TERAPIA ANTIVIRAL

PARA RAIVA

Juliana Galera Castilho

Instituto Pasteur/Departamento de Medicina

Preventiva e Saúde Animal-FMVZ-USP

Setembro - 2011

HISTÓRICO

Lyssa ou Lytta: loucura,

demência

RAIVA

rabere: fúria ou delírio

rabhas: tornar-se violento

Antiguidade: raiva era temida em razão de sua forma de

transmissão, quadro clínico e evolução

latim

sânscrito

grego

HISTÓRICO

Fonte: Wilkinson, 2002. Rabies

Egípcios

2.300 a.C.

Mesopotâmios

Grécia antiga

Século XIX

HISTÓRICO

Código de Eshnunna

AristeuArtêmis

Séc. VI - I a.C. e Séc. I d.C.

gregos

e romanos

Louis Pasteur

PROFILAXIA DA RAIVA HUMANA

Pessoas expostas ao

risco da raiva

PÓS-EXPOSIÇÃO

Apenas vacina

PRÉ-EXPOSIÇÃO

Vacina ou vacina e soro

Pessoas agredidas

por mamíferos

Humanos

Terapia para raiva

- terapia com interferon - leucócito humano

- terapia antiviral - ribavirina intravenosa

- terapia - administração intravenosa e intratecal de

ribavirina ou interferon

- soro hiperimune anti-rábico de humano ou eqüino (via

intravenosa ou intratecal)

- hipotermia terapêutica

- terapia utilizando protocolo de Milwaukee

ENTRETANTO, NENHUMA TERAPIA É EFETIVA PARA

TRATAMENTO DA RAIVA ATÉ O MOMENTO

CASOS DE CURA - RAIVA EM HUMANA

Fonte: http://images.google.com.br

PRIMEIRO CASO DE CURA DE RAIVA

HUMANA – EUA (2004)

Fonte: http://images.google.com.br

CASOS DE CURA - RAIVA HUMANA

TRATAMENTO

caso confirmado de raiva

(laboratorialmente)

Quando entrar com protocolo

quadro clínico sugestivo

vínculo epidemiológico e

profilaxia antirrábica inadequada

- detecção de antígeno viral

- detecção de anticorpo

- detecção de RNA viral

Paciente com:

TRATAMENTO

Protocolo de Milwaukee

Tratamento baseou-se em 2 princípios:

Indução do coma

(agentes anti-excitatórios)

Terapia específica

(anti-virais)

- Quetamina: anestésico, com efeito

hipnótico e características analgésicas

- Midazolam: hipnótico, ansiolítico,

anticonvulsivante

- Fenobarbitúricos: drogas antiepiléticas

(tratamento de convulsões)

- Ribavirina

- Amantadina

- Quetamina

Replicação

viral

CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS VÍRUSREPLICAÇÃO DO VÍRUS DA RAIVA

Fonte: Schnell et al., 2010

5 RNAs mensageiros separados (monocistrônicos)

N LGMP1350 n 891 n 606 n 1572 n 6426 n

5’

LDR NC NC NC NC

11.932 nucleotídeos

REPLICAÇÃO DO VÍRUS DA RAIVA

CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS VÍRUSREPLICAÇÃO DO VÍRUS DA RAIVA

Fonte: Schnell et al., 2010

CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS VÍRUSREPLICAÇÃO DO VÍRUS DA RAIVA

-POLIMERASE

+

-

POLIMERASE

CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS VÍRUSREPLICAÇÃO DO VÍRUS DA RAIVA

Fonte: Schnell et al., 2010

CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS VÍRUSREPLICAÇÃO DO VÍRUS DA RAIVA

Fonte: Trabulsi &Alterthum, 2004

Fonte: www.virology.net/Big_Virology

ATUAÇÃO DOS ANTIVIRAIS NA

REPLICAÇÃO DO VÍRUS DA RAIVA

Fonte: www.virology.net/Big_Virology

CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS VÍRUS1 - QUETAMINA

Fonte: Schnell et al., 2010

2 - AMANTADINA

CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS VÍRUS3 - RIBAVIRINA

Inibe RNA polimerase, mRNA

e síntese de ácido nucléico

CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS VÍRUS3 - RIBAVIRINA

-POLIMERASE

+

-

POLIMERASE

É POSSÍVEL O TRATAMENTO

PARA RAIVA HUMANA?

As razões para a alta mortalidade dos

casos de raiva humana não é clara

Disfunção neuronal, mas

pouco dano citopático

neuronal

Infecção viral: primeiramente

ocorre disfunção neuronal do

que inflamação e morte celular

Teoricamente a encefalite é reversível

Por que não tratar raiva humana?

Se o vírus não destrói células do

SNC

resposta imune adequada

eliminação viral

Se essas alterações do SNC são

tratáveis

encefalomielite

alterações bioquímicas

citomegalia

vasoespasmos cerebral

reação imunológica

edema cerebral

Paciente

Quando o tratamento não é eficiente?

imunodeprimidos- resposta imune deficiente

- sem eliminação viral

- tratamento contra indicado

Pacientes

com exposição vacinal- resposta imune exacerbada

- tratamento contra indicado

Eficiência do protocolo de Milwaukee?

infecção pelo vírus da raiva

paciente (idade, saúde, imunocompetente)

tratamento prévio com vacina

inicio do tratamento

NOVAS ESTRATÉGIAS DE

TRATAMENTO PARA RAIVA

Fonte:<http//www.odec.ca/projects/2004/mcgo4s0/pubichtml/t3/RNA.html>

1- RNAi: por meio

de short-interfering

RNAs (siRNAs)

ESTRATÉGIAS DE TRATAMENTO

2- Introdução de

anticorpos dentro

da célula

ESTRATÉGIAS DE TRATAMENTO PARA

RAIVA

TRANSFECÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-VÍRUS

DA RAIVA EM CÉLULAS DE LINHAGEM N2A

(NEUROBLASTOMA DE CAMUNDONGO) E

NEUTRALIZAÇÃO INTRACELULAR PARA USO

COMO ANTIVIRAL

OBJETIVOS

• Avaliar a capacidade de transfecção de anticorpos

anti-vírus da raiva

Ensaio de transfecção de anticorpos

Fonte: Von Groll, 2003

• Estudar a efetividade do uso de anticorpos anti-

vírus da raiva, por neutralização intra-celular,

como terapia antiviral frente as diferentes

variantes do vírus da raiva

• Avaliar a viabilidade da célula após a transfecção

de anticorpos anti-vírus da raiva, através do uso do

corante azul de Tripan

METODOLOGIA

2 – Adaptação dos vírus em células N2A

3 – Titulação dos vírus em células N2A

4 – Ensaio de transfecção de anticorpos

1 – Caracterização molecular dos vírus

5 - Neutralização intracelular das diferentes

variantes do vírus da raiva em células N2A

RESULTADOS

Adaptação dos vírus em células N2A

Caracterização molecular dos vírus

Pasteur Virus

(PV)

Cerdocyon thous

(AgV2)

Bovino

(AgV3)Eptesicus spp

Pasteur Virus (PV)Bovino (AgV3) Eptesicus spp

Ensaio de transfecção de anticorpos

TRATADO NÃO TRATADO

CONTROLE DE CÉLULAS

Neutralização intracelular dos isolados

do vírus da raiva em células N2A

TWO WAY ANOVA

TRATADO

10 TCID50%/100µl 1.75

COTROLE

10 TCID50%/100µl 2.0

CONCLUSÕES

O DESEVOLVIMENTO DE TECNOLOGIAS E MECANISMOS QUE

ATUAM COMO ANTIVIRAIS É UMA ABORDAGEM PROMISSORA,

POIS PERMITE INIBIR DE MODO ESPECÍFICO A REPLICÇÃO

VIRAL.

GERA BASES PARA ESTUDOS EM MODELOS ANIMAIS DE

EXPERIMENTAÇÃO, O QUE É PRIMORDIAL PARA

DESENVOLVIMENTO DE PROTOCOLOS MAIS SEGUROS E

EFICIENTES.

jgcastilho@pasteur.saude.sp.gov.br