rdc 53/2015 tornando prático o

RDC 53/2015 – Tornando prático o

estudo de perfil de degradação

Ministrante: Caroline Lima de Oliveira

RDC 53/2015 – ESTUDO DE PERFIL DE DEGRADAÇÃO

AGENDA

• Premissas dos estudos de degradação forçada → Planejamento dos ensaios de degradação forçada

• Premissas para o desenvolvimento de métodos indicativos de estabilidade → Planejamento estratégico

• Balanço de massas → justificativas técnicas e ortogonalidade

• Relatório de perfil de degradação → Elaboração

• Estudo de caso e discussão final

RDC 53/2015 – ESTUDO DE PERFIL DE DEGRADAÇÃO

Premissas dos estudo de degradação forçada

• Planejamento dos ensaios de degradação forçada

• Hidrólise ácida e Hidrólise básica

• Oxidação por peróxido

• Oxidação por íons metálicos

• Calor

• Umidade

• Luz

RDC 53/2015 – ESTUDO DE PERFIL DE DEGRADAÇÃO – ESTADO DA ARTE






• Calor

• Umidade

• Luz


Premissas dos estudo de degradação forçada → Planejamento dos ensaios de degradação forçada

• Quais as literaturas e conhecimentos prévios recomendados?

DRUG MASTER FILE

QUÍMICA ORGÂNICA



• Quais os conceitos relevantes que extraímos de todas essas literaturas?

Solubilidade

pKa

Log P

Susceptibilidade de grupos químicos a condições de estresse

Máximos de absorção e Perdas de cromóforos

Viabilidade de se realizar determinada condição de estresse

Ortogonalidade

Justificativas técnicas



Conhecendo o Log P do ativo (s) e Produtos de degradação

Tretinoína

Log P: 6,04

Hidroquinona

Log P: 1,37

Compostos polares Compostos apolares

Log P → Coeficiente de partição:



Conhecendo o Log P do ativo (s) e Produtos de degradação → Ivabradina e seus produtos de degradação (PDs)

Molécula de Ivabradina

PDs da Ivabradina

(*) Pikul. P et al - Forced Degradation Studies of Ivabradine and In Silico Toxicology Predictions for Its New Designated Impurities



Conhecendo o Log P do ativo (s) e Produtos de degradação→ Ordem de eluição de PDs → Fase reversa


• Log P:

• Melhor diluente para uma melhor recuperação/extração do ativo e de seus produtos de

degradação presentes no IFA isolado ou no produto acabado.

• Previsão de ordem de eluição em cromatografia por fase reversa;

• Escolha do aditivo de fase móvel ou proporção aquosa/orgânica da fase móvel;




Conhecendo a solubilidade do ativo (s) e produtos de degradação → pKa

• Parâmetro chave para avaliar a solubilidade por pH → pKa

• Ácidos fracos: Doadores de prótons

• Bases Fracas: Receptores de prótons

• Para IFAs que são ácidos fracos: solubilidade em água aumenta exponencialmente quando o pH ultrapassa

o valor de seu pKa. Caso o ácido possua mais de um grupo ionizável, a cada pKa ultrapassado a solubilidade

aumentará de forma ainda mais elevada.

• Para IFAs que são bases fracas: Cada vez que o pH cai abaixo de um de seus pKas a solubilidade em água

aumenta de forma ainda mais elevada.



Ácido acetilsalicílico → Carater Ácido

pKa: 3,41

Conhecendo a solubilidade do ativo (s) e Produtos de degradação → pKa

Chemicalize



Conhecendo a solubilidade do ativo (s) e Produtos de degradação → pKa

Diazepam → Carater básico

pKa: 2,92

Chemicalize



• pKa:

• Necessidade de neutralização ou ajuste de pH para ensaios aquosos de degradação forçada;

• Necessidade de co-solvente para ensaios aquosos de degradação forçada;

• Viabilidade de se atingir um endpoint de concentração de degradante;

• Definição de fase móvel.



Qual o meu “n” de amostras a serem degradadas?

Medicamento com

1 ativo

Matéria-prima (IFA)

Produto

Placebo

Associação

2 ou mais ativos

Matérias-primas isoladas

Produto

Placebo real (presença de ativos)

Branco do processo

Branco do processo

Cada IFA isolado + excipientes

v

Mais de um fabricante de IFA?



Qual amostra de medicamento utilizar no estudo de degradação forçada?

• Lote bancada → exigência mínima → usar preferencialmente o mesmo lote em todo o estudo;

• Avaliação crítica sobre lote técnico e lote piloto → Avaliar impactos do escalonamento!

• Mesmo medicamento com diferentes concentrações (Fórmula proporcional) → Utilizar

qualquer apresentação;

• Formulações quantitativamente diferentes → utilizar a maior relação excipiente e ativo →

menor concentração de ativo;

• Formulações qualitativamente diferentes → Avaliar o estresse para todas as formulações.







• Calor

• Umidade

• Luz


Premissas dos estudo de degradação forçada → Hidrólise ácida e hidrólise básica

• A hidrólise envolve a reação de clivagem de ligações a partir de moléculas de água:

• Água presente em quantidades significativas em IFAs (hidratos), em excipientes e em nosso ambiente.

• Catalisada por meio ácido ou básico;

• Dependente de fatores como: sais e tampões, força iônica, solventes e excipientes.

• É dependente do pKa da molécula a ser estudada → É necessário que as moléculas estejam ionizadas e

tenham bons grupos abandonadores para favorecer a ocorrência de hidrólise.

• Grupos funcionais mais passíveis de hidrólise ácida e básica: Ésteres; lactonas; amidas; lactamas.

Éster Lactona Amida Lactama



• Hidrólise catalisada por ácido



• Hidrólise promovida por base (consumo da base)



• Na presença de agentes nucleofílicos (H2O):

• Ésteres gerando ácidos carboxílicos e álcool;

• Lactonas gerando ácidos carboxílicos com abertura do anel lactônico.

Moléculas ionizadas:

Favorecimento da reação

de hidrólise

Baertschi, S.W., Alsante, K. M. and Reed, R.A. Pharmaceutical Stress Testing: prediction drug degradation, ed. 2ª, v. 210, 2011.



• Na presença de agentes nucleofílicos (H2O):

• Amidas gerando ácidos carboxílicos e aminas;

• Lactanas gerando ácidos carboxílicos com abertura do anel lactâmico.




• Como um excipiente pode favorecer a hidrólise?

• Excipientes que são higroscópicos;

• Excipientes que possuem impurezas que podem agir como ácidos e bases.

Excipientes Como podem favorecer a hidrólise?

Celulose Absorve água

Fosfato de cálcio dibásico anidro / diidratado Ácido (pH 2,5)/ pode liberar água

Estearato de magnésio Absorve água; básico sob condições de umidade

Óxido de silício Absorve água

Croscamelose Absorve água; básico sob condições de umidade

Acidulantes ( Ácido cítrico, Ácido ascórbico) Confere baixo pH

Carbonato de cálcio Confere alto pH



• Se problemas de solubilidade forem encontrados, utilizar co-solventes preferencialmente

apróticos em volume suficiente para solubilizar o IFA → avaliar quão diluído foi seu agente

estressante.

O uso do metanol como co-solvente em casos específicos precisa ser avaliado → Avaliar criticamente o

perfil de degradação!

pH ácido pH neutro pH básico

Acetonitrila Acetonitrila Acetonitrila1

DMSO N-metil Pirrolidona DMSO

Ácido acético Diglima

Ácido propiônico p-Dioxano

1. 1M de NaOH e acetonitrila são miscíveis somente para soluções contendo 20% de acetonitrila ou menos. Caso seja observada a

formação de uma mistura de duas fases, alterar o co-solvente.



• Caso o uso de co-solventes não solucione o problema do ensaio insolúvel sob um pH aplicado:

• Avaliar o uso de tampões com pH controlado → Avaliar o pka da molécula e definir em qual pH a

mesma não encontra-se neutra → Trabalhar com valores de pH que mimetizem condições

ácidas e básicas!

• Preparar uma solução mais concentrada da amostra a ser testada e estressar uma alíquota

deste preparo → Concentração final do ensaio deve se a definida em metodologia!

• Avaliar se a formulação apresenta excipientes incompatíveis com pH ácidos ou básicos → pH

básico - Hipromelose

Se as estratégias não forem bem-sucedidas, utilizar o histórico como justificativa para não atingir o

endpoint ou até mesmo a não realização da condição!







• Calor

• Umidade

• Luz


Premissas dos estudo de degradação forçada → Oxidação por peróxido de hidrogênio e íons

metálicos (Cu II e Fe III)

• A reação de oxidação é um dos mecanismos mais comuns de degradação dos fármacos.

• Baseia-se na transferência de elétrons provenientes de metais para formar ânions e cátions

reativos e no ataque nucleofílico do IFA ao peróxido:

• Moléculas muito funcionalizadas e de caráter mais básico tendem a sofrer oxidação:




Grupamentos químicos mais suscetíveis a oxidação: Ligações alfa de Éteres e aminas, aminas

secundárias e terciárias e sulfetos.

Ligação alfa de éteres e aminas → carbono alfa reage com o radical hidroperoxila ROO. formando

hidroperóxido com sucessiva degradação a éster e aldeído → Atenção para condições drásticas de

oxidação e formação de PDs secundários.




Grupamentos químicos mais suscetíveis a oxidação: aminas primárias, aminas secundárias e

terciárias.

• Quando desprotonadas são mais suscetíveis a oxidação → avaliar o pka, pois o pH da solução

de peróxido é ácido;

• Aminas primárias: Formação de hidroxilaminas → PDs instáveis e de difícil isolamento →

ALERTA para Balanço de massas!

• Aminas secundárias, terciárias e heterocíclicas: Formação de n-oxides;

ATENÇÃO: Para terciárias → Muito comum observar na estabilidade de longa duração → reação

com peróxido presente nos excipientes da formulação ( exemplos: PEGs, polisorbatos, povidona,

crospovidona).


Premissas dos estudo de degradação forçada → Oxidação por peróxido de hidrogênio e íons (Cu

II e Fe III)

Grupamentos químicos mais suscetíveis a oxidação: aminas primárias, aminas secundárias e

terciárias.

Para aminas primárias e secundárias → formação de hidroxilaminas

Para aminas terciárias → formação de óxidos de aminas terciárias → n-óxidos


Premissas dos estudo de degradação forçada → Oxidação por peróxido de hidrogênio íons (Cu II

e Fe III)

Grupamentos químicos mais suscetíveis a oxidação: Sulfetos oxidados a sulfóxidos e sulfonas

ATENÇÃO: Desprotonação também favorece o mecanismo de oxidação!

Mecanismo semelhante a oxidação de aminas terciárias → SN2




• Íons metálicos:

• Cu II e Fe III → CuCl2 (cloreto cúprico) ou FeCl3 (cloreto férrico)

• Condição: 24 horas.

• Sempre a temperatura ambiente: Se houver a possibilidade de processo de redox a

temperatura não influenciará!




• Aminoácidos são espécies extremamente suscetíveis a íons metálicos → formação de

quelatos!

• Compostos heterocíclicos tendem a formar quelatos;

• Compostos com a presença de enxofre → altamente reativo na presença de íons

metálicos

• Exemplo: Acetilcisteína → Presença de enxofre → Vários estados de oxidação

→ Baixa reprodutibilidade.




Premissas de preparo do ensaio: Oxidação por peróxido

• Co-solventes adequados: Álcoois de cadeia pequena (Metanol e etanol) → controlam o poder

oxidativo do peróxido.

• Utilizar balões âmbar → Luz catalisa reações de oxidação!

• Evitar o uso de acetonitrila → Extremamente reativa na presença de peróxido → Formação do

radical reativo formil cianeto extremamente reativo a compostos funcionalizados (éteres e amidas,

aminas secundárias e terciárias, sulfetos e fenóis) com caráter básico.




Premissas de preparo do ensaio:

• Para o ensaio de íons metálicos: Avaliar se há a presença de excipientes que sejam complexantes: EDTA por

exemplo forma quelatos que são insolúveis impossibilitando o ensaio.



Avaliação do T0 em estresses úmidos: preparar o ensaio com o seu produto ou IFA direto no degradante

avolumando com diluente na sequencia e analisando → sem nenhum período de incubação.

• Definição de preparo de amostra → Resolução de problemas de limitação analítica;

• Definição de preparo de amostra referência;

• Investigação de alta susceptibilidade do IFA frente a condição de estresse → Degradação instantânea;

• Investigação de limitação técnica para a realização do ensaio → Justificativa para não chegar no endpoint ou

até mesmo não realizar o ensaio;

• Evitar perder dias de estudo, principalmente o endpoint de tempo de exposição é atingido;

• Definição da necessidade de se realizar a etapa de neutralização ou correção para o pH do referência (pH

ótimo) em virtude do peak shape do ativo.







• Calor

• Umidade

• Luz


Premissas dos estudo de degradação forçada → Calor

• Fármacos com ligações fracas possuem maior tendência a pirólise → Por ex: Ligações sigmas de

carbono e um átomo eletronegativo;

• Descarboxilação também é muito comum → -CO2.

• Calor seco → Amostras devidamente preparadas em balão âmbar e fechado a 60°C em ESTUFA.

• Recomendação: Única variável é o tempo → não aumentar a temperatura ou fazer uso de

banho-maria ou refluxo

Falta de reprodutibilidade


Premissas dos estudo de degradação forçada → Mecanismo de reações sob calor

• Rearranjos → transformações químicas em moléculas sob a presença de calor agem como nucleófilos e

eletrófilos:

• Isomerização conformacional → Ocorre quando os átomos ligados aos carbonos de compostos

saturados estão em conformações diferentes em virtude da rotação do eixo da ligação.



Premissas dos estudo de degradação forçada → Mecanismo de reações sob calor

• Rearranjos → transformações químicas em moléculas sob a presença de calor agem como

nucleófilos e eletrófilos:

• Polimerização → carbonos eletrofílicos podem reagir com nucleófilos em cadeia e

formar dímeros, trímeros entre outros polímeros: Polimerização da ampicilina








• Calor

• Umidade

• Luz


Premissas dos estudo de degradação forçada → Umidade

• Condição de umidade → 75 %UR → Susceptibilidade comum para moléculas que ionizam em pH

neutro - Hidrólise

• Amostras devidamente preparadas em balão âmbar aberto com a menor temperatura possível

de preferência em CÂMARA DE ESTABILIDADE qualificada.

• A única variável é o tempo → não aumentar a temperatura ou umidade.

• Aplicado a amostras sólidas e semissólidas de produto acabado.

• Suspensão extemporânea → expor o pó da suspensão a umidade e depois ressuspender para

análise.







• Calor

• Umidade

• Luz


Premissas dos estudo de degradação forçada → Fotólise → Preparo do ensaio de Luz branca e

luz UV

• Sólidos e Semissólidos: camada fina e uniforme de pó/creme/pomada.

• Amostras líquidas: em frasco do tipo headspace “deitados”.

• Cuidado com sombra e efeito estufa!

• Controle escuro → avaliação de um possível aquecimento na câmara.

Sólidos e Semissólidos Líquidos

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Premissas dos estudo de degradação forçada → Fotólise → Preparo do ensaio de Luz branca e

luz UV

• Luz branca: 1,2 klux hora

• Exposição: 1 a 2 ciclos

• UV: 200 Watt.hora/m²

• Exposição: 1 a 2 ciclos

• A única variável é a exposição a radiação → Não aumentar o tempo de exposição após

conclusão dos ciclos!


Premissas dos estudo de degradação forçada → Fotólise → Luz branca e luz UV

• Grupamentos mais suscetíveis a degradação por luz: carbonilas, nitroaromáticos, n-Oxides, alcenos,

arilcloretos, sulfetos e polienos.

• Isomerização



Desenvolvimento de métodos indicativos de estabilidade

• Escolha da técnica analítica → Seletividade e Especificidade do método

• Definição da concentração de trabalho

• Preparo da amostra

• Pureza cromatográfica (via DAD e MS)



• Escolha da técnica analítica → Seletividade e sensibilidade do método

• Deve ter seletividade para o IFA em presença dos seus prováveis produtos de degradação.

• Deve ser capaz de ser sensível o bastante para quantificar os prováveis produtos de

degradação do IFA, nas concentrações limites.

• Precisão e exatidão no limite quantificação (≤ limite de notificação);

• Avaliar sempre a influencia da fase móvel na linha de base

SENSIBILIDADE E SELETIVIDADE COMO ATENDER?



• Escolha da técnica analítica → Seletividade do método

Para seletividade → escolhendo a técnica de separação → HPLC/UPLC; GC;

1. O IFA e seus possíveis produtos de degradação apresentam polaridades semelhantes, Log P

próximos?

2. pKa próximos?

3. Os PDs são voláteis em detrimento ao IFA ou vice-versa?

4. Qual o melhor modo de eluição?

5. Qual a melhor fase estacionária?

6. Método já deve ser compatível com a espectrometria de massas para uma futura identificação?

7. Qual melhor amostra a ser utilizada para definição de seletividade?



• Escolha da técnica analítica → Sensibilidade do método

Para sensibilidade → escolhendo a técnica de detecção→ DAD, Espectrometria de massas, CAD,

fluorescência, light scattering, RID, entre outros.

Detector de arranjo de diodos → DAD → Pureza de pico

1. O ativo e seus PDs possuem cromóforos?

2. Qual o máximo de absorção do ativo? É o mesmo dos seus PDs? Será apenas um comprimento de onda

no método?

3. Os aditivos e solventes utilizados na fase móvel oneram a avaliação de pureza de pico ou linha de base?



• Quando a presença de aditivos comprometem a linha de base e a precisão e exatidão do LOQ é reduzida:

1. Quanto menor a

concentração de EDTA

menor a perturbação

da linha de base e

mais precisas e exatas

são as replicatas;

2. Relação sinal/ruído

favorecida.






• Pureza cromatográfica (via DAD e MS)



• Definição da concentração de trabalho e preparo de amostra → Definição de dose máxima

diária (DMD) e os limites de notificação e identificação a serem trabalhados

Há informação

de

DMD na bula?

Ir com a DMD

no site coifa da

ANVISA

Avaliar bulas de medicamentos

referência / discutir junto a equipe

médica (estudo clínico) na

ausência do medicamento

referência

Ir com a DMD

no site coifa

da ANVISA


https://coifa.anvisa.gov.br/calculos.html



• Definição da concentração de trabalho e Preparo da amostra

O preparo da amostra (100%) é definido pelos valores dos limites de notificação e identificação

Critérios:

• Sinal/ruído do Limite de notificação (LN) e Limite de identificação (LI) → > 20 no mínimo;

• Assimetria de pico do LN e LI → 0,8 a 1,2 → satisfatórios.

LI LN



• Definição da concentração de trabalho e Preparo da amostra

• Para impurezas desconhecidas: Os produtos de degradação desconhecidos podem ser quantificados a

partir de solução de padrão do fármaco no limite de identificação.

• limite de quantificação: ≤ limite de notificação para impurezas desconhecidas.

LI LN

PRECISÃO E EXATIDÃO - LOQ






• Pureza cromatográfica (via MS e DAD)

Motivos de indeferimento:



• Pureza cromatográfica (via MS e DAD)

• O que o guia 4/2015 traz de exigências para pureza de pico?

• Pico do ativo no LN e no LI

• Picos de impurezas

• Pico do ativo na concentração 100% após estresse

Não é necessário apresentar pureza de pico → baixas concentrações

Apresentação de pureza de pico



• Pureza cromatográfica → via DAD Os espectros ao longo do pico são avaliados

e comparados com o ápice do pico

Sem diferenças espectrais o pico está puro?



• Pureza cromatográfica → via DAD

• Garantimos a ausência de isômeros do ativo?

• Qual o valor de Absorbance threshold a ser utilizado?

• Há balanço de massas?

• Foi necessária saturação de pico para atingir limites tão baixo?

• Qual a diluição aplicada?

• Fase móvel interfere na avaliação de pureza de pico? Uso de cut-off? Justificativa técnica?

• IDEAL: USO DE OUTRAS TÉCNICAS COMO LC/MS, NMR, IR por exemplo.



• Pureza cromatográfica → via MS → Mais sensível e específico que o DAD

• Os espectros de massas são registrados sucessivamente sobre todo o intervalo de eluição do pico suspeito.

• Se durante a varredura desse espectro massas adicionais forem detectadas, o cromatograma de massas

correspondente é extraído → Comparação com o espectro de massas do padrão do ativo na mesma

concentração.

• Impureza não detectada por DAD → sem cromóforo ou baixa concentração → MS oferece detecções

altamente específicas sem interferências, para o monitoramento e identificação de impurezas.



• Pureza cromatográfica

Mundo real → ANVISA: Avaliação da pureza de pico e o balanço de massas são

complementares. Para técnicas sem o peak purity (FL, LS, CAD, RID) → utilizar técnicas

complementares


Balanço de massas (BM)

• Justificativas técnicas para falta de balanço de massas

• Uso de técnicas ortogonais


Balanço de massas (BM) → Quando o BM se apresentar abaixo de 100%?

1º ponto ser questionado: Metodologia de preparo de amostra

• Ainda estamos com problemas de solubilidade do IFA?

• O preparo do referência está muito distinto ao do ensaio?

• O problema foi observado apenas para o produto?

• Placebo interfere na recuperação dos PDs? Mudança de aspecto prejudica a recuperação do ativo e PDs?



1º ponto ser questionado: Metodologia de preparo de amostra

• Instabilidade dos PDs e do IFA em solução?

• É necessário um diluente específico para avaliar os PDs formados?

• Ensaios secos também estão sem BM aceitável?

• Corrigiu-se pelo teor?



2º ponto ser questionado: Quando o problema pode ser o método?

• O que houve com o sinal analítico do ativo e seus PDS?

• As impurezas podem não estar sendo eluídas pela coluna escolhida?

• Impurezas saem no vzero? Redesenvolvimento!

• Há coeluição com o IFA? Possível para amostras com picos do ativo saturados! Temos pureza de pico?

• Possibilidade de modificação do grupo cromóforo: desvio de fator resposta de determinado PD?



Quando o problema pode ser o método?

• Comparou-se o espectro de UV de cada impureza com o do(s) IFA(s), verificando se houve alteração dos máximos de

absorção UV e na relação entre esse máximo e algum outro comprimento de onda de baixa absorbância?

• Possibilidade de destruição do grupo cromóforo e consequente não detecção de determinada impureza? → Análise em

outro comprimento de onda ou uso de técnicas ortogonais (LC-MS/MS, GC/MS, RMN (Apenas para a MP);

• Degradação secundária? → Controlar a degradação para obter apenas 10%;

• Perda por volatilização? Uso de frascos headspace e avaliação pela técnica de GC/MS;



Após as investigações citadas, obtidas as respostas que não condenem o método:

Justificativa técnica é factível e embasada para a ausência de BM adequado!


Balanço de massas (BM)

• Como calcular?

• Justificativas técnicas para falta de balanço de massas

• Uso de técnicas ortogonais


Balanço de massas (BM) → Justificativas técnicas e ortogonalidade

• Com toda a análise crítica dos resultados realizadas, as possíveis justificativas:

Sem uma técnica ortogonal:

Justificar pela hipótese de desvio de fator resposta analítica no DAD:

• Para desconhecidas → avaliar os espectros de absorção quando o software fornecer e comparar com o

do ativo;

• Para conhecidas → Quantificação contra padrão da impureza;

• Mais de um comprimento de onda? Como calcular o BM?

• PDs de ativos associados de difícil discriminação?


Balanço de massas → Justificativas técnicas e ortogonalidade

• Com toda a análise crítica realizada dos resultados obtidos, as possíveis

justificativas:

• Inviabilidade do uso de desvio de fator resposta analítica no DAD → Perdas de cromóforos;

• Uso de técnica ortogonal com adaptação do método para que o perfil cromatográfico seja o

mesmo independente do detector: MS; CAD; LS, entre outros;

• Preparar a amostra de estresse para análise em outros detectores;

• Apresentar os novos cromatogramas mostrando a presença de pico não observado por DAD;

• Aplicação do método nas amostras de estabilidade→ Há a necessidade de 2 técnicas na

avaliação de estabilidade real?


Ferramentas de identificação → Uso do LC/MS

O método de rotina é compatível com o detector de espectrometria de massas?

Para ser compatível:

Fluxo ideal de fase móvel: inferior a 0,5 ml/min;

Fase móvel ideal: Aditivos e tampões voláteis, água e solventes orgânicos de alta

pureza.

Para métodos de rotina não compatíveis → avaliar a seletividade após adaptação!

Seria uma premissa de desenvolvimento de método indicativo de estabilidade já

compatível?


Ferramentas de identificação → Uso do LC/MS → Aditivos de fase móvel voláteis

Aditivos pKa /pkb

Ácido fórmico pka 3,8

Ácido trifluoroacético pka 0,5

Ácido acético pka 4,8

Formiato de amônio pka 3,8 / 9,2

Acetato de amônio pka 4,8 / 9,2

Bicarbonato de amônio pka 6,3 / 9,2 / 10,3

Hidróxido de amônio pkb 4,7

Ácido Heptafluorobutírico (HFBA) pka 0,4

di n-butilamina acetate pka 11,3


Ferramentas de identificação → Uso do LC/MS → Técnicas hifenadas



Bom desenho experimental e análise crítica

Guia 4/2015


Como elaborar um relatório de estudo de perfil de degradação?


Relatório → Como elaborar um relatório de estudo de perfil de degradação: Análise crítica

Estudo de perfil de degradação

segundo o Guia 4/2015

Parte crítica: Introdução, Discussão do perfil e

conclusão

Parte experimental: Degradação forçada



Introdução:

• Pesquisa / Levantamento bibliográfico / Desenho Experimental;

• DMF: impurezas de síntese, produtos de degradação conhecidos ou não, condições de estresse

(validação), estabilidade do IFA;

• Susceptibilidade da molécula: literatura, predição (Zeneth®);

• Compatibilidade: histórico, literatura, predições (Zeneth®);

• Estudo de estabilidade: acelerada ou de longa duração;

• Especificações: RDC 53/15, compêndios oficiais;

Guia 4/2015



Metodologia:

• Apresentar todos os detalhes do método cromatográfico e de detecção:

• Preparo detalhado da fase móvel; tipo de coluna, uso de temperatura, volume de injeção, dentre outros

parâmetros relevantes.

• Apresentar o uso de mais de um comprimento de onda ou qualquer alteração no intervalo de varredura do

DAD.

• Preparo das amostras:

• Preparo dos padrões (LN e LI) do IFA e das impurezas nas especificações;

• Preparo da amostra referência (Branco, IFA, PA e Placebo);

• Preparo das amostras para o estudo de estresse (Branco, IFA, PA e Placebo) → Descrever uso de co-

solventes, neutralização, limitação analítica.

Guia 4/2015



Discussão do perfil de degradação e conclusão:

• Discutir cada ensaio de estresse separadamente:

• Comparação do perfil do IFA isolado e quando presente no produto acabado;

• Em caso de mais de um fabricante de matéria prima, avaliar o perfil cromatográfico e discutir

sobre a semelhança ou não entre os fabricantes.

• Avaliar criticamente se houve ou não o favorecimento da degradação quando há interação do

IFA com os excipientes no produto acabado;

• Se houverem impurezas conhecidas, sinalizá-las na discussão.

• Discutir se os produtos de degradação encontrados no estresse foram observados nas

amostras de estabilidade acelerada, longa duração ou aceleradíssima → Degradação potencial

versus a degradação real;

• Discutir mecanismos de degradação, se possível.

Guia 4/2015




• Dados brutos

• Apresentação dos cromatogramas de forma organizada;

• Apresentar 2 escalas com visualização do pico principal (125%) e dos produtos de degradação (5% do

125%);

• Apresentação dos seguintes parâmetros cromatográficos:

• Resolução;

• Pureza do pico (relevante somente para os picos dos IFAs) para todas as condições de estresse;

• Assimetria;

• Eficiência da coluna (n° de pratos teóricos).




• Balanço de massas

• Tabela comparando a porcentagem de degradação do(s) IFA(s) com a porcentagem de

aumento de impurezas;

• Discussão sobre o balanço de massas;

• Quedas inferiores a 10% do seu ativo em endpoint aplicado;

• Justificativas técnicas para déficit de balanço de massas;

• Uso de ortogonalidade.

Guia 4/2015




• Conclusão

• Perfil de degradação “potencial” comparado ao perfil de degradação real;

• Discussão sobre o impacto das condições de produção no resultado do perfil de

degradação;

• Discussão sobre os fatores de armazenamento que podem interferir na estabilidade do

produto.

Guia 4/2015



Etapa de identificação

• Identificação

• Após sinalização de PD acima do LI nas amostras de estabilidade, como reportar?

• Injeção de um padrão caracterizado ou farmacopeico de uma substância → Mesmo Tr e o mesmo

espectro de UV no método indicativo de estabilidade;

• Um mecanismo de degradação proposto que leve a uma estrutura confirmada com uma técnica

espectroscópica de caracterização (espectros de massas, de RMN, infravermelho);

• Caracterização conclusiva, realizada com pelo menos duas técnicas espectroscópicas diferentes

(espectros de massas, de RMN, infravermelho).

Guia 4/2015



Com um estudo bem conduzido:

O perfil de degradação real e qualquer desvio de qualidade do produto deve ser

detectado pelo método indicativo de estabilidade (MIE) e sua origem rastreável

(degradação forçada).


Estudos de caso


Estudo de caso: BM justificado por identificação e fator resposta

Molécula C → Degradação em fotólise sem balanço de massas

PD de fotólise da

Molécula CMolécula C

A identificação do PD por massas e RMN explicou a falta de BM na condição de fotólise → Eliminação da

conjugação → Redução da absortividade →1. FR diferente de 1; 2. Máximo de absorção diferente do ativo.


Estudo de caso: BM justificado por identificação e fator resposta

• Molécula C → Necessidade de 3 comprimentos de onda para apresentação do perfil de degradação e definição de balanço de

massas.

Embora o comprimento de onda 252 nm seja o mais discriminativo de impurezas, não há

fechamento de BM → Sempre avaliar os demais comprimentos


Estudo de caso → Construindo um racional preliminar para estudo de perfil de

degradação para cafeína em comprimido analgésico com associação de mais 2 ativos

(Paracetamol + Orfenadrina)

pKa: -1,16

Log P: - 0,55

Extremamente solúvel em água

independente do pH aplicado

Carater altamente básico

Cafeína → base estrutural: xantina, com a diferença de possuir apenas aminas terciárias.

Estrutura química complexa, contendo bastante heteroátomos e funções orgânicas → poucos produtos de

degradação relatados e previstos na literatura.





• Altamente suscetível a hidrólise básica → literatura científica e DMF;

• Estável nas demais condições de estresse → atenção para os demais ativos → estresse do

placebo real determinará a seletividade;

• Sem necessidade de uso de co-solvente para avaliação do IFA isolado e presente no

medicamento;





• Cafeidina principal PD da cafeína sob hidrólise básica;

• As impurezas conhecidas apresentam estruturas

semelhantes → Método gradiente e mais aquoso no

início da corrida!





• Paracetamol se apresenta em uma concentração 8 vezes maior que a cafeína no medicamento;

• Paracetamol mais lábil que a cafeína → baixa resolução dos seus PDs com os PDs da cafeína;

• UPLC;

• Uso de comprimentos de onda distintos:


Estudo de caso → Construindo um racional preliminar para estudo de perfil de degradação

para cafeína em comprimido analgésico com associação de mais 2 ativos (Paracetamol +

Orfenadrina)• Sem Balanço de massas adequado na condição de hidrólise

básica:

• Impurezas desconhecidas com máximos de absorção em

205 nm → péssimo para avaliação de pureza da Cafeína →

275 nm para avaliação!

• Justificativa de desvio de absortividade;

• Cafeidina: FR diferente de 1 → cálculo contra o padrão da

impureza conhecida.


Conclusão

Para um adequado atendimento a RDC 53/2015:

Análise crítica sempre, seja ela experimental ou teórica!

MUITO OBRIGADA!!!

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rdc 53/2015 tornando prático o

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