Análise Molecular de OGMsAnálise Molecular de OGMs

Identificação Molecular

Análise de DNA- PCR- Southern Blot - Real Time PCR- Arranjos

Análise de ProteínaBaseadas em imunologia

- ELISA- Western blot- Proteoma

Reação em Cadeia da Polimerase

Polymerase chain reaction - PCR

  Técnica usada para amplificar uma região específica de DNA em visando produzir quantidade de DNA

suficiente para ser testado adequadamente

Reação de PCR

Como funciona??

Vantagens:- Rapidez- Sensibilidade- Custo

Desvantagens:- Falsos resultados

EXTRAÇÃO DE DNA

Qualidade do DNA

PCR

Termociclador

Eletroforese

Cubas horizontais

Visualização em UV

 

 

Positivo/Negativo

Presença ou ausência de banda em gel de agarose

Amplificação de genes via PCR

4. Hibridização da membrana com a sonda específica

Retirada da membrana com o DNA

Hibridização da membrana com sonda radioativa

Solução de transferência

Esponja

Gel

Membrana de Nylon Papel para Absorção

3. Transferência do DNA para a membrana de nylon (Blotting)

2. Eletroforese DNA em Gelde Agarose

5. Revelação do autoradiograma

Retirada das hibridizações

não específicas

1. Digestão do DNA com enzimas de restrição

Southern Blot

Cr-

cont

23,130 bp9,416 bp

6,557 bp

4,361 bp

2,322 bp2,027 bp

Cr-

P5-0

1

Cr-

P5-0

2

Cr-

P5-0

3

Cr-

P5-1

4

Ct-P

5-20

Plas

m.1

C

Plas

m. 3

C

Ct-P

5-07

Ct-P

5-08

Ct-P

5-16

Ct-c

ont

Análise da integração do DNA ao genoma por Southern Blot

Análise Molecular

Digestão com EcoRI e hibridação com sonda específica para

sarcotoxin IA

PCR

Southern blot

Análise do fenótipoSintoma aos 25 dias após inoculação (104 CFU/ml)

stx-5Controle

Western blot

Real Time PCR

Resultados após amplificação

Análise da Expressão de Genes

Arranjos de DNA

Aumento do número de genes

chips de DNAdiferentes seqüências para

detectar genes expressos ou introduzidos em plantas

Tecnologia de ArranjosTecnologia de Arranjos

ProteomaProteoma

Levantamento quantitativo de proteínas/peptídeos em uma amostra para identificar mudanças de interesse

Proteoma GenomaProteínas e peptídeos

Dinâmico

Células e tecido específicos

DNA

Estático

Orgão específico

Separação e preparo de amostraSeparação e preparo de amostra

Digestão - tripsina

Peptídeo

Separação