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Free Powerpoint TemplatesUNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE CENTRO DE CINCIAS DA SADE CURSO DE FARMCIA

ESTUDO DA ATIVIDADE ANTIGENOTXICA DO LTEX DE Euphorbia tirucalli PELO TESTE DO MICRONCLEO EM MEDULA SSEA DE RATOS Dborah Munique Nogueira de Sousa

Banca examinadora: Profa. Dra. Aline Schwarz (Orientadora UFRN) Profa. Dra. Vivian Silbiger (UFRN) Msc. Iris Ucella de Medeiros

Natal, 16 de junho de 2011.

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Introduo

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O homem est exposto diariamente concentraes sub-txicas de uma gama de substncias que podem provocar mutaes (ALBERTS et al., 2002); Sabe-se que essas substncias, por serem altamente reativas, provocam desde defeitos hereditrios, oriundos de mutaes em clulas germinativas, at a formao de tumores benignos ou malignos, resultantes de alteraes em clulas somticas (RIETJENS et al., 2005); Somente neste ano de 2011 estima-se que surgir mais de 489.270 novos casos de cncer no Brasil (BRASIL, 2009).

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Introduo


Devido a grande quantidade de efeitos adversos e ao insucesso oriundos dos tratamentos usuais (radioterapia, quimioterapia e cirurgia), muitos pacientes aderem s terapias complementares e/ou alternativas (CASSILETH e DENG, 2004); Sabe-se que diversas plantas medicinais podem possuir efeito anticarcinognico tais como a Chenopodium ambrosioides, popularmente conhecida como mastruz (KIUCHI et al., 2002; LIU, 2004; NASCIMENTO et al., 2006); a Annona muricata, conhecida por graviola (KOJIMA et al., 2008) e o cacto Opuntia fcus indica, conhecida por palma (NETO et al., 2005).

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Introduo


O uso emprico etnofarmacolgico dos extratos etanlico e aquoso do ltex de E. tirucalli como um agente antitumoral bem difundido na medicina popular para tratar doenas crnico-degenerativas (FURSTENBERGER, 1985; GARCIA et al., 2010); A espcie Euphorbia tirucalli Lineu (aveloz), pertence famlia Euphorbiaceae, de origem africana e tem distribuio cosmopolita (CORREIA, 1994; VARRICCHIO et al., 2008); O ltex custico de E. tirucalli, de acordo com a literatura, pode possuir atividades duplas: co-carcinognico e anticarcinognico (HECKER, 1968; SIGIURA, 1994; BOSCH, 2004); O grau de esterificao da cadeia diterpnica prediz a atividade promotora tumoral ou antitumoral do ltex dependendo das condies Page 4 ambientais (DATTA et al., 1999; WADA et al., 2002).

Introduo


Outras atividades tambm tm sido atribudas ao ltex como moluscicida (TIWARI E SINGH, 2005; AFONSO-NETO et al., 2010), larvicida (YADAV et al., 2002; RAHUMAN, 2008; RAMOS et al., 2009; MWINE et al., 2010), antiviral (BETANCUR-GALVIS et al. 2002; MAREGESI et al., 2010), citotxica (VALADARES et al, 2006) e antimicrobiana (LIRIO et al., 1998; PAREKH e CHANDA, 2006).

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Fontes:http://www.tudosobreplantas.com.br/blog/index.p hp/2011/01/26/avelos-e-eficiente-contra-o-cancer/

Fonte: http://www.princesadebobes.com.br/2010/07/hospitalalberteinstein-faz-pesquisa-contra-o-cancer/

Fonte: http://www.einstein.br/espaco-saude/tecnologiae-inovacao/Paginas/avelos-um-aliado-contra-oPage 6 cancer.aspx

Introduo


Neste estudo, o extrato aquoso de E. tirucalli a 0,05% (v/v) foi testado para a toxicidade geral e para a genotoxidade in vivo em clulas da medula ssea de ratos Wistar, utilizando como parmetro, o teste do microncleo. O teste do microncleo amplamente utilizado na deteco de alteraes provocadas por agentes clastognicos (que quebram cromossomos) e aneugnicos (que interferem nas fibras do fuso mittico) (RABELLO-GAY et al. 1991).

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Introduo


Microncleo (MN) ou corpsculo de Howell-Jolly: um pequeno corpo de DNA, localizado no citoplasma; aparece na telfase e resultante de fragmentos de cromossomos ou de cromossomos inteiros. Pode haver um ou mais por clula; Eritrcito policromtico (EP): um eritrcito jovem, que ainda contm ribossomos. Eritrcito normocromtico (EN): eritrcito maduro, sem ribossomos; O teste se caracteriza pela observao do efeito do agente testado em EP anucleados, que tm vida curta, e qualquer MN encontrado representa dano cromossmico recente.

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Introduo


Fonte: http://faqbio.blogspot.com/2011/04/ficha-resumo-divisao-celular-mitose_29.html Fonte: Adaptado de http://faqbio.blogspot.com/2011_04_01_archive.html

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Soluo aquosa De uma planta autenticada (nmero de registro: Euphorbia tirucalli L. - 10.110 D.M.N. Sousa) foi coletado 50l do ltex, que foi adicionado em um balo volumtrico de 100 mL. O volume do balo foi completado com gua destilada; A soluo foi feita minutos antes da administrao.

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Materiais e mtodos Templates Free Powerpoint Animais 20 ratos Wistar machos com 60 dias de vida (Protocolo CEUAUFRN: 040/2010); Foram alojados individualmente em gaiolas de polipropileno (40x50x20 cm), mantidas em sala adequada com temperatura (23 a 26 C) e umidade relativa do ar controlados e ciclo de luz claro/escuro de 12h; gua e rao foram oferecidas ad libitum durante todo o procedimento experimental; Os animais foram divididos em trs grupos: controle (n=6), que recebeu gua por gavagem diariamente, e dois grupos experimentais (n=7/grupo) que receberam, tambm por gavagem, 0,5mL ou 1,0mL da soluo aquosa do ltex 0,05% (v/v) diariamente, por 30 dias. Page 11

Materiais e mtodos Templates Free Powerpoint Animais Durante todo o tratamento o consumo de rao e a ingesto hdrica foram mensurados; Os animais foram pesados diariamente;

Ao final do tratamento (dia 30) os animais foram subdivididos em dois grupos menores. Metade recebeu soluo salina 0,9% (i.p.) e a outra metade recebeu ciclofosfamida 50mg/kg (i.p.); 24h aps, os animais foram submetidos eutansia com tiopental (70mg/kg; i.p.) para a exteriorizao do fmur e coleta de medula ssea utilizado no teste do microncleo.

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Controle + salina (n=3) Controle Controle + ciclofosfamida (n=3)

Soluo aquosa + salina (n=3) 0,5 mL da soluo aquosa Soluo aquosa + ciclofosfamida (n=4)

Soluo aquosa + salina (n=3) 1,0 mL da soluo aquosa Soluo aquosa + ciclofosfamida (n=4) Page 13

Materiais e mtodos Templates Free Powerpoint Teste do microncleo

Corante RosenfeldFonte: arquivo pessoal.

5 minutos 1000 rpm

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Materiais e mtodos Templates Free Powerpoint Leitura das lminas Foi realizada a contagem e anlise de 1000 eritrcitos por lmina, em microscpio ptico com objetiva de aumento de 100 vezes (leitura em zigue-zague); Considera-se como normal a ocorrncia de 03 eritrcitos policromticos micronucleados (EPMN) para cada 1000 EP. Assim, foi anotada a frequncia de EPMN; Foi realizada tambm a contagem de EP e EN com o objetivo de verificar a proporo entre clulas jovens e maduras; A diminuio na proporo de eritrcitos imaturos (EP) reflete uma diminuio na relao EP/EN, sendo isso um parmetro de citotoxicidade ou depresso celular (HEDDLE E SALAMONE, 1981).Page 15

Materiais e mtodos Templates Free Powerpoint Leitura das lminas A colorao de Rosenfeld (Giemsa modificado) eritrcitos policromticos de normocromticos: diferencia

a) Eritrcito policromtico micronucleado (EPMN) b) Eritrcito policromtico (EP) c) Eritrcito normocromtico (EN)http://eduep.uepb.edu.br/rbct/sumarios/pdf/mutagenese.pdf

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Materiais e mtodos Templates Free Powerpoint Estatstica Foi empregada a anlise de varincia ANOVA seguida do post-hoc teste de Tukey, quando necessrio, na anlise dos dados obtidos. Para todos os dados foi considerada a diferena de 5%.

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Resultados


Consumo de rao, ingesto hdrica, peso corporal e ganho de peso corporal: A anlise de varincia revelou que os diferentes tratamentos no foram capazes de provocar alteraes no consumo de rao e na ingesto hdrica dos animais experimentais quando comparados com o grupo controle (Figuras 1 e 2); O peso corporal (dados no apresentados) e o ganho de peso corporal total (calculado a cada trs dias - Figura 3) tambm no foram alterados pelos tratamentos;

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Resultados


Controle 0,5mL da soluo aquosa 1,0mL da soluo aquosa70

65

Consumo de rao (g)

60

55

50

45

40 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30

Perodo de tratamento

Figura 1- Consumo de rao (g) de ratos tratados ou no (grupo controle) com 0,5 mL ou 1,0 mL da soluo aquosa (0,05% v/v) do ltex de E. tirucalli, por 30 dias. (p>0,05 ANOVA; mdia erro padro). Page 19

Resultados


Controle 0,5mL da soluo aquosa 1,0mL da soluo aquosa160

150

*140

Volume (mL)

130

*120

110

100

90 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30

Perodo de tratamento

Figura 2- Ingesto hdrica (mL) de ratos tratados ou no (grupo controle) com 0,5 mL ou 1,0 mL da soluo aquosa (0,05% v/v) do ltex de E. tirucalli, por 30 dias. (*p

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