tÉcnicas de coloraÇÃo

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS EMPREGADAS NO DEPARTAMENTO DE ANATOMIA PATOLÓGICA -

FCM - UNICAMP..

Patologia geral e especial

Neuropatologia e Neuroimagem

Neuroimagem - Graduação

Neuroimagem - Casos

Índice alfabético geral

Índice alfabético NeuroBanco de Imagens Neuro

Neuropatologia - Casos

Casos correlativos Adições recentes English Homepage Site espelho....

Hematoxilina Fosfotúngstica Hematoxilina de Harris + Eosina

Método de Grocott para fungos

Métodos de Ziehl-Nielsen e Fite para bacilos ácido-resistentes

Melanina (remoção)

Azul de Alcian

Método de Weigert - Van Gieson para elástico e colágeno

Método de Verhoeff para elástico e colágeno

Tricrômico de Masson

Verde Metil Pironina

Vermelho Congo Alcalino

Giemsa - método de Wolbach modificado

Escarlate R método de Herxheimer

PAS - Reação do Ácido Periódico - Schiff

Reticulina - método de Gomori

Método de Von Kossa para cálcio

Gram - método de Macallum-Goodpasture

Mucicarmim

Cristal Violeta

Método de Warthin para Treponema

Sudão Negro para gorduras

Pigmento de Formol em corte histológico (remoção)

Método de Fontana-Masson para melanina

Solução sulfocrômica

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Imunofluorescência Direta

Método de Grimelius para neurosecreção

Azul de Toluidina para substância metacromática

Reação de Perls para Hemossiderina

Luxol fast blue - Nissl para mielina e neurônios

AGNOR

DESCALCIFICADORES

FIXADORES e especificação

FERRO COLOIDAL DE MOWRY

BIÓPSIAS DE MEDULA OSSEA

MICROSCOPIA ELETRÔNICA

HEMATOXILINA FOSFOTÚNGSTICA

Hematoxilina 1 gÁgua destilada 500 mlÁcido Fosfotúngstico 20 gÁgua destilada 500 ml

Dissolver a Hematoxilina em 500 ml de água destilada com o auxílio de calor, sem ferver e agitando sempre.

Dissolver o Ácido Fosfotúngstico em 500 ml de água destilada.

Juntar as duas soluções e agitar.

Guardar e envelhecer durante 6 meses.

IODO ALCOÓLICO Iodo 3gIodeto de Potássio 6gÁlcool 95% 300ml

1. Desparafinar e hidratar

2. Refixar em Bicloreto de Mercúrio, solução saturada por 24 horas

3. Passar em água destilada 3 vezes

4. Iodo Alcoólico 5% por 5 minutos


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6. Tiossulfato de Sódio 5% por 5 minutos


8. Oxidar em Permanganato de Potássio 0,25% por 5 minutos


10.Ácido Oxálico 5% por 10 a 20 minutos

11.Passar em água destilada 3 vezes

12.Corar pela HEMATOXILINA FOSFOTÚNGSTICA 24 horas

13.Salvar o corante e desidratar, diafanizar e montar.

RESULTADO: Fibras Colagenas azul escuro

HEMATOXILINA DE HARRIS Hematoxilina 5gÁlcool 95% 50mlSulfato de Alumínio e Potássio 100gÁgua Destilada 1000mlÓxido de Mercúrio 2,5g

Dissolver a Hematoxilina no álcool e o Alúmen na água destilada com o auxílio de calor.

Misturar as duas soluções e ferver o mais rápido possível.

Remover da fonte de calor e juntar o Óxido de Mercúrio aos pouquinhos com cuidado, reaquecer até a fervura e contar um minuto.

Afastar da fonte de calor e mergulhar em uma bacia com água e gelo imediatamente.

Adicionar 4 ml de Ácido Acético, quando o corante estiver resfriado.

EOSINA Eosina 2,5gÁgua destilada 50 mlÁlcool 95% 200 mlÁlcool 80% 750 ml

Dissolver a EOSINA na água destilada e acrescentar o álcool 95% Juntar os 750 ml de álcool 80% e mais 5 ml de Ácido Acético.

MÉTODO DE GROCOTT PARA FUNGOS Fixação Formalina 10%Soluções Ácido Crômico solução aquosa a 5%

Nitrato de Prata solução aquosa a 5%

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Metenamina solução aquosa a 3%

Bórax solução aquosa a 5%

Bissulfito de Sódio solução aquosa a 1%

SOLUÇÃO ESTOQUE DE METENAMINA-NITRATO DE PRATA Nitrato de Prata solução aquosa a 5% 5 mlMetenamina solução aquosa a 3% 100 ml

* Ao juntar as soluções forma-se uma nuvem branca que se dissolve ao agitar.

SOLUÇÃO DE TRABALHO DE METENAMINA-NITRATO DE PRATA Solução estoque de Metenamina-Nitrato de Prata 25 mlÁgua destilada 25 mlSolução de Bórax 5% 2 mlTiossulfato de Sódio solução aquosa a 2%

1. Desparafinar, hidratar pelo álcool até a água corrente por 5 min

2. Oxidar em solução de Ácido Crômico a 5% durante uma hora

3. Lavar em água corrente por poucos segundos

4. Bissulfito de Sódio a 1% durante um minuto

5. Lavar em água corrente 5 minutos

6. Enxaguar em água destilada 3 a 4 passagens

7. Impregnar pela solução de trabalho de METENAMINA-NITRATO DE PRATA em estufa a 60ºC durante 30 a 60 minutos.

8. Controlar ao microscópio (crítico)* até que os fungos corem-se em marrom dourado.

9. Enxaguar em 6 trocas de água destilada

10.Remover a prata em excesso com tiossulfato de Sódio 2% por 3 min

11.Lavar em água corrente por 2 minutos

12.Corar os núcleos pela Hematoxilina de Harris por 5 segundos

13.Lavar em água corrente por 5 minutos

14.Desidratar, diafanizar e montar com Entellan.

Resultado: Fungos em marrom dourado; Núcleos em azul *impregnação em excesso cora outros componentes, principalmente fibras colágenas e núcleos, e atrapalha a visualização dos fungos.

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MÉTODO DE ZIEHL-NIELSEN PARA BACILOS ÁLCOOL-ÁCIDO RESISTENTES (tuberculose, lepra)

Corante de Ziehl-Nielsen Fenol 8 ml

Álcool Absoluto 20 ml

Fucsina Básica (pó) 2 g

Água Destilada 200 ml

Corante de Azul de Metileno Água destilada 99 ml

Azul de Metileno 0,5 g

Ácido Acético Glacial 0,5 ml

Diferenciador Álcool 70% 99 ml

Ácido Clorídrico puro 1 ml

Mistura para desparafinar Xilol 60 ml

Vaselina 30 ml

Procedimento:

1. Desparafinar na mistura xilol-vaselina por 10 minutos 2 vezes

2. Secar a lâmina em papel filtro dobrado

3. Corar pela Fucsina de Ziehl-Nielsen a quente: filtre o corante sobre o corte na lâmina em um suporte e aqueça com uma chama sob a lâmina até ver o vapor começar a subir da lâmina. Repetir por 3 vezes com 2 minutos de espaço entre os aquecimentos.

4. Lavar em água corrente para retirar o excesso do corante

5. Diferenciar no álcool-ácido cuidadosamente, revelando cor rósea no corte, e mergulhar na água corrente interrompendo a diferenciação

6. Lavar em água corrente por 10 minutos

7. Corar pelo Azul de Metileno por 1 minuto

8. Retirar o excesso em água corrente rapidamente

9. Desidratar, diafanizar e montar.

Resultado: Bacilos em vermelho; Núcleos em azul

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MÉTODO de FITE PARA BACILOS ÁLCOOL-ÁCIDO RESISTENTESFRAGMENTOS; fixados em formol 10 % e cortes em parafina de 6 micrômetros REAGENTES: 1-Xilol-óleo de Amêndoa

Óleo de Amêndoa 1 parte

Xilol 2 partes

2-Corante de Ziehl-Nielsen

Preparo conforme técnica anterior [4]

3-Ácido Sulfúrico 2%

Álcool 70% ou água destilada 98 ml

Ácido Sulfúrico 2 ml

NOTA: Usar água ou álcool 70% conforme o micro organismo para ser evidenciado: se tuberculose use álcool 70%, se lepra use água

PROCEDIMENTO:

1. Desparafinar em 2 etapas de Xilol - óleo de Amêndoa por 12 minutos cada

2. Secar por compressão utilizando papel filtro dobrado

3. Secar ao ar

4. Corar em solução corante de Ziehl-Nielsen [filtrado] por 15 a 30 minutos em temperatura ambiente


6. Diferenciar em [3] conforme nota acima

7. Lavar em água corrente por 5 a 10 minutos

8. Contracorar com Azul de Metileno por 1 minuto


10.Secar em papel filtro. Completar a secagem agitando a lâmina ao ar e passagens em xilóis

11.Montagem em Permount ou Entellan

RESULTADO: Bacilos vermelho; Fundo azul

MELANINA (remoção) SOLUÇÃO DE PERMANGANATO DE POTÁSSIO

Permanganato de Potássio 0,25 g

Água destilada 100 ml

6

SOLUÇÃO DE ÁCIDO OXÁLICO

Ácido Oxálico 5 g


PROCEDIMENTO:

1. Desparafinar e hidratar até a água corrente

2. Passar em água destilada

3. Colocar na solução de Permanganato de Potássio 0,25%, por 30 minutos a 1 hora, dependendo da quantidade do pigmento

4. Lavar demoradamente em água corrente e passar em água destilada

5. Colocar na solução de Ácido Oxálico a 5% até que o corte fique descorado



8. Corar qualquer coloração a seguir

AZUL DE ALCIAN PH 2,7 SOLUÇÃO DE ÁCIDO ACÉTICO

Ácido Acético Glacial 3 ml


SOLUÇÃO DE AZUL DE ALCIAN

Azul de Alcian 1 g

Solução de Ácido Acético a 3% 100 ml

SOLUÇÃO DE SAFRANINA

Safranina 0,1 g

Solução aquosa de Ácido Acético a 3% 100 ml

PROCEDIMENTO:

1. Desparafinar até a água corrente e água destilada

2. Corar pelo Azul de Alcian por 30 minutos


4. Contracorar pela Safranina 0,1% por 1 minuto

5. Passar em água para retirar excesso

6. Desidratar, diafanizar e montar.

7

MÉTODO DE WEIGERT - VAN GIESON PARA ELÁSTICO E COLÁGENO Corante de WEIGERT

Fucsina Básica 2 g

Resorcina 4 g


Preparo do corante de Weigert:

Misturar em uma cápsula de porcelana bem limpa os elementos acima, aquecer até ebulir esta solução e permanecer ebulindo por 1 minuto, adicionar 25 ml de Cloreto Férrico solução aquosa a 29%.

Esfriar, filtrar em um papel filtro dobrado (sanfonado), desprezar o líquido filtrado e salvar o precipitado com o papel filtro utilizado.

Abrir o papel filtro contendo o precipitado na cápsula de porcelana e acomoda-la na estufa para que seque completamente.

De posse da cápsula com o papel filtro e o precipitado seco, adicione 200 ml de álcool 95% e com o auxílio do calor, aqueça cuidadosamente a solução até dissolver o precipitado, retire do calor e remova o papel filtro da solução e deixe a solução esfriar naturalmente, adicione 4 ml de Ácido Clorídrico e adicione mais álcool 95% perfazendo o volume final de 200 ml.

Corante de VAN GIESON Fucsina Ácida 1% solução aquosa 5 mlSolução aquosa saturada de Ácido Pícrico 100 ml

HEMATOXILINA DE WEIGERT Solução A

Hematoxilina 1,0 g

Álcool 95% 100 ml

Solução B

Cloreto Férrico 29% 4,0 ml

Água destilada 95,0 ml

Ácido Clorídrico concentrado 1,0 ml

PROCEDIMENTO:

1. Desparafinar em Xilol, álcool até a água corrente

2. Corar pela Hematoxilina Férrica de Weigert por 10 minutos. Misturar as soluções A e B em volumes iguais no momento do uso.


4. Passar em álcool 95%

5. Corar pelo corante de Weigert por 30 minutos a 1 hora.

8


7. Corar pelo corante de Van Gieson por 30 segundos

8. Desidratar diretamente, diafanizar e montar.

RESULTADO: Fibras elásticas - azul escuro Núcleos - azul a preto

Colágeno - róseo a vermelho

Outros elementos - amarelo

MÉTODO DE VERHOEFF PARA ELÁSTICO E COLÁGENOSoluções estoque:

Hematoxilina alcoólica 10% (10 g de hematoxilina em 100 ml de álcool absoluto)

Cloreto férrico 10%

Solução de Iodo de Verhoeff.

o Iodo – 2 g.

o Iodeto de Potássio – 4 g.

o Água destilada 100 ml.

Solução corante diária de fibras elásticas.

Hematoxilina alcoólica 10 % - 25 ml. Álcool absoluto - 25 ml.

Cloreto férrico 10% - 25 ml.

Misturar bem e adicionar Solução de iodo de Verhoeff - 25 ml.

Solução diferenciante : Cloreto férrico 2%.

Procedimento.

1. Desparafinar e hidratar 2. Corar 15 min. na solução para fibras elásticas de Verhoeff. 3. Lavar em aguar corrente 20 min. 4. Passar por água destilada. 5. Diferenciar em cloreto férrico 2%, sob controle microscópico. Fibras elásticas

devem salientar-se em negro contra fundo cinza claro. 6. Tiossulfato de sódio 5% - 1 min. 7. Lavar em água destilada 5 min. 8. Contracorar com solução de van Gieson 1 min. Tempo maior descora as fibras

elásticas. 9 Desidratar rapidamente e montar (tempo de desidratação excessivo em álcool

descora a solução de van Gieson).

9

TRICRÔMICO DE MASSON SOLUÇÃO DE BOUIN

Solução saturada de Ácido Pícrico 75 ml

Formaldeído puro 25 ml


HEMATOXILINA FÉRRICA DE WEIGERT

Solução A Hematoxilina pó 1 g

Álcool 95% 100 ml

Solução B Solução aquosa de Cloreto Férrico a 29% 4 ml


Ácido Clorídrico Concentrado 1 ml

Solução de trabalho: juntar na hora do uso partes iguais da solução A e B

SOLUÇÃO DE ESCARLATE DE BIEBRICH Solução aquosa de Escarlate de Biebrich 1% 90 ml

Solução aquosa de Fucsina Ácida 1% 10 ml


SOLUÇÃO ÁCIDA FOSFOTÚNGSTICA-FOSFOMOLÍBDICA

Ácido Fosfotúngstico 2,5 g

Ácido Fosfomolíbdico 2,5 g


SOLUÇÃO DE AZUL DE ANILINA Azul de Anilina 2,5 g



SOLUÇÃO DE ÁGUA-ÁCIDO Água destilada 100 ml


PROCEDIMENTO:



3. Mordentar em solução de Bouin por 1 hora na estufa a 60 graus ou preferencialmente deixar por uma noite em temperatura ambiente

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4. Lavar em água corrente até desaparecer o amarelo deixado pela solução de Bouin

5. Passe em água destilada

6. Core pela solução de Hematoxilina Férrica de Weigert (A e B) por 10 minutos


8. Passe em água destilada

9. Corar pela solução de Escarlate de Biebrich por 5 minutos

10.Passe por água destilada

11.Diferencie pela solução de Ácido Fosfotúngstico-Fosfomolíbdico durante 10 a 15 minutos


13.Corar pela solução de Azul de Anilina durante 5 a 10 minutos

14.Lave em água destilada

15.Passe pela solução de Ácido Acético Glacial 1% por 3 a 5 minutos


17.Desidrate, diafanize e monte em resina.

RESULTADO Núcleos - pretos Citoplasma, Queratina, Fibras intercelulares - vermelho

Colageno e Muco - azul

VERDE METIL PIRONINAFixação: Formalina a 10 % tamponada ou Carnoy Cortes de 4 m

SOLUÇÕES:

SOLUÇÃO ESTOQUE DE VERDE METIL 1%Verde Metil 1 gÁgua destilada 100 mlExtrair e purificar a solução de Verde Metil

Método: 1. Adicionar 100 ml de clorofórmio na solução estoque de Verde Metil e agitar bem 2. Deixar por várias horas no extrator ou durante a noite se possível, acondicionado em um funil de separação

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3. Descartar o clorofórmio do separador 4. Repetir a operação até que o clorofórmio saia sem cor, usualmente na terceira vez é suficiente para remover as impurezas da solução

SOLUÇÃO ESTOQUE DE PIRONINA A 1%Pironina GS 1 gÁgua destilada 100 mlAqueça delicadamente a solução até dissolver o coranteSOLUÇÃO DE TRABALHO VERDE METIL PIRONINASolução estoque purificada de Verde Metil 70 mlSolução estoque de Pironina GS 1% 30 ml

Ajustar o pH para 4.8 usando uma solução de Acetato de Sódio a 1%. Deixar o corante descansar por uma noite antes de usar. Não filtrar.

PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar e hidratar até a água destilada 2. Filtrar sobre a lâmina a solução corante e deixar por 2 minutos 3. Por as lâminas entre papel filtro pressionando e secar no ar durante 5 minutos 4. Diferenciar individualmente com uma ou duas gotas de água destilada. Checar em microscópio e se os cortes estão vermelhos, diferencie rapidamente em álcool

etílico a 80% -5 graus 5. Desidratar em acetona duas ou três mergulhadas rápidas 6. Completar passando em uma mistura de partes iguais de xilol-acetona e em duas

passagens de Xilol por 1 ou 2 minutos cada 7. Montar em resina

RESULTADOS:

Ácido Ribonucleico (RNA) vermelho Ácido Desoxiribonucleico (DNA).azul ou azul esverdeado

VERMELHO CONGO ALCALINO SOLUÇÃO ALCALINA.estoqueÁlcool 80% 500 mlCloreto de Sódio 20 g

SOLUÇÃO ALCALINA.usoSolução alcalina estoque 50 mlHidróxido de Sódio 1% 0,5 ml

SOLUÇÃO ALCALINA/VERMELHO CONGO.estoqueÁlcool 80% 500 mlCloreto de Sódio 20 gVermelho Congo 1,25 g

SOLUÇÃO ALCALINA/VERMELHO CONGO.usoSolução Alcalina/Vermelho Congo.estoque 50 mlHidróxido de Sódio 1% 0,5 ml

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HIDRÓXIDO DE SÓDIO 1%Água destilada 100 mlHidróxido de Sódio 1 g

As duas soluções estoque duram aproximadamente 30 dias Agitar filtrar sempre antes do uso

PROCEDIMENTO

1. Desparafinar, hidratar até a água destilada

2. Hematoxilina durante 2 minutos


4. Lavar em água destilada e passar em álcool 80%

5. Passar na solução alcalina por 20 minutos

6. Passar para a solução alcalina/Vermelho Congo por 60 minutos

7. Desidratar rapidamente em 3 banhos de álcool absoluto, Xilol e montar em resina

Resultado: Amilóide em róseo Núcleos azul

GIEMSA MÉTODO MODIFICADO DE WOLBACH GIEMSA SOLUÇÃO ESTOQUEGiemsa pó 3 gGlicerina PA 198 mlMetanol 198 ml

Dissolver o pó de Giemsa em Glicerina na estufa a 60 C por 2 horas e acrescentar o metanol após a retirada da estufa.

PROCEDIMENTO


2. Corar na solução corante de Giemsa diluída: 10 ml de solução estoque em 90 ml de água destilada, corar nesta solução por 1 hora. Preparar para a diferenciação: uma cubeta plástica com água destilada e três gotas de Ácido Acético Glacial, uma cubeta plástica com álcool absoluto e três gotas de Ácido Acético, uma cubeta com álcool absoluto e duas com Xilol.

3. Mergulhar uma vez na cubeta contendo água acidulada

4. Mergulhar uma vez na cubeta contendo álcool acidulado

5. Controlar no microscópio e se for necessário repetir os passos 3 e 4

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6. Mergulhar na cubeta de álcool absoluto até a lâmina esteja limpa

7. Mergulhar na seqüência xilol e montar em resina

RESULTADO Núcleos azul Citoplasma rosa

Bactérias azul

ESCARLATE R. MÉTODO DE HERXHEIMER Solução corante de ESCARLATEAcetona 50 mlÁlcool 70% 50 mlEscarlate R 0,3 g

Agitar e filtrar antes do uso, recuperar após o uso. De tempo em tempo, adicionar pequena quantidade de acetona/álcool 70% na solução de Escarlate R para evitar a formação de precipitado.

PROCEDIMENTO:

1. Cortar em congelação cortes com 15 a 20 micra

2. Colher os cortes em água destilada

3. Passar em álcool 50%, 2 a 5 minutos

4. Passar os cortes diretamente para o corante de Escarlate R

5. Diferenciar em álcool 70% rapidamente


7. Corar os núcleos pela Hematoxilina Harris

8. Passar os cortes novamente para a água destilada

9. Colher os cortes em lâminas, em uma vasilha com água

10.Montar com Gelatina/Glicerina

RESULTADO Núcleos azul Lípides vermelho vivo

PAS--ÁCIDO PERIÓDICO + REATIVO DE SCHIFFSOLUÇÃO CORANTE: REATIVO DE SCHIFF Aquecer 200 ml de água destilada em um erlenmeyer de 500 ml até a ebulição.

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Adicionar 1 g de Fucsina Básica (MERCK, granulada) cuidadosamente adicionando pouco a pouco, evitando a reação térmica, deixar abaixar a temperatura em 60 C aproximadamente e filtrar AGITANDO SEMPRE até que a temperatura abaixe à do ambiente. Adicione 20 ml de Ácido Clorídrico 1N * Água destilada. 92 ml Ácido Clorídrico. 8 ml Adicione também 1 g de Metabissulfito de Sódio Continuar agitando por mais 3 horas e deixar em repouso durante a noite. Adicionar 1 g de carvão ativado. Agite por 1 hora, filtre o corante e estoque em geladeira. SOLUÇÃO DE ÁCIDO PERIÓDICO 0,5% Cristais de Ácido Periódico 0,5 gÁgua destilada 100 ml

PROCEDIMENTO


2. Oxidar em Ácido Periódico 0,5% por 15 minutos

3. Lavar em água corrente por 5 minutos e enxaguar na água destilada por 3 vezes

4. Corar em Reativo de Schiff por 30 minutos


6. Contra corar pela Hematoxilina de Harris por 5 segundos


8. Desidratar, diafanizar e montar em resina

RESULTADO Glicogênio, mucina, membrana basal, fungos - vermelho Núcleos azul

RETICULINA MÉTODO DE GOMORIFixação: formol a 10%

Técnica: Parafina, cortes em 6-8 m

Solução de Prata Amoniacal: estável por 2 semanas Diluir em 10 ml de água destilada 1 g de Nitrato de Prata, Diluir em 10 ml de água destilada 1g de Hidróxido de Potássio Aos 10 ml de Nitrato de Prata a 10% juntar 2,5 ml de Hidróxido de Potássio a 10% em um erlenmeyer e nesta mistura precipitada adicionar 26 a 28 gotas de hidróxido de Amônio, agitando sempre quando for gotejando o Hidróxido de Amônio até que o

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precipitado desapareça quase completamente, restando alguns grânulos no fundo do erlenmeyer (se desejar dobre o volume com água destilada, de acordo com a

técnica original) Trabalhe com a vidraria muito limpa e livre de ácido

Solução de Permanganato de Potássio Permanganato de Potássio.........0,5 g Água destilada............................100 ml

Solução de Metabissulfito de Potássio Metabissulfito de Potássio...........2,0 g Água destilada............................100 ml

Solução de Formol

Formaldeído...............................20,0 ml Água destilada...........................80,0 ml

Solução de Sulfato de Amônio Férrico (Alúmen de Ferro) Sulfato de Amônio Férrico...........2,0 g Água destilada............................100 ml

Solução de Cloreto de Ouro Solução de Cloreto de Ouro a 1%..........20,0 ml Água destilada..........................................80,0 ml

Solução de tiossulfato de Sódio Tiossulfato de Sódio....................2,0 g Água destilada...........................100 ml

PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar e hidratar 2. Oxidar em Permanganato de Potássio 0,5% por 5 minutos 3. Lavar em água corrente por 2 minutos 4. Diferenciar em Metabissulfito de Potássio 2% por 5 minutos 5. Lavar em água corrente por 2 minutos 6. Sensibilizar em Sulfato de Amônio Férrico 2% por 5 minutos 7. Lavar em água corrente por 5 minutos e passar em água destilada 3 vezes 8. Impregnar na solução de Prata Amoniacal (filtrando a solução sobre a lâmina) por

30 segundos despreze a solução utilizada 9. Lavar em água destilada rapidamente 10. Reduzir em Formol 20% por 3 minutos 11. Lavar em água corrente por 5 minutos 12. Passar em Cloreto de Ouro 0,2% por 10 minutos 13. Lavar em água destilada por 3 trocas 14. Passar em Metabissulfito de Potássio por 5 minutos 15. Lavar em água destilada 3 trocas 16. Passar em tiossulfato de Sódio 2% por 5 minutos

16

17. Lavar em água corrente por 2 minutos 18. Corar pela Hematoxilina de Harris por 5 segundos 19. Desidratar, diafanizar e montar

RESULTADO: Fibras reticulínicas - preto

MÉTODO DE VON KOSSA PARA CÁLCIOFIXAÇÃO: Formol 10% ou preferencialmente em Álcool, Cortes 6 m

Solução de NITRATO DE PRATA 5% Nitrato de Prata......................5 g Água destilada.................100 ml

Solução TIOSULFATO DE SÓDIO 5% tiossulfato de Sódio...............5 g Água destilada.................100 ml

Solução de SAFRANINA Safranina...............................0,1 g Ácido Acético Glacial............1 ml Água destilada.....................99 ml

PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar, hidratar 2. Passar por 3 vezes em água destilada 3. Gotejar sobre o corte na lâmina o Nitrato de Prata e submeta a luz solar por 30

minutos a 1 hora ou luz ultra violeta ou ainda a uma lâmpada de 100 watts 4. Enxaguar em água destilada 5. Passar em tiossulfato de Sódio 5% 6. Lavar em água destilada por 3 vezes 7. Contra corar os núcleos pela Safranina por 5 minutos 8. Desidratar, diafanizar e montar

RESULTADO: Núcleo vermelho Citoplasma rosa Cálcio preto

GRAM HISTOLOGICO - MÉTODO DE MACALLUM GOODPASTURESolução de GOODPASTURE Fucsina Básica.................0,59 g Anilina...............................1,00 ml Álcool 30%...................100,00 ml Fenol.................................1,00 ml

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Solução de STIRLING Violeta de Genciana..........5,00 g Anilina................................2,00 ml Álcool absoluto......................10,00 ml Água destilada......................88,00 ml

Solução Saturada de ÁCIDO PÍCRICO Ácido Pícrico..............................1,18 g Água destilada......................100,00 ml

Solução de IODO PARA GRAM Iodo..................................1,00 g Iodeto de Potássio.........2,00 g Água destilada.........300,00 ml PREPARAR: Dissolver em 3 ml de água destilada o IODO e em seguida dissolver na mesma solução o IODETO DE POTÁSSIO, sem acrescentar mais água, após completar acrescente os 297 ml de água restantes.

PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar hidratar 2. Corar com GOODPARTURE por 10 minutos (agitar e filtrar sobre a lâmina) 3. Lavar em água destilada 4. Diferenciar em FORMALINA PA pura por 3 minutos 5. Lavar em água destilada 6. Corar o fundo com solução de ÁCIDO PÍCRICO por 3 a 5 minutos 7. Lavar em água destilada 8. Diferenciar em álcool 95% por 30 segundos 9. Lavar em água destilada 10. Corar no STIRLING por 3 minutos (filtrar sobre a lâmina no instante do uso) 11. Lavar em água destilada 12. Corar na solução de IODO/IODETO DE POTÁSSIO por 1 minuto 13. Enxugar as lâminas em papel filtro por compressão, mas deixando um pouco

úmida 14. Mergulhar as lâminas em uma mistura de partes iguais de XILOL E ANILINA com

várias trocas 15. Xilol com 2 trocas 16. Montar em resina NÃO REUTILIZE O XILOL DESTA EM OUTRA COLORAÇÃO A MISTURA DO XILOL/ANILINA É MUITO TÓXICA

RESULTADO: Bactérias Gram-positivas azul Bactérias Gram-negativas vermelho Outros elementos vermelho para púrpura

MUCICARMIMSolução Corante de MUCICARMIM Carmim........................................1,0 g

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Cloreto de Alumínio Anidro........0,5 g Água destilada..........................2,0 ml Misturar em um pequeno frasco de vidro os componentes listados e aquecer em uma fonte elétrica por 2 minutos. O líquido vai ficando vermelho escuro e

consistência de xarope. Diluir o conteúdo do frasco em 100 ml de álcool 50% e repousar por 24 horas. Para o uso filtre em uma proveta um volume e acrescente 5 volumes de água destilada.

PROCEDIMENTO 1. Desparafinar e hidratar 2. Core pela Hematoxilina de Harris por 30 segundos 3. Lavar em água corrente por 5 minutos 4. Corar pelo corante MUCICARMIM por 30 minutos 5. Desidratar diretamente, diafanizar e montar

RESULTADO: Núcleos - azul Mucinas - róseo para vermelho Outros elementos - amarelo

CRISTAL VIOLETAFixação: Formalina a 10% Cortes em parafina: 4 a 6 m

SOLUÇÕES:

Cristal Violeta solução estoque Cristal Violeta.................................14,0 g Álcool etílico a 95%....................100,0 ml

Cristal Violeta solução funcionante

Solução estoque de Cristal Violeta.......10,0 ml Água destilada.......................................300,0 ml Ácido Clorídrico concentrado...................1,0 ml

Meio de Montagem Gelatina.................................10,0 g Água destilada...........................60,0 ml Aquecer até a gelatina dissolver e adicionar: Fenol.............................................1,0 ml

PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar e hidratar até a água destilada 2. Corar na solução funcionante de Cristal Violeta 5 horas 3. Lavar em água corrente por 15 minutos 4. Montar as lâminas com o meio de montagem ou se preferir deve secar as

lâminas no ar

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5. Quando desejar examinar coloque uma gota de água destilada e recubra com uma laminula

RESULTADO: Amilóide - violeta púrpura Outros elementos - azul

MÉTODO DE WARTHIN PARA ESPIROQUETASFixação: Formalina 10% tamponada Cortes em parafina de 6 m

SOLUÇÕES TAMPÃO 1-Água Tamponada pH 3,6 Acetato de Sódio..............16,4 g Água destilada...............1000,0 ml

2-Ácido Acético Glacial 11,8% Água destilada..................100,0 ml Ácido Acético Glacial.........11,8 ml

Preparar a solução tamponada pH 3,6 misture: Solução-1..............3,0 ml Solução-2............37,0 ml Água destilada.960,0 ml

3-Nitrato de Prata 1% Nitrato de Prata...............1,0 g Água destilada...........100,0 ml

A- Hidroquinona 3% Hidroquinona....................0,3 g Água Tamponada.........10,0 ml

B- Gelatina 5% Gelatina neutra.............5,0 g Água destilada........100,0 ml

C- Nitrato de Prata 2% Nitrato de Prata...........0,5 g Água destilada.........25,0 ml *Preparar todas as soluções, manter somente a solução de Nitrato de Prata na

estufa 60-65 C e misturar as soluções na ordem: Solução Hidroquinona (A).............4 ml Solução Gelatina (B)....................60 ml Solução de Nitrato de Prata (C)..12 ml

PROCEDIMENTO 1. Desparafinar hidratar até a água destilada 2. Impregnar na solução de Nitrato de Prata a 1% (preparada em água tamponada)

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na estufa a 60 C por uma hora 3. Lavar rapidamente em água bi-destilada ou deionizada 4. Revelar na solução Hidroquinona/Gelatina/Nitrato de Prata (ABC) até ficar

castanho dourado, de 3 a 4 minutos 5. Lavar em água tamponada por 3 minutos 6. Desidratar, diafanizar e montar

RESULTADO: Espiroquetas - negras Fundo - castanho amarelado

SUDÃO NEGRO PARA GORDURAS

Cortes de congelação ou em parafina

Preparar em uma cubeta com álcool 70% solução saturada de SUDÃO NEGRO A técnica é própria para cortes de congelação, se preferir fazer em lâminas com cortes de parafina não terá o mesmo resultado.

PROCEDIMENTO 1. Cortes de congelação em água destilada 2. Colocar em álcool 50% por 2 minutos 3. Corar pelo SUDÃO NEGRO por 30 minutos (filtrar no uso) 4. Passar em álcool 50% por 2 minutos para diferenciar 5. Colocar em água destilada 6. Pescar em lâminas 7. Montar em glicerina/gelatina = TÉCNICA 18

RESULTADO: Lípides em preto

PIGMENTO DE FORMOL EM CORTES HISTOLÓGICOS (REMOÇÃO)SOLUÇÃO DE ÁLCOOL AMONIACAL Amônia PA...........................1,0 ml Álcool 75%.......................200,0 ml

PROCEDIMENTO 1. Desparafinar e lavar em água corrente 2. Submeter a solução de ÁLCOOL AMONIACAL durante 30 minutos 3. Lavar por 10 minutos 4. Seguir a coloração ou reação...

TÉCNICA DE FONTANA-MASSON PARA MELANINASOLUÇÃO DE PRATA AMONIACAL Dissolver 10 g de Nitrato de Prata em 100 ml de água destilada Separar 95 ml desta solução e nesta adicionar o Hidróxido de amônio em gotas, tornando a princípio a solução precipitada. Com a adição do Hidróxido de Amônio o

precipitado dissolve-se Se a solução ficou clara utilize os 5 ml de Nitrato de Prata 10% para torna-la

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opalescente Deixe em repouso por uma noite Da solução pronta para o uso, utilize 25 ml e acrescente 75 ml de água destilada e filtre

SOLUÇÃO CORANTE DE SAFRANINA Safranina...................................0,1 g Água destilada....................100,0 ml Ácido Acético Glacial.............1,0 ml

SOLUÇÃO DE CLORETO DE OURO 0,2% Solução estoque de Cloreto de Ouro 1%...10,0 ml Água destilada...............................................40,0 ml

SOLUÇÃO DE TIOSSULFATO DE SÓDIO 5% Tiossulfato de Sódio..................5,0 g Água destilada.....................100,0 ml

PROCEDIMENTO 1. Desparafinar e hidratar até a água destilada 2. Impregnar na solução de Nitrato de Prata/Amoniacal filtrada para o uso, e por na

estufa a 56 C por uma hora. Os cortes tornam-se marrom claro 3. Enxaguar em água destilada 4. Submeter em Cloreto de Ouro 0,2% por 10 minutos 5. Enxaguar em água destilada 3 vezes 6. Reduzir em Tiossulfato de Sódio 5% por 5 minutos 7. Enxaguar em água destilada 3 vezes 8. Corar os núcleos pela solução Corante de Safranina por 5 minutos 9. Enxaguar em água destilada por 2 vezes 10. Desidratar, diafanizar e montar

RESULTADO: Núcleos rosa Grânulos argentafins - preto

SOLUÇÃO SULFOCRÔMICABicromato de Potássio....................60,0 g Água destilada..............................200,0 ml Ácido Sulfúrico..............................200,0 ml

Dissolver o Bicromato de Potássio em água destilada e acrescentar aos poucos o Ácido Sulfúrico, utilize o frasco próprio para suportar o calor da reação do ácido com a água, a solução deve precipitar e nesta fase acrescente um pouco de água destilada para que o precipitado desapareça mas fique no limite UTILIZAR ERLENMEYER COM NO MÍNIMO O TRIPLO DO VOLUME A SER PREPARADO

Vidrarias devem ser submetidas a solução Sulfocromica por no mínimo 20 minutos

IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA

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Os conjugados de Fluorescência são obtidos comercialmente de diversas marcas e

nossa experiência: Behring e Dako. As reações desenvolvidas neste serviço são: IgA, IgG, IgM, C3c, C1q, Kappa,

Lambda e Fibrinogênio. 1. Após a reconstituição com água destilada, dividir em alíquotas de 50 ml e

conserva-las em freezer a -20 C. 2. Preparar a solução de PBS Cloreto de Sódio.......................8,0 g Cloreto de Potássio................0,81 g Fosfato de Sódio(Na2HPO4)..........1,15 g se Na2HPO4 12H2O: 2,42 g Fosfato de Potássio(KH2PO4).......0,20 g Dissolver em 1000 ml de água destilada e medir o pH 3. Preparar a solução Azul de Evans / PBS Azul de Evans......................0,01 g Solução de PBS.................100 ml 4. Rediluir a solução de Azul de Evans/PBS Solução Azul de Evans/PBS...........10 ml Solução PBS.....................................90 ml Filtrar esta solução 5. Separar das alíquotas uma amostra de cada para uso e acrescentar aos 50 l mais 1 ml de solução de Azul de Evans/PBS rediluido(4) e conservá-las em geladeira

a +4 C 6. As biópsias são incluídas em Tissue- TeK, congeladas em Nitrogênio Líquido e

cortadas em criostato a -24 C. 7. Os cortes colhidos em lâminas silanizadas e secos ao ar são acomodadas em

uma cuba e imersas em PBS por 15 minutos. 8. Colocar o conjugado rediluido: IgA-IgM-IgG-C3c-C1q-Kappa-Lambda-Fibrinogênio

em centrífuga e centrifugar por 15 minutos com 9000 RPM (na hora do uso). 9. Incubar em câmara úmida por 30 minutos a temperatura ambiente 10. Lavar cuidadosamente os cortes, escorrendo sobre eles a solução de PBS . 11. Mergulhar na solução de PBS por 10 minutos e repetir mais 10 minutos com

nova solução. 12. Montar com lamínula sob solução PBS/glicerina na proporção 1/2

TÉCNICA DE GRIMELIUS PARA GRÂNULOS DE NEUROSECREÇÃOSolução A (impregnadora) 150 ml de água destilada 2 ml de Nitrato de Prata a 2%

A água deve ser aquecida até a ebulição e separando 50 ml desta água adicionar 2 ml da solução de Nitrato de Prata a 2% e aguardar a temperatura abaixar a 60 C

Solução B (reveladora) 100 ml de água destilada 5 g de Sulfito de Sódio 1 g de Hidroquinona Aquecer os 100 ml de água destilada até a ebulição e adicionar os sais (Sulfito de Sódio e Hidroquinona) e aguardar a temperatura abaixar até 60 C

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Corante Nuclear: SAFRANINA Safranina....................0,1 g Água destilada...........99 ml Ácido Acético...............1 ml

PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar e hidratar 2. Lavar em água destilada exaustivamente 3. Submeter na solução A por 3 minutos a 65 C 4. Lavar em água destilada a 65 C 5. Submeter na solução B por 1 minuto 6. Lavar em água destilada a 65 C 7. Repetir na solução A por 1 minuto a 65 C 8. Lavar em água destilada a 65 C 9. Repetir na solução B por 1 minuto 10. Lavar em água destilada a 65 C 11. Lavar em água destilada em temperatura ambiente 12. Corar os núcleos pela Safranina por 1 minuto 13. Desidratar, diafanizar e montar com resina

RESULTADO: grânulos argentafins impregnados (amarelo/marrom/negro) núcleos em vermelho

AZUL DE TOLUIDINAFixação: Formalina a 10% Cortes em parafina de 6 m

AZUL DE TOLUIDINA Azul de Toluidina.....................0,1 g Água destilada......................100 ml

PROCEDIMENTO: 1. Desparainar e hidratar, após água destilada 2. Corar pelo Azul de Toluidina por 30 minutos 3. Enxaguar em água destilada 4. Cubra o corte com laminula sobre uma gota de água destilada 5. Moldure a laminula com cera aquecida Recomendamos usar uma lâmina controle com um corte de cordão umbilical

RESULTADO: Substância metacromática em róseo

PERLS PARA HEMOSSIDERINAFixação: Formalina a 10 % Cortes em parafina de 5 m

Soluções: A- Solução FERROCIANETO DE POTÁSSIO

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Ferrocianeto de Potássio......................2,5 g Água destilada........................................25 ml B- Solução ÁCIDO CLORÍDRICO Ácido clorídrico..................................5 ml Água destilada.................................20 ml Misturar a solução A e B em partes iguais (25 + 25) sempre no instante do uso Solução corante de SAFRANINA Safranina.............................0,1 g Água destilada...................99 ml Ácido Acético Glacial..........1 ml

PROCEDIMENTO: 1. Desparafinar e hidratar 2. Passar em água destilada 3. Submeter a solução Cloridríco-Ferrocianeto por 1 hora 4. Enxaguar em água destilada por 3 vezes 5. Contracorar pela Safranina por 2 minutos 6. Passar em água para diferenciar (controle ao microscópio) 7. Desidratar, diafanizar e montar

RESULTADO: Pigmento Férrico azul Núcleos vermelho

Luxol-fast-blue – Nissl (Klüver-Barrera) para mielina e neurônios.Fixação – Formol 10%.

Soluções :

Luxol-fast-blue 0,1%

Luxol-fast-blue MBS 0,1 g. Etanol 95% 100 ml.

Dissolver o corante no álcool. Acrescentar 0,5 ml de ácido acético 10% por 100 ml de solução. A solução é estável por meses.

Cresil – violeta 0,1%.

Cresil violeta 0,1 g. Água destilada 100 ml.

Imediatamente antes do uso, adicionar 15 gotas de ácido acético a 10%. Filtrar antes do uso.

Carbonato de lítio 0,05 %.

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Carbonato de lítio 0,05 g. Água destilada 100 ml.

Procedimento.

Cortes de parafina, preferivelmente entre 15 a 20 micrômetros. Desparafinar, chegar ao álcool 95 %. Corar pela solução de luxol fast blue durante a noite em estufa a 56%. (Usar recipiente bem vedado para não evaporar; exemplo - tubete para lâminas com

rosca). Retirar excesso de corante com álcool 95 %. Enxaguar em água destilada. Diferenciar lâminas uma a uma na solução de carbonato de lítio, cerca de 30

segundos – o excesso de corante começa a sair. Continuar a diferenciação em álcool 70% e ir agitando gentilmente até que a

diferença entre substância branca e cinzenta fique nítida. Repetir a seqüência do carbonato de lítio e álcool 70% (se necessário) até que a substância cinzenta esteja bem clara (aconselha-se acompanhamento ao

microscópio). Terminada a diferenciação coletar todas lâminas em água destilada. Corar por solução de cresil violeta 6 min. Pode-se também usar HE, só hematoxilina

ou PAS como contracolorações. Desidratar rapidamente em etanol 95 e absoluto. Obs. Desidratação prolongada

pode prejudicar a coloração dos neurônios por cresil violeta. Xilol. Montagem em Entellan.

Resultados : mielina – azul turquesa; neurônios – azul violeta.

AgNOR TÉCNICA de PLOTON et al, 1986, modificada por Trevisan, M, comun. pessoal 1996).SOLUÇÃO A: 2g de gelatina dissolvida em 100 ml de água destilada pré aquecida. Adicionar 1g de ácido fórmico.

SOLUÇÃO B: nitrato de prata a 50%

MODO DE PREPARO

1. Misturar na hora do uso 1 volume de solução A com 2 volumes de solução B. Colocar diretamente sobre o esfregaço. Deixar por trinta minutos, no escuro e à

temperatura ambiente. 2. Lavar em água destilada. 3. Colocar em metabissulfito de sódio a 1% por 1 a 3 minutos. 4. Lavar em água destilada. 5. Colocar tiossulfato de sódio a 2% por 1 a 3 minutos. 6. Lavar com água destilada. 7. Seguir o procedimento habitual de montagem com resina sintética.

RESULTADOS: nucléolos em negro

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DESCALCIFICADORESANTES DE DESCALCIFICAR QUALQUER TECIDO ÓSSEO SÃO NECESSÁRIOS DOIS PASSOS - ESTAR FIXADO ADEQUADAMENTE E SERRADO NA ESPESSURA DE NO MÁXIMO 5 mm. APÓS DESCALCIFICADO REDUZIR A 3 mm

ÁCIDO NÍTRICO 7% Água destilada.................930 ml Ácido Nítrico.......................70 ml IMPORTANTE: deitar o ácido sobre o volume total de água e nunca o contrário

ÁCIDO FÓRMICO - CITRATO DE SÓDIO Solução A Água destilada...................250 ml Citrato de Sódio....................50 g

Solução B Água destilada.........................125 ml Ácido Fórmico puro.................125 ml No instante do uso juntar partes iguais da solução A e B Este descalcificador preserva bem a morfologia do tecido embora seja muito lento. É recomendado para fragmentos pequenos

DESCALCIFICADOR USADO NO DEP. DE ANATOMIA PATOLÓGICA DO HOSPITAL GERAL DE MASSACHUSETTS E NO L.A.P. UNICAMP EDTA, Tetrasódio.............................7 g Tartarato de Sódio e Potássio......80 g Tartarato de Sódio.................1,4 g Ácido Clorídrico.................1200 ml Água destilada...................9000 ml 1. A escolha das marcas das drogas deste descalcificador tem que ser criteriosa na

qualificação 2. Todo tecido tem que estar fixado e recortado no tamanho correto,

preferencialmente fixado durante a noite. 3. Submeter o tecido ao descalcificador no máximo 8 horas. Conforme o tamanho e concentração de cálcio no fragmento o tempo pode variar de 2 a 8 horas. Se necessário mais tempo, nunca deixe o fragmento no descalcificador durante a

noite. Repita a operação durante o dia. 4. Teste os fragmentos com um alfinete ou uma lâmina de bisturi, se ao penetrar no

tecido ranger revelando textura vítrea continue o processo 5. Concluído o processo de descalcificação lave em água corrente por uma hora, não deixe lavando durante a noite, conserve em álcool 70%

FIXADORES E ESPECIFICAÇÕES 1-FORMALINA TAMPONADA (biópsia de todos órgãos)

Formol 100 ml


Fosfato de Sódio Monobásico 4 g

Fosfato de Sódio Dibásico 6,5 g

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Este fixador é de uso geral 2-BOUIN (biópsia de testículo e rim)

Solução saturada de Ácido Pícrico aquoso 750 ml

Formol 250 ml


Fixar de 4 a 6 horas, conservar em álcool 70 % até o processo seguinte.

3-DUBOSQUE-BRASIL (biópsia de rim)

Formol 120 ml

Ácido Acético 30 ml

Ácido Pícrico 2 g

Fragmento filiforme de rim neste fixador por 1 hora no máximo, a duração do fixador é de 15 dias

4-CARNOY (biópsia pequena)

Álcool absoluto 60 ml

Clorofórmio 30 ml


Fixador rápido, deixar no máximo por 1 hora e iniciar o processo em álcool absoluto por 30 minutos, dois Xilois com 15 minutos cada e duas passagens de parafina com 15 minutos cada em seguida a incusão.

5-ZENKER (biópsia de medula)


Cloreto de Mercúrio 50 g

Dicromato de Potássio 25 g

Sulfato de Sódio 10 g

Adicionar 5 ml de Ácido Acético Glacial para 95 ml da solução de Zenker na hora do uso, nele permanece por 24 horas e lavar por 3 a 6 horas em água corrente

FERRO COLOIDAL DE MOWRYFixação; formol neutro a 10% Cortes em parafina; 6 m 1-Solução Cloreto Férrico a 29% 2-Solução FERRO COLOIDAL DE MULLER estoque Água destilada 250 ml

Levar até a ebulição e adicionar a Solução de Cloreto Férrico 29% 4,4 ml3-Solução de trabalho FERRO COLOIDAL DE MULLER

Solução estoque de FERRO COLOIDAL DE MULLER 20 ml



4-Solução aquosa de Ácido Acético Glacial 12% 5-Solução aquosa de Ácido Clorídrico 5% 6-Solução aquosa de Ferrocianeto de Potássio 5%7-Solução de trabalho Ferrocianeto de Potássio 5%/Ácido Clorídrico 5%

Ferrocianeto de Potássio a 5% 40 ml

Ácido Clorídrico a 5% 40 ml

8-Corante de Van Gieson ou Fast Red

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PROCEDIMENTO:

1. Desparafinar e hidratar até a água destilada

2. Por durante 3 minutos em solução de Ácido Acético Glacial 12%

3. Submeter em solução trabalho de Muller por 1 hora (3)

4. Enxaguar em solução aquosa de Ácido Acético Glacial 12% em 4 etapas, durante 3 minutos cada.

5. Submeter as lâminas pela solução de trabalho de Ferrocianeto de Potássio/Ácido Clorídrico por 20 minutos


7. Enxaguar em água destilada

8. OPCIONAL - Contracorar com solução corante de Van Gieson por 5 a 7 minutos ou solução corante de Vermelho Rápido por 5 minutos

9. Desidratar e diafanizar

10.Montar com resina

RESULTADOS: Mucopolisacarídeo ácido - Azul

BIÓPSIAS DE MEDULA OSSEAPara biópsias de medula ossea de agulha em adulto utilizar o fixador de ZENKER, e para biósia de medula ossea de agulha em criança utilizar o formol 10% e após a fixação do fragmento descalcifique em Ácido Fórmico 30% por 18 a 24 horas.

PROCESSO

Medula ossea (biópsia de agulha) em ZENKER por 18 a 24 horas Lavar em água corrente por 4 a 6 horas Se houver impedimento para prosseguir com o processo, coloque a medula

ossea em cápsula e mergulhe em Alcool 80%

Segue:

1-Alcool 90% 15 minutos2-Alcool absoluto 30 minutos3-Alcool absoluto 30 minutos4-Alcool absoluto 30 minutos5-Xilol 30 minutos6-Xilol 30 minutos7-Parafina a 62C 30 minutos8-Parafina a 62C 30 minutos9-INCLUSÃO

MICROSCOPIA ELETRÔNICA

Solução de Karnovsky –

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Paraformaldeído – 2 g. Água distilada – 20 ml. Aquecer a 60º C e juntar gotas de NaOH 1 N até dissolver. Esfriar. Glutaraldeído a 50% - 12 ml Cacodilato de sódio – 8,56 g. Água distilada – 200 ml. Acertar pH para 7.2. Usar 70 ml.

Resultado final: Paraformaldeído a 1 % Glutaraldeído a 3% em Tampão Cacodilato 0,07 M

Tetróxido de ósmio (OsO4) – Dissolver 1 g em 50 ml de água distilada. Quebrar ampola de OsO4 em um vidro âmbar, com a água e deixar durante a noite

(dissolução muito lenta) Ampolar alíquotas de 1 ml (para evitar inalação de vapores, substância tóxica) Para usar – misturar 1 : 1 com tampão cacodilato 0,07 M, pH 7,2. Fragmentos ficam 2 hs. no fixador.

Acetato de Uranila (Corante em bloco) – Acetato de Uranila - 0,5 g. Sacarose - 9,9 g. Água distilada – 100 ml. Após o ósmio, deixar uma noite na geladeira nesta solução. Daí passa à desidratação e inclusão.

Desidratação – Em séries crescentes de acetona ou etanol – óxido de propileno (As resinas são solúveis em acetona mas não em etanol. Óxido de propileno faz a

transição para permitir infiltração pela resina). Acetona 30% - 30 min. Acetona 50% - 15 min. Acetona 70% - 15 min. Acetona 90% - 15 min. Acetona 100% - 15 min. Acetona 100% - 15 min. Acetona / resina (1:1) no rotor - 2 hs. Resina na estufa a 37º C - 1 h. Inclusão em resina Araldite.

Corante para cortes grossos (1 ) Azul de toluidina – 1 g. Bórax - 1 g. água distilada - 100 ml. Filtrar. Corar em chapa quente. Aquecer até levantar vapor, sem deixar secar.

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Lavar em água corrente. Observar sem lamínula (gota de óleo de imersão opcional) Secar e guardar.

Contrastante para cortes ultrafinos (0,1 ) - Citrato de chumbo de Reynolds (1963) –

Nitrato de chumbo 2,66 g Citrato de sódio 3,52 g Água distilada 60 ml. Dissolver em balão de vidro agitando forte por 1 min, lentamente por 30 min, até

desaparecerem os grânulos finos. Adicionar 16 ml de NaOH 1 N (1 g de NaOH em 25 ml de água distilada e

previamente fervida para eliminar todo CO2). Solução torna-se transparente Completar para 100 ml. Filtrar com filtro millipore antes do uso.

Shorr para esfregaços ( CITOLOGIA)MordenteÁcido fosfotúngstico: 25gÁcido fosfomolíbdico: 25g.Águar destilada: 1500ml

Verde-luzVerde-luz: 1g.Água destilada acetificada: 1000ml(água + 2ml ácido acético)

Vermelho shorrPonceau de xilidina: 1gOrange G: 1g.Fucsina ácida: 0,5 g.Água destilada acetificada: 1500ml(água + 3ml ácido acético)

Hematoxilina

usar hematoxilina de Harris sem ácido acético.Técnica: HE

1 – lavar2 – Hematoxilina: 5 minutos3 – lavar4 – Vermelho: 2 minutos

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5 – lavar6 – Mordente: 6 minutos.7 – lavar8 – Verd-luz: 1 minuto.9 - álcool (3)10 – xilou : montar.

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tÉcnicas de coloraÇÃo

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