análise de dna por eletroforese em gel de

Análise de DNA por eletroforese em gel de agarose

Danielson Ramos

Introdução

Antes, os estudos da engenharia de DNA eram monitorados pela velocidade de sedimentação em gradiente de sacarose;

Hoje, se utiliza a técnica de eletroforese em géis de agarose e poliacrilamida, pois são mais simples, rápidas e poder de resolução superior.

Princípio da eletroforese: Consiste na migração e separação de partículas em uma matriz, submetidas a uma diferença de potencial elétrico.

• A migração das partículas depende do tamanho e carga, além da DDP a que foram submetidas.

• Esquema 1: Eletroforese Sistema Horizotal

• Esquema 2: Eletroforese Sistema vertical

Parâmetros que afetam a migração do DNA de fita dupla em gel de agarose

• Tamanho da molécula de DNA, concentração de agarose e marcadores moleculares;

• Conformação do DNA e agentes intercalantes;

• Voltagem aplicada;

• Tampão de corrida

Protocolo Experimental

• Preparo do gel

• Eletroforese

• Anomalias de migração mais frequentes

- Efeito de extremidades;

- Efeito de sobrecarga da amostra;

- Contaminação do DNA por sais e proteínas.

Cuidados Importantes

• Brometo de etídeo: Usar luvas na manipulação e antes de serem descartados, devem ser descontaminados;

• Luz UV: Usar óculos e outros Eps;

• Agarose: Não agitar o erlenmeyer logo após a fusão (preparo);

• Reciclagem do Gel: Descontaminar, estocar em H2O destilada com trocas(15 dias), fundir em microondas, medir o volume e acrescentar o tampão decorrida, estocar a temperatura ambiente;

• Diferentes concentrações de géis na reciclagem, considerar 1%.

Finish