dulo 10 - sangue e hemocitopoeseCARACTERSTICAS PRINCIPAIS DO SANGUEO sangue pode ser considerado como um tecido lquido. Muitos autores consideram o sangue como uma variedade de tecido conjuntivo em que o material intercelular substitudo por um lquido de composio bastante especfica.Estudo de sangue ao microscpio de luzA maneira mais usada para se estudar as clulas do sangue ao microscpio de luz envolve inicialmente a obteno de um preparado da seguinte maneira:- sangue obtido por puno ou perfurando-se a pele com uma agulha ou estilete.- uma gota de sangue colocada sobre uma lmina de vidro, encosta-se uma lamnula na gota e puxa-se esta lamnula arrastando o sangue e produzindo uma pelcula muito delgada de clulas sanguneas. Um preparado assim obtido denominadoesfregaoouextenso.- a pelcula deixada secar ao ar para depois ser corada.

Colorao do esfregao de sangueOs esfregaos de sangue costumam ser corados por mistura complexas de corantes, denominadas corantes tipo Romanovsky. H vrias receitas levemente diferentes, mas todas tm em comum um corante bsico, um corante cido e um corante metacromticoclique para rever os conceitos de corante cido, bsico nesta pgina e nas seguintese veja noGlossrioa definio de metacromasia. Uma composio comum a estas solues uma mistura dos corantes azul de metileno, azur B e eosina.A combinao destes corantes e a afinidade das estruturas celulares por cada um deles ou por combinaes dos corantes produz imagens caractersticas das vrias clulas.Clulas do sangueAs clulas do sangue pertencem a duas linhagens de caractersticas morfolgicas e funcionais diferentes. Suas origens tambm so diferentes, o que ser estudado mais adiante no temHemocitopoese.Clulas do sangue:- ashemcias,eritrcitosouglbulos vermelhos, estruturas anucleadas que contm grande quantidade de hemoglobina no seu interior.- osleuccitosouglbulos brancos, grupo constitudo por vrios tipos celulares. Conforme suas caractersticas do ncleo e citoplasma so subdivididos em: a)granulcitosoupolimorfonucleares. Seus ncleos tm cromatina densa e so divididos em pequenas pores unidas por filamejntos delgados de cromatina. O nmero destas pores pode variar e por esta razo so denominados polimorfonucleares. O citoplasma das clulas deste grupo possui grnulos de diferente composio qumica, colorao e funes, denominadosgrnulos especficos.De acordo com suas vrias caractersticas os leuccitos granulcitos podem ser: neutrfilos- seus ncleos tem cromatina densa, de colorao escura. Quando jovens seus ncleos tm a forma de um basto em forma da letraCouU. Esta forma de neutrfilo tambm denominadabastonete. Quando maduros seus ncleos so subdivididos em vrias pores (geralmente de trs a cinco) unidas por filamentos de cromatina. Esta forma de neutrfilo tambm denominada desegmentado. Seu citoplasma contm grnulos muito pequenos que se coram mal pelos vrios corantes e assumem uma colorao cor de rosa clara. eosinfilos- seus ncleos costumam ter dois segmentos, porm possvel encontrar eosinfilos com mais de trs segmentos. A grande caracterstica dos eosinfilos est no seu citoplasma: possui um grande nmero de grnulos grandes corados em laranja ou cor de rosa. Esta colorao dada pela eosina, da o nome desta clula. basfilos- seus ncleos quase nunca so segmentados, sendo esfricos ou ovais e ocupam a maior parte do citoplasma. Os ncleos so frequentemente obscurecidos por pequenos gros azuis e prpura. So as clulas mais infrequentes dentre os leuccitos e as mais raras de serem encontradas em esfregaos. b)agranulcitosoumononucleares.Estas clulas tem ncleos esfricos, ovais ou indentados (em forma da letraCouU), portanto seus ncleos no so segmentados.Seu citoplasma no possui grnulos especficos (da o nome agranulcitos), porm podem possuir grnulos inespecficos denominadosazurfilos, que podem tambm estar presentes nos granulcitos. Estes grnulos so muito pequenos, parecendo pequenos pontos no citoplasma, e se coram em azul. H dois tipos de agranulcitos: linfcitos- so clulas geralmente pequenas, um pouco maiores que as hemcias. Seu ncleo esfrico tem cromatina densa. O citoplasma se resume a uma delgada camada levemente basfila ao redor do ncleo. moncitos- so clulas grandes, as maiores do grupo dos leuccitos. Seu ncleo, de cromatina frouxa, indentado e excntrico (se situa fora do centro da clula). Possui bastante citoplasma, levemente basfilo.CLULAS DO SANGUESangue - 2Exame de esfregaos de sangueAlguns cuidados devem ser tomados ao examinar esfregaos de sangue ao microscpio de luz.Um deles se refere colorao do esfregao: quando se cora uma srie de esfregaos naturalmente so tomadas precaues para que a sua colorao seja homognea. Isto nem sempre fcil de ser conseguido devido s variveis que entram em jogo:- a mistura corante preparada na hora e pingada sobre o esfregao;- o tempo de colorao pode ser diferente entre as vrias sries de colorao;- o pH da gua pode influir na colorao final.Em virtude destes fatores, a colorao das clulas em esfregaos pode ser mais escura em alguns preparados e mais escura em outros. Algumas clulas podem se corar mais por alguns corantes em alguns esfregaos do que em outros.As hemcias, por exemplo, deveriam se coram em cor de rosa ou laranja claro, mas s vezes tomam um tom acinzentado ou azulado como na imagem ao lado.Um cuidado a ser tomado no exame de esfregaos de sangue deve ser o de examinar inicialmente a cor das hemcias para em seguida tirar concluses sobre a colorao de clulas da srie branca.Na srie de imagens que ser vista a seguir, h imagens de vrios aumentos. Para ter uma idia correta sobre o tamanho das clulas, convm sempre comparar seu dimetro com o dimetro de hemcias.

Aumento: grande.Colorao: Leishman.10-2

As hemcias tm a forma de um disco bicncavo. So, portanto, mais delgadas no centro, razo pela qual esta regio pouco corada. Seu dimetro em condies normais bastante constante, de cerca de 7 micrometros.CLULAS DO SANGUESangue - 3A clula presente no centro da figura superior, cercada por hemcias, um pouco maior que as hemcias.Passe o cursor sobre a imagem para diferenciar seu ncleo e citoplasma.Seu ncleo tem cromatina densa: bastante corado e tem grumos escuros de cromatina. O que mais chama a ateno o fato de estar dividido em quatro segmentos unidos por delgados filamentos de cromatina.Seu citoplasma possui alguns grnulos corados em cor semelhante do citoplasma: so gros de colorao neutra.Trata-se, portanto, de umneutrfilo segmentado.

A clula presente na figura inferior tem as mesmas caractersticas e diagnstico.Sangue - 4Na figura superior h uma clula um pouco maior que uma hemcia. Seu ncleo tem forma da letraCouU- passe o cursor sobre a imagem para destacar o ncleo. Este tem cromatina densa: veja grumos de comatina no seu interior.Seu citoplasma claro e no parece ter grnulos.Trata-se de umneutrfilo em bastonete.A figura inferior contm uma clula um pouco maior que uma hemcia cujo ncleo tem uma constrio - veja a seta. Seu citoplasma tem grnulos cor de rosa.Trata-se de umneutrfilo em bastoneteque est sofrendo constries e portanto este neutrfilo est passando para a etapa de segmentado.angue - 1Qual o diagnstico da clula da figura superior?RespostaPoucos grnulos , nucleo em C = neutrfilo em bastoneteQual o diagnstico da clula da figura inferior?Neutrfilo em bastonete, transformando-se em neutrfilo segmentadoResposta

Sangue - 6A figura superior contem uma clula pouco maior que uma hemcia e ncleo com dois lbulos -passe o cursor sobre a figura para distinguir os lbulos.O citoplasma est carregado de grnulos grandes cor de laranja.Uma clula com estas caractersticas s pode ser umeosinfilo.lula da figura inferior com mesmas caractersticas e diagnstico da clula acima.

Aumento Sangue - 7A figura contm uma clula cujo ncleo tem dois lbulos - passe o cursor para distingui-los.O citoplasma possui muitos grnulos de vrios tamanhos, vrios dos grsnulos esto no citoplasma que envolve o ncleo e parecem estar no interior do ncleo. Os grnulos so azuis ou prpura.Esta clula s pode ser umbasfilo.

LULAS DO SANGUESangue - 8A figura superior mostra uma clula quase do tamanho de uma hemcia. , portanto, uma clula relativamente pequena.Seu ncleo tem cromatina densa e esfrico. No est subdividido em segmentos, portanto a clula no um polimorfonuclear, o que afasta o diagnstico de neutrfilo, eosinfilo e basfilo.Seu citoplasma existe em pequena quantidade e basfilo. Consiste de um halo de cor azul claro em torno de parte da clula. Lembrar que estamos vendo uma clula inteira e que existe uma delgada camada de citoplasma mesmo onde aparentemente ele no visto.O citoplasma no parece ter grnulos.Trata-se de umlinfcito.Clula da figura inferior: mesmas caractersticas, mesmo diagnstico.Note que o citoplasma no est azulado como o da figura superior. Defeito de colorao apontado no incio deste mdulo.

Aumento: grande.Colorao: Leishman.

Colorao: Leishman.

Sangue - 9Na figura superior h uma clula bastante grande, com ncleo fortemente indentado. Seu citoplasma volumoso, fracamente basfilo e no tem grnulos.Trata-se de ummoncito.As setas apontam plaquetas.Na figura inferior: h um moncito embaixo e um neutrfilo segmentado em cima.

Aumento:grande.Colorao:Leishman.

CARACTERSTICAS PRINCIPAIS DA HEMOCITOPOESEHemocitopoeseouhemopoese o processo de formao de clulas do sangue a partir de clulas tronco indiferenciadas comprometidas com a formao de clulas sanguneas.Cada tipo de clula do sangue tem a sua linhagem prpria de diferenciao: h uma linhagem eritroctica, uma linhagem granuloctica, uma monoctica e uma linfoctica. Em cada uma destas linhagens as respectivas clulas-tronco sofrem mitoses e gradativamente se diferenciam em clulas adultas.Alm disto h o processo de produo das plaquetas as quais se originam a partir de fragmentos do citoplasma que se soltam de clulas denominadasmegacaricitos.Esfregaos de clulas da medula ssea

Uma maneira de estudar as clulas envolvidas em hemocitopoese analisar esfregaos de medula ssea. Medula ssea pode ser obtida por puno do canal medular de ossos e as clulas so espalhadas na superfcie de uma lmina histolgica e corada como o so os esfregaos de sangue. Nos adultos a hemocitopoese se restringe a alguns ossos, por exemplo crista ilaca, costelas, vrtebras.Nos esfregaos possvel acompanhar a diferenciao das clulas de cada linhagem. Neste mdulo sero analisadas as principais etapas de formao na linhagem eritroctica e granuloctica. Inicialmente o reconhecimento das diferentes etapas das diversas linhagens pode parecer confuso, porm se soubermos o que acontece durante a diferenciao das vrias linhagens o estudo grandemente facilitado. Lembrar que com a colorao usada de rotina,basfilosignifica uma estrutura que se cora em azul eeosinfilouma estrutura que se cora em cor de rosa ou laranja.Nos esfregaos esto presentes de maneira misturada as clulas das vrias linhagens (inclusive linfoctica e monoctica), necessrio bastante critrio para diagnostic-las corretamente. Como as clulas de uma linhagem esto em constante transformao de uma etapa para outra, importante levar em considerao que a morfologia de uma clula pode ser varivel, dependendo se ela est acabando de entrar em uma etapa, est no meio de uma etapa ou j est saindo daquela etapa.Principais acontecimentos da eritropoeseDurante a eritropoese as clulas tronco denominadasproeritroblastosdiminuem bastante de tamanho, a cromatina dos ncleos se torna cada vez mais densa, isto , escura e granulosa, o citoplasma bastante basfilo devido grande quantidade de RNA nele presente -esta clula oeritroblasto basfilo. medida que estas clulas se diferenciam elas iniciam a sntese de hemoglobina. Devido a isto o citoplasma passa a se corar por uma mistura de corantes basfilos e acidfilospor causa da coexistncia de RNA e hemoglobina- esta clula oeritroblasto policromatfilo.Com a perda gradual do RNA citoplasmtico as clulas atingem a cor de uma hemcia - oeritroblasto ortocromtico.Nas ltimas etapas deste processo o ncleo expulso para fora da clula originando uma hemcia.Principais acontecimentos da granulocitopoeseA clula tronco da linhagem granuloctica uma clula grande, com ncleo volumoso de cromatina frouxa e citoplasma basfilo, porm menos que o citoplasma do proeritroblasto. Esta clula denominadamieloblasto.Durante as etapas seguintes de diferenciao a clula diminui de tamanho, a cromatina do ncleo se torna mais densa e h o progressivo acmulo de grnulos especficos, caractersticos de cada clula adulta.Os mieloblastos originam ospromielcitos, diferentes para cada sublinhagem: promielocito neutrfilo, eosinfilo e basfilo.Nosmielcitosos ncleos apresentam uma chanfradura, isto , uma indentao.Na fase seguinte, demetamielcito, as clulas so bastante menores, de tamanho aproximado ao de uma hemcia ou de um neutrfilo. Seu ncleo alongado como uma salchicha, em forma deUouC, s vzes um pouco retorcido.As clulas da fase seguinte j so encontradas em pequena quantidade no sangue circulante: clulas comncleo em bastooubastonetes. Os bastonetes neutrfilos existem em pequena porcentagem no sangue normal, o que no ocorre com os bastonetes eosinfilos.A ltima fase aquela que corresponde s clulas normalmente encontradas no sangue circulante: neutrfilo segmentado, eosinfilo segmentado e basfilo segmentado.CLULAS DAS LINHAGENS ERITROCTICA E GRANULOCTICALinhagem eritrocticaEritroblastos basfilosClulas pequenas, ncleos de cromatina densa, citoplasma basfilo.Linhagem granulocticaMetamielcito neutrfiloClula grande, ncleo alongado, citoplasma de cor clara, que lembra o do neutrfilo.

CLULAS DAS LINHAGENS ERITROCTICA E GRANULOCTICALinhagem eritrocticaEritroblasto basfiloClula pequena, ncleo de cromatina densa com grumos grosseiros de cromatina, citoplasma basfilo.Deve ser uma etapa inicial de eritroblasto basfilo, pois o citoplasma ainda bastante volumoso.Eritroblasto policromatfiloClula pequena, ncleo de cromatina densa, citoplasma de cor misturada entre cor de rosa e azul.

CLULAS DAS LINHAGENS ERITROCTICA E GRANULOCTICAMegacaricitoClula de grande tamanho, a maior clula da medula ssea. Ncleo lobulado. Citoplasma costuma conter grnulos, mas que no esto visveis nesta imagem.Passe o cursor para melhor distinguir ncleo e citoplasma.

CLULAS DAS LINHAGENS ERITROCTICA E GRANULOCTICAMegacaricitoClula de grande tamanho, a maior clula da medula ssea. Ncleo lobulado. Citoplasma costuma conter grnulos, mas que no esto visveis nesta imagem.Passe o cursor para melhor distinguir ncleo e citoplasma.

Linhagem eritrocticaProeritroblastosClulas grandes com ncleo volumoso e citoplasma intensamente basfilo sem grnulos.Eritroblasto basfiloClulas um pouco maior que hemcias, ncleo de cromatina densa e citoplasma basfilo.Proeritroblastos policromatfilosClulas pequenas, ncleo de cromatina densa, citoplasma de cor misturada entre cor de rosa e azul.Linhagem granulocticaMielcitosClulas grandes, ncleo chanfrado (indentado), grnulos no citoplasma (provavelmente mielcitos neutrfilos).Metamielcito neutrfiloClula pequena, ncleo alongado, citoplasma de neutrfilo.

Linhagem granulocticaPromielcitoClula grande, ncleo grande e esfrico, citoplasma basfilo contendo alguns pequenos grnulos prpura (setas pretas).

Linhagem eritrocticaEritroblasto basfiloClula um pouco maior que hemcias, ncleo de cromatina densa e citoplasma basfilo sem grnulos.Eritroblasto policromatfiloClula pequena, ncleo de cromatina densa, citoplasma de cor misturada entre cor de rosa e azul.Linhagem granulocticaMielcitoClula grande, citoplasma levemente basfilo, ncleo indentado contendo ncleolos (setas pequenas).Metamielcito eosinfiloClula pequena, ncleo em forma de basto grosso retorcido, com grnulos eosinfilos no citoplasma.Metamielcito neutrfiloClula pequena, ncleo em forma de basto grosso, com grnulos neutrfilos no citoplasma.Veja tambm alguns neutrfilos segmentados (no indicados por setas).

inhagem eritrocticaDois pares deeritroblastosquase na situao deortocromticos.A palavraortocromticosignifica: decolorao normalou decolorao correta, referindo-se colorao do citoplasma. Significa que o citoplasma j est com a colorao de uma hemcia totalmente formada, faltando apenas a expulso do ncleo.

Aumento: grande.Colorao: Leishman.10-19

http://www.icb.usp.br/mol/10-19-hemop9.html