Técnica fluorogênica

Os testes baseados na adição de MUG (4-metil-umbeliferil-β-D-

glicuronideo) a um caldo de cultura para detecção de Escherichia coli., são

exemplos desta técnica. A enzima β-glicuronidase produzida pela grande

maioria das cepas desse microrganismo transforma o MUG em umbeliferona,

que é fluorescente quando observado sob luz ultravioleta de onda longa. A

observação do número de tubos turvos, com gás e fluorescentes após 24 ou

48h, permite o cálculo do número mais provável de E. coli por grama (ou mL) do

produto (MACHADO, 2007).

A constatação da presença da Escherichia coli é obtida através da ação da

enzima β-glucoronidase, que é caracteristicamente produzida por cepas de

Escherichia coli, sobre o substrato 4-metilumbeliferil-β-D-glucoronídeo (MUG);

quando o MUG é degradado, o produto resultante 4-metilumbeliferona (Figura 1)

apresenta fluorescência azul sob luz ultravioleta (360nm) (Figura 2) (COVERT et

al., 1989 ; SILVA et al., 2000). Nesta técnica, a presença de coliformes totais é

confirmada pela alteração da coloração do meio, de incolor para amarelo (Figura

2).

Figura 1 – Esquema da reação enzimática do substrato MUG (IDEXX, 2005)

Figura 2 – Mudança de coloração na reação enzimática ONPG/ MUG (IDEXX,

2005)

Incolor = negativo (ausência coliforme)

Amarelos = coliformes totais

Fluorescência = E. coli

Este método oferece como vantagens:

- Rapidez e facilidade de usar;

- Identificação direta e enumeração de Escherichia coli ou Enterococos em

36 horas (em comparação com 3 ou 4 dias usando métodos tradicionais);

- Dispensa a preparação de meio de cultura;

- Emprega microplacas estéreis e prontas para uso;

- Padronização do preparo, incubação e técnica de leitura para E. coli e

Enterococcus;

- Detecção da atividade de uma enzima específica de cada bactéria por

microplaca;

- Resultados confiáveis;

- Economia de tempo e material.

A Fig. 3 representa ilustrativamente um microscópio fluorogênico, usado nesta

técnica para enumerar as células viáveis e não viáveis.

Figura 3 – Microscópio fluorogênico, usado para contagem de microrganismos.Fonte: Google imagens (Epifluorescência direta), 2008.

BIBLIOGRAFIA

GOLDBECK, Júlia C. Métodos rápidos de análise microbiológica. 2008.

Trabalho acadêmico. Bacharelado em Química de Alimentos. Universidade

Federal de Pelotas.

GEGHI, Simone de Queiróz. Avaliação da Eficiência dos Métodos Rápidos Usados Para a Detecção de Coliformes Fecais em Amostras de Água, em Comparação com a Técnica de Fermentação em Tubos Múltiplos. 2005. 36

f. Trabalho Acadêmico. Bacharelado em Ciências Farmacêuticas. Universidade

Estadual Paulista Júlio Mesquita Filho – UNESP – Campus Araraquara.