Métodos de detecção dos protozoários Giardia

spp. e Cryptosporidium spp. em águas

Romeu Cantusio Neto

V Fórum de Discussão da Sociedade Paulista de

Parasitologia:

Protozoários Patogênicos em Amostras Ambientais:

Ocorrência e Métodos de Detecção .

www.sanasa.com.br

Pedreira

Campinas

Dados Gerais

Campinas

Paulínia

Jaguariúna

Morungaba

Valinhos

Sumaré

Hortolândia

Monte Mor

Indaiatuba

• 1,04 milhões de habitantes

• 796 km2

• 568 industrias

• 25.833 estabelecimentos comerciais

• Universidades

Captação do rio Atibaia

Captação do rio Capivari

Sociedade de Abastecimento de Água e

Saneamento S/A – Campinas – São Paulo

• Captação, adução, tratamento, reservação e distribuição de

água potável;

• Coleta, afastamento e tratamento dos esgotos domésticos;

• Volume médio mensal água potável produzido: 10 milhões m3;

• Adutoras e redes de distribuição: 3200 Km;

• Volume reservado: 60 reservatórios dispersos pela cidade (28

elevados e 32 semi-enterrados) com capacidade total de 120

milhões de litros.

•Estações de tratamento de água da Sanasa (tipo convencional):

=>Clarificação (floculadores, decantadores e filtros);

=>Desinfecção (cloradores e amoniadores);

=>Polimento (caiação e fluoretação)

Estações de Tratamento de

Água

Capacidade Início de Operação

ETA 1 500 L/s 1936

ETA 2 700 L/s 1961

ETA 3 e 4 2900 L/s 1972 (ETA 3) 1991 (ETA

4)

ETA Capivarí 360 L/s 1988

Portaria 51825 de Março de 2004

Norma de Qualidade de Água para

Consumo Humano no Brasil

No Brasil, a Portaria nº 518/MS

Recomenda a investigação dos protozoários em amostras de

água de abastecimento.

Problemas para a implantação:

-disparidade econômica em todo território nacional

-dificuldade de aquisição dos equipamentos necessários

-falta de recursos humanos

Brasil

Metodologias de detecção de

protozoários em amostras

hídricas- Método de Filtração em Cartuchos

- Filtração em Membranas

- Floculação em Carbonato de Cálcio

- Método 1623

Considerações:

- Grande variabilidade

Baixa eficiência de recuperação frente a fatores interferentes

- Altos custosUSEPA; Connel et al., 2001

Captação

Purificação

Detecção

Volumes

variados

• baixo custo

• Captura eficiente

• baixo volumes filtrados

• efeito da turbidez

Vantagens

Desvantagens

Membranas

• Captura eficiente

• Eluição simples

• alto custo

• disponibilidade

Vantagens

Desvantagens

Gelman Envirochek and

Envirochek HV

• IDEXX Filta-Max System

Espumas

Filtração

da

amostra

tubo de eluição

Liberação das espumas

e ciclos sucessivos de

lavagem

MÉTODO DE FILTRAÇÃO EM MEMBRANAS

I – COLETA E FILTRAÇÃO (4L/min)

II – ELUIÇÃO

III – IMUNOFLUORESCÊNCIA

1 L

ÁGUA

RASPAGEM DA

SUPERFÍCIE LAVAGEM DA

SUPERFÍCIE650 x g

(15 min.)

2 x

SOBRENADANTE

SEDIMENTO

SEDIMENTO1,0 mL

Controles

+ - Am.

Giardia

Cryptosporidium

Membrana de ésteres mistos de celulose

antes da filtração

Membrana

pós filtração por água bruta

Equipamento utilizado na metodologia de Filtração

em Membrana

Método de Filtração

10 L

ÁGUA

CaCl2 NaHCO3

Cryptosporidium

Giardia

pH 10Ác. Sulfâmico

MÉTODO DE FLOCULAÇÃO EM

CARBONATO DE CÁLCIO

3.000 RPM

(10 min.)

Material floculado

Sedimento em tubo cônico Sedimento final

Floculação em Carbonato

de Cálcio

AMOSTRAANTICORPO

MAGNÉTICO

SEPARAÇÃO IMUNOMAGNÉTICA

Princípio da Separação Imunomagnética

Debris + organismos

Debris

Principais etapas da IMS –Separação Imunomagnética

Mixer Dynal MX-1 Concentrador Magnético MPC1

Tubo Dynal L10 Concentrador Magnético MPC-S

• Reação de Imunoflorescência Direta:

• grau de fluorescência

• formato e tamanho

• caracteres morfológicos

EnumeraçãoCryptosporidium spp. e Giardia spp.

Cisto 400x e Oocisto 600x (Color Seed®) Cisto e Oocisto 600x (RID)

Cistos 400x e 200x (RID) Cisto e Oocisto 600x (Contraste de Fase)

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

1800

Meses/Anos

CAPTAÇÃO DO RIO ATIBAIA

* Captação do Rio Capivari

Médias - Eficiência de Recuperação em amostras de

água bruta (rio Atibaia)

• Filtração em Membranas:

- Sem IMS:

- Giardia spp. 15,6 – 52,5

- Cryptosporidium spp. 25,5 – 35,0

- Com IMS:

- Giardia spp. 19,3 – 57,0

- Cryptosporidium spp. 10,0 – 52,0

• Floculação em Carbonato de Cálcio:

- Sem IMS:

- Giardia spp. 14,3 – 60,5

- Cryptosporidium spp. 26,8 – 39,5

- Com IMS:

- Giardia spp. 40,5 – 58,0

- Cryptosporidium spp. 12,5 – 33,0

Publicações

• CANTUSIO NETO, R. ; LUCIANA URBANO SANTOS; MARIA INÊS ZANOLI SATO;

FRANCO, RMB. Detection of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in samples of

natural water from the Atibaia River, city of Campinas, São Paulo, Brazil,

concentrated using Membrane Filtration and Calcium Carbonate Flocculation

Methods, followed or not by Immunomagnetic Separation. In: 15th Health Related

Water Microbiology Symposium, 2009, Naxos. 15th Health Related Water

Microbiology Symposium, 2009. v. 1. p. 330-B21.

• Luciana Urbano Santos; Franco, Rmb; A. Guaraldo; CANTUSIO NETO, R.; D. Alves.

Infectivity of Giardia spp. in BALB/c Nude Mice Inoculated with Cysts of Effluent

Watewater after UV Light Disinfection. In: 59 AALAS National Meeting, 2008,

Indianapolis. Abstracts of scientific papers 2008 AALAS National Meeting, 2008. v. 1.

p. 12-12.

• Leal, D. A. G.; Pereira, M. A.; Franco, R. M. B ; Branco, N.; CANTUSIO NETO, R. .

First report of Cryptosporidium spp. oocysts in oysters (Crassostrea rhizophorae)

and cockles (Tivela mactroides) in Brazil. Journal of Water and Health, v. 130208, p. 1-

7, 2008.

Publicações

• Luciana Urbano Santos ; CANTUSIO NETO, R. ; Franco, Rmb . Protozoários

patogênicos de veiculação hídrica: as metodologias de detecção em amostras de

esgoto e a eficiência dos tratamentos de remoção e desinfecção. Higiene Alimentar, v.

22, p. 22-28, 2008.

• Tais Rondelo Bonnatti ; Franco, Rmb ; CANTUSIO NETO, R. . Comparison of two

methodologies for detection of Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocysts

in activated sludge from a sewage treatment plant in the city of Campinas, São Paulo,

Brazil.. Journal of Water and Health, v. 05, p. 1-7, 2007.

• CANTUSIO NETO, R. ; Luciana Urbano Santos ; Franco, Rmb . Evaluation of

activated sludge treatment and the efficiency of the disinfection of Giardia species

cysts and Cryptosporidium oocysts by UV at a sludge treatment plant in Campinas,

south-east Brazil. Water Science and Technology, v. 54, p. 89-94, 2006.

• CANTUSIO NETO, R.; Luciana Urbano Santos; Franco, RMB . Evaluation of

activated sludge treatment and the efficiency of the disinfection of Giardia species

cysts and Cryptosporidium oocysts by UV at a sludge treatment plant in Campinas,

south-east Brazil. In: WATER MICRO 05, 2005, SWANSEA. 13 INTERNATIONAL

SYMPOSIUM ON HEALTH-RELATED WATER MICROBIOLOGY. v. 1. p. 42-42.

Publicações

• CANTUSIO NETO, R. ; Franco, RMB . Ocorrência de oocistos de Cryptosporidium spp. e cistos de Giardia, spp. em diferentes pontos do processo de tratamento de água, em Campinas, São Paulo, Brasil. Higiene Alimentar, v. 18, p. 52-59, 2004.

• Luciana Urbano Santos ; Tais Rondelo Bonnatti ; CANTUSIO NETO, R. ; Rocha-eberhardt, R . Occurrence of Giardia cysts and Cryptosporidium oocysts in activated sludge samples in Campinas, SP, Brazil. Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, v. 46, p. 309-313, 2004.

• Franco, RMB ; CANTUSIO NETO, R. Occurrence of Cryptosporidial oocysts and Giardia cysts in bottled mineral water commercialized in the city of Campinas, State São Paulo, Brazi. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v. 97, p. 205-207, 2002.

• Franco, RMB ; CANTUSIO NETO, R. ; Rocha-Eberhardt, R . Occurrence of Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts in raw water from Atibaia River, Campinas, Brazi. Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, v. 43, p. 109-111, 2001.

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