Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (HPLC)

Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (HPLC)

Breve introduo Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) o tipo mais verstil e mais amplamente empregado de cromatografia por eluio.

Na cromatografia lquida, a fase mvel um solvente lquido, o qual contm a amostra na forma de uma mistura de solutos. O tipo de cromatografia lquida de alta eficincia geralmente definido pelo mecanismo de separao ou pelo tipo de fase estacionria: (1) partio ou cromatografia lquido-lquido; (2) adsoro ou cromatografia lquido-slido; (3) troca inica ou cromatografia de ons; (4) cromatografia por excluso; (5) cromatografia por afinidade; (6) cromatografia quiral. A cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) tornou-se uma ferramenta analtica indispensvel. Os laboratrios criminais e os programas de televiso policiais e forenses, como CSI, CSI Miami, Crossing Jordan e Law and Order, frequentemente empregam a CLAE no processo de obteno de evidncias criminais.Historia Nos anos de 1960 que se desenvolveu a tecnologia para produzir e utilizar recheios com dimetros de partculas to pequenos como 3 a 10 m. O termo cromatografia lquida de alta eficincia sempre empregado para distinguir essa tecnologia dos procedimentos cromatogrficos realizados em colunas simples que os precederam. A cromatografia de coluna simples, contudo, ainda encontra considervel uso para propsitos preparativos. Como funciona?

um tipo de cromatografia lquida que emprega pequenas colunas, recheadas de materiais especialmente preparados e uma fase mvel (solvente) que eluda sobre altas presses.

AplicaesQumica Forense (metablitos de drogas)Bioqumica (protenas, aminocidos, esteroides)Cincias ambientaisAlimentos (corantes artificiais, aflatoxicinas, aditivos, antioxidantes)Farmacologia (frmacos)Toxicologia (pesticidas)

Bombas de alta pressoPermitem vencer a resistncia passagem da F.M. exercida pelas partculas da F.E.

Funo: proporcionar fluxo constante e reprodutvel de F.M. a todo o sistema.

Solventes (Fase mvel)

Sistemas de Introduo de Amostras (INJETORES)

O mtodo mais empregado de introduo da amostra em cromatografia lquida baseado em um sistema com ala de amostragem.Frequentemente as alas intercambiveis esto disponveis para permitir a escolha do volume da amostra de 5 a 500 L.

vlvula de 6 prticos (orifcios)O detector deve ser pequeno e compatvel com a vazo de lquido. O detector a ser empregado vai depender da natureza da amostra.Funo do detector: identificar a presena de substncias de interesse que estejam eluindo da coluna cromatogrfica, proporcionando uma identificao e quantificao continua dos componentes da amostra.

Detectores-Detectores baseados na absoro de luz UV/VIS (mais amplamente empregados - radiao ultravioleta (190 - 400 nm) ou visvel (400 - 800 nm);

-Detector no UV/VIS com arranjo de fotodiodos (DAD) (a bsorbncia de uma amostra pode ser determinada em todos os de modo Simultneo)

-Detectores baseados na fluorescncia (> sensibilidade UV )

-Detectores baseados no espalhamento da luz

-Detectores baseados no ndice de refrao

-Detectores eletroqumicos (+utilizado para fludos corpreos e produtos naturais)

-Espectrmetro de massas (HPLCMS/MS)F.E. utilizada vrias vezesVersatilidadeTempo reduzido de anliseAlta resoluoAnlise qualitativaResultados quantitativos DetectabilidadeAutomao Alto Custo do equipamentoAlto custo de manuteno do equipamentoNecessita de experincia do operadorVantagens x Desvantagens