APLICAÇÕES DOS TESTES SOROLÓGICOS

➢ Diagnóstico

➢ Acompanhamento terapêutico

➢ Epidemiologia

FATORES QUE INFLUENCIAM NOS RESULTADOS DAS REAÇÕES SOROLÓGICAS

●Antígenos

●Anti-soros padronizados ●Reações padronizadas (técnicas)

●Avaliação: Sensibilidade, especificidade e valor preditivo

DETECÇÃO DE ANTÍGENOS E ANTICORPOS

AG AC SISTEMAREVELADOR

Íntegro

Recombinante

Peptídeo

Monoclonais

PrecipitaçãoAglutinação

Enzima

Radioisótopo

Fixaçãodo C`

Extrato

Policlonais

FluorocromoPurificado

SENSIBILIDADE

ESPECIFICIDADE

VALOR PREDITIVO

Porcentagem de resultados positivos peloteste na população de doentes

VPSen. = VP + FN

Porcentagem de resultados negativos peloteste nos indivíduos não doentes

VNEsp. = VN + FP

Positivo – proporção de indivíduos doentesentre os resultados positivos obtidos no testeem estudo

VPVPP = VP + FP

TESTEDOENÇA

TOTAL

presente ausente

positivo 380 80 460

negativo 20 1520 1540

TOTAL 400 1600 2000

TESTEDOENÇA

TOTAL

presente ausente

positivo 19 99 118

negativo 1 1881 1882

TOTAL 20 1980 2000

Sens = 95%Espec = 95%Prev = 1%

Sens = 95%Espec = 95%Prev = 20%

VALOR PREDITIVO POSITIVO

VPP = 16%

VPP = 82%

ESTRUTURA DE PROTEÍNAS

ESTRUTURA DE PROTEÍNASEPITOPOS

FONTES ANTIGÊNICAS

• Antígenos totais• Antígenos de membrana• Frações purificadas• Proteínas recombinantes• Peptídeos sintéticos

➢ conter epítopos específicos

➢ ser comum as diferentes cepas

➢ de fácil obtenção através de

metodologia reprodutível

Características ideais de um antígeno

➢ Fixação de Complemento

➢ Reações de Aglutinação: Aglutinação Direta;

Aglutinação com Látex; Hemaglutinação Indireta;

➢ Imunofluorescência

➢ Radioimunoensaio

➢ Reações Imunoenzimáticas: ELISA; Dot Blot;

Western Blot; Line Immuno Assay

➢ Reações de Quimioluminescência

➢ Nefelometria e Turbidimetria

MÉTODOS IMUNOLÓGICOS

Testes de Aglutinação em Tubos

1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640

0,950 mL PBS

0,5 mL PBS

0,5 mL PBS

0,5 mL PBS

0,5 mL PBS

0,5 mL PBS

0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL

Acrescentar 0,5 mL de Ag em cada tubo

50 μL do soro

Armazenar a 4ºC por 72 horas

Realizar a leitura a cada 24 horas

TESTE DE AGLUTINAÇÃO

LATEX COAGLUTINAÇÃO

TESTE DE AGLUTINAÇÃO DIRETA:CONJUNTO DIAGNÓSTICO PARA DETECÇÃO DE ESTREPTOCOCOS

REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO HEMOAGLUTINAÇÃO

REAÇÃO DE IMUNOFLUORESCÊNCIA

Indireta

Detecção de Ag Detecção de Ac

Direta

Detecção de Ag

APLICAÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS PARA DETECÇÃO DE PATÓGENOS POR

IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA

Vírus influenza

Tipo B

Vírus Herpes simplexTipo 1

REAÇÃO DE IMUNOFLURESCÊNCIA DIRETA PARA DETECÇÃO DE Giardia e Cryptosporidium

Cryptosporidium

Giardia

LES Sindrome de Goodpasture

IMUNOCOMPLEXOS EM DOENÇAS AUTOIMUNE

CITOMETRIA DE FLUXO

REPRESENTAÇÃO DOS DADOS NA CITOMETRIA DE FLUXO

TÉCNICA DE ELISA

SUBSTRATE

COLORDEVELOPED anti-Ig

POD labeled

ELISA INDIRETO – DETECÇÃO DE ANTICORPOS

antigen

anti-Ag Ab POD labeled

SUBSTRATE

COLORDEVELOPED

ELISA CAPTURA – DETECÇÃO DE ANTÍGENOS

FASE SÓLIDA

• Índice de adsorção • Boa adesão a agentes surfactantes• Estabilidade de adsorção• Custo acessível• adesão a agentes surfactantes• Estabilidade de adsorção• Custo acessível

Poliestireno

Polivinil

ELETROFORESE

➢Eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) (Laemmli, 1970)

Proteínas do extrato bruto Marcadores de peso molecular na faixa de 200 a 10 kDa

TÉCNICA DO

WESTERN BLOT

WESTERN BLOT PARA O DIAGNÓSTICO DA INFECÇÃO PELO HIV

DIAGNÓSTICO DA INFECÇÃO PELO HIV