apresentação de proposta para projeto de pesquisa de doutorado
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Alda Ernestina dos Santos
08/02/2012
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Universidade Federal do Rio de JaneiroNúcleo de Pesquisas de Produtos Naturais
Isolamento, Elucidação Estrutural e Avaliação do Potencial Biológico
dos Isoflavonóides de Erythrina sp. e Biflavonóides de Garcinia sp.
Proposta de Projeto de Pesquisa de Doutorado
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Sumário
Introdução
I- BiflavonóidesII- IsoflavonóidesIII- Gênero GarciniaIV- Gênero EryhtrinaV- DengueVI- Glioblastoma Multiforme HumanoVII- Diabetes
Objetivos e Justificativa
Metodologia
Equipe envolvida
Cronograma de execução
Resultados Esperados
3
INTRODUÇÃO Biflavonóides
� Resultam do acoplamento oxidativo fenólico de duas un idades de flavonóides
� Constiuídos por seis anéis
� Pouco estudados
O
O
O
O
OH
OH
OH
OH
OH
OH
A
B
C
D
E
F
2
3
2' 4'
5'
6'
41056
78
1'9
1'''6'''
5'''
4'''3'''
2'''
2''
3''4''10''5''
6''
7''8''
9''
Figura 1: Esqueleto básico dos biflavonóides.
4
INTRODUÇÃO Biflavonóides
Figura 2: Estrutura da amentoflavona.
Nomenclatura
O
O
OH
OH
OH
O
O
OH
OH
OH
Proposta por Locksley
Apigeninil-(I-3’, II-8)-apigenina
Ferreira et al. (2006)
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INTRODUÇÃO Biflavonóides
Figura 3: Diferentes biflavonóides.
Variedade Estrutural
OOH
OH O
OH
O
OH
O
OH
OH
O
O
O
O
O
OH
OH3COH
CH3O
OH
O
O
OOH
OH
OH
OH
OOH
OH O
OH
O
OH
OH
O
OH
6
INTRODUÇÃO BiflavonóidesPrincipais Tipos
OOH
OH O
OH
O
OH
O
OH
OH
Agathisflavonas(I-6, II-8)
O
O
O
O
O
OH
OH3COH
CH3O
OH
Hinokiflavonas
(I-4,’ O, II-6)
Andersen & Markhan (2006)
Figura 4: Representantes das hinokiflavonas e agathi sflavonas.
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INTRODUÇÃO BiflavonóidesPrincipais Tipos
GB-flavonas
(I-3, II-8)
Ochnaflavonas(I-3’, O, II-4’)
OOH
OH O
O
OH
O
O
OH
OH
OOH
OH O
OH
O
OH
OH
O
OH O
OH
OH
OH
OH
OH
OOH
OH O
OH
OH
Cupressiflavonas
(I-8, II-8)
Figura 5: Representantes das GB-flavonas, ochnaflav onas e cupressiflavonas.
INTRODUÇÃO Isoflavonóides
IFD
Figura 6: Biossíntese dos isoflavonóides.
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INTRODUÇÃO IsoflavonóidesPrenilados ou complexos
O
O
O
OHOH
OH
Figura 7: Estrutura da erysenegalenseina.
Tahara & Ibrahim, 1995
9
10
INTRODUÇÃO
Gênero Garcinia
Figura 8: Biflavonóides volkensiflavona e morellofl avona-4’- O-glucosideo
� 180 espécies
� Família Clusiaceae
� Mangostão
� Acúmulo de Biflavonóides
O
O
OH
OH
OH
O
O
OH
OH
OH
O
O
OH
OH
OH
O
O
OH
OH
O
OH
O
OHOH
OH
OH
Gontijo et al. (2012)
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INTRODUÇÃO
Gênero GarciniaUsos Populares
� Culinária
� Infecções microbianas
� Afrodisíaco
� Antioxidante
� Antitumoral
� Auxiliar na perda de peso
Iwu et al. (2002)
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INTRODUÇÃO
Gênero Erythrina
Figura 9: Estrutura dos isoflavonóides erysubsina E e 6,8-diprenilerythrina
� 110 espécies
� Família Fabaceae
� Eritrinas
� Acúmulo de Isoflavonóides
� Diversos usos populares
O
O
OH
OH
OH
O
O
OHOH
HO
Wanjala & Majinda (2002)
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INTRODUÇÃO
Dengue
� Doença reemergente
� 50 000 000 de casos por ano
� DENV-1 (1920)
� DENV-2 (1990)
� DENV-3 (1999)
� DENV-4 (2010)
Muller (2011)
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INTRODUÇÃO
� Astrocitoma
� Alta capacidade proliferativa, invasiva e resistênc ia
� Sobrevida média de 12 meses após diagnóstico
� Maior incidência entre 45 e 70 anos de idade
� Alta resistência a quimio e radioterapia
� Intervenção cirúrgica ineficaz
Glioblastoma Multiforme Humano
Kleihues et al. (2007)
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INTRODUÇÃO
Diabetes Mellitus
Watkins (2003)
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Geral
OBJETIVOS
Isolamento e identificação estrutural dos isoflavon óides de Erythrina sp. e biflavonóides de Garcinia sp. , bem como avaliar suas atividades antiviral, antitumoral e hipoglicemiante
Específicos
I) Isolamento e monitoramento por técnicas cromatográf icas
II) Elucidação por técnicas espectroscópicas e espe ctrométricas
III) Avaliação da atividade sobre a replicação do v írus Dengue tipo 3
IV) Avaliação de efeitos na morfologia, viabilidade e proliferação de células Gbm95 e Gbm02
V) Avaliação da atividade inibitória in vitro da enzima α-amilase
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JUSTIFICATIVA
I) Pouco estudo dos isoflavonóides e biflavonóides quando comparados àoutras classes de flavonóides
II) Os gêneros Garcinia e Erythrina apresentarem uso etnofarmacológico
III) O desafio da elucidação estrutural de flavonói des mais complexos
IV) A necessidade da busca por alternativas eficaze s aos tratamentos da dengue, glioblastoma multiforme humano e diabetes m ellitus
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METODOLOGIA Folhas e Frutos de Garcinia sp.
Cascas de Erythrina sp.
7 dias EtOH
Extrato EtOH
CH2Cl2
Partição líquido-líquido com HEX, DCM, AcOEt e BuOH
SilicaCCDHPLC-UVGC-MS
UV, IV, RMN e IES-EM
Iso e biflavonóides Isolados
Figura: Metodologia a ser empregada.
AcOEt
Substâncias Elucidadas
Testes de Atividade Antiviral, Antitumoral e Hipoglicemiante
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EQUIPE ENVOLVIDA
Identificação botânica e taxonomia
Prof. Cássia M. Sakuragui – IB/UFRJ
Atividade Antiviral
Prof. Davis Ferreira – IMPPG/UFRJ
Msc Marcelo Damião
Atividade AntitumoralProf. José Garcia Abreu ICB/UFRJ
Msc Fernanda Mathias
Atividade Hipoglicemiante
Prof. Fabíola Dutra Rocha FF/UFJF
ATIVIDADES 1 2 3 4
a) Coleta das espécies X X
b) Preparação dos extratos X X
c) Isolamento e elucidação estrutural
X X X
d)Testes biológicos X X X
e) Apresentação em Congressos X X X
f) Elaboração de artigos X X X X
g) Elaboração da tese X X X
CRONOGRAMA DE EXECUÇÃO ANUAL
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RESULTADOS ESPERADOS
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I) Contribuir para o estudo de iso e biflavonóides
II) Obter informações importantes a cerca da quimicas a c erca dos gêneros Garcinia e Erythrina
III) Aprimoramento em elucidação estrutural
IV) Publicação em periódicos de alto impacto
BIBLIOGRAFIA CONSULTADA
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ANDERSEN, O.M.; MARKHAM, K.R. Flavonoids: Chemistry , Biochemistry and Applications. Boca Raton: Taylor & Francis Group. 2 006.
CAVENEE, W.K. Glioblastoma. In: WHO classification of tumors of the Central Nervous System, Lyon: IARC. 2007.
FERREIRA, D.; SLADE, D.; MARAIS, J.P.J. Bi, tri, tet ra, penta and hexaflavonoids. p. 1102-1124. In: ANDERSEN, O.M.; MARKHAM, K.R. Flavon oids: Chemistry, Biochemistry and Applications. Boca Raton: Taylor & Francis Group. 2006.
GONTIJO, V.S.; SOUZA, T.C.; ROSA, I.A.; SOARES, M.G .; SILVA, M.A.; VILEGAS, W.; VIEGAS JUNIOR, C.; SANTOS, M.H. Isolation and evalu ation of the antioxidant activity of phenolic constituents of the Garcinia brasiliensis epicarp. Food Chemistry, n. 132, p. 1230-1235. 2012.
BIBLIOGRAFIA CONSULTADA
23
IWU, M.M.; DIOP, A.D.; MESEROLE, L.; OKUNJI, C.O. Garcinia kola: a new look at an old adaptogenic agent. Ethnomedicine and Drug Discove ry, p. 191-199. 2002.
MULLER, V.D.M. Avaliação da atividade antiviral de p eçonhas de serpentes e escorpião contra os vírus da dengue e febre amarela . 2011. 86p. Tese (Doutorado em Biociências) – Universidade de São Paulo, Ribeirão P reto.
TAHARA, S.; IBRAHIM, R.K. Prenylated isoflavonoids – a n update. Phytochemistry, v. 38, n. 5, p. 1073-1094. 1995.
WANJALA, C.C.W.; MAJINDA, R.R.T.; A new isoflavone f rom the stem bark of Erythrina latissima. Fitoterapia, n. 71, p. 400-405. 2000.
WATKINS, P.J. ABC of Diabetes. 5a ed, Londres: BMJ. 2003.