prÁticas de biofÍsica: exercÍcios...esta apostila é destinada aos estudantes da disciplina de...

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ

PRÁTICAS DE BIOFÍSICA:

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

PROFª BIANCA MENDES MACIEL



DISCIPLINA: BIOFÍSICA PROFª BIANCA MENDES MACIEL


EXERCÍCIOS




EXERCÍCIOS

TURMA _________________________________ GRUPO:




EXERCÍCIOS

(CURSO / ANO)

_________________________________

:

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ – UESCDEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

PROFª BIANCA MENDES MACIEL


(CURSO / ANO):

_________________________________

UESC


__________________________________________________________________

Práticas de Biofísica: exercícios

2

SUMÁRIO

Apresentação .......................................................................................... 3

I. BOAS PRÁTICAS LABORATORIAIS ........................................................... 4

II. INSTRUMENTAÇÃO PARA USO DO LABORATÓRIO EM ATIVIDADE DE BIOFÍSICA ................................................................................................

10

III. EXERCÍCIOS DE SOLUÇÕES I .................................................................... 13

IV. EXERCÍCIOS DE SOLUÇÕES II (Aplicação clínica) ...................................... 18

V. PREPARO DE SOLUÇÕES .......................................................................... 20

VI. PRESSÃO OSMÓTICA ............................................................................... 22

VII. ESPECTROFOTOMETRIA ......................................................................... 26

VIII. EFEITO DA OSMOLARIDADE DO MEIO SOBRE A INTEGRIDADE DAS HEMÁCIAS ...............................................................................................

33

IX. EQUILÍBRIO DE DONNAN (Prática demonstrativa) .................................. 36

X. CROMATOGRAFIA EM PAPEL .................................................................. 39


3

APRESENTAÇÃO

Esta apostila é destinada aos estudantes da disciplina de Biofísica da

Universidade Estadual de Santa Cruz, ministrada pela Profª. Bianca Mendes Maciel. Os

roteiros das aulas práticas (com duração de 1 h e 40 min) tiveram como base algumas

referências (conforme citado abaixo) e foram adaptados de acordo com a

disponibilidade da infraestrutura desta Universidade.

Os estudantes realizarão as aulas práticas em grupos de 3 a 5 membros,

previamente estabelecidos. Os exercícios serão respondidos em grupo ao final de cada

aula e apresentados a Professora para vistoria. No final do semestre, este material

deverá ser encadernado e entregue para correção, em data a ser marcada, e fará parte

do crédito prático da disciplina.

REFERÊNCIAS:

Caliri, M. H. L. Medidas e diluições de drogas. Disponível em:

https://edisciplinas.usp.br/pluginfile.php/49929/mod_resource/content/2/ApostilaDil

uicaoDrogas2007.pdf

Cambraia, J.; Pacheco, S. Práticas de Biofísica. Viçosa: \UFV, 1997.

Degani, A. L. G.; Cass, Q. B.; Vieira, P. C. Cromatografia um breve ensaio. Química Nova

na Escola nº 7, 1999. p. 21-25.

HENEINE, I. F. Biofísica Básica. São Paulo: Atheneu, 2000.

Nardy, M. B. C.; Stella, M.B.; Oliveira, C. Práticas de laboratório de bioquímica e

biofísica: uma visão integrada. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2013.

NOME DOS COMPONENTES:

OBJETIVOS:

•••••

CONSIDERAÇÕES:

Adaptado de: Nardy, M. B. C.; Stella, M.B.; Oliveira, C. Práticas de laboratório de

bioquímica e biofísica: uma visão integrada. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2013.

�

1.

2.

3.

4.

Para que o aluno se familiarize com o ambiente em que desenvolverá as atividades, ele

deve conhecer o espaço físico no qual trabalhará, as normas de seguran

procedimentos

�

menos, suas consequências, minimizadas.

1.

2.

3.

4.

5.


OBJETIVOS:

• Familiarizar o estudante com • Conscientizar o estudante das regras básicas de segurança laboratorial;• Saber identificar os pictogramas de perigo químico;• Classificar os resíduos produzidos no laboratório de aula prática;• Apresentar a norma de rotulagem de produtos químicos.

CONSIDERAÇÕES:



� IntroduçãoTodo trabalho de laboratório passa por quatro fases:

1. Familiarização do estudante com o ambiente do laboratório.2. Desenvolvimento de habilidades para o uso de aparelhos.3. Execução do experimento proposto visando aos resultados finais.4. Interpretação dos resultados



procedimentos-

� Normas Os acidentes pod


1. Usar sempre jaleco;2. Usar calça comprida, cabelo preso e cal3. Não usar relógios, pulseiras, anéis ou outros ornamentos durante o trabalho no

laboratório

4. Não beber, comer ou fumar no 5. Caminhar lentament

sabor, odores devem ser verificados com muito cu


I.


Familiarizar o estudante com

Conscientizar o estudante das regras básicas de segurança laboratorial;

Saber identificar os pictogramas de perigo químico;

Classificar os resíduos produzidos no laboratório de aula prática;

Apresentar a norma de rotulagem de produtos químicos.

CONSIDERAÇÕES:



Introdução

trabalho de laboratório passa por quatro fases:

Familiarização do estudante com o ambiente do laboratório.

Desenvolvimento de habilidades para o uso de aparelhos.

Execução do experimento proposto visando aos resultados finais.

Interpretação dos resultados



-padrão e os principais materiais e

gerais de segurança no laboratório

Os acidentes podem ser evitados, se devidas pre


Usar sempre jaleco;

Usar calça comprida, cabelo preso e cal

Não usar relógios, pulseiras, anéis ou outros ornamentos durante o trabalho no

laboratório;

Não beber, comer ou fumar no

Caminhar lentament




I. BOAS PRÁTICAS LABORATORIAIS


Familiarizar o estudante com o laboratório;











Interpretação dos resultados obtidos.



e os principais materiais e


em ser evitados, se devidas pre


Usar sempre jaleco;

Usar calça comprida, cabelo preso e cal


Não beber, comer ou fumar no

Caminhar lentamente e com atenção Nunca testar am


4



BOAS PRÁTICAS LABORATORIAIS

o laboratório;











obtidos.



e os principais materiais e


em ser evitados, se devidas pre


Usar calça comprida, cabelo preso e calçado fechado


Não beber, comer ou fumar no laboratório

com atenção Nunca testar am


Práticas




DATA: ____/_____/_____

o laboratório;













e os principais materiais e equipamentos que utilizará.


em ser evitados, se devidas precauções forem tomadas ou, ao

ado fechado


laboratório;

com atenção Nunca testar am

sabor, odores devem ser verificados com muito cuidado


UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ – UESC DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS


DATA: ____/_____/_____












equipamentos que utilizará.

ções forem tomadas ou, ao

ado fechado;


com atenção Nunca testar amostras ou reagentes p

idado;

de Biofísica: exercícios

DATA: ____/_____/_____







deve conhecer o espaço físico no qual trabalhará, as normas de segurança, os

equipamentos que utilizará.



ostras ou reagentes p


DATA: ____/_____/_____




ça, os



ostras ou reagentes pelo


5

6. Não levar a mão á boca ou olhos quando estiver manuseando produtos químicos;

7. Em casos de acidentes, manter a calma e chamar o professor ou técnico responsável;

8. Guardar em armários, ou outros locais indicados pelo professor, os objetos pessoais, como bolsas, blusas e outros;

9. Brincadeiras são absolutamente proibidas nos laboratórios; 10. Usar a capela sempre que trabalhar com solventes voláteis, tóxicos e reações

perigosas, explosivas ou tóxicas;

11. Manipular as substâncias inflamáveis em locais distantes de fontes de aquecimento;

12. Usar pipetadores sempre que utilizar pipetas; 13. Ao final de cada aula, as vidrarias utilizadas durante o trabalho de laboratório

devem ser esvaziadas e enxaguadas antes de serem enviadas para limpeza;

14. Entregar ao técnico, ou responsável, as vidrarias trincadas, lascadas ou quebradas;

15. Antes de manipular qualquer reagente, deve-se ter conhecimento de suas características com relação á toxicidade, inflamabilidade e explosividade

(ATENÇÃO AOS PICTOGRAMAS DE PERIGO INDICADOS NO RÓTULO!!!);

16. Indicar claramente os reagentes e as soluções, que devem apresentar data de preparo, o nome de quem a preparou;

17. Usar sempre materiais e equipamentos adequados; 18. Orientar-se sempre com o professor quanto ao descarte de reagentes, resíduos

de reações ou outros resíduos dos laboratórios.

Estas são algumas regras gerais que devemos seguir durante o trabalho no

laboratório. Ao longo do curso, em cada experimento, serão relacionadas outras mais

especificas, inclusive sobre os reagentes que serão manipulados.

� Classificação dos resíduos de acordo com a resolução CONAMA nº 358/2005

• GRUPO A: Resíduos com a possível presença de agentes biológicos que, por suas características de maior virulência ou concentração, podem apresentar

risco de infecção.

• GRUPO B: Resíduos contendo substâncias químicas que podem apresentar risco à saúde pública ou ao meio ambiente, dependendo de suas

características de inflamabilidade, corrosividade, reatividade e toxicidade.

• GRUPO C: Quaisquer materiais resultantes de atividades humanas que contenham radionuclídeos em quantidades superiores aos limites de

eliminação especificados nas normas da Comissão Nacional de Energia

Nuclear-CNEN e para os quais a reutilização é imprópria ou não prevista.


6

• GRUPO D: Resíduos que não apresentem risco biológico, químico ou radiológico à saúde ou ao meio ambiente, podendo ser equiparados aos

resíduos domiciliares.

• GRUPO E: Materiais perfurocortantes ou escarificantes, tais como: lâminas de barbear, agulhas, escalpes, ampolas de vidro, brocas, limas endodônticas,

pontas diamantadas, lâminas de bisturi, lancetas; tubos capilares;

micropipetas; lâminas e lamínulas; espátulas; e todos os utensílios de vidro

quebrados no laboratório (pipetas, tubos de coleta sanguínea e placas de

Petri) e outros similares.

� Norma de rotulagem de produtos químicos de acordo com GHS: critérios mínimos

O GHS (Globally Harmonised System of Classification and Labelling) foi desenvolvido pela ONU com o objetivo de estabelecer um conjunto de critérios globalmente harmonizados para a classificação de riscos físicos, perigos para a saúde, e riscos ambientais especificados nos rótulos dos produtos químicos. Neste sistema, as seguintes informações devem estar contidas no rótulo:

1. Identificação do produto e telefone de emergência do fornecedor 2. Composição química 3. Pictograma de perigo 4. Palavra de advertência 5. Frase de perigo 6. Frases de precaução 7. Outras informações

Observe o exemplo abaixo


7

EXERCÍCIOS:

1) Agora reflita: o laboratório em que trabalhará produz que tipos de resíduos? Pesquise como deve ser o descarte desses resíduos?


8

2) O que significa cada pictograma de perigo químico?

SÍMBOLO SIGNIFICADO SÍMBOLO SIGNIFICADO


9

3) Agora, observe o rótulo de um produto químico e identifique as informações mínimas de acordo com GHS. Existe alguma informação faltando? Qual (quais)?

4) Quais são os perigos deste produto de acordo com os pictogramas indicados no rótulo? Cite os principais cuidados que devem ser tomados ao manusear este

reagente:

II. INSTRUMENTAÇÃO PARA USO DO LABORATÓRIO EM ATIVIDADE DE BIOFÍSICA


OBJETIVOS:

•

••

EXERCÍCIOS:1) Identifique as vidrarias apresentadas durante a aula e descreva a sua utilização

(desenhe

. INSTRUMENTAÇÃO PARA USO DO LABORATÓRIO EM ATIVIDADE DE BIOFÍSICA


OBJETIVOS:

• Familiarizar o estudante com práticas de Biofísica

• Aprender a técnica de pipetagem;• Realizar diluições seriadas.

EXERCÍCIOS:

Identifique as vidrarias apresentadas durante a aula e descreva a sua utilização

(desenhe ou fotografe caso

VIDRARIA




Familiarizar o estudante com práticas de Biofísica

Aprender a técnica de pipetagem;

Realizar diluições seriadas.


ou fotografe caso

VIDRARIA


DISCIPLINA: PROFª BIANCA MENDES MACIEL



Familiarizar o estudante com práticas de Biofísica e suas aplicações;


Realizar diluições seriadas.


ou fotografe caso precis

10




Familiarizar o estudante com as vidrariase suas aplicações;



precise memorizar):

Práticas


BIOFÍSICA PROFª BIANCA MENDES MACIEL


DATA: ____/_____/_____

as vidrarias de uso mais frequente nas aulas


memorizar):

UTILIZAÇÃO




DATA: ____/_____/_____

de uso mais frequente nas aulas


UTILIZAÇÃO



DATA: ____/_____/_____





DATA: ____/_____/_____




11


12

2) Qual é a principal diferença na função de uma vidraria graduada e uma vidraria volumétrica?

3) Como se realiza as diluições seriadas 10X e 2X em um volume final de 10 mL? Esquematize com desenhos, identificando o fator de diluição.

4) Dilua o corante realizando uma diluição seriada 10X (10-1 ; 10-2 ; 10-3) em um volume final de 5 mL. Observe a coloração das diluições. Visualmente, as

diluições parecem estar corretas?


OBJETIVOS:

••

••

CONSIDERAÇÕES:

Massa molecular (MM): soma das massas atômicas (em Massa molarmolecularmuito pequenas e não existe balança que permita pesáunidades de massa atômica. Por isso, contamos os átomos em “pacotes” de 6,02 x 1023 podemos dizer que uma única molécula de KCl tem massa molecular igual a 74,5 u e um mol de moléculas de KCl (ou seja 6,02 x 10seja, a massa molar é igual a 74,5 g/mol.

Concentração:as concentrações das soluções

•

•


OBJETIVOS:

• Aprender a converter • Apresentar, discutir e

concentrações

• Calcular soluções diluídas a partir de soluções concentradas• Discutir o transporte de substâncias em sistemas separados por membran

CONSIDERAÇÕES:

Massa molecular (MM): soma das massas atômicas (em

Massa molar (M)molecular (em umuito pequenas e não existe balança que permita pesáunidades de massa atômica. Por isso, contamos os átomos em “pacotes” de 6,02 x

(nº de Avogadro), assim como podemos dizer que uma única molécula de KCl tem massa molecular igual a 74,5 u e um mol de moléculas de KCl (ou seja 6,02 x 10seja, a massa molar é igual a 74,5 g/mol.

Concentração: relação as concentrações das soluções

• Percentual (%)

• Molaridade



Aprender a converter

Apresentar, discutir e concentrações;

alcular soluções diluídas a partir de soluções concentradas

Discutir o transporte de substâncias em sistemas separados por membran

CONSIDERAÇÕES:

Massa molecular (MM): A massa molecular (às vezes chamada de peso molecular) é a soma das massas atômicas (em

(M): A massa molar (em gramas) é numericamente igual à massa u) e relaciona

muito pequenas e não existe balança que permita pesáunidades de massa atômica. Por isso, contamos os átomos em “pacotes” de 6,02 x


relação quantidade de soluto / quantidade de soluçãoas concentrações das soluções

Percentual (%) =

Molaridade (M): O resultado é expresso em

m= massa em gramas; MM = massa molecular; V = volume (L)



III. EXERCÍCIOS DE SOLUÇÕES I


Aprender a converter as escalas de volume, massa e concentração;

Apresentar, discutir e calcular



Relembrando...

A massa molecular (às vezes chamada de peso molecular) é a soma das massas atômicas (em u) dos átomos da molécula.

A massa molar (em gramas) é numericamente igual à massa e relaciona-se com o número de moles



quantidade de soluto / quantidade de solução

as concentrações das soluções em:

gramas de soluto / 100 mL de soluçãomL de soluto /

O resultado é expresso em


13



EXERCÍCIOS DE SOLUÇÕES I

as escalas de volume, massa e concentração;

calcular diferentes modos de expressão de



Relembrando...

A massa molecular (às vezes chamada de peso molecular) é a ) dos átomos da molécula.

A massa molar (em gramas) é numericamente igual à massa se com o número de moles


(nº de Avogadro), assim como ovos são contados por dúzias! podemos dizer que uma única molécula de KCl tem massa molecular igual a 74,5 u e um mol de moléculas de KCl (ou seja 6,02 x 10seja, a massa molar é igual a 74,5 g/mol.


gramas de soluto / 100 mL de soluçãomL de soluto / 100 mL de solução

O resultado é expresso em


Práticas




DATA: ____/_____/_____


diferentes modos de expressão de



Relembrando...


A massa molar (em gramas) é numericamente igual à massa se com o número de moles. Os átomos possuem massas


ovos são contados por dúzias! podemos dizer que uma única molécula de KCl tem massa molecular igual a 74,5 u e um mol de moléculas de KCl (ou seja 6,02 x 1023 moléculas) pesa 74,5 g. Ou


gramas de soluto / 100 mL de solução100 mL de solução

O resultado é expresso em mol.L-1 (mol por litro)





DATA: ____/_____/_____



alcular soluções diluídas a partir de soluções concentradas;



A massa molar (em gramas) é numericamente igual à massa Os átomos possuem massas

muito pequenas e não existe balança que permita pesá-los diretamente em unidades de massa atômica. Por isso, contamos os átomos em “pacotes” de 6,02 x

ovos são contados por dúzias! podemos dizer que uma única molécula de KCl tem massa molecular igual a 74,5 u

moléculas) pesa 74,5 g. Ou


gramas de soluto / 100 mL de solução (m100 mL de solução (v/v)

(mol por litro)



DATA: ____/_____/_____



Discutir o transporte de substâncias em sistemas separados por membranas.

A massa molecular (às vezes chamada de peso molecular) é a


los diretamente em unidades de massa atômica. Por isso, contamos os átomos em “pacotes” de 6,02 x

ovos são contados por dúzias! Por exemplopodemos dizer que uma única molécula de KCl tem massa molecular igual a 74,5 u


quantidade de soluto / quantidade de solução. Expressaremos

m/v)

(mol por litro)



DATA: ____/_____/_____


as.

A massa molecular (às vezes chamada de peso molecular) é a


los diretamente em unidades de massa atômica. Por isso, contamos os átomos em “pacotes” de 6,02 x

Por exemplo, podemos dizer que uma única molécula de KCl tem massa molecular igual a 74,5 u


Expressaremos


14

• Osmolaridade (Osm): O resultado é expresso em osmol.L-1 (osmol por litro)

M = Molaridade; n = nº de partículas dissociadas.

Diluição: Preparar soluções diluídas a partir de soluções mais concentradas (“soluções estoque”).

Equivalente-grama de uma substância: é a massa dessa substância capaz de reagir com 1g de hidrogênio.

E = massa molar/ k O valor de k é interpretado de acordo com o comportamento químico da substância.

• Ácido: k é igual ao número de hidrogênios ionizáveis (H+). Eácido = massa molar/nº de H

+

• Base: k é igual ao número de hidroxilas (OH-). Ebase = massa molar/nº de OH

-

• Sal: k é igual à valência total do cátion ou do ânion considerado. Esal = massa molar/ valência total

OBS: A valência é medida pelo número de elétrons que um átomo pode dar, receber, ou compartilhar de forma a constituir uma ligação química. Isto está relacionado com o número de espaços omissos nas camadas eletrônicas do átomo.

Observe as escalas de volume, concentração e massa:

VOLUME L mL µL nL pL

MASSA g mg µg ng pg

CONCENTRAÇÃO

mol.L-1 (mol por litro) = M (Molar)

mol.L-1

(M)

mmol.L-1

(mM)

µmol.L-1

(µM)

nmol.L-1

(nM)

pmol.L-1

(pM)

Exemplos: 1 103 106 109 1012

10-3 1 103 106 109

10-6 10-3 1 103 106

10-9 10-6 10-3 1 103

10-12 10-9 10-6 10-3 1

Osm = M x n

Ci . Vi = Cf . Vf


15

EXERCÍCIOS

1) Converta as unidades abaixo (use notação de base 10, quando necessário):

a) 28 µL = _________________mL

g) 3,56 mL = _______________µL

b) 0,9 mL = ________________µL

h) 0,8 µL = ________________mL

c) 57,4 µL = _______________mL

i) 0,5 mol.L-1 = _____________ mmol.L-1

d) 25 µM = ________________mM

j) 1,5 mmol.L-1 = ___________ nM

e) 3 M = __________________µM

k) 200 nmol.L-1 = ___________ mmol.L-1

f) 350 nmol.L-1 = ___________M l) 45µmol.L-1 = _____________ nmol.L-1

2) Como preparar as seguintes soluções?

a. 200 mL de solução salina (NaCl 0,9%).

b. A partir de uma solução de glicose 20%, preparar 12 mL de uma solução

glicose a 3%.

c. A partir de uma solução de ureia 2M, preparar 30 mL de uma solução a 2,5%.


16

d. A partir de uma solução de glicose 5M, preparar 15 mL de uma solução a 3%.

e. A partir de uma solução de NaCl 5M, preparar 500 mL de uma solução a 0,9%.

3) Qual é a osmolaridade das soluções abaixo?

a) NaCl 0,9% = ___________ mOsm.L-1

c) NaCl 3% = ___________ mOsm.L-1

b) Glicose 5% = ___________ mOsm.L-1 d) Glicose 10% = _________ mOsm.L-1

4) Quantos mEq de potássio tem em 1mL de uma solução de cloreto de potássio a 10%?

5) Como preparar uma solução aquosa de potássio a 20 mEq/500 mL a partir de uma solução de KCl a 20%?

OBS: NaCl: MM = 58,5 u; Glicose: MM = 180 u; Uréia = 60 u

KCl: Massa molar = 74,5 g/mol; Valência K = 1.


17

6. Considere os sistemas abaixo separados por uma membrana permeável e complete as lacunas:

a. A velocidade de migração dos solutos, em ordem decrescente será?

_____>_____>_____.

b. O equilíbrio será atingido: 1º _____; 2º _____; 3º _____.

c. Antes do equilíbrio, o desnível será maior em: 1º _____; 2º _____; 3º _____.

d. No equilíbrio, as concentrações nos compartimentos serão:

( ) iguais ( ) diferentes

e. No equilíbrio, as pressões nos compartimentos serão:

f. ( ) iguais ( ) diferentes

g. Em todos os casos, a elevação do nível será:

( ) transitória ( ) permanente

7. Complete as lacunas, no caso dos mesmos sistemas serem separados por uma

membrana semipermeável:

a. A velocidade de migração do solvente, em ordem decrescente será?

_____>_____>_____.

b. O equilíbrio será atingido: 1º _____; 2º _____; 3º _____.

c. Antes do equilíbrio, o desnível será maior em: 1º _____; 2º _____; 3º _____.

d. No equilíbrio, as concentrações nos compartimentos serão:


e. No equilíbrio, as pressões nos compartimentos serão:


f. Em todos os casos, a elevação do nível será:

( ) transitória ( ) permanente

solução de

URÉIA

MM = 60

solução de

GLICOSE

MM = 180

solução de

SACAROSE

MM = 342

0,2M 0,1M 0,2M 0,1M 0,2M 0,1M

A B C


OBJETIVO:

•

EXERCÍCIOS:

1)

2)


OBJETIVO:

• Aplicar o cálculo de soluções em situações clínicas.

EXERCÍCIOS:

1) Um paciente endovenosa. Na farmácia hospitalar tem disponível glicose a 50% (ampolas

de 20 mL) e água bidestilada (frascos de 500 mL). Como proceder para

preparar a solução desejada?

2) Se a solução invés de água bidestilada, qual seria a osmolaridade da solução final? Esta

seria isotônica, hipotônica ou hipertônica em relação ao plasma?

OBS: Osmolaridade do plasma é de aproximadamente 300 m



Aplicar o cálculo de soluções em situações clínicas.

Um paciente necessita de 1000 mL de soro glicosado a 5% para administração

endovenosa. Na farmácia hospitalar tem disponível glicose a 50% (ampolas



Se a solução acima fosse preparada em solução fisiológica (NaCl 0,9%) ao

invés de água bidestilada, qual seria a osmolaridade da solução final? Esta





IV. EXERCÍCIO DE SOLUÇÕES II (Aplicação clínica)



necessita de 1000 mL de soro glicosado a 5% para administração




acima fosse preparada em solução fisiológica (NaCl 0,9%) ao




18



EXERCÍCIO DE SOLUÇÕES IIplicação clínica)









Práticas



EXERCÍCIO DE SOLUÇÕES II plicação clínica)

DATA: ____/_____/_____











DATA: ____/_____/_____







OBS: Osmolaridade do plasma é de aproximadamente 300 mOsm/L.


DATA: ____/_____/_____







Osm/L.


DATA: ____/_____/_____







19

3) O paciente necessita de 500 mL de solução glicofisiológica (solução glicosada 5% + solução fisiológica 0,9%). Na farmácia hospitalar tem disponível solução

glicosada a 5% (frascos de 500 mL) e solução de NaCl a 10% (ampolas de 10

mL). Como proceder para preparar a solução desejada?

4) Foi diagnosticado hipocalemia (baixo nível sérico de potássio) em um canino de 27 kg. Para o tratamento, foi recomendado a suplementação diária com

cloreto de potássio a 0,5 mEq/Kg por via oral (1 x dia), durante 10 dias. O

medicamento é apresentado na forma de drágeas de KCl 500 mg (caixa com

50 drágeas). Quantos comprimidos ao dia e quantas caixas serão utilizadas

durante a terapia? OBS: Massa molar KCl = 74,5 g/mol; Valência K = 1.

5) O paciente necessita de 500 mL de solução salina hipertônica (NaCl 3%). Na farmácia hospitalar tem disponível solução fisiológica (NaCl 0,9%) em frascos

de 500 mL e ampolas de 20 mL de NaCl 20%. Como proceder para preparar a

solução desejada?

NaCl: MM = 58,5 u; Glicose: MM = 180 u

KCl: Massa molar = 74,5 g/mol; Valência K = 1.


OBJETIVO

•

•

MATERIAL:I. Equipamentos:

••

II. Vidrarias e utensílios:

•••••••••••••

III. Reagentes:

•••••••


OBJETIVOS:

• Preparar soluções de diferentes concentraçõespráticas da disciplina;

• Determinar a osmolaridade

MATERIAL: I. Equipamentos:

• Balança digital• Agitador magnético com as “bailarinas”

Vidrarias e utensílios:

• Balão volumétrico de 100 mL• Béquer de 250 mL• Erlenmeyer de 250 mL• Proveta de 100 mL• Vidro de relógio• Bastão de Vidro• Espátulas• Rolo de barbante• Rolo de gaze• Rolo de papel alumínio• Algodão hidrofóbico• Caneta para marcação em vidro• Tesoura

III. Reagentes:

• NaCl • KCl • CaCl2 • Sacarose• Glucose • Manitol • Água destiladada


DISCIPLINA: BIOFÍSICA / PROFª


Preparar soluções de diferentes concentraçõespráticas da disciplina;

Determinar a osmolaridade

I. Equipamentos:

Balança digital

Agitador magnético com as “bailarinas”Vidrarias e utensílios:

Balão volumétrico de 100 mL

Béquer de 250 mL

Erlenmeyer de 250 mL

Proveta de 100 mL

Vidro de relógio

Bastão de Vidro

Espátulas para pesagem

Rolo de barbante

Rolo de gaze

Rolo de papel alumínio

Algodão hidrofóbico

para marcação em vidro

Sacarose

Manitol

Água destiladada


DISCIPLINA: BIOFÍSICA / PROFª

V. PREPARO DE SOLUÇÕES


Preparar soluções de diferentes concentraçõespráticas da disciplina;

Determinar a osmolaridade das soluções

Agitador magnético com as “bailarinas”

Balão volumétrico de 100 mL

Erlenmeyer de 250 mL

para pesagem

Rolo de papel alumínio

Algodão hidrofóbico


20


DISCIPLINA: BIOFÍSICA / PROFª BIANCA MENDES MACIEL

PREPARO DE SOLUÇÕES

Preparar soluções de diferentes concentrações

das soluções.

Agitador magnético com as “bailarinas”


Práticas


BIANCA MENDES MACIEL


DATA: ____/_____/_____

Preparar soluções de diferentes concentrações, que serão utilizadas nas aulas



BIANCA MENDES MACIEL


DATA: ____/_____/_____

, que serão utilizadas nas aulas


DATA: ____/_____/_____



DATA: ____/_____/_____



21

PROCEDIMENTO:

1) Preparar 100 mL das seguintes soluções abaixo e calcular as respectivas

concentrações osmolares:

SOLUÇÕES* CONCENTRAÇÃO

(Osm.L-1)

SOLUÇÕES** CONCENTRAÇÃO

(Osm.L-1)

NaCl (0,5 M) NaCl (0,2 M)

NaCl (1,0 M) KCl (0,2 M)

NaCl (2,0 M) CaCl2 (0,15 M)

Sacarose (0,5 M) Sacarose (0,4 M)

Sacarose (1,0 M) Manitol (0,4 M)

Sacarose (2,0 M) Glicose (0,4 M)

* serão utilizadas na aula VI ** serão utilizadas na aula VIII

Demonstre seus cálculos:


OBJETIVO:

•

CONSIDERAÇÕES:

Onde:

π = Pressão osmóticaM = concentração molarR = constante universal dos gases (T – temperatura em Kelvin (= T °C + 273)i = fator de correção de Van’t Hoffdissociadas) MATERIAL:I. Vidrarias e utensílios

II. Reagentes


OBJETIVO:

• Demonstrar a relação entre a concentração de soluto e a pressão osmótica da solução.

CONSIDERAÇÕES:� Pressão osmótica

concentrada para impedir a passagem de moléculas de solvente� A sua relação com a concentração da solução é dada pela equação de Van’t

Hoff:

Onde:

= Pressão osmótica

M = concentração molarR = constante universal dos gases (

temperatura em Kelvin (= T °C + 273)= fator de correção de Van’t Hoff

dissociadas)

MATERIAL: I. Vidrarias e utensílios

• Becker • Pipeta • Proveta 50 ou 100 mL• Termômetro• Barbante• Tesoura• Caneta para marcação em vidro• Luvas • Saco de diálise

II. Reagentes

• Soluções preparadas na aula V (NaCl 0,5 MM e 2,0 M)

• AgNO3




Demonstrar a relação entre a concentração de soluto e a pressão osmótica da solução.

CONSIDERAÇÕES: Pressão osmóticaconcentrada para impedir a passagem de moléculas de solventeA sua relação com a concentração da solução é dada pela equação de Van’t

= Pressão osmótica

M = concentração molar R = constante universal dos gases (

temperatura em Kelvin (= T °C + 273)= fator de correção de Van’t Hoff

I. Vidrarias e utensílios

Becker 500 mL

de vidro de

Proveta 50 ou 100 mL

Termômetro

Barbante

Tesoura

Caneta para marcação em vidro

Saco de diálise

Soluções preparadas na aula V (NaCl 0,5 MM e 2,0 M)

1%



VI.


Demonstrar a relação entre a concentração de soluto e a pressão osmótica da

Pressão osmótica: é a pressão que deve ser aplicada à solução mais concentrada para impedir a passagem de moléculas de solventeA sua relação com a concentração da solução é dada pela equação de Van’t

R = constante universal dos gases (= 0,082 atm ou 62,3 mmHg)temperatura em Kelvin (= T °C + 273)

= fator de correção de Van’t Hoff

de vidro de 1 mL

Proveta 50 ou 100 mL


Soluções preparadas na aula V (NaCl 0,5 M

π

22



. PRESSÃO OSMÓTICA


: é a pressão que deve ser aplicada à solução mais concentrada para impedir a passagem de moléculas de solventeA sua relação com a concentração da solução é dada pela equação de Van’t

= 0,082 atm ou 62,3 mmHg)temperatura em Kelvin (= T °C + 273)

= fator de correção de Van’t Hoff (está relacionado a quantidade de partículas


Soluções preparadas na aula V (NaCl 0,5 M

π = M.R.T

Práticas



PRESSÃO OSMÓTICA

DATA: ____/_____/_____



= 0,082 atm ou 62,3 mmHg)

(está relacionado a quantidade de partículas

Soluções preparadas na aula V (NaCl 0,5 M, 1,0 M

= M.R.T.i




PRESSÃO OSMÓTICA

DATA: ____/_____/_____



= 0,082 atm ou 62,3 mmHg)


e 2 M; sacarose


DATA: ____/_____/_____


: é a pressão que deve ser aplicada à solução mais concentrada para impedir a passagem de moléculas de solvente. A sua relação com a concentração da solução é dada pela equação de Van’t


; sacarose 0,5 M, 1,0


DATA: ____/_____/_____


: é a pressão que deve ser aplicada à solução mais

A sua relação com a concentração da solução é dada pela equação de Van’t


0,5 M, 1,0


23

PROCEDIMENTO: 1. Umedeça o tubo de diálise em água destilada; 2. Amarre com um barbante uma das extremidades do tubo de diálise; 3. Adicione 25 mL da solução preparada pelo seu grupo no interior do tubo de

diálise; 4. Introduza a ponta da pipeta de 1mL, aproximadamente 2 cm, para dentro da

solução contida no tubo de diálise e amarre firmemente com cuidado para que não fiquem bolhas de ar no sistema;

5. Introduza o conjunto pipeta-tubo de diálise num becker contendo, aproximadamente, 400 mL de água destilada;

6. Fixar o conjunto no suporte de ferro; 7. Marcar a altura do líquido na pipeta de vidro (este deve estar acima do cordão

para conseguir visualizar). Esta pipeta funciona como um osmômetro capilar; 8. Anote imediatamente o tempo do início do experimento e a altura no nível do

líquido; 9. A cada 5 min, anote a altura do líquido na pipeta de vidro até completar 20 min

de experimento. Anote também o resultado dos outros grupos; 10. Nos grupos que utilizaram soluções de NaCl: retirar 1 mL da solução externa

(em cada tempo do experimento), colocar em um tubo de ensaio e adicionar 200 µL de AgNO3 (use luvas!). OBS1: O nitrato de prata revela a presença de cloretos formando um precipitado branco (cloreto de prata):

NaCl + AgNO = AgCl + NaNO3 OBS2: Utilizar controle positivo (sol. NaCl) e controle negativo (água) para visualizar as reações

ANOTAÇÃO DOS RESULTADOS:

SOLUÇÃO

ALTURA DA COLUNA (cm)

5 min 10 min 15 min 20 min

NaCl 0,5 M NaCl 1,0 M Sacarose 0,5 M Sacarose 1,0 M EXERCÍCIOS: 1) Formule sua hipótese para este experimento:


24

2) Calcule a porcentagem (m/v), a osmolaridade e a pressão osmótica (em mmHg) de cada solução

SOLUÇÃO

% (m/v)

Osmolaridade (osm.L-1)

π (atm)

NaCl 0,5 M NaCl 1,0 M Sacarose 0,5 M Sacarose 1,0 M

3) Trace um gráfico com os dados obtidos de cada solução, colocando-se na ordenada as variações dos volumes (mL) e na abscissa as variações do tempo

(min):


25

4) Interprete os resultados relacionando a concentração das soluções, osmolaridade, pressão osmótica, altura da coluna de liquido no osmômetro

capilar e permeabilidade da membrana.


OBJETIVO

•

••

CONSIDERAÇÕES:

�


OBJETIVOS:

• Familiarizar o estudante com a técnica analítica de espectrofotometria e suas aplicações;

• Determinar o espectro de absorção de uma substância;• Produzir um gráfico de curva padrão para

amostra desconhecida.

CONSIDERAÇÕES:

� COLORIMETRIA• Compreende os métodos analíticos que se baseiam na medição da

quantidade de luz absorvida por uma solução.

• Uma solução colorida apresenta máxima absorção de luz para a sua complementar.transmitida.




Familiarizar o estudante com a técnica analítica de espectrofotometria e suas aplicações;

Determinar o espectro de absorção de uma substância;

Produzir um gráfico de curva padrão para amostra desconhecida.

CONSIDERAÇÕES:

COLORIMETRIA

Compreende os métodos analíticos que se baseiam na medição da quantidade de luz absorvida por uma solução.

Uma solução colorida apresenta máxima absorção de luz para a sua complementar.transmitida.

AZUL

VIOLETA

� Vértices = cores primárias (vermelho, azul e amarelo);� Laterais � Medianas



VII. ESPECTROFOTOMETRIA


Familiarizar o estudante com a técnica analítica de espectrofotometria e suas


Produzir um gráfico de curva padrão para amostra desconhecida.


Uma solução colorida apresenta máxima absorção de luz para a sua complementar. Assim, a cor da solução é determinada pela cor da luz

- TRIÂNGULO DE CORES

AZUL

VIOLETA

értices = cores primárias (vermelho, azul e amarelo);

aterais = cores secundárias (verde, violeta e laranja);

edianas = cores complementares

26



ESPECTROFOTOMETRIA



Produzir um gráfico de curva padrão para


Uma solução colorida apresenta máxima absorção de luz para a sua Assim, a cor da solução é determinada pela cor da luz

TRIÂNGULO DE CORES

VERMELHO

VERDE


= cores secundárias (verde, violeta e laranja);

cores complementares

Práticas



ESPECTROFOTOMETRIA

DATA: ____/_____/_____



Produzir um gráfico de curva padrão para determinar a concentração de uma



TRIÂNGULO DE CORES -

VERMELHO

VERDE

LARANJA



cores complementares




ESPECTROFOTOMETRIA

DATA: ____/_____/_____



determinar a concentração de uma

Compreende os métodos analíticos que se baseiam na medição da


AMARE

LARANJA




DATA: ____/_____/_____





AMARELO




DATA: ____/_____/_____




Uma solução colorida apresenta máxima absorção de luz para a sua cor Assim, a cor da solução é determinada pela cor da luz

RELAÇÃO ENTRE RELAÇÃO ENTRE

Vermelha

Luz incidente

RELAÇÃO ENTRE O COMPRIMENTO DE ONDA

Vermelha

Amarela

Azul

Luz incidente

(branca)

O COMPRIMENTO DE ONDA

FONTE:

Luz absorvida pela

solução colorida

27

O COMPRIMENTO DE ONDA, A COR

FONTE: http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/naturezadacor.html

Luz absorvida pela

solução colorida

(vermelha

Práticas

A COR ABSORVIDA E A COR COMPLEMENTAR

http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/naturezadacor.html

Luz absorvida pela

solução colorida

vermelha)


ABSORVIDA E A COR COMPLEMENTAR


Amarela

Azul

Luz transmitida e

da solução (


FONTE: ENEM 2011



Amarela

Verde

Luz transmitida e cor

da solução (verde)


FONTE: ENEM 2011



Verde

cor

�

T – projetado);

It - intensidade de luz transmitida;

A – Absorbância

linearidaproporcionalidade linear entre concentração e absorbância deixa de existir.quando a soluçãpara determinação de sua absorbância.

I

• À medida que a concentração de um corante aumenta, a quantidade de que atravessa a solução diminui, indicando maior absorção.intensidade da cor de uma solução é proporcional à concentração das moléculas absorventes de luz.

� LEI DE LAMBERTsolução vmeio atravessado”.

T (Tra

Transmitânciaprojetado);

intensidade de luz transmitida;

Absorbância

Desvios da lei de Lambertlinearidade (limite de concentração para a qual a lei de Lambertproporcionalidade linear entre concentração e absorbância deixa de existir.quando a soluçãpara determinação de sua absorbância.

Io

À medida que a concentração de um corante aumenta, a quantidade de que atravessa a solução diminui, indicando maior absorção.intensidade da cor de uma solução é proporcional à concentração das moléculas absorventes de luz.

LEI DE LAMBERT-BEERsolução varia exponencialmente com a concentração e com a espessura do meio atravessado”.

T (Transmitância) =

mitância (mede a intensidade de luz transmitida em relação ao que foi

intensidade de luz transmitida;

Absorbância (mede a quantidade de luz absorvida, é o inverso da tra

T[1] > T[2]

Desvios da lei de Lambertlimite de concentração para a qual a lei de Lambert

proporcionalidade linear entre concentração e absorbância deixa de existir.quando a solução é muito concentrada, necessitandpara determinação de sua absorbância.

It


BEER: “A intensidade da energia radiante absorvida por uma aria exponencialmente com a concentração e com a espessura do

meio atravessado”.

mitância) = It / I

(mede a intensidade de luz transmitida em relação ao que foi

intensidade de luz transmitida; I0 - intensidade de luz incidente

(mede a quantidade de luz absorvida, é o inverso da tra

T[2] > T [3]

Desvios da lei de Lambert-Beer: limite de concentração para a qual a lei de Lambert

proporcionalidade linear entre concentração e absorbância deixa de existir.é muito concentrada, necessitand

para determinação de sua absorbância.

Io

28


: “A intensidade da energia radiante absorvida por uma aria exponencialmente com a concentração e com a espessura do

I0


intensidade de luz incidente


T [3] A

Beer: Para concentrações superiores ao limite de limite de concentração para a qual a lei de Lambert

proporcionalidade linear entre concentração e absorbância deixa de existir.é muito concentrada, necessitand

para determinação de sua absorbância.

FONTE: Compri

limite de linearidade

Práticas

À medida que a concentração de um corante aumenta, a quantidade de que atravessa a solução diminui, indicando maior absorção.intensidade da cor de uma solução é proporcional à concentração das


A (Absorbância) =




A[1] < A[2]

Para concentrações superiores ao limite de limite de concentração para a qual a lei de Lambert

proporcionalidade linear entre concentração e absorbância deixa de existir.é muito concentrada, necessitando, portanto,a diluição da amostra

FONTE: Compri

It



À medida que a concentração de um corante aumenta, a quantidade de que atravessa a solução diminui, indicando maior absorção.intensidade da cor de uma solução é proporcional à concentração das


A (Absorbância) = -logT




[2] < A [3]

Para concentrações superiores ao limite de limite de concentração para a qual a lei de Lambert-Beer é válida)

proporcionalidade linear entre concentração e absorbância deixa de existir.o, portanto,a diluição da amostra

FONTE: Compri-Nardi et al., 2013

Io



À medida que a concentração de um corante aumenta, a quantidade de que atravessa a solução diminui, indicando maior absorção. Ou seja, a intensidade da cor de uma solução é proporcional à concentração das


logT


(mede a quantidade de luz absorvida, é o inverso da transmitância)

Para concentrações superiores ao limite de Beer é válida)

proporcionalidade linear entre concentração e absorbância deixa de existir. Ocorre o, portanto,a diluição da amostra

Nardi et al., 2013

I


À medida que a concentração de um corante aumenta, a quantidade de luz Ou seja, a

intensidade da cor de uma solução é proporcional à concentração das



mitância)

Para concentrações superiores ao limite de Beer é válida), a

Ocorre o, portanto,a diluição da amostra

It

�

� ESPECTROFOTÔMETRO

• Instrumento utilizado para determinar os valores de transmitância (luz transmitida) e absorbância (

comprimento de onda.

• A sensibilidade do método depende da escolha do melhor comprimento de onda

espectro de absorção.

• A curva de espectro de absorção determina de onda para

onde há maior absorbân

• Para quantificação de amostras desconhecidas, é necessário estabelecerinicialmente,

corresponde à relação gráfica entre os valores de absorbância e

das concentrações conhecidas de uma determinada solução.

• Curva padrãomenos

um gráfico da concentração (eixo x)

concentração da amostra desconhecida pode, então, ser determinada neste

gráfico

ESPECTROFOTÔMETRO

Instrumento utilizado para determinar os valores de transmitância (luz

transmitida) e absorbância (


FUNCIONAMENTO

A sensibilidade do método depende da escolha do melhor comprimento de

onda eletromagnética para leitura


A curva de espectro de absorção determina

de onda para a leitura espectrofotométrica de

onde há maior absorbân

Para quantificação de amostras desconhecidas, é necessário estabelecer

inicialmente, uma


concentrações conhecidas de uma determinada solução.

Curva padrão: realizada a partir da determinação das absorbância

menos, cinco diluições de uma solução conhecida



gráfico e através de uma equação de regr

ESPECTROFOTÔMETRO


transmitida) e absorbância (


FUNCIONAMENTODE UM ESPECTROFOTÔMETRO


eletromagnética para leitura



a leitura espectrofotométrica de

onde há maior absorbância e menor transmitância.


uma “curva



: realizada a partir da determinação das absorbância

cinco diluições de uma solução conhecida



e através de uma equação de regr

29


transmitida) e absorbância (luz absorvida) de uma solução em um ou mais

DE UM ESPECTROFOTÔMETRO

FONTE:


eletromagnética para leitura, que deve ser determinado pela curva de


a leitura espectrofotométrica de

cia e menor transmitância.


curva padrão” (ou “curva de calibração”), que







e através de uma equação de regr

Práticas


uz absorvida) de uma solução em um ou mais


FONTE: http://quimicanastaipas.wordpress.com


, que deve ser determinado pela curva de

A curva de espectro de absorção determina a faixa de

a leitura espectrofotométrica de uma determinada solução,



” (ou “curva de calibração”), que





um gráfico da concentração (eixo x) versus


e através de uma equação de regressão.





http://quimicanastaipas.wordpress.com



a faixa de melhor comprimento

uma determinada solução,







cinco diluições de uma solução conhecida (5 padrões)

absorbância








melhor comprimento




corresponde à relação gráfica entre os valores de absorbância e os valores


: realizada a partir da determinação das absorbâncias de,

(5 padrões). Prepara

absorbância (eixo y)








melhor comprimento


Para quantificação de amostras desconhecidas, é necessário estabelecer,


os valores

de, pelo

repara-se

(eixo y). A



30

MATERIAL

I. Equipamentos:

• Espectrofotômetro com cubetas II. Vidrarias e utensílios:

• Frasco de vidro âmbar de 1L • Becker de 100 mL • Tubos de ensaio de 15 mL (de vidro) • Pipetas graduadas (de 5 ou 10 mL) • Canetas para marcação em vidro • Estantes para tubo de ensaio • Pipetadores (ou peras) • Micropipeta de 1000 µL • Ponteiras • Papel toalha

III. Reagentes:

• KMnO4 • Água destilada (1L)

PROCEDIMENTO:

1. Preparar uma solução de KMnO4 a 0,1 g/L (solução estoque). Armazená-la em frasco âmbar.

2. Zerar o aparelho com o tubo branco (água destilada); 3. Realizar as leituras espectrofotométricas em cada comprimento de onda,

conforme tabela 1 e determinar o melhor comprimento de onda;

Tabela 1: Determinação do melhor comprimento de onda para leitura espectrofotométrica do KMnO4

λ (nm) A T 400

425

450

475

500

525

550

575

600

625

650

675

700


31

4. Dilua a solução estoque conforme indicado na tabela 2; 5. Determine a concentração (g/L) de cada diluição e realize a leitura

espectrofotométrica (valores de absorbância), de acordo com a determinação

do melhor comprimento de onda.

TUBOS SOL. ESTOQUE KMnO4 0,1 g/L

ÁGUA DESTILADA (mL)

CONCENTRAÇÃO (g/L)

ABSORBÂNCIA (= ______nm)

1 1mL 9 2 2mL 8 3 3mL 7 4 4mL 6 5 5mL 5 Solução X - - ? Branco - 10 - Zerar

EXERCÍCIOS:

1) Elabore uma curva (no Excel) determinando o espectro de absorção da solução de permanganato de potássio (cole abaixo):

2) Qual a importância da determinação do espectro de absorção?


32

3) Elabore uma curva padrão a partir das diluições da solução estoque e determine a concentração da solução desconhecida (solução X):


OBJETIVO

•

•

CONSIDERAÇÕES:�

MATERIAL

I. Equipamentos:

••


••••••••••

III. Reagentes:

•

••

VIII. EFEITO DA OSMOLARIDADE DO MEIO


OBJETIVOS:

• Demonstrar o efeito da osmolaridade do meio sobre a integridade das hemácias;

• Estimar extracelular

CONSIDERAÇÕES:� Qualquer experimento que envolva cultivo de células, tecidos ou órgãos é

primordial preservar a integridade estrutural da célula. Para isso, o ponto de isotonicidade meio extern

MATERIAL

I. Equipamentos:

• Espectrofotômetro com cubetas• Centrífuga


• Tubos de ensaio• Pipetas graduadas • Estantes para tubo de ensaio• Pipetadores (ou peras)• Micropipeta de 100• Ponteiras• Luvas • Canetas para marcação em vidro• Papel toalha• Termômetro

II. Reagentes:

• Soluções preparadas na aula V: NaCl (0,2 M); KCl (0,2 M); CaClSacarose (0,4 M); Manitol (0,4 M); Glicose (0,4 M)

• Sangue de ovino com EDTA• Água destilada



EFEITO DA OSMOLARIDADE DO MEIO


Demonstrar o efeito da osmolaridade do meio sobre a integridade das hemácias;

o ponto de isotonicidade celular com relação à osmolaridadeextracelular

CONSIDERAÇÕES: Qualquer experimento que envolva cultivo de células, tecidos ou órgãos é primordial preservar a integridade estrutural da célula. Para isso, o ponto de isotonicidade celular deve ser determinadomeio externo.

I. Equipamentos:

Espectrofotômetro com cubetas

Centrífuga II. Vidrarias e utensílios:

Tubos de ensaio 15 mL

Pipetas graduadas 10 mL

Estantes para tubo de ensaio

Pipetadores (ou peras)

Micropipeta de 100

Ponteiras

Canetas para marcação em vidro

Papel toalha

Termômetro

Soluções preparadas na aula V: NaCl (0,2 M); KCl (0,2 M); CaClSacarose (0,4 M); Manitol (0,4 M); Glicose (0,4 M)

Sangue de ovino com EDTA

Água destilada





Demonstrar o efeito da osmolaridade do meio sobre a integridade das

o ponto de isotonicidade celular com relação à osmolaridade

Qualquer experimento que envolva cultivo de células, tecidos ou órgãos é primordial preservar a integridade estrutural da célula. Para isso, o ponto de

celular deve ser determinado


15 mL (tipo Falcon

10 mL

Estantes para tubo de ensaio

Pipetadores (ou peras)

Micropipeta de 100 µL



Sangue de ovino com EDTA

33







celular deve ser determinado


tipo Falcon)



Práticas



EFEITO DA OSMOLARIDADE DO MEIO SOBRE A INTEGRIDADE DAS HEMÁCIAS

DATA: ____/_____/_____




celular deve ser determinado com relação à osmolarida





SOBRE A INTEGRIDADE DAS HEMÁCIAS

DATA: ____/_____/_____




com relação à osmolarida

Soluções preparadas na aula V: NaCl (0,2 M); KCl (0,2 M); CaCl



DATA: ____/_____/_____


o ponto de isotonicidade celular com relação à osmolaridade do meio


com relação à osmolaridade do

Soluções preparadas na aula V: NaCl (0,2 M); KCl (0,2 M); CaCl2 (0,15 M);



DATA: ____/_____/_____


do meio


de do

(0,15 M);


34

PROCEDIMENTO:

1. Dilua uma das soluções (uma solução por grupo), conforme o quadro a seguir:

TUBOS SOLUÇÃO

(mL)

ÁGUA (mL) CONCENTRAÇÃO

(Osm.L-1)

PRESSÃO

OSMÓTICA

(mmHg)

[1] 2 8

[2] 3 7

[3] 4 6

[4] 5 5

[5] 6 4

[6] 7 3

[7] 8 2

[8] 9 1

2. Calcule as concentrações osmolares e as pressões osmóticas das soluções;

3. Meça a temperatura dos tubos (basta apenas medir de um dos tubos);

4. Adicione em cada tubo 0,1 mL de sangue (use luvas), agite cuidadosamente por

inversão e deixem em repouso por 5 minutos;

5. Em seguidas, centrifugue a 2.500 rpm por 5 minutos;

6. Transfira o sobrenadante para uma cubeta de colorímetro e meça a

absorbância a 540 nm.

ANOTAÇÃO DOS RESULTADOS:

TUBOS CONCENTRAÇÃO

(mOsm.L-1)

A

(540 nm)

[1]

[2]

[3]

[4]

[5]

[6]

[7]

[8]


35

EXERCÍCIOS:

1) Construa um gráfico (no Excel) relacionando a absorbância (na ordenada) e a

osmolaridade da solução (na abscissa).

2) Com base nos seus dados, faça uma estimativa da osmolaridade no interior

das hemácias.

3) Que conclusões podem ser tiradas acerca da integridade das hemácias em

função da concentração da solução no experimento realizado?

4) De acordo com a literatura, uma solução de NaCl a 0.9% é isosmolar com o

sangue. Isto está de acordo com os seus resultados? Apresente explicações

para possíveis discrepâncias:


OBJETIVO

•

CONSIDERAÇÕES:�

�

�

�

MATERIAL

I. Equipamentos:

••


••

NOME DOS COMPONENTES

prÁticas de biofÍsica: exercÍcios...esta apostila é destinada aos estudantes da disciplina de...

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