Desenvolvimento de Modelos de Pele Humana Reconstituída na forma de Kits para Testes

de Segurança e Eficácia de Produtos Farmacêuticos e Cosméticos

Programa RHAE Pesquisador na EmpresaEdital MCT/SETEC/CNPq nº 67/2008

Bolsista Tereza M. S. P. VictorioCoordenador Simone F. Hengeltraub

Setores de Atuação

1) Higiene Pessoal, Perfumaria e Cosméticos2) Saúde3) Biotecnologia4) Prestação de Serviços

TRIDSKIN Laboratórios Ltda.

A TRIDSKIN oferece soluções in vitro para testes de segurança e de eficácia, que dão suporte às atividades de desenvolvimento e de pesquisa de produtos e de matérias primas do setor cosmético e farmacêutico.

Contribuir com a comunidade científica, na busca de alternativas de testes in vitro que eliminem a necessidade da realização de testes em animais.

Contribuir para a formação de um centro brasileiro para desenvolvimento e validação de métodos alternativos aos testes em animais para avaliação de segurança de ingredientes e produtos.

Ser um dos laboratórios escolhido pelo centro de validação Brasileiro (BraCVAM) e Europeu (ECVAM) para participar do processo de validação de novos métodos alternativos de testes de segurança in vitro.

Visão

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Desenvolvimento de kits de cultura tridimensional de pele humana para testes de segurança de substâncias químicas e ingredientes cosméticos (irritação cutânea, corrosividade, sensibilização cutânea, irritação ocular, fotoalergenicidade) e testes de eficácia de produtos cosméticos e seus ingredientes.

Objetivo do Projeto

Para atingir este objetivo, a TRIDSKIN teve o compromisso de desenvolver outros métodos bioquímicos, baseados em cultura de células em monocamadas ou em biomoléculas.

1) Epiderme equivalente: queratinócitos em membrana sintética;

2) Pele equivalente: derme (matrix de colágeno) e epiderme (queratinócitos)

2003/15/EC: The 7th Amendment of Cosmetic European Directive

- 11/09/2004: Proibição de testes em animais para produtos cosméticos.

- Proibição progressiva de testes em animais de ingredientes:

• “Testing Ban”: 11/03/2009

• “Marketing Ban”: 11/03/2009 proibir o uso de animais para testes de

segurança de ingredientes cosméticos, com exceção de 3 estudos (11 de

Março 2013):

�Toxicocinéticos

�Dose repetitiva

�Toxicidade reprodutiva

• 11 de Março de 2013: proibir completamente o uso de animais para testes

de segurança de ingredientes cosméticos

REACHRegistration, Evaluation, Authorization and

restriction of CHemicals• Lei cosmético = consumidor• Lei químico = trabalhadores e meio ambiente

Legislação para Substâncias Químicas:

- Diretiva 67/548/EC: “Dangerous Substances Directive”

- Diretiva 88/379/EC: “Dangerous Preparations Directive”

ECVAM (European Centre for the Validation of Alternative Methods)

Governo

Indústrias

Universidades

Consumidores

Entidades

* BCOP, ICE, Cytosensor, Fluoresceína, Ensaio baseado em células (parcial)

** HET-CAM, Balb/C 3T3 NRU citotoxicidade

Métodos Alternativos de Substituição

Disponíveis

Métodos Alternativos de Redução e Refinamento Disponíveis

Métodos Não Validados

Corrosividade Toxicidade Aguda Irritação Ocular**

Irritação Cutânea Sensibilização Cutânea Toxicidade Dose Repetitiva

Mutagenicidade Embriotoxicidade (células tronco)

Carcinogenicidade

Genotoxicidade Toxicidade Reprodutiva

Fototoxicidade Toxicocinética

Absorção Dérmica

Teste pirogenicidade

Irritação Ocular*

Corrosividade da Pele

Método Alternativo Validado (substituição):

- TER: método que substitui (EC B.40, OECD 430)

- EPISKINTM: método que substitui (EC B.40, OECD 431)

- EpiDermTM: método que substitui(EC B.40, OECD 431)

Irritação Cutânea

Método Alternativo Validado (substituição):

- EpiSkinTM , EpiDermTM modificado e SkinEthicTM RHE: validado pelo ECVAM, aprovado pelo ESAC e sobre análise final pelo SCCS.

-Endpoint MTT e IL-1α

- EC 440/2008, EC B.46, OECD draft

PROCESSO DE VALIDAÇÃO

Extremamente importante para aceitação do modelo pelos órgãos governamentais

1) Obter aprovação de Comitê de Ética para obtenção de pele de prepúcio de RN

2) Isolar fibroblastos e queratinócitos3) Definir meio de cultura para queratinócitos4) Definir frasco para cultivo de queratinócitos e placas para o

crescimento de epiderme e pele equivalente5) Construir Banco de Células6) Definir o uso de “feeder layer”7) Definir número de queratinócitos semeados sobre matrix

extracelular e membrana sintética8) Definir protocolo para histologia9) Testar o modelo para formação debarreira (SDS)10) Testar o modelo entre 3 pesquisadores do mesmo laboratório11) Testar o modelo entre pelo menos 3 diferentes laboratórios

Passos para validação

Projeto aprovado no Comitê de Ética do Hospital Albert Einstein

Cultura de Queratinócitos em

“Feeder Layer”

Definição da passagem a ser utilizada no modelo 3D

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