propriedades farmacológicas de diferentes séries … · propriedades farmacológicas de...

Profa. Dra. Ana Luísa Palhares de MirandaLASSBio – Faculdade de Farmácia - UFRJ

[email protected]

Propriedades Farmacológicas de Diferentes Séries de N-acilidrazonas Planejadas e

Sintetizadas como Protótipos de Fármacos Antitrombóticos e Antinflamatórios.

UFRJ

mailto:[email protected]

©©ALPM2008ALPM2008

Medicinal Medicinal ChemistryChemistry is a chemistry-based discipline, also involvingaspects of biological, medical and pharmaceutical sciences. It is concernedwith the invention, discovery, design, identification and preparation of biologically active compounds, the study of their metabolism, theinterpretation of their mode of action at the molecular level and theconstruction of structure-activity relationships.

C.G. Wermuth, C.R. Ganellin, P. Lindberg and L.A. Mitscher(1998) Glossary of Terms Used in Medicinal Chemistry

DESIGN AND SYNTHESIS

PHARMACOLOGY

MOLECULAR MODELLINGNEW PROTOTYPES

NEW DRUGS

MEDICINAL CHEMISTRY LASSBio

PHARMACOLOGY

Rational Planning Validation


ArachidonicArachidonic AcidAcid CascadeCascade, , MediatorsMediators of of InflammationInflammation, , PainPain

andand ThrombiThrombi FormationFormation..

p38 MAPK

Trombina,ADP

Fraga, C. A. M.; Barreiro, E. J. (2006) Curr. Med. Chem. 13, 167.

Freitas, A.C.C.; Barreiro, E.J.(1993) Rev. Bras. Farm. 74, 57.Freitas, A. C. C. et al. (1995) Quimica Nova 18, 138.

Silveira, I.A.F.B. et al. (1991) Braz. J. Biol. Med. Res. 24, 947.Silveira, I.A.F.B. et al. (1993) J. Pharm. Pharmacol. 45, 646.Todeschini, A. R. et al. (1998) Eur. J. Med. Chem. 33, 189.

TheThe BegningBegning: Design of : Design of PyrazolicPyrazolic ArylhydrazonesArylhydrazones

AntiAnti--inflammatoryinflammatory andand AnalgesicAnalgesic

PlateletPlatelet AggregationAggregation InhibitorsInhibitors

TheThe EvolutionEvolution: : PyrazolicPyrazolicAcylArylhydrazonesAcylArylhydrazones

Matheus, M. E. et al. (1998) Braz. J. Biol. Med. Res. 24, 1219.Miranda, A. L. P. et al. (1994) Can.J. Physiol. Pharmacol. 72 (S1), 210.


IC50= 2.2 μM (AA) NAHNAH--1,2,41,2,4--OxadiazolicOxadiazolic, NAHNAH--1,2,31,2,3--TryazolicTryazolic, , NAHNAH--ImidazoImidazo[1,2[1,2--a]a]pyridinicpyridinic, , NAHNAH--PyrazoloPyrazolo[3,4[3,4--b]b]pyridinicpyridinic, , NAHNAH--tienotieno[2,3[2,3--c]c]pyrazolicpyrazolic, , NAHNAH--

PyrazoloPyrazolo[3,4[3,4--b]b]tienotieno[2,3[2,3--d]d]pyridinicpyridinic, , NAHNAH--ImidazolicImidazolic

Ribeiro, I. G. et al. (1998) Eur. J. Med. Chem. 33, 225.Figueiredo, J. M. et al. (2000) Bioorg. Med. Chem. 8, 2243.Cunha, A. C. et al. (2002) Il Farmaco 57, 999.Cunha, A. C. et al. (2003) Bioorg. Med. Chem. 11, 2051.


DIARYLHETEROCYCLE CLASS

Molecular frameworksMinimal structural subunit

Ligand points – 1 or + receptor

Duarte, C.M.; Fraga, C.A.M.; Barreiro, E.J. (2007) Mini Rev. Med. Chem. 7, 1.


“Privileged Structures”

DUAL DRUGSSYMBIOTIC DRUGS

MULTIPLE MECHANISM OF ACTION

PGHS-2 / 5-LOXPGHS-2 / TNF-αPDE4 / TNF-α

PGHS-2 / MAPK p38PDEs: PDE4 PDE3 PDE5 PDE2

CB2 / CB1

Barreiro E. J. et al Quim Nova, 2002, 25: 129Fraga C.A. M. & Barreiro E. J. Curr Med Chem, 2006, 13: 167.

PAIN

INFLAMMATIONARTHRITIS

ATHEROSCLEROSIS

ISCHEMIA

CANCERTHROMBOSIS

≠ TargetsSame Physiopathologic

Process

AA cascadeDual inhibitors (COX/LOX)

NSAIs + SafeChronic Inflammation

• Enzyme Inhibition• Receptors: agonist/antagonist• Cell signalling: AMPc, GMPc, Ca++, NO ...


EICOSANOIDS BIOLOGICAL ACTIVITIES

Vasodilatação

Hemostasia

Dor

Agregação plaquetária

BroncoconstriçãoEICOSANÓIDES

QuimiotaxiaPGE2

TXA2

LTC4

PGD2

Inflamação

PGE2

PGI2 / TXA2

LTB4


Hinz & Brune, JPET 300: 367-375,2002.

INFLAMMATION THROMBOSIS

AA METABOLITES

INFLAMMATIONPAIN

FEVER

PHYSIOLOGIC STIMULICONSTITUENT COX-1

FUNÇÕES PLAQUETÁRIASFLUXO SANGUÍNEOFUNÇÕES RENAIS

PROTEÇÃO TGI

COX

INFLAMMATORY STIMULIINDUCIBLE COX-2

PGE2 PGI2 TXA2

PGE2PGI2TXA2

other mediators

Non-selectives COX Inhibitors

--

COX-2 SelectivesInhibitors

PAIN

PGI2 TXB2

TXB2

PGI2

Células Endoteliais

ParedeVascular Plaqueta

Trombose

Inibidores de COX-1AAS

Antitrombóticos


Antitrombóticos

Inibidores Seletivos COX-2

Riscos Cardiovasculares



PGI2 TXB2

TXB2

PGI2



Trombose

PGI2 TXB2PGI2 TXB2

TXB2

PGI2

TXB2

PGI2




Trombose


Antitrombóticos


Antitrombóticos






Calor Rubor Edema DorPerda daFunção

• cytokines expression• COX-2 expression – PGs synthesis• adhesion molecules expression• chemokines expression• inflammatories cells recruitment


Dray A. et al 1994, TiPS 15: 190.

Dor patológica (crônica)

Dano tecidual, inflamação, patologia

Injúria do nervo

Estímulo de baixa intensidade

hiperalgesia

alodínia

fibras C, Aδ

fibras Cfibras C

fibras Αβ

Dor causada por um estímulo que normalmente não induz dor

resposta exagerada àum estímulo doloroso

Dor Fisiológica (aguda)

Estímulo de alta intensidade(térmico, mecânico, químico)

Estímulo de baixa intensidade(táctil, pressão)

dor aguda (proteção)

sensação inócua

fibras C, Aδ

fibras Aα,β

Inflammatory Painor Hyperalgesia

©©ALPM2008ALPM2008 Jackson S. P. & Schoenwaelder S. M. Nat Rev Drug Discovery, 2003, 2: 1-15.

Molecular Targets of Current Antithrombotic Drugs


Ensaio de Contorção Abdominal induzida por Ácido Acético em

Camundongo

Ensaio de Edema de Pata de Rato induzido por

Carragenina

Ensaio de Agregação Plaquetária

METHODOLOGIES

Orgão isolado: aorta, traqueia

Adm. Oral

t=0 h t=1h t=1:10 h t=1:30h

intrap.

20 min10 min

Início contagem Término contagemAdm. Oral

t=0 h t=1h t=1:10 h t=1:30h

intrap.

20 min10 min

Início contagem Término contagemAdm. Oral

t=0 h t=1h t=1:10 h t=1:30h

intrap.intrap.

20 min10 min

Início contagem Término contagem

http://www.ugobasile.com/site/product1.asp?ID=32


NN

OH

ArR

NAH

N-acylhydrazone

2

a

2H-pyridazinone

NN

OH

R

aa--bondbondrupturerupture

pyridazinone (1H)-pyridinone

NN

OH

ArR'

CN

OH

ArR

R' PDEPDE’’s s inhibitorsinhibitors

PatentPatent literatureliterature

O

O

N

ON

HS

LASSBio 294


-- ThienylacylhydrazoneThienylacylhydrazone CompoundsCompounds --LASSBio 294 LASSBio 294 AnaloguesAnalogues

O

O

NN

O

S

LASSBio 785

O

O

NN

O

S

LASSBio 786

O

O

N

ON

HS

LASSBio 294

O

O

NN

O

SH

LASSBio 787

O

O

NN

O

S

LASSBio 788

O

O

NN

O

SH

Br

LASSBio 789

Kummerle A. , 2005, Tese de Mestrado, IQ, UFRJ.Silva, A.G. et al. (2005) Bioorg. Med. Chem., 13, 3431.


Methode Optique

ESTÍMULO

PLATELET AGGREGATION ASSAY (Turbidmetric Method - BORN & CROSS, 1963):

Rabit and Human PRP and Washed Platelets


AAAA ColColáágenogeno

CICI5050 ((μμM)M) CICI50 50 ((μμM)M)

LASSBio 294LASSBio 294 15,3 15,3 ±± 0,20,2 18,3 18,3 ±± 8,78,7

LASSBio 785LASSBio 785 0,3 0,3 ±± 0,080,08 0,9 0,9 ±± 0,60,6

LASSBio 786LASSBio 786 0,02 0,02 ±± 0,60,6 7,9 7,9 ±± 2,42,4

LASSBio 787LASSBio 787 20,9 20,9 ±± 0,40,4 21,1 21,1 ±± 0,20,2

LASSBio 788LASSBio 788 0,2 0,2 ±± 0,30,3 1,5 1,5 ±± 0,20,2

LASSBio 789LASSBio 789 3,1 3,1 ±± 0,30,3 3,4 3,4 ±± 0,20,2

COMPOSTOSCOMPOSTOS

Platelet Aggregation induced by AA and ColágenoRabit PRP

-- IC50 of ThienylacylhydrazoneThienylacylhydrazone CompoundsCompounds --

cardiac muscle contractionVasodilatory – rat aorta –endotheliun independent

(IC50= 10,2 μM)

Positive Inotropic

Positive InotropicVasodilatory IC50 = 74 μM


Potency Order of ThienylacylhydrazoneThienylacylhydrazone CompoundsCompoundsPlateletPlatelet AggregationAggregation InducedInduced byby AA 200 AA 200 μμM M andand ColCol 55μμg/g/mLmL

AAAA 786> 786> 788788> > 785785> 789> 294> 787> 789> 294> 787

ColColáágenogeno 785785> > 788788> 789> 786> 294> 787> 789> 786> 294> 787


0

25

50

75

ADP 5 μMDMSO

LASSBio 294 100μMLASSBio 294 300μM

% A

greg

ação

LASSBio 294 LASSBio 294 ≈≈ 1414--17 % inibi17 % inibiççãoão

PlateletPlatelet AgregationAgregationInducedInduced byby ADP ADP

(5 (5 μμM M –– RabitRabit PRP)PRP)

0

25

50

75ADP 5 μMDMSO

LASSBio 785 100 μM

LASSBio 786 100 μMLASSBio 787 100 μMLASSBio 788 100 μMLASSBio 789 100 μMLASSBio 785 300 μMLASSBio 786 300 μMLASSBio 787 300 μMLASSBio 788 300 μM

LASSBio 789 300 μM

Compostos

% d

e Ag

rega

ção

**

* *

LASSBio 785 LASSBio 785 ≈≈ 3030--40 % inibi40 % inibiççãoão


0

50

100

150

ADPDMSOLASSBio 294 100LASSBio 294 300LASSBio 785 100LASSBio 785 300

LASSBio 786 100LASSBio 786 300LASSBio 787 100LASSBio 787 300LASSBio 788 100LASSBio 788 300LASSBio 789 100

LASSBio 789 300

Compostos μM

% d

e A

greg

ação

0

10

20

30

40

Compostos μM

% d

e A

greg

ação

2nd wave

Platelet Aggregation induced by ADP (3 3 μμM)M)Human PRP

-- ThienylacylhydrazoneThienylacylhydrazone CompoundsCompounds --


EFFECT ON THE BLEEDING TIME


0

500

1000

1500VEÍCULOAASLASSBio 294LASSBio 785LASSBio 786LASSBio 787LASSBio 788LASSBio 789

Compostos (300 μmol/ kg)

Tem

po d

e Sa

ngra

men

to(s

)

*

*

*

*


0

5

10

15

ColágenoDMSOLASSBio 294 100LASSBio 294 300LASSBio 785 100LASSBio 785 300

LASSBio 786 100LASSBio 786 300LASSBio 787 100LASSBio 787 300LASSBio 788 100LASSBio 788 300

LASSBio 789 100LASSBio 789 300

AAS 1000

Compostos μM

Impe

dânc

ia (o

hms/

min

)

*

* **

*

** * *

*

EFFECT ON THE HUMAN WHOLE BLOOD AGGREGATION INDUCED BY COL (20 μg/ml)



O

O

NN

O

S

O

O

NN

O

S

O

O

NN

O

SH

BrLASSBio 785 LASSBio 788 LASSBio 789

•100% AA Inhibition•90% Col Inhibition (rabit PRP)•30- 40% ADP (human PRP)•20- 30% Trombin WP•Collagen Human PRP:

50%: LASSBio 29470%: LASSBio 785, 786, 788, 789

TXA2Cyclic

Nucleotides

PlateletPlatelet AntiAnti--AggregatingAggregating ProfileProfile• ADP Rabit 35%• LASSBio 294 – Different Profile

AP + KT5720 (Inib. PKA)AP + ODQ (Inib. GC/NO)

No effect


• U-46619 e PAF induced aggregation - no activity

• Human whole blood : ⇓ Impedence (30% - 60%)Exception LASSBio 789

• Release reaction ≈ 90% of inhibition

• Bleeding Time: LASSBio 294: 53,3%LASSBio 785: 29,4%LASSBio 789: 88,9%

ANTITHROMBOTIC ANTITHROMBOTIC POTENTIALPOTENTIAL

PlateletPlatelet AntiAnti--AggregatingAggregating ProfileProfile


ThienylacylhydrazoneThienylacylhydrazone CompoundsCompoundsPlatelet Aggregation induced by Thrombin in the

presence of NO DonnorsDICKINSON et al. (1997) Biochem. J., 323, 371-377.

NO Donnors: Inhibit Platelet Aggregation dose –dep. (↑ AMPc e GMPc - limited)

PDE3 Inhibitors: Inhibit Platelet Aggregation

PDE2 Inhibitors: ↑ NO donnors inhibition

PDE3 Inhibitors + NO: Reverse the inhibition (PDE2 x PDE3)

↑PDE2

AMPc e GMPc

NO Donnors ↑ GMPc intraplatelet PDE3

↑ AMPc >>>GMPc


ROLE OF SNP, EHNA E MILRINONA ON THE PLATELET AGGREGATION INDUCED BY THROMBIN IN HUMAN WP

100

0

50

100

0

50

Período de Incubação (min)0 1 3

0 1 3

0 1 3

0 1 3

a) b) c) d)

a) b) c) d)

a) Trombinab) Trombina + SNP 10μMc) Trombina + Milrinona 100 μMd) Trombina + SNP + Milrinona

a) Trombina + EHNAb) Trombina + EHNA +SNP 10μMc) Trombina +EHNA +Milrinona 100 μMd) Trombina + EHNA +SNP + Milrinona

% d

e A

greg

ação

PDE2 Activation

PDE3 Inhibition

PDE2 Inhibition


Effect of LASSBio 785 in the presence of SNP on the platelet aggregation inducedby thrombin in human wp

100

0

500

a) b) d)c)

0 1 3 0 1 3 0 1 3 0 1 3 0 1 3

e)%

de

Agr

egaç

ão

Período de Incubação (min)

a) Trombinab) Trombina + LASSBio 785 300μMc) Trombina + SNPd) Trombina + SNP + LASSBio 785 100μMe) Trombina + SNP + milrinona + LASSBio 785 100μM

PDE2 InhibitionNo reversion


100

0

500

a) b) d)c)

0 1 3 0 1 3 0 1 3 0 1 3 0 1 3

e)%

de

Agr

egaç

ão


a) Trombinab) Trombina + LASSBio 788 300μMc) Trombina + SNP d) Trombina + SNP + LASSBio 788 100μMe) Trombina + SNP + milrinona + LASSBio 788 100μM


PDE2 InhibitionNo reversion


100

0

50

a) b) d)c)

0 1 3 0 1 3 0 1 3 0 1 3 0 1 3

e)

% d

e A

greg

ação


a) Trombinab) Trombina + LASSBio 789 300μMc) Trombina + SNP + LASSBio 789 100μMd) Trombina + SNP + LASSBio 789 10μMe) Trombina + SNP + milrinona + LASSBio 789 100μM



100

0

500

a) b) d)c)

0 1 3 0 1 3 0 1 3 0 1 3

% d

e A

greg

ação


a) Trombinab) Trombina + SNP +LASSBio 294 300 μM c) Trombina + SNP + LASSBio 786 300 μM d) Trombina + SNP + LASSBio 787 300μM

Effect of LASSBio 294, 786 and 787 in the presence of SNP on the plateletaggregation induced by thrombin in human wp


TXBTXB22 ProductionProduction in in HumanHuman WholeWhole BloodBlood

CompoundsCompounds ICIC5050 TXBTXB2 2 ProductionProduction ((μμM)M)

LASSBio 294 LASSBio 294 63,0 63,0 ±± 3,73,7

LASSBio 785 LASSBio 785 30,4 30,4 ±± 3,43,4

LASSBio 786 LASSBio 786 34,1 34,1 ±± 3,73,7

LASSBio 787 LASSBio 787 211,7 211,7 ±± 1,21,2

LASSBio 788 LASSBio 788 2,6 2,6 ±± 1,61,6

LASSBio 789 LASSBio 789 257,8 257,8 ±± 1,91,9



Non-stimulated Platelets

• AMPc: No alteration

• GMPc: significant increase

control=82.9±7.6; L785=182.4±9.4*; L788=177.6±14* (fmol/well)

Effect of ThienylacylhydrazoneThienylacylhydrazone CompoundsCompounds on on thetheCyclicCyclic NucleotidesNucleotides FormationFormation in human PRP

SNP-stimulated Platelets

• AMPc: No alteration


SNP=112.0±2.2; L785=197.6±20*; L788 = 217.3±6.8*; EHNA=205.2±12.4* (fmol/well)

SNP+PGE1-stimulated Platelets


SNP+PGE1=125.8±2.4; L785=216.4±16.7*; L788=255.7±16.6*)

• Functional studies in the presence of SNP suggested a PDE2-like effect for LASSBio 785, 788 and 789. • They modulate cyclic nucleotides (mainly cGMP) as PDE inhibitors.


STRUCTURAL MODIFICATIONS OTIMIZATION OF THE PHARMACOLOGICAL

PROFILE

LASSBio 78510 μM

PDE2 – no effect

PDE4 – no effectPDE3 – no effect

PDE5 – 50.5*

LASSBio 78810 μM

PDE2 – 23.6 ns

PDE4 – 32.7* (IC50 = 72.6 μM)PDE3 – no effect

PDE5 – 57.9*

PDE INHIBITIONDr. Claire Lugnier – ULP Strasbourg

IC50 = 37 μM

IC50 = 10 μM


ThienylacylhydrazoneThienylacylhydrazone CompoundsCompoundsSuggested Anti-platelet Mechanism of Actiom

COLÁGENO ADPAA

PLC

DAG

PKC

IP3

Ca++

TXA2

Ca++

⇓ AMPc

NO

GUANILATO CICLASE

GMPc

PROTEÍNA QUINASE G

TXA2

Gq

TIENILACILIDRAZÔNICOS

TIENILACILIDRAZÔNICOS

Inibição de PDE 2 ou 5?Ativação da guanilato ciclase?

Inibição da PGHS-1Inibição da TS

STD


O

O

N

ON

HS

LASSBio 294

(+) Vasodilatator(+) Anti-thrombotic(-) Antinflammatory

And analgesic

Kummerle A. , 2005, Tese de Mestrado, IQ, UFRJ.Brito F C F, 2005, Tese de Doutorado, ICB, UFRJ.Bezerra Neto H J C, Lacerda D I et al, 2006, Bioorg Med Chem 14, 7924.Duarte C M, Tributino J L M et al, 2007, Bioorg Med Chem 15, 2421.

O

O N

O

N

HHNHSO2CH3

LASSBio 930

O

O N

O

N

HHNO2

OH

LASSBio 881

LASSBio 930 LASSBio 883

LASSBio 891

O

O ON

O

NHH

NO2

O

O ON

O

NHH

NO2

N CH3

H3C

AntinflamatórioAnalgésico

Anti-isquêmico

AntinflamatórioAnalgésico

COX-2 / TNF-α


LASSBio 891

O

O ON

O

NHH

NO2

LASSBio 883

O

O ON

O

NHH

NO2

N CH3

H3C

AIAN

ortoorto--NitroNitro--NAHNAH--1,31,3--BenzodioxolicBenzodioxolic CompoundsCompoundsScreening• 3 séries

≈ 20 derivados


• Determinação da potência antinociceptiva no ensaio de contorções abdominais induzidas por ácido acético 0,6%

• Determinação da potência antinociceptiva no ensaio de Formalina 2,5% ( Fase inflamatória)

• Determinação da potência antiinflamatória no ensaio de edema de pata de rato induzido por carragenina 1%

Compostos DE50 (µmol/kg) Efeito Máximo (%) LASSBio 883

14,4 ± 1,8

59,8

LASSBio 891

10,8 ± 1,4

57,8

Nimesulido

24,2 ± 2,3

66,3

Compostos

DE50 (µmol/kg) Efeito Maximo (%)

LASSBio 883

77,9 ± 9,0

69,1

LASSBio 891

123,2 ± 10,2

56,2

Nimesulido

52,3 ± 6,4

70,7

Compostos DE50 (µmol/kg) Efeito Maximo (%) LASSBio 883

105,5 ± 7,1

42,2

LASSBio 891

117,6 ± 10,9

45,4

Nimesulido

72,2 ± 4,6

56,3

Os valores são medidos cronometrando o tempo de resposta e volume de edema ± ESM. *P<0,05 os valores médios foram estatisticamente significantes (t-Students)

ortoorto--NitroNitro--NAHNAH--1,31,3--BenzodioxolicBenzodioxolic CompoundsCompounds


0

30

60

90AAAA + DMSO

Nimesulido

LASSBio 883LASSBio 891

Compostos (100μM)

% d

e Ag

rega

ção

*100%

Platelet Aggregation induced by AA (200 μM) - Rabbit PRP

NO EFFECT



M μN

imes

ulid

o 50

0

M μAs

pirin

a 50

0

M μLA

SSBi

o 88

3 50

0

M μLA

SSBi

o 89

1 50

0 0

20

40

60

80

100

*

*

% d

e in

ibiç

ão d

e TX

B 2

Cel

ecox

ib 0

,01

Cel

ecox

ib 0

,1C

elec

oxib

1C

elec

oxib

10

Cel

ecox

ib 1

00

Nim

esul

ido

0,01

N

imes

ulid

o 0,

1N

imes

ulid

o 1

Nim

esul

ido

10N

imes

ulid

o 10

0

LAS

SB

io 8

83 0

,01

LAS

SB

io 8

83 0

,1LA

SS

Bio

883

1LA

SS

Bio

883

10

LAS

SB

io 8

83 1

00

LAS

SB

io 8

91 0

.01

LAS

SB

io 8

91 0

.1LA

SS

Bio

891

1LA

SS

Bio

891

10

LAS

SB

io 8

91 1

00

0

20

40

60

80

100 ***

** *

** *

*

**

*

* * **

% d

e in

ibiç

ão d

e PG

E 2

• Selectivity COX-1/COX-2 – Human Whole Blood

Sangue humano coletado sem anticoagulante

Alíquotar 1ml de sangue

+ 4µL de DMSO ou Derivados

1 hora

Centrifugação13000

RPM/15min

Soro coletado e

congelado a – 20º C

Dosagem de TXB2

por EIA




1 hora


RPM/15min

Soro coletado e


Dosagem de TXB2

por EIA




1 hora


RPM/15min

Soro coletado e


Dosagem de TXB2

por EIA




1 hora


RPM/15min

Soro coletado e


Dosagem de TXB2

por EIA

Sangue humano coletado

com heparina(10 UI/ml)



15 minutos


RPM/5min

Soro coletado e congelado a – 20º C

Dosagem de PGE2

por EIA

LPS (100 µg/ml)

24 horas

Agitação 37 °C





15 minutos


RPM/5min


Dosagem de PGE2

por EIA

LPS (100 µg/ml)

24 horas

Agitação 37 °C





15 minutos


RPM/5min


Dosagem de PGE2

por EIA

LPS (100 µg/ml)

24 horas

Agitação 37 °C





15 minutos


RPM/5min


Dosagem de PGE2

por EIA

LPS (100 µg/ml)

24 horas

Agitação 37 °C


Os valores são medidos cronometrando o tempo de resposta (s) e volume de edema (µl) ±ESM. *P<0,05 os valores médios foram estatisticamente significantes (t-Students)

• Ensaio de hiperalgesia térmica induzida por carragenina 1% (Teste da placa quente modificado)

0

1

2

3

4

5

6Controle

Talidomida

Nimesulido

Nimesulido + Tal

LASSBio 883

LASSBio 883 + Tal

LASSBio 891

LASSBio 891 + Tal

Tempo (3a Hora)

61,5%

91,1%

68,8%

96,0%

62,0%

88,5%

*

* *

*

*

*

*

Hiperalgesia

Latê

ncia

(s)

0

100

200

300

400

500

600Controle

Talidomida

Nimesulido

Nimesulido + Tal

LASSBio 883

LASSBio 883 + Tal

LASSBio 891

LASSBio 891 + Tal

16,1n.s.29,3%

21,0%

53,0%

* *

* * * *

Edema

Tempo (3a Hora)

Vol

ume

de E

dem

a (μ

L)+

Cg subpl.

Hiperalgesia Mecânica: mediadores em sequência(Cunha TM et al 2005, PNAS 102: 1755)

Thermal Hyperalgesia

LAVICH, T.R., et al. Eur J of Pharmacol, 61039, (2003), p.1-8.


LPS

/DM

SO M μ

Talid

omid

a 10

0

M

μLA

SS

Bio

883

10

M

μLA

SS

Bio

883

50

M

μLA

SS

Bio

883

100

M μLA

SS

Bio

891

10

M μLA

SS

Bio

891

50

M μLA

SS

Bio

891

100

0

20

40

60

80

100

120

65,7%

*

**

41,5%

64,0 %

% P

rodu

ção

de T

NF-α

Os resultados são expressos em valor médio de % de Produção de TNF-a / n= 3, *p<0,05.

• Avaliação da Produção de TNF-a em sobrenadante de macrófagos alveolares de camundongos.


TNF-α

Expressão de COX-2

COX-1

Dosagem (COX-1)

FormalinaHiperalgesia

Contorção

LASSBio 883

Inibição

Inibidor

x

Existe uma Grande Liberação de TNF-α por Macrófagos, Residentes

na região peritoneal

Dosagem (COX-2)Edema Carragenina

SensibilizaçãoLiberação de Prost

COX-2

Levando

Levando

TNF-α

Expressão de COX-2

COX-1

Dosagem (COX-1)


Contorção

LASSBio 883

Inibição

Inibidor

x

Existe uma Grande Liberação de TNF-α por Macrófagos, Residentes

na região peritoneal

Dosagem (COX-2)Edema Carragenina

SensibilizaçãoLiberação de Prost

COX-2

Levando

Levando


CLONCLUSIONS


SIMBIOTIC COMPOUNDSIMBIOTIC COMPOUNDTNFTNF--αα / COX/ COX--2 2



CLONCLUSIONS

COX-2 Dosagem COX-1


Contorção

LASSBio 891

Diminui Liberação

InibiçãoLiberação de mediadores na região

peritoneal

Mediadores Pró-Algésicose Pró-Inflamatórios

COX-1

ReduzSensibilização

Edema Carragenina

x

Vasodilatação Migração

COX-2 Dosagem COX-1


Contorção

LASSBio 891

Diminui Liberação

InibiçãoLiberação de mediadores na região

peritoneal

Mediadores Pró-Algésicose Pró-Inflamatórios

COX-1

ReduzSensibilização

Edema Carragenina

x

Vasodilatação Migração


COXCOX--2 SELECTIVE INHIBITOR2 SELECTIVE INHIBITOR


DERIVADOS N-ACILIDRAZÔNICOS QUINOXALÍNICOS


Atividade Analgésicav.o. 100 μmol/kg

AtividadeAntinflamatóriav.o. 100 μmol/kg

Derivados NAHQuinoxalínicos

Mazzeu E F, 38º Congresso SBFTE, 2006.


0 1 2 3 4 5

012345678

Veículo

****

LASSBio 1009LASSBio 1013*

*

Tempo de leitura (h)

Varia

ção

de L

atên

cia

(s)

0 1 2 3 4 5

012345678

Veículo

*** *



Varia

ção

de L

atên

cia

(s)

0 1 2 3 4 5

012345678

VeículoLASSBio 1018LASSBio 1024

**

** *


Varia

ção

de L

atên

cia

(s)

0 1 2 3 4 5

012345678

Veículo

*



Varia

ção

de L

atên

cia

(s)

Efeito Anti-hiperalgésico Temporal dos Derivados Quinoxalínicos

Compostos 100μmol/Kg, v.o, n=5-8* p<0,05 (teste t de Student)


0

5

10

15

20

25VEÍCULOLASSBio 1009LASSBio 1013LASSBio 1016LASSBio 1017LASSBio 1018LASSBio 1024LASSBio 1195LASSBio 1196

54,4%* 61,2%

** 56,2%*

61,7%**

46,4%*

43,7%

4,8%

34,7%

* p< 0,05 , ** p< 0,01 One-way ANOVA, % inibição comparado ao controle veículo

Compostos 100μmol/Kg, v.o

ASC

(0,5

- 4h

)

Efeito Anti-hiperalgésico dos Derivados Quinoxalínicos:Área Sobre a Curva (ASC) do efeito temporal.


0

5

10

15

20

COLCOL + DMSOL.1008L.1009L.1010L.1011L.1012L.1013L.1014L.1015

L.1016L.1017L.1018L.1019L.1020L.1021L.1022L.1023L.1024L.1025

*

*

77,9% 48,8%

Compostos 100 μM

Velo

cida

de d

e A

greg

ação

(incl

inaç

ão)

0

25

50

75

100

L.1011

AA

L.1020

AA + DMSOL.1008L.1009L.1010

L.1012L.1013L.1014L.1015

L.1016L.1017L.1018L.1019

L.1021L.1022L.1023L.1024L.1025

Compostos 100 μM

% A

greg

ação

* *

26,8%

25%

**

39,6% 20,3%

Derivados NAHQuinoxalínicos

Atividade Anti-Agregante Plaquetária

Fumian M M, 38º Congresso SBFTE, 2006.

LASSBio 1013 – 55,5% de inibição nas concentrações de 1μM, 10μM e 100μMLASSBio 1016 – 29,2% de inibição na concentração de 1μM e 39,3% a 100μMLASSBio 1018 – 35,1% de inibição na concentração de 1μM e 54,2% a 100μM

LASSBio 1013 – 50,9% de inibição nas concentrações de 1μM, 10μM e 100μMLASSBio 1016 – 40,1% de inibição nas concentrações de 1μM, 10μM e 100μMLASSBio 1018 – 19,7% de inibição na concentração de 1μM e 75,4% a 100μM

Efeito sobre a produção de TXB2

Efeito sobre a produção de PGE2

Inibição PGs – não seletiva


Anel Imidazolo-Piridina

N

N

CH3

O

NH

N

WN

N Ar

SCH3

O O

A

A

A’

Anel Quinoxalina

Anel Quinoxalina

NAH

NAH

B

B

Grupamentofarmacofórico

O

NH

NN

N R

W

Figura 2 - Gênese da Nova Série de Derivados N-acilidrazônicos (NAH) quinoxalínicos, desenhados como candidatos a protótipos antiinflamatórios e analgésicos

A e A’= bioisosterismoclássico

B+A’

Hibridação Molecular &

Bioisosterismo

W= substituintes elétron retiradores ou doadores

Anéis heteroaromáticos

N

NNH

NOO

LASSBio 1020

LASSBio 1021

N

NNH

NO N

LASSBio 1025

N

NNH

NO

N

Anel Imidazolo-Piridina

N

N

CH3

O

NH

N

WN

N Ar

SCH3

O O

A

A

A’

Anel Quinoxalina

Anel Quinoxalina

NAH

NAH

B

B

Grupamentofarmacofórico

O

NH

NN

N R

W

Figura 2 - Gênese da Nova Série de Derivados N-acilidrazônicos (NAH) quinoxalínicos, desenhados como candidatos a protótipos antiinflamatórios e analgésicos

A e A’= bioisosterismoclássico

B+A’

Hibridação Molecular &

Bioisosterismo

W= substituintes elétron retiradores ou doadores

Anéis heteroaromáticos

N

NNH

NOO

LASSBio 1020

N

NNH

NOO

LASSBio 1020

LASSBio 1021

N

NNH

NO N

LASSBio 1021

N

NNH

NO N

LASSBio 1025

N

NNH

NO

N

LASSBio 1025

N

NNH

NO

N

DERIVADOS N-ACILIDRAZÔNICOS QUINOXALÍNICOS

0 100 200 300

20

30

40

50

60

70

80

90

100

110

120 DMSOLASSBio 1020LASSBio 1021LASSBio 1025

*

*

** * *

*

*

*

*

*

*

*

*

*

*

Concentração μM

% C

ontr

ação

1 10 100 1000

-10

10

30

50

70

90

LASSBio 1025


[μM]

Rel

axam

ento

(% 1

0 μM

FN

F)

65,4 %119,8 μMLASSBio 1025

74,1 %55,1 μMLASSBio 1021

72,1 %10,9 μMLASSBio 1020

Relaxamento máximoIC50Composto

65,4 %119,8 μMLASSBio 1025

74,1 %55,1 μMLASSBio 1021

72,1 %10,9 μMLASSBio 1020

Relaxamento máximoIC50Composto

prazosina

Louback L S, XXVIII Jornada IC UFRJ, 2006.


Simbióticos

TNF-α

MAPK p38

PGs

PDEs


Prof. Eliezer J. BarreiroProf. Eliezer J. BarreiroProf. Carlos A. M. Prof. Carlos A. M. FragaFraga

ProfaProfa. Lidia M. Lima. Lidia M. LimaProfaProfa. . FernandaFernanda Carla F Carla F BritoBrito

Dra. Patricia C. LimaDra. Magna Suzana A. Moreira

Ms. Arthur E. KümmerleDra.Carolina Matos Duarte

Ms. Daniel I. LacerdaLeandro Louback

Eduardo F. Mazzeu

Departamento de Farmacologia Básica e Clínica, ICB, UFRJ.

Prof. Claire Lugnier – CNRS, UniversitéLouis Pasteur, Strasbourg, Fr.


Universidade Federal do Rio de JaneiroUniversidade Federal do Rio de Janeiro

PRONEX

propriedades farmacológicas de diferentes séries … · propriedades farmacológicas de...

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