enterobactérias e outras bactérias gram gram negativas

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Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas • Laboratório Clínico • 4o ano Biomedicina

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Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas. Laboratório Clínico 4o ano Biomedicina. Enterobacteriaceae. maior e mais heterogênea família de bactérias Gram negativas de importância clínica - representam 80% ou mais de todos os Gram negativos isolados na rotina microbiológica - PowerPoint PPT Presentation

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Page 1: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

• Laboratório Clínico• 4o ano Biomedicina

Page 2: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Enterobacteriaceaemaior e mais heterogênea família de bactérias Gram negativas de importância clínica

- representam 80% ou mais de todos os Gram negativos isolados na rotina microbiológica- são responsáveis por cerca de 70% das infecções urináias e 50% das septicemias

Constituída por 27 gêneros / 102 espécies / 08 grupos indefinidos.

Independente da complexidade, mais de 95% das amostras implicadas em caso clínicos são colocadas em 25 espécies

E. coliKlebsiella sp

Page 3: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Definição

• Bacilos Gram negativos • Fermentadores da glicose• Oxidase negativa e catalase +• Ausência da atividade da citocromo-oxidasediferencia de outros gram-

negativos • Móveis / imóveis • Crescem em meios comuns - meios básicos (caldo peptona) - meios ricos

(ágar sangue, ágar chocolate e CLED) – meios seletivos (Mac Conkey)• Reduzem os nitratos a nitritos

Habitat Plantas, solo, água, intestino do homem e animais

Enterobacteriaceae

Page 4: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Enterobacteriaceae

Nomenclatura e Classificação

• Métodos Fenotípicos• Moleculares novas espécies reclassificação

Classificação• Gêneros ( dezenas) • Espécies ( centenas )• biotipos e sorotipos Complexos

Page 5: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

• Escherichia coli•Klebsiella pneumoniae•Proteus mirabilis e P. vulgaris•Enterobacter spp•Salmonella typhi e S. paratyphi A e B•Salmonella enteritidis e S. cholerae suis•Shigella spp•Yersinia pestis e Y. enterocolitica•Citrobacter spp•Serratia

Enterobacteriaceas com importância médica

Enterobacteriaceae

Grupos1- Escherichia2- Klebsiella-Enterobacter-Serratia3- Proteus-Morganell-Providencia4- Citrobacter5-Shigelas6 – Salmonelas7- Outras enterobacteriaceae

Page 6: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Identificação de Enterobactérias

Classificação - patogenia

- Enteropatógenos

- Infecções nosocomiais - espécies importantes

- Outras espécies - raras em material clínico

isoladas em : meio ambiente

plantas

animais

Page 7: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Enterobactérias - principal componente da flora intestinal normaldo homem.

• Infecções -intestinal, feridas e trato urinário

• Abcessos, pneumonia, meningites

• Infecções nosocomiais

Família EnterobacteriaceaePatogenia

Page 8: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Infecções intestinais

Características• normalmente na comunidade• DTA – doença transmitida por alimento • surtos / casos isolados• hospitalar

Patógenos entéricos clássicos

Salmonella sppShigella sppE.coli - categorias diarreiogênicasYersinia enterocolitica

Família EnterobacteriaceaePatogenia

Page 9: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Infecções extra-intestinais Comunidade Hospitalar

• Qualquer espécie• Fatores de risco:

PacienteVeículos de transmissãoAlimentos contaminados

Espécies mais comuns

Escherichia coliKlebsiella pneumoniaeKlebsiella oxytocaProteus mirabilisEnterobacter sppSalmonella ( sorotipos)Serratia marcescensCitrobacter sppProvidencia spp

Família EnterobacteriaceaePatogenia

Page 10: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS

Família Enterobacteriaceae

Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN( 18 a 24h 1 mm de diâmetro).

A enterobactéria sempre cresce nos meios ricos (ágar sangue, chocolate), bem como nos meios seletivos: ágar Mac Conkey e Salmonella-ShigellaOs Gram positivos como regra não crescem em ágar Mac Conkey e Salmonella-Shigella, exceto os enterococos que podem crescer No ágar Mac Conkey e Salmonella-Shigella, além das enterobactérias e dos enterococos, podemcrescer bactérias não fermentadoras e Candida

Secreções: ágar sangue e Mac Conkey

Líquidos nobres e biópsias: Ágar Chocolate e Mac Conkey

Fezes: Mac Conkey e Salmonella-Shigella

Urina: CLED ou ágar sangue e Mac Conkey, etc.

Page 11: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

1- Exame macroscópico da cultura:• Aspecto morfológico das colônias• Tempo de crescimento e tamanho da colônia• Observar pureza da cultura

2-Exame microscópico da cultura:• Gram: tamanho, morfologia, reação tintorial, etc

ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS

Família Enterobacteriaceae

Page 12: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Aspecto das colônias

Agar MacConkey

Page 13: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Aspecto das colônias

Salmonella. E.cloacaeE.coli

Page 14: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

1. Fermentação da glicose2. Fermentação da lactose3. Motilidade4. Utilização de citrato5. Descarboxilação da lisina6. Produção de sulfeto de hidrogênio (H2S)7. Produção de gás (CO2)8. Oxidase9. Produção de indol10. Produção de urease11. Produção de fenilalanina desaminase ou opção triptofanase12. Produção de gelatinase ou opção DNAse

Família Enterobacteriaceae

Identificação Bioquímica ( cultura pura)

Principais provas para a identificação das enterobactérias de importância clínica

Page 15: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Provas complementares de Identificação

•Fermentação de outros carboidratos: sacarose, maltose, arabinose, salicina, dulcitol, manitol, etc.•Utilização de aminoácidos: arginina e ornitina•Hidrólise da esculina, etc.•Utilização de acetato•Provas úteis, mas pouco utilizadas: vermelho de metila (VM), voges-proskauer (VP), crescimento em KCN, tartarato de jordan e lipase.

Família Enterobacteriaceae

Identificação Bioquímica ( cultura pura)

Esquemas de identificação - determinação dos gêneros e espécies mais isolados na clínica, utilizando provas características de cada gênero e espécie.Critérios para identificação - facilidade de execução, facilidade de interpretação, custo, rapidez para leitura

Page 16: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Família Enterobacteriaceae

Identificação Bioquímica ( cultura pura)

Meios presuntivos• IAL (Pessoa e Silva) • EPM-MILI• TSI

Page 17: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Família Enterobacteriaceae

Identificação Bioquímica ( cultura pura)

Meios presuntivosIAL (Pessoa e Silva) - “Instituto Adolfo Lutz” – triagem de enterobactérias – 9 provas

em apenas um tubo de ensaio: indol (tampa), fermentação da sacarose e glicose e produção de gás, fenilalanina, uréia, H2S, Lisina, Motilidade

- E. coli- Shigella (indol positiva)- Shigella (indol negativa)- Enterobacter aerogenes- Klebsiella pneumoniae- Klebsiella spp. (sacarose negativa)

Baseado nestas provas é possível identificar as seguintes bactérias:

- Enterobacter cloacae- Providencia spp. (uréia positiva) ou Morganella morganii- Providencia spp. (uréia negativa)- Proteus mirabilis- Proteus vulgaris- Salmonella spp.

- Salmonella typhi- Citrobacter freundii- Serratia marcescens (provascomplementares)- Vibrio cholerae- Vibrio spp.- bactérias não fermentadoras

Meio IAL - vantagem = prático para inoculação e de baixo custo - desvantagem = dificuldade de interpretação de tantas provas (experiência)

Page 18: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Família Enterobacteriaceae Identificação Bioquímica ( cultura pura)

Meios presuntivosEPM-MILI-Citrato - mesma combinação de reações do meio IAL ou Rugai (fenilalanina,

fermentação da glicose, gás, H2S, uréia), separados em 2 tubos, passando a verificação do indol da tampa do IAL, para o meio MILi após adição do reativo de Kovacs

Page 19: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Família Enterobacteriaceae

Identificação Bioquímica ( cultura pura)

Page 20: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Família Enterobacteriaceae

Identificação Bioquímica ( cultura pura)

Meios presuntivosTSI – Tríplice Açucar Ferro - O meio de TSI é inclinado em bico de flauta, de cor

vermelho-cereja e deve ser inoculado por picada central até o fundo, seguido de espalhamento na superfície e incubação durante 18-24h a 35oC

a) Púrpura/amarelo (ápice púrpuro e base amarela) = fermentação apenas da glicose (lactose e sacarose negativas)b) Amarelo/amarelo (ápice e base amarelos) = fermentação da glicose + lactose e/ou sacarose (2 ou 3 açúcares)c) Presença de gás (CO2) = bolhas ou meio fragmentadod) H2S positivo = presença de precipitado negro

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Família Enterobacteriaceae

Identificação Bioquímica ( cultura pura)

Page 22: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Família Enterobacteriaceae Identificação Bioquímica ( cultura pura)

Page 23: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Provas complementares:

Fermentação de açúcares

Pesquisa de enzimasDNasegelatinase,lipase

Identificação Bioquímica

Gram Oxidase VM e VP

Família Enterobacteriaceae

Série completa - 47 testes

vermelho de metila (VM)produção de acetilmetilcarbinol a partir dextrose - voges-proskauer (VP)

Page 24: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Reação de VM e VP

Família Enterobacteriaceae

• Enterobacter• Klebsiella• Serratia

Maioria das espécies dos outros Gêneros• Salmonella• Shigella• E.coli• Proteus• Morganella• Providencia• Citrobacter• Kluyvera

Enterobactérias VP+ Enterobactérias VP -

vermelho de metila (VM), voges-proskauer (VP),

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Page 26: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Família Enterobacteriaceae

Identificação

A fonte de informação mais utilizada baseia-se na tabela organizada por Farmer (1991) contando com 47 provas, e os respectivos percentuais de positividade para 28 diferentes gêneros e 121 espécies de enterobactérias. Os principais gêneros e espécies de importância clínica podem ser caracterizados com >95% de acerto com poucas provasValores positivos ou negativos referem-se a 80% ou mais de definiçãoPB (padrão bioquímico) = probabilidade teórica da bactéria em questão; apresentar o padrãobioquímico analisado (Exemplo: PB para Proteus vulgaris em relação às provas, H2S +(98%) FA +(95%) Indol + (98%) (multiplicar os percentuais de ocorrência)= 92% PB baixo significa ter outro padrão mais frequente

Gram da colônia isolada – sempre fazer o Gram para evitar enganos de interpretação (diferenciar cocos de bacilos, Gram positivos de Gram negativoe e leveduras).Prova da oxidase – indicada para detectar e/ou diferenciar o grupo Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio que também são fermentadores.Prova do metabolismo fermentador – triagem utilizando os meios de OF glicose (quando suspeitar de não fermentador), TSI (Tríplice Açucar Ferro) ou EPM (Rugai sem sacarose), para enterobactérias.Série bioquímica complementar – sempre necessária para caracterizar gênero e espécie. O número de provas vai permitir maior ou menor discriminação

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Page 28: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas
Page 29: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas
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Page 31: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

BGN BGN OxidaseOxidase

Lac + Lac -

E.coliEnterobacterKlebsiellaKluyveraCitrobacter

ShigellaSalmonellaSerratiaProteusProvidenciaMorganella

Ágar Mac ConkeyÁgar Mac Conkey

IALIALIALIAL

Cit. SimmonsCit. SimmonsCit. SimmonsCit. Simmons

+

EnterobacterKlebsiellaKluyveraCitrobacter

EnterobacterKlebsiellaKluyveraCitrobacter

-E.coliE.coli

VP +VP +

+

SalmonellaSerratiaProteus/Prov.(V)

SalmonellaSerratiaProteus/Prov.(V)

-ShigellaMorganellaShigellaMorganella

Fluxograma identificação bacilos gram negativos

Page 32: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

• LPS Antígeno somático O polissacarídico Polissacárido do core (comum a todas)Lipidio A

•Antígeno K (Kapsel) = cápsula, proteico ou polissacarídico•Antígeno H = proteínas flagelares (flagelina). Enterobactérias móveis

Importância dos Ag da parede celular

Enterobacteriaceae

A classificação antigênica das Enterobacteriáceas baseia-se na presença dos Ags O, K, e H e detecta-se por aglutinação com soros específcos

Enterobactérias Antígeno completo denominadas lisas

Que não contem rugosas

Identificação Sorológica

Page 33: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Identificação SorológicaFamília Enterobacteriaceae

Sorotipos são divisões baseadas no relacionamento antigênicoBiotipos são amostras do mesmo sorotipo que diferem em características bioquímicas

Em atividades de rotina de Bacteriologia Clínica, a identificação ou confirmação sorológica é feita apenas com germes comprovadamente patogênicos e de importância epidemiológica como Salmonella spp., Shigella spp., Escherichia coli Yersina enterocolitica

•Gota do anti-soro (coelhos: polivalente – Ac contra várias enterobactérias monovalente – Ac individuais contra antígenos O, K e H

Suspensão densa (leitosa) bactéria salina 0,85%

Aglutinação Teste positivo

Page 34: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Gênero:Escherichia

Compreende as espécies E. coli, E. hermanii, E. fergusonii, E.vulneris e E. blattae. Seis são as categorias de E. coli enteropatogênicas: E. coli enteropatogênica clássica (EPEC), E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enteroinvasiva (EIEC), E. coli enterohemorrágica (EHEC) E. coli enteroaderente (EAEC) e E. coli enteroagregativa (EAggEC).

Trato unrinário , doenças diarréicas , sepse , meningite

Page 35: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Identificação Sorológica

E. coli

Page 36: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Gênero: Salmonella

Bactéria do gênero Salmonella vista por microscopia eletrônica. Bactéria do gênero Salmonella vista por microscopia eletrônica.

Febre entérica (febre tifóide), bacteremia com lesões focais , enterocolite

Page 37: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

a) Anti-Salmonella polivalente somático (Grupos A,B,C,D,E)b) Anti-Salmonella somático, Grupo D (S. typhi)c) Anti-Salmonella, anti Vi

Identificação Sorológica

Salmonella

Page 38: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Gênero: Klebsiella

Trato respiratório – pneumonias (3%)

Page 39: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Gênero:Enterobacter,Citrobacter Serratia,Providencia

•Estão associadas a infecções hospitalares

•Observa-se resistência a múltiplos antibióticos

Enterobacter – capsulas pequenas – trato intestinal, urinaria e sepse

Serratia – pneumonia, bacteremia e endocardite (pacientes viviados em narcotios)

Page 40: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Gênero: YersiniaComposto de no mínimo sete espécie

Yersinia Pestis

•Agente causador de uma das doenças mais devastadora na história•Peste urbana e peste silvestre•Peste bubônica e peste pneumônica

Yersinia enterocolítica

•Causam enterocolite• gastroenterite diarréia, febre e dor abdominal

Page 41: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Yersinia PestisYersinia enterocolítica

Image Courtesy: Wyoming Animal Health and Disease Information Network

Ágar MacConkey

Page 42: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Gênero: Proteus

Associadas a infecção urinárias

As cepas produz grandes quantidades de urease que degrada a uréiacom Co2 e NH3 eleva o Ph da urina facilitando a formação de cálculos renais

Proteus mirabilis

Page 43: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Escherichia coli e Proteus mirabilis: são suscetíveis a vários antibióticos

A maioria das enterobactérias são sensíveis a cefalosporina, aminoglicosídeos, tetraciclinas, cloranfenicol, cotrimoxazol e aos derivados de quilônicos Proteus,Providencia e Serratia resistentes a polimixinas

Klebsiella,Enterobacter e Serratia resistencia a ampicilina

Tratamento

Page 44: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Infecção endógena difícil de ser controlada Evitar o uso irrestrito de antibióticos-> resistência bacteriana

Infecção exógenamais fácil controle

Eficaz com educação e introdução de procedimentos adequados de controle de infecçaop.ex.: lavar bem as mãos E eliminação de roupas sujas em meio com surto identificado

Prevenção e Controle

Page 45: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Bastonetes Gram negativos não fermentadores

bacilos Gram negativos classificados como não fermentadores (BNFs) são microrganismos aeróbios, não esporulados, que se caracterizam pelo fato de serem incapazes de utilizar carboidratos como fonte de energia através de fermentação, degradando-os pela via oxidativa

A maioria dos laboratórios de microbiologia clínica não realiza provas de identificação desses microrganismos visto a pouca incidência em amostras ambulatoriais

A caracterização é importante nos casos de infecção hospitalar , embora a incidencia seja pequena, mas esses microrganismos apresentam resistência elevada a vários antibióticos e são capazes de causar infecções graves

Page 46: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

BNFs de importância clínica

Bastonetes Gram negativos não fermentadores

Page 47: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Testes para identificação de BNFs

Bastonetes Gram negativos não fermentadores

Page 48: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Testes para identificação de BNFs

Bastonetes Gram negativos não fermentadores

Page 49: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Testes para identificação de BNFs

Bastonetes Gram negativos não fermentadores

Page 50: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas

Testes para identificação de BNFs

Bastonetes Gram negativos não fermentadores

Page 51: Enterobactérias e outras bactérias Gram gram negativas