Microbiologia Bsica

Aula prtica

Dr. Deivid Batisto

2015

Objetivos:

Observao de bactrias

Preparao de esfregao

Tcnicas de colorao:

Coloraes simples (azul de metileno)

Coloraes diferenciais (Colorao de Gram)

Tcnicas de colorao

o Permitem revelar a forma, a dimenso e os componentes das clulas bacterianas, bem como, os aspetos bioqumicos da

sua estrutura.

o Permitem observar clulas bacterianas em microscopia de campo claro.

o Como o ndice de refrao do protoplasma bacteriano difere muito pouco do meio circundante, difcil o exame

direto de preparaes no coradas, a no ser que se utilizem

tcnicas especiais de iluminao.

Tcnicas de colorao

Preparao do esfregao

Fixao do esfregao

Colorao

Observao ao microscpio

Preparao e fixao do esfregao

o Preparado sobre uma gota de gua

abrangendo uma superfcie de 1 cm2

o As lminas usadas podem ser lavadas com uma

mistura de lcool-ter (1:1)

o Fixao pelo calor em movimentos circulares.

o Evitar aquecer demasiado a preparao para

no destruir as clulas

Em caso de incndio.

Cobertor

Extintor

NO APAGAR O FOGO

COM GUA

Manter a calma!! os movimentos rpidos alimentam a combusto

Tapar o frasco

e a lamparina

Azul de metileno

Mtodo de colorao simples utilizao de um nico

corante.

Corante bsico ou catinico - fixado pelas estruturas

mais negativas da clula como os cidos nucleicos e

a parede celular das bactrias

Colorao com azul de metileno

1. Corar com azul de metileno durante 1 minuto

2. Lavar com gua

3. Secar com cuidado e observar ao microscpio

http://www.bigroom.org/wordpress/?m=200704

http://www.apsnet.org/education/IntroPlantPath/PathogenGroups/bacteria/text/fig12.htm

Colorao de Gram

Gram + Gram -

Colorao diferencial

Distingue bactrias Gram + de bactrias Gram-

Indispensvel na identificao bacteriana

Bactrias Gram+ e Gram- Composio diferente da parede celular

Gram+: Parede homognea e espessa, formada

essencialmente por peptidoglicano, baixa quantidade de

lipoprotenas.

Gram-: Parede fina, camada de peptidoglicano fina,

camada externa complexa, formada por lipoprotenas e

polissacardeos

Colorao de Gram

Violeta de

cristal

1 minuto

Lugol

(iodo)

1 minuto

lcool

Acetona

30-60 segundos

Safranina

ou Fucsina

30-60 segundos

dH2O dH2O

Trabalho a realizar:

oIsolamento de colnias:

Repicagem (riscado em placa)

oPreparao de esfregao a partir de meio lquido e

slido

oTcnicas de colorao:

Colorao de Gram