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PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO Código:

POP HEM - 008

HEMATOLOGIA – Automatizada Folha:

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Elaboração

Alexsandra de Afonseca

Bioquímica

Revisão

Ana Raíssa Mota dos Santos Gerente da Qualidade

Aprovação e Liberação

Márcia Maria Mendes de Moraes

Diretora do Laboratório

Ass: Data:10.05.2010

Ass: Data: 25.05.2018

Ass: Data: 25.05.2018

0. Situação de revisão:

Situação Data Alteração

0.0 11.04.2018 Versão inicial

0.1 25.05.2018 Inclusão do item 6.5.4 Instruções rápida de uso do Abx Micros e do anexo 8.6 Instruções do Aparelho ABX Micros

1. Objetivo:

Este procedimento descreve as etapas e requisitos necessários à rotina, para realização do exame Hemograma

e outros relacionados como: leucograma, eritrograma, dosagem de hemoglobina, hematócrito e contagem de

plaquetas. Todos automatizados no equipamento de hematologia ABX Micros 60.

2. Campo de Aplicação:

Aplica-se ao setor técnico, na bancada de hematologia.

3. Responsabilidade:

Técnicos e bioquímicos.

4. Referências:

PS 010 - Biossegurança

PS 007 - Laudos Laboratoriais

Manual de Informação de Segurança – ABX Micros 60

BAIN, Barbara J. Células sangüíneas: um guia prático. 2.ed. – Porto Alegre: Artes Médicas, 1997.

FAILACE, Renato. Hemograma: manual de interpretação. 3.ed. – Porto Alegre: Artes Médicas, 1995.

Documento em CD- Rom do ABX Micros 60

5. Terminologia, Definições e Símbolo:

WBC - Contagem de Leucócitos LIN - Linfócitos MON – Monócitos GRA - Granulocitos RBC - Contagem de Hemácias Hgb - Concentração de hemoglobina Hct - Hematócrito VCM - Volume Corpuscular Médio HCM - Hemoglobina Corpuscular Média CHCM - Concentração da Hemoglobina Corpuscular Média RDW - Amplitude de Distribuição da Série Vermelha PLT- Contagem de Plaquetas PDW – Amplitude de Distribuição Plaquetária VPM - Volume Plaquetário Médio PCT – Plaquetócrito


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EDTA - ácido etilenodiaminotetracético (anticoagulante)

6. Descrição:

6.1 Aplicação Clínica O hemograma é o exame laboratorial de rotina para a avaliação quantitativa e qualitativa dos elementos figurados do sangue. Este procedimento aplica-se também a dosagem isolada de Ht, Hb, plaquetas ou leucograma. 6.2 Princípio do Método

O ciclo de análise do ABX Micros 60 utiliza-se de dois principais sensores, um detector de luz e um de impedância elétrica. Os Leucócitos (WBC), são contadas no tamanho da célula e avaliadas. O aparelho diferencia três tipos: células pequenas (linfócitos), células medias (neutrófilo, eosinófilo e basófilo)e células grande(monócito) e requer uma contagem manual de células. Os glóbulos vermelhões e contagen de Plaquetas são medida por um principio de variação impedância, já a hemoglobina é medida por fotometria além de computação a partir de dados armazenados para medição direta de Hematócrito (Hct), VCM, HCM, CHCM, RDW, VPM, Pct, PDW. Todos descritos detalhadamente no manual deste equipamento Seção Tecnologia. 6.2 Amostra

A amostra utilizada é sangue total com EDTA, o jejum não é obrigatório. O material colhido é identificado com código de barras e transportado a temperatura ambiente e dentro das normas de Biossegurança (PS 010), esta deve ser encaminhada ao setor técnico, sendo ideal que a análise seja realizada até 6 horas após a coleta. A amostra é considerada inadequada quando: colhida em tubo errado ou mal identificado, congelada ou coagulada. A estabilidade da amostra colhida com EDTA é de 8h à temperatura ambiente e de 48h se refrigerada (2 a 8°C).

6.3 Controle, Reagentes e Materiais

6.3.1 Corantes:

Corante panótico rápido, pronto para uso. Solução de corante Wright. Para preparo vide anexo 8.2. 6.3.2 - Reagentes para automação:

- ABX Miniclear - ABX Minilyse Lmg - Minoclear - Diluente de 20 litros - Sangue controle níveis baixo, alto e normal - ABX Minitrol 16 - Controle Interno 3 níveis Controllab 6.4 Equipamentos e materiais

Analisador hematológico ABX micros 60;

Homogeneizador;

Microscópio.

Tubos de coleta com anticoagulante EDTA, volumes variados.

Lâminas de vidro para microscopia, tamanho aproximado de 25 x 76 mm.

Lâminas de vidro distensora para esfregaços.

6.5 Procedimentos

6.5.1 Execução do Exame Automatizado:


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Rotina

− Observando as instruções do guia rápido e do manual do ABX Micros 60 e bula, processar os controles no

equipamento.

− Vide no PS 005 Controle Interno de Qualidade – Segue instruções para processamento do Controle Interno

assim como plano de contingência.

− Usar os EPIs conforme descrito no PS 010-Biossegurança.

− Baseando-se nas orientações de como processar amostras, contidas no Manual do equipamento iniciar o

processamento das amostras. Lembrando que a identificação das amostras no equipamento dar-se

manualmente digitando o código de barras.

− Uma vez processadas as amostras, o histograma será impresso automaticamente pelo aparelho. Proceder a

confecção e leitura da lâmina para casos cabíveis.

− Fazer a confecção e coloração dos esfregaços sanguíneos de todas as amostras para hemograma, leucograma

e plaquetas. Vide Anexo 8.2. A coloração utilizada rotineiramente é a técnica rápida – Panótico.

− Em caso de pane no equipamento, seguir orientações do anexo 8.5.

6.5.2 Microscopia

Rotina: Avaliação microscópica da amostra:

− Examinar as lâminas das amostras selecionadas após coloração. Utilizar-se do microscópio do setor. Usar

objetiva de 40X. A objetiva de 100X de imersão deve ser reservada para avaliação de inclusões, granulações

citoplasmáticas etc.

− Avaliar a série vermelha, observando a forma, dimensão, coloração e empilhamento dos eritrócitos. Verificar

se os dados numéricos do resultado fornecido pelo equipamento de automação são comparáveis aos vistos ao

microscópio.

− Avaliar as plaquetas quanto ao número e morfologia (tamanho).

− Avaliar leucócitos contando 100 leucócitos e classificando-os diferencialmente. Atentar para características

morfológicas, tintoriais e atípicas. Observar a existência de eritroblastos, contá-los separadamente dos

leucócitos relacionando-os com 100 leucócitos. O equipamento de automação ABX Micros faz a distinção de

eritroblastos, logo resultados provenientes desta automação não devem ter o número total de leucócitos

corrigidos. Salvo em situações que o bioquímico julgar que a contagem do equipamento não foi fidedigna.

− Após a avaliação microscópica, fazer as alterações, se necessário, e acrescentar as informações importantes

diretamente no impresso do resultado ou na ficha do paciente.

− Fazer a liberação dos resultados no Sistema SMART.

6.5.3 Manutenção do Equipamento ABX Micros


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Todas as manutenções necessárias do ABX Micros devem ser realizadas conforme instruções operacionais

contidas no Manual do Usuário, respeitando sempre sua periodicidade e registrando sua execução em planilha

específica (anexo 8.3).

Limpeza Diária automática:

• Ao ligar a cada 13 amostras ou 4 horas parado.

Limpeza concentrada:

• Realizada semanalmente

Reposição de reagente:

• Sempre que um dos reagentes terminar, o equipamento acenderá uma luz vermelha no painel frontal. A

troca deve ser realizada e o lote deve ser inserido.

Troca do reservatório de esgoto:

• Sempre que o reservatório encher o equipamento, deverá ser substituído.

6.5.4 Instruções rápida de uso do Abx Micros

Disponibilizamos no setor técnico um quadro com as instruções básica de uso do aparelho Abx Micros

(anexo 8.6) para esclarecimento de dúvidas, vale ressaltar que todos os colaboradores foram devidamente

treinados e somente os mesmo poderão manusear o aparelho.

6.5.5 Equipamento parado

Quando o aparelho MICROS ABX 60 estiver inoperante, os exames HEMATOCRITO E HEMOGLOBINA deverão

ser enviados para NTO, para isso, os seguintes exames deverão ser acrescentados na OS do paciente na BASE

MEDDI:

2804041B – HEMATOCRITO NTO

2804042A –HEMATOCRITO NTO

Imprimir, entregar os resultados e deixar um laudo impresso para a bioquímica digitar o resultado no dia

seguinte.

6.6 Cálculo:

Correção da contagem de leucócitos em presença de eritroblastos

Contagem de leucócitos x 100

100 + N° de eritroblastos

6.8 Limitações dos métodos:

− Homogeneização inadequada da amostra;


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− Falha na aspiração da amostra;

− Amostra com coágulos;

− Amostras com valores para leucócitos, hemácias e plaquetas acima do limite de detecção. Nestes

casos no campo do resultado, o equipamento mostrará símbolos: >>>>.

7. Controle de Registro

8. Anexos:

8.1 - Confecção, coloração de lâminas e preparo de corante;

8.2 – Formulários de Limpeza do ABX Micros

8.3 - Formulários de CIQ de Hematologia

8.4 – Plano de Contingência Hematologia

8.5 - Instruções do Aparelho ABX Micros

8.1 Confecção, coloração de lâminas e preparo de corante:

CONFECÇÃO DO ESFREGAÇO

1. Colocar uma gota (2 a 3 mm de diâmetro) de sangue devidamente homogeneizado aproximadamente a 1

cm do final de uma lâmina para microscopia limpa, seca e isenta de pó e gordura e apoiada em uma superfície

plana ( bancada de trabalho);

2. Com o polegar e o indicador, segurar o final (extremidade) da lâmina distensora com ângulo de 30 a 45

graus em frente à gota de sangue na lâmina descrita acima;

3. Puxar a lâmina distensora para traz até entrar em contato com a gota de sangue. Deixar o sangue espalhar-

se e completar o ângulo formado entre as duas lâminas;

4. Empurrar a lâmina distensora para frente a uma velocidade moderada e constante, até que a gota de

sangue tenha sido espalhada em um filme moderadamente delgado. Observar para que o ângulo entre as

lâminas seja mantido igual em todo o processo;

5. Secar a distensão ao ar;

6. Identificar as lâminas com número da OS e com as iniciais do nome do paciente, usando lápis;

7. Limpar a lâmina distensora utilizando uma gaze.

Identificação do registro da

Qualidade

Responsável pela coleta

Acesso

Indexação Meio de Arquivo

Forma de Armazenamento

Retenção Disposição Arquivo

ativo Arquivo Inativo

Folha de trabalho Auxiliar de laboratório

Arquivo

Ordem Cronológica

Físico

Pasta Arquivo

5 Anos

Doação para reciclagem

Formulários Supervisora do setor técnico

Arquivo

Ordem Cronológica

Físico

Pasta Arquivo

5 Anos

Doação para reciclagem


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COLORAÇÃO

Técnica – Coloração rápida – Panótico

1. Seguir instruções da bula do kit

Técnica – Wright

1. Cobrir lâmina com a distensão sanguínea com a solução corante filtrada;

2. Deixar atuar por 3 minutos;

3. Colocar água (não necessita ser tratada) sobre a lâmina com o corante;

4. Homogeneizar o corante e a água. Observar para que, ao colocar a água, o corante não escorra;

5. Deixar atuar por 15 minutos;

6. Lavar em água corrente;

7. Limpar o verso da lâmina com gaze e álcool;

8. Deixar secar.

PREPARO DE CORANTE:

Técnica de Wright Corante em pó Wright.................. ...0,3g Glicerina........................................3,0 mL Álcool metílico.............................97,0 mL 1. Misturar o corante com a glicerina;

2. Acrescentar o álcool metílico aos poucos, homogeneizando constantemente;

3. Colocar a solução em um frasco de plástico opaco;

4. Identificar o frasco: “Corante Wright- pronto para uso”. Colocar a data de preparo e rubricar. Esta solução é

estável por até 12 meses deste que mantida ao abrigo da luz e hermeticamente fechada. Filtrar apenas a

quantidade necessária para uso;

5. Fazer teste com o corante elaborado (corar algumas lâminas) a fim de verificar sua eficácia.


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8.2 Formulário de Limpeza do ABX Micros


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8.3 Formulário de CIQ de Hematologia


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8.4 – Plano de Contingência Hematologia

Como proceder em caso de pane nos equipamentos

1. PANE NO ABX Micros:

Se o equipamento do setor de Hematologia – ABX Micros – entrar em pane não resolvível em tempo hábil para entrega dos resultados e/ou processamento das amostras, deve-se encaminhar as amostras para os Laboratórios de apoio, dando sempre preferência ao NTO (Núcleo de Tecnologia Operacional – USINA)-24 horas. No caso de hematologia, estes laboratórios apenas processarão as amostras nos equipamentos. A liberação dos resultados, assim como, a avaliação microscópica, quando necessária, serão realizadas pelo bioquímico do setor no BIOCENTER.

Outras opções: Laboratório Pró-diagnóstico (Hospital São Mateus)- 24 horas, LABORE e BIOLAB (horário

comercial).

2. REQUISITOS PARA ENVIO DAS AMOSTRAS:

• Gerar a folha de trabalho;

• Identificar, separar e acondicionar o material obedecendo aos critérios estabelecidos na IT-009 (Triagem e

transporte de amostras);

• Os resultados podem ser obtidos através de meio físico e/ou eletrônico;

• Acionar a empresa responsável pelo transporte de amostras.


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8.5 - Instruções do Aparelho ABX Micros

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