espectrofotometria de absorção atómica com chama e camara de grafite

Espectrofotometria de Absoro Atmica

com chama ou com cmara de grafite para

determinao do Mg, Cu, Zn e Se

Sandra Isabel Costa

Departamento de Promoo da Sade e Preveno de Doenas No Transmissveis

(DPSPDNT)

Unidade de Diagnstico Laboratorial e Referncia

(UDLR)

Lisboa, 29 de Novembro de 2013

2- Avaliar os resultados do novo programa de AEQ

no qual comemos a participar em 2013 -Trace

elements

1- Fundamentos tericos da EAA-chama para a

determinao do zinco, magnsio cobre e da EAA-

cmara de grafite para a determinao do selnio.

3-Validao da metodologia de EAA para as

determinaes do Mg, Cu, Zn e Se

Espectroscopia de Absoro Atmica- EAA

A EAA uma tcnica analtica de deteo qualitativa e determinao

quantitativa de determinados elementos, recorrendo absoro de

radiao pelos tomos no seu estado gasoso.

A sua elevada sensibilidade, torna este mtodo adequado para a anlise

de microelementos ou elementos vestigiais, presentes como impurezas

ou como componentes normais de amostras.

Os trs campos da Espectroscopia Atmica so:

-Emisso

-Absoro

-Fluorescncia

Espectroscopia de Absoro Atmica- EAA

Quando a radiao com um comprimento de onda adequado incide

num grupo de tomos livres, no seu estado fundamental, os tomos

podem absorver essa radiao, passando estes para um estado

excitado- Absoro Atmica .

Atravs da medio da quantidade de radiao absorvida pode-se

determinar quantitativamente o elemento presente.

Etapas do processo de atomizao por chama:

Aspirao da amostra

Formao do aerossol

Formao do vapor atmico

Absoro da radiao eletromagntica

Transies energticas

EAA por chama

Queimador

I0 I

TS CEAGP. TS CEAGP.

A amostra em soluo

aspirada

chama onde

convertida em

tomos livres.

Passa para um

nebulizador, onde se

forma uma neblina

fina (aerossol).

Os tomos mantm-se no estado

fundamental podendo absorver

radiao de comprimento de

onda conveniente.

o tomo no estado

fundamental passa para

um estado energtico

mais elevado (excitado)

Lmpada de ctodo co

Modulador

DET AMP

T = I/I0 Abs = log I0/I

Monocromador

Nebulizador

Nebulizador

Queimador

Absoro de radiao Quebra de

ligaes Evaporao do

solvente

Evaporao dos solutos

Componentes bsicos de um EAA por chama

Atomizador

Fonte emissora de radiao

Monocromador

Detetor de radiao

Sistema de amplificao e medio do sinal


Lmpada de descarga sem elctrodo

Lmpada de descarga de vapor

Lmpada de ctodo co

Lmpada de ctodo de intensidade elevada

EAA por chama


Lmpada de ctodo co

Constituda por um nodo e um ctodo que contm o

elemento ao qual a lmpada se destina.

Os elctrodos esto hermeticamente fechados numa atmosfera

de um gs monoatmico ultra puro, non ou rgon.

S possivel analisar um elemento de cada vez (substituir a

lmpada sempre que se analisam elementos diferentes.)

Requerem uma fonte de tenso muito estvel.

EAA por chama

EAA - Interferentes A absoro atmica conhecida como uma tcnica muito especfica

com poucas interferncias.

Interferncias em absoro atmica podem ser divididas em duas

categoriais:

1-Espectrais

resultam da absoro de radiao caracterstica por outros

elementos presentes.

afetam a formao dos tomos do analito, e podem ser devidas a:

efeito matriz

interferncias quimcas

interferncias de ionizao

2-No espectrais

Efeito matriz

EAA - Interferentes

se a amostra mais viscosa,

e/ou se a tenso superficial diferente dos padres

A eficincia de nebulizao pode ser diferente

entre amostras e padres.

ajustar o mais possvel a matriz dos padres matriz das amostras. Ex glicerol

cido ou outro reagente adicionado s amostras durante a preparao, dever ser adicionada aos padres e ao branco nas mesmas

concentraes.

mtodo de adio padro desvantagem: aplicado amostra a amostra (cada amostra implica uma

calibrao analitica).

Nebulizador

Compensar este tipo de interferncia:

Interferncia qumica

EAA - Interferentes

Formao de compostos termicamente mais estveis com o analito,no

sendo este totalmente decomposto pela energia disponvel na chama

Existem duas maneiras de abordar o problema:

- Adicionar em excesso um outro elemento que ir formar

preferencialmente um composto termicamente estvel com

o interferente

-Ex. xido de lantnio (determinao do Mg)

- aumentar a energia da chama, atravs do uso de outra

combinao de oxidante/combustvel (nem sempre

possivel porque o elemento a analisar pode decompr-se)

Nebulizador

Queimador

Interferncia de ionizao

EAA - Interferentes

Estas interferncias devem-se perda de um ou mais electres dos

tomos excitados.

Ex chamas de elevada temperatura (protxido de azoto/acetileno).

Este tipo de interferncias minimizam-se:

adio de um elemento facilmente ionizvel

(a presena de um excesso de electres livres faz diminuir a ionizao da

amostra, aumentando assim a sensibilidade do elemento em estudo.

EAA com atomizao electrotrmica

EAA com atomizao eletrotrmica tambm conhecida por em forno de grafite, ou em cmara de grafite, por ser habitualmente um pequeno tubo de grafite, o dispositivo onde ocorre a atomizao.

A amostra no estado lquido, suspenso ou slida, introduzida

num forno ou cmara de grafite, a qual sujeita a um aquecimento

progressivo previamente programado.

O programa de temperaturas aplicado cmara depende do

elemento a analisar e da matriz da amostra.

A preciso e exactido dos resultados obtidos por esta tcnica esto

relacionados com o tempo e temperatura programados.

Um programa tpico de temperaturas compreende quatro patamares


Etapa de secagem

Evaporao do solvente, deve ser feita de

modo suave para que no ocorram projeces

da amostra (decisivo para a preciso).

Nesta etapa faz-se passar um fluxo de gs

inerte atravs do tubo para uma secagem

rpida e suave da amostra.

Etapa da pirlise

Mineralizao dos componentes da matriz,

deve ser feita a uma temperatura to alta

quanto possvel sem que haja perda do

elemento a analisar.

Nesta etapa tambm se faz passar um fluxo

de gs inerte atravs do tubo para eliminar

vapores de constituintes da matriz ou fumos.


Etapa de Atomizao

Produo do vapor atmico, deve ser feita

temperatura mais baixa que conduza

maxima atomizao do elemento a analisar

(mxima sensibilidade).

Nesta etapa, em geral, o fluxo de gs

inerte interrompido, uma vez que reduz

o tempo de residncia dos tomos no tubo

de grafite, e consequentemente a

sensibilidade do mtodo.

Etapa de Limpeza

Eliminao de vapores constituintes da matriz.

Nesta etapa h passagem de fluxo de gs inerte.

EAA com atomizao eletrotrmica

Modificadores de matriz

Substncias que tm como funo alterar as propriedades do analito ou

da matriz.

Objetivo

Estabilizar (tornar menos voltil) o analito de modo a permitir efetuar

a pirlise a temperaturas mais elevadas:

maior eliminao dos componentes da matriz

menor probabilidade de ocorrerem interferncias.

Nitrato de Pd, Nitrato de Mg, Dihidrogenofosfato de amnio,...


Background

Pode ocorrer uma atenuao adicional do feixe de absoro especfico,

ao nvel da nuvem atmica devido a uma absoro molecular e a uma disperso da radiao

Processos/Sistemas de correo do background:

Uso de lmpadas de deutrio

Com base no efeito de Zeeman

Com base no efeito de Smith-Hiettje


Background

Lmpadas de deutrio 1 Quando o chopper (modulador rotatorio) d passagem radiao

da lmpada de deutrio D2, mede-

se o Background

2 Quando o chopper d passagem radiao da lmpada

de ctodo oco mede-se a

atenuao total do feixe (AA+Bkg)

3 Subtraindo o primeiro valor ao

segundo, temos a Abs. Atmica (AA)

especfica.

Efeito de Zeeman

Ocorre quando a amostra colocada num campo magntico.


O campo magntico alternadamente ligado e desligado (numa

frequncia de fraes de segundo durante a atomizao).

Com o campo magntico desligado mede-se a atenuao total

(Amostra + Bkg)

Com o campo magntico ligado mede-se o Bkg.

A existncia de uma interaco do campo magntico com os

momentos magnticos orbital de spin do tomo, leva diviso da

linha espectral em trs ou mais.

+ -

Campo magntico

fonte

Quando o vapor atmico submetido a um forte campo magntico os

nveis eletrnicos so desdobrados.

: amostra + background

+: background

- +

Sinal analtico

Efeito de Zeeman


Espectroscopia de Absoro Atmica

Sinal da Chama vs Eletrotrmica

Na EAA/ chama, o sinal contnuo:

inicialmente sobe, correspondendo

chegada da soluo chama; depois

permanece mais ou menos constante

durante o tempo em que a soluo estiver

a ser aspirada.

Na EAA/ grafite, o sinal um pico. A

produo dos tomos e o aparecimento dos

mesmos no percurso ptico, levam ao

aparecimento de um sinal de absorvncia. O

sinal vai ser avaliado em termos da sua

rea (absorvncia integrada).

EAA com chama vs EAA cmara de grafite

Cmara de grafite

Sensibilidade cerca de 100 a 1000

vezes maior.

Permite efectuar as

determinaes com volumes de

amostra muito mais pequenas (10

20mL).

Permite fazer determinaes

diretamente em amostras slidas

Equipamento mais dispendioso

Chama

S se poder aplicar em solues

necessrio um volume de

amostra superior ao utilizado na

cmara de grafite

Boa preciso

Mais rpido



elements






Erros sistemticos:

ocorrem sempre no mesmo sentido, mas quando identificados podem ser

corrigidos ou eliminados. Existe um desvio que assume sempre a mesma

direo (positivo ou negativo) em relao ao valor esperado, interferindo

assim na exatido.

Deteriorao do equipamento

Deteriorao gradual dos materiais de controlo/calibradores e reagentes

Balana mal calibrada

Erros sistemticos na pipetagem

Erros de operao

Tipos de erros

Causas mais frequentes :

Erros aleatrios: so erros que resultam de imprecises em medies e

portanto inevitveis. Afetam a reprodutibilidade e preciso dos resultados e

podem ser avaliados atravs da repetio de medies sobre a mesma

amostra.

Variaes das condies ambiente do laboratrio (temperatura)

Limitaes dos instrumentos de medida

M homogeneizao dos reagentes/amostras

Bolhas de ar no sistema

Tipos de erros

Causas mais frequentes :

Preciso e

Exato No Preciso e No

Exato

Preciso e No

Exato No Preciso e

Exato

O parmetro Bias permite ao laboratrio avaliar a sua inexatido, sendo que

esta corresponde ao desvio entre o valor obtido ou a mdia de muitos valores

em repetio e o valor verdadeiro ou esperado que deveria ter sido encontrado.

Avaliao Externa da Qualidade

Os dados necessrios para o seu clculo podem ser obtidos atravs do

tratamento dos dados de controlo interno e da avaliao externa da

qualidade.


O erro total (ET) a combinao linear de erros aleatrios e erros

sistemticos, a qual origina um intervalo de valores associado a um

determinado nvel de confiana, que caracteriza o erro da medio.

A apreciao feita seguindo os seguintes critrios:

ID 0,5 Excelente

0,5 < ID 1,0 Bom

1,0 < ID 2,0 Satisfaz

ID > 3,0 No satisfaz


Estima a exatido comparativamente mdia ponderada/calculada pelo

laboratrio organizador.

ndice de Desvio - usado para a avaliao do desempenho individual.

Determinaes realizadas no DPSPDNT por EAA (chama e

cmara de grafite )

Microelementos Tipo de amostra

Zn (10,7 18,4 mmol/L) Soro

Se (0,58 1,82 mmol/L) Soro

Cu (10,99 21,98 mmol/L) Soro

Cu (0,03 1,26 mmol/L) Urina

Mg (0,7 0,91 mmol/L) Soro

Mg(1,0 3,0 mmol/L) Sangue

Mg* Urina

*em 2014


NEQAS -Programa de Qumica Clinica-2013

Cu (soro) Mg (soro)

N

Ensaios %

N

Ensaios %

50 64

Excelentes 24 48,0 18 28,1

Bom 21 42,0 38 59,4

Satisfaz 4 8,0 5 7,8

No Satisfaz 1 2,0 3 4,7

Participmos em 114 ensaios:

Cu (50 ensaios - soro) 90% de desempenho bom ou excelente Mg (64 ensaios - soro) 88% de desempenho bom ou excelente

-4,0

-2,0

0,0

2,0

4,0

6,0

8,0 %

Cobre no soro

Magnsio no soro

Representao grfica dos ID calculados a partir da mdia de

resultados obtidos com todos os mtodos e o respectivo desvio

padro, para a determinao do Cu e o Mg, no soro, NEQAS- Qumica

Clnica ,2013


Cu (soro) Cu (urina) Mg (soro) Mg (sangue) Zn (soro) Se (soro)

N

Ensaios %

N

Ensaios %

N

Ensaios %

N

Ensaios %

N

Ensaios

% N

Ensaios %

14 14 14 14 14 14

Excelentes 8 57,1 8 57,1 8 57,1 10 71,4 7 50,0 2 14,3

Bom 6 42,9 6 42,9 6 42,9 4 28,6 6 42,9 7 50,0

Satisfaz 0 0,0 0 0,0 0 0,0 0 0,0 1 7,1 4 28,6

No Satisfaz 0 0,0 0 0,0 0 0,0 0 0,0 0 0,0 1 7,1


NEQAS Programa Trace elements (soro, urina, sangue) incio no ano de 2013

-4,00

-3,00

-2,00

-1,00

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00 %

Cobre no soro

Cobre na urina


Representao grfica dos ID calculados a partir dos resultados

obtidos para os laboratrio que utilizam o mesmo mtodo que ns,

para a determinao do io Cu no soro e urina, NEQAS Trace Elements, 2013

-4,0

-3,0

-2,0

-1,0

0,0

1,0

2,0

3,0

4,0 %

Mg no soro

Mg no sangue



obtidos com todos os mtodos, para a determinao do io Mg no

soro e no sangue, NEQAS Trace Elements, 2013

-8,0

-6,0

-4,0

-2,0

0,0

2,0

4,0

%

Zinco no soro

Selnio no soro



obtidos para os laboratrio que utilizam o mesmo mtodo que ns,

para a determinao do io Zn e io Se no soro, NEQAS Trace Elements, 2013

Cu (soro) Qumica clnica Cu (soro) Trace Elements

N Ensaios % N

Ensaios %

50 14

Excelente 24 48,0 8 57,1

Bom 21 42,0 6 42,9




Mg (soro) Qumica clnica Mg (soro) Trace Elements

N Ensaios % N

Ensaios %

64 14

Excelente 18 28,1 8 57,1

Bom 38 59,4 6 42,9




Zn (soro) Qumica clnica Zn (soro) Trace Elements

N Ensaios % N

Ensaios %

35 14

Excelente 5 14,3 7 50,0

Bom 27 77,1 6 42,9





NEQAS Programa Trace elements (soro, urina, sangue) incio no ano de 2013

Durante este ano participamos em 84 ensaios com um desempenho de

93% de Bom ou Excelente, 6 % de Satisfaz e 1% de No satisfaz

Mg (28 ensaios soro e sangue) 100% de desempenho bom ou excelente

Zn (14 ensaios - soro) 93% de desempenho bom ou excelente

Se (14 ensaios - soro) 64% de desempenho bom ou excelente

Cu (28 ensaios soro e urina) 100% de desempenho bom ou excelente

Vantagens Participao na AEQ - Trace Elements

Inclui as naturezas de amostra: soro, urina e sangue

Incluir o Selnio

Maior n de participantes com o mesmo mtodo e/ou utilizando

mtodos comparveis ex. ICP

Melhor desempenho na AEQ

Acrscimo no custo das determinaes

Desvantagens Participao na AEQ - Trace Elements



elements






Guia Relacre - Validao de Mtodos internos de ensaio em anlise qumica

Sempre que um Laboratrio utiliza mtodos internos de ensaio ter que realizar um

processo de validao desses mtodos, que inclua todos os registos obtidos.

A validao dos mtodos internos deve ser adaptada a cada caso, sendo

progressivamente mais exigente para as situaes indicadas:

A situao 1,2 e 3 so mais frequentes.

A situao 4 e 5 encontram-se mais em laboratrios de investigao.

5 - Mtodo baseado em tcnicas de ensaio inovadoras e no descritas na literatura

cientifica.

1 - Uma modificao menor da tcnica relativamente norma . Neste caso as

alteraes no levantam dvidas sobre a equivalncia tcnica dos resultados

2 - Uma modificao maior da tcnica relativamente norma . Neste caso as

alteraes levantam dvidas sobre a equivalncia tcnica dos resultados.

3 - Mtodo baseado em tcnica de ensaio conhecida, cuja aplicao ao ensaio

pretendido venha descrita em literatura cientfica, no existindo uma norma

de ensaio correspondente.

4 - Mtodo baseado em tcnica de ensaio conhecida, mas cuja aplicao ao ensaio

pretendido no venha descrita em literatura cientifica.

Validao da metodologia

1 - Gama de Trabalho/ Linearidade

Os requisitos mnimos para a validao de mtodos internos de

ensaio so:

5 - Exatido

4 - Preciso

3 - Sensibilidade

2 - Limiares analticos

1 - Gama de trabalho/ Linearidade

Metodologia que envolve o traado de uma curva de calibrao

Curva de calibrao- norma ISO 8466-1 so recomendados dez pontos

de calibrao, no devendo ser um nmero inferior a cinco,

distribuindo-se de igual modo na gama de concentraes.

Para processos lineares a preciso deve ser constante ao longo

da gama de trabalho Verificar a Homogeneidade de Varincias

Nos processos lineares deve-se garantir a linearidade.

Validao da metodologia

Anlise visual Funciona bem:

- evidente a ausncia de linearidade

-quandoR>0,995 linear

Teste de Mandel

A partir de um conjunto de pares ordenados, calcula-se a funo de

calibrao linear (ISO 8466-I) e a funo de calibrao no linear

(ISO 8466- II), bem como os respetivos desvios padro residuais, Sy/x

e Sy2.

Determina-se a diferena das varincias (DS2) pela seguinte equao:

2

2

2

/

2 )3()2( yxy SNSNDS

Em que N o nmero de padres de calibrao.

Modelo estatstico de acordo com a norma ISO 8466-1:

1 - Gama de Trabalho - Verificao da Linearidade

Calcula-se ento o valor teste, VT

2

2

2

YS

DSVT

Se VT F a funo de calibrao linear

Se VT > F a funo de calibrao no linear

1 - Gama de Trabalho - Verificao da Linearidade

Compara-se este valor de VT com o valor tabelado da distribuio de

F de Snedecor/Fisher:

No caso de VT > F, deve-se avaliar a possibilidade de reduzir a gama de

trabalho. Caso se justifique recorre-se ISO 8466-2 ou a uma funo

susceptvel de bom ajuste.

Padro Conc (mg/

dL)

Conc2 (mg/

dL) Abs

experimental

Abs

calculada

P0 0,0000 0,00 -0,00010 0,00305 P1 10,000 100,00 0,03350 0,03025 P2 15,000 225,00 0,04379 0,04385 P3 20,000 400,00 0,05902 0,05745 P4 25,000 625,00 0,07041 0,07105 P5 30,000 900,00 0,08548 0,08465 P6 40,000 1600,00 0,11004 0,11184

y = 0,002720x + 0,003054 R = 0,996494

-0,02000

0,00000

0,02000

0,04000

0,06000

0,08000

0,10000

0,12000

0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00

Ab

s 2

13,9

nm

Conc. (mg/dL Zn)

Curva Zinco (SIC 20-03-2013)

1 - Verificao da Linearidade

Resultados da funo linear Resultados da funo quadrtica R= 0,998245321 -8,664E-06 3,066E-03 8,883E-04

R2= 0,99649372 4,291E-06 1,808E-04 1,710E-03

Erro - Padro (Sy/x ou S2Y1)

= 0,002337862 9,983E-01 0,001839 #N/D

ordenada na oridem= 0,003054286 1,150E+03 4,000E+00 #N/D

declive= 0,002719714 7,780E-03 1,353E-05 #N/D

N 7

1 - Teste Visual de Linearidade

R: R2 maior que 0,995 ento estamos perante uma recta.

2 - Teste Mandel linearidade

Este teste s avalia qual dos dois mtodos (linear ou quadrtico) melhor

DS2= 1,3793E-05 VT= 4,076247579

Fctabelado = 21,19768958

VT F a funo de ajuste linera adequada

Exemplo Io Zinco

A homogeneidade pode ser avaliada atravs de um modelo

estatstico de acordo com a norma ISO 8466-1.

1 - Gama de Trabalho- Verificao da Homogeneidade de Varincias

O primeiro padro e o ltimo padro so analisados em 10 rplicas independentes.

Determina-se as varincias associadas ao primeiro e ltimo padro do seguinte modo:

1

10

1

2

,

2

i

j

ji

in

yy

S

i - o n do padro

j - o n de repeties efetuadas para cada padro

As varincias so testadas para examinar se existem diferenas

significativas entre elas nos limites da gama de trabalho, efetuando o

clculo do valor teste (VT):

VT=S210/ S2

1 quando S2

10 > S2

1

VT=S21/ S2

10 quando S2

1 > S2

10

Compara-se este valor de VT com o valor tabelado da distribuio

de F de Snedecor/ Fisher, para n-1 graus de liberdade:

Se VT F: As diferenas de varincias no so significativas e a gama de trabalho est bem ajustada.

Se VT > F: As diferenas de varincias so significativas e a gama de

trabalho deve ser reduzida at que a diferena entre varincias

relativas ao 1 e ltimo padro permitam obter o VT F

Caso se justifique, recorre-se ISO 8466/2 ou a outra funo

susceptvel de um bom ajuste.

1 - Gama de Trabalho- Verificao da Homogeneidade de Varincias

1 - Verificao da Homogeneidade de Varincias

P (10mg/dL) P (40mg/dL)

10,9544 38,8241

9,9471 39,8711

10,6068 39,0578

10,4337 39,5146

10,9039 40,3465

10,1441 40,1784

10,4866 39,7612

10,7568 39,8464

10,2239 40,0215

9,8491 39,9234

n 10 10

mdia 10,43 39,73

S 0,39 0,48

CV(%) 3,69 1,20

Varincia 0,1484110 0,2285161

gL 9 9

Avaliao da varincia

VT = 1,5398

Ftabelado (99% )= 5,3511 gl 18

R: VT

2 Limiares analticos

Limite de deteo

Este limiar analtico corresponde mais pequena quantidade de substncia

que pode ser detetada numa amostra, mas no pode ser quantificada

com um valor exato.

Teor mnimo medido, a partir do qual possvel detetar a presena do

analito com uma certeza estatstica razovel.

Uma leitura inferior ao limite de deteo no significa, obviamente, a

ausncia do analito a medir. Apenas se pode afirmar com uma

probabilidade definida, que a concentrao do componente em causa ser

inferior a um certo valor.

Em termos qualitativos, o conceito de limite de deteo corresponde

concentrao mnima que possvel distinguir do branco, ou seja, de uma

amostra que contm a mesma matriz mas no contm o analito.


Limite de deteo

Em termos quantitativos o limite de deteo obtido por:

a) Caso geral

LD = X0 + K S0 X0 - a mdia aritmtica do teor medido de uma srie de brancos ou padres vestgios (entre

10 e 20 ensaios), preparados de forma independente e lidos ao longo de vrios dias de

trabalho, isto , reproduzindo o mais possvel a situao de rotina.

S0 representa o desvio padro associado a X0

A lei de probabilidade de X0 suficientemente conhecida e partindo do

princpio que gaussiana (distribuio normal) ento toma-se o valor de

K 3,3 para um nvel de confiana de 99,7%.

Assim

LD = X0 + 3,3 S0


Limite de deteo

b) Caso em que o mtodo envolve a utilizao de uma calibrao linear

Sy/x o desvio padro residual da curva de calibrao b declive da reta

b

SLD

xy /3,3


Limite de quantificao

Corresponde menor quantidade de analito presente numa amostra que

pode ser quantificada com preciso e exatido.

Na prtica, corresponde normalmente ao padro de calibrao de menor

concentrao (excluindo o branco).

Este limiar, aps ter sido determinado, deve ser testado para averiguar se a

exatido e preciso conseguida satisfatria.

Segundo recomendaes IUPAC o coeficiente de variao (desvio padro a

dividir pela mdia dos valores encontrados) para estes padres no deve

exceder 10%.


Limite de quantificao

Em termos quantitativos o limite de quantificao obtido por:

a) Caso geral

LQ = X0 + 10 S0

X0 - a mdia aritmtica do teor medido de uma srie de brancos ou padres vestgios

(entre 10 e 20 ensaios), preparados de forma independente e lidos ao longo de vrio

dias de trabalho, isto , reproduzindo o mais possvel a situao de rotina.

S0 representa o desvio padro associado a X0


Limite de quantificao (LQ)

b) Caso do Padro vestgio ou Branco fortificado

-padres vestgio ou brancos fortificados independentes

-estudar exatido e preciso

nveis aceitveis 10%

Neste caso ter-se-:

Em que:

Sy/x o desvio padro residual da curva de calibrao b declive da reta

c) Caso em que o mtodo envolve a utilizao de uma calibrao linear

b

SLQ

xy /10


Limite de Deteo/ Quantificao

Existe uma relao terica entre o limite de deteo e o limite de

quantificao (ISO/TS 13530:2009)

Para a validao do mtodo, o limite de quantificao pode ser

estimado da seguinte forma:

3

LQLD

Exemplo Zinco

LQ (1 Padro da CC ) =10 mg/ dL

LD 3,3 mg/ dL

3 - Sensibilidade

Quociente entre o acrscimo do valor lido L e a variao da concentrao C correspondente aquele acrscimo.

C

LSensib

.

Esta caracterstica avalia a capacidade de um mtodo (ou equipamento) de

distinguir pequenas diferenas de concentrao de um analito.

Se a curva de calibrao for definida por um modelo linear, a sensibilidade

ser constante ao longo de toda a gama de trabalho e igual ao declive da

reta de calibrao.

Estudo do critrio de aceitao do declive da reta de calibrao analtica

Data Referncia N Declive

20-03-2013 01/2013 1 0,002641

21-03-2013 02/2013 2 0,002720

3

4

5

6

7

8

9

10

11

Mdia 0,002681

S 0,000056

n-1 1

CV(%) 2

Mdia + 2xS 0,002792

Mdia - 2xS 0,002569

3 - Exemplo do estudo da Sensibilidade io zinco

Numericamente:

desvio padro, varincia coeficiente de variao

4 - Preciso

Repetibilidade

Condies to estveis quanto possvel (mesmo laboratrio, mesmo

analista, mesmo equipamento e num curto intervalo de tempo).

Reprodutibilidade

Condies de ensaio diferentes, utilizando o mesmo mtodo de ensaio,

sobre uma mesma amostra, fazendo-se variar as condies de medio,

tais como, diferentes laboratrios, diferentes operadores, diferentes

equipamentos

Preciso intermdia

Condies intermdias no mesmo laboratrio, mas definindo

exatamente quais as condies a variar (uma ou mais), tais como:

Diferentes analistas

Diferentes equipamentos

Diferentes pocas

Preciso intermdia

4 - Preciso

Cu- Nvel 1 Lote 14401

Data mg/dL

09-03-2012 97,66

14-03-2012 94,50

19-03-2012 108,50

28-03-2012 108,43

30-03-2012 96,66

18-04-2012 101,30

24-04-2012 95,15

04-05-2012 99,61

08-05-2012 94,73

16-05-2012 100,12

25-05-2012 96,70

29-05-2012 95,36

06-06-2012 98,60

06-06-2012 99,87

19-06-2012 93,57

25-06-2012 106,10

09-07-2012 97,75

17-07-2012 96,35

25-07-2012 98,41

03-08-2012 95,24

29-08-2012 97,65

31-08-2012 96,64

13-09-2012 95,06

17-10-2012 94,17

23-10-2012 97,70

Contar 25

mdia 98,23

sd 4,09

2s 8,19

3s 12,28

C.V. (%) 4,17

Si(T.O) = 4,09 mg/dL

70,0

75,0

80,0

85,0

90,0

95,0

100,0

105,0

110,0

115,0

120,0

14401

mg/

dL

Lote

Cu Absoro Atmica Nvel 1

mdia 1S 2S 3S controlo Fabricante

5 - Exatido

Mede a concordncia de vrios resultados obtidos, por meio da

comparao do seu valor mdio, com o valor verdadeiro.

A exatido afetada diretamente pelos erros sistemticos

Bias

ID ndice de desvio

Parmetros estatsticos:

Bibliografia

Guia Relacre 3 - Validao de Resultados em Laboratrios qumico

Guia Relacre 13 - Validao de Mtodos internos de ensaio em anlises qumica

ISO 5725-3:1994 Accuracy (trueness and precision)of measurement methods and results- Part 3 Intermediate measures of the precision of a standard measurement method

ISO 8466-1:1990 Water quality Calibration and evaluation of analytical methods and stimation of performance characteristics

Part 1 Statistical evaluatin of the linear calibration funcion

NCCLS, Estimation of Total Analytical Error for Clinical Laboratory Methods; Approved Guideline; EP21-A; Vol 23; N 20, 2009

ISO 8466-2:2001 Water quality Calibration and evaluation of analytical methods and stimation of performance characteristics

Part 2 Calibration strategy for non-linear second-order calibration funcions

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