aplicação da técnica da glicina-ácida/edta e avaliação da ... · dra fabíola traina _____...

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SAtildeO PAULO

FACULDADE DE MEDICINA DE RIBEIRAtildeO PRETO

Aplicaccedilatildeo da teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA e

avaliaccedilatildeo da eficaacutecia no tratamento de hemaacutecias

com teste direto da antiglobulina positivo

Ceacutelia Kazue Abiko

RIBEIRAtildeO PRETO

2017




Dissertaccedilatildeo apresentada agrave Faculdade de Medicina de

Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo para

obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Ciecircncias

Aacuterea de concentraccedilatildeo Hemoterapia e Medicina

Transfusional

Orientador Prof Dr Dimas Tadeu Covas

ldquoVersatildeo corrigida A versatildeo original encontra-se disponiacutevel tanto na Biblioteca da Unidade

que aloja o Programa quanto na Biblioteca Digital de Teses de Dissertaccedilotildees da USP

(BDTD)rdquo

RIBEIRAtildeO PRETO

2017

Ficha Catalograacutefica

A142a

Abiko Ceacutelia Kazue

Aplicaccedilatildeo da teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA e avaliaccedilatildeo da

eficaacutecia no tratamento de hemaacutecias com teste direto da

antiglobulina positivo Ceacutelia Kazue Abiko ndash Ribeiratildeo Preto

2017

52f il 30cm

Dissertaccedilatildeo de mestrado apresentada agrave Faculdade de

Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo


Transfusional


1 Glicina-aacutecidaEDTA 2 Teste direto da antiglobulina 3

AHAI 4 Fenotipagem

CDU 61538

CEacuteLIA KAZUE ABIKO







Aacuterea de concentraccedilatildeo Hemoterapia e Biotecnologia


APROVADO ____________

BANCA EXAMINADORA

________________________________

Profordf Dra Fabiacuteola Traina

________________________________

Prof Dr Amauri Antiquera Leite

________________________________

Profordf Dra Ana Paula Costa Nunes da Cunha Cozac

DEDICATOacuteRIA

Dedico este trabalho aos meus filhos Pedro e Maria que sirva de incentivo para a busca do

conhecimento sucesso e realizaccedilatildeo profissional

Aos colegas de trabalho Ana Paula Cristiane Igor Mara Rita e Simone pelo

companheirismo e pela agradaacutevel convivecircncia no dia dia

A todos os colegas do Hemonuacutecleo de Araccedilatuba e aos profissionais da aacuterea da sauacutede que

amam a profissatildeo trabalham com eacutetica e que se dedicam buscando o bem estar dos

pacientes

AGRADECIMENTOS

A DEUS pelo dom da vida e a graccedila de colocar em minha vida pessoas especiais que me

ajudaram a chegar ateacute aqui

Aos meus pais que me ensinaram respeito honestidade perseveranccedila e pelo incentivo aos

estudos

A dra Flaacutevia Leite Souza Santos que me ajudou durante todo o trabalho e contribuiu de

forma valiosa com todas as suas orientaccedilotildees

Ao meu esposo Abidias que de forma especial e carinhosa me deu forccedila e coragem me

apoiando nos momentos de dificuldade

Ao dr Dimas Tadeu Covas pela oportunidade de poder realizar este trabalho e pela ajuda na

definiccedilatildeo do tema

A dra Eugenia Amorim Ubialli pelo apoio e pela prestreza em ajudar sempre que necessitei

Ao dr Wolney Gois Barreto diretor do Hemonuacutecleo de Araccedilatuba pelo incentivo para

realizaccedilatildeo do mestrado

A minha irmatilde Leda que apoiou e ajudou nas horas em que precisei e que natildeo foram poucas

A Raquel Botelho pela sua atenccedilatildeo e prontidatildeo para ajudar

Aos colegas do mestrado aos com os quais convivi durante todo o ano de 2014 e que

guardarei eternamente em minha memoacuteria

A Eacutemile que me ajudou com as amostras e as valiosas informaccedilotildees

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 1

11TESTES PREacute-TRANSFUSIONAIS 1

111 TIPAGEM ABORh 2

112 ANTICORPOS ANTI-ERITROCITAacuteRIOS 3

113 PESQUISA E IDENTIFICACcedilAtildeO DE ANTICORPOS IRREGULARES 4

114 PROVA DE COMPATIBILIDADE 5

115 FENOTIPAGEM PARA OUTROS SISTEMAS 6

12 METODOLOGIAS APLICADOS Agrave ROTINA IMUNO-HEMATOLOacuteGICA 7

121 MEacuteTODOS DE FASE FLUacuteIDA 8

122 COLUNAS DE GEL 9

123 BIOLOGIA MOLECULAR 9

13 TESTE DA ANTIGLOBULINA 10

131 TESTE DIRETO DA ANTIGLOBULINA 11

132 TESTE INDIRETO DA ANTIGLOBULINA 12

133 CONDICcedilOtildeES CLIacuteNICAS COM TDA POSITIVO 13

134 ANEMIA HEMOLIacuteTICA AUTOIMUNE 15

135 TRATAMENTO DE HEMAacuteCIAS COM TDA POSITIVO 16

1351 TEacuteCNICA DE BLOQUEIO 17

1352 TRATAMENTO DE HEMAacuteCIAS COM ZZAP 17

1353 CLOROQUINA 17

1353 GLICINA-AacuteCIDAEDTA 18

2 OBJETIVOS 20

21 OBJETIVO GERAL 20

22 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 20

3 JUSTIFICATIVA 21

4 METODOL OGIA 22

41 AMOSTRAS DE DOADORES 22

411 FENOTIPAGEM 23

412 SENSIBILIZACcedilAtildeO DAS HEMAacuteCIAS 24

413 TRATAMENTO DAS AMOSTRAS 25

42 PREPARO DA GLICINA AacuteCIDA-EDTA 25

421 TEacuteCNICA DA GLICINA-AacuteCIDAEDTA 26

43 PREPARO DA CLOROQUINA 26

431 TEacuteCNICA DA CLOROQUINA 26

44 VERIFICACcedilAtildeO DA EFETIVIDADE DOS TESTES 27

45 TESTE DO ELUATO 27

46 AMOSTRA DE PACIENTE 27

5 RESULTADOS 28

51 REAGENTES 28


521 SENSIBILIZACcedilAtildeO DAS AMOSTRAS 28

522 TRATAMENTO DAS HEMAacuteCIAS 29

523 COMPARACcedilAtildeO ENTRE AS TEacuteCNICAS 30

524 TESTAGEM DO ELUATO 33

525 EFEITO DA ELUICcedilAtildeO SOBRE OS ANTIacuteGENOS ERITROCITAacuteRIOS 34


527 TEMPO DE EXECUCcedilAtildeO DA TEacuteCNICA DA GLICINA-AacuteCIDAEDTA 36

528 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 40

6 DISCUSSAtildeO 42

7 CONCLUSAtildeO 45

8 REFEREcircNCIA BIBLIOGRAacuteFICA 46

9 ANEXOS 50

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Princiacutepio do teste direto da antiglobulinapaacutegina11

Figura 2 - Princiacutepio da teste indireto da antiglobulinapaacutegina 13

Figura 3 - Soluccedilatildeo da uacuteltima lavagempaacutegina 29

Figura 4 - TDA das amostras apoacutes sensibilizaccedilatildeo com anticorpos policlonais

humanospaacutegina 30

Figura 5 - Resultados do TDA apoacutes o tratamento das hemaacutecias com

cloroquina paacutegina 31

Figura 6 ndash Resultados do TDA apoacutes o tratamento das hemaacutecias com glicina-aacutecidaEDTA

paacutegina 32

Figura 7 - Painel do eluato da amostra 21paacutegina 34


Figura 9 - Fenotipagem das amostras 24 e 50 para antiacutegeno K apoacutes tratamento com glicina-

aacutecidaEDTApagina 36

Figura 10 ndash TDA monoespeciacutefico da amostra de pacientepaacutegina 38

Figura 11 ndash TDA apoacutes o tratamento com glicina aacutecidaEDTA e

cloroquinapaacutegina 38

Figura 12 - Fenotipagem da amostra tratada com glicina-aacutecidaEDTApaacutegina 39

Figura 13 ndash Painel em gel (LISSAGH) do eluato apoacutes tratamento com glicina-

aacutecidaEDTApaacutegina 39

Figura 14 ndash Painel enzimaacutetico do eluato em gel neutro apoacutes tratamento com glicina-

aacutecidaEDTA paacutegina 39

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Resultado geral do tratamento das hemaacutecias com glicina e


Tabela 2 - Resultados do TDA apoacutes tratamento da hemaacutecias sensibilizadas por anticorpo

sensibilizadopaacutegina 33

Tabela 3 - Resultado apoacutes o segundo tratamento das hemaacutecias com glicina-


Tabela 4 - Resultado do Eluato das amostras tratadas com glicina-


Tabela 5 ndash Verificaccedilatildeo da interferecircncia do tratamento da hemaacutecias com cloroquina e glicina-

aacutecidaEDTA sobre os antiacutegenos Fya Fy

b Jk

a Jk

b S e spaacutegina 35

Tabela 6 ndash Resultados individuais por amostrapaacutegina 37

LISTA DE GRAFICOS

Graacutefico 1 - Nuacutemero de amostras sensibilizadas por especificidade de

anticorpopaacutegina 31

Graacutefico 2 - Teste de correlaccedilatildeo muacuteltipla entre as teacutecnicas

aplicadaspaacutegina 41

LISTA DE QUADROS

Quadro 1 - Preparo dos Reagentes da teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTApaacutegina 25

Quadro 2 - Preparo do Reagente da teacutecnica da Cloroquinapaacutegina 26

Quadro 3 - Resultados comparativos entre as teacutecnicas utilizadas paacutegina 40

LISTA DE FLUXOGRAMAS

Fluxograma 1 - Fluxo da pesquisa utilizando as amostras de doadorespaacutegina 22

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL

Sistema Sanguiacuteneo ABO

Anemia Hemoliacutetica Autoimune

Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento

Fraccedilatildeo do complemento


Antiacutegeno D

Doenccedila Hemoliacutetica do Feto e do Receacutem-nascido

Aacutecido desoxirribonucleico

Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e

Aacutecido Etileno Diamino Tetraceacutetico

Porccedilatildeo do anticorpo

Antiacutegeno Duffy a

Antiacutegeno Duffy b

Aacutecido Cloriacutedrico

Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros

Cloreto de soacutedio

Puro para anaacutelise

Pesquisa de anticorpos irregulares

Tampatildeo fosfato salino

Reaccedilatildeo em cadeia de polimerase

Polietilenoglicol

Potencial hidrogeniocircnico

Sistema sanguiacuteneo Rh

Antiacutegeno D

Rotaccedilotildees por minuto

Antiacutegeno S

Antiacutegeno s

Siacutendrome da Imunodeficiecircncia adquirida

Sistema de banco de sangue

Termo de consentimento livre e esclarecido

Teste direto da antiglobulina

Teste indireto da antiglobulina

Hidroximetil aminometano

Sulphydryl-Proteolytic Enzyme

Microlitros

RESUMO

ABIKO C K Aplicaccedilatildeo da teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA e avaliaccedilatildeo da eficaacutecia no

tratamento de hemaacutecias com teste direto da antiglobulina positivo 2017 52 f

Dissertaccedilatildeo (mestrado) - Faculdade de Medicina Universidade Estadual de Satildeo Paulo

Ribeiratildeo Preto 2017

Os testes preacute-transfusionais satildeo o conjunto de teacutecnicas imuno-hematoloacutegicas aplicadas nas

amostras do receptor e do doador com a finalidade de fornecer uma unidade de hemaacutecias

compatiacutevel e segura para a transfusatildeo Aleacutem da fenotipagem ABO e RhD obrigatoacuteria nos

testes preacute-transfusionais a determinaccedilatildeo do perfil antigecircnico de outros antiacutegenos eritrocitaacuterios

de importacircncia cliacutenica melhora a seguranccedila transfusional especialmente para pacientes

previamente aloimunizados ou candidatos agrave transfusotildees crocircnicas Para tais pacientes

conhecer o fenoacutetipo eritrocitaacuterio permite a seleccedilatildeo de concentrados de hemaacutecias com o

mesmo fenoacutetipo o que previne reaccedilotildees transfusionais hemoliacuteticas assim como nova

aloimunizaccedilatildeo Indiviacuteduos que apresentam as hemaacutecias sensibilizadas ldquoin vivordquo por

anticorpos anti-eritrocitaacuterios como ocorre na anemia hemoliacutetica autoimune (AHAI) teratildeo o

teste direto da antiglobulina (TDA) positivo dificultando a realizaccedilatildeo da fenotipagem O

TDA positivo provoca resultados falsos positivos especialmente quando satildeo utilizados para a

fenotipagem soros comerciais da classe IgG que exigem a fase de antiglobulina humana ou

teste indireto da antiglobulina (TIA) para leitura Em 1982 Edwards Moulds e Judd

propuseram a utilizaccedilatildeo da teacutecnica da cloroquina para dissociar os complexos de antiacutegeno-

anticorpo preservando a membrana eritrocitaacuteria e permitindo a fenotipagem Atualmente eacute a

teacutecnica mais utilizada nos centros brasileiros A teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA foi

primeiramente descrita por Louie Jieng e Zeroulis em 1986 poreacutem eacute pouco utilizada por natildeo

haver os reagentes prontos comercialmente no mercado brasileiro O presente estudo avaliou a

teacutecnica da glicina-aacutecida-EDTA com reagentes preparados ldquoin houserdquo em paralelo agrave teacutecnica da

cloroquina que eacute atualmente a teacutecnica aplicada no Hemocentro de Ribeiratildeo Preto Para isso

amostras de hemaacutecias de doadores (n=50) com fenoacutetipo conhecido foram sensibilizadas com

anticorpos humanos de especificidade conhecida e ambas as teacutecnicas foram aplicadas Foi

verificado ainda o efeito da teacutecnica sobre a expressatildeo dos antiacutegenos eritrocitaacuterios (Fya Fy

b

Jka Jk

b S e s) atraveacutes da fenotipagem das amostras que tiveram o TDA negativado A

viabiliadade dos anticorpos presentes no eluato recuperado apoacutes tratamento com a glicina-

aacutecidaEDTA tambeacutem foi testada A glicina-aacutecidaEDTA foi efetiva em negativar o TDA em

33 amostras (66) comparaacutevel com a cloroquina que negativou 28 amostras (56) O eluato

apresentou-se viaacutevel no tratamento com a glicina-aacutecidaEDTA e natildeo foi constatada destruiccedilatildeo

dos antiacutegenos eritrocitaacuterios apoacutes o tratamento Concluiacutemos que a teacutecnica da glicina-

aacutecidaEDTA pode ser utilizada como uma opccedilatildeo no tratamento de hemaacutecias com TDA

positivo com a vantagem de seu tempo de execuccedilatildeo ser inferior ao da cloroquina (2 minutos x

30 a 120 minutos) o que lhe torna uacutetil em situaccedilotildees de maior urgecircncia Quando ambas as

teacutecnicas satildeo utilizadas em hemaacutecias diferentes de uma mesma amostra a efetividade estaacute

significativamente aumentada (plt005)

Palavras chave Glicina-aacutecidaEDTA Teste direto da antiglobulina AHAI fenotipagem

ABSTRACT

ABIKO C K Application of the glycine-acidEDTA technique and efficacy evaluation in

the treatment of red blood cells with positive antiglobulin test 2017 52 f Dissertaccedilatildeo

(mestrado) - Faculdade de Medicina Universidade Estadual de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto

2017

The pre-transfusion tests are the group of immunohematology techniques applied in the

receptor and donor samples in order to provide a unit of red blood cells compatible and safe

for transfusion In addition to the obligatory ABO and RhD phenotyping in the pre-

transfusion tests the determination of the antigenic profile of other red cells antigens of

clinical importance improves transfusion safety especially for patients previously

alloimmunized or candidates for chronic transfusion For such patients knowing the

phenotype allows the selection of red blood cell concentrates with the same phenotype which

prevents hemolytic transfusion reactions as well as new alloimmunization Individuals who

have antibody-coated red blood cells sensitized in vivo such as in autoimmune hemolytic

anemia (AHAI) will have a direct antiglobulin test (DAT) positive making it difficult to

perform phenotyping Positive DAT causes false positive results especially when

commercially available IgG serums which require the human antiglobulin phase or indirect

antiglobulin test (IAT) for reading are used for phenotyping In 1982 Edwards Moul ds and

Judd proposed the use of the chloroquine technique to dissociate antigen-antibody complexes

by preserving the erythrocyte membrane and allowing phenotyping It is currently the most

used technique in Brazilian centers The EDTAglycine-acid technique was first described by

Louie Jieng and Zeroulis in 1986 but it is little used because commercially available reagents

are not available in the Brazilian market The present study evaluated the EDTAglycine-acid

technique with reagents prepared in house in parallel to the chloroquine technique which is

currently the technique applied at the Hemocentro de Ribeiratildeo Preto For this donor red cells

samples (n = 50) with known phenotype were sensitized with human antibodies of known

specificity and both techniques were applied The effect of the technique on the expression of

erythrocyte antigens (Fya Fy

b Jk

a Jk

b S and s) was also verified by the phenotyping of the

samples that had negative DAT The viability of the antibodies present in the recovered eluate

after treatment with EDTAglycine-acid A was also tested EDTAglycine-acid was effective

in negatively affecting DAT in 33 samples (66) comparable to chloroquine that negatived

28 samples (56) The eluate was viable in treatment with EDTAglycine-acid and no

destruction of erythrocyte antigens after treatment We conclude that the EDTA glycine-acid

technique can be used as an option in the treatment of red cells with TDA positive with the

advantage that its execution time is inferior to that of chloroquine (2 minutes x 30 to 120

minutes) which makes it useful in emergency situations When both techniques are used in

different erythrocytes of the same sample the effectiveness is significantly increased (p

lt005)

Key words EDTAglycine-acid direct antiglobulin test AIHA phenotyping

1 INTRODUCcedilAtildeO

A transfusatildeo de hemaacutecias eacute um recurso terapecircutico muito importante e eficaz e tem se

mostrado como um grande aliado no tratamento de diversas patologias auxiliando na

melhoria da sobrevida e qualidade de vida de diversos pacientes quando indicada de forma

correta Eacute provavelmente a modalidade de terapia mais utilizada no mundo sendo

considerada a forma mais antiga de terapia celular A transfusatildeo de hemaacutecias em pacientes

com anemia grave ou sangramento agudo reestabelece o niacutevel de hemoglobina moleacutecula

responsaacutevel pelo transporte de oxigecircnio para os tecidos melhorando a isquemia tecidual

(BARJAS-CASTRO 2013 ZAGO 2014)

A transfusatildeo de componentes celulares como o concentrado de hemaacutecias deve ser

bem avaliada quanto aos riscos e benefiacutecios Os testes preacute-transfusionais satildeo parte obrigatoacuteria

do processo transfusional e tecircm como funccedilatildeo assegurar que o melhor hemocomponente seja

selecionado para o paciente reduzindo assim a chance de transfusotildees incompatiacuteveis e reaccedilotildees

transfusionais (BARJAS-CASTRO 2013)

11TESTES PREacute-TRANSFUSIONAIS

Os testes preacute-transfusionais tecircm a finalidade de evitar a ocorrecircncia de reaccedilotildees

hemoliacuteticas no receptor decorrentes da transfusatildeo de hemaacutecias incompatiacuteveis do doador

(DOWNES e SHULMAN 2011) Tem como propoacutesito selecionar hemaacutecias que apoacutes

transfusatildeo deveratildeo ter sobrevida normal ou mais proacutexima do normal (MELO 2007)

Os testes preacute-transfusionais que consistem no conjunto de teacutecnicas imuno-

hematoloacutegicas aplicadas agraves amostras do receptor e doador devem ser realizados antes de toda

transfusatildeo A aplicaccedilatildeo desses testes tem como finalidade fornecer uma unidade de hemaacutecias

compatiacuteveis e elevar a seguranccedila da transfusatildeo Os testes preacute-transfusionais aliados a

utilizaccedilatildeo de novas tecnologias tem historicamente evitado reaccedilotildees transfusionais

hemoliacuteticas garantindo a seguranccedila transfusional em cerca de 95 dos pacientes que recebem

transfusatildeo Eacute imprescindiacutevel poreacutem a execuccedilatildeo correta das teacutecnicas envolvidas nos testes preacute-

transfusionais e ainda garantir a identificaccedilatildeo correta do receptor e das amostras de sangue e

das unidades de hemaacutecias (CASTILHO 2000 MELO 2007 BARJAS-CASTRO 2013)

2

Todos os testes que compotildeem a rotina preacute-transfusional usam meacutetodos soroloacutegicos

que envolvem a reaccedilatildeo antiacutegeno x anticorpo Ao testar a presenccedila de um antiacutegeno na

superfiacutecie da hemaacutecia eacute necessaacuterio dispor de um soro com especificidade conhecida para

aquele antiacutegeno Por outro lado testar a presenccedila de um determinado anticorpo no soro ou no

plasma exige o uso de hemaacutecias com perfil antigecircnico conhecido Os testes preacute-transfusionais

incluem tipagem ABO (direta e reversa) tipagem RhD pesquisa de anticorpos irregulares

(PAI) no sangue do receptor retipagem ABO e RhD do hemocomponente e prova de

compatibilidade entre as hemaacutecias do doador e soro ou plasma do receptor em caso de

transfusatildeo de hemaacutecias ou hemocomponentes que contenham mais de 2 mL de volume

eritrocitaacuterio como o concentrado de granuloacutecitos (BRASIL 2016 GANZELLA 2014

SANTOS 2014)

Aleacutem dos testes regularmente realizados a determinaccedilatildeo do fenoacutetipo para outros

antiacutegenos eritrocitaacuterios do doador e do receptor pode ser indicada A fenotipagem eritrocitaacuteria

determina o perfil antigecircnico para outros antiacutegenos de importacircncia cliacutenica aleacutem dos antiacutegenos

do sistema ABO e do antiacutegeno RhD Ela pode auxiliar a confirmaccedilatildeo de uma especificidade

de anticorpo encontrada no soro do paciente uma vez que espera-se que a sua hemaacutecia natildeo

expresse o antiacutegeno correspondente e simultaneamente eacute utilizada para selecionar um

concentrado de hemaacutecias negativo para o respectivo antiacutegeno evitando reaccedilotildees hemoliacuteticas

transfusionais A fenotipagem de candidatos a transfusotildees crocircnicas tambeacutem eacute recomendada

pois esse grupo de pacientes deve se beneficiar com a transfusatildeo profilaacutetica de unidades de

hemaacutecias com mesmo fenoacutetipo evitando assim a aloimunizaccedilatildeo assim como reaccedilotildees

hemoliacuteticas provocadas por anticorpos previamente existentes e em baixo tiacutetulo natildeo

identificados pela triagem de anticorpos (CASTILHO JUNIOR e REID 2015 DOWNES e

SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh

O sistema ABO (ISBT001) foi o primeiro sistema de grupo sanguiacuteneo a ser

descoberto Ele foi descrito em 1900 por Karl Landsteiner e eacute considerado o sistema de maior

importacircncia na praacutetica transfusional Ele eacute composto por quatro antiacutegenos A (ABO1) B

(ABO2) AB (ABO3) e A1 (ABO4) e eacute caracterizado pela presenccedila dos anticorpos naturais

ou seja anticorpos que surgem sem a exposiccedilatildeo preacutevia aos antiacutegenos atraveacutes de transfusatildeo ou

gestaccedilatildeo Os anticorpos ABO satildeo predominantemente da classe IgM satildeo capazes de fixar o

complemento e de provocar hemoacutelise grave intravascular caso ocorra transfusatildeo ABO

incompatiacutevel Por apresentar essa caracteriacutestica peculiar a tipagem do sistema ABO eacute

3

composta de duas etapas a prova direta e a prova reversa Na prova direta eacute realizada a

pesquisa dos antiacutegenos na superfiacutecie das hemaacutecias que satildeo testadas com soros comerciais

Anti-A e Anti-B A prova reversa por sua vez pesquisa a presenccedila de anticorpos ABO ao

testar o soro ou plasma do pacientedoador com hemaacutecias A1 e B Ambas as provas satildeo

obrigatoacuterias e devem ser concordantes para interpretaccedilatildeo do fenoacutetipo ABO (BRASIL 2016

COOLING 2011 SANTOS 2014)

O sistema Rh (ISBT004) eacute o maior e mais complexo sistema de grupos sanguiacuteneos

compreendendo atualmente 54 antiacutegenos (ISBT 2016) Satildeo cinco os principais antiacutegenos do

sistema Rh D (RH1) C (RH2) E (RH3) c (RH4) e e (RH5) Esses antiacutegenos possuem alta

capacidade imunogecircnica e seus respectivos anticorpos estatildeo envolvidos na doenccedila hemoliacutetica

perinatal e em reaccedilotildees transfusionais hemoliacuteticas Os autoanticorpos quentes como ocorre na

anemia hemoliacutetica quente satildeo representados em grande parte por anticorpos contra antiacutegenos

puacuteblicos do sistema Rh (CASTILHO 2007 CHOU e WESTHOFF 2011 BARJAS-

CASTRO 2013) A tipagem RhD pesquisa o antiacutegeno D na membrana eritrocitaacuteria ao testar a

hemaacutecia com antissoros comerciais Atualmente a maior parte dos soros Anti-D

comercializados satildeo monoclonais

112 ANTICORPOS ANTI-ERITROCITAacuteRIOS

Anticorpos satildeo proteiacutenas presentes no plasma tambeacutem denominadas imunoglobulinas

Satildeo produzidas pelo sistema imune em resposta a presenccedila de um determinado antiacutegeno

Podem ser classificadas de acordo com suas caracteriacutesticas e propriedades em cinco classes de

imunoglobulinas IgG IgM IgA IgE e IgD (BARJAS-CASTRO 2013)

A ligaccedilatildeo entre o antiacutegeno e o anticorpo envolvem ligaccedilotildees natildeo covalentes que satildeo

reversiacuteveis Vaacuterios tipos de interaccedilotildees natildeo covalentes podem contribuir para a ligaccedilatildeo do

antiacutegeno pelo anticorpo incluindo forccedilas eletrostaacuteticas pontes de hidrogecircnio forccedilas de Van

der Walls e interaccedilotildees hidrofoacutebicas (ABBAS LICHTMAN e PILLAI 2008)

As interaccedilotildees antiacutegeno-anticorpo satildeo constituiacutedas por ligaccedilotildees dinacircmicas que sofrem

interferecircncia de alteraccedilotildees fiacutesico-quiacutemicas no meio como mudanccedilas na temperatura na forccedila

eletrostaacutetica na concentraccedilatildeo do antiacutegeno e do anticorpo no pH entre outros O melhor pH

para a reaccedilatildeo eacute em torno de 70 no entanto raros anticorpos podem exigir acidificaccedilatildeo do

meio para serem identificados (SANTOS 2014)

Em imuno-hematologia satildeo pesquisados os anticorpos que reconhecem os antiacutegenos

eritrocitaacuterios de grupo sanguiacuteneo ldquoIn vivordquo esses anticorpos dependendo de seu significado

4

cliacutenico satildeo capazes de reconhecer seus respectivos antiacutegenos sobre a hemaacutecia podendo levar

a sua destruiccedilatildeo por dois mecanismos fagocitose por macroacutefagos no sistema reticulo-

endotelial ou por ativaccedilatildeo do sistema complemento com a formaccedilatildeo do complexo de ataque a

membrana e hemoacutelise intravascular As duas classes de anticorpos de maior importacircncia em

imuno-hematologia satildeo as imunoglobulinas IgG e IgM (SANTOS 2014)

Devido a sua estrutura pentameacuterica os anticorpos da classe IgM se ligam aos

antiacutegenos localizados na superfiacutecie da membrana de hemaacutecias proacuteximas e promovem

aglutinaccedilatildeo das mesmas em meio salino ldquoin vitrordquo Anticorpos da classe IgG por sua vez

satildeo denominados ldquonatildeo aglutinantesrdquo ou ldquoincompletosrdquo pois sua estrutura de monocircmero eacute

pequena o que desfavorece a aglutinaccedilatildeo direta uma vez que uma mesma moleacutecula de IgG

natildeo alcanccedila antiacutegenos alvos em duas hemaacutecias proacuteximas Os anticorpos IgM aleacutem de terem

um tamanho maior apresentam 750 vezes maior eficiecircncia de aglutinaccedilatildeo que os anticorpos

IgG permitindo maior facilidade nas ligaccedilotildees entre as hemaacutecias (CARRUCIO e WISE 2012

GREEN e KLOSTERMANN 2012)

Nos testes ldquoin vitrordquo satildeo simulados reaccedilotildees que poderiam ocorrer ldquoin vivordquo causando

reaccedilotildees indesejaacuteveis A fase de sensibilizaccedilatildeo em que o anticorpo se liga ao antiacutegeno

correspondente natildeo eacute identificada macroscopicamente poreacutem uma vez que o anticorpo

aproxima as hemaacutecias e vence a forccedila eletrostaacutetica que naturalmente as repele chamada de

potencial zeta ocorre a aglutinaccedilatildeo Dependendo das caracteriacutesticas do anticorpo e de sua

capacidade de fixar complemento pode ocorrer tambeacutem a hemoacutelise (SANTOS 2014)

113 PESQUISA E IDENTIFICACcedilAtildeO DE ANTICORPOS IRREGULARES

A pesquisa de anticorpos irregulares eacute teste obrigatoacuterio nos testes preacute-transfusionais e

tem a finalidade de detectar anticorpos ldquoin vitrordquo que possam causar reaccedilatildeo ldquoin vivordquo

Dependendo da populaccedilatildeo estudada (pacientes x doadores) e ainda da sensibilidade do

teste a frequecircncia de anticorpos irregulares pode variar de 03 a 38 A imunizaccedilatildeo pode

ocorrer por transfusatildeo gestaccedilatildeo transplante ou injeccedilatildeo de material imunogecircnico (WALKER

2011)

Os anticorpos irregulares podem ser classificados como aloanticorpos que satildeo

voltados contra antiacutegenos ausentes na hemaacutecia autoacuteloga ou como autoanticorpos os quais

reconhecem antiacutegenos eritrocitaacuterios proacuteprios Os autoanticorpos anti-eritrocitaacuterios surgem em

decorrecircncia da desregulaccedilatildeo da autotoleracircncia imune relacionada agrave condiccedilotildees diversas como

doenccedilas hematoloacutegicas doenccedilas inflamatoacuterias autoimunes neoplasias infecccedilotildees e uso de

5

medicaccedilotildees A presenccedila do autoanticorpo associado a um quadro de anemia hemoliacutetica

caracteriza a anemia hemoliacutetica autoimune (AHAI) seja ela primaacuteria ou secundaacuteria agrave outra

patologia Ateacute 12 a 40 dos pacientes com autoanticorpos quentes podem apresentar

aloanticorpos de significado cliacutenico mascarados pelos autoanticorpos (LEGER e GARRATY

1999 BRANCH e PETZ 1999)

Eacute importante detectar a presenccedila de anticorpos no plasmasoro de um receptor de

transfusatildeo para garantir que seja transfundido sangue compatiacutevel Quando a pesquisa de

anticorpo irregular resultar positiva para um ou mais anticorpos de relevacircncia clinica eacute

necessaacuterio confirmar a ausecircncia do respectivo antiacutegeno na hemaacutecia do receptor assim como

selecionar para transfusatildeo concentrados de hemaacutecias tambeacutem negativos para aqueles

antiacutegenos evitando assim reaccedilotildees transfusionais (WALKER 2011)

A detecccedilatildeo de um anticorpo irregular eacute inicialmente realizada pela triagem de

anticorpos na qual o soroplasma do receptor eacute testado frente a 2 ou 3 hemaacutecias do tipo ldquoOrdquo

O conjunto de fenoacutetipos dessas hemaacutecias deve contemplar o maior nuacutemero possiacutevel de

antiacutegenos de importacircncia cliacutenica Como os anticorpos irregulares de maior interesse cliacutenico

satildeo na maior parte das vezes imunes portanto da classe IgG eacute obrigatoacuteria a fase de

antiglobulina (AGH) do teste ou teste indireto da antiglobulina (TIA) uma vez que esses

anticorpos satildeo incompletos (CASTILHO JUNIOR e REID 2015) O teste de triagem estando

positivo deve-se fazer a identificaccedilatildeo da especificidade do anticorpo utilizando um painel com

maior nuacutemero de hemaacutecias fenotipadas

114 PROVA DE COMPATIBILIDADE

A prova de compatibilidade eacute um teste obrigatoacuterio em caso de transfusatildeo de

componentes eritrocitaacuterios Tambeacutem chamada de prova de compatibilidade maior deve ser

realizada antes da administraccedilatildeo de sangue total ou concentrado de hemaacutecias utilizando-se

hemaacutecias obtidas do tubo coletor da bolsa a ser transfundida e o soro ou plasma do receptor

(BRASIL 2016)

Eacute definido como o procedimento para excluir a incompatibilidade entre o doador e o

receptor Tem o objetivo de detectar anticorpos que podem natildeo ter sido encontrados na

pesquisa de anticorpos devido a ausecircncia ou pouca expressatildeo de antiacutegenos no painel de

hemaacutecias utilizado aleacutem da possibilidade de terem ocorrido erros teacutecnicos ou notacionais

durante a realizaccedilatildeo da pesquisa (MELO 2007)

6

115 FENOTIPAGEM PARA OUTROS SISTEMAS

Aleacutem da pesquisa de ABORh que eacute realizado rotineiramente a fenotipagem para

outros sistemas tambeacutem denominado ldquofenotipagem estendidardquo determina a presenccedila ou

ausecircncia de antiacutegenos considerados de importacircncia cliacutenica A fenotipagem natildeo eacute obrigatoacuteria

nos testes preacute-transfusionais poreacutem a legislaccedilatildeo atual recomenda a realizaccedilatildeo da fenotipagem

eritrocitaacuteria dos antiacutegenos C (RH2) E (RH3) c (RH4) e (RH5) K (KELL1) Fya (FY1) Fy

b

(FY2) Jka

(JK1) Jkb (JK2) S (MNS3) e s (MNS4) para pacientes aloimunizados e pacientes

com indicaccedilatildeo de transfusotildees crocircnicas (BRASIL 2016)

A seleccedilatildeo de concentrados de hemaacutecias com o mesmo fenoacutetipo do receptor para

transfusatildeo pode evitar reaccedilotildees transfusionais hemoliacuteticas no paciente previamente

aloimunizado tambeacutem previne a sensibilizaccedilatildeo por outros antiacutegenos o que normalmente

tornam as transfusotildees seguintes ainda mais complicadas A fenotipagem do paciente tambeacutem

auxilia na identificaccedilatildeo dos anticorpos pois espera-se que nas hemaacutecias do paciente o

antiacutegeno seja negativo para o anticorpo encontrado servindo de guia para teste de exclusatildeo de

anticorpos (SANTOS 2014 WALKER 2011)

A incidecircncia de aloanticorpos aumenta com o nuacutemero de transfusotildees no entanto a

implantaccedilatildeo de rotina de fenotipagem com transfusatildeo profilaacutetica de hemaacutecias com fenoacutetipo

compatiacutevel para pacientes candidatos agrave politransfusatildeo como os portadores de doenccedila

falciforme talassemia anemia aplaacutestica doenccedilas linfo e mieloproliferativas renais crocircnicos e

anemias refrataacuterias pode contribuir para o baixo iacutendice de sensibilizaccedilatildeo nessas populaccedilotildees

(FLUIT KUNST e DRENTHE-SCHONK 1990 MARTINS et al 2008 e VICHINSKY et

al 2001) Outro grupo de pacientes que se beneficia com a transfusatildeo de mesmo fenoacutetipo satildeo

os pacientes com AHAI uma vez que o autoanticorpo pode mascarar a presenccedila de um

aloanticorpo de significado cliacutenico em ateacute 40 dos casos Mesmo com as teacutecnicas utilizadas

ldquoin vitrordquo para remover a interferecircncia do autoanticorpo no soro um aloanticorpo pode natildeo

ser identificado e dessa forma transfundir o mesmo fenoacutetipo do paciente evitaria reaccedilatildeo

hemoliacutetica pelos anticorpos voltados contra antiacutegenos de maior importacircncia cliacutenica e de

frequecircncia intermediaacuteria Aleacutem disso os pacientes com AHAI satildeo fortes respondedores e a

transfusatildeo profilaacutetica do mesmo fenoacutetipo previne a aloimunizaccedilatildeo (SHIREY et al 2002)

Aleacutem de fenotipar o receptor eacute importante tambeacutem que os bancos de sangue tenham

rotinas de fenotipagem de doadores para atender as necessidade dos pacientes aloimunizados

ou em esquema de transfusotildees crocircnicas (PINTO BRAGA e SANTOS 2011)

7

Rotineiramente eacute inviaacutevel estabelecer o fenoacutetipo eritrocitaacuterio completo de um

indiviacuteduo pela grande diversidade de sistemas sanguiacuteneos descritos Ate junho de 2015 jaacute

haviam sido classificados 308 antiacutegenos atribuiacutedos a 36 sistemas definidos pela Sociedade

Internacional de Transfusatildeo de Sangue (ISBT) (CASTILHO JUNIOR e REID 2015)

Portanto o paciente eacute normalmente fenotipado para os antiacutegenos de maior importacircncia

clinica

Alguns fatores podem limitar a realizaccedilatildeo da fenotipagem eritrocitaacuteria Um dos fatores

eacute a transfusatildeo alogecircnica realizada haacute menos de 90 dias Neste caso podem ocorrer resultados

falso positivos para determinados antiacutegenos devido agrave presenccedila de hemaacutecias do doador

(LAINE et al 2000)

Outro fator eacute a presenccedila de anticorpo sensibilizando a hemaacutecia do paciente e

provocando positividade do teste direto da antiglobulina humana (TDA) Os soros

normalmente utilizados para fenotipagem especialmente para os antiacutegenos Fya

(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb

(JK2) S (MNS3) e s (MNS4) necessitam da fase de antiglobulina

humana (AGH) para que ocorra aglutinacatildeo Amostras que apresentam o TDA positivo

aglutinam apoacutes reaccedilatildeo com a AGH natildeo pela real presenccedila do antiacutegeno em sua superfiacutecie mas

pela interaccedilatildeo da AGH com o anticorpo que estaacute sensibilizando o eritroacutecito A interferecircncia

do TDA positivo pode ser anulada atraveacutes de algumas teacutecnicas capazes de dissociar o

anticorpo como por exemplo o tratamento da hemaacutecia sensibilizada com cloroquina ou com

glicina-aacutecida-EDTA (BRANCH e PETZ 1999 SHIREY et al 2002 e LEGER 2011)

12 METODOLOGIAS APLICADOS Agrave ROTINA IMUNO-HEMATOLOacuteGICA


que envolvem a reaccedilatildeo antiacutegeno-anticorpo e tem como objetivo determinar o perfil antigecircnico

eritrocitaacuterio do receptor e do doador assim como identificar em seu soro a presenccedila de

anticorpos contra antiacutegenos eritrocitaacuterios que possam comprometer a sobrevida das hemaacutecias

transfundidas Para testar o antiacutegeno na superfiacutecie da hemaacutecia eacute necessaacuterio dispor de um

antissoro com especificidade conhecida para aquele antiacutegeno Por outro lado para testar a

presenccedila de um determinado anticorpo no soro ou plasma do receptor eacute necessaacuterio o uso de

hemaacutecias com perfil antigecircnico conhecido (SANTOS 2014)

Diversas metodologias satildeo aplicadas nos laboratoacuterios de imuno-hematologia Cada

serviccedilo de hemoterapia faz a escolha do meacutetodo que seraacute aplicado de acordo com o perfil do

laboratoacuterio com o volume de exames diaacuterios e tambeacutem com o custo envolvido Todas essas

8

teacutecnicas tecircm como objetivo comum demonstrar a reaccedilatildeo entre antiacutegeno e anticorpo no

entanto elas se baseiam em diferentes princiacutepios Muitas metodologias satildeo atualmente

aplicadas agrave imuno-hematologia entre elas o sistema de fase soacutelida a tecnologia de hemaacutecias

magnetizadas a biologia molecular e ateacute mesmo a citometria de fluxo no entanto os meacutetodos

mais tradicionais satildeo aqueles baseados no princiacutepio de hemaglutinaccedilatildeo

121 MEacuteTODOS DE FASE FLUacuteIDA

Os meacutetodos de fase fluiacuteda satildeo testes baseados na hemaglutinaccedilatildeo e incluem o teste em

tubo e o teste em microplacas Uma suspensatildeo de hemaacutecias eacute adicionada ao plasma ou soro

em seguida eacute realizada a centrifugaccedilatildeo e por fim eacute feita a leitura do resultado que eacute

considerado positivo se for observado algum grau de aglutinaccedilatildeo ou hemoacutelise A intensidade

de aglutinaccedilatildeo eacute graduada de acordo com o tamanho dos agregados desprendidos da

superfiacutecie apoacutes agitaccedilatildeo delicada do tubo ou microplaca Os meacutetodos de hemaglutinaccedilatildeo satildeo

aplicados a todos os testes preacute-transfusionais Como os anticorpos ABO satildeo aglutininas frias

a tipagem eacute realizada em temperatura ambiente (22degC) no entanto ao investigar a presenccedila

de anticorpos irregulares que como jaacute mencionado eacute na maioria das vezes anticorpos

incompletos da classe IgG eacute essencial que a reaccedilatildeo seja incubada a 37degC As reaccedilotildees satildeo

facilitadas com a utilizaccedilatildeo de potencializadores e da antiglobulina humana (WALKER e

HARMENING 2012 ROBACK et al 2011)

Nos meacutetodos de fase fluiacuteda nos quais a AGH eacute empregada a fase de lavagem eacute

fundamental Apoacutes a incubaccedilatildeo do soro com as hemaacutecias deve ser realizada a lavagem da

reaccedilatildeo para remover o excesso de anticorpos natildeo ligados agraves hemaacutecias jaacute que os anticorpos

livres podem bloquear a AGH quando ela eacute adicionada e levar a resultados falso negativos

(ROBACK et al 2011)

Os testes de hemaglutinaccedilatildeo satildeo os mais tradicionais entre os meacutetodos ainda hoje

aplicados agrave rotina de bancos de sangue A vantagem desses meacutetodos eacute o baixo custo quando

comparado agraves teacutecnicas mais modernas mas apresentam tambeacutem desvantagens A teacutecnica em

tubo por exemplo natildeo permite automaccedilatildeo eacute trabalhosa e exige matildeo-de-obra bastante treinada

na execuccedilatildeo das diversas etapas do teste e mesmo assim pode haver subjetividade na

interpretaccedilatildeo dos resultados aleacutem de resultados falso-negativos (DOWNES e SHULMAN

2011 ZANTEK et al 2012)

9

122 COLUNAS DE GEL

A teacutecnica em gel iniciada na deacutecada de 90 representou uma grande revoluccedilatildeo na

rotina laboratorial tornando-se muito popular Aleacutem de ser sensiacutevel a teacutecnica dispensa a fase

de lavagem antes da adiccedilatildeo da AGH assim como a agitaccedilatildeo do teste para leitura reduzindo o

nuacutemero de resultados falsos negativos decorrentes dessas duas etapas e o tempo para

execuccedilatildeo dos testes (LAPIERRE et al 1990 NOVARETTI et al 2000 NOVARETTI et

al 2004) Os reagentes satildeo comercializados na forma de cartotildees plaacutesticos contendo

microtubos preenchidos por gel composto por microesferas de acrilamida-dextran Nesta

metodologia tambeacutem baseada na hemaglutinaccedilatildeo a suspensatildeo de hemaacutecias e o soro satildeo

depositados em uma cacircmara acima da coluna de gel e em seguida procede-se com a

centrifugaccedilatildeo dos cartotildees As microesferas atuam como uma malha que permite a passagem

em direccedilatildeo ao fundo do microtubo apenas das hemaacutecias natildeo aglutinadas enquanto as

hemaacutecias aglutinadas ficam retidas na parte superior da coluna ou ao longo dela (GREEN e

KLOSTERMANN 2012 WALKER e HARMENING 2012) Portanto quanto maior a

agregaccedilatildeo mais hemaacutecias ficam retidas no topo da coluna Dependendo do tipo de teste a ser

realizado pode ser utilizado gel neutro ou gel especiacutefico impregnado pelo anticorpo desejado

e o gel contendo antiglobulina humana que satildeo utilizados para os testes diretos e indiretos da

antiglobulina (LAPIERRE et al 1990) A coluna de gel ainda permite a visualizaccedilatildeo clara de

duas populaccedilotildees distintas de hemaacutecias como em pacientes receacutem transfundidos

123 BIOLOGIA MOLECULAR

A biologia molecular ou genotipagem estaacute sendo cada vez mais aplicada aos grupos

sanguiacuteneos pois fornece resultados seguros e precisos especialmente nos casos em que natildeo eacute

possiacutevel a realizaccedilatildeo da fenotipagem como em pacientes receacutem-transfundidos e pacientes

com TDA positivo Na genotipagem eacute possiacutevel determinar atraveacutes do DNA do paciente

extraiacutedo de seus leucoacutecitos de sangue perifeacuterico o fenoacutetipo eritrocitaacuterio deduzido sem

qualquer interferecircncia do anticorpo que sensibiliza a hemaacutecia ou de hemaacutecias alogecircnicas

transfundidas Sua realizaccedilatildeo no entanto exige o treinamento de equipe especializada e capaz

de interpretar os resultados em conjunto com os achados soroloacutegicos (JUNIOR e OLIVATO

2007)

Apesar de ser uma ferramenta de grande importacircncia hoje na imuno-hematologia

ainda estaacute restrito aos grandes centros de hemoterapia No Brasil poucos serviccedilos puacuteblicos de

sauacutede dispotildeem desse recurso e utilizam teacutecnicas de genotipagem de grupos sanguiacuteneos para

atendimento a seus pacientes Esta abordagem poreacutem vem sendo introduzida em algumas

10

instituiccedilotildees de reconhecida competecircncia na hemoterapia mas sua disponibilizaccedilatildeo deve

tornar-se mais generalizada atraveacutes da formaccedilatildeo de centros de referecircncia para atendimento

das diversas unidades de hemoterapia (MARTINS et al 2009) Dessa forma muitas decisotildees

transfusionais especialmente em urgecircncias ainda devem ser tomadas sem o resultado da

genotipagem eritrocitaacuteria

13 TESTE DA ANTIGLOBULINA

Coombs Mourant e Race descreveram em 1945 uma teacutecnica utilizando soro de

coelho contendo antiglobulina humana (AGH) que posteriormente foi chamada de ldquosoro de

Coombsrdquo O meacutetodo foi desenvolvido inicialmente para ampliar o efeito de aglutininas fracas

do sistema Rh anticorpos ldquoincompletosrdquo que normalmente natildeo apresentavam aglutinaccedilatildeo

visiacutevel O teste foi concebido como um instrumento de investigaccedilatildeo de doenccedila hemoliacutetica do

receacutem-nascido e de reaccedilotildees transfusionais causadas por anticorpos Rh que estavam presentes

no soro dos paciente poreacutem que natildeo eram demonstraacuteveis pelas teacutecnicas ateacute entatildeo existentes

A maior parte dos anticorpos de significado cliacutenico assim como seus respectivos

antiacutegenos foram descritos apoacutes o surgimento do ldquosoro de Coombsrdquo em 1945 sendo assim o

teste da antiglobulina representa ateacute hoje a forma mais importante de aglutinaccedilatildeo artificial em

imuno-hematologia permitindo revelar a presenccedila de anticorpos na membrana da hemaacutecia A

antiglobulina humana eacute constituiacuteda por anticorpo especiacutefico contra a porccedilatildeo Fc de outro

anticorpo Quando um anticorpo ldquoincompletordquo sensibiliza a hemaacutecia normalmente natildeo

provoca aglutinaccedilatildeo visiacutevel Apoacutes a adiccedilatildeo da AGH ao meio esta reconhece e se liga agraves

porccedilotildees Fc dos anticorpos que sensibilizam a hemaacutecia formando assim uma malha e

provocando aglutinaccedilatildeo visiacutevel (BARJAS-CASTRO 2013)

Os reagentes de antiglobulina podem ser poliespeciacuteficos ou monoespeciacuteficos Os

poliespeciacuteficos satildeo uma mistura de anticorpos ant-IgG e anti-C3d (fraccedilatildeo C3d do

complemento) Os reagentes monoespecificos podem ser anti-IgG anti-IgM anti-IgA anti-

complemento podendo ser anti-C3d e anti-C3b (GREEN e KLOSTERMANN 2012)

O teste da antiglobulina pode ser usado para detectar hemaacutecias sensibilizadas com

aloanticorpos IgG autoanticorpos IgG e componentes do complemento A sensibilizaccedilatildeo

pode ocorrer ldquoin vivordquo ou ldquoin vitrordquo O uso do AGH para detectar a sensibilizaccedilatildeo ldquoin vitrordquo

tem dois estaacutegios e eacute denominado teste indireto da antiglobulina A sensibilizaccedilatildeo ldquoin vivordquo eacute

detectada em procedimento de um uacutenico estagio chamado teste direto da antiglobulina (TDA)

11

Os testes direto e indireto satildeo ateacute hoje amplamente aplicados como princiacutepio de inuacutemeros

testes soroloacutegicos em imuno-hematologia (GREEN e KLOSTERMANN 2012)

131 TESTE DIRETO DA ANTIGLOBULINA

O teste direto da antiglobulina humana revela a presenccedila de anticorpo eou fraccedilatildeo do

complemento ligados agrave superfiacutecie das hemaacutecias A sensibilizaccedilatildeo das hemaacutecias ocorrida ldquoin

vivordquo natildeo eacute visualizada mas apoacutes a adiccedilatildeo da antiglobulina humana ocorre a aglutinaccedilatildeo que

eacute visualizada macroscopicamente (Figura 1)

Figura 1 - Princiacutepio do teste direto da antiglobulina Teste utilizado para demonstrar a sensibilizaccedilatildeo ldquoin

vivordquo das hemaacutecias O sangue total eacute coletado do paciente em tubo contendo anticoagulante EDTA Na teacutecnica

realizada em tubo uma suspensatildeo de hemaacutecias 5 em soluccedilatildeo de salina eacute preparada Uma gota dessa suspensatildeo

eacute lavada 3 vezes com soluccedilatildeo fisioloacutegica para retirada de anticorpos que estatildeo livres no plasma Toda soluccedilatildeo eacute

retirada e adiciona-se o soro de Coombs (antiglobulina humana) O soro de Coombs reconhece os anticorpos que

estatildeo ligados agrave superfiacutecie das hemaacutecias fazendo com que ocorra aglutinaccedilatildeo visiacutevel macroscopicamente

(COOMBS et al 1946)

Apesar de natildeo ser um teste preacute-transfusional obrigatoacuterio o TDA eacute um dos testes mais

importantes para investigar e classificar quadros hemoliacuteticos como de origem imune ou natildeo

imune O seu valor preditivo positivo em vigecircncia de anemia hemoliacutetica eacute de 83 poreacutem natildeo

havendo sinais de hemoacutelise seu valor preditivo eacute apenas 14 Eacute por esse motivo que a

interpretaccedilatildeo do TDA positivo deve levar em consideraccedilatildeo a histoacuteria cliacutenica e os resultados

dos outros exames laboratoriais A realizaccedilatildeo do TDA eacute obrigatoacuteria na investigaccedilatildeo

12

laboratorial de diversos quadros hemoliacuteticos entre eles a anemia hemoliacutetica autoimune

(AHAI) a reaccedilatildeo hemoliacutetica imune poacutes-transfusional a siacutendrome do linfoacutecito passageiro a

doenccedila hemoliacutetica perinatal e a hemoacutelise droga-dependente (LEGER 2011)

Resultados de TDA positivos foram tambeacutem observados em indiviacuteduos com niacuteveis

seacutericos elevados de IgG ou complemento sem evidecircncia de anemia hemoliacutetica imune como

em pacientes com doenccedila falciforme talassemia doenccedila renal crocircnica mieloma muacuteltiplo

doenccedilas autoimunes e siacutendrome da imunodeficiecircncia adquirida (SIDA) Aleacutem disso pequenas

quantidades de IgG (5 a 90 moleacuteculas por hemaacutecia) e complemento (5 a 40 moleacuteculas por

hemaacutecia) podem estar presentes nas hemaacutecias de indiviacuteduos saudaacuteveis sem associaccedilatildeo com

reduccedilatildeo na sobrevida das mesmas A positividade do TDA depende da populaccedilatildeo estudada e

pode variar de 01 entre doadores de sangue sem qualquer sinal cliacutenico de hemoacutelise ateacute

15 em pacientes hospitalizados (CASTILHO JUNIOR e REID 2015 LEGER 2011)

Indiviacuteduos que apresentam TDA positivo seja agraves custas de IgG eou complemento

com ou sem sinais cliacutenicos de hemoacutelise teratildeo a fenotipagem eritrocitaacuteria prejudicada A

fenotipagem de indiviacuteduos com TDA positivo especialmente quando utilizado o teste indireto

da antiglobulina pode acarretar resultados falsos positivos e levar a seleccedilatildeo de fenoacutetipo

incorreto para transfusatildeo (GREEN e KLOSTERMANN 2012 LEGER 2011)

132 TESTE INDIRETO DA ANTIGLOBULINA

O teste indireto da antiglobulina (TIA) eacute utilizado para revelar a sensibilizaccedilatildeo ldquoin

vitrordquo das hemaacutecias e eacute aplicado a diversos testes soroloacutegicos em imuno-hematologia entre

eles a pesquisa de anticorpos identificaccedilatildeo de anticorpos testes de compatibilidade

fenotipagem eritrocitaacuteria e titulaccedilatildeo de anticorpos Na teacutecnica indireta a hemaacutecia que contecircm

o antiacutegeno eacute colocada em contato ldquoin vitrordquo com o anticorpo que se liga mas natildeo promove a

aglutinaccedilatildeo visiacutevel A adiccedilatildeo da AGH forma uma malha entre os anticorpos que sensibilizam

as hemaacutecias e provoca a aglutinaccedilatildeo macroscoacutepica (figura 2) (GREEN e KLOSTERMANN

2012)

Caso a amostra de hemaacutecia estudada seja previamente sensibilizada resultados falsos

positivos podem ser obtidos no TIA jaacute que a AGH reagiraacute com a moleacutecula que sensibilizava

anteriormente a hemaacutecia mesmo se o anticorpo especiacutefico natildeo tiver se ligado ao antiacutegeno

correspondente (GREEN e KLOSTERMANN 2012)

13

133 CONDICcedilOtildeES CLIacuteNICAS COM TDA POSITIVO

O TDA positivo deve ser interpretado cuidadosamente sempre em conjunto com o

quadro cliacutenico do paciente A positividade isolada do TDA natildeo significa hemoacutelise A

interpretaccedilatildeo do teste positivo requer o conhecimento do diagnoacutestico do paciente da presenccedila

de sinais e sintomas sugestivos de hemoacutelise assim como de seu histoacuterico transfusional

gestacional e de informaccedilotildees sobre o uso recente de medicaccedilotildees (LEGER 2011)

Figura 2 ndash Princiacutepio do teste indireto da antiglobulina O TIA pode ser utilizado na pesquisa de anticorpos de

especificidades desconhecidas livres no soroplasma como eacute o caso da pesquisa e identificaccedilatildeo de anticorpos

irregulares Ele eacute tambeacutem utilizado para determinar a presenccedila de antiacutegenos na membrana da hemaacutecia quando

satildeo empregados soros de especificidades conhecidas da classe IgG No primeiro caso o soroplasma contendo o

anticorpo desconhecido eacute colocado em contato com hemaacutecias cujo perfil antigecircnico eacute conhecido No segundo

caso utiliza-se soro de especificidade conhecida da classe IgG para determinar a presenccedila ou ausecircncia de um

antiacutegeno na membrana O anticorpo encontra o antiacutegeno correspondente e ocorre a ligaccedilatildeo do anticorpo agrave

hemaacutecia mas natildeo ocorre aglutinaccedilatildeo Apoacutes a adiccedilatildeo da AGH que se liga aos anticorpos formando uma malha

ocorre a aglutinaccedilatildeo visiacutevel (COOMBS MOURANT e RACE 1945)

O TDA positivo eacute uma achado claacutessico de algumas condiccedilotildees cliacutenicas como a reaccedilatildeo

transfusional hemoliacutetica a doenccedila hemoliacutetica do feto e do receacutem-nascido (DHFRN) a anemia

hemoliacutetica induzida por drogas a siacutendrome do linfoacutecito passageiro e a anemia hemoliacutetica

autoimune (AHAI) Portanto o TDA positivo pode ser decorrente da sensibilizaccedilatildeo da

hemaacutecia autoacuteloga por um autoanticorpo ou por um aloanticorpo ligado agrave hemaacutecia alogecircnica

circulante A positividade do TDA pode ainda ocorrer de forma passiva em pacientes que

14

recebem imunoglobulinas humanas ou ainda pela transfusatildeo de plaquetas ABO natildeo idecircntico

(LEGER 2011 RALPH GREEN e KLOSTERMANN 2012 ZANTEK et al 2012)

Nas reaccedilotildees transfusionais hemoliacuteticas imunes o aloanticorpo do receptor sensibiliza

as hemaacutecias transfundidas do doador e reduz sua sobrevida ao removecirc-la precocemente da

circulaccedilatildeo pela fagocitose no sistema retiacuteculo-endotelial ou pela hemoacutelise intravascular As

reaccedilotildees podem ser agudas se ocorrem ateacute 24 horas ou tardias quando ocorrem apoacutes 24 horas

da transfusatildeo A gravidade das reaccedilotildees hemoliacuteticas pode variar de um simples rendimento

transfusional inadequado agrave quadros graves de hemoacutelise intravascular evoluindo ateacute mesmo

com choque vascular e oacutebito O TDA pode resultar negativo caso toda massa eritrocitaacuteria

transfundida tenha sido destruiacuteda (LEGER 2011 ZANTEK et al 2012)

Na doenccedila hemoliacutetica do feto e do receacutem-nascido (DHFRN) anticorpos maternos da

classe IgG atravessam a barreira placentaacuteria e sensibilizam as hemaacutecias fetais que seratildeo

destruiacutedas precocemente levando agrave anemia fetal Apesar da incompatibilidade ABO feto-

materna ser a causa mais frequente de DHFRN raramente ela eacute responsaacutevel pela ocorrecircncia

de quadros graves Por outro lado anticorpos contra antiacutegenos do sistema Rh e Kell

especialmente Anti-D (Anti-RH1) Anti-c (Anti-RH4) e Anti-Kell (Anti-KELL1) satildeo

conhecidos por causar DHFRN severa Raramente outros anticorpos tambeacutem podem estar

implicados na DHFRN como os anticorpos contra antiacutegenos do sistema Kidd Duffy MNS e

Diego (ZANTEK et al 2012)

A hemoacutelise droga-dependente eacute causada pela produccedilatildeo de um anticorpo voltado contra

a droga ligada agrave membrana eritrocitaacuteria ou ainda contra o complexo droga-membrana A

classe de medicaccedilotildees mais comumente envolvida eacute a dos antimicrobianos betalactacircmicos

(penicilinas e cefalosporinas) mas outras classes como quimioteraacutepicos e anti-inflamatoacuterios

tambeacutem satildeo descritos (LEGER 2011 ZANTEK et al 2012)

Apoacutes transplante de ceacutelulas progenitoras hematopoieacuteticas em que o doador possui

anticorpos contra antiacutegenos eritrocitaacuterios do receptor o linfoacutecito de memoacuteria do doador pode

resistir ao esquema imunossupressor utilizado e continuar a produccedilatildeo de anticorpos que

reconhecem a hemaacutecia incompatiacutevel do receptor ainda circulante O quadro cliacutenico pode

variar de um simples TDA positivo sem outros sinais ou sintomas ateacute um quadro hemoliacutetico

grave e abrupto (LEGER 2011)

15

134 ANEMIA HEMOLIacuteTICA AUTOIMUNE

A anemia hemoliacutetica autoimune eacute caracterizada pela destruiccedilatildeo precoce das hemaacutecias

autoacutelogas por autoanticorpos que sensibilizam as hemaacutecias e levam agrave fagocitose pelos

macroacutefagos no sistema reticulo-endotelial ou hemoacutelise intravascular O diagnoacutestico da AHAI

baseia-se na presenccedila de hemoacutelise cliacutenica associada agrave evidecircncia de fator imune representado

pelo TDA positivo As classes de anticorpos envolvidas em quadros de AHAI satildeo IgG IgM e

raramente IgA (LEGER 2011 ZANTEK et al 2012) Satildeo raros os casos de AHAI com TDA

negativo que podem estar relacionados a um autoanticorpo de baixa avidez de densidade

inferior agrave detecccedilatildeo do meacutetodo ou ainda de classe de imunoglobulina natildeo avaliada pelo

meacutetodo utilizado para o teste (GARRATY 2005)

A AHAI pode ser classificada em dois grupos principais de acordo com a melhor

temperatura de reaccedilatildeo do autoanticorpo As anemias hemoliacuteticas causadas por anticorpos

quentes que reagem melhor a 37 oC e geralmente IgG representam 80 dos casos de AHAI

Nas AHAI por anticorpo quente o TDA pode ser positivo para IgG mais complemento (67)

somente IgG (20) ou somente por complemento (13) As anemias causadas por

anticorpos frios geralmente da classe IgM e que reagem melhor em temperatura ambiente ou

a 4 oC representam aproximadamente 20 dos casos de AHAI Por exibirem amplitude

teacutermica esses anticorpos ligam-se agraves hemaacutecias ao atingirem a circulaccedilatildeo nas extremidades do

corpo fixam o complemento e desprendem-se da hemaacutecia apoacutes retornar para partes mais

quentes Por esse motivo em AHAI por anticorpos frios o TDA eacute positivo apenas agraves custas

de C3 e normalmente o IgM natildeo eacute detectado (LEGER 2011 ZANTEK et al 2012)

A presenccedila do autoanticorpo IgG pode ser confirmada atraveacutes da eluiccedilatildeo do anticorpo

da hemaacutecia Tipicamente o eluato na AHAI por anticorpo quente reage com todas as ceacutelulas

testadas de um painel de hemaacutecias alogecircnicas do tipo ldquoOrdquo ou pode eventualmente exibir uma

especificidade conhecida como Anti-e (Anti-RH5) Nas AHAI a frio por sua vez espera-se

um eluato negativo (HARMENING RODBERG e GREEN 2012 LEGER 2011)

Os autoanticorpos satildeo com frequecircncia encontrados livres no plasma e natildeo somente

ligados agraves hemaacutecias autoacutelogas Eles podem interferir em todas as fases dos testes preacute-

transfusionais nas quais o plasma eacute testado especialmente os autoanticorpos quentes que

acarretam resultados positivos em todos os testes levados agrave fase de antiglobulina humana

Esses anticorpos portanto positivam a pesquisa de anticorpos irregulares e mascaram a

presenccedila de aloanticorpos de significado cliacutenico Aproximadamente 60 dos pacientes que

apresentam AHAI a quente apresentam anticorpos que reagem em meio salino mas se forem

16

levados em conta meacutetodos mais sensiacuteveis como PEG enzima e estudo em gel a positividade

pode ser superior a 90 (LEGER 2011)

Aleacutem da eficaacutecia da transfusatildeo ser comprometida pela diminuiccedilatildeo da vida-meacutedia das

hemaacutecias a presenccedila do autoanticorpo dificulta a realizaccedilatildeo dos testes preacute-transfusionais e

compromete a seguranccedila transfusional Os autoanticorpos reagem normalmente como

panaglutininas pois satildeo normalmente voltados contra antiacutegenos puacuteblicos na maior parte das

vezes contra antiacutegenos do sistema Rh Por apresentarem essas caracteriacutesticas podem ainda

mascarar a presenccedila de aloanticorpos de significado clinico e levar a testes de compatibilidade

positivos exigindo uma avaliaccedilatildeo criteriosa da necessidade da transfusatildeo (BRANCH e PETZ

1999 JUNIOR e OLIVATO 2004)

Remover a interferecircncia do autoanticorpo para avaliar a presenccedila de aloanticorpos

mascarados nem sempre eacute possiacutevel mesmo utilizando teacutecnicas de autoadsorccedilatildeo ou

aloadsorccedilatildeo que aleacutem de tudo satildeo demoradas e exigem de 2 a 6 horas para conclusatildeo

(GARRATY e PETZ 2002) Nesses casos a fenotipagem eritrocitaacuteria do paciente eacute de

extrema utilidade especialmente em situaccedilotildees de urgecircncia A definiccedilatildeo do fenoacutetipo do

paciente para os antiacutegenos de maior importacircncia cliacutenica pode auxiliar a seleccedilatildeo de unidades

de hemaacutecias com mesmo fenoacutetipo o que garante que eventuais aloanticorpos natildeo

identificados sejam respeitados e tambeacutem evita nova sensibilizaccedilatildeo (JUNIOR e OLIVATO

2004 SHIREY et al 2002)

135 TRATAMENTO DE HEMAacuteCIAS COM TDA POSITIVO

O TDA positivo impede a fenotipagem eritrocitaacutecia por meacutetodos que exigem a fase de

AGH uma vez que a aglutinaccedilatildeo ocorreraacute devido agrave interaccedilatildeo da AGH com o autoanticorpo

que sensibiliza a hemaacutecia do paciente levando a resultados falso positivos Em algumas

situaccedilotildees como na AHAI por anticorpo quente a fenotipagem eacute especialmente importante

pois o autoanticorpo interfere na triagem e identificaccedilatildeo de anticorpos assim como no teste de

compatibilidade e dificultam a detecccedilatildeo de aloanticorpos de significado cliacutenico que

obrigatoriamente devem ser respeitados Nessas situaccedilotildees a fenotipagem eritrocitaacuteria

determina o perfil antigecircnico do paciente e possibilita o fornecimento de unidades de

hemaacutecias com o mesmo fenoacutetipo para a transfusatildeo evitando a sensibilizaccedilatildeo para novos

antiacutegenos assim como reaccedilotildees hemoliacuteticas transfusionais No entanto eacute necessaacuterio aplicar

meacutetodos que natildeo sofram interferecircncia do TDA positivo ou seja meacutetodos que natildeo necessitem

da fase de AGH ou meacutetodos de bloqueio do anticorpo sem bloquear o antiacutegeno Uma opccedilatildeo eacute

a utilizaccedilatildeo de soros monoclonais IgM (salinos ou de meio proteico natildeo concentrado) mas

17

nem sempre esses reagentes estatildeo disponiacuteveis especialmente os reagentes monoclonais para

os antiacutegenos dos sistemas Duffy (Fya Fy

b) Kidd (Jk

a Jk

b) e MNS (S s) (JUNIOR e

OLIVATO 2004)

Outra opccedilatildeo eacute a teacutecnica de bloqueio que pode ser utilizada para tratar hemaacutecias para

posterior fenotipagem em casos de TDA positivos com reatividade le2+ Em casos onde a

positividade do TDA eacute maior que 2+ estaacute indicada a tratamento quiacutemico para remoccedilatildeo da

interferecircncia do autoanticorpo antes de realizar a fenotipagem Entre as teacutecnicas utilizadas

atualmente estatildeo o ZZAP a cloroquina e a glicina aacutecidaEDTA (BRANCH e PETZ 1982

SERERAT VEIDT e DUTCHED 2000)

1351 TEacuteCNICA DE BLOQUEIO

A teacutecnica de bloqueio se baseia na utilizaccedilatildeo de anti-IgG (Coombs monoespeciacutefico)

para tratar as hemaacutecias com TDA positivo O anticorpo anti-IgG se liga aos anticorpos que

estatildeo sensibilizando a hemaacutecias poreacutem sem bloquear os antiacutegenos Os antiacutegenos que natildeo

estatildeo sensibilizados podem ser detectados atraveacutes dos antissoros especiacuteficos (SERERAT

VEIDT E DUTCHED 2000)

1352 TRATAMENTO DE HEMAacuteCIAS COM ZZAP

O Sulphydryl-Proteolytic Enzyme (ZZAP) que eacute uma mistura de ditiotreitol (DTT)

mais papaiacutena ativada com cisteiacutena eacute um reagente capaz de dissociar imunoglobulinas da

classe IgG ligadas a membrana dos eritroacutecitos enquanto trata enzimaticamente as hemaacutecias

O tratamento enzimaacutetico tambeacutem potencializa a ligaccedilatildeo do autoanticorpo ao antiacutegeno e

acelera o processo de autoadsorccedilatildeo O ZZAP pode desnaturar os antiacutegenos do sistema Duffy

MNS e Kell o que limita sua aplicaccedilatildeo para fins de fenotipagem (BRANCH e PETZ 1982)

1353 CLOROQUINA

Em 1982 Edwards Moulds e Judd propuseram a utilizaccedilatildeo da teacutecnica da cloroquina

que dissociava o complexo antiacutegeno-anticorpo e mantinha a membrana das hemaacutecias

iacutentegras Os derivados quinolecircicos jaacute haviam sido descritos anteriormente por Domokos e

Aszody em 1964 e Holtz Mantel e Buck em 1973 (apud Edwards Moulds e Judd 1982) pela

sua capacidade de separar imunocomplexos e inibir a reaccedilatildeo antiacutegeno-anticorpo reduzindo as

cargas eleacutetricas das superfiacutecie das hemaacutecias A teacutecnica eacute uma das mais utilizadas nos centros

18

brasileiros para remover a interferecircncia do autoanticorpo e eacute tambeacutem a teacutecnica atualmente

adotada pelo laboratoacuterio de imuno-hematologia do Hemocentro de Ribeiratildeo Preto

Edwards Moulds e Judd (1982) demonstraram que a teacutecnica da cloroquina para

dissociaccedilatildeo de anticorpos eacute uma teacutecnica simples efetiva e confiaacutevel para dissociar

imunoglobulina das hemaacutecias Desde que a membrana das hemaacutecias permaneccedila intacta natildeo

haacute perda da reatividade dos antiacutegenos e a sua maior aplicaccedilatildeo eacute a fenotipagem de hemaacutecias

com TDA positivo Os autores verificaram que em 83 das amostras sensibilizadas in vivo e

22 amostras (no total de 40) sensibilizadas ldquoin vitrordquo apresentaram TDA negativo e

puderam ser fenotipadas A teacutecnica poreacutem natildeo consegue remover os componentes do

complemento na maioria dos casos

Champagne e colaboradores (1999) testaram a teacutecnica da cloroquina para dissociar

antiacutegenos Bg comparando com a teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA e verificaram vantagem em

relaccedilatildeo ao uso de um uacutenico reagente diminuindo a manipulaccedilatildeo e verificou que o mesmo natildeo

destroacutei antiacutegeno Kell

A cloroquina tambeacutem mostrou-se pouco efetiva em remover anticorpos do sistema

Duffy da superfiacutecie das hemaacutecias (EDWARDS MOUDS e JUDD 1982 ROZIERS e

SQUALI 1997)

1353 GLICINA-AacuteCIDAEDTA

A afinidade e a estabilidade entre a ligaccedilatildeo antiacutegeno-anticorpo eacute definida como a

resultante entre forccedilas atrativas e repulsivas entre ambos (CARUCIO e WISE 2012) e resulta

da somatoacuteria de forccedilas quiacutemicas dinacircmicas e fracas (natildeo covalentes) como pontes de

hidrogecircnio forcas eletrostaacuteticas forca de Van der Waals e pontes hidrofoacutebicas A estabilidade

dessa ligaccedilatildeo eacute facilmente abalada por alteraccedilotildees quiacutemicas e fiacutesicas no meio da reaccedilatildeo como

a alteraccedilatildeo do pH A teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA se baseia na mudanccedila do pH para a

quebra da ligaccedilatildeo antiacutegeno-anticorpo (KOSANKE 2012)

A teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA foi descrita em 1986 por Louie Jieng e Zeroulis que

utilizaram 50 amostras de doadores sensibilizados ldquoin vitrordquo com anticorpos A teacutecnica foi

efetiva em 48 amostras permitindo o estudo do eluato assim como a fenotipagem das

hemaacutecias Os autores testaram tambeacutem a teacutecnica em 100 hemaacutecias TDA positivo que

puderam ser utilizadas para teacutecnicas de autoadsorccedilatildeo

19

Anterior a isso Rekvig e Hannestad (1977) haviam descrito a teacutecnica utilizando os

mesmos reagentes em concentraccedilotildees diferentes somente como meacutetodo de eluiccedilatildeo aacutecida-fria

com a finalidade de testar o eluato

Baseado nesses trabalhos Byrne em 1991 testou a teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA

modificado da teacutecnica de eluiccedilatildeo aacutecida-fria Utilizou a teacutecnica para o tratamento de hemaacutecias

com TDA positivo que deixava as hemaacutecias intactas para serem fenotipadas e o eluato viaacutevel

para ser testado Na teacutecnica utilizada foi modificada o pH do meio e a concentraccedilatildeo dos

reagentes

Roziers e Squali (1997) e Katharia e Chaudhary (2013) compararam a teacutecnica da

glicina-aacutecidaEDTA com as teacutecnicas da cloroquina e do aquecimento Verificaram maior

eficaacutecia da glicina-aacutecidaEDTA em relaccedilatildeo as outras duas teacutecnicas pois com uma mesma

quantidade de amostra produzia as hemaacutecias livres de anticorpo e tambeacutem o eluato Mostrou-

se ainda superior devido ao menor tempo exigido para sua realizaccedilatildeo o que favorece seu uso

em situaccedilotildees de urgecircncia e emergecircncia

As duas desvantagens da teacutecnica poreacutem eacute o fato de destruir os antiacutegenos do sistema

Kell e o fato de natildeo remover fraccedilotildees do complemento ligadas agrave hemaacutecia (PALLAS WILER e

McGEE 1991 ROZIERS e SQUALLI 1997 CHAMPAGNE et al 1999 KOSANKE 2012

e KATHARIA e CHAUNDHARY 2013)

20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL

211 Avaliar a eficaacutecia da glicina-aacutecidaEDTA em remover os anticorpos ligados agraves

hemaacutecias sensibilizadas por anticorpos da classe IgG

22 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS

221 Preparaccedilatildeo dos reagentes utilizados na teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA

verificaccedilatildeo da estabilidade dos mesmos e avaliar custos

222 Tratar as hemaacutecias sensibilizadas por anticorpos antieritrocitaacuterios humanos

com a teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA e testar sua efetividade em remover o

anticorpo ligado a hemaacutecia comparando com a teacutecnica da cloroquina

223 Testar a viabilidade do eluato resultante das amostras tratadas com glicina-

aacutecidaEDTA

224 Verificar se houve destruiccedilatildeo dos antiacutegenos eritrocitaacuterios apoacutes o tratamento

com glicina-aacutecidaEDTA e com cloroquina

225 Verificar se o tempo de execuccedilatildeo da teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA descrito

nos textos de referecircncia eacute reprodutiacutevel

21

3 JUSTIFICATIVA

Algumas condiccedilotildees cliacutenicas podem levar ao depoacutesito ldquoin vivordquo de anticorpos eou

fraccedilotildees do complemento sobre as hemaacutecias Entre elas estatildeo as reaccedilotildees hemoliacuteticas poacutes-

transfusionais a doenccedila hemoliacutetica perinatal o uso de medicamentos e principalmente a

AHAI Na AHAI um anticorpo normalmente da classe IgG ou IgM reconhece antiacutegenos

proacuteprios na membrana eritrocitaacuteria e reduz a sobrevida da hemaacutecia levando a sua destruiccedilatildeo

pelos macroacutefagos no sistema reticulo-endotelial ou agrave ativaccedilatildeo do complexo de ataque agrave

membrana e agrave lise intravascular Os autoanticorpos satildeo voltados na maioria das vezes contra

antiacutegenos eritrocitaacuterios de alta frequecircncia populacional conhecidos como antiacutegenos puacuteblicos

e por este motivo reconhecem tanto hemaacutecias autoacutelogas quanto alogecircnicas (HARMENING

RODBERG e GREEN 2012 LEGER 2011)

Devido agrave presenccedila do autoanticorpo livre no plasma e tambeacutem do anticorpo eou

complemento ligado agrave hemaacutecia o banco de sangue pode encontrar dificuldades em todas as

fases dos testes preacute-transfusionais do paciente com AHAI e deve utilizar teacutecnicas que

auxiliem na escolha do melhor hemocomponente melhorando a seguranccedila transfusional Essas

teacutecnicas visam remover a interferecircncia do autoanticorpo livre no soro e do autoanticorpo

ligado agrave hemaacutecia permitindo a detecccedilatildeo de aloanticorpos associados e a realizaccedilatildeo da

fenotipagem eritrocitaacuteria respectivamente (BRANCH e PETZ 1999 PETZ 2004 SHIREY

et al 2002)

A finalizaccedilatildeo dos testes preacute-tranfusionais na presenccedila de autoanticorpo pode levar

algumas horas e nem sempre o paciente poderaacute aguardar Nesse contexto torna-se vantajosa a

aplicaccedilatildeo de teacutecnicas de raacutepida execuccedilatildeo (PETZ 2004 SHIREY et al 2002)

O presente estudo propotildee aplicar e avaliar a eficaacutecia da teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA

em remover os anticorpos ligados agrave hemaacutecia o que permite a fenotipagem eritrocitaacuteria

estendida e a seleccedilatildeo de concentrados de hemaacutecias com mesmo fenoacutetipo do paciente

Atualmente no Hemocentro de Ribeiratildeo Preto a teacutecnica utilizada para esse fim eacute o

tratamento das hemaacutecias com difosfato de cloroquina cujo tempo de execuccedilatildeo pode demorar

ateacute duas horas enquanto a teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA pode ser realizada em apenas dois

minutos o que a tornaria opccedilatildeo de escolha especialmente em situaccedilotildees de urgecircncia Ao

contraacuterio da cloroquina a glicina-aacutecidaEDTA permite tambeacutem o estudo do eluato das

hemaacutecias tratadas

22

4 METODOL OGIA

41 AMOSTRAS DE DOADORES

Foram coletados 50 amostras de doadores de sangue que compareceram ao

Hemonuacutecleo de Araccedilatuba no periacuteodo de junho a agosto de 2016 Foram convidados a

participar da pesquisa doadores de repeticcedilatildeo do tipo sanguiacuteneo ldquoOrdquo RhD positivo

cadastrados no sistema de banco de sangue (SBS) do Hemocentro de Ribeiratildeo Preto

Todos os doadores que concordaram em participar da pesquisa assinaram o termo de

consentimento livre e esclarecido (TCLE) que foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em pesquisa

do Hospital das Cliacutenicas e da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto

No momento da doaccedilatildeo foram coletados adicionalmente 5 mL de sangue total em

soluccedilatildeo anticoagulante EDTA (aacutecido etileno diamino tetraceacutetico) dispensando punccedilatildeo venosa

adicional para coleta da amostra O fluxograma 1 resume as etapas desenvolvidas no projeto

Fluxograma 1 - Fluxo da pesquisa utilizando as amostras de doadores

23

411 FENOTIPAGEM

Foram verificados se os doadores tinham fenotipagem preacutevia para outros sistemas de

grupos sanguiacuteneos aleacutem do sistema ABORhD que eacute realizado rotineiramente

A fenotipagem eritrocitaacuteria para outros sistemas ou fenotipagem estendida eacute realizada

para identificar a presenccedila ou ausecircncia de antiacutegenos considerados de importacircncia cliacutenica No

Hemonuacutecleo de Araccedilatuba uma parcela de doadores de repeticcedilatildeo satildeo fenotipados para os

antiacutegenos dos sistemas de grupo sanguiacuteneo Rh (antiacutegenos C c E e e) Kell (antiacutegeno K)

Duffy (antiacutegenos Fya e Fy

b) Kidd (antiacutegenos Jk

a e Jk

b) e sistema MNSs (antiacutegenos S e s)

A fenotipagem para o Rh e Kell eacute realizada por metodologia de microplaca utilizando

25 microL de hemaacutecia lavada e diluiacuteda a 5 em salina e 25 microL do antissoro comercial especiacutefico

A reaccedilatildeo eacute incubada 15 minutos a temperatura ambiente e centrifugadas para leitura Para os

antiacutegenos Fya Fy

b Jk

a Jk

b S e s a metolodogia utilizado eacute gel contendo antiglobulina

humana (gel LissCoombs poliespeciacutefico) da marca BIO-RAD onde se utiliza suspensatildeo de

hemaacutecia em LISS (Soluccedilatildeo de baixa forccedila iocircnica) A suspensatildeo eacute preparada atraveacutes da

diluiccedilatildeo de 10 microL de hemaacutecia em 1000 microL de LISS Pipetado 50 microL dessa diluiccedilatildeo no gel e

adicionado 25 microL do antissoro especiacutefico Incuba-se em banho seco por 15 minutos a 37 degC e

eacute centrifugado em centriacutefuga especiacutefica Os antissoros utilizados eram das marcas Fresenius e

Lorne

Foi verificado a fenotipagem do doador no banco de dados do Hemocentro Os

registros dos fenoacutetipos dos doadores ficam armazenados no sistema de banco de sangue

(SBS) Para doadores que natildeo tinham fenotipagem estendida preacutevia para antiacutegenos do sistema

Rh (C c E e e) e Kell (K) foi realizada a fenotipagem para esses antiacutegenos

O tratamento das hemaacutecias com glicina-aacutecidaEDTA e cloroquina para dissociar

anticorpos pode inativar enfraquecer ou destruir os antiacutegenos presentes nas hemaacutecias

alterando assim os resultados da fenotipagem Para verificar se houve destruiccedilatildeo dos


b Jk

a e Jk

b S e s nas amostras que tiveram o TDA negativado apoacutes

tratamento foram novamente fenotipadas ao final para os antiacutegenos que eram inicialmente

positivas

A repeticcedilatildeo da fenotipagem foi realizada nas amostras que apresentaram efetividade

no tratamento da teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA eou da cloroquina e a detecccedilatildeo do antiacutegeno

na amostra preacute-tratamento

24

412 SENSIBILIZACcedilAtildeO DAS HEMAacuteCIAS

As hemaacutecias foram sensibilizadas com antissoros policlonais humanos de amostras de

plasma fresco congelado de doadores com resultado de pesquisa de anticorpo irregular

positivos

A escolha do anticorpo para sensibilizar as hemaacutecias foi definida de acordo com o

fenoacutetipo do doador que deveria ser positivo para o respectivo antiacutegeno

Para a sensibilizaccedilatildeo um volume de antissoro (1 mL) e um volume (1 mL) de

hemaacutecias lavadas quatro vezes com soluccedilatildeo fisioloacutegica foram adicionadas a um tubo de 12 x

75 mm A mistura foi homogeneizada e incubada em banho maria (BM) a 37 degC por 60

minutos A seguir as hemaacutecias foram novamente lavadas 4 vezes com soluccedilatildeo fisioloacutegica

para retirada dos anticorpos que natildeo se ligaram A soluccedilatildeo da uacuteltima lavagem foi testada

como controle negativo O teste da uacuteltima lavagem eacute importante para assegurar que os

anticorpos que poderatildeo ser detectados no eluato apoacutes o tratamento com a glicina-aacutecidaEDTA

sejam aqueles que estavam ligados agraves hemaacutecias e natildeo aqueles livres no plasma O controle

negativo mostra que todo o anticorpo livre foi retirado (LEGER 2011)

Para o teste de presenccedila de anticorpo na soluccedilatildeo da uacuteltima lavagem foram incubadas

com hemaacutecias de triagem de anticorpos irregulares (ID-Diacell BIO-RAD) contendo os

antiacutegenos especiacuteficos Realizado a teacutecnica em gel LissCoombs com anti-IgG+C3d Incubado

no tempo de 15 minutos a temperatura de 37 degC e centrifugada 10 minutos em centriacutefuga

proacutepria

As 50 amostras de doadores foram sensibilizadas com os anticorpos policlonais

humanos

Apoacutes sensibilizadas rdquoin vitrordquo e lavadas as hemaacutecias foram diluiacutedas em soluccedilatildeo de

baixa forccedila iocircnica (LISS) na quantidade de 10 microL de hemaacutecia para 1000 microL de soluccedilatildeo A

suspensatildeo foi pipetada (50 microL) em coluna-gel-teste LissCoombs (BIO-RAD) que contecircm

antiglobulina poliespeciacutefico (IgG+C3d) e centrifugada em baixa rotaccedilatildeo conforme orientaccedilatildeo

do fabricante durante 10 minutos

As amostras deveriam apresentar aglutinaccedilatildeo com reatividade 3 a 4+ no TDA As

amostras que apresentaram reaccedilatildeo menor que 3+ foram novamente sensibilizadas com nova

aliacutequota do antissoro

25

413 TRATAMENTO DAS AMOSTRAS

As amostras sensibilizadas apresentando o TDA positivo 3 ou 4+ foram divididas em

duas aliacutequotas e submetidas a duas teacutecnicas diferentes com o objetivo de dissociar o anticorpo

ligado Uma aliacutequota da amostra foi tratada com soluccedilatildeo de difosfato de cloroquina enquanto

a outra aliacutequota foi tratada com glicina-aacutecidaEDTA

42 PREPARO DA GLICINA AacuteCIDA-EDTA

A teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA utiliza 3 soluccedilotildees diferentes a glicina aacutecida o

EDTA e o tampatildeo TRIS

Os reagentes foram preparados utilizando os sais para anaacutelise (PA) de EDTA

(Na2EDTA2H2O) TRIS (C4H11NO3) Glicina (H2NCH2CO2H) NaCl e a soluccedilatildeo de aacutecido

cloriacutedrico (HCl) 12 N todos reagentes da marca SYNTH (quadro 1)

Para o preparo do tampatildeo glicina-acida eacute necessaacuterio o ajuste do pH para 15 Para esse

ajuste utiliza-se aacutecido cloriacutedrico (HCl) concentrado O pH foi medido com fitas reativas de pH

com escala de 1 a 14 da marca MERCK Posteriormente a soluccedilatildeo foi enviada ao laboratoacuterio

de controle de qualidade do Hemocentro de Ribeiratildeo Preto e o pH medido no pHmetro O

tampatildeo glicina-aacutecida foi armazenado a 4 degC (grau Celsius) e o tampatildeo tris e o EDTA em

temperatura ambiente controlada (20 a 24 degC)

Apoacutes o preparo e durante a realizaccedilatildeo dos testes foram feitas inspeccedilotildees visuais para

verificaccedilatildeo de turvaccedilatildeo do meio e presenccedila de precipitados

Reagente Material Quantidade Preparo e

Conservaccedilatildeo

EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)

5 gramas Mistura ateacute

dissoluccedilatildeo do sal e

conserva em

temperatura ambiente Aacutegua Destilada 50 Ml

Tris

TRIS (C4H11NO3) 121 gramas Conservar em

temperatura ambiente NaCl 525g

Aacutegua destilada 100ml

Gliacutecina-aacutecida

Glicina

(H2NCH2CO2H) 15 gramas

Conservar a 4 oC NaCl 116gramas

Aacutegua Destilada 200ml

HCL 12N Ajutar o pH para 15

Quadro 1 - Preparo dos Reagentes da teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA

Fonte ndash Byrne 1991

26

O tampatildeo glicina-aacutecida e o tampatildeo TRIS satildeo estaacuteveis por 7 meses O reagente EDTA

precipitou alguns dias depois do preparo mesmo estando em temperatura em ambiente

controlado Houve necessidade de preparo de novo reagente

421 TEacuteCNICA DA GLICINA-AacuteCIDAEDTA

1 Em um tubo de ensaio 12x75 mm eacute adicionado 08 mL da soluccedilatildeo de glicina-aacutecida A

esta soluccedilatildeo adiciona-se 02 mL de EDTA e mistura

2 Adiciona-se 02 mL de hemaacutecias sensibilizadas (lavada 4 vezes) A mistura eacute

homogeneizada e incubada por exatamente 2 minutos

3 A seguir 01 mL de tampatildeo TRIS eacute adicionado agrave mistura que eacute novamente

homogeneizada e centrifugada por 2 minutos a 3400 rpm O pH deve estar entre 7 a 75

4 Apoacutes centrifugaccedilatildeo separa-se em outro tubo o sobrenadante (eluato) e as hemaacutecias

que permanecem satildeo lavadas 4 vezes com soluccedilatildeo fisioloacutegica para retirada de todo o

reagente e anticorpos livres

43 PREPARO DA CLOROQUINA

A cloroquina eacute diluiacuteda em tampatildeo PBS na concentraccedilatildeo de 20 (Quadro 2) e

armazenado a 4 degC sua validade apoacutes o preparo eacute de 1 mecircs

A teacutecnica da cloroquina jaacute estaacute padronizada para rotina do laboratoacuterio de imuno-

hematologia do Hemocentro de Ribeiratildeo Preto e suas unidades

Reagente Reagentes Quantidade PreparoConservaccedilatildeo

Cloroquina

Difosfato de cloroquina

(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC

Tampatildeo PBS 100ml

NaOH 01 N Acertar o pH para

51

Quadro 2 - Preparo da Cloroquina Fonte - Edwards Moulds e Judd 1982

431 TEacuteCNICA DA CLOROQUINA

1 4 partes da soluccedilatildeo pronta eacute adicionada a uma parte de hemaacutecias lavadas 4 vezes com

soluccedilatildeo fisioloacutegica

2 A mistura eacute incubada em temperatura ambiente por ateacute duas horas

3 Centrifugar a 3400 rpm por 2 minutos

27

4 Remover o sobrenadante lavar as hemaacutecias novamente com soluccedilatildeo fisioloacutegica 4

vezes

44 VERIFICACcedilAtildeO DA EFETIVIDADE DOS TESTES

Apoacutes tratamento pelas duas teacutecnicas o TDA foi repetido em todas as amostras para

verificar se os tratamentos foram efetivos e houve a dissociaccedilatildeo do anticorpo Para as

amostras tratadas pela teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA que permaneceram com TDA positivo

novo tratamento foi realizado

45 TESTE DO ELUATO

O eluato resultante das amostras tratadas com glicina-acidaEDTA foi testado com

hemaacutecias de triagem A soluccedilatildeo do eluato foi incubada com as hemaacutecias de triagem de

anticorpos (ID-Diacell BIO-RAD) pela teacutecnica em gel LissCoombs O teste foi incubado 15

minutos a 37 degC e centrifugado por 10 minutos em centrifuga proacutepria para a teacutecnica em gel

Os eluatos que apresentaram resultados positivos foram testados em painel de 11 hemaacutecias

(ID-Diapanel BIO-RAD) para a identificaccedilatildeo do anticorpo

46 AMOSTRA DE PACIENTE

Foi incluiacuteda uma amostra de paciente que apresentou TDA positivo por IgG e pesquisa

de anticorpo irregular positivo com presenccedila de autoanticorpo com reatividade panaglutinina

A amostra foi tratada em paralelo pelas duas teacutecnicas descritas e foi enviada para o

Hemocentro para genotipagem eritrocitaacuteria que foi realizado por metodologia PCR em tempo

real no equipamento Real-time system PCR 7500 ( Applied Biosystems Califoacuternia EUA)

28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES

Para aplicaccedilatildeo da teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA satildeo necessaacuterios 3 diferentes

reagentes que podem ser encontrados em forma de kit pronto para uso No entanto esses kits

natildeo estatildeo disponiacuteveis no Brasil Os reagentes satildeo tampatildeo glicina-aacutecida o EDTA e o tampatildeo

Tris

Todos os reagentes foram preparados rdquoin houserdquo a partir dos sais e soluccedilotildees PA (puro

para anaacutelise) da marca SYNTH que foram adquiridos para a pesquisa O custo estimado para

cada teste foi aproximadamente R$ 020 reais

Apoacutes o preparo os reagentes poderiam ser armazenados em condiccedilotildees adequadas pelo

periacuteodo de 1 ano (BYRNE 1991) Ao final do preparo e durante o periacuteodo de

armazenamento de fevereiro a setembro de 2016 foi realizada inspeccedilatildeo visual para verificar

a presenccedila de precipitados ou turvaccedilatildeo A soluccedilatildeo de glicina e o tampatildeo TRIS mostraram-se

estaacuteveis ateacute o final do periacuteodo Por sua vez o reagente EDTA precipitou alguns dias depois do

preparo mesmo estando armazenado em temperatura ambiente controlada e foi necessaacuterio

novo preparo


521 SENSIBILIZACcedilAtildeO DAS AMOSTRAS

Apoacutes incubaccedilatildeo das hemaacutecias com o antissoro as mesmas foram lavadas 4 vezes para

retirada dos anticorpos livres A soluccedilatildeo da uacuteltima lavagem foi testada Caso houvesse

positividade na soluccedilatildeo da uacuteltima lavagem a etapa era repetida (figura 3) Das 50 amostras

sensibilizadas a uacuteltima lavagem foi positiva somente em 3 delas Nas 3 amostras o anticorpo

utilizado para sensibilizaccedilatildeo foi o anti-K Apoacutes repetido nova etapa de lavagem os resultados

se apresentaram negativos

Em todas as amostras sensibilizadas ldquoin vitrordquo o TDA foi testado e verificado a

intensidade do teste Entre as 50 amostras 47 alcanccedilaram TDA com intensidade 3-4+ apoacutes a

primeira sensibilizaccedilatildeo enquanto 3 amostras necessitaram uma segunda incubaccedilatildeo com

anticorpo (figura 4)

A escolha dos anticorpos para sensibilizar as hemaacutecias foi feita de acordo com o

fenoacutetipo do doador e a disponibilidade das amostras dos antissoros humanos Foram

29

utilizados sete diferentes especificidades de anticorpos policlonais humanos conforme mostra

o graacutefico1

Figura 3 - Soluccedilatildeo da uacuteltima lavagem A soluccedilatildeo da uacuteltima lavagem foi testada com hemaacutecia de triagem de

anticorpos em gel LissCoombs (BIO-RAD) A finalidade eacute verificar a presenccedila de anticorpos livres na

suspensatildeo que possam interferir na pesquisa do eluato As soluccedilotildees de lavagem das amostras na figura a tiveram

resultados negativos Na figura b duas amostras a 47 e 50 apresentaram resultado positivo Nova etapa de

lavagem foi realizada e o resultado final foi negativo

522 TRATAMENTO DAS HEMAacuteCIAS

Apoacutes a sensibilizaccedilatildeo e obtenccedilatildeo de resultados de TDA com intensidade de 3 a 4+

cada uma das amostras foi dividida em duas aliacutequotas e tratada separadamente pelas teacutecnicas

de glicinaaacutecida-EDTA e cloroquina

As teacutecnicas foram consideradas efetivas quando obteve-se a completa dissociaccedilatildeo do

anticorpo verificada atraveacutes do TDA negativo na amostra poacutes tratamento conforme figuras 5

e 6 Dentre as amostras tratadas com cloroquina 2850 tiveram o TDA negativado A glicina-

aacutecidaEDTA negativou o TDA em 33 das 50 amostras tratadas Apenas 17 amostras tratadas

30

com glicina-aacutecidaEDTA permaneceram com o TDA positivo e foram submetidas a um novo

tratamento

Figura 4 - TDA das amostras apoacutes sensibilizaccedilatildeo com anticorpos policlonais humanos Amostras na

figura a com intensidades de 3-4+ Na figura b amostras 4 e 7 com intensidade menor que 3+ e portanto foram

novamente sensibilizadas com nova aliacutequota de soro Anti-D e anti-S Apoacutes a segunda sensibilizaccedilatildeo

apresentaram reatividade 4 e 3+ respectivamente Os anticorpos utilizados para sensibilizaccedilatildeo foram D S c E

C e K

523 COMPARACcedilAtildeO ENTRE AS TEacuteCNICAS

No tratamento com a glicina-aacutecidaEDTA houve dissociaccedilatildeo completa do anticorpo

em 33 amostras (66) das 50 amostras testadas enquanto que com a cloroquina foram 28

amostras (56) (tabela 1)

31

Graacutefico 1- Nuacutemero de amostras sesnsibilizadas por especificidade de anticorpo Entre as 50 amostras 12

foram sensibilizadas com anti-D 10 com anti-C 9 com anti-E 8 com anti-c 7 com anti-S 3 com anti-K e 1

com anti-Dia As especificidades dos anticorpos foram definidas de acordo com o fenoacutetipo do doador

Figura 5 ndash Resultados do TDA apoacutes o tratamento das hemaacutecias com cloroquina Nas amostras onde houve

a dissociaccedilatildeo do anticorpo (2 21 a 23 26 39 a 42 45 46 e 49) a hemaacutecia se deposita no fundo no microtubo

apoacutes a centrifugaccedilatildeo (TDA negativo) As amostras em que a dissociaccedilatildeo natildeo foi efetiva (1 3 24 25 43 44 47

48 e 50) o anticorpo ligado agraves hemaacutecias eacute alvo da AGH presente no gel (TDA positivo)

Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32

Figura 6 ndash Resultados do TDA apoacutes o tratamento das hemaacutecias com glicina-aacutecidaEDTA Nas amostras

onde houve a dissociaccedilatildeo do anticorpo (4 6 7 12 a 15 17 34 35 37 e 38) a hemaacutecia se deposita no fundo no

microtubo apoacutes a centrifugaccedilatildeo (TDA negativo) As amostras em que a dissociaccedilatildeo natildeo foi efetiva (5 16 18

19 20 33 e 36) o AGH presente no gel se liga ao anticorpo ligado agraves hemaacutecias que ficam retidas no gel (TDA

positivo)

Tabela 1-Resultado geral do tratamento das hemaacutecias com glicina e cloroquina

Teacutecnica utilizada TDA negativo TDA positivo Total

Glicina-aacutecidaEDTA 33 17 50

Cloroquina 28 22 50

A glicina-aacutecidaEDTA conseguiu negativar mais amostras sensibilizadas com Anti-D

e anti-K que a cloroquina Para as hemaacutecias sensibilizadas com anti-E Anti-S e Anti-Dia

ambas as teacutecnicas dissociaram o anticorpo em 100 das amostras Os resultados detalhados

por especificidade do anticorpo apoacutes o primeiro tratamento com glicina-aacutecidaEDTA e com

cloroquina estatildeo na tabela 2

Para as amostras que permaneceram positivas (17 amostras) apoacutes o tratamento com a

glicina-aacutecidaEDTA foi realizado um novo tratamento Houve dissociaccedilatildeo do anticorpo em 3

amostras (18) apoacutes a segunda tentativa Nas demais 14 (82) amostras tratadas pela

segunda vez 3 (18) permaneceram positivas e 11 (65) sofreram hemoacutelise

33

Tabela 2 - Resultados do TDA apoacutes tratamento das hemaacutecias sensibilizadas por anticorpo

sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS

1ordm TRATAMENTO COM

GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50

A hemoacutelise foi verificada durante o procedimento de lavagem final das hemaacutecias com

soluccedilatildeo fisioloacutegica para a retirada dos reagentes As soluccedilotildees de lavagem ficaram

avermelhadas e as hemaacutecias com coloraccedilatildeo escura As amostras foram descartadas Dentre as

6 amostras que ainda puderam ser testadas para o TDA trecircs amostras negativaram sendo 1

sensibilizada com anti-D e 2 com anti-C (tabela 3)

Tabela 3 - Resultado apoacutes o segundo tratamento das hemaacutecias com glicina-aacutecidaEDTA

Tratamento com

glicina-aacutecidaEDTA

TDA Negativo TDA Positvo Hemoacutelise Total

Segundo tratamento 3 3 11 17

524 TESTAGEM DO ELUATO

Apoacutes o tratamento com a teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA a soluccedilatildeo do eluato foi

testada para verificar a viabilidade dos anticorpos que foram dissociados ou eluiacutedos Dentre

as 50 amostras 41 (82) apresentaram eluato positivo As nove amostras cujos eluatos foram

negativos haviam sido sensibilizadas com as seguintes especificidades de anticorpos anti-E 6

amostras (67) de 9 anti-S 2 amostras (29) de 7 e anti-D 1 amostra (8) de 12 (tabela 4)

O eluato de todas as amostras sensibilizadas com os anticorpos anti-C anti-c Anti-K e Anti-

Dia foram positivos Os eluatos positivos na triagem de anticorpos foram testados com paineacuteis

de hemaacutecias de identificaccedilatildeo para confirmar a especificidade e a viabilidade dos anticorpos

(figuras 7 e 8)

34

525 EFEITO DA ELUICcedilAtildeO SOBRE OS ANTIacuteGENOS ERITROCITAacuteRIOS

Para verificar o efeito do tratamento com a glicina-aacutecidaEDTA e com a cloroquina

sobre a expressatildeo dos antiacutegenos Fya Fy

b Jk

a Jk

b S e s foi realizada a fenotipagem das

amostras que tiveram o TDA negativado apoacutes tratamento com ambas as teacutecnicas Foi avaliado

se o tratamento destruiu os antiacutegenos expressos antes do tratamento

Tabela 4- Resultado do Eluato das amostras tratadas com glicina-aacutecidaEDTA

Anticorpos Eluato positvo Eluato negativo Total

Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50

Figura 7 ndash Painel do eluato da amostra 21 A amostra foi sensibilizada com anticorpo anti-C que foi

recuperado no eluato

Figura 8 ndash Painel do eluato da amostra 47 A amostra foi sensibilizada com anticorpo anti-K que foi


35

Dentre as 50 amostras 26 eram previamente fenotipadas para os antiacutegenos Fya Fy

b

Jka Jk

b S e s Dentre elas 20 alcanccedilaram TDA negativo apoacutes tratamento com a glicina-

aacutecidaEDTA e 20 negativaram apoacutes tratamento com cloroquina (tabela 5) Apoacutes ambas as

teacutecnicas os antiacutegenos originalmente expressos permaneceram positivos comprovando que natildeo

houve destruiccedilatildeo dos mesmos

Tabela 5 - Verificaccedilatildeo da interferecircncia do tratamento da hemaacutecias com cloroquina e glicina-

aacuteicdaEDTA sobre os antiacutegenos Fya Fy

b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20

As amostras 24 47 e 50 eram positivas para o antiacutegeno K A cloroquina natildeo dissociou

o anticorpo em nenhuma das 3 amostras enquanto a glicina-aacutecidaEDTA foi efetiva nas

amostras 24 e 50 Foi testada a expressatildeo do antiacutegeno K nas amostras 24 e 50 apoacutes o

tratamento utilizando meacutetodo indireto em gel contendo AGH Apesar de natildeo ter sido avaliado

a intensidade de reaccedilatildeo de expressatildeo dos antiacutegenos podemos verificar na figura 9 que nas

duas amostras em que a teacutecnica foi efetiva e dissociou o anticorpo a expressatildeo do antiacutegeno K

continua presente mas a reatividade observada pode ser considerada 1+ sugerindo que houve

diminuiccedilatildeo da expressatildeo do antiacutegeno quando comparado com a expressatildeo observada em

hemaacutecia natildeo tratada

Os resultados individuais de cada amostra em ambas as teacutecnicas encontram-se

resumidas na tabela 6


Foi incluiacuteda uma amostra de paciente onde foi constatada a presenccedila de autoanticorpo

a quente da classe IgG pelo TDA monoespeciacutefico (figura 10) O autoanticorpo tambeacutem

interferia na pesquisa e identificaccedilatildeo de anticorpos irregulares pois apresentava caracteriacutestica

de panaglutinina As hemaacutecias da paciente sensibilizadas ldquoin vivordquo foram tratadas com

cloroquina e com glicina-aacutecidaEDTA

36

Figura 9 ndash Fenotipagem das amostras 24 e 50 para antiacutegeno K apoacutes tratamento com glicina-aacutecidaEDTA

O teste positivo indica a presenccedila do antiacutegeno poreacutem a reatividade fraca (1+) sugere que houve enfraquecimento

de sua expressatildeo A direita a expressatildeo forte (4+) do antiacutegeno Kell em hemaacutecia controle natildeo tratada utilizada

como controle positivo

A cloroquina natildeo foi efetiva na retirada do anticorpo ligado as hemaacutecias ao contraacuterio

do tratamento com a glicina-aacutecidaEDTA que dissociou o anticorpo (figura 11)

A hemaacutecia tratada com glicina foi fenotipada para os antiacutegenos Fya Fy

b Jk

a Jk

b S e s

(figura 12) A fenotipagem para o sistema Rh (C c E e e) e Kell foi realizada em gel

especiacutefico monoclonal sem interferecircncia do TDA positivo (controle da reaccedilatildeo negativo)

O eluato resultante do tratamento com glicina-aacutecidaEDTA foi testada em gel com

hemaacutecias de painel de identificaccedilatildeo de anticorpos e apresentou resultado positivo com todas

as ceacutelulas (figura 13 e 14)

A amostra foi enviada para genotipagem e o resultado da genotipagem confirmou o

resultado da fenotipagem apoacutes tratamento com glicina-aacutecidaEDTA

527 TEMPO DE EXECUCcedilAtildeO DA TEacuteCNICA DA GLICINA-AacuteCIDAEDTA

O tempo de reaccedilatildeo da glicina-aacutecidaEDTA eacute de 2 minutos Todas as amostras foram

tratadas obedecendo ao tempo descrito na literatura demonstrando que o mesmo eacute

reprodutiacutevel

37

Tabela 6- Resultados individuais por amostra

Amostra Especificidade

dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes

sensibilizaccedilatildeo

Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina

1 D 4+ Natildeo Natildeo 4+ 2 Dia 3+ Sim Sim 3+ 3 D 4+ Natildeo Natildeo 4+ 4 D 4+ Natildeo Sim 4+ 5 c 3+ Natildeo Natildeo 3+ 6 E 3+ Sim Sim Negativo 7 S 4+ Sim Sim 3+ 8 E 3+ Sim Sim 1+ 9 E 3+ Sim Sim 2+

10 c 3+ Natildeo Natildeo 3+ 11 D 4+ Natildeo Sim 4+ 12 D 4+ Natildeo Sim 4+ 13 S 3+ Sim Sim 3+ 14 S 3+ Sim Sim 3+ 15 D 3+ Natildeo Sim 3+ 16 c 3+ Natildeo Natildeo 2+ 17 E 3+ Sim Sim (+) 18 c 3+ Natildeo Natildeo 2+ 19 D 4+ Natildeo Natildeo 3+ 20 c 3+ Natildeo Natildeo 2+ 21 C 3+ Sim Sim 4+ 22 C 3+ Sim Sim 4+ 23 C 3+ Sim Sim 4+ 24 K 4+ Natildeo Sim 4+ 25 D 3+ Natildeo Natildeo Negativo 26 E 4+ Sim Sim Negativo 27 S 3+ Sim Sim 3+ 28 C 3+ Sim Natildeo 4+ 29 C 3+ Sim Sim 4+ 30 C 3+ Sim Sim 4+ 31 c 3+ Natildeo Natildeo 2+ 32 E 3+ Sim Sim Negativo 33 C 3+ Sim Natildeo 4+ 34 S 3+ Sim Sim Negativo 35 S 3+ Sim Sim Negativo 36 C 4+ Sim Natildeo 4+ 37 c 4+ Natildeo Natildeo 4+ 38 D 4+ Natildeo Sim 4+ 39 S 3+ Sim Sim 3+ 40 c 4+ Sim Natildeo 2+ 41 C 4+ Sim Natildeo 4+ 42 E 3+ Sim Sim Negativo 43 D 3+ Natildeo Sim 2+ 44 D 3+ Natildeo Sim 2+ 45 E 3+ Sim Sim Negativo 46 C 3+ Sim Sim 4+ 47 K 4+ Natildeo Natildeo 4+ 48 D 3+ Natildeo Sim 2+ 49 E 3+ Sim Sim Negativo 50 K 4+ Natildeo Sim 4+

TOTAL 50 28 33 41

38

Figura 10 ndash TDA monoespeciacutefico da amostra de paciente Hemaacutecias sensibilizadas por anticorpo da classe

IgG

oacute Figura 11 ndash TDA apoacutes o tratamento com glicina-aacutecidaEDTA (esquerda) e cloroquina (direita) A glicina

negativou completamente o TDA enquanto a hemaacutecia tratada com cloroquina persistiu positiva (1+)

39

Figura 12 ndash Fenotipagem da amostra tratada com glicina-aacutecidaEDTA Fy(a+b+) Jk(a-b+) S+s+

Figura 13 ndash Painel em gel (LissAGH) do eluato apoacutes tratamento com glicina-aacutecidaEDTA Reatividade de

intensidade 4+ em todas as ceacutelulas

Figura 14 ndash ndash Painel enzimaacutetico (hemaacutecias tratadas com bromelina) do eluato em gel neutro apoacutes

tratamento com glicina-aacutecidaEDTA Reatividade de intensidade 4+ em todas as ceacutelulas

40

528 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA

Quanto a efetividade das teacutecnicas em negativar o TDA foi verificado que a glicina-

aacutecidaEDTA foi efetiva em 66 das amostras testadas no primeiro tratamento (3350

amostras) enquanto a cloroquina conseguiu negativar 56 (2850) Esses resultados natildeo

apresentam diferenccedila significativa (pgt005) demostrando que a teacutecnica da glicina-

aacutecidaEDTA natildeo eacute superior mas eacute tatildeo efetiva quanto a da cloroquina

Quando aliamos os resultados de ambas as teacutecnicas verificamos que em 76 (3850)

das amostras o TDA foi negativado Esse dado indica que ainda que uma teacutecnica natildeo seja

eficaz na remoccedilatildeo do anticorpo eacute uma boa alternativa tentar a segunda teacutecnica jaacute que a falha

em remover o anticorpo utilizando uma delas natildeo prevecirc necessariamente a falha com a outra

Quando se utiliza o teste de correlaccedilatildeo muacuteltipla (graacutefico 2) para comparar a utilizaccedilatildeo das

duas teacutecnicas com o resultado de cada uma isolada (somente a cloroquina ou somente a

glicina) verificamos que os resultados apresentam diferenccedila significativa (plt005) (quadro 3)

TRATAMENTO EFETIVO COM TOTAL PORCENTAGEM

Glicina ou cloroquina 38 76

Glicina e cloroquina 23 46

Glicina apenas 10 20

Cloroquina apenas 5 10

Nenhuma das teacutecnicas 12 24

Quadro 3 - Resultados comparativos entre as teacutecnicas utilizadas

41

Graacutefico 2 - Teste de correlaccedilatildeo muacuteltipla entre as teacutecnicas aplicadas A- Glicina e Cloroquina B-Cloroquina C-

Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO

Os reagentes utilizados na teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA em que podem ser

utilizadas as hemaacutecias para fenotipagem e a soluccedilatildeo resultante como eluato podem ser

adquiridos em forma de kit comercial prontos para uso poreacutem natildeo estatildeo disponiacuteveis no

Brasil A preparaccedilatildeo dos reagentes ldquoin houserdquo a partir de sais comerciais adquiridos se

mostrou viaacutevel Os reagentes glicina e o tampatildeo Tris armazenados de forma correta se

mantiveram estaacuteveis por um periacuteodo de 7 meses Somente o reagente EDTA precipitou alguns

dias depois do preparo mesmo armazenado em condiccedilotildees adequadas sugerindo que o mesmo

deve ser preparado em menor quantidade e armazenado em aliacutequotas A soluccedilatildeo de

cloroquina tambeacutem pode ser preparada ldquoin houserdquo e pode ser armazenado por um mecircs A

legislaccedilatildeo brasileira autoriza a utilizaccedilatildeo de reagentes preparados a partir de sais comerciais

como a cloroquina e a glicina-aacutecidaEDTA desde que os sais tenham autorizaccedilatildeo da

vigilacircncia sanitaacuteria para a comercializaccedilatildeo (BRASIL 2001)

A comparaccedilatildeo quanto a efetividade em dissociar anticorpos em amostras com TDA

positivos entre a teacutecnica da glicina e a teacutecnica da cloroquina mostrou que natildeo haacute diferenccedila

estatiacutestica entre elas e que ambas satildeo igualmente eficientes Se utilizadas conjuntamente haacute

maior possibilidade de elucidaccedilatildeo dos casos

Uma vantagem da teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA eacute que ela permite numa mesma

amostra eluir o anticorpo ligado aacute hemaacutecia assim como fenotipar a hemaacutecia tratada Devido a

sua dupla utilidade a teacutecnica eacute vantajosa principalmente em pacientes em que pouco volume

de amostra pode ser coletado como em casos de crianccedilas e receacutem-nascidos

A fenotipagem poacutes tratamento se mostrou viaacutevel jaacute que os antiacutegenos de maior

importacircncia natildeo sofreram alteraccedilotildees Nas 20 amostras que foram fenotipadas antes e apoacutes

tratamento para verificar a influecircncia dos reagentes na expressatildeo dos antiacutegenos Fya Fy

b Jk

a

Jkb S e s natildeo houve destruiccedilatildeo dos mesmos por nenhuma das duas teacutecnicas

Para as amostras positivas para o antiacutegeno Kell (350) e sensibilizadas com o

respectivo anticorpo a teacutecnica da glicina foi efetiva em negativar o TDA em apenas duas

delas mas apoacutes o tratamento foi verificada uma fraca reatividade da reaccedilatildeo antiacutegeno-

anticorpo sugerindo que houve um enfraquecimento da expressatildeo do antiacutegeno conforme

esperado e descrito na literatura (BYRNE 1991 PALLAS WILER E MCGEE 1991

ROZIERS e SQUALI 1997 CHAMPAGNE et al 1999 KOSANKE 2012 e KATHARIA e

CHAUDHARY 2013) A accedilatildeo da glicina sobre o antigeno Kell natildeo representa impedimento

para seu uso uma vez que na impossibilidade de testar o antiacutegeno Kell o banco de sangue

43

consegue facilmente atender a solicitaccedilatildeo de transfusatildeo com unidades de hemaacutecias Kell

negativas jaacute que eacute um antiacutegeno de baixa prevalecircncia na populaccedilatildeo variando de 15 na

populaccedilatildeo africana a 9 nos europeus (DANIELS 2011)

A soluccedilatildeo resultante da dissociaccedilatildeo do anticorpo pela teacutecnica da glicina pode ainda ser

utilizada como eluato podendo substituir a teacutecnica de eluiccedilatildeo com reagentes comercias (kits

de eluiccedilatildeo aacutecida) que tem alto custo aproximadamente entre R$2000 a R$2500 por teste

Em 41 amostras (82) houve a dissociaccedilatildeo e recuperaccedilatildeo do anticorpo que estava

sensibilizando as hemaacutecias Em 9 amostras (18) os anticorpos foram eluiacutedos poreacutem

apresentaram reaccedilatildeo negativa quando testadas com hemaacutecias de triagem entre eles o anti-E

(6) anti-S (2) e Anti-D (1) Eacute possiacutevel que a correccedilatildeo pH do meio natildeo tenha sido adequada o

que pode ter desfavorecido a reatividade do anticorpo (WALKER 2011)

Para as amostras tratadas com glicina-aacutecidaEDTA nas quais natildeo houve dissociaccedilatildeo do

anticorpo pelo primeiro tratamento (1750) o segundo tratamento natildeo se mostrou eficaz jaacute

que 3 (18) permaneceram positivas e 11 (65) sofreram hemoacutelise O tempo de

armazenagem natildeo parece ter influenciado jaacute que todas as amostras foram testadas dentro de

48 horas apoacutes a coleta Outros fatores que natildeo foram verificados podem ter levado a

hemoacutelise Apesar da literatura (LOUIE JIENG e ZEROULIS 1986 e BYRNE 1991)

recomendar um segundo tratamento ele foi pouco eficaz tendo negativado apenas 3 das 17

amostras testadas

A amostra de paciente que apresentou sensibilizaccedilatildeo ldquoin vivordquo mostrou melhor

efetividade da teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA sobre a da cloroquina possibilitando

fenotipagem para os antiacutegenos Fya Fy

b Jk

a Jk

b S e s que natildeo foram destruiacutedos apoacutes o

tratamento comprovado atraveacutes da genotipagem

A presenccedila de autoanticorpo a quente com presenccedila de hemoacutelise (AHAI) ou natildeo pode

mascarar a presenccedila de aloanticorpo interferindo na rotina soroloacutegica da fenotipagem que eacute

uma importante ferramenta para auxiliar na seleccedilatildeo de hemaacutecias para transfusatildeo (SHIREY et

al 2002) Esses pacientes frequentemente possuem aloanticorpos associados ao

autoanticorpo e a prevalecircncia de aloimunizaccedilatildeo entre eles varia entre 12 a 40 (LEGER e

GARRATY 1999 BRANCH e PETZ 1999) o que dificulta ainda mais a escolha do melhor

componente a ser transfundido aleacutem de aumentar a possibilidade de reaccedilotildees hemoliacuteticas

imunes poacutes-transfusionais

Nesses casos as teacutecnicas de dissociaccedilatildeo de anticorpos satildeo importantes para tratar

amostras de pacientes e a teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA pode ser usada como uma opccedilatildeo

pois se mostrou eficaz na dissociaccedilatildeo anticorpo ligado agraves hemaacutecias deixando livre a

44

superfiacutecie das mesmas permitindo a fenotipagem por antisoros IgG Paralelamente os

anticorpos eluiacutedos tambeacutem puderam ser estudados O mesmo natildeo ocorre com a cloroquina

que permite apenas a fenotipagem e tampouco com os kits de eluiccedilatildeo aacutecida disponiacuteveis no

mercado nacional que satildeo destinados a realizaccedilatildeo do eluato mas destroem as hemaacutecias

O tempo de tratamento na teacutecnica da glicina-aacutecidaEDTA tambeacutem eacute uma vantagem

pois foi possiacutevel reproduzir no tempo determinado de 2 minutos enquanto a cloroquina

demora ateacute duas horas

Ainda que a aplicaccedilatildeo das teacutecnicas por biologia molecular estejam cada vez mais

presentes na rotina imuno-hematoloacutegica e possibilitam estabelecer o fenoacutetipo deduzido do

genoacutetipo elas natildeo estatildeo disponiacuteveis na maioria dos centros e sua realizaccedilatildeo exige algumas

horas A resoluccedilatildeo imediata do problema transfusional necessita dos resultados soroloacutegicos

pois com frequecircncia natildeo eacute possiacutevel aguardar o resultado do teste molecular Dessa forma

apesar da crescente importacircncia da genotipagem eritrocitaacuteria teacutecnicas soroloacutegicas aplicadas

corretamente e no momento propiacutecio satildeo de grande utilidade para resolver problemas imuno-

hematoloacutegicos como ocorre com a fenotipagem em pacientes com TDA positivo

45

7 CONCLUSAtildeO

A teacutecnica da glicina aacutecidaEDTA utilizando reagentes preparados ldquoin houserdquo

mostrou-se efetiva em remover os anticorpos que sensibilizavam as hemaacutecias podendo ser

utilizada com seguranccedila antes da fenotipagem eritrocitaacuteria pois natildeo destruiu os principais

antiacutegenos testados na fenotipagem estendida A teacutecnica tem vantagem pois utiliza uma mesma

amostra para testar o eluato e tambeacutem fenotipar a hemaacutecia aleacutem do tempo de execuccedilatildeo que eacute

raacutepido sendo uma alternativa aplicaacutevel principalmente em casos urgentes de pacientes que

apresentam autoanticorpos

46

8 REFEREcircNCIA BIBLIOGRAacuteFICA

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procedimentos hemoteraacutepicos Diaacuterio Oficial da Uniatildeo nordm 25 Seccedilatildeo 1 p 37 Brasiacutelia 05 de

fevereiro de 2016

BRASIL LEI nordm 102052001 (LEI ORDINAacuteRIA) 21 de mar 2001 Regulamenta o sect 4o do

art 199 da Constituiccedilatildeo Federal relativo agrave coleta processamento estocagem distribuiccedilatildeo e

aplicaccedilatildeo do sangue seus componentes e derivados estabelece o ordenamento institucional

indispensaacutevel agrave execuccedilatildeo adequada dessas atividades e daacute outras providecircncias Diaacuterio Oficial

da Uniatildeo Brasiacutelia 22 de mar 2001 Seccedilatildeo 1 p 1

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50

9 ANEXOS

51

FUNDACcedilAtildeO HEMOCENTRO DE RIBEIRAtildeO PRETO

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO (TCLE)

Tiacutetulo da pesquisa Aplicaccedilatildeo da teacutecnica da glicina aacutecidaEDTA e avaliaccedilatildeo da

eficaacutecia no tratamento de hemaacutecias com teste direto da antiglobulina positivo

Pesquisadora responsaacutevel Ceacutelia Kazue Abiko

Orientador Prof Dimas Tadeu Covas

Co-orientadora Dra Flaacutevia Leite Souza Santos

Objetivo da pesquisa Vocecirc estaacute sendo convidado a participar de uma pesquisa que tem

como objetivo padronizar uma nova teacutecnica para auxiliar na tipagem sanguiacutenea de pacientes

A tipagem sanguiacutenea pode sofrer interferecircncia da presenccedila de anticorpos ligados aos gloacutebulos

vermelhos do sangue Nessas situaccedilotildees eacute difiacutecil selecionar o melhor sangue para o paciente e

eacute preciso a utilizaccedilatildeo de teacutecnicas adicionais para remover essas interferecircncias

Esta pesquisa tem como objetivo estudar outra teacutecnica para remover esses anticorpos e

comparaacute-la com a teacutecnica atualmente utilizada Para isso precisamos de amostras de pacientes

e doadores voluntaacuterios

Se vocecirc eacute um doador eacute necessaacuterio que vocecirc autorize a coleta de 5 ml (1 tubo) a mais

de seu sangue

Se vocecirc eacute um paciente natildeo haveraacute necessidade de nova amostra pois utilizaremos as

amostras jaacute coletadas para os testes preacute-transfusionais e os resultados encontrados nesta

pesquisa natildeo iratildeo interferir na escolha da (s) bolsa (s) de sangue que vocecirc possa vir a receber

Se vocecirc concordar em participar leia com atenccedilatildeo o texto abaixo e assine as duas vias

rubricando todas as paacuteginas deste termo de consentimento Uma via original assinada e

rubricada por vocecirc e pela pesquisadora ficaraacute com vocecirc

As suas informaccedilotildees seratildeo mantidas em sigilo pela pesquisadora e natildeo haveraacute

armazenamento de material para pesquisas posteriores Os seus dados seratildeo usados apenas

neste estudo e quando o trabalho for publicado seu nome e qualquer outra informaccedilatildeo que

possam identificaacute-lo natildeo seratildeo revelados

Eacute pouco provaacutevel que o que noacutes aprendermos com este estudo tenha um benefiacutecio

direto para vocecirc assim como natildeo poderemos dar nada em troca pela sua participaccedilatildeo na

pesquisa

Nosso objetivo com esta pesquisa eacute que os resultados poderatildeo ser uacuteteis para o

tratamento de pacientes no futuro Os riscos da participaccedilatildeo satildeo miacutenimos Se vocecirc eacute um

doador de sangue a amostra seraacute coletada no momento da doaccedilatildeo natildeo exigindo punccedilatildeo

venosa adicional

52

Eacute seu direito ter acesso aos resultados dos testes da pesquisa Esses resultados natildeo

seratildeo fornecidos automaticamente a vocecirc mas caso vocecirc se interesse em saber o resultado ou

tiver alguma duacutevida sobre a sua participaccedilatildeo neste estudo deveraacute entrar em contato com Ceacutelia

Kazue Abiko pelo telefone (18) 99718-3551

Vocecirc tem total liberdade de optar por natildeo participar da pesquisa Caso aceite

participar poderaacute desistir a qualquer momento ou retirar seu consentimento mesmo apoacutes ter

coletado o sangue Para cancelar sua participaccedilatildeo basta avisar a pesquisadora e os seus dados

seratildeo retirados do projeto

Qualquer duacutevida eacutetica sobre a pesquisa poderaacute entrar em contato com o Comitecirc de

Eacutetica em Pesquisa do Hospital das Cliacutenicas e da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto

(CAMPUS UNIVERSITAacuteRIO bairro Monte Alegre CEP 14048-900 Ribeiratildeo Preto-SP

Telefone (16) 3602-2228 FAX (16) 3633-1144 e-mail cephcrpuspbr)

Consentimento de participaccedilatildeo

A Consentimento do participante

Li as informaccedilotildees acima sobre o estudo e recebi explicaccedilotildees sobre a participaccedilatildeo no estudo

Portanto dou o meu consentimento para participar do estudo

___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________

Nome completo da pesquisadora

___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data








Transfusional


ldquoVersatildeo corrigida A versatildeo original encontra-se disponiacutevel tanto na Biblioteca da Unidade

que aloja o Programa quanto na Biblioteca Digital de Teses de Dissertaccedilotildees da USP

(BDTD)rdquo

RIBEIRAtildeO PRETO

2017


A142a





2017

52f il 30cm




Transfusional



AHAI 4 Fenotipagem

CDU 61538










APROVADO ____________

BANCA EXAMINADORA

________________________________


________________________________


________________________________


DEDICATOacuteRIA







pacientes

AGRADECIMENTOS




estudos















SUMAacuteRIO



111 TIPAGEM ABORh 2

















1353 CLOROQUINA 17


2 OBJETIVOS 20



3 JUSTIFICATIVA 21

4 METODOL OGIA 22


411 FENOTIPAGEM 23










5 RESULTADOS 28

51 REAGENTES 28










6 DISCUSSAtildeO 42

7 CONCLUSAtildeO 45


9 ANEXOS 50

LISTA DE FIGURAS









paacutegina 32













LISTA DE TABELAS











b Jk

a Jk



LISTA DE GRAFICOS





LISTA DE QUADROS







ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL



Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento



Antiacutegeno D



Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e






Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros






Polietilenoglicol



Antiacutegeno D


Antiacutegeno S

Antiacutegeno s








Microlitros

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data


A142a





2017

52f il 30cm




Transfusional



AHAI 4 Fenotipagem

CDU 61538










APROVADO ____________

BANCA EXAMINADORA

________________________________


________________________________


________________________________


DEDICATOacuteRIA







pacientes

AGRADECIMENTOS




estudos















SUMAacuteRIO



111 TIPAGEM ABORh 2

















1353 CLOROQUINA 17


2 OBJETIVOS 20



3 JUSTIFICATIVA 21

4 METODOL OGIA 22


411 FENOTIPAGEM 23










5 RESULTADOS 28

51 REAGENTES 28










6 DISCUSSAtildeO 42

7 CONCLUSAtildeO 45


9 ANEXOS 50

LISTA DE FIGURAS









paacutegina 32













LISTA DE TABELAS











b Jk

a Jk



LISTA DE GRAFICOS





LISTA DE QUADROS







ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL



Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento



Antiacutegeno D



Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e






Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros






Polietilenoglicol



Antiacutegeno D


Antiacutegeno S

Antiacutegeno s








Microlitros

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data










APROVADO ____________

BANCA EXAMINADORA

________________________________


________________________________


________________________________


DEDICATOacuteRIA







pacientes

AGRADECIMENTOS




estudos















SUMAacuteRIO



111 TIPAGEM ABORh 2

















1353 CLOROQUINA 17


2 OBJETIVOS 20



3 JUSTIFICATIVA 21

4 METODOL OGIA 22


411 FENOTIPAGEM 23










5 RESULTADOS 28

51 REAGENTES 28










6 DISCUSSAtildeO 42

7 CONCLUSAtildeO 45


9 ANEXOS 50

LISTA DE FIGURAS









paacutegina 32













LISTA DE TABELAS











b Jk

a Jk



LISTA DE GRAFICOS





LISTA DE QUADROS







ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL



Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento



Antiacutegeno D



Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e






Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros






Polietilenoglicol



Antiacutegeno D


Antiacutegeno S

Antiacutegeno s








Microlitros

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

DEDICATOacuteRIA







pacientes

AGRADECIMENTOS




estudos















SUMAacuteRIO



111 TIPAGEM ABORh 2

















1353 CLOROQUINA 17


2 OBJETIVOS 20



3 JUSTIFICATIVA 21

4 METODOL OGIA 22


411 FENOTIPAGEM 23










5 RESULTADOS 28

51 REAGENTES 28










6 DISCUSSAtildeO 42

7 CONCLUSAtildeO 45


9 ANEXOS 50

LISTA DE FIGURAS









paacutegina 32













LISTA DE TABELAS











b Jk

a Jk



LISTA DE GRAFICOS





LISTA DE QUADROS







ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL



Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento



Antiacutegeno D



Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e






Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros






Polietilenoglicol



Antiacutegeno D


Antiacutegeno S

Antiacutegeno s








Microlitros

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

AGRADECIMENTOS




estudos















SUMAacuteRIO



111 TIPAGEM ABORh 2

















1353 CLOROQUINA 17


2 OBJETIVOS 20



3 JUSTIFICATIVA 21

4 METODOL OGIA 22


411 FENOTIPAGEM 23










5 RESULTADOS 28

51 REAGENTES 28










6 DISCUSSAtildeO 42

7 CONCLUSAtildeO 45


9 ANEXOS 50

LISTA DE FIGURAS









paacutegina 32













LISTA DE TABELAS











b Jk

a Jk



LISTA DE GRAFICOS





LISTA DE QUADROS







ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL



Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento



Antiacutegeno D



Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e






Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros






Polietilenoglicol



Antiacutegeno D


Antiacutegeno S

Antiacutegeno s








Microlitros

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

SUMAacuteRIO



111 TIPAGEM ABORh 2

















1353 CLOROQUINA 17


2 OBJETIVOS 20



3 JUSTIFICATIVA 21

4 METODOL OGIA 22


411 FENOTIPAGEM 23










5 RESULTADOS 28

51 REAGENTES 28










6 DISCUSSAtildeO 42

7 CONCLUSAtildeO 45


9 ANEXOS 50

LISTA DE FIGURAS









paacutegina 32













LISTA DE TABELAS











b Jk

a Jk



LISTA DE GRAFICOS





LISTA DE QUADROS







ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL



Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento



Antiacutegeno D



Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e






Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros






Polietilenoglicol



Antiacutegeno D


Antiacutegeno S

Antiacutegeno s








Microlitros

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

51 REAGENTES 28










6 DISCUSSAtildeO 42

7 CONCLUSAtildeO 45


9 ANEXOS 50

LISTA DE FIGURAS









paacutegina 32













LISTA DE TABELAS











b Jk

a Jk



LISTA DE GRAFICOS





LISTA DE QUADROS







ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL



Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento



Antiacutegeno D



Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e






Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros






Polietilenoglicol



Antiacutegeno D


Antiacutegeno S

Antiacutegeno s








Microlitros

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

LISTA DE FIGURAS









paacutegina 32













LISTA DE TABELAS











b Jk

a Jk



LISTA DE GRAFICOS





LISTA DE QUADROS







ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL



Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento



Antiacutegeno D



Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e






Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros






Polietilenoglicol



Antiacutegeno D


Antiacutegeno S

Antiacutegeno s








Microlitros

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

LISTA DE TABELAS











b Jk

a Jk



LISTA DE GRAFICOS





LISTA DE QUADROS







ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL



Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento



Antiacutegeno D



Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e






Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros






Polietilenoglicol



Antiacutegeno D


Antiacutegeno S

Antiacutegeno s








Microlitros

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

LISTA DE GRAFICOS





LISTA DE QUADROS







ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL



Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento



Antiacutegeno D



Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e






Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros






Polietilenoglicol



Antiacutegeno D


Antiacutegeno S

Antiacutegeno s








Microlitros

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

LISTA DE QUADROS







ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL



Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento



Antiacutegeno D



Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e






Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros






Polietilenoglicol



Antiacutegeno D


Antiacutegeno S

Antiacutegeno s








Microlitros

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data




ABO

AHAI

Bg

degC

c

C

C3

C3b

C3d

D

DHFRN

DNA

DTT

E

e

EDTA

Fc

Fya

Fyb

HCl

IgA

IgD

IgE

IgM

mL

NaCl

PA

PAI

PBS

PCR

PEG

pH

Rh

RhD

rpm

S

s

SIDA

SBS

TCLE

TDA

TIA

TRIS

ZZAP

microL



Antiacutegeno Bg

Grau Celsius

Antiacutegeno c

Antiacutegeno C

Complemento



Antiacutegeno D



Dithiothreitol

Antiacutegeno E

Antiacutegeno e






Imunoglobulina A

Imunoglobulina D

Imunoglobulina E

Imunoglobulina M

Mililitros






Polietilenoglicol



Antiacutegeno D


Antiacutegeno S

Antiacutegeno s








Microlitros

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

RESUMO





























b

Jka Jk













ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

ABSTRACT




2017
























b Jk

a Jk











lt005)






























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data





























2











SANTOS 2014)













SHULMAN 2011)

111 TIPAGEM ABORh









3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

3

































4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

4



























2011)






5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

5


























(BRASIL 2016)






6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

6







b

(FY2) Jka



























7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




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proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

7






clinica




(LAINE et al 2000)




(FY1) Fyb

(FY2) Jka

(JK1) Jkb




















8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

8























(ROBACK et al 2011)








9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

9

122 COLUNAS DE GEL




























2007)





10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

10
































11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


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Assinatura

_____________

Data

11














(COOMBS et al 1946)







12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


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Assinatura

_____________

Data

12


























2012)





13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

13






















14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

14































15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

15


































16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

16


































17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

17



b) Kidd (Jk

a Jk


OLIVATO 2004)




















1353 CLOROQUINA







18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

18

















SQUALI 1997)














19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

19








reagentes











20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

20

2 OBJETIVOS

21 OBJETIVO GERAL










aacutecidaEDTA





21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

21

3 JUSTIFICATIVA


















et al 2002)













22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

22

4 METODOL OGIA













23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

23

411 FENOTIPAGEM









a e Jk






b Jk

a Jk







Lorne









b Jk

a e Jk



positivas




24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

24




positivos
















proacutepria


humanos









25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

25






















EDTA

EDTA

(Na2EDTA2H2O)



conserva em


Tris





Glicina







26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

26




















Cloroquina


(C18H32ClN3O8P2)

20 gramas

Conservar a 4 degC



51







27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

27


vezes






45 TESTE DO ELUATO













28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

28

5 RESULTADOS

51 REAGENTES




Tris










novo preparo















29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

29


o graacutefico1














30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

30


tratamento





C e K





31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

31








Anti-D 12

Anti-C 10

Anti-E 9

Anti-c 8

Anti-S 7

Anti-K 3 Anti-Dia 1

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

32





positivo)




Cloroquina 28 22 50










33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

33


sensibilizado

ANTICORPOS

SENSIBILIZADOS


GLICINA

TRATAMENTO COM

CLOROQUINA

TOTAL TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

TDA

NEGATIVO

TDA

POSITIVO

Anti-D 8 4 0 12 12

Anti-C 6 4 10 0 10

Anti-E 9 0 9 0 9

Anti-c 0 8 1 7 8

Anti-S 7 0 7 0 7

Anti-K 2 1 0 3 3

Anti-Dia 1 0 1 0 1

TOTAL 33 17 28 22 50







Tratamento com













(figuras 7 e 8)

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

34




b Jk

a Jk






Anti-D 11 1 12

Anti-C 10 0 10

Anti-E 3 6 9

Anti-c 8 0 8

Anti-S 5 2 7

Anti-K 3 0 3

Anti-Dia 1 0 1

Total 41 9 50





35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

35


b

Jka Jk







b Jk

a Jk

b S e s

AMOSTRAS

COM

FENOTIPAGEM

PREacuteVIA

TRATADAS COM

CLOROQUINA

TRATADAS COM

GLICINA

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

Tratamento

efetivo

Amostras

concordantes com

a fenotipagem

preacutevia

26

20

20

20

20


















36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

36








b Jk

a Jk

b S e s











reprodutiacutevel

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

37



dos anticorpos

Intensidade do

TDA apoacutes


Tratamento

efetivo com

cloroquina

Tratamento

efetivo com

glicina

Eluato

poacutes

glicina



TOTAL 50 28 33 41

38


IgG



39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





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p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

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9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















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Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


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Assinatura

_____________

Data

38


IgG



39






40





















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Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



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26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







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p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















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Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

39






40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

40





















41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



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p 363-388



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26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



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p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















___________________________________________________________________________

Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

__________________________________________________________________________________


___________________________________________________________________________

Assinatura

_____________

Data

41


Glicina ( plt005)

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



45-76













p 363-388



47



26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












ndeg3 2012 p 95-96



48





p 497-522







e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





49



501







1441



p1086-1092





Company 2012 p 273-287





2012 p 707-709

50

9 ANEXOS

51

















de seu sangue













pesquisa




venosa adicional

52

















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Nome completo

___________________________________________________________________________

Assinatura

___________

Data

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Assinatura

_____________

Data

42

6 DISCUSSAtildeO
























b Jk

a










43



















amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















45

7 CONCLUSAtildeO








46








161-167 aug 1982





fevereiro de 2016







ndeg 2 1991 p 46-47



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26(4) 1945 p 255-266




















Company 2012 p 101-118












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e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















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Company 2012 p 101-118





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de seu sangue













pesquisa




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Nome completo

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Assinatura

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Data

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Assinatura

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amostras testadas




b Jk

a Jk














44
















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7 CONCLUSAtildeO








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de seu sangue













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Nome completo

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Company 2012 p 273-287





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e Hemoterapia 2008 30(4)272-276

















57(6) p 668-673



Company 2012 p 101-118





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Company 2012 p 273-287





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aplicação da técnica da glicina-ácida/edta e avaliação da ... · dra fabíola traina _____...

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