pós - aula 3 preparo de amostra - 21-03

7/18/2019 Pós - Aula 3 Preparo de Amostra - 21-03

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PREPARO DE AMOSTRASPREPARO DE AMOSTRAS

Ribeirão Preto - 2012

Profª Drª Cristiane Masetto de [email protected]

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO

FACULDADE DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICASDE RIBEIRÃO PRETO



soro plasma

urina

líquor tecidos

meio de dissolução

géiscremes

comprimidos




- Livre interferentes

- Concentração daamostra

- Erros na quantificação

-

Deterioração das colunas e outraspartes (compatível com o sistema deanálise)

- Perda de tempo com manutençãopreventiva (limpeza de detector, dacoluna, limpeza da fonte de íons)- Necessidade de atingir limites cadavez menores

OBJETIVOS

IMPORTÂNCIA




Máxima recuperação do analito de interesse

Menor número de passos

Rápido

Alta precisão

Fácil automação

PROCEDIMENTO DE EXTRAÇÃO IDEAL




Características da matriz

Características do analito

Técnica de análise empregada

ESCOLHA DA TÉCNICA DE EXTRAÇÃO




PRECIPITAPRECIPITAÇÇÃO DE PROTEÃO DE PROTEÍ Í NASNAS

- DESPROTEINIZAÇÃO

- solventes orgânicos (solubilidade das proteínas)- ácidos (formação de sais insolúveis)

- DESVANTAGENSBaixa recuperaçãoNão seletivo

Baixa exatidãoEm alguns casos: diluição da amostra




EXTRAEXTRAÇÇÃO LÃO LÍ Í QUIDOQUIDO--LLÍ Í QUIDOQUIDO

LIQUID LIQUID EXTRACTION (LLE)LIQUID LIQUID EXTRACTION (LLE)

partição da amostra entre dois líquidos imiscíveis: fase aquosa e faseorgânica

analito: coeficiente de partição entre as duas fases

solvente extrator

pH da fase aquosa volume do solvente extrator

A eficiência da LLE depende:




•amostras com alta afinidade pelaágua são parcialmente extraídas pelosolvente orgânico

• impurezas do solvente sãoconcentradas (solvente ultrapuro)

• formação de emulsões

• volumes relativamente grandes deamostra e solvente são requeridos

• toxicidade dos solventes orgânicos

• difícil automação

• simples

• grande número de solventes(solubilidade e seletividade)

• proteínas presentes naamostra são desnaturadas

DESVANTAGENS VANTAGENS




EXTRAEXTRAÇÇÃO EM FASE SÃO EM FASE SÓÓLIDALIDASOLID PHASE EXTRACTION (SPE)SOLID PHASE EXTRACTION (SPE)




SISTEMA DE EXTRAÇÃO EM FASE SÓLIDA




Condicionamento – expor os sítios para interação

Aplicação da amostra - lenta

Lavagem – eliminar interferentes

Secagem do cartucho

Eluição – eluir composto de interesse

Condicionamento Adição amostra Lavagem Eluição

ContaminanteAmostra de interesse




MECANISMO EM SPE

Modo reversoModo normal

Troca iônica

RETENÇÃO: analito e grupos funcionais da sílica

C-8, C-18 e CN: interações de Van der Waals

Modo normal: ligações de hidrogênio, interações ππππ- ππππ edipolo-dipolo

Troca iônica: interações eletrostáticas




Vantagens da SPE em relaVantagens da SPE em relaççãoão àà

LLELLE

Maior eficiência

Elimina maior número de interferentes

Reduzido consumo de solvente orgânico

Fácil coleta do analito

Fácil automação




MICRO EXTRAMICRO EXTRAÇÇÃO LÃO LÍÍQUIDOQUIDO--LLÍÍQUIDO DISPERSIVAQUIDO DISPERSIVADISPERSIVE LIQUID LIQUID MICROEXTRACTIONDISPERSIVE LIQUID LIQUID MICROEXTRACTION

(DLLME)(DLLME)

Sistema ternário de solventes

- Solvente dispersor

- Solvente extrator

- Fase aquosa (analito)




Zang et al ., Chin. J. Anal. Chem. 37(2), 2009


FUNDAMENTOS TEFUNDAMENTOS TEÓÓRICOSRICOS



Caldas et al ., Quím. Nova, 34 (9), 2011

FUNDAMENTOS TEFUNDAMENTOS TEÓÓRICOSRICOS




Rezaee et al ., J. Chromatogr. A, 1116, 2010




SOLVENTE EXTRATORSOLVENTE EXTRATOR

- Alta densidade

- Baixa solubilidade

-Capacidade de extração composto de interesse

-

Bom comportamento cromatográficodissulfeto de carbono

tetracloreto de carbono

clorofórmio

diclorometano

tetracloroetilenoRibeirão Preto - 2012



SOLVENTE DISPERSORSOLVENTE DISPERSOR

-

Miscível no solvente extrator e na fase aquosa

Acetona

Metanol

Acetonitrila




Fatores que afetam a eficiência da extraFatores que afetam a eficiência da extraççãoão

- Tipo solvente extrator

- Tipo solvente dispersor

- Volume solvente extrator (fator de pré-concentração)

- Volume solvente dispersor




Volume da fase sedimentadaVolume da fase sedimentada

-Solubilidade do solvente extrator na fase aquosa

-Volume da amostra

-Volume do solvente dispersor

- Volume do solvente extrator




Fator de prFator de préé--concentraconcentraçção (PF)ão (PF)

Csed: concentração do analito na fase sedimentadaC0: concentração inicial do analito na amostra

RecuperaRecuperaçção da extraão da extraçção (ER)ão (ER)




Outros fatores que influenciam a eficiência da extraOutros fatores que influenciam a eficiência da extraççãoão

-Tempo de extração

-

Força iônica - adição de sal(0,5 a 10 %)




VantagensVantagens

-Rapidez

-Baixo custo-Prática e fácil

-Altos valores de recuperação

-Alto fator de enriquecimento-Baixo consumo de solventes orgânicos

-Cálculo do volume da fase sedimentada

-Consumo de solventes clorados

-Solvente extrator deve ter densidade maior do que a água

DesvantagensDesvantagens




Ojeda et al. Chromatographia , 2011 (Published online)

Publications of DLLME procedures




DESAFIOSDESAFIOS

Matrizes biológicasRobustez

Densidade dos solventesAutomação

Incompatibilidade com algumas técnicas analíticas


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