Mtodo de Anlise

Sulfluramida

1. Finalidade:

Orientaes para a determinao da concentrao de princpio ativo em Isca Formicida Exatta e matria-prima.

2. Definio:A isca formicida a base de sulfluramida contm em sua formulao: polpa ctrica, leo de soja, sulfluramida 0,3% p/p, diasil e caulin. Busca-se neste protocolo estabelecerem-se as condies para seletivamente extrair e analisar o princpio ativo, sulfluramida, por meio de cromatografia de fase gasosa, uma vez que a sulfluramida volatiliza-se e estvel nas condies de anlise.

3. Mtodo de Anlise:

3.1 Materiais / Equipamentos

- Cromatgrafo a gs HP-68 Plus equipado com detector de ionizao de chama;

- Coluna capilar HP-1;

- Balana analtica;

- Microseringa graduada em dcimos de microlitros;

- Agitador Magntico com aquecimento;

- Vidraria de acordo com o mtodo de anlise.

3.2 Reagentes / Solues:

- Padro de Sulfluramida com concentrao definida;- Tetrametilbenzeno (TMB)

- Acetato de Etila P.A

3.3 Procedimento:

- ENSAIO POR PADRONIZAO INTERNA

Preparar uma soluo padro interno de Tetrametil Benzeno (TMB) com 20 mg num balo volumtrico de 100 ml ou 50 mg num balo volumtrico de 250 ml. Aps pesagem, completar o volume com Acetato de Etila e deixar no ultrassom por 5 minutos.

- PREPARO DO BRANCO DE SOLUO

Este padro para ser analisado comparando-se com o produto tcnico (sulfluramida), premix e a Isca da produo.

Pesar 30 mg ou 0,0300g de Sulfluramida padro, com exatido de 1mg, em Erlenmayer de 125mL de capacidade. Adicionar com pipeta volumtrica 20 ml de soluo padro interno (tetrametilbenzeno). Fechar o Erlenmayer e levar ao banho de ultrassom para dissoluo completa e eliminao de gases por aproximadamente 5 minutos.

Transferir uma alquota desta soluo para frasco do cromatgrafo. Injetar no cromatgrafo 1 microlitro no mtodo 2.

Injetar no mnimo 2 vezes e obter a mdia dos resultados, para fins de elaborao do relatrio.

- ANLISE DE PRODUTO TCNICO (SULFLURAMIDA)

Pesar, rapidamente, em Erlenmeyer de 50 mg do produto tcnico contendo sulfluramida. Acrescentar com pipeta volumtrica 20ml de soluo padro interno. Deixar em ultrassom por 5 minutos, transferir esta soluo para o vial. Injetar no cromatgrafo 1 microlitro no mtodo 2.

- ANLISE DO PREMIX

Pesar, rapidamente, em Erlenmeyer de 1 g do premix contendo sulfluramida. Acrescentar com pipeta volumtrica 20ml de soluo padro interno. Deixar em ultrassom por 5 minutos, filtrar e transferir esta soluo para o vial. Injetar no cromatgrafo 1 microlitro no mtodo 2.

- MOAGEM E EXTRAO DA ISCA

Fazer a triturao prvia da amostra durante aproximadamente 2 minutos no multiprocessador.

Aps triturao, pesar 10g do p da isca, com exatido de 20mg, em erlenmeyer de 125ml e adicionar 20ml do padro (TMB), preparado previamente.

Colocar o erlenmeyer em um becker contendo gua, deixar em agitao durante 30 minutos numa temperatura aproximadamente de 40C, +ou- 2oC.

Em seguida deixar esfriar e filtrar tranfeir o filtrado para o vial. Injetar no cromatgrafo 1 microlitro no mtodo 2.

- INJEO DA AMOSTRA

O cromatgrafo deve estar no mtodo 2

Lavar a seringa 6 vezes no mnimo com acetona

Lavar a seringa com a amostra 6 vezes no mnimo e desprezar

Retirar 1 (l da amostra, observar se no tem ar na seringa.

Limpar agulha com papel higinico

Apertar a tecla Status + Prep Run , aguardar o visor mostrar a mensagem Ready For Injection.

Injetar a amostra e imediatamente apertar a tecla Start.

3.4 Clculos:

- Equao

Por meio da curva de calibrao e regresso linear determina-se a equao abaixo:

([952,40950 x Pi + 9011,30097]) - 12504,08367

[SF]= R

191,95667

[SF] = (g/ml

- Calcular a rea do padro interno (TMB), que sai aproximadamente em 6 minutos no cromatograma (observar o maior pico deste minuto).

- Calcular as reas dos picos de sulfluramida (SF) e seus ismeros que saem de 7 at 11 e fazer um somatrio dos resultados (observar os picos maiores e somar apenas 6 picos neste intervalo).

- Dividir a rea do (TMB) pela rea total de sulfluramida (SF), a qual ser igual a razo da frmula(R).

- Inserir os valores do PI (TMB), o qual corresponde a concentrao em (g de (TMB) da soluo padro utilizada para extrao da isca que e aproximadamente 200(g/ml.

- O resultado deve ser aproximadamente de 1500(g/ml. Para ter o resultado em g/kg, deve-se multiplicar o valor obtido por 0,002.

Ex: 1500(g/ml x 0,002 = g/kg de SF

- Aps este calculo, desconta-se ou acrescenta-se de acordo com o resultado do branco de soluo.

- Clculo do branco de soluo:

% = [SF] x 100 , onde: M

M = massa de Sulfluramida padro (pureza = 97%)

[SF] = resultado real da concentrao de sulfluramida

%= porcentagem usada no calculo final da Isca Formicida e do Produto Tcnico(Sulfluramida).

- Calculo do Produto Tcnico(Sulfluramida)

% = [SF] x 100 , onde: M

M= massa do Produto Tcnico

[SF]= resultado real de sulfluramida presente na amostra

Aps estes clculos, desconta-se ou acrescenta-se de acordo com o resultado do branco de soluo.

- Calculo do Premix

% = [SF] x 100 , onde: M

M= massa do Premix

[SF]= resultado real de sulfluramida presente na amostra.

Aps estes clculos, desconta-se ou acrescenta-se de acordo com o resultado do branco de soluo.

Condies cromatograficas para o mtodo 2:1- Forno

Temperatura inicial: 90oC

Tempo inicial: 2 minutos

Velocidade de Aquecimento 1: 4oC/min

Temperatura final 1: 115oC

Tempo final 1: 0 min

Velocidade de aquecimento 2: 20oC/min

Temperatura final-2: 180oC

Tempo Final 2: 0 min

2- Coluna

Temperatura mxima: 325oC

Modo: Fluxo Constante

Fluxo de H2 inicial: 10mL/mim

Presso nominal: 7,5 psi

Velocidade Mdia: 33cm/seg

3- Injetor

Modo: Split

Gs de arraste: H2

Temperatura: 250oC

Presso: 7,5 psi

Split radio: 20:1

Fluxo total:28mL/min

Fluxo gs saver: 20mL/min

Tempo gs saver: 2,0min

4- Detector

Tipo: Fid

Temperatura: 270oC

Fluxo de H2: 30mL/min

Fluxo de ar sinttico: 350mL/min

Modo: Constant columm +makep flow

Gs de mak-up: N2

Fluxo combinado: 30mL/min

5- Make-Up

N2 (Nitrognio): 29mL/min

6- Injeo Manual

Voluma de injeo: 1microlitro no modo split 1:20.