes. Métodos Vinte ratas Rattus Norvegicus Berkenhout,1769 grávidas, com 2-3 meses de idade, provenientes do biotério do Centro de Biologia da Reprodução, da UFJF, pesando entre 200-300g, receberam por via oral 500 (n=5), 1000(n=5) ou 2000mg/Kg(n=5) do extrato de valeriana ou o veículo (n=5) do 12º dia ao 19º dia de gestação. Quatro neonatos machos de cada mãe foram avaliados. Para determinação do desenvolvimento físico foram analisados: abertura dos olhos, desdobramento da orelha, aparecimento do lanugo e pelos, erupção do incisivo superior e inferior e descida dos testículos. Os reflexos estudados foram: resposta postural, preensão palmar, esquiva ao abismo, orientação e geotaxia negativa. Os resultados foram submetidos ao teste Qui-quadrado (α= 0.01) para comparar o grupo controle com cada grupo tratado. O protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de ética em Experimentação Animal da UFJF, (Nº 019/2011). Resultados Desdobramento de orelha, erupção do incisivo superior, abertura do olho e descida dos testículos foram semelhantes entre controle e tratados A erupção do incisivo inferior apresentou diferença entre o controle e tratamento 3 (Χ 2 =10,160, p=0,006), aparecimento do lanugo entre controle e tratamento 1 (Χ 2 =11,406, p=0,003) e o aparecimento do pelo entre controle e tratamento 1(Χ 2 =17,665, p < 0,001) e 2 (Χ 2 =10,392, p=0,006).A data de aparecimento dos reflexos foi semelhante entre os grupos. Conclusão A exposição intra-uterina à valeriana alterou a data de aparecimento do incisivo inferior, lanugo.

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Resumo: 26.038

EFFECTS OF GUARANÁ EXTRACT (Paullinia cupana, Mart.) ON HUMAN SPERMATOZOA CELLS FREEZING TOXICITY

Autores

1ASSMANN, C. E.

2, FLORES, E. R. S.

1, CADONÁ, F. C.

1, FANTINEL, M. R.

1, MOSTARDEIRO,

C. P. 1, MANICA-CATTANI, M. F.

1,3, CRUZ, I. B. M. D.

3, RIBEIRO, E. E.

2, BICA, C.

1,

ALGARVE, T. D. 1,3

, CRUZ, I. B. M. 1 Departamento de Morfologia - UFSM,

2 Departamento de

Patologia - UFCSPA, 3 Universidade Aberta da Terceira Idade - UEA

Apoio Financeiro: FAPEAM, FAPERGS, CNPq

Resumo Objetivos The aim of this study was to investigate whether guaraná supplementation ( < i>Paullinia cupana, Mart) in sperm freezing medium can affect the viability and oxidative biomarkers of spermatozoa post-thaw. Métodos The study was approved by the Institutional Review Board of the Universidade Federal de Santa Maria (RS, Brasil, process number: 23081.015838/2011-10). An ex vivo protocols using human sperm samples were performed. The study group included 3-4 young fertile men donators, with ages between 25-30 years. The samples were treated with different concentration of guaraná extract (0.1, 1, 5 and 10 µg/mL) and a negative control without guaraná supplementation. The sample cells were freezing at -80ºC during 24 hours. Additional protocol was performed to evaluate the spermatozoa guaraná protective effect without freezing process using sperm aliquots exposure to prooxidant compound (200 µM hydrogen peroxide, H2O2) maintained during 2h at 37ºC CO2 incubation. All treatments were performed in triplicate. Statistical analyses were carried out using SPSS version 18.0. The comparison among treatments was performed using One-way analysis of variance followed by a post hoc Tukey’s test. Resultados The results showed that guaraná supplementation at 5 and 10 µg/mL increase significantly the sperm post-thaw viability (5µg/mL=160%, 10µg/mL=150%, control=100%, p < /i>=0.003). The 10 µg/mL also decreased the carbonyl protein levels (0.187mmol/mg protein ± 0.011) and reactive oxidative species (ROS) production evaluated by 2'–7'-dichlorofluorescein diacetate assay (62.3% ± 3.3) when compared with control groups (0.177mmol/mg protein ± 0.005; 72.5% ± 1.4) respectively. These data suggest that guaraná have a cryoprotective effect on human sperm post-thaw. This increasing is probably related to integrated action of xanthine and catechins that are the main bioactive guaraná compounds. Complementary studies need to be performed to evaluate if the guaraná supplementation in freezing medium is safe in genotoxicity terms. Conclusão In conclusion, the results described here suggest that guaraná extracts at 5 and 10 µg/mL concentrations have a cryoprotective effect on human sperm post-thaw increasing this cell viability and decreasing the cellular ROS production.

FeSBE 2012

Resumo: 26.039

Quercetin protects the impairment of ezyme acetylcholinesterase activity on brain of rats exposed to cadmium

Autores

1ABDALLA, F. H.

1, CARVALHO, F. B.

1, STEFANELLO, N.

1, RODRIGUES, M. V.

1,

GONÇALVES, J. F. 1, MARTINS, C. C.

1, MAZZANTI, C. M. D. A.

1, CARDOSO, A. M.

1, MELO,

F. F. 1, BELMONTE, L. P.

1, MAZZANTI, C. M. D. A.

1 Química - UFSM

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS

Resumo Objetivos In the present study we investigated the effect of a compound natural antioxidant, quercetin, on acetylcholinesterase (AChE) activity on brain of rats orally exposed to cadmium. Métodos Adult male Wistar rats (70-90 days; 220-300 g) from the Central Animal House of the University Federal of Santa Maria (UFSM) were used in this experiment. The animals were maintained at a constant temperature (23±1°C) on a 12 h light/dark cycle with free access to food and water. All animal procedures were approved by the Animal Ethics Committee from the Federal University of Santa Maria (protocol under number: 031/2011). The rats received by oral administration: Cd as CdCl2 dissolved in saline (Cd 2.5 mg/kg)and Querc dissolved in ethanol 25% (vehicle) at doses of 5, 25, and 50 mg at 5 days a week for 45 days. Animals were randomly divided into eight groups of 10-14 animals each: saline/ethanol, saline/Querc 5 mg/kg, saline/Querc 25 mg/kg, saline/Querc 50 mg/kg, Cd/ethanol 25%, Cd/Querc 5 mg/kg, Cd/Querc 25 mg/kg, and Cd/Querc 50 mg/kg. Querc was administered 30 min after Cd. The solutions were freshly prepared; Cd was diluted in saline and the Querc in ethanol 25% and both were administered (1 ml/kg) between 9 and 11 a.m. After the treatment period, animals were first submitted to the euthanasia being previously anesthetized with halothane; the cerebral cortex, hippocampus, striatum, hypothalamus and cerebellum were collected for the subsequent enzymatic assay. The AChE enzymatic assay was determined and expressed in µmol AcSCh/h/mg of protein. Data were analyzed by two-way ANOVA followed by Tukey test ( P < 0.05). All data are expressed as mean ± SEM. Resultados The exposure to Cd decreased (53%) the AChE activity in the cerebral cortex while that the treatment with Querc 5, 25 and 50 mg/kg prevented this effect ( P < 0.05). In addition was observed that the AChE activity presented a significant decreased (51%) in hippocampus, and the treatment with Querc 5, 25 and 50 mg/kg prevented this effect ( P < 0.05). In the other hand in hypothalamus the Cd exposure increases (57.6%) the AChE activity and the treatment with Querc 5, 25 and 50 mg/kg also prevented this effect ( P < 0.05). No significant differences ( P < 0.05) was observed on the AChE activity in striatum and cerebellum. Conclusão Quercetin prevented the increase in AChE activity caused by Cd exposure. From these results it is concluded that Querc can be considered a promising compound in regard to natural therapies against hypocholinergic diseases and can thus be applied after pre-clinical studies for the treatment of neurodegenerative diseases such as behavioral and functional therapeutic inhibitor of AChE.

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Resumo: 26.040

Avaliação dos possíveis efeitos preventivos do CuCl2 sobre a atividade da δ-ALA-D induzido pela exposição ao HgCl2 em ratos jovens

Autores 1SIQUEIRA, L. F.

1, MORAES-SILVA, L.

1, FIUZA, T. L.

1, OLIVEIRA, C. S.

1, OLIVEIRA, V. A.

1,

PEREIRA, M. E. 1, INEU, R. P.

1, PEREIRA, M. E.

1 Química - UFSM

Apoio Financeiro: CNPq (503867/2011-0), CAPES, FAPERGS, PIBIC/ CNPq/ UFSM

Resumo Objetivos O mercúrio é um metal considerado um poluente ambiental originado de várias fontes tais como aquelas provenientes de áreas de mineração e de intensa atividade industrial. Sabe-se que o mercúrio pode induzir várias alterações bioquímicas e que sua toxicidade pode persistir por longos períodos. Considerando os efeitos da exposição a esse metal tóxico, o presente trabalho examinou os efeitos do mercúrio sobre a atividade da δ-ALA-D de diferentes tecidos em ratos jovens e investigou a possível ação preventiva do cobre, um metal essencial que possui importante papel no organismo participando de várias reações biológicas sendo, por exemplo, requerido para utilização do ferro e usado como cofator para uma variedade de metaloenzimas. Métodos Ratos jovens de ambos os sexos receberam uma dose diária (s.c.) de salina ou CuCl2 2H2O (6,95 mg/kg) do 3º ao 7º dia de idade e, nos cinco dias subseqüentes, receberam salina ou HgCl2 (5 mg/kg). Os animais foram mortos 21 dias após o fim da exposição ao mercúrio (33 dias de idade) e amostras de sangue, fígado, rim e cérebro foram coletadas. CEUA 096/2011. Resultados O ganho de peso corporal e o peso absoluto e relativo de fígado, rim e cérebro foram verificados. A ANOVA de duas vias (4 tratamento x 14 dias) revelou efeito significativo do tratamento [F(3,8)=5,40; p < 0,025], dia [F(13,104)=361,61; p < 0,001], e interação entre tratamento x dia [F(39,104)=6,53; p < 0,001] sobre o ganho de peso corporal. A interação foi significativa uma vez que animais tratados com cloreto de mercúrio (Sal-Hg) tiveram menor ganho de peso corporal que os demais grupos. Em relação ao peso dos órgãos, a ANOVA de uma via revelou efeito significativo do tratamento sobre o peso absoluto de fígado [F(3,8)=6,865, p < 0,013] e peso absoluto e relativo de rim [F(3,8)=4,172; p < 0,047; F(3,8)=15,562, p < 0,001, respectivamente] sem alteração do peso absoluto e relativo de cérebro. A exposição ao cloreto de mercúrio diminuiu significativamente o peso absoluto de fígado e aumentou o peso absoluto e relativo de rim (pos hoc de Duncan, p < 0,05). O cloreto de cobre preveniu totalmente o efeito do mercúrio sobre o ganho de peso corporal, peso absoluto de fígado e peso relativo de rim, além disso, preveniu parcialmente o aumento do peso absoluto renal. Quanto à atividade da δ-ALA-D, a ANOVA de uma via revelou efeito significativo do tratamento sobre a atividade da δ-ALA-D renal [F(3,8)=7,302, p < 0,011] sem alteração da atividade de sangue, fígado e cérebro. O teste pos hoc revelou que a administração de cloreto de mercúrio causou inibição da atividade da enzima renal ( p < 0,05). O pré-tratamento com cloreto de cobre preveniu totalmente esse efeito. Conclusão Assim, podemos concluir que o cobre, um importante metal essencial, pode ser usado como alternativa de tratamento preventivo aos efeitos deletérios do mercúrio, uma vez que foi capaz de prevenir alterações no ganho de peso corporal, peso de órgãos e atividade da δ-ALA-D renal. Também foi possível confirmar que o efeito protetor do cobre persiste mesmo quando o parâmetro é analisado muito tempo depois do pré-tratamento. Contudo mais estudos são necessários para verificar se o cobre pode prevenir outras alterações causadas pela exposição ao mercúrio.

FeSBE 2012

Resumo: 26.041

Parâmetros bioquímicos de ratas prenhas e sua prole expostos ao HgCl2 na água de beber

Autores 1Oliveira, C. S.

1, Pedroso, T. F.

1, Mesquita M.

1, Oliveira, V. A.

1, Ineu, R. P.

1, Moraes-Silva, L.

1,

Pereira, M. E. 1 Departamento de Química - UFSM

Apoio Financeiro: CAPES, PROBIC/ UFSM, CNPq

Resumo Objetivos O mercúrio (Hg) é um metal não essencial e pode causar alterações no metabolismo dos organismos vivos. Alguns estudos tem demonstrado a toxicidade do MeHg em ratas prenhas e sua prole, contudo poucos estudos tem verificado a toxicidade do HgCl2. Assim, este trabalho buscou investigar os efeitos da intoxicação com HgCl2 sobre parâmetros bioquímicos de ratas prenhas e sua prole expostas a diferentes doses de metal na água de beber. Métodos Vinte e um ratos Wistar (16 fêmeas virgens, 7-8 semanas de idade, pesando 190-220 g; e 5 machos experientes, 14-15 semanas de idade, pesando 250-300 g), provenientes do Biotério Central da Universidade Federal de Santa Maria, foram utilizados neste estudo. Para o acasalamento, os animais (3 fêmeas para 1 macho) foram mantidos na mesma caixa durante a noite e, na manhã seguinte, foi realizado o esfregaço vaginal para determinação da gravidez. Ao ser detectado espermatozóides, as ratas foram consideradas prenhas (dia 0 de gestação) e separadas nos seguintes grupos: G0 (controle, somente água destilada, n=7), G10 (10µg Hg2+/mL, n=4) e G50 (50µg Hg2+/mL, n=5). As ratas prenhas foram expostas ao HgCl2 na água de beber como única fonte líquida da dieta durante todo o período gestacional. A cada dois dias as ratas foram pesadas, assim como, foram realizadas as trocas das soluções de HgCl2 e a quantificação da ingestão de comida e água. No 20º dia de gestação, as ratas foram mortas por decapitação, o sangue foi coletado para obtenção do soro, e os tecidos retirados para determinação da atividade da enzima porfobilinogênio sintase (PBG-sintase). Este trabalho foi conduzido de acordo com as normas nacionais e institucionais do Comitê de Ética e Bem Estar Animal da Universidade Federal de Santa Maria (processo número 096/2011) para experimentos com animais. Resultados A ANOVA de uma via revelou efeito significativo do tratamento sobre o ganho de peso corporal [F(2,13)=4,876; p < 0,026], a ingestão de dieta sólida [F(2,13)=4,932; p < 0,025] e líquida [F(2,13)=14,892; p < 0,001], sobre o peso relativo de rim [F(2,13)=9,427; p < 0,003] e sobre o número de fetos [F(2,13)=9,182; p < 0,003]. A exposição ao HgCl2 nas doses de 10 e 50µg Hg2+/mL induziu uma menor ingestão líquida e um aumento no número de fetos, e a dose maior (50µg Hg2+/mL) ainda levou a um menor ganho de peso corporal, aumento do peso relativo renal e menor ingestão sólida das ratas prenhas (teste pos hoc de Duncan). Com relação aos parâmetros bioquímicos, a exposição ao HgCl2 não alterou os níveis séricos de ureia e creatinina, assim como não alterou a atividade da PBG-sintase de fígado, rim e placenta das ratas prenhas. Contudo, a ANOVA de uma via revelou efeito significativo do tratamento sobre a atividade da PBG-sintase hepática [F(2,13)=3,761; p < 0,05] de fetos, levando a um aumento na atividade da enzima PBG-sintase de fígado de fetos expostos a maior dose do metal via útero. Conclusão Os resultados do presente estudo mostram que a exposição de ratas prenhas ao mercúrio na forma de HgCl2 usando esta via de administração, nas doses testadas, causa um grau mínimo de toxicidade quando comparado a exposição ao mercúrio na forma de MeHg. Os animais intoxicados com Hg ingeriram menos água, provavelmente, em virtude da redução da palatabilidade causada pelo metal. Ainda, o aumento da atividade da PBG-sintase hepática dos fetos pode ser um mecanismo compensatório, visto que os fetos são expostos ao HgCl2 desde o início do seu desenvolvimento.

FeSBE 2012

Resumo: 26.042

Effects of acute exposure to ZnCl2 and HgCl2 on biochemical parameters of lactating and non-lactating rats

Autores 1Oliveira, V. A.

1, Mesquita, M.

1, Fonseca, T. P.

1, Oliveira, C. S.

1, Ineu, R. P.

1, Moraes-Silva, L.

1,

Siqueira, L. F. 1, Pereira, M. E.

1 Departamento de Química - UFSM

Apoio Financeiro: CAPES, PIBIC/UFSM, CNPq

Resumo Objetivos This work aims to investigate the action of HgCl2 on oxidative parameters and on markers of renal, hepatic and cerebral mercury toxicity of lactating (LR) and non-lactating rats (NLR). Furthermore, this study evaluated the preventing role of ZnCl2 against the HgCl2 toxicity. Métodos Adult Wistar rats, LR (24 animals, on day 7 and 8 of lactation, around 250g) and NLR (24 animals, around 180 g), were randomly divided in four experimental groups (n=6): Sal-Sal, Sal-Hg, Zn-Sal and Zn-Hg. The animals were subcutaneously exposed to pretreatment with ZnCl2 (27 mg/kg) or saline and on the following day were exposed to HgCl2 (5 mg/kg) or saline. Animals were killed for decapitation 24 hours after the HgCl2 exposure. Blood samples were collected to obtain the serum, and the tissues were removed for determination of δ-aminolevulinic acid dehydratase (δ-ALA-D) activity and total thiol (TSH) and non-protein thiol (NPSH) levels. This study was conducted in according to the guidelines of the Committee on Care and Use of Experimental Animal Resources, Federal University of Santa Maria, Brazil (096/2011). Resultados One-way ANOVA revealed significant effect of the treatment on liver absolute weight [F(3,23)=6.479; p˂0.003], kidney relative weight [F(3,23)=5.885; p˂0.005], on kidney TSH and liver NPSH levels [F(3,23)=3.361; p˂0.031 and F(3,23)=3.556; p˂0.033, respectively] and serum creatinine and urea levels [F(3.23)=5.443; p˂0.007 and F(3,23)=4.571; p˂0.014, respectively] from LR. The LR HgCl2-exposed presented liver absolute weight and renal TSH content significantly lower and kidney relative weight, serum creatinine and urea levels significantly higher than the control group (Duncan’s multiple range test: p˂0.05). Renal, hepatic and cerebral δ-ALA-D activity and renal and hepatic NPSH levels were not altered. ZnCl2 per se (Zn – Sal group) caused significant increase on hepatic NPSH levels. ZnCl2 (Zn – Hg group) prevented the increase of renal relative weight and the decrease (partially) of renal TSH in LR caused by HgCl2. In relation to NLR, one-way ANOVA revealed significant effect of the treatment on renal and hepatic δ-ALA-D activity [F(3,23)=9.150 p˂0.001 and F(3,23)=5.523 p˂0.006, respectively], on kidney TSH and liver NPSH levels [F(3,23)=22.724 p˂0.001 and F(3,23)=3.882 p˂0.024, respectively] and on serum creatinine and urea levels [F(3,23)=21.769 p˂0.001 and F(3,23)=13.361 p˂0.001, respectively]. NLR HgCl2-exposed presented significant inhibition in renal and hepatic δ-ALA-D activity, renal TSH levels significantly lower, and serum creatinine and urea levels significantly higher than the control group (Duncan’s multiple range test: p˂0.05). Cerebral δ-ALA-D activity and renal and hepatic NPSH levels were unaltered. ZnCl2 per se (Zn – Sal group) caused a significant increase on hepatic NPSH levels. ZnCl2 (Zn – Hg group) only prevented partially and totally the inhibition of renal and hepatic δ-ALA-D activity induced by HgCl2, respectively. Conclusão These results show that LR and NLR are differently sensitive to HgCl2. In fact, differently from LR, NLR presented inhibition in renal and hepatic δ-ALA-D activity and serum creatinine and urea levels were about 109% and 60% respectively higher than LR.

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Resumo: 26.043

BIOCHEMICAL AND MORPHOLOGICAL ALTERATIONS INDUCED BY THE CRUDE VENOM OF Polybia paulista WASP ON WISTAR RAT KIDNEY.

Autores

1KOCH, M. S.

1, BRAATZ, S. M.

1, QUADROS, T.

1, OLIVEIRA, M. R. P.

1, WILLE, A. C. M.

1,

APPEL, M. H. 2, BORBA, L. M.

1 Biologia Estrutural, Molecular e Genética - UEPG,

2 Análises

Clínicas - UEPG

Apoio Financeiro:

Resumo Objetivos The literature relates that multiple wasp stings can cause intravascular hemolysis, rhabdomyolisis, hepatocyte damage and acute renal failure. In this paper we investigated the occurrence of nephrotoxic effect from crude venom of the Polybia paulista wasp by using light microscopy, transmition electron microscopy and determination in the enzymes creatine phosphokinase (CK), urea and creatinine. Métodos For this purpose, variable doses of venom (10, 20 and 30µg/g of rat) quantified by Coomassie Blue method were injected intraperitoneally in male Wistar rat weighing 150-250g. Kidney fragments collected after 48h injection with venom (group treated) and with phosphate buffered saline (group control) were fixed in ALFAC solution, dehydrated in ethanol, embedded in paraffin, sliced and stained with hematoxilin-eosin. For ultrastructural study kidney treated with venom (30µg/g) were fixed in Karnovsky solution, post-fixed in osmium tetroxide and contrasted with uranyl acetate. Similarly, serum samples collected from the brachial plexus in the control group and treated with venom (in all the doses), were used for the determination of CK, urea and creatinine. The statistical analysis included the calculation of the means, variance and errors of the means. The significance of differences was evaluated by Student’s t test. This methodology was performed before the stablishment of the Ethics Committee on Animal Experimentation. Resultados Histopathological analysis of the kidney reveled tubule epithelium cells with hypocromic nucleus, total detachment of some cells to basal lamina and elimination for the lumen. Ultrastructural study showed a few sites of cytoplasmic degradation and mitochondrial swelling in the proximal tubule cells. Creatinine serum activity not showed significative increase in all doses tested (n=5). The urea presented slight increase, characterized by 29% and 40% in animals treated with doses of 20µg/g (n=5) and 30µg/g (n=5), respectively. Differently, CK activity showed significative increase of about 1.8x and 4.8x for the doses 20µg/g (n=3) and 30 µg/g (n=3) of the venom. Conclusão The pathophysiology of the acute renal failure is incertain, however the specific literature mentions it can be a result of hemolysis, rhabdomyolysis, disseminated intravascular coagulation and the direct nephrotoxic effect of the venom. The obtained data indicate that the crude venom of Polybia paulista wasp has an indirect nephrotoxic action, evidenced by the presence of rhabdomyolysis and tubular necrosis. Further studies are necessary for a better characterize of the nephrotoxic effect following wasp sting.

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Resumo: 26.044

Avaliação dos níveis de citocinas em embriões provenientes de mães tratadas com o veneno do escorpião Tityus bahiensis durante a gestação.

Autores 2,1

DORCE, A. L. C. 1, FREITAS, L. A. D.

1, FRARE, E. O.

1, DORCE, V. C.

1, NENCIONI, A. L. A.

1

Farmacologia - IBU, 2 Programa de Pós-Graduação em Ciências - CCD

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq e Fapesp (09/54710-3)

Resumo Objetivos Verificar possíveis alterações nos níveis das citocinas IL-1α, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-10 e INF-γ em embriões de ratos Wistar após o tratamento das fêmeas prenhes com o veneno do escorpião Tityus bahiensis. Métodos Os procedimentos realizados foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais do Instituto Butantan (CEUAIB) sobre o número de protocolo 513/08. Para nossos estudos foram utilizados embriões e suas placentas obtidos do cruzamento de ratos Wistar machos e fêmeas, sexualmente maduros, com aproximadamente 90 dias de vida, pesando entre 260 - 300 g. Para avaliação dos níveis de citocinas, fêmeas prenhes foram divididas em grupos de 5 animais cada, os quais receberam injeção de solução salina (grupos controle) na dose de 1ml/kg, lipopolisacarideos (LPS) na dose de 100μg/kg (grupo controle positivo) ou injeção de veneno bruto do escorpião Tityus bahiensis na dose de 2,5mg/kg (grupos experimentais) no 10º ou 16º dia gestacional. Os filhotes foram retirados por laparotomia 24 horas após os tratamentos. As amostras foram maceradas por homogeneizador de tecidos e centrifugadas a 10.000 r.p.m./10min a 4°C. Os tecidos foram colocados em coquetel inibidor de protease Sigma P8340 (100μl de coquetel para 34 ml de PBS). Os níveis de citocinas foram determinados por ensaios imunoenzimáticos. Resultados Após 24 horas verificamos em GD10 uma diminuição dos níveis de TNF-α (C 1514.8&plusmn325.2, V 193.5&plusmn186.0*, LPS 395.7&plusmn59,3*). Os demais parâmetros para esses animais não foram alterados. Em GD16 observou-se diminuição nos níveis de TNF-α (C 1424.6&plusmn195.2, V 110.1&plusmn138.5*, LPS 319.3&plusmn359.7*), IL-1β (C 66.6&plusmn33.9, V 11.5&plusmn1.6*, LPS 9.3&plusmn9.6*), IL-6 (C 852.8&plusmn164.7, V 388.4&plusmn78.0*, LPS 275.3&plusmn61.5*), IL-10 (C 293.5&plusmn99.3, V 133.2&plusmn66.2*, LPS 110.4&plusmn59.3*) e INF-γ (C 60.5&plusmn21.8, V 13.1&plusmn2.7*, LPS 26.6&plusmn1.6) quando comparados com seus grupos controles. Os níveis de IL-1α não apresentaram diferenças significantes. Conclusão O envenenamento materno moderado com o veneno do escorpião Tityus bahiensis causa alterações nos níveis de citocinas dos embriões quando analisados após 24 horas.

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Resumo: 26.045

Chemical compounds and some acute toxicological parameters of Bauhinia platypetala.

Autores 1OLIVEIRA, F.R.A.M.

2, SANTOS, F.J.B.

2, JUNIOR, J. S. C.

1, ALMEIDA, A. A. C.

1, FREITAS, R.

M. D. 1 Departamento de Bioquímica e Farmacologia - UFPI,

2 Departamento de Química - IFPI

Apoio Financeiro: Capes, CNPq e FAPEPI

Resumo Objetivos Investigate the safety of ethanol extract (EE) and the ethereal (EF), aqueous (AF), and ethyl acetate (EA) fractions from B. platypetala, and determine their toxicological effects in mice. Métodos The project was approved by Ethics Committee for Animal Experimentation of the Federal University of Piauí (Protocol number 038/2009). For each experiment, mice were randomly divided into five groups: control group treated with vehicle, four groups were treated 30 min before the behavioral tests and acute toxicity with only one dose of EE, EF, AF and EA (0.05 g/kg), and a reference group treated with DZP 0.001 g/kg. Observations were made on the LD50 of the extracts and fractions to evaluated the biochemical and hematological parameters. Resultados In EF, EA, and AF fractions the main components were phytol, stearic acid and myo-inositol, respectively. Our experiments could not determine the ED50, since no death was detected in acute toxicological tests. Ethanol extract and fractions did not cause alteration in motor activity, behavioral and respiratory rates. In open field test, only EE in the three doses tested, 12,5 (95,14 ± 2,087), 25 (94,43 ± 1,925) and 50 (92,14 ± 1,933) mg/Kg decreased the number of square crossed compared to vehicle group (101,4 ± 3,679; p < 0,05). Acute administration of the B. platypetala produces no change of hematological and biochemistry parameters. Conclusão Collectively, the results indicate that the extract and fractions from B. platypetala may be atoxic, showing that this can be used as a folk medicine.

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Resumo: 26.046

IMPACTO DO CONSUMO MATERNO DE ETANOL NO PERÍODO DE LACTAÇÃO SOBRE O DESENVOLVIMENTO REFLEXOLÓGICO DA SUA PROLE

Autores 1SHIKI, A. M.

1, MASUDA, M. Y.

1, SILVA, N. G.

1, ACCO, M.

1, BELLOT, R. G.

1,1,1,1,

CONCEIÇÃO, I. M. 1,1,1,1

, FREITAS, T. A. 1 NUCLEO DE PESQUISA - UMESP

Apoio Financeiro: CNPq-PIBIC; Centro de Neurociências – Fac. Saúde - UMESP

Resumo Objetivos Além de suas funções nutricionais e imunoprotetoras o leite materno é extremamente importante para o desenvolvimento adequado do sistema nervoso central. Muitas substâncias podem chegar ao lactente através do leite materno, sendo o etanol uma delas. A dependência ao etanol é uma doença que afeta o mundo inteiro, podendo atingir pessoas de ambos os sexos, todas as idades e condições socioeconômicas. É de corrente conhecimento que o etanol prejudica o desenvolvimento de embriões e fetos quando ingerido durante a gestação. Entretanto, poucos são os relatos das consequências de seu uso durante a lactação. Dessa forma, é nosso objetivo analisar o impacto sobre a prole do consumo de doses elevadas de etanol por suas mães durante o período de lactação. Métodos O uso dos animais foi aprovado pelo CEUA – Metodista sob protocolo n: 056/2011. Foram utilizadas 18 fêmeas de camundongos e suas ninhadas, divididas igualmente em dois grupos: etanol (ETA) (que recebeu solução de 8% de etanol do 2º ao 15º dias de lactação como fonte exclusiva de líquidos) e grupo controle (CT) (que recebeu água filtrada durante todo o experimento. Os parâmetros reflexológicos (reflexos de: preensão palmar, de geotaxia negativa, de subir, de agarrar) foram acompanhados do 3 ao 10 dia de lactação. Foi utilizado o teste T para verificar possíveis diferenças entre os grupos. A probabilidade de p < 0,05 foi considerada como sendo capaz de revelar diferenças estatisticamente significantes entre os grupos. Resultados Em relação aos filhotes machos foi observado diferença estatisticamente significante no Reflexo Postural do grupo ETA (2,362±0,874 ) em relação ao CT (0,198 ±0,188). Nos demais parâmetros analisados não foram encontrados diferença estatisticamente significante. Já nas fêmeas foi observada diferença estatisticamente significante do grupo ETA em relação ao CT nos reflexo de Escalar no dia 8: ETA (257,381±19,843) em relação ao CT (172,786±33,985) e no dia 10: ETA (215,048±23,724) e CT (114,643±32,791); Geotaxia Negativa no dia 6: ETA (31,143±5,439) em relação ao CT (15,071±3,814); no dia 8: ETA (26,952±5,307) e CT (7,786±1,534) e no dia 9: ETA (32,143±5,620) e CT (14,071±4,832). Nos demais parâmetros não foram observados diferença estatisticamente significante. Conclusão Esses dados demonstraram que a ingestão de etanol durante a lactação pode influenciar de forma negativa o desenvolvimento reflexológicos dos filhotes, sendo mais prejudicial para as fêmeas.

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Resumo: 26.047

ALTERAÇÕES COMPORTAMENTAIS E NEUROQUÍMICAS EM RATOS APÓS A ADMINISTRAÇÃO SUBCRÔNICA ORAL DE BENZO(a)PIRENO

Autores

6MACIEL, É. S.

3, BIASIBETTI, R.

2, COSTA, A. P.

3, LUNARDI, P.

6, SCHUNCK, R. V. A.

1,

BECKER, G. C. 4, DALLEGRAVE, E.

3, GONÇALVES, C. A.

5, GARCIA, S. C.

6,1, LEAL, M. B.

2,

LEAL, R. B. 1 Farmacologia - UFRGS,

2 Bioquímica - UFSC,

3 Bioquímica - UFRGS,

4 Departamento

de Ciências Básicas da Saúde - UFCSPA, 5 Departamento de Análises - UFRGS,

6 Programa de Pós

Graduação em Neurociências - UFRGS

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, INCT- Instituto Nacional de Análise Integrada do Risco

Ambiental e PROPESQ/UFRGS

Resumo Objetivos Benzo(a)pireno (BaP) é um contaminante ambiental formado durante a combustão incompleta de material orgânico. O papel do BaP como agente mutagênico e carcinogênico está bem definido, porém, poucos estudos relacionados ao efeito neurotóxico do BaP foram publicados. Por atravessar a barreira hemato-encefálica, o sistema nervoso central esta sujeito a danos provocados por este composto. A ativação glial em resposta a injúria cerebral envolve mudanças na proteína ácida fibrilar glial (GFAP) e na S100B, entre outras. As proteínas cinases ativadas por mitógenos (MAPKs) são mediadoras de várias respostas celulares, como proliferação celular, diferenciação, sobrevivência e morte. As principais são ERK1/2, JNK1/2 e p38MAPK. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da administração subcrônica oral de BaP sobre parâmetros comportamentais e neuroquímicos. Métodos Aprovação do comitê de ética da UFRGS número 18287. Ratos Wistar (n=12/grupo), machos (90 dias, peso entre 250-300g) foram tratados com BaP (2 mg/kg) ou óleo de milho (controle), via gavagem oral, uma vez ao dia, por 28 dias. O efeito de BaP sobre a atividade locomotora espontânea foi avaliado (caixa de atividade locomotora Insight Equipamentos Ltda) no 26o dia após o início do tratamento e a memória de curta e longa duração foi avaliada através do teste de reconhecimento de objetos no 27o e 28o dia, respectivamente. No 29o dia os animais foram anestesiados com xilazina (10mg)/cetamina (75 mg/kg) e posicionados no estereotáxico para a coleta do fluído cérebro-espinhal pela cisterna magna e o sangue total foi coletado da veia cava caudal, em seguida foram mortos por perfuração do diafragma. O cérebro foi removido e o hipocampo dissecado para as análises: ELISA para o imunoconteúdo de GFAP hipocampal e S100B no hipocampo, soro e líquor. Através de Western blotting no tecido hipocampal foram avaliadas as formas fosforiladas totais das proteínas ERK1/2, p38MAPK, JNK1/2 e B-actina. Análise estatística: teste de reconhecimento de objetos (Mann-Whitney U teste) e os demais resultados (teste t de Student). Resultados Um aumento significativo ( p < 0,05) na atividade locomotora dos animais tratados com BaP (8428,587mm±947,08mm) em relação ao grupo controle (5517,925mm±673,98mm) foi observado. No teste de reconhecimento de objetos, houve uma diminuição significativa ( p < 0,05) na memória de curta duração, onde o índice de reconhecimento dos animais tratados com BaP foi 46,0[43,3/50,0] e do grupo controle 55,9[53,5/58,4]. Não houve diferença na memória de longa duração (p=0,603). O imunoconteúdo de GFAP no tecido hipocampal dos animais tratados com BaP apresentou uma tendência de aumento (p=0,07) em relação ao grupo controle. O conteúdo de S100B aumentou significativamente ( p < 0,05) no líquor (BaP=281,9±54,88 e controle=100±30,98 ng/mL) e diminuiu ( P < 0,05) no soro (BaP=42,02868±8,700199 e controle=100±23,97876 ng/mL). Dentre as MAPKs, somente a ERK 2 apresentou uma diminuição significativa ( p < 0,01) no hipocampo dos animais tratados com BaP (BaP=78,63±7,41 e controle=102,23±3,54 fosforilação (% do controle). Conclusão BaP 2mg/kg alterou parâmetros tanto comportamentais (atividade locomotora e memória de curta duração) quanto

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neuroquímicos (tendência a astrogliose hipocampal, alteração do imunoconteúdo de S100B no líquor e soro e diminuição da ERK 2, envolvida com neuroproteção) sugerindo que estas alterações possam estar envolvidas nos mecanismos de neurotoxicidade de BaP.

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Resumo: 26.048

EFEITO DOS NANOTUBOS DE CARBONO FUNCIONALIZADOS COM POLIETILENOGLICOL SOBRE A MEMÓRIA E A CAPACIDADE ANTIOXIDANTE TOTAL DO HIPOCAMPO DE RATOS

Autores 1BOSCO, L. D.

1, PARFITT, G. M.

1, CAMPOS, R. C.

1, BUONOCORE, J. Q.

1, LIMA, J. V.

1,

BARROS, D. M. 1 Instituto de Ciências Biológicas - FURG

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq e INCT em Nanomateriais de Carbono

Resumo Objetivos Os nanotubos de carbono são materiais com dimensões na escala nanométrica cujas propriedades físico-químicas podem promover a interação com os sistemas biológicos e a potencial ocorrência de efeitos tóxicos. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito dos nanotubos de carbono de parede única funcionalizados com polietileno glicol (SWNT-PEG) sobre o comportamento de ratos e a capacidade antioxidante total (ACAP) do hipocampo destes animais. Métodos O presente projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal (parecer P029/2011). Ratos machos da espécie Rattus novergicus, com 2-3 meses de idade e pesando entre 300 e 350 g, foram anestesiados e submetidos à cirurgia estereotáxica para o implante de cânulas nos hipocampos direito e esquerdo. Após 48 h de recuperação da cirurgia os animais receberam, através da infusão intrahipocampal, as dispersões de SWNT-PEG nas concentrações de 0,5; 1,0 e 2,1 mg/mL e da solução salina (grupo controle), com n=12 por grupo experimental. O comportamento foi estudado através da tarefa do medo condicionado contextual (MCC) e o efeito dos tratamentos sobre a memória foi investigado em dois tempos distintos: na consolidação (infusão imediatamente após a sessão de treino) e na evocação (infusão 30 min antes da sessão de teste). O teste do MCC foi realizado 24 h após a sessão de treino e ao término do teste os animais foram mortos por decapitação. Os hipocampos foram dissecados e congelados para a determinação da ACAP por fluorimetria. Os resultados foram analisados por ANOVA de uma via e pós-teste de Tukey para valores de significância p < 0,05. Resultados Os resultados da tarefa de MCC foram expressos em média e erro padrão da média e se referem ao percentual de tempo em imobilidade para o total de 5 min de observação. Os dados da determinação da ACAP foram normalizados em relação ao controle e expressos em percentual do inverso da área relativa. Na tarefa de MCC, não houve diferença significativa entre os tratamentos realizados no tempo consolidação, enquanto neste mesmo tempo a ACAP apresentou uma redução significativa nos grupos SWNT-PEG 0,5 (55,21±3,40) e 1,0 (56,98±4,48) em relação aos grupos 2,1 mg/mL (86,56±8,48) e controle (100±6,07). A avaliação comportamental no tempo evocação, evidenciou a diminuição no tempo de imobilidade dos animais infundidos com as dispersões de SWNT-PEG nas concentrações de 0,5 (57,96±5,42), 1,0 (65,33±5,67) e 2,1 mg/mL (64,77±6,06) quando comparados ao grupo controle (86,35±4,30), embora a ACAP do hipocampo destes animais não apresentou diferença significativa entre os tratamentos (controle 100±6,00; SWNT-PEG 0,5 mg/mL: 107±10,04; SWNT-PEG 1,0 mg/mL: 99,55±10,43; SWNT-PEG 2,1 mg/mL: 108,2±8,8). Conclusão Os resultados desta pesquisa demonstraram que os SWNT-PEG podem interferir na memória e alterar o sistema de proteção antioxidante do hipocampo de ratos. Não foi observada uma relação dose-resposta, sugerindo que as características físico-químicas dos SWNT-PEG estão relacionadas aos efeitos biológicos destes nanomateriais. A divergência entre a resposta bioquímica do tecido e a comportamental evidenciou que o momento em que as dispersões de SWNT-PEG são infundidas é crítico para as alterações que este nanomaterial pode causar no tecido nervoso.

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Resumo: 26.049

EFEITO DA ADMINISTRAÇÃO INTRAPERITONEAL DE NANOCÁPSULAS DE NÚCLEO LIPÍDICO NA MEMÓRIA DE RATOS E NA GERAÇÃO DE ESPÉCIES REATIVAS DE OXIGÊNIO NO HIPOCAMPO

Autores

1PAESE, K.

2, BOSCO, L. D.

2, CAMPOS, R. C.

1, POHLMANN, A. R.

2, BARROS, D. M.

1,

GUTERRES, S. S. 1, GUTERRES, S. S.

1 Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas - UFRGS,

2 Pós

Graduação em Ciências Fisiológicas - Fisiologia Animal Comparada - FURG

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES e FAPERGS

Resumo Objetivos Nanocápsulas de núcleo lipídico (LNC) são sistemas vesiculares vastamente estudados visando à liberação controlada de fármacos e ativos cosméticos. Estudos demonstraram o aumento da concentração de fármacos no SNC quando estes são administrados nanoencapsulados, porém pouco se sabe sobre a segurança destes sistemas nanoparticulados frente a possíveis danos ao SNC. Levando-se em consideração que sistemas de diâmetro nanométrico apresentam propriedades físico-químicas diferenciadas e que estas podem levar a diferentes respostas biológicas torna-se fundamental avaliar a segurança destes sistemas, visto isto o objetivo deste trabalho foi investigar o efeito de LNC sobre o comportamento de ratos bem como sobre a geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) no hipocampo destes. Métodos Ratos machos ( < i>Rattus novergicus) (2-3 meses, 300-400g peso) receberam LNC por via i.p. nas concentrações de 10, 30 e 60 mg/kg expressas em relação ao polímero, os controles receberam salina e uma solução de Tween 80 com n=10/grupo. O comportamento foi estudado através das tarefas do labirinto aquático de Morris (LAM) e do medo condicionado contextual (MCC). Para a tarefa LAM os animais foram treinados por 5 dias consecutivos e receberam os tratamentos 30 min antes de cada sessão de treino, o teste foi realizado no 6º dia. No 7º dia, a última dose foi administrada 30 min antes do treino para o MCC e o teste foi realizado 24 h após. Durante os dias de realização das tarefas os animais foram pesados. Ao término do teste do MCC os animais foram mortos por decapitação e os hipocampos dissecados e congelados para a determinação de ROS por fluorimetria. Os resultados foram analisados por ANOVA/Tukey p < 0,05. CEUA - FURG (P063/2011) Resultados Na tarefa LAM foram realizados 5 dias de treino e no dia do teste o percentual de tempo de permanência no quadrante da plataforma foi determinado. A atividade locomotora foi avaliada no dia do teste pela distância percorrida e velocidade média. Para todos os tratamentos houve diferença significativa (média ± SEM) entre o primeiro e o último dia de treino indicando que os animais aprenderem a tarefa, quanto ao percentual de tempo de permanência não houve diferença significativa entre os grupos controle (37,56&plusmn2,66), Tween 80 (37,24&plusmn3,48), LNC 10mg/kg (36,85&plusmn3,94), LNC 30 mg/kg (34,93&plusmn3,04) e LNC 60mg/kg (36,73&plusmn3,84). A atividade locomotora também não diferiu entre os grupos estudados. No MCC os resultados são apresentados em percentual de tempo de imobilidade no dia do teste. Não foi observada diferença estatística entre os grupos controle (81,43&plusmn2,07), Tween 80 (76,13&plusmn3,95), LNC 10mg/kg (81,53&plusmn2,11), LNC 30mg/kg (79,47&plusmn3,36) e LNC 60mg/kg (75,30&plusmn5,39). A produção de ROS foi normalizada em relação ao controle e não houve diferença significativa entre os diferentes grupos estudados, variando de 107,5&plusmn10,74% para o grupo LNC 10 e 120&plusmn5,32% para o grupo Tween 80. Houve diminuição significativa de ganho de peso para os grupos tratados com LNC 10mg/kg (3,97&plusmn1,15%), LNC 30mg/kg (4,12&plusmn1,25%) e LNC 60mg/kg (0,30&plusmn0,55%) comparativamente ao grupo controle (9,50&plusmn1,31%). Conclusão Os resultados indicam que a administração i.p. de LNC não causa prejuízos na performance cognitiva e não altera o perfil

FeSBE 2012

de produção de ROS no hipocampo, porém diminui significativamente o ganho de peso após 7 dias de tratamento para todas as doses de LNC estudadas.

FeSBE 2012

Resumo: 26.050

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE AGUDA EM DOSES REPETIDAS,SUBCRONICA E CRONICA, EM CAMUNDONGOS, TRATADOS COM EXTRATO AQUOSO DO PÓ DE MESOCARPO DE Orbignya phalerata Mart

Autores

1MENDES, M. C. S.

1, SILVA, A. P. D. S. C. L. D.

1, POLICARPO, P. R.

1, NUNES, L. C. C.

1, RIOS,

V. M. 1, FREITAS, R. M. D.

1, OLIVEIRA, G. Z. D. S. D.

1, MORENO, L. C. G. E. A. I.

1,

OLIVEIRA, F. R. D. A. M. D. 1, FREITAS, R. M. D.

1 BIOQUIMICA E FARMACOLOGIA/

PROGRAMA POS GRADUACAO CIENCIAS FARMACEUTICAS - UFPI

Apoio Financeiro:

Resumo Objetivos O mesocarpo do babaçu (Orbignya phalerata Mart) produz um pó que é comumente utilizado pela população da região Nordeste do Brasil como medicamento e suplemento alimentar, todavia é importante conhecer os seus possíveis efeitos tóxicos, uma vez que são poucos os dados sobre sua eficácia e segurança para o consumo humano. Os objetivos deste trabalho foram investigar os efeitos da administração na forma aguda em doses repetidas (30 dias), subcrônica (90 dias) e crônica (120 dias) do extrato aquoso do pó (EAP) obtido do mesocarpo do babaçu, por meio dos parâmetros bioquímicos e hematológicos, em camundongos Swiss adultos (2 meses de idade), machos e fêmeas, com peso médio de 25 ± 5 g. Fornecendo, assim, dados a respeito da toxicidade do EAP, já que a população da região de ocorrência dos babaçuais (principalmente dos Estados do Maranhão e Piauí) o utiliza amplamente. Métodos Os protocolos experimentais e procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal da Universidade Federal do Piauí (CEEA / UFPI n º 044/09). Os animais (n=10/grupo), para cada grupo investigado, foram tratados por via oral (v.o) com o extrato aquoso do pó (EAP) do mesocarpo de babaçu nas doses de 1, 2 e 3 g kg-1 de peso corporal no decorrer de 30, 90 e 120 dias consecutivos. Em seguida, foi feita a coleta do sangue para avaliação dos parâmetros bioquímicos e hematológicos. No estudo estatístico os valores foram expressos como média ± erro padrão da média (E.P.M.). O nível de significância para rejeição da hipótese de nulidade foi sempre < a 5%. Resultados A administração v.o do EAP do mesocarpo de babaçu, não alterou de forma significativa, os parâmetros bioquímicos: glicose, uréia, creatinina, ácido úrico, triglicerídeos, colesterol total, proteínas totais, aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase, fosfatase alcalina, bilirrubina total, bilirrubina direta, permanecendo inalteradas após o tratamento com o EAP do babaçu nas doses testadas em comparação com o grupo controle. Assim como também não houve alteração nos parâmetros hematológicos. A contagem diferencial de leucócitos totais, hemácias, eosinófilos e monócitos revelaram pequenas flutuações, embora, dentro dos limites de referência e sem indicativo de importância clínica. Conclusão A administração aguda em doses repetidas, subcrônica e crônica do EAP do mesocarpo de babaçu não induziram nenhum efeito de risco na maioria dos parâmetros bioquímicos e hematológicos estudados em camundongos Swiss adultos. No entanto, novos estudos avaliando-se outros aspectos, são necessários, para justificar ainda mais o uso seguro do mesocarpo do babaçu.

FeSBE 2012

Resumo: 26.051

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIFÚNGICA E CITOTÓXICA DE SEMICARBAZONAS E TIOSSEMICARBAZONAS FRENTE A FUNGOS MICOTOXIGÊNICOS DE INTERESSE AGROPECUÁRIO

Autores

1,2PAIVA, R. O.

2, KNEIPP, L.

1, GOULART, C. M.

3, CARIDDI, L. N.

3, ESCOBAR, F. M.

3,

SABINI, L. I. 1, ECHEVARRIA, A.

1 Química - UFRRJ,

2 Micologia - FIOCRUZ,

3 Microbiologia e

Imunologia - UNRC

Apoio Financeiro: PPGCTIA/UFRRJ, FAPERJ, CAPES

Resumo Objetivos Micotoxinas são metabólitos secundários produzidos por fungos, identificadas em diversos produtos agrícolas, representando um sério fator de risco para a saúde humana e animal. Nosso objetivo foi avaliar a atividade antifúngica de substâncias da classe semicarbazonas (SM 1-9) e tiossemicarbazonas (TS 1-8), sintetizadas e caracterizadas por técnicas espectroscópicas, através do método de microdiluição em caldo, segundo norma preconizada pela CLSI (documento M38-A), frente aos fungos micotoxigênicos Aspergillus flavus, A. nomius, A. ochraceus, A. parasiticus e Fusarium verticillioides e, também, sua toxidez frente a células Vero e células mononucleares de sangue periférico humano (protocolo nº 2 no Comité Institucional de Ética de la Investigación en Salud-CIEIS do Instituto Médico Río Cuarto S.A., Río Cuarto, Argentina). Métodos As substâncias foram solubilizadas em DMSO: TWEEN 20: meio RPMI 1640 na razão 1:1:8. As amostras fúngicas foram obtidas na coleção micológica Trichomonaceae do Instituto Oswaldo Cruz, FIOCRUZ-RJ. Foram determinadas as concentrações mínimas inibitórias (MIC) e as concentrações mínimas fungicidas (MFC) frente aos fungos micotoxigênicos

nas concentrações de 500, 250, 125, 62,5, 31,2 e 15,6 g/mL. A toxidez foi avaliada frente a células mononucleares de sangue periférico humano utilizando o corante de exclusão Azul de Trypan. A viabilidade celular utilizando células Vero (clone 76, Cercopithecus aethiops kidney) foi determinada pelo teste de absorção de Vermelho Neutro (NRU). Todos os experimentos foram realizados em triplicata. Protocolo nº 2 no Comité Institucional de Ética. Resultados

A classe das TS foi a mais efetiva. A TS-6 apresentou MIC igual a 250 g/mL para A. nomius, A. ochraceus e A. parasiticus

e MIC de 500 g/mL para A. flavus e F. verticillioides. Enquanto que, TS-3 inibiu 100%, na concentração de 500 g/mL, o

crescimento de A. flavus, A. parasiticus e F. verticillioides, a TS-8 inibiu 100%, na concentração de 500 g/mL, o

crescimento de A. flavus e A. parasiticus, este, também teve o crescimento inibido (MIC = 500 g/mL) pelas TS-1, TS-2, e TS-4. Dentre as SM ensaiadas, SM-1 e SM-4 afetaram somente o crescimento de A. flavus e F. verticillioides (MIC = 500

g/mL). No ensaio da concentração mínima fungicida (MFC), todas as SM e as TS (TS-3 e TS-6) apresentaram efeito

fungistático (MFC > 500 g/mL) frente às amostras fúngicas, e a TS-6 efeito fungicida contra F. verticillioides (MFC = 500

g/mL). Os ensaios de citotoxicidade frente às células mononucleares e células Vero, realizados com as substâncias que apresentaram atividade antifúngica (SM-1, SM-2, TS-6), mostraram que as SM não foram tóxicas nas concentrações ensaiadas. No entanto, a TS-6 apresentou efeito citotóxico frente aos dois tipos de células avaliadas. Conclusão As TS e SM apresentaram atividade antifúngica, podendo se tornar uma alternativa como medida profilática ao crescimento fúngico e produção de micotoxinas.

FeSBE 2012

Resumo: 26.052

THE THROMBIN-LIKE ENZYME FROM Bothrops pictus SNAKE VENOM. PURIFICATION AND DEVELOPMENT OF SIMPLE STANDARD ASSAY PROCEDURES FOR THE CHARACTERIZATION OF A COAGULANT ENZYME UPON FIBRINOGEN

Autores 1VILCA-QUISPE, A.

1, PONCE-SOTO, L. A.

1, MARANGONI, S.

1 Bioquimica - UNICAMP

Apoio Financeiro: Capes

Resumo Objetivos Was purification and partial enzymatic characterization of a new serineprotease (TLBpic) with thrombin-like activity from B. pictus snake venom by simple standard assay procedures. Métodos TLBpic was purified according to the method described by Vilca-Quispe et al. (Toxicon 55 (745-53) 2010) on the analytical RP-HPLC μ-Bondapak C18 column (Waters). The proteins were eluted at a flow rate of 1 mL/min and elution profile was monitored at 280nm. SDS-PAGE (12,5%) in a discontinuous gel was used to estimate the molecular mass of the proteins, under reducing and non-reducing conditions. TLBpic activity was measured using the synthetic substrate N-benzoyl-L-arginine-p-nitroanilide (BapNA). The standard assay mixture contained 240 μL of substrate and 4 μL of TLBpic in a final volume of 245 μL. After the addition of the TLBpic (4μg), the mixture was incubated for up to 30 min at 37•C. The initial velocity of the reaction (Vo), KM and Vmax of TLBpic were determined using a Lineweaver-Burk. The effects of different protease inhibitors of TLBpic were examined with its activity on BApNA. The inhibition assays were determined by incubating 5 mM of the inhibitors phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) and TLBpic for 15 min before being added to the mixture in 240μL of BapNA at 37•C. The Fibrinogenolytic activity of the TLBpic on fibrinogen was evaluated by SDS–PAGE (12,5%): A) Different incubation times: TLBpic (2 μg) was incubated with bovine fibrinogen (0,2%) at 37•C separately for 0, 15, 30, 60, 120 or 240 min; B) Different pH values: TLBpic (2 μg) was incubated with bovine fibrinogen (0,2%) separately at pH values of 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 and 10 for 2h; C) Different temperatures: TLBpic (2 μg) was incubated with bovine fibrinogen (0,2%) separately at temperatures of 25, 35, 45, 55 and 65 °C for 2h; and D) Effect of metal ions TLBrod (2 μg) was incubated with bovine fibrinogen (0,2%) separately containing 0.05 M final concentration of Ca 2+ , Mg<sup2+ , Mn 2+ , Ba 2+ , or Zn 2+ at 37•C for 2h. To finish the reaction it was stopped by the addition of 0.9 mL denaturalizing solution (Tris-HCl 0.05M; urea 10mM, b-mercaptoethanol 10%, SDS 2% and bromophenol blue (0.05%, w/v)) and aliquots were taken to examine the fibrinogen degradation products at each time point. All experiments were conduced in accordance with guidelines of the Ethics Committee CEUA/UNICAMP N 1932-1. Resultados TLBpic was isolated in one chromatographic step in RP-HPLC and its amidolytic activity was measured by DL-BApNA. The value of KM and Vmax were 1.9x10 -1 M and 0.95x10 -1 nmoles p-NA/lt/min, respectively determined using a Lineweaver-

Burk plot and the SDS-PAGE showed homogeneity and a molecular weight of ∼35 kDa. The inhibitory effects by PMSF on the amidolytic activity suggest that TLBpic is a serineprotease. TLBpic was characterized biologically through fibrigenolytic activity; these solutions in SDS-PAGE showed a fast degradation of the α-chain, a slow degradation of β-chain and it did not affect the γ-chain. In fibrigenolytic activity also, TLBpic displayed good cleavage activities on bovine fibrinogen across a wide range of temperatures (35-45•C) and pH values (7–9.5). These results indicate that TLBpic is a thermally stable enzyme. With the metal ion assays showed that TLBpic was inhibited by Ba 2+ and Zn 2+ , but not by Ca 2+ , Mg 2+ and Mn 2+ . Conclusão Using a simple and rapid procedure based on RP-HPLC was purified one serineprotease with thrombin-like activity; TLBpic

FeSBE 2012

can be isolated with high grade of purity showing a molecular mass ∼35kDa, similar to those of other thrombin-like enzymes from other snake venoms. TLBpic have the ability to degrade fibrinogen and showed α and β chain cleavage maintaining its properties at different pH and temperature values.

Resumo: 26.053

AVALIAÇÃO DA FUNÇÃO HEPÁTICA EM TRABALHADORES OCUPACIONALMENTE EXPOSTOS AO BENZENO

Autores

1BARTH, A.

1, MORO, A. M.

1, BRUCKER, N.

1, FREITAS, F. A. D.

1, CHARÃO, M. F.

1,

DURGANTE, J. 1, CAMPANHARO, S.

1, GARCIA, S.

1, SAUER, E.

1, GAUER, B.

1, GARCIA, S.

1

Faculdade de Farmácia - UFRGS

Apoio Financeiro: CNPq, INAIRA, CAPES, CEVS

Resumo Objetivos O monitoramento ocupacional para exposição ao benzeno tem como biomarcador o ácido trans, trans-mucônico urinário. No entanto, a quantificação das enzimas hepáticas também é recomendada na avaliação da hepatotoxicidade causada pelo benzeno, afim de detectar precocemente as alterações hepáticas que podem acometer trabalhadores expostos. O objetivo deste estudo foi avaliar a função hepática de trabalhadores ocupacionalmente expostos ao benzeno através da quantificação de enzimas hepáticas e do ácido trans, trans-mucônico. Métodos Este estudo clinico-laboratorial foi realizado em 20 frentistas homens da cidade de Santa Maria/RS (idade média de 37,50±1,88 anos) com tempo de médio de exposição ao benzeno de 149,65±21,73 meses. O grupo controle foi composto por 20 indivíduos saudáveis não expostos ocupacionalmente ao benzeno (idade média de 38,15±2,95 anos). A função hepática foi avaliada através da quantificação sérica das enzimas alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST) por método cinético UV automatizado. A monitorização biológica do benzeno foi realizada através da quantificação urinária de ácido trans, trans-mucônico (AttM) pelo método descrito em Int. Arch. Occup. Environ. Health, France 62; 529, 1990. A análise estatística foi realizada através do programa Statistica 6.0. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão médio. As comparações entre grupos foram executadas pelo teste de Mann-Whitney e os testes de correlação foram realizadas de acordo com Spearman, seguindo a distribuição das variáveis. Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (projeto 21728). Resultados As atividades de ALT e AST foram significativamente aumentadas no grupo de expostos em comparação ao grupo controle (23,35±2,45 vs. 14,30±1,41 U/L; p < 0,001) e (24,80±1,90 vs. 10,25±0,62 U/L; p < 0,001), respectivamente. O AttM urinário foi de 0,54±0,12 mg/g creatinina e de 0,13±0,03 mg/g creatinina para o grupo exposto e controle, respectivamente ( p < 0,001). Correlações positivas de Spearman foram observadas entre tempo de exposição e AttM urinário (r=0,63; p < 0,001), tempo de exposição e ALT (r=0,46; p < 0,001) e tempo de exposição e AST (r=0,80; p < 0,001). Conclusão Esses resultados demonstraram alterações na função hepática e do biomarcador de exposição ao benzeno no grupo de

FeSBE 2012

expostos em relação ao grupo controle. Além disso, o aumento da atividade das enzimas hepáticas e da excreção do AttM urinário foi acompanhado pelo aumento do tempo de exposição ao benzeno, sugerindo que a exposição crônica ao benzeno pode contribuir para alterações no tecido hepático.

Resumo: 26.054

AVALIAÇÃO DE EFEITOS COMPORTAMENTAIS E DANO AO DNA INDUZIDOS POR BENZO(A)PIRENO EM RATAS APÓS ADMINISTRAÇÃO ORAL SUBCRÔNICA

Autores

1SCHUNCK, R. V. A.

1, MACIEL, É. S.

2, BECKER, G. C.

2, SALOMON, J.

3, BRANCO, C. S.

4,

FREITAS, F. A. 4,5

, DALLEGRAVE, E. 4,5

, DALLEGRAVE, E. 3, SALVADOR, M.

4, GARCIA, S. C.

1,2, LEAL, M. B.

1 Neurociências - UFRGS,

2 Farmacologia - UFRGS,

3 Biotecnologia - UCS,

4

Análises - UFRGS, 5 Centro de Informação Toxicológica - UFCSPA

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, INCT- Instituto Nacional de Análise Integrada do Risco

Ambiental e PROPESQ/UFRGS.

Resumo Objetivos Objetivos: Benzo(a)pireno (BaP) é um composto tóxico pertencente à classe de hidrocarbonetos policíclicos aromáticos, conhecido por ser um poderoso agente mutagênico e carcinogênico. Forma-se pela combustão incompleta de matérias orgânicas acumulando-se no ar, no solo e na água como material particulado. Apesar de seus efeitos tóxicos serem amplamente estudados, os mecanismos por meio dos quais pode causar danos ainda permanecem incertos. No presente estudo, investigamos os efeitos da administração subcrônica oral em ratos Wistar, fêmeas (120 dias, 250-300g) de BaP sobre parâmetros comportamentais e indução de danos ao ácido desoxiribonucléico (DNA). Métodos Métodos: Os experimentos foram realizados após a aprovação do comitê de ética da UFRGS (protocolo número 18287). Ratas (6-8 por grupo) foram tratados, diariamente, por 30 dias com BaP (1 mg/kg) ou óleo de amendoim (grupo controle), via gavagem oral. Alterações comportamentais foram avaliadas através do teste de atividade locomotora (caixa de atividade locomotora Insight Equipamentos Ltda.), em três períodos do tratamento (dias 1, 14 e 28) e o teste de memória de longa duração (LTP) através do reconhecimento de objetos (dias 29 e 30). Por se tratar de fêmeas, o ciclo estral foi avaliado através de esfregaços vaginais. A avaliação comportamental foi realizada somente nas fases metaestro ou diestro, assim, a variação nos dias de realização dos testes comportamentais foi de ± 1 dia. Sinais de morbidade, toxicidade e mortalidade, assim como a variação do peso corporal foram avaliados diariamente. No trigésimo primeiro dia os animais foram anestesiados com xilazina e cetamina (10mg e 75mg/kg, respectivamente) e amostras de sangue da veia cava caudal foram coletadas para a análise de dano ao DNA (ensaio cometa). Após a coleta de sangue, os animais foram sacrificados por perfuração do diafragma e seus órgãos removidos e limpos de tecidos adjacentes. O teste “t de Student” foi utilizado para avaliar os resultados da atividade locomotora e ensaio cometa e Mann-Whitney U teste para avaliar a memória de reconhecimento de objetos. O cálculo da massa relativa foi obtido através do peso corporal [Peso Relativo = (Peso do animal X 100) / Peso do animal no 1º dia] e analisado por ANOVA de uma via/ Duncan. Resultados

FeSBE 2012

Resultados: não foram observados sinais de morbidade, toxicidade, mortalidade ou diferenças significativas quanto ao peso corporal relativo. Um aumento da atividade locomotora foi observado (Dia 14, p < 0,05) nos animais tratados com BaP (10516,73mm±1171,82mm) em relação aos controles (6762,43mm±1065,888mm) e uma tendência (p=0,07) ao final do tratamento (dia 28). No teste de reconhecimento de objetos, na retenção da memória (LTP) o índice de reconhecimento (mediana [intervalo interquartil]) nos animais tratados com BaP foi de 45,3[26,4/63,3] e nos animais do grupo controle 42,3[37,6/56,0], não apresentaram diferença significativa entre os grupos (p=0,9). Os animais tratados com BaP apresentaram maior índice ( p < 0,05) de dano total ao DNA (122,83± 32,56) quando comparados aos grupos controles (38,17 ± 7,17). Danos de classe quatro no grupo tratado com BaP foram maiores ( p < 0,05) em relação ao grupo controle. Conclusão Conclusão: O dano causado ao DNA pode ser responsável, em parte, pelos efeitos tóxicos do BaP, porém, mais estudos com doses maiores ou administração crônica são necessários.

FeSBE 2012

Resumo: 26.055

Avaliação preliminar do efeito cicatrizante do extrato etanólico de Vernonia scorpioides (Asteraceae)

Autores

1MARIN, M. G. P.

1, GRINEVIICIUS, V. M. A. D. S.

1, FARIAS, M. S.

1, BÜCKER, N. C. F.

1,

SILVA, F. O. D. 1, PEDROSA, R. C.

2, SANTOS, J. D. S.

2, ROSSI, M. H.

1 centro de ciencias

biologicas - ufsc, 2 s/n - IB

Apoio Financeiro: CNPq (bolsas PIBIC, produtividade, mestrado e doutorado) e CAPES

(doutorado).

Resumo Objetivos As folhas de Vernonia scorpioides (Lam.) Pers. (Asteraceae) são usadas popularmente no Brasil para o tratamento de úlceras, lesões e inflamações (DALAZEN et al., 2005).O objetivo do presente trabalho foi caracterizar o efeito cicatrizante do extrato etanólico da V. scorpiodes em modelo experimental in vivo. Métodos Avaliou-se a redução da lesão através do modelo de excisão de pele de camundongos Balb/C ( < i>Mus musculus L.)(machos, n=3; peso=20±2g), mantidos sob condições controladas (fotoperíodo 12h, 25±2oC, 60% de U.R. do ar) com ração comercial e água ad libitum, sob aprovação da CEUA-UFSC (protocolo PO1245)( PEREIRA A.,2010). No período de tratamento (12 dias) foram efetuadas 4 aplicações tópicas de 100µL de salina (0,9%)(CN) e de soluções salinas contendo 50, 100 e 200mg/kg do extrato EtOH de V. Scorpiodes (VS) solubilizado com DMSO (10%) e tween 20 (1%). Este extrato foi preparado macerando-se as partes aéreas (desidratadas e moídas) em etanol a frio (3 dias) e, após 3 extrações, removeu-se o solvente, sob pressão reduzida. A redução da lesão foi mensurada com o software ImageJ (http://imagej.nih.gov/ij/download/), comparando as imagens digitais tomadas a cada 3 dias desde o 1o até o 12o dia após a lesão, para cada animal. Os resultados obtidos foram avaliados estatisticamente pela análise de variância ANOVA, complementada por Tukey-Kramer e o teste de Barlett (p < 0,05). Resultados VS50, VS100 e VS200 promoveram a redução da lesão respectivamente em 68,06±20,00; 96,31±0,63 e 88,61±2,82 % em relação ao CN (55,25±5,08%) de maneira tempo-dependente. Observou-se presença de pelos na área após a regeneração. Conclusão A partir dos resultados obtidos é possível afirmar que o tratamento com o extrato etanólico de V. scorpiodes na concentração de 100mg/kg foi o mais efetivo na redução da lesão. Além disto, os dados obtidos validam o uso popular

FeSBE 2012

desta planta como agente cicatrizante.

Resumo: 26.056

INVESTIGAÇÃO DOS EFEITOS PROTETORES DO SELENITO DE SÓDIO SOBRE A NEUROTOXICIDADE DO METILMERCÚRIO EM DIFERENTES PERÍODOS DE DESENVOLVIMENTO DE RATOS WISTAR

Autores 1SANTOS, N. B.

1, TEIXEIRA, B. N.

1, CAPELASSO, D. L. S.

1, SAMPAIO, G. S. A.

1, YAMADA,

E. S. 1, COSTA, E. T.

1 Fisiologia - UFPA

Apoio Financeiro: Capes

Resumo Objetivos Este trabalho utilizou ratos Wistar em diferentes períodos do neuro-desenvolvimento a fim de investigar possíveis efeitos protetores do selênio (selenito de sódio) em um modelo in vivo de exposição ao metilmercúrio (MeHg). Métodos Os sujeitos (grupos de idades P1 e P21) receberam por amamentação ou via oral: veículo, Selênio (5ppm), MeHg (10ppm) ou Selênio (5ppm) mais MeHg (10ppm) durante 20 e 10 dias respectivamente (n = 8 por grupo). Após o tratamento, os ratos foram submetidos aos testes de campo aberto e labirinto aquático a fim de analisar déficits motores e de memória/aprendizagem, respectivamente. Para fins de análise histológica, foi realizada perfusão e imunohistoquimica para Neu-N. Com o objetivo de aferir possíveis efeitos deletérios sobre populações neuronais, foi feita contagem estereológica dos neurônios do hipocampo (camada polimórfica do giro denteado). CEUA BIO020-10. Resultados foi observada redução significativa na atividade locomotora de neonatos (P1) mediante exposição ao MeHg. Além disso, nos grupos expostos ao MeHg (isoladamente ou associado ao selênio) verificou-se déficits de aprendizagem e memória. Já os animais P21 expostos ao MeHg apresentaram aumento na atividade locomotora, efeito abolido pela administração concomitante de selênio. Quando submetidos ao labirinto aquático, observou-se redução do tempo de latência apenas no grupo controle e naqueles animais expostos ao selênio. Como resultado das contagens estereológicas, observou-se diminuição do número de neurônios no hipocampo somente nos animais P21 expostos ao mercúrio. Conclusão Os resultados obtidos sob estas condições experimentais mostraram que a exposição ao MeHg resultou em efeitos comportamentais diversos dependentes da idade dos sujeitos. A administração de selênio só foi capaz de interferir positivamente nos déficits locomotores observados em animais mais velhos. Além disso, foi observado que a administração de selênio não interferiu nos distúrbios comportamentais de memória/aprendizagem, tampouco na morte neuronal induzida

FeSBE 2012

por MeHg. Possíveis mecanismos associados a este padrão de proteção parcial por selênio, especialmente em estágios mais avançados de desenvolvimento neural ainda necessitam ser elucidados.

Resumo: 26.057

Long-term intoxication with cadmium salt or contaminated potatoes impaired memory of rats

Autores

1FERREIRA, R. D.

1, GONÇALVES, J. F.

1, COSTA, P. D.

1, ROSA, M. M. D.

1, ABDALLA, F. H.

1,

RAMOS, A. 1, SCHETINGER, M. R. C.

1, PAVIN, S. S.

1, BARBOSA, N. B. D. V.

1, MORSCH, V.

M. 1, RUBIN, M. A.

1 Centro de Ciências Naturais e Exatas - UFSM

Apoio Financeiro: FAPERGS, CAPES e CNPq

Resumo Objetivos The objective of this study was to investigate whether Cd intoxication would affect learning and memory processes of rats subjected to long-term exposure to diet with low levels of Cd salt or with Cd from contaminated potato tubers measured on inhibitory avoidance apparatus. Métodos Potato plantlets ( < i>Solanum tuberosum L., cv. Macaca) for tissue culture were obtained from the Potato Breeding and Genetics Germplasm Program, Universidade Federal de Santa Maria, RS, Brazil. The plantlets were micropropagated in MS medium, transplanted to plastic trays containing sand, and the collect tubers planted in sand box and cultivated with 0 or 10 µM Cd. Produced tubers were oven-dried, powder processed and utilized for diet (4.5 µg Cd/g of dry weight). Male Wistar rats (3-week-old weighing 85.5±5.3 g) were randomly distributed among the six experimental groups (10 animals per group) and fed with the different diets during 5 months: control (only diet), pot (10% of diet composed of tuber powder from potatoes grown without Cd), pot + Cd (10% of diet composed of tuber powder from potatoes grown with Cd), 1, 5 or 25 mg/kg Cd (diet mixed with 1, 5 or 25 mg/kg of CdCl2 salt dissolved in water). Memory, foot shock sensitivity and lomocotor activity were evaluated using the inhibitory avoidance apparatus and open field test according to Guerra et al. and Rubin et al. (Psychopharmacol. 186; 150-08, 2006; J. Neurosci. 24; 1328-34, 2004). All animal procedures were approved by the Animal Ethics Committee from the Federal University of Santa Maria (protocol under number: 031/2011). Statistical analysis of training and test step-down latencies was carried out by Kruskal–Wallis followed by post hoc analyses (nonparametric Dunn’s test), where p < 0.05 was considered to represent a significant difference in all experiments. CEUA 031/2011. Resultados Long-term diet exposure to 1, 5, 25 mg/kg Cd salt or Cd accumulated into potato tubers decreased the step-down latencies presented by rats at 75%, 81%, 67% and 73% , respectively, when compared to the control group, suggesting memory impairment in rats. Statistical analysis of training showed no difference significant among the groups. Because the motivational disparities in the training session may account for differences in inhibitory avoidance at testing, experiments were performed to assess whether Cd or potato intake affected shock threshold, or locomotor ability of the animals.

FeSBE 2012

Statistical analysis of open-field data revealed that neither Cd nor potato intake did not cause gross motor disabilities at testing, as demonstrated by the similar number of crossing or rearing responses exhibited by the animals. Moreover, Cd or potato intake did not alter foot shock sensitivity, as demonstrated by the similar flinch, jump and vocalization thresholds exhibited by the rats. Conclusão Taken together, the results of the present study showed that neither Cd nor potato intake caused motor disabilities or altered foot shock sensitivity which exclude the possibility that these parameters may have contributed to the alteration in step-down latencies. Thus, we suggest that the decreased step-down latencies presented by rats after long-term exposure to diet with 1, 5, 25 mg/kg Cd salt or contaminated potatoes indicate memory impairment in these animals. Thus, it is relevant to understand the mechanisms of Cd neurotoxicity since the Cd concentrations used in this study were realistic to humans.

Resumo: 26.058

AVALIAÇÃO DAS DIMENSÕES CEREBRAIS E DANOS HIPOCAMPAIS EM RATOS TRATADOS CRONICAMENTE COM ETANOL DA ADOLESCÊNCIA À FASE ADULTA

Autores

1OLIVEIRA, A. C. A.

1, FERNANDES, R. M.

1, SANTANA, L. N. S.

1, FERNANDES, L. M. P.

1,

SANTOS, I. R. C. 1, GOMES-LEAL, W.

2, MAIA, C. S. F.

1, LIMA, R. R.

1 ICB - UFPA,

2 Faculdade

de Farmácia - UFPA

Apoio Financeiro: FAPESPA

Resumo Objetivos Investigar os efeitos neuropatológicos no hipocampo de ratos tratados cronicamente com etanol desde a adolescência até a fase adulta. Métodos Ratos Wistar fêmeas de 35 dias de vida receberam, por gavagem, etanol na dosagem de 6,0 g/kg/dia até os 90 dias (n=10). Os animais controle receberam água filtrada, também por gavagem (n=10). Os animais foram perfundidos com solução salina heparinizada a 0.9% seguida de paraformaldeído a 4%, 24h após o último dia de intoxicação. Após a perfusão, os encéfalos foram removidos da caixa craniana e pós-fixados no mesmo fixador por 12h. Realizou-se mensuração encefálica através da técnica de estudo mesoscópico, usando paquímetro digital (Mitutoyo Corp., CD 56” CT) nas dimensões ântero-posterior, dorso-ventral e látero-lateral. Em seguida, os encéfalos foram crioprotegidos em soluções com concentrações crescentes de sacarose e glicerol, embebidos em Tissue tek, congelados em câmara de criostato, com efeito Peltier (-55°C – Carl Zeiss, Mícron, Alemanha), obtendo-se secções coronais de 20 µm e 50 µm de espessura para análise imunohistoquímica e histoquímica, respectivamente. Todas as secções foram montadas diretamente em lâminas gelatinizadas durante a microtomia. Para análise imunohistoquímica, utilizou-se anticorpos para neurônios maduros (anti-Neu-N), astrócitos (GFAP) e microglia (Iba1). Quantificou-se o número de células Neu-N + utilizando objetiva de 40X e retículo de contagem de área 0.0625 mm2 acoplada à ocular de um microscópio óptico (Eclipse E200, NIKON® ) nas áreas CA1, CA3 e hilo hipocampal (3 secções por animal, 5 animais de cada grupo) Devido às dimensões reduzidas das regiões CA1 e CA3, contou-se três campos de 0,01875 mm2 . Os dados quantitativos obtidos foram submetidos à análise estatística pelo teste considerando p < 0,005. Os resultados foram expressos em média e erro padrão. Utilizou-se o software GraphPad Prism 5.0. CEPAE-UFPA: BIO043-12 Resultados O tratamento com etanol induziu diminuição das dimensões encefálicas nos sentidos ântero-posterior(ETOH= 13.8±0,09; Controle= 15±0,04), látero-lateral (ETOH= 13.2±0.04; Controle= 14.4±0.04) e dorso-ventral (ETOH= 7.8±0.4 Controle=

FeSBE 2012

8.7±0.4), bem como do número de células NeuN+ em CA1 (23.7±1,27)em relação ao controle (31±1,73); hilo hipocampal também apresentou diminuição(23.7±2,08)quando comparado ao controle (33,1±1.8) , mas não em CA3 (26±1.02 ; Controle= 28,5±1,8). Houve ativação microglial em pequeno número, caracterizada pela presença de células arredondadas com morfologia de fagócitos, mas intensa diminuição da população microglial em geral microglial (células ramificadas). Houve astrocitose nos animais tratados com etanol, relação aos animais controle. Conclusão A intoxicação crônica com etanol induz alterações estruturais no sistema nervoso central, concomitante com perda neuronal em CA1 e hilo hipocampal, astrocitose, pequena microgliose e aparente redução das células microgliais em geral.

Resumo: 26.059

Avaliação preliminar do efeito cicatrizante de membranas de polietileno linear de baixa densidade

Autores

1MOTA, N. S. R. S.

1, CHARMILLOT, M. P. F.

1, MARIN, M. G. P.

1, GRINEVIICIUS, V. M. A. D.

S. 2, PILETTI, R.

2, FIORI, J. J.

2, FIORI, M. A.

3, PICH, C. T.

1, PEDROSA, R. C.

1 Bioquímica -

ufsc, 2 s/d - unesc,

3 campus araranguá - ufsc

Apoio Financeiro:

Agradecimentos ao CNPq por bolsas PIBIC (CHARMILLOT, M.P.F.; e

MARIN, M.G.P.) e bolsa produtividade (PEDROSA, R.C.) e à CAPES por bolsa

de doutorado (GRINEVICIUS, V.M.A.S.)

Resumo Objetivos O polietileno linear de baixa densidade (PELBD) apresenta estrutura molecular de cadeias lineares com ramificações curtas formando filmes esticáveis com várias possibilidades de aplicação tecnológica (SCHOUTERDEN,1987).O objetivo desta pesquisa foi verificar a atividade cicatrizante de membranas de PELBD na redução da lesão cutânea em modelo experimental in vivo. Métodos A avaliação da redução da lesão foi efetuada através de modelo de excisão de pele de camundongos isogênicos Balb/C ( < i>Mus musculus L.) (machos, n=6; peso+ 20±2g), mantidos sob condições controladas (fotoperíodo 12h, 25±2oC, 60% de U.R. do ar) com ração comercial e água ad libitum ( protocolo PP00620 aprovado pela CEUA da UFSC) )( PEREIRA A.,2010). Após 12 dias de tratamento por aplicação tópica de solução salina (0,9%, 100 µL)(CN) (periodicidade 3 dias) e cobertura do leito da lesão com membranas de PELDB com dimensões padronizadas(diâmetro 1,5cm) fixadas com adesivo DERMABOND (Jonhson&Jonhson; BIOMEDIC). As membranas do tipo não perfurada (MN) e do tipo perfurada (MP)(perfurações equidistantes 0,5mm) foram obtidas a partir de filmes produzidos por extrusão (0,5mm de espessura) e posteriormente esterilizadas (lâmpada UV,20min). Mensurou-se a redução da lesão com o software ImageJ (http://imagej.nih.gov/ij/download/), comparando as imagens digitais do 1o com as do 12 o dia após a lesão, para cada animal. Os resultados obtidos foram avaliados estatisticamente pela análise de variância ANOVA, complementada por Tukey-Kramer e o teste de Barlett (p < 0,05). Resultados MN e MP promoveram a redução da lesão em 87,11±10,84% e 94,56±17,10%, respectivamente, sendo significativamente

FeSBE 2012

maiores do que o CN (52,79±10,42%) ( p < 0,05). MP e MN não absorveram exsudados do local lesado onde se observou a presença de pelos após a regeneração. Conclusão Ambas as membranas promoveram ótima redução da lesão no período de tratamento, embora a tentativa de aumentar a porosidade (MP) não tenha sido estatisticamente significativa. A não aderência das membranas na pele lesionada ou íntegra pode representar uma vantagem para aplicações biomédicas.

Resumo: 26.060

ALTERAÇÕES TECIDUAIS NA MEDULA ESPINHAL APÓS INTOXICAÇÃO CRÔNICA POR ETANOL

Autores

1FERNANDES, R. M.

1, OLIVEIRA, A. C. A.

2, CARVALHO, S. D.

1, CORDEIRO-DE-SOUZA, C.

1, FERNANDES, L. M. P.

1, SANTANA, L. N. S.

1, GOMES-LEAL, W.

2, MAIA, C. S. F.

1, LIMA,

R. R. 1 ICB - UFPA,

2 Faculdade de Farmácia - UFPA

Apoio Financeiro: FAPESPA

Resumo Objetivos Investigar os efeitos da intoxicação crônica com etanol nas substâncias cinzenta e branca da medula espinhal de ratos adultos. Métodos Ratos Wistar, fêmeas, com idade de 35 dias receberam, por gavagem, etanol na dose de 6 g/Kg/dia durante 90 dias. Os animais controle receberam água destilada por gavagem. Os animais foram perfundidos com solução salina a 0.9% heparinizada, seguida de paraformaldeído a 4% 24 h após o último dia de intoxicação. Após a perfusão, as medulas foram isoladas da coluna vertebral e pós-fixadas no mesmo fixador usado na perfusão por 12h e crioprotegidas em soluções com concentrações crescentes de sacarose e glicerol. Em seguida, blocos dos segmentos cervical, torácico e lombar da medula espinhal foram embebidos em Tissue tek, congelados em câmara de criostato com efeito Peltier (-55°C – Carl Zeiss, Mícron, Alemanha). Obtiveram-se secções coronais de 30 e 50 micrômetros de espessura para análise imunohistoquímica e histoquímica, respectivamente. Todas as secções foram montadas diretamente em lâminas gelatinizadas durante a microtomia. Secções foram coradas com violeta de cresila e submetidas à imunohistoquímica para proteína básica de mielina (anti-MBP), oligodendrócitos patológicos (anti-TAU-1) e para astrócitos (anti-GFAP) com o anticorpo GFAP. Neurônios motores do corno ventral de todos os segmentos foram contados em 5 secções por animal (N=5) tanto no grupo intoxicado quanto no grupo controle,em lâminas coradas com violeta de cresila. Comparações entre os grupos foram feitas usando o teste t-Student com significância estatística de p < 0,05. BIO043-12 CEPAE-UFPA. Resultados Observou-se reatividade geral de células Tau-1 positivas, sendo encontrados corpos celulares de oligondendrócitos em regiões torácicas. Também observou-se aumento de astrocitose. Houve uma diminuição na reatividade para MBP na

FeSBE 2012

substância branca assim como uma diminuição no número de neurônios motores nos segmentos torácico (ETOH=12.8±1.1; Controle=16.3±1.6) e lombar (ETOH=11.3±1.2; Controle=15.6±1.8) dos animais intoxicados com etanol em relação aos animais do grupo controle, não apresentando diferença estatisticamente significativas no segmento cervical (ETOH=22.2±2.5; Controle=25.4±1.6). Conclusão A intoxicação crônica com etanol induz alterações na medula espinhal de roedores adultos, incluindo alteração em oligodendrócitos, astrocitose elevada, desmielinização e danos a motoneurônios.

Resumo: 26.061

ANALISYS OF PROTEINS OF THE VENOM OF THREE DIFFERENT SPECIES OF BRAZILIAN TITYUS SCORPIONS.

Autores 1,1,1,1

SANTOS, M. B. V. D. 1, SOUZA, A.

1, LUNA, M. S. A.

1, DORCE, V. A. C.

1, YAMANOUYE,

N. 1, YAMANOUYE, N.

1 Laboratorio de Farmacologia - IBu

Apoio Financeiro: Capes,FUNDAP/SES

Resumo Objetivos Scorpions of the genus Tityus are widely distributed over all Brazil. The scorpion venoms are constituted by a complex mixture of toxins: proteins of high molecular mass (MW > 10 kDa), peptides (MW 3-10 kDa) and low molecular mass compounds (Mw 14 kDa) profile of the venom from three different species of the genus Tityus: T. serrulatus (Ts), T. bahiensis (Tb) and T. obscurus (To). Métodos Methods: Venom from Ts, Tb and To were obtained from Laboratory of Arthropod, Instituto Butantan. The proteins of the venom from Ts, Tb and To (30 µg) were separated by SDS-PAGE (10%) and were stained with Coomassie Brilliant Blue. The gel was scanned and the density of the bands was quantified with Quantity One software (Bio-Rad). Western blotting was performed to verify whether scorpion antivenom produced by Instituto Butantan can recognize the proteins of these venoms. Resultados Results: Analyses of the protein profile of the venom from three species of Tityus scorpions showed that 3 bands around 74, 60 and 46 kDa are present in all three venoms. Two bands of approximately 36 and 16 kDa are present in Ts and Tb venoms. Two bands of approximately 63 and 41 kDa are exclusively in Ts venom and 3 bands of approximately 37, 33 and 22 kDa appear only in To venom. Scorpion antivenom recognizes most of protein of the venoms. Only the 16 and 22 kDa proteins from Tb and To, respectively were not recognized. Conclusão

FeSBE 2012

Conclusion: Our data showed marked differences among the venoms analyzed, and some bands from Tb and To are not recognized by scorpion antivenom. These data suggest that these proteins could have a significant role in the toxicity of the venom of scorpions that could contribute to the pathology of the envenoming.