planejamento, sÍntese e avaliaÇÃo farmacolÓgica de

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS

DOUTORADO EM QUÍMICA

INSTITUTO DE QUÍMICA

PLANEJAMENTO, SÍNTESE E AVALIAÇÃO

FARMACOLÓGICA DE

DERIVADOS 1,3,4-OXADIAZOLA-2(3H)-TIONA PROTÓTIPOS

A FÁRMACOS ANTI-INFLAMATÓRIOS

AMANDA FEITOSA CIDADE

GOIÂNIA, 2016

TERMO DE CIÊNCIA E DE AUTORIZAÇÃO PARA DISPONIBILIZAR AS

TESES E DISSERTAÇÕES ELETRÔNICAS NA BIBLIOTECA DIGITAL DA UFG

Na qualidade de titular dos direitos de autor, autorizo a Universidade

Federal de Goiás (UFG) a disponibilizar, gratuitamente, por meio da Biblioteca

Digital de Teses e Dissertações (BDTD/UFG), regulamentada pela Resolução CEPEC nº 832/2007, sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a

Lei nº 9610/98, o documento conforme permissões assinaladas abaixo, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção

científica brasileira, a partir desta data.

1. Identificação do material bibliográfico: [ ] Dissertação [X ] Tese

2. Identificação da Tese ou Dissertação

Nome completo do autor: Amanda Feitosa Cidade

Título do trabalho: Planejamento, síntese e avaliação farmacológica de

derivados 1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona protótipos a fármacos anti-inflamatórios

3. Informações de acesso ao documento:

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Havendo concordância com a disponibilização eletrônica, torna-se imprescindível o envio do(s) arquivo(s) em formato digital PDF da tese ou

dissertação.

Data: 06 / 10 / 2016

Assinatura do (a) autor (a)

vi

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS

DOUTORADO EM QUÍMICA

INSTITUTO DE QUÍMICA

PLANEJAMENTO, SÍNTESE E AVALIAÇÃO

FARMACOLÓGICA DE

DERIVADOS 1,3,4-OXADIAZOLA-2(3H)-TIONA PROTÓTIPOS

A FÁRMACOS ANTI-INFLAMATÓRIOS

AMANDA FEITOSA CIDADE

Tese apresentada ao Instituto de

Química da Universidade Federal

de Goiás, como exigência parcial

para a obtenção do título de

Doutor em Química.

Orientador: Prof. Dr. Luciano Morais Lião.

Co-Orientador: Prof. Dr. Ricardo Menegatti

GOIÂNIA, 2016

ix

Um dos maiores segredos da existência humana é o

autoconhecimento e a compreensão de que não somos heróis,

mas seres humanos sujeitos a inúmeras falhas.

Enxergar nossas limitações e imperfeições

pode nos causar breve inquietação,

mas também pode nos dar a oportunidade preciosa

para transformar ansiedade em criatividade,

decepções em tolerância e perdas em maturidade.

Para isso, vamos nutrir nossa emoção e intelecto com

sabedoria, humildade, generosidade e tranquilidade.

Embora muitos tenham mesa farta, vivemos numa sociedade de famintos.

Augusto Cury

x

AGRADECIMENTOS

Agradeço a Deus pela oportunidade de desenvolver este trabalho na

presença de pessoas tão especiais que vieram a engrandecer a minha existência.

Aos meus grandes incentivadores nas várias áreas desta vida, meus pais

Alcides Cidade e Maria Helena Feitosa Cidade, sempre com muito amor e carinho.

Ao meu esposo Antônio Aparecido Gomes pelo carinho, companheirismo,

compreensão e paciência nos períodos de ausência durante a realização deste

trabalho.

A minha irmã Bruna Cidade e meu sobrinho João Henrique e Miguel pela

força e pelo apoio familiar.

A equipe de trabalho do LQFM e do Laboratório de Ressonância Magnética

Nuclear.

Aos Professores Dr. Ricardo Menegatti e Dr. Luciano Morais Lião, pela

dedicação, compreensão nas correções e orientações neste período de aprendizado

intenso.

Ao Professor Dr. Elson Alves Costa e a sua prestimosa equipe de trabalho,

pelos ensaios biológicos realizados.

Aos meus colegas de pós-graduação que tornaram um período de longa

dedicação em algo divertido.

Ao apoio financeiro da Capes e CNPq.

xi

SUMÁRIO

LISTA DE TABELAS.......................................................................................... xiv

LISTA DE FIGURAS............................................................................................xvi

LISTA DE ABREVIATURAS E SÍMBOLOS.....................................................xvii

RESUMO................................................................................................................xix

ABSTRACT.............................................................................................................xx

1. INTRODUÇÃO 1

1.1. MERCADO FARMACÊUTICO GLOBAL .................................................................. 1

1.2. IMPACTO SOCIOECONÔMICO .............................................................................. 4

1.3. PROCESSO INFLAMATÓRIO ................................................................................. 5

1.4. ANTI-INFLAMATÓRIOS NÃO ESTEROIDES (AINES) .......................................... 13

1.5. INIBIDORES DUAIS COX-2 E 5-LOX ................................................................ 16

1.6. NOVOS CANDIDATOS A PROTÓTIPOS DE FÁRMACOS ANTI-INFLAMATÓRIOS .... 17

1.6. DESENVOLVIMENTO DE FÁRMACOS E A QUÍMICA VERDE ................................ 19

2. OBJETIVOS 21

2.1. OBJETIVO GERAL ............................................................................................. 21

2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS ................................................................................... 21

3. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 23

3.1. PROCEDIMENTO GERAL .................................................................................... 23

3.1.1. Cromatografia em Camada Delgada (CCD) ........................................... 23

3.2. MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS ......................................................................... 23

3.2.1. Estudo de RMN ........................................................................................ 23

3.2.2. Espectroscopia na região do infravermelho (IV) .................................... 24

3.2.3. Medidas do ponto de fusão (P.F.) ............................................................ 24

3.3. PROCEDIMENTO GERAL PARA A SÍNTESE DOS DERIVADOS (14A-14J) .............. 24





3.9. MÉTODOS FARMACOLÓGICOS .......................................................................... 46

xii

3.9.1 Animais ...................................................................................................... 46

3.9.2. Fármacos e reagentes .............................................................................. 47

3.9.3. Atividade Antinociceptiva ........................................................................ 47

3.9.4. Atividade Anti-inflamatória ..................................................................... 48

3.9.5. Análise estatística .................................................................................... 50

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO 51

4.1. PLANEJAMENTO ESTRUTURAL DOS NOVOS CANDIDATOS A PROTÓTIPO DE

FÁRMACO ANTI-INFLAMATÓRIO (19A-19J). ............................................................ 51

4.2. ANÁLISE RETROSSINTÉTICA PARA OBTENÇÃO DOS NOVOS CANDIDATOS A

PROTÓTIPOS DE FÁRMACOS ANTI-INFLAMATÓRIOS (19A –19J) .............................. 53

4.3. SÍNTESE ORGÂNICA .......................................................................................... 55

4.4. METODOLOGIA SINTÉTICA EMPREGADA PARA OBTENÇÃO DOS COMPOSTOS 1-

FENIL-1H-PIRAZOLAS SUBSTITUÍDOS (14A-14J). ..................................................... 58

4.5. METODOLOGIA SÍNTÉTICA EMPREGADA NA OBTENÇÃO DOS COMPOSTOS 1-

FENIL-1H-PIRAZOLA-4-CARBALDEÍDOS SUBSTITUÍDOS (15A-15J) ........................... 61


ÁCIDO-FENIL-1H-PIRAZOLA-CARBOXÍLICO SUBSTITUÍDOS (16A-16J) ...................... 65


FENIL-1H-PIRAZOLA-4-CARBOXILATOS DE METILA SUBSTITUÍDOS (17A-17J) ......... 67


FENIL-1H-PIRAZOLA-4-CARBOIDRAZIDAS SUBSTITUÍDOS (18A-18J) ....................... 69

4.9. METODOLOGIA SÍNTÉTICA EMPREGADA NA OBTENÇÃO DOS COMPOSTOS 5-(1-

FENIL)-1H-PIRAZOLA-4-IL)-2,3-DIIIDRO-1,3,4-OXADIAZOLAS-2(3H)-TIONA

SUBSTITUÍDOS (19A-19J) ......................................................................................... 71

4.10. ESPECTROSCOPIA NA REGIÃO DO INFRAVERMELHO ....................................... 74

4.11. CARACTERIZAÇÃO POR RESSONÂNCIA MAGNÉTICA NUCLEAR ...................... 74

4.11.1 Caracterização estrutural dos compostos 1-fenil-1-H-pirazolas (14a-14j)

............................................................................................................................ 76

4.11.2. Caracterização estrutural dos compostos 1-fenil-1H-pirazola-4-

carbaldeídos (15a-15j) a 5-(fluorofenil-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-

oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-19j) ...................................................................... 81

4.12. RESULTADOS FARMACOLÓGICOS E DISCUSSÃO ............................................. 94

xiii

4.12.1. Efeito antinociceptivo avaliado no teste de contorções abdominais

induzidas por ácido acético. .............................................................................. 94

4.12.3. Teste do edema de pata induzido por carragenina ................................ 97

4.12.4. Teste de pleurisia induzida por carragenina ......................................... 99

5. CONCLUSÕES E PERSPECTIVAS 105

6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 107

7. ANEXO 120

xiv

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Evolução do mercado farmacêutico global no período de 2009-2014 em

bilhões de................................................................................................... 1

Figura 2 - Tempo teórico do curso da inflamação de um processo inflamatório

agudo, bem como mediadores químicos e células associadas. ................. 6

Figura 3 – Proposta mecanística para biossíntese da histamina. ................................. 7

Figura 4 - Biossíntese da serotonina. .......................................................................... 8

Figura 5 - Biossíntese enzimática da prostaglandina PGG2. ..................................... 10

Figura 6 - Biotransformação do ácido araquidônico pelas vias das ciclooxigenases e

do citocromo P-450. ............................................................................ 11

Figura 7 - Rota biossintética do ácido araquidônico pelas vias das lipoxigenases. .. 13

Figura 8 - Estrutura química dos fármacos hidrocortisona (1), ácido acetilsalicílico

(2), celecoxibe (3) e rofecoxibe (4). .................................................... 15

Figura 9 - Estrutura química dos AINEs ácido flufenâmico (5), diclofenaco (6),

ibuprofeno (7) e indometacina (8). ...................................................... 15

Figura 10 - Estrutura química do protótipo á fármaco anti-inflamatório licofelona

(9). ....................................................................................................... 17

Figura 11 - Modificação molecular entre os compostos ácido flufenâmico (10) e

derivado (11) realizada por Boschelli e colaboradores (1993), voltada à

síntese de compostos com atividade anti-inflamatória. ....................... 18

Figura 12 - Estrutura química do composto LQFM-021: 5-(1-(3-fluorofenil)- 1-H-

pirazola-4-il)-2H-tetrazola (12). .......................................................... 19

Figura 13 - Planejamento dos compostos 1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-19j), a

partir do protótipo LQFM-021 (12) e do derivado do ácido flufenâmico

(10). ..................................................................................................... 51

Figura 14 - Análise retrossintética para síntese dos compostos objeto de estudo (19a-

19j). ...................................................................................................... 54

Figura 15 - Reagentes e condições reacionais para a síntese dos compostos (19a-

19j). ...................................................................................................... 56

Figura 16 - Estrutura química dos intermediários sintéticos envolvidos na obtenção

dos derivados 1,3,4-oxadiazolas-2(3H)-tiona substituídos 19a-19j. ... 57

Figura 17 - Metodologia sintética empregada para a obtenção dos compostos 1-fenil-

1H-pirazolas substituídos (14a-14j). ................................................... 58

Figura 18 - Proposta mecanística para a reação de obtenção dos compostos 1-fenil-

1H-pirazolas substituídos (14a-14j), adaptado de SCUDDER, 1992.. 60

Figura 19 – Metodologia sintética empregada na obtenção dos compostos

intermediários (15a-15j). ..................................................................... 61


1H-pirazola-4-carbaldeídos substituídos (15a-15j), adaptado de

BLAZEVIC et al., 1979. ..................................................................... 64

Figura 21 - Metodologia sintética empregada para a obtenção dos compostos


xv

Figura 22 - Proposta mecanística para a reação de obtenção dos compostos 4-ácido-

fenil-1H-pirazola-carboxílico substituídos (16a-16j), adaptado

SCUDDER, 1992; CLAYDEN et al,. 2001. ....................................... 66




1H-pirazola-4-carboxilatos de metila substituídos (17a-17j), adaptado





1H-pirazola-4-carboidrazidas substituídos (18a-18j), adaptado


Figura 27 - Metodologia sintética empregada para a obtenção dos compostos (19a-

19j). ...................................................................................................... 71

Figura 28 - Proposta mecanística para obtenção dos compostos (19a-19j), adaptado

de SCUDDER, 1992; CLAYDEN et al,. 2001. ................................... 73

Figura 29 - Subunidades estruturais dos 5-(1-fenil-1H-pirazola-4-il)-2,3-dihidro-

1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona substituídos (19a-19j). ......................... 76

Figura 30 - LQFM-021 (12), derivado do ácido flufenâmico (11), derivado 19f e

subunidades estruturais A, B e C. ........................................................ 94

Figura 31 – Efeito do composto 19f (89, 178 e 356 µmol/kg v.o.) no modelo de

contorções abdominais induzidas por ácido acético em camundongos

(n = 8). O veículo foi DMSO 10%, 10 mL/kg v.o., e indometacina (28

µmol/kg v.o.) como controle positivo. ................................................ 95

Figura 32 – Efeito antinociceptivo do composto 19f (178 µmol/kg, v.o.) na primeira

e segunda fase do teste da formalina em camundongos (n = 8). Veículo

(10 mL/Kg, DMSO 10% v.o.), Indometacina (28 µmol/kg, v.o.) e

morfina (17.5 µmol/kg, s.c.), no tempo de lambida (s) foram usados

como controles positivo, durante a primeira (0–5 min) e segunda fase

(15–30 min). ........................................................................................ 97

Figura 33 - Efeito do composto 19f (178 µmol/kg, v.o.), dexametasona (5 µmol/kg,

v.o.- controle positivo) e veículo (10 mL/Kg, DMSO 10% v.o.) no

teste do edema induzido por carragenina em camundongos (n =8). ... 99

Figura 34 - Efeito do composto 19f (178 µmol/kg, p.o.), dexametasona (5 µmol/kg,

p.o.- controle positivo) e veículo (10 mL/Kg, DMSO 10% v.o.) no

teste de pleurisia induzido por carragenina em camundongos (n=8). 100

Figura 35- Efeito do composto 19f (178 µmol/kg, v.o.) e dexametasona (5 µmol/kg,

v.o.- controle positivo) na migração celular no exsudato pleural (n=8).101

Figura 36 - Efeito do composto 19f (178 µmol/kg, v.o.), dexametasona (5 µmol/kg,

v.o.- controle positivo) e veículo (10 mL/Kg, DMSO 10% v.o.) na

atividade da mieloperoxidase no exsudato pleural. ........................... 102

Figura 37 - Efeito do composto 19f (178 µmol/kg, v.o.) ou dexametasona (5

µmol/kg, v.o.- controle positivo) na concentração de TNF-𝛼 no

exsudato pleural. ................................................................................ 103

xvi

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - As 10 classes terapêuticas mais vendidas em 2014 segundo dados do IMS

HEALTH. .................................................................................................. 3 Tabela 2 - Fator e de acordo com o setor industrial selecionado. ............................. 20 Tabela 3 - Propriedades físico químicas dos compostos (19a-19j) frente ao filtro

farmacocinético preconizado por lipinsk (2004). .................................... 52 Tabela 4 - Formas de apresentação, valores de Rf, e rendimentos referente aos

compostos (14a-14j). ............................................................................... 58 Tabela 5 - Formas de apresentação, valores de Rf, e rendimentos referente aos

compostos (15a-15j). ............................................................................... 62 Tabela 6 - Formas de apresentação, valores de Rf, e rendimentos referentes aos

compostos (16a-16j). ............................................................................... 65 Tabela 7 – Formas de apresentação, valores de Rf, e rendimentos referente aos

compostos (17a-17j). ............................................................................... 67 Tabela 8 - Formas de apresentação, valores de Rf, e rendimento referente aos

compostos (18a-18j). ............................................................................... 70 Tabela 9 - Rendimentos parciais e totais para a sintese dos derivados 5-(1-fenil-1H-

pirazola-4-il)-2,3-dihidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-19j). ....... 72 Tabela 10 - Formas de apresentação, Rf e faixa de fusão dos derivados 19a-19j. .... 72 Tabela 11 - Bandas de absorção na região de infravermelho dos compostos (19a-

19j). ......................................................................................................... 74 Tabela 12 -Deslocamentos químicos de rmn de

1H dos compostos 1-fenil-1-H-

pirazolas (14a-14j) em CDCl3. ................................................................ 79 Tabela 13 - Deslocamentos químicos de RMN de

13C dos compostos 1-fenil-1-H-

pirazolas (14a-14j) em CDCl3. ................................................................ 80 Tabela 14 - Deslocamentos químicos de RMN de


pirazola-4-carbaldeídos (15a-15j) em CDCl3 e DMSO-d6* . .................. 83 Tabela 15 - Deslocamentos químicos de RMN de

13C dos 1-fenil-1-H-pirazola-4-

carbaldeídos (15a-15j) em CDCl3 e DMSO-d6*. .................................... 84 Tabela 16 - Deslocamentos químicos de RMN de

1H dos compostos 4-ácidos-1 -

fenil-1-H-pirazola-4-carboxílicos (16a-16j) DMSO-d6. ......................... 85 Tabela 17 - Deslocamentos químicos de RMN de

13C dos 4ácidos-1-fenil-1-H-

pirazola-4-carboxílicos (16a-16j) em DMSO-d6. .................................... 86 Tabela 18 - Deslocamentos químicos de RMN de


pirazola-4-carboxilatos de metila (17a-17j) em CDCl3. .......................... 87 Tabela 19- Deslocamentos químicos de RMN


pirazola-4-carbohidrazidas (18a-18j) em DMSO-d6. .............................. 89 Tabela 20 - Deslocamentos químicos de RMN de

13C dos 1-fenil-1-H-pirazola-4-

carbohidrazidas (18a-18j) em DMSO-d6................................................. 90 Tabela 21 - Deslocamentos químicos de RMN de

1H dos compostos 5-(1-fenil-1H-

pirazola-4-il)-1,3,4- oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-9j) em DMSO-d6

(continua). ............................................................................................... 91 Tabela 22 - Deslocamentos químicos de RMN de

1H dos compostos 5-(1-fenil-1H-

pirazola-4-il)-1,3,4- oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-19j) em DMSO-d6

(continuação). .......................................................................................... 92 Tabela 23 - Deslocamentos químicos de RMN de

13C dos compostos 5-(1-fenil-1H-

pirazola-4-il)-1,3,4- oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-19j) em DMSO-d6... 93

xvii

LISTA DE ABREVIATURAS E SÍMBOLOS

AINEs Anti-inflamatórios não esteroidais

AADC Aminoácido aromático descarboxilase

CDC Centers for Disease Control and Prevention EUA

cGMP Monofosfato cíclico de guanosina

COX Ciclooxigenase

d Dupleto

dd Duplo dupleto

ddd Duplo duplo dupleto

dddd Duplo duplo duplo dupleto

dddq Duplo duplo duplo quadrupleto

ddq Duplo duplo quadrupleto

ddqui Duplo duplo quintupleto

dl Dupleto largo

FLAP Enzima fosfolipase

H1 Receptor de histamina 1

H2 Receptor de histamina 2

HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation

HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence

Hz Hertz

5-HPETE Ácidos 5-epoxieicosatrienóicos

i.p. Via intraperitoneal

IASP Associação Internacional para o Estudo da Dor

IL Interleucina

IL-1 Interleucina 1

IL-1β Interleucina 1 beta

IV Infravermelho

KATP Canal de potássio sensível ao ATP

LQFM Laboratório de Química Farmacêutica Medicinal

LQFM-021 5-(1-(3-fluorofenil)-1H-pirazol-4)-2H-tetrazola

LTA4 Leucotrienos A4

LTB4 Leucotrienos B4

LTC4 Leucotrienos C4

LTD4 Leucotrienos D4

LTE4L Leucotrienos E4

5-LOX 5-lipoxigenase



MHz Mega hertz

MPO Mieloperoxidase

NO Óxido nítrico

NOS Óxido nítrico sintase

pg Picograma

PGD2 Prostaglandinas endoperóxido D

PGE2 Prostaglandinas endoperóxido

PGF2-alfa Prostaglandinas endoperóxido alfa

PGG2 Prostaglandinas instáveis

PGI2 Prostaciclina

http://www.cdc.gov/

https://pt.wikipedia.org/wiki/Monofosfato_c%C3%ADclico_de_guanosina

xviii

pH Potencial hidrogeniônico

PLA2 Fosfolipase A2

Qui Quintupleto

Rf Fator de retenção

RMN 13

C Ressonância magnética nuclear de carbono

RMN 1H Ressonância magnética nuclear de hidrogênio

s Singleto

s.c. Via subcutânea

Sal Salina

sl Singleto largo

SNC Sistema nervoso central

SRS-A Substância de reação lenta da anafilaxia

T Temperatura

t Tripleto

td Triplo dupleto

tdq Triplo duplo quadrupleto

CCD Cromatografia em camada delgada

TMS Tetrametilsilano

TNF-α Fator de necrose tumoral – alfa

tt Triplo tripleto

TXA2 Tromboxano

TPH Triptofano hidroxilase

v.o. Via oral

v/v Volume/volume

δ Deslocamento químico

λ Comprimento de onda

μg Micrograma

μL Microlitro

xix

RESUMO

O processo inflamatório é um mecanismo de defesa do organismo frente a estímulos

nocivos, porém, se persistente contribui para a patogênese de muitas doenças. No

âmbito de uma linha de pesquisa que visa o desenvolvimento de novos candidatos a

protótipos de fármacos anti-inflamatórios multialvos, descrevemos neste estudo o

planejamento e a síntese dos compostos 1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-19j), bem

como a avaliação do efeito anti-inflamatório do composto 19f. Estes compostos

foram planejados via estratégia de hibridação molecular, a partir do protótipo

LQFM-021 (12), que apresenta efeito antinociceptivo e anti-inflamatório em

modelos agudos e crônicos, e do derivado do ácido flufenâmico (11), um protótipo

anti-inflamatório inibidor das vias COX-2 e 5-LOX. A rota sintética utilizada para

obtenção dos compostos alvo, se mostrou eficiente uma vez que apresentou

rendimentos globais que variaram entre 22-51% e atende á princípios da química

verde. O tratamento dos camundongos com o composto 19f reduziu o número de

contorções abdominais induzidas por ácido acético, sendo que a ação antinociceptiva

foi confirmada na segunda fase do teste de dor induzida pela formalina, o que

permitiu dissociar a atividade anti-inflamatória deste composto de uma atividade

analgésica central. O tratamento com o composto 19f reduziu o edema, no modelo do

edema de pata, e a ação anti-inflamatória foi confirmada pela redução da migração

celular de leucócitos e células polimorfonucleares em 43,8% e 61,8 %,

respectivamente, similar ao controle positivo dexametasona (60,6% e 74,7% de

redução). Foi observada a redução da atividade da enzima mieloperoxidase (27,8 %

de redução), no modelo de pleurisia em camundongos, e o tratamento com 19f foi

capaz de reduzir a concentração de TNF-α no exsudato pleural dos camundongos em

56 %, o controle positivo dexametasona reduziu em 77,5% comparado ao grupo

controle. Em conclusão sugere-se que a ação anti-inflamatória do composto 19f pode

estar relacionada com a redução dos níveis TNF-α. Uma vez que a citocina TNF-α é

um importante fator na progressão da artrite reumatoide, podemos inferir que 19f

apresenta perfil promissor e pode corroborar no âmbito do desenvolvimento de novos

protótipos de fármacos relacionados a doenças inflamatórias crônicas. A avaliação

farmacológica de todos os compostos sintetizados neste trabalho servirá de guia para

se estabelecer a relação entre estrutura química e atividade biológica da série (19a-

19j), com o intuito de otimizar a atividade anti-inflamatória.

Palavras-chave: Síntese Orgânica. Antinocicepção. Atividade Anti-inflamatória.

xx

ABSTRACT

The inflammatory process is a defense mechanism of the organism against the

noxious stimulus, but if persistent contributes to the pathogenesis of many diseases.

As part of a line of research that aims to develop new candidates the prototype anti-

inflammatory, we described in this study the planning, the synthesis of derivatives

1,3,4-oxadiazoles-2(3H)-thione (19a-19j) and the evaluation of anti-inflammatory

effect of the compound 19f . These compounds were planned from the molecular

hybridization strategy from prototype LQFM-021 (12), which presents

antinociceptive and anti-inflammatory effect in acute and chronic models, and

derivate of the acid flufenamic, a prototype anti-inflammatory inhibitor of the COX-

2 and 5-LOX pathway. The synthetic route used to obtain the target compound is

effective since it had good yields (22-51%) and obeys the principles of green

chemistry. The treatment of mice (n = 8) with the compound 19f reduced the number

of abdominals contortions induced by acetic acid, and the antinociceptive action was

confirmed in the second phase of the pain test induced by formalin, which allowed

differentiate anti-inflammatory activity of this compound of the a analgesic activity.

The treatment with compound 19f reduced the edema, in the paw edema model, and

anti-inflammatory action it was confirmed by the reduce of the polymorphonuclear

cell migration and leukocytes in 43,8% e 61,8 %, respectively, similar to the positive

control dexamethasone (60,6% e 74,7% reduction). Was observed the reduction of

myeloperoxidase activity (27,8% reduction), in the pleurisy model in mice, and the

treatment with 19f was able to reduce the TNF-α concentration in the mice in 56%,

dexamethasone positive control reduced in 77,5% compared to the control group. In

conclusion we suggest that the anti-inflammatory action of the compound 19f may be

associated in the reduction of the TNF-α level. Once the cytokine TNF-α is an

important factor in the progression of rheumatoid arthritis, we can infer that the 19f

compound show promising profile and can collaborate in the development of new

prototypes of drugs related to chronic inflammatory diseases. The pharmacological

evaluation of all compounds synthesized this work will serve as a guide to establish

the relationship between chemical structure and biological activity of the series (19a-

19j), in order for optimize the anti-inflammatory activity.

Key words: Organic Synthesis. Antinociception. Anti-inflammatory Activity.

1

1. INTRODUÇÃO

A inflamação é uma resposta do organismo frente a estímulos nocivos

(físicos, químicos ou biológicos) ou lesão tecidual, dando inicio a processos

imunológicos de reparo e cura. A falha neste processo contribui para patogênese de

doenças inflamatória crônicas a exemplo da artrite reumatoide. Os anti-inflamatórios

não esteroides (AINEs) são os fármacos de primeira linha paliativa prescritos no

alivio da dor, porém o uso contínuo resulta, comumente, em reações adversas

gástricas e renais (LAWRENCE; WILLOUGHBY; GILROY, 2002; IASP, 2015).

Neste cenário, abordagens inovadoras e de baixo custo para o

desenvolvimento de novos fármacos anti-inflamatórios são eminentes. E assim, a

química medicinal é peça chave neste contexto, tendo em vista a necessidade de

pesquisa e desenvolvimento de novos protótipos a fármacos anti-inflamatórios.

1.1. Mercado Farmacêutico Global

O mercado farmacêutico global movimentou US $ 1057,1 bilhões em

2014 (figura 1), sendo a América do Norte responsável por 36,1% deste montante,

que corresponde a US $ 406 bilhões. Estimativas do Instituto Mundial de Saúde

(IMS Health) demonstram percentual de crescimento de 6% para 2015, o que totaliza

US $1120,5 bilhões (IMS HEALTH, 2016 a).

Figura 1 - Evolução do mercado farmacêutico global no período de 2009-2014 em bilhões de

dólares.

Fonte: adaptado de IMS HEALTH, 2016 b.

2

Por outro lado, 88,5% das vendas de medicamentos em 2014 foram

realizadas pela América do Norte, Europa, Ásia e Japão, enquanto a América Latina

foi responsável por apenas 11,5 % do montante mundial (IMS HEALTH, 2016 b).

Dentre os medicamentos que apresentaram maior taxa de faturamento

em 2014 temos respectivamente, em 1ª, 5ª, 8ª e 10ª posições, o Alalimumab

(Humira®), Etanercept (Enbrel®), Infliximab (Remicade®) e Rituximab

(Mabthera®) empregados principalmente no tratamento de artrite reumatoide. Estes

medicamentos são utilizados como inibidores do fator de necrose tumoral alfa (TNF-

α), sendo obtidos através da tecnologia do DNA recombinante. Vale destacar que na

6ª posição temos a associação Fluticasona e Salmeterol (Seretide®) empregados na

terapêutica como antiasmático. Juntos estes fármacos foram responsáveis por 4,2%

de todo faturamento no mercado farmacêutico, o que totaliza em US $ 43,6 bilhões

(IMS HEALTH, 2016 c).

Dentre as 10 classes terapêuticas mais vendidas neste período, estão

os analgésicos e os antiasmáticos, os quais em diversos casos estão relacionados aos

processos inflamatórios, e ocupam respectivamente, o 3° e 6° lugares nas vendas

(tabela1). Estes dados nos permitem inferir que as desordens de origem inflamatória

são algumas das condições clínicas mais frequentes no cenário mundial, pois

acometem um grande número de indivíduos e causam grande impacto na assistência

farmacêutica.

3

Tabela 1 - As 10 classes terapêuticas mais vendidas em 2014 segundo dados do IMS Health.

Fonte: adaptado de IMS HEALTH, 2016 d.

Segundo o relatório publicado em 2014 pela companhia

Pharmaceutical Research and Manufacturers of America (PHRMA), há mais de 200

novos protótipos anti-inflamatórios que se encontram em desenvolvimento e/ou

aguardando aprovação pela agência que regulamenta medicamentos nos Estados

Unidos (FDA), para serem empregados no tratamento de doenças inflamatórias

crônicas. Entre os quais, 60% destinam-se ao tratamento da artrite reumatoide. Isto

faz com que os candidatos a protótipos a fármacos anti-inflamatórios não esteroides

estejam entre as classes mais pesquisada, o que ratifica a busca por novos fármacos

que sejam efetivos, seguros e com menor incidência de efeitos adversos, quando

comparados aos já existentes (PHARMA, 2016).

Muito embora o desenvolvimento de novos fármacos anti-

inflamatórios tenha contribuído para o aumento da qualidade de vida de pacientes

portadores de doenças inflamatórias crônicas, a busca por novos protótipos a

fármacos anti-inflamatórios que interrompam a progressão da doença de forma

segura é eminente (GERLAG; NORRIS; TAK, 2015).

Ainda diante do contexto de desenvolvimento de novos protótipos a

fármacos anti-inflamatórios, a questão assume grande relevância uma vez que é parte

integrante da política industrial brasileira. Afinal são reconhecidos que os fármacos e

os medicamentos são instrumentos imprescindíveis à assistência farmacêutica e

Posição

Classes terapêuticas Vendas 2014

(US$ bilhões)

Antitumorais 1° 74,4

Antidiabéticos 2° 63,5

Analgésicos 3° 59,7

Anti-hipertensivos 4° 47,5

Antibacterianos 5° 40,2

Asma 6° 39,5

Saúde mental 7° 39,1

Doenças Autoimunes 8° 35,9

Reguladores Lipídicos 9° 28,4

Dermatológicos 10° 28,2

4

devem ser eficazes, efetivos e seguros (BARREIRO; FRAGA, 2005). Portanto,

fármacos e medicamentos destinados às doenças infamatórias crônicas estão dentre

os instrumentos essenciais de inclusão social, tendo em vista o impacto

socioeconômico.

1.2. Impacto Socioeconômico

As doenças inflamatórias crônicas, como artrite reumatóide são

caracterizadas pelo acúmulo e persistência de células inflamatórias nas articulações,

o que resulta em lesões articulares. A artrite reumatóide (AR) é uma artropatia que

afeta cerca de 1% da população mundial. Sendo esta, uma doença autoimune

sistêmica, marcada pela inflamação nas membranas sinoviais e estruturas articulares

que pode levar à destruição ósteo-articular e a incapacitação funcional dos pacientes

(LAWRENCE; WILLOUGHBY; GILROY, 2002; VIEIRA; GOODMAN;

TANAKA, 2011; GERLAG; NORRIS; TAK, 2015).

Doenças que atingem a musculatura esquelética reúnem em média 100

patologias e condições que afetam as articulações, tecidos adjacentes e tecidos

conectivos, sendo as causas prevalentes da incapacidade física nos países ocidentais.

Nos Estados Unidos aproximadamente 52 milhões de americanos apresentam algum

tipo de artrite ou condição relacionada. Segundo o Centro de Controle e Prevenção

dos Estados Unidos (CDC) até 2030 o número de pessoas com patologias do grupo

artrite será de aproximadamente 67 milhões de indivíduos, estimando uma perda

total de US $ 128 bilhões na economia Norte Americana (PHARMA, 2016).

No Brasil os tipos mais comuns de doenças reumáticas são a artrite, a

artrose, a tendinite e a gota, sendo que existem atualmente cerca de 15 milhões de

pessoas acometidas. A prevalência da artrite reumatoide em adultos é de cerca de 1%

da população, que resulta na sobrecarga dos sistemas de saúde e previdência social

(ALMEIDA; BERTOLO, 2014; GERLAG; NORRIS; TAK, 2015).

Doenças inflamatórias debilitantes são prevalentes em mulheres na

faixa etária de 30 a 60 anos. Entretanto, cerca de 290 mil novos casos de artrite

https://pt.wikipedia.org/wiki/Doen%C3%A7a_sist%C3%A9mica

5

reumatoide na infância e adolescência são relatados, e se não tratada na fase inicial

pode acarretar deformidades irreversíveis (SYMMONS, 2015).

1.3. Processo Inflamatório

O processo inflamatório é desencadeado por agentes nocivos de

origem endógena, como fratura ou tecidos em necrose; ou exógena como infecções

(bacterianas, virais ou parasitárias), trauma (contuso ou penetrante), agentes físicos

(queimaduras ou congelamento) e químicos (radiação e algumas substâncias

químicas ambientais) (LAWRENCE; WILLOUGHBY; GILROY, 2002;

RAINSFORD, 2007; VENDRAMINI-COSTA; CARVALHO, 2012).

A resposta inflamatória pode ser classificada em inflamação crônica

ou aguda, e diferenciam-se quanto ao tempo de duração. A resposta aguda é ativa e

autolimitada, resultando no reparo tecidual e retorno à homeostase no organismo, em

contrapartida a inflamação crônica se dá a partir da desregulação dos mecanismos de

restauração dos tecidos e estímulos inflamatórios persistentes, sendo estes fatores

importantes na progressão de doenças crônicas de origem inflamatória

(LAWRENCE; WILLOUGHBY; GILROY, 2002; MASKREY et al., 2011;

MCINNES; SCHETT, 2011).

O curso e a cinética celular da inflamação, como demonstrados na

figura 2, são caracterizados pelo movimento de proteínas e leucócitos presentes no

sangue para o tecido extra vascular, que desencadeiam aumento da permeabilidade

vascular, aumento do fluxo sanguíneo na área inflamada e vasodilatação local.

Paralelamente, existe a regulação positiva da expressão de moléculas de adesão nas

células endoteliais e a liberação de fatores quimiotáticos ao sítio inflamado, que

facilitam a aderência de células circulantes para o endotélio vascular e a sua

migração para a área afetada. Estes eventos resultam na predominância de neutrófilos

na área inflamada no início da lesão, os quais em seguida são gradualmente

substituídos por células mononucleares, em especial monócitos, que então se

diferenciam em macrófagos. Estas células fagocíticas eliminam o material estranho e

restos celulares, levando ao retorno da homeostase. A ativação contínua das etapas

6

deste processo ou a falha na capacidade de resolver a resposta inflamatória tornam a

lesão crônica, sendo prejudicial para o tecido (LAWRENCE; WILLOUGHBY;

GILROY, 2002; GILROY et al., 2004; FRANCISCHETTI et al., 2010; MASKREY

et al., 2011).

Figura 2 - Tempo teórico do curso da inflamação de um processo inflamatório agudo, bem como

mediadores químicos e células associadas ao mesmo.

Fonte: adaptado de LAWRENCE; WILLOUGHBY; GILROY, 2002.

Existem vários mediadores inflamatórios que coordenam os eventos

iniciais da inflamação aguda. Entre esses mediadores encontram-se: aminas

vasoativas (histamina e serotonina), metabólitos do ácido araquidônico

(prostaglandinas, leucotrienos e lipoxinas), proteínas plasmáticas (sistemas do

complemento, das cininas e da coagulação), fator de ativação das plaquetas (PAF),

citocinas (TNF alfa, e IL-1) e óxido nítrico (NO), que contribuem para o

aparecimento dos sinais clássicos da inflamação aguda, tais como dor, rubor, calor e

edema (LAWRENCE; WILLOUGHBY; GILROY, 2002; LEONE; OTTANI;

BERTOLINI, 2007; FRANCISCHETTI et al., 2010; CRUVINEL et al., 2010;

DENNIS; NORRIS, 2015).

As aminas vasoativas histamina e serotonina são os primeiros

mediadores a serem secretados dos grânulos intracelulares, com função de promover

a vasodilatação, aumento da permeabilidade vascular e ativação endotelial

(FRANCISCHETTI et al., 2010).

7

A histamina é uma amina biogênica, biossintetizada e armazenada nos

grânulos em mastócitos e basófilos. Sua biossíntese é decorrente da L-histidina, na

qual via catálise enzimática, sofre descarboxilação mediada pela enzima histidina

descarboxilase, tendo como coenzima o fosfato de piridoxal. O provável mecanismo

de reação (figura 3) envolve a formação de uma imina intermediária, seguida da

perda de dióxido de carbono (CO2), o fosfato de piridoxal promove a ação catalítica,

e facilita a reação de hidrólise no carbono adjacente a base de Shiff, esta ligada a

enzima histidina descarboxilase, leva a formação da histamina (MASINI et al., 2005;

CRIADO, 2010; KOVACOVA-HANUSKOVA et al., 2015).

Figura 3 – Proposta mecanística para biossíntese da histamina.

COOH

NH2

HN

N

N

H

OH

O H

O

P

L- histidina

Fosfato de Piridoxal

N

H

O

N

O

P

M

O

O

HO

HHN

N

H

-H2O

N

H

O

N

O

P

M

O

O

HN

N

H

-CO2

N

H

O

N

O

P

M

HN

N+H

2O

N

H

O

N

O

P

M

HN

N

O

H

H

NH2

HN

N

N

H

OH

O H

O

P

Histamina

Fosfato de Piridoxal

Imina Intermediária

Fonte: adaptado de MASINI et al., 2005.

A ação da histamina é decorrente de sua ligação ao sítio de quatro

subtipos de receptores (H1, H2, H3 e H4), ambos acoplados à proteína G. O

reconhecimento e ligação da histamina nos receptores H1 induz a vasodilatação,

aumento da permeabilidade, já nos receptores H2 há relaxamento do músculo liso

extra vascular, vasodilatação e principalmente o aumento da secreção gástrica. Os

receptores H3 exercem atividade de inibição por retroalimentação (inibindo a

liberação de histamina), por outro lado os receptores H4, estimulados pela histamina

P – subunidade fosfato

M - meio fisiológico

8

promovem a quimiotaxia de mastócitos e produção de leucotrienos B4 (CRIADO,

2010; KOVACOVA-HANUSKOVA et al., 2015).

A serotonina tem sua origem nas células enterocromafins, tendo como

precursor o L-triptofano. Sua biossíntese (figura 4) envolve as etapas de hidroxilação

e descarboxilação do aminoácido essencial triptofano. A enzima triptofano

hidroxilase (TPH) catalisa a etapa limitante da velocidade da reação, sendo que a

descarboxilação subsequente do 5-hidroxitriptofano promovida pelo aminoácido

aromático descarboxilase (AADC) conduz a síntese da serotonina. A captação,

armazenamento e liberação da serotonina são promovidos pelas plaquetas, e seu

envolvimento no processo inflamatório e na dor se dá via ligação com os seus

receptores (5-HT3, 5-HT1A e 5-HT2A), que além de exercer uma ação direta podem

também desencadear a liberação de outros mediadores pró-inflamatórios

(TORRENTE; GELENBERG; VRANA, 2012; XU et al., 2015).

Figura 4 - Biossíntese da serotonina.

NH3

NH

O

OH

Triptofano

NH3

NH

O

HOHO

5-Hidroxitriptofano

NH3

NH

HO

5-hidroxitriptamina ou Serotonina

TPH*

* TPH - TRIPTOFANO HIDROXILASE** AADC - AMINOÁCIDO AROMÁTICO DESCARBOXILASE

AADC**

H2O CO2

O2

Fonte: adaptado de TORRENTE; GELENBERG; VRANA, 2012.

As citocinas são glicoproteínas ou polipeptídios hidrossolúveis cuja

produção no processo inflamatório ocorre em diversos tipos de células, inclusive

células do sistema imune. Por meio do controle da expressão gênica, as citocinas

agem sobre atividade de diferenciação, proliferação e sobrevida de células do sistema

imunológico, além de regular a produção e atividade de outras citocinas, modulando

assim o curso do processo inflamatório. As diferentes citocinas podem ser

enquadradas nas seguintes categorias: interleucinas (IL), fatores de necrose tumoral

(TNF), quimiocinas, interferons (IFN) e fatores de crescimento mesenquimal.

Algumas destas citocinas podem ter ações pró-inflamatórias ou anti-inflamatórias

9

dependendo do microambiente biológico que se encontram (PRLIC; BEVAN, 2006;

ZHANG; AN, 2007; NAKAMURA et al., 2015).

O Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-α) é uma das principais

citocinas pró-inflamatórias liberadas durante o processo inflamatório, sendo

produzido predominantemente pelos monócitos, macrófagos e linfócitos T. Também

é encontrado nos neurônios e células da glia, desempenhando funções importantes

tanto na hiperalgesia inflamatória quanto na dor neuropática. Após ser produzido e

liberado, o TNF-α liga-se aos receptores específicos denominados receptores de TNF

(TNF-R) I e II, os quais podem desencadear o processo de apoptose. Desta maneira,

o principal efeito fisiológico do TNF-α é promover a resposta imune no processo

inflamatório por meio do recrutamento de neutrófilos e monócitos para o local da

lesão, além de ativá-los (ZHANG; AN, 2007; LEONE et al., 2007; PELUSO;

PALMERY, 2015).

Outro mediador inflamatório é o óxido nítrico (NO), este é produzido

por diversas células em mamíferos tendo ação relaxante vascular, agente

quimiotática, neurotransmissor e inibidor da agregação plaquetária e pode ser gerado

durante a resposta imune e inflamatória. O NO é sintetizado pela enzima óxido

nítrico sintetase (NOS), ativada pelo aumento do cálcio intracelular, presente em

células endoteliais podendo também ser liberado por macrófagos após indução de

citocinas, tai como interferon-γ. Alguns outros importantes mediadores presentes no

processo inflamatórios são os neuropeptídios, substância P, neurocinina A e

encefalinas (FRANCISCHETTI et al., 2010; FLORENTINO et al., 2015; FONSECA

et al., 2015).

Os eicosanoides constituem outra importante classe de mediadores

lipídicos formados durante a inflamação a partir da chamada “cascata do ácido

araquidônico” (AA). O ácido araquidônico (AA) ou ácido eicosatetranóico é um

ácido graxo essencial insaturado formado por 20 átomos de carbono e quatro duplas

ligações, sendo considerada fonte de vários mediadores lipídicos. Na presença de um

estímulo agressor, a enzima fosfolipase A2 é ativada e então catalisa a hidrólise dos

fosfolipídios presentes nas membranas celulares liberando o ácido araquidônico. Este

então passa a ser substrato para a biossíntese intracelular de diferentes eicosanoides

mediados pelas vias das ciclooxigenases (COX-1 e 2), via das lipoxigenases (5,12 e

10

15-LOX) e do citocromo P-450 (BERTOLINI; OTTANI; SANDRINI, 2002;

BURNETT; LEVY, 2012; HWANG et al., 2013; KNAB; GRIPPO; BENTREM,

2014).

Pela via das ciclooxigenases, também conhecida como prostaglandina

endoperóxido sintetase, ocorre a oxidação e a ciclização do ácido araquidônico que

conduz a formação da prostaglandina instável PGG2 (figura 5). O ácido adota no

sistema biológico uma conformação estendida na forma L que posiciona o

hidrogênio ligado ao carbono 13 (C-13) para abstração pelo radical tirosina-385.

Esse espaço possibilita a adição de oxigênio na superfície antarafacial do carbono na

posição 11 (C-11). Ao passo que esta conformação permite a formação do

endoperóxido entre o carbono 11 (C-11) e o carbono 9 (C-9), isso também implica

subsequente rearranjo conformacional que conduz a formação da ligação entre e

carbono 8 e 12 C-8/C12 e ataque ao carbono 15 (C-15) por uma segunda molécula de

oxigênio logrando na PGG2 (MALKOWSKI et al., 2000).

Figura 5 - Biossíntese enzimática da prostaglandina PGG2.

CO2H

HH

Àcido Araquidônico

13

Ciclooxigenase

CO2H

HH

O

O385

TirO

5-exo

CO2HO

O

O

O

15

CO2HO

O 15

5-exo

OOH

PGG2

1211

9

10

8

14 15

Fonte: adaptado de JAHN; GALANO; DURAND, 2008.

A PGG2 por sua vez é reduzida á PGH2 através da reação com a

peroxidase, devido a instabilidade relativa á conformação (figura 6), esta sofre

isomerização mediada por enzimas específicas resultando nas prostaglandinas (PGE2,

PGD2, PGF2-alfa), prostaciclina (PGI2) e tromboxano A2 (TXA2). Os eicosanoides

além de suas várias funções fisiológicas, também são responsáveis pela amplificação

11

da resposta inflamatória (GARG et al., 2003; JULEMONT et al., 2004; KNAB;

GRIPPO; BENTREM, 2014; SAMADI; BILSLAND; GEORGAKILAS, 2015).

Figura 6 - Biotransformação do ácido araquidônico pelas vias das ciclooxigenases e do citocromo P-

450.

Fonte: adaptado de LEVAL et al., 2002.

A enzima ciclooxigenase possui três isoformas a COX-1 e a COX-2 e

mais recentemente foi descrita a COX-3. A COX-1 é a forma constitutiva

predominante da enzima e está expressa em todo o organismo. Ao contrário, a COX-

2 é a forma induzida da enzima, expressa principalmente em condições patológicas e,

portanto, em resposta á estímulos inflamatórios, estando envolvida na produção de

prostaglandinas pró-inflamatórias (BERTOLINI; OTTANI; SANDRINI, 2002;

LEONE; OTTANI; BERTOLINI, 2007).

Os prostanóides são divididos em três grupos distintos:

prostaglandinas, prostaciclina e tromboxano; esta classificação baseia-se na natureza

e nos substituintes do anel central. As ações biológicas de prostanóides sobre o

sistema cardiovascular estão relacionadas as observações científicas nas quais as

prostaglandinas (PGs) e prostaciclina (PGI2) são potentes vasodilatadores, enquanto

tromboxano (TXA2) contrai os vasos e induz a agregação plaquetária, ao contrário da

PGI2 que exibe propriedades anti-agregantes. As PGs e TXA2 aumentam a

12

permeabilidade vascular, que pode conduzir ao edema. Além disso, a secreção de

muco no estômago e intestino delgado é aumentada pelas prostaglandinas (PGEs),

estes efeitos ajudam a manter a integridade da mucosa gástrica, conferem proteção às

células epiteliais e estão relacionados às propriedades citoprotetoras das

prostaglandinas sintetizadas pela COX-1 (GILROY et al., 2004; CARVALHO et al.,

2004; JAHN; GALANO; DURAND, 2008; HERNÁNDEZ; CABRERA;

LAVAGGI, 2012).

A biotransformação do ácido araquidônico pela via das lipoxigenases

(figura 7) catalisa a inserção de oxigênio em várias posições do ácido araquidônico.

A 5-lipoxigenase (5-LOX) é a enzima chave inicial na formação de leucotrienos, esta

enzima catalisa a inserção de oxigênio na posição C-5 do ácido araquidônico, através

da enzima fosfolipase A2 (PLA2), para produzir o ácido 5-HPETE. Este ácido é um

metabólito instável que é degradado ao ácido 5-HETE. A enzima 5-LOX também

catalisa a desidratação de 5-HPETE para formar o leucotrieno LTA4, que é o

precursor biologicamente ativo dos leucotrienos B4 (LTB4), C4 (LTC4), D4 (LTD4) e

E4 (LTE4). Estes três últimos leucotrienos, que são os leucotrienos cistenila,

constituem a mistura de compostos anteriormente conhecidos como substância de

reação lenta da anafilaxia (SRS-A). Os produtos finais da 12-lipoxigenase e 15-

lipoxigenase são o ácido 12-hidroxieicosatetraenóico e as lipoxinas, sendo que estes

são mediadores anti-inflamatórios que contribuem para a resolução do processo

(CLÀRIA; ROMANO, 2005; BURNETT; LEVY, 2012; KUHN; BANTHIYA;

LEYEN, 2015).

13

Figura 7 - Rota biossintética do ácido araquidônico pelas vias das lipoxigenases.

Fonte: adaptado de LEVAL et al., 2002.

Alternativamente, o ácido araquidônico pode ser biotransformado pela

via do citocromo P-450 "epoxigenase”, em ácidos epoxieicosatrienóicos (EETs)

(figura 6). EETs são sintetizados principalmente em células endoteliais e são

metabolizados a espécies menos reativas, esses compostos além de promoverem

diminuição da inflamação, também reduzem a agregação de plaquetas, a fim de

manter a homeostase vascular (CLÀRIA; ROMANO, 2005; HWANG et al., 2013).

1.4. Anti-inflamatórios Não Esteroides (AINEs)

De maneira geral, os fármacos empregados no tratamento de doenças

inflamatórias são classificados em esteroides (corticosteroides) e não esteroides

(AINEs) (LAURENCE; BRUNTON; KNOLLMAN, 2012).

Os anti-inflamatórios esteroides derivam do núcleo

ciclopentanoperidrofenantreno, como por exemplo, a hidrocortisona (1) (figura 8). O

mecanismo de ação desta classe de fármacos se dá por meio da ação inibitória

14

indireta da fosfolipase A2, decorrente da indução de lipocortina-1, impedindo desta

forma a liberação do ácido araquidônico das membranas celulares. Por outro lado, os

anti-inflamatórios não esteroides não apresentam em suas estruturas o núcleo

ciclopentanoperidrofenantreno, e atuam na inibição das enzimas COX-1 e 2 de forma

não seletiva ou seletiva, impedindo a produção excessiva de eicosanoides

(RAINSFORD, 2007; KHANAPURE et al., 2007).

O ácido acetilsalicílico (2), desenvolvido em meados do século 19,

pertence a classe dos derivados salicílicos e caracteriza-se pela inibição irreversível

da atividade da ciclooxigenase, através de ligação covalente com o resíduo de serina,

o que impede a interação do ácido araquidônico com o sítio ativo da enzima. Embora

seja eficaz como analgésico, antipirético e anti-inflamatório, o uso deste fármaco por

período prolongado é limitado. Isto devido à supressão da síntese de prostanóides

mediada pela COX-1, o que confere ao ácido acetilsalicílico reações adversas

gastrointestinais resultando em lesão gástrica e ulcerações (CARVALHO;

CARVALHO; RIOS-SANTOS, 2004; FONSECA et al., 2015).

Por sua vez, o celecoxibe (3) lançado no mercado farmacêutico global

no final dos anos 90, caracteriza-se por inibir seletivamente a enzima COX-2. Este

medicamento pertence à segunda geração de AINEs, os quais possuem em comum

em suas estruturas químicas, as subunidades difenilheterociclo e a presença de

substituintes sulfona ou sulfonamida. Apresenta perfil farmacológico com reduzida

incidência de efeitos adversos gastrintestinais, porém, ainda mantem-se

questionamentos sobre sua segurança, principalmente após comprovação da

toxicidade cardiovascular de outros coxibes, em especial o rofecoxibe (4) retirado de

circulação em 2004 (DREWS, 2006; SINHA; GAUTAM; SHUKLA, 2013;

KÜÇÜKGÜZEL; ŞENKARDEŞ, 2015).

15

Figura 8 - Estrutura química dos fármacos hidrocortisona (1), ácido acetilsalicílico (2), celecoxibe (3)

e rofecoxibe (4).

OHO

O

O

NN

F3C

SO O

NH2(1) (2) (3)

O

SO

O

O

(4)

O

O

OH

O

H

H

H

OH

Outros AINEs tais como ácido flufenâmico (5), diclofenaco (6) e

ibuprofeno (7) figura 9, agem como inibidores competitivos reversíveis de ambas as

isoformas, competindo com a ligação do ácido araquidônico no sítio ativo da COX.

Uma terceira classe de AINEs, representados pela indometacina (8), causa inibição

reversível lenta e tempo-dependente da COX-1 e COX-2, o que resulta na formação

de interação íon-íon entre o carboxilato do fármaco e o resíduo arginina na posição

120 da proteína no sitio ativo, seguida por alterações conformacionais na estrutura do

fármaco. Entretanto, assim como os demais AINEs citados, reações adversas

significativas incluindo aumento do risco de ataque cardíaco e acidente vascular

encefálico podem ser associados ao uso contínuo dos AINEs (CARVALHO;

CARVALHO; RIOS-SANTOS, 2004; RAINSFORD, 2007).

Figura 9 - Estrutura química dos AINEs ácido flufenâmico (5), diclofenaco (6), ibuprofeno (7) e

indometacina (8).

NH

CF3

OH

O

NH

COOH

ClCl

OH

O

(5) (6) (7)

N

O

O

OH

ClO

(8)

16

Em Face da inibição das vias das COXs promovida pelos AINEs, a

biotransformação do ácido araquidônico pode ser deslocada para a via das enzimas

lipoxigenases, tais como 5-LOX, 12-LOX e 15-LOX, seguida então, da produção de

leucotrienos, mediadores dos processos inflamatórios e funções imunológicas

presentes em processos alérgicos e asmáticos. Em algumas situações, o uso

inadequado de anti-inflamatórios inibidores COX leva ao desenvolvimento de

quadros clínicos de asma e alergia induzida (como edema de língua e angiodema),

além de urticária, cefaléia, e insuficiência renal (CLÁRIA; ROMANO, 2005;

LEONE; OTTANI; BERTOLINI, 2007; BURNETT; LEVY, 2012).

Desta forma, inibidores versáteis capazes de bloquear ambas as vias

metabólicas COX-2 e 5-LOX, estão em desenvolvimento e suas vantagens

suportadas por diversos estudos farmacológicos, destacando-se como estratégia

terapêutica anti-inflamatória promissora.

1.5. Inibidores Duais COX-2 e 5-LOX

No século XIX Paul Erlich cunhou o termo “Magic Bullet”, o qual

sugere que cada doença seria tratada por um fármaco. No entanto, recentemente este

paradigma tem sofrido mudanças, uma vez que se reconheceu que o tratamento de

doenças multifatoriais tem melhor prognóstico quando se emprega regime de

tratamento combinado (DREWS, 2000; STREBHARDT; ULLRICH, 2008). Este

novo paradigma é particularmente importante nos processos inflamatórios crônicos,

no qual compostos que atuem por mais de uma via bioquímica, que incluem

inibidores de COX-2 e 5-LOX, representam abordagens promissoras quando

comparados aos tratamentos convencionais (HWANG et al., 2013).

Os inibidores duais são protótipos a fármacos anti-inflamatórios aptos

a bloquear as vias metabólicas COX-2 e 5-LOX, inibindo desta forma a síntese de

prostaglandinas, tromboxanos e leucotrienos. Desta maneira, pode se contornar as

principais desvantagens dos AINEs clássicos, que incluem a produção reduzida de

prostaglandinas gastroprotetora ocasionada pela inibição da COX-1 constitutiva,

risco cardiovascular relacionada à síntese de tromboxanos, e adicionalmente à

17

inibição da síntese de leucotrienos broncoconstritores (BERTOLINI; OTTANI;

SANDRINI, 2002; LEONE; OTTANI; BERTOLINI, 2007; BURNETT; LEVY,

2012).

Inibidores duais da COX-2 e 5-LOX ainda não estão disponíveis

comercialmente e se encontram sob investigação clínica. Um destes é a licofelona (9)

figura 10, inibidor competitivo da 5-lipoxigenase e ciclooxigenase (COX-1 e COX-

2), que se encontra em fase III do desenvolvimento clínico, este protótipo diminui a

produção de prostaglandinas e leucotrienos pró-inflamatórios que são envolvidos na

fisiopatologia da inflamação, possui efeitos antipirético e antitrombótico. Além

disso, dados preliminares apontam perfil de segurança gastrointestinal (GI) e

cardiovascular quando comparado aos AINEs convencionais (ALVARO-GRACIA,

2004; BANNWARTH, 2004; LIM; WANG; WLUKA, 2014).

Figura 10 - Estrutura química do protótipo á fármaco anti-inflamatório licofelona (9).

N

OH

O

Cl

(9)

1.6. Novos Candidatos a Protótipos de Fármacos Anti-inflamatórios

Abordagens sintéticas com base na estrutura química de AINEs são

estratégias promissoras para obtenção de novos protótipos a fármacos anti-

inflamatórios, visando melhorar o perfil de segurança e potencializar a atividade

biológica (AMIR; KUMAR; JAVED, 2007).

Desta forma, o estudo promovido por Boschelli e colaboradores

(1993) demonstrou que a substituição da subunidade carboxilato (a) do fármaco

ácido flufenâmico (10) pelo núcleo 1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (b) no composto 5-

(2-(3-(trifluorometil)fenilamino)fenil)-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (11) figura 11 ,

não apenas manteve a inibição da síntese das prostaglandinas (COX), como também

18

apresentou atividade inibidora da 5-LOX (BOSCHELLI; CONNOR;

BORNEMEIER, 1993; JULEMONT et al., 2004). Este derivado possui em sua

estrutura o núcleo 1,3,4-oxadiazola, amplamente descrito na literatura em função das

atividades anti-inflamatórias, conferindo ao derivado baixa toxicidade gástrica

(OLIVEIRA et al., 2012; KHALILULLAH et al., 2012).

Figura 11 - Modificação molecular entre os compostos ácido flufenâmico (10) e derivado (11)

realizada por Boschelli e colaboradores (1993), voltada à síntese de compostos com atividade anti-

inflamatória.

NH

OH

O

CF3

NH

CF3

N

O

N

H

S

Modificação Molecular

(10) (11)

(a) (b)

Compostos contendo subunidades pirazolas (B) figura 12, são

compostos da classe de heterociclos de origem sintética que possuem em sua

estrutura um anel de cinco membros com dois átomos de nitrogênio adjacentes e três

de carbono. São estruturas bem reconhecidas devido suas aplicações farmacológicas

e medicinais, dentre as quais podemos destacar as ações antimicrobianas,

antitumoral, antifúngicas, antidepressivas, imunossupressoras, anticonvulsivantes,

antiparasitária e bactericida. Subunidades N-fenil-1H-pirazolas são descritos ainda,

por suas atividades anti-inflamatórias e analgésicas e ganharam destaque após o

desenvolvimento do celecoxibe (1) (BANSAL; BALA; SUTHAR, 2014;

KÜÇÜKGÜZEL; ŞENKARDEŞ, 2015).

Devido a necessidade de analgésicos e anti-inflamatórios mais efetivos

e com menor incidência de efeitos adversos, muitos derivados pirazólicos foram

sintetizados e avaliados quanto a sua atividade biológica. Neste contexto, o protótipo

LQFM-021 (12) figura 12, desenvolvido no Laboratório de Química Farmacêutica

Medicinal da Universidade Federal de Goiás, apresentou efeito antinociceptivo e

anti-inflamatório promissores em modelos agudos e crônicos, sendo que as vias

19

opióide e do óxido nítrico podem estar envolvidas no mecanismo de ação da

atividade antinociceptiva. Além disso, estudos de toxicidade oral aguda

demonstraram que este composto pode ser bem tolerado quando administrado pela

via oral (RAMOS et al., 2013; FLORENTINO et al., 2015).

Figura 12 - Estrutura química do composto LQFM-021: 5-(1-(3-fluorofenil)- 1-H-pirazola-4-il)-2H-

tetrazola (12).

NN

N

N

N

H

N

F (12)

B

1.6. Desenvolvimento de Fármacos e a Química Verde

O processo de descoberta e desenvolvimento de fármacos é composto

por diferentes estágios consecutivos de competências multidisciplinares, sendo estes

complexos e dinâmicos (GUIDO; ANDRICOPULO; OLIVA, 2010).

Os fármacos, mais do que qualquer outro bem tecnológico

industrializado, exigem para sua invenção alto domínio científico e tecnológico que

vai da etapa de bancada em laboratórios de pesquisa ao desenvolvimento em larga

escala na indústria químico-farmacêutica. Altas somas de recursos são necessárias

até se chegar ao mercado final sob a forma de medicamento. Desta forma, a

viabilidade da rota sintética para obtenção do composto bioativo, que inclui a

disponibilidade comercial das matérias primas, bem como a sustentabilidade da

mesma sob o ponto de vista ambiental, são requisitos avaliados pelos órgãos

reguladores, tais como o FDA (BARREIRO; PINTO, 2013; ROSCHANGAR;

SHELDON; SENANAYAKE, 2015).

Pesquisa e desenvolvimento de medicamentos custam para cada

fármaco aprovada pelo FDA, valores estimados em US $ 1,2-1,8 bilhões, que devem

ser recuperados com a venda do medicamento posteriormente. Desta forma, as

20

empresas farmacêuticas buscam atenuar ao máximo os atrasos que seguem para

comercialização do composto bioativo, considerando que o prazo médio de uma

patente é de 12 anos. Dados estes fatores, os processos de síntese de fármacos

desenvolvidos por empresas farmacêuticas nem sempre refletem desenvolvimento

sustentável, e resultam no aumento dos custos ambientais e econômicos

(ROSCHANGAR; SHELDON; SENANAYAKE, 2015).

Nas últimas décadas pode-se dizer que a química orgânica está sendo

reescrita através do emprego de novas abordagens que visam à obtenção de novos

produtos e processos que visem o desenvolvimento sustentável. Neste contexto a

química verde, refere-se à promoção de processos químicos seguros, sustentáveis e

redução de resíduos. Os 12 princípios da química verde, incluem a prevenção na

formação de resíduos; maior eficiência nas reações; uso de produtos químicos menos

tóxicos; utilização de produtos que sejam seguros; uso de solventes inócuos ou

auxiliares; rotas sintéticas mais curtas; uso de catalisadores em detrimento de

reagentes estequiométricos; análise e prevenção da poluição. Diante desses fatores, a

química verde deve ser promovida e apoiada pela comunidade científica, bem como

pelos governos, indústrias e todos os outros setores da sociedade (LENARDÃO et

al., 2003; NOYORI, 2009; FERREIRA; ROCHA; SILVA, 2014).

Outro indicador que avalia a aceitabilidade ambiental de produtos e

processos químicos é o Fator E, o qual mede a quantidade de resíduo gerado por kg

do produto (tabela 2). Relevante na indústria farmacêutica por apresentar elevado

fator E, para cada kg de produto obtido são gerados de 25 à 100 kg de resíduos

(SHELDON, 2007).

Tabela 2 - Fator E de acordo com o setor industrial selecionado.

Setor industrial Toneladas anual de produto Kg perda / Kg produto

Refinaria de óleo 106-108 0.1

Resíduos químicos 104-106 <1-5

Química fina 102-104 5->50

Farmacêutico 10-103 25->100

Fonte: adaptado de SHELDON, 2007.

21

2. OBJETIVOS

2.1. Objetivo Geral

No âmbito de uma linha de pesquisa que visa a busca de novos

candidatos a protótipos de fármacos anti-inflamatórios, é descrito neste trabalho o

planejamento, a síntese e a avaliação farmacológica dos derivados 1,3,4-oxadiazola-

2(3H)-tiona (19a-19j), originalmente desenhados a partir do derivado do fármaco

ácido flufenâmico (11) e do composto LQFM-021 (12) por meio da estratégia de

hibridação molecular.

2.2. Objetivos Específicos

I. Planejamento dos novos derivados (19a-19j) a partir do composto LQFM-

021 (12) e do derivado do fármaco ácido flufenâmico (11).

II. Planejamento sintético dos compostos objetos de estudo (19a-19j), através

do emprego de análise retrossintética.

III. Síntese dos derivados (19a-19j) por meio da síntese orgânica.

IV. Caracterização estrutural dos compostos sintetizados (19a –19j) através do

emprego das espectroscopias de Ressonância Magnética Nuclear e no Infravermelho.

V. Investigação do efeito antinociceptivo do derivado 5-(1-(3-fluorfenil)-1H-

pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19f), por meio de modelos de

nocicepção aguda de dor induzida pelo ácido acético e pela formalina;

VI. Investigação do mecanismo de ação envolvido no efeito anti-inflamatório do

derivado 5-(1-(3-fluorfenil)-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-

tiona (19f), por meio dos testes de edema de pata e pleurisia induzida por

22

carragenina, bem como avaliação sob a atividade da mieloperoxidase (MPO) e

determinação da concentração de TNF-α no exsudato pleural.

23

3. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

3.1. Procedimento Geral

Os solventes e reagentes utilizados nas reações foram adquiridos das

indústrias Sigma-Aldrich, Merck e Vetec Química Fina Ltda. Os solventes como:

metanol (MeOH), etanol (EtOH), ácido Trifluoroacético (TFA) e diclorometano

(DCM), devido ás especificações de pureza não necessitaram de tratamento prévio. A

evaporação dos solventes foi realizada à pressão reduzida, em evaporador rotatório

(TE-2II-Tecnal), em sistemas de alto vácuo. As sínteses foram realizadas sob

condições de refluxo (60-90°C), com auxílio de manta aquecedora e agitação

magnética.

A nomenclatura oficial IUPAC dos compostos intermediários e finais

foram obtidas por meio do servido chemicalize.org versão beta.

3.1.1. Cromatografia em Camada Delgada (CCD)

Para cromatografia em camada delgada (CCD) foram utilizadas placas

de alumínio Whatman 20x20 cm revestidas com sílica gel 60 F254 e espessura de

0,25mm, empregando-se como fase móvel hexano/acetato de etila (70:30 v/v), (14a-

14j),(15-15j),(17a-17j) e para os compostos (19a-19j), para os intermediários (16a-

16j) e (18a-18j) utilizou-se diclorometano/Metanol (95:5 v/v).

A visualização das substâncias em CCD foi realizada em câmara

contendo luz ultravioleta (254 e 365 nm).

3.2. Métodos Espectroscópicos

3.2.1. Estudo de RMN

Todos os compostos sintetizados foram caracterizados através das

metodologias convencionais de RMN de 1H,

13C, HSQC e HMBC.

24

Os espectros de RMN foram obtidos no Instituto de Química da

Universidade Federal de Goiás em um Bruker Avance III 500 (campo de 11,75

Tesla: 500,13 MHz na frequência do hidrogênio), equipado com sondas multinuclear

para tubo de 5 mm de diâmetro com detecção inversa (TBI) e direta (BBO), para os

experimentos de 1H,

13C, HSQC e HMBC. A aquisição e processamento dos dados

foram realizados através do software Bruker TopSpin (versão 3.1), e as amostras

foram dissolvidas em clorofórmio deuterado (CDCl3) e dimetilsulfóxido deuterado

(DMSO-d6), tendo como referência interna o tetrametilsilano (TMS).

3.2.2. Espectroscopia na região do infravermelho (IV)

Os espectros na região do infravermelho (IV) foram obtidos em um

aparelho Perkin- Elmer Spectrum Bx-II FT-IR System, na Central Analítica do

Instituto de Química da Universidade Federal de Goiás, em pastilhas de KBr e

analisadas na faixa de frequência de absorção de 400 a 4000 cm-1.

3.2.3. Medidas do ponto de fusão (P.F.)

Os pontos de fusão foram corrigidos em aparelho Marte, no

Laboratório de Química Farmacêutica da Faculdade de Farmácia da Universidade

Federal de Goiás.

3.3. Procedimento Geral para a Síntese dos Derivados (14a-14j)

(FINAR; HURLOCK, 1957).

Uma mistura contendo 1 mmol de fenilhidrazinas funcionalizadas

(13a-13j), 1,2 mmol de 1,1,3,3-tetrametoxipropano (0,16 g) (A), 0,07 mL de ácido

clorídrico concentrado e 20 mL de etanol permaneceu a temperatura de refluxo (80-

90°C) por 2 horas. Após término da reação, monitorado via CCD, a mistura reacional

foi neutralizada com solução de bicarbonato de sódio (p/v) a 10% (v), sendo a fase

orgânica extraída com clorofórmio (v), seca sobre sulfato de sódio e concentrada à

25

pressão reduzida. Os produtos foram purificados por cromatografia de adsorção em

coluna, empregando sílica 100-200 mesh (Merk) como fase estacionária e

clorofórmio como fase móvel.

1-fenil-1H-pirazola (14a)

Rendimento: 0,12 g (0,83 mmol, 84%). RMN de 1H (500,13 MHz)

CDCl3 / TMS (δ ppm): 7,93 (1H, dd, J= 2,4 e 0,5 Hz; H-5); 7,73 (1H, dd, J= 1,9 e

0,5 Hz, H-3); 7,69 (1H, dddd, J= 7,5; 2,2; 1,6 e 0,7 Hz, H-2’); 7,69 (1H, dddd, J=

7,2; 2,2; 1,2 e 0,9 Hz, H-6’); 7,45 (1H, dddd, J= 7,5; 7,4; 1,9 e 0,9 Hz, H-3’); 7,45

(1H, dddd, J= 7,4; 7,2; 1,9 e 0,7 Hz, H-5’); 7,29 (1H, tdd, J= 7,4; 1,6 e 1,2 Hz, H-4’);

6,47 (1H, dd, J= 2,4 e 1,9 Hz, H-4). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3 / TMS (δ

ppm): 141,1 (C-3); 140,1 (C-1’); 129,3 (C-3’ e 5’); 126,6 (C-5); 126,4 (C-4’); 119,2

(C-2’ e 6’); 107,7 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

: 3201 (υ C-H), 2918 (υ C-H), 1497 (υ

C=C), 753 e 690 (υ C-H de aromático monosubstituído).

1-(2-clorofenil)-1H-pirazola (14b)



1,2 Hz, H-3’); 7,74 (1H, dd, J= 1,7 e 0,5 Hz, H-3); 7,54 (1H, ddd, J=7,9; 5,6 e 1,2

Hz, H-6’); 7,43 (1H, td, J= 7,9 e 1,2 Hz, H-5’); 7,42 (1H, ddd, J= 8,1, 7,9 e 5,6 Hz,

H-4’); 6,50 (1H, dd, J= 2,4 e 1,7 Hz, H-4). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3 /

TMS (δ ppm): 140,6 (C-3); 139,4 (C-1’); 133,6 (C-3’); 131,6 (C-5); 130,1 (C-4’);

129,7 (C-5’); 128,5 (C-6’); 118,2 (C-2’); 106,4 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

: 3106 (υ

C-H), 748 (υ C-H de aromático 1,2-dissubstituído).

1-(3-clorofenil)-1H-pirazola (14c)


CDCl3 / TMS (δ ppm):7,91 (1H, dl, J= 2,5 Hz; H-5); 7,75(1H, t, J= 2,1 Hz, H-2’);

7,73 (1H, dl, J= 1,8 Hz, H-3); 7,58 (1H, ddd, J= 8,0; 2,1 e 0,9 Hz, H-6’); 7,37 (1H, t,

J= 8,0 Hz, H-5’); 7,26 (1H, ddd, J= 8,0; 2,1 e 0,9 Hz, H-4’); 6,48 (1H, dd, J=2,5 e

1,8 Hz, H-4). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3 / TMS (δ ppm): 141,4 (C-3);

26

140,7 (C-1’); 135,0 (C-3’); 130,3 (C-5’); 126,9 (C-5); 126,2 (C-4’); 119,2 (C-2’);

116,9 (C-6’); 108,1 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

: 3105 (υ C-H), 1038 (υ C-Cl).

1-(4-clorofenil)-1H-pirazola (14d)


DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 8,54 (1H, dd, J= 2,5 e 0,5 Hz; H-5); 7,89 (1H, dd, J=

10,0 e 3,1 Hz, H-2’); 7,89 (1H, dd, J= 9,0 e 3,1 Hz, H-6’); 7,77 (1H, dd, J=1,7 e 0,5

Hz, H-3); 7,56 (1H, dd, J= 10,0 e 2,2 Hz, H-3’); 7,56 (1H, dd, J= 9,0 e 2,2 Hz, H-5’);

6,57 (1H, dd, J= 2,5 e 1,7 Hz, H-4). RMN de 13


ppm): 141,0 (C-3); 138,1 (C-1’); 129,9(C-4’); 129,3 (C-3’ e 5’); 127,7 (C-5); 119,8

(C-2’ e 6’); 108,0 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

:3131 (υ C-H), 1093 (υ C-Cl), 824 (υ

C-H de aromático 1,4-dissubstituído).

1-(2-fluorfenil)-1H-pirazola (14e)


CDCl3 / TMS (δ ppm): 8,0 (1H, ddd, J= 2,9, 2,5 e 0,5 Hz; H-5); 7,89 (1H, dddd, J=

7,7; 5,7; 3,6 e 2,5 Hz, H-6’); 7,75 (1H, dd, J= 1,8 e 0,5 Hz, H-3); 7,27(1H, td, J= 7,7

e 3,2 Hz, H-5’); 7,24 (1H, tdd, J= 7,7; 5,8 e 3,6 Hz, H-4’); 7,21 (1H, dddd, J=9,7;

7,7; 3,2 e 2,5 Hz, H-3’); 6,48 (1H, dd, J= 2,5 e 1,8 Hz, H-4). RMN de 13

C (125,76

MHz) CDCl3 / TMS (δ ppm): 153,4 (C-2’); 141,0 (C-3); 130,8 (C-5); 128,4 (C-1’);

127,8 (C-5’); 125,0 (C-4’); 124,6 (C-6’); 116,8 (C-3’); 107,4 (C-4). IV máx. (KBr)

cm-1

:3060 (υ C-H), 1221 (υ C-F), 748 (υ C-H de aromático 1,2-dissubstituído).

1-(3-fluorfenil)-1H-pirazola (14f)


CDCl3 / TMS (δ ppm):7,92 (1H, dl, J= 2,2 Hz; H-5); 7,73(1H, dl, J= 1,7 Hz, H-3);

7,48 (1H, dt, J= 8,1 e 2,2 Hz, H-6’); 7,47 (1H, dtd, J= 7,9; 2,2 e1,1 Hz, H-2’); 7,40

(1H, td, J= 8,1 e 6,0 Hz, H-5’); 6,98 (1H, tdd, J= 8,1; 2,2 e 1,1 Hz, H-4’);6,48 (1H,

dd, J= 2,2 e 1,7 Hz, H-4). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3 / TMS (δ ppm):

163,3 (C-3’); 141,6 (C-3); 141,4 (C-1’); 130,6 (C-5’); 126,7 (C-5); 114,2 (C-2’);

112,9 (C-4’); 107,9 (C-4); 106,6 (C-6’). IV máx. (KBr) cm-1

:3120 (υ C-H), 1257 (υ

C-F), 678, 773 e 857 (υ C-H de aromático1,3-dissubstituído).

27

1-(4-fluorfenil)-1H-pirazola (14g)



0,5 Hz, H-3); 7,64 (1H, ddd, J= 9,1; 4,7 e 3,5 Hz, H-2’); 7,64 (1H, ddd, J= 10,3; 4,7

e 3,5 Hz, H-6’); 7,13 (1H, ddd, J= 9,1; 8,2 e 3,5 Hz, H-3’); 7,13 (1H, ddd, J= 10,3;

9,1 e 3,5 Hz, H-5’); 6,45 (1H, dd, J= 2,5 e 1,7 Hz, H-4). RMN de 13

C (125,76 MHz)

CDCl3 / TMS (δ ppm): 161,0 (C-4’); 141,2(C-3); 136,5 (C-1’); 126,9 (C-5); 121,0

(C-2’ e 6’); 116,2 (C-3’ e 5’); 107,8 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

:3123 (υ C-H), 1218

(υ C-F), 832 (υ C-H de aromático 1,4-dissubstituído).

1-(3-bromofenil)-1H-pirazola (14h)


CDCl3 / TMS (δ ppm): 7,91 (1H, t, J= 2,2 Hz; H-2’); 7,90 (1H, dd, J= 2,5 e 0,6 Hz,

H-5); 7,72 (1H, dd, J= 1,7 e 0,6 Hz, H-3); 7,62 (1H, ddd, J= 8,1; 2,2 e 1,0 Hz, H-6’);

7,40 (1H, ddd, J= 8,1; 1,9 e 1,0 Hz, H-4’); 7,30 (1H, t, J= 8,1 Hz, H-5’); 6,47 (1H,

dd, J= 2,5 e 1,7 Hz, H-4). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3 / TMS (δ ppm):

141,5 (C-3); 141,1 (C-1’); 130,4 (C-5’); 129,4 (C-4’); 126,7 (C-5); 123,0 (C-3’);

122,3 (C-3’); 117,4 (C-6’); 108,0 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

:3098 (υ C-H), 1034 (υ

C-Br).

1-(4-toluilfenil)-1H-pirazola (14i)



0,5 Hz, H-3); 7,56 (1H, dd, J= 9,1 e 2,6 Hz, H-2’); 7,56 (1H, dd, J= 8,5 e2,6 Hz, H-

6’); 7,23 (1H, ddq, J= 9,1; 1,9 e 0,6 Hz, H-3’); 7,23 (1H, ddq, J= 8,5; 1,9 e 0,6 Hz,

H-5’); 6,44 (1H, dd, J= 2,4 e 1,7 Hz, H-4); 2,37 (3H, t, J= 0,6 Hz, CH3). RMN de 13

C

(125,76 MHz) CDCl3 / TMS (δ ppm):140,8 (C-3); 138,0 (C-1’); 136,2 (C-4’); 129,8

(C-3’ e 5’); 126,8 (C-5); 119,3 (C-2’ e 6’); 107,2 (C-4); 20,8 (C-CH3). IV máx.

(KBr) cm-1

:2920 (υ C-H), 814 (υ C-H de aromático 1,4-dissubstituído).

28

1-(3-nitrofenil)-1H-pirazola (14j)

Rendimento: 0,19 g (1 mmol, 98%). RMN de 1H (500,13 MHz)

CDCl3 / TMS (δ ppm): 8,56 (1H, t, J= 2,2 Hz; H-2’); 8,13(1H, ddd, J= 8,1; 2,2 e

0,9 Hz, H-4’); 8,09 (1H, ddd, J= 8,1; 2,2 e 0,9 Hz, H-6’); 8,03 (1H, d, J=2,6 Hz, H-

5); 7,78 (1H, dd, J= 1,7 e 0,5 Hz, H-3); 7,64 (1H, t, J= 8,1 Hz, H-5’); 6,54 (1H, dd,

J=2,6 e 1,7 Hz, H-4). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3 / TMS (δ ppm): 148,9 (C-

3’); 142,3 (C-3); 141,0 (C-1’); 130,3 (C-5’); 126,8 (C-5); 124,3 (C-6’); 120,6 (C-4’);

113,5 (C-2’); 108,8 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1: 3092 (υ C-H), 1528 e 1345 (υ C-

NO2).


(OLIVEIRA; MAIRINK; PAZINI, 2013).

Uma mistura de 1 mmol dos derivados 1-fenil-1H-pirazolas

substituídos (14a-14j), 1,5 mmol de hexametilenotetramina (0,14g) (B) e 2 mL de

ácido trifluoracético, permaneceu sob temperatura de refluxo (70-80°C) por 12 horas.

Após consumo total do substrato, acompanhada via cromatografia em camada

delgada (CCD) e revelador com 2,4 dinitrofenilhidrazina para monitorar o curso da

reação, a mistura foi vertida em gelo picado e neutralizada com bicarbonato de sódio

(p/v) a 10% (v). Em seguida, a fase orgânica foi extraída em diclorometano (v), seca

sobre sulfato de sódio anidro e concentrada a pressão reduzida. O produto obtido foi

submetido à purificação em cromatografia de adsorção em coluna, empregando sílica

100-200 mesh (Merk) e diclorometano como fase móvel.

1-fenil-1H-pirazola-4-carbaldeído (15a)

Rendimento: 0,14 g (0,82 mmol, 84); P.f.= 166-167°C. RMN de 1H

(500,13 MHz) DMSO6 / TMS (δ ppm): 9,93 (1H, s, CHO); 9,26 (1H, d, J=0,5 Hz;

H-5); 8,29 (1H, d, J= 0,5 Hz, H-3); 7,93 (1H, ddd, J= 7,6; 2,0 e 1,1 Hz, H-2’); 7,93

(1H, dddd, J= 8,6; 2,1; 2,0 e 1,1 Hz, H-6’); 7,57 (1H, dddd, J=7,6; 7,4; 2,1 e 1,9 Hz,

H-3’); 7,57 (1H, ddd, J=8,6; 7,4 e 1,9 Hz, H-5’); 7,42 (1H, tt, J= 7,4 e 1,1 Hz, H-4’).

RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO6/ TMS (δ ppm): 184,8 (C-CHO); 141,0 (C-3);

29

138,6 (C-1’); 132,0 (C-5); 129,7 (C-3’e 5’); 127,3 (C-4’); 125,2 (C-4); 119,2 (C-2’ e

6’). IV máx. (KBr) cm-1

:3125 (υ C-H), 2850 (υ C-H), 1672(υ C=O), 756 e 683 (υ

C-H de aromático monosubstituído).

1-(2-clorofenil)-1H-pirazola-4-carbaldeído (15b)


CDCl3 / TMS (δ ppm): 9,99 (1H, s, CHO); 8,34 (1H, d, J=0,5 Hz; H-5); 8,19 (1H,

d, J= 0,5 Hz, H-3); 7,75 (1H, ddd, J= 8,1; 1,4 e 0,4 Hz, H-3’); 7,55 (1H, ddd, J= 7,9;

1,8 e 0,4 Hz, H-6’); 7,47 (1H, ddd, J= 7,9; 7,4 e 1,4 Hz, H-5’); 7,36 (1H, ddd, J=

8,1; 7,4 e 1,8 Hz, H-4’). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3 / TMS (δ ppm) :184,2

(C-CHO); 141,2 (C-3); 138,9 (C-1’); 135,1 (C-5); 134,2 (C-3’); 130,9 (C-4’); 128,6

(C-5’); 128,3 (C-6’); 125,0 (C-4); 118,3 (C-2’). IV máx. (KBr) cm-1

:3112 (υ C-H),

1677 (υ C=O), 752 (υ 1,2 aromático).

1-(3-clorofenil)-1H-pirazola-4-carbaldeído (15c)

Rendimento: 0,19 g (0,95 mmol, 95%); P.f.= 63-65°C. RMN de 1H

(500,13 MHz) CDCl3 / TMS (δppm): 9,97 (1H, s, CHO); 8,45 (1H, d, J=0,5 Hz; H-

5); 8,18 (1H, d, J= 0,5 Hz, H-3); 7,79 (1H, t, J= 2,1 Hz, H-2’); 7,61 (1H, ddd, J=

8,1;2,1 e 1,0 Hz, H-6’); 7,44 (1H, t, J= 8,1 Hz, H-5’); 7,37 (1H, ddd, J= 8,1; 2,1 e 1,0

Hz, H-4’). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3 / TMS (δ ppm) : 183,9 (C-CHO);

141,7 (C-3); 139,9 (C-1’); 135,6 (C-3’); 130,4 (C-5’); 129,8 (C-5); 127,7 (C-4’);

125,7 (C-4); 120,0 (C-2’); 117,3 (C-6’). IV. máx. (KBr) cm-1: 3101 (υ C-H), 1669

(υ C=O), 1096 (υ C-Cl).

1-(4-clorofenil)-1H-pirazola-4-carbaldeído (15d)



5); 8,17 (1H, d, J= 0,5 Hz, H-3); 7,68 (1H, dd, J= 9,8 e 2,2 Hz, H-2’); 7,68 (1H,

dd,J= 9,0 e 2,2 Hz, H-6’); 7,62 (1H, dd, J= 9,8 e 2,9 Hz, H-3’); 7,62 (1H, dd, J=9,0 e

2,9 Hz, H-5’). RMN de 13


141,9 (C-3); 137,6(C-1’); 133,7 (C-4’); 129,9 (C-5); 129,7 (C-3’e 5’); 125,9 (C-4);

120,8 (C-2’ e 6’). IV máx. (KBr) cm-1

:3124 (υ C-H), 1681 (υ C=O), 1099 (υ C-Cl).

30

1-(2-fluorfenil)-1H-pirazola-4-carbaldeído (15e)


(500,13 MHz) CDCl3 / TMS (δ ppm): 9,98 (1H, s, CHO); 8,53 (1H, dd, J=0,6 e 2,3

Hz H-5); 8,18 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-3); 7,93 (1H, ddd, J= 8,1; 7,9 e 1,6 Hz, H-6’);

7,37 (1H, ddd, J= 8,1; 7,5 e 1,9 Hz, H-3’); 7,30 (1H, td, J= 8,1 e 1,9 Hz, H-5’); 7,28

(1H, tdd, J=8,1; 2,4 e 1,6 Hz, H-4’). RMN de 13


ppm) : 183,9 (C-CHO); 153,4 (C-2’); 141,0 (C-3); 134,6 (C-5); 129,2 (C-3’); 127,3

(C-1’); 125,6 (C-4); 125,1 (C-5’); 124,6 (C-6’); 117,1 (C-4’). IV máx. (KBr) cm-

1:3149 (υ C-H), 2853 (υ C-H), 1670 (υ C=O), 1202 (υ C-F), 753 (υ C-H de

aromático 1,2-dissubstituído).

1-(3-fluorfenil)-1H-pirazola-4-carbaldeído (15f)

Rendimento: 0,17g (0,90 mmol, 90%); P.f.= 82-85°C.RMN de 1H


5); 8,17 (1H, d, J= 0,5 Hz, H-3); 7,53 (1H, dddd, J= 10,3; 2,4; 1,9 e 0,7 Hz, H-2’);

7,51 (1H, ddd, J= 7,4; 1,9 e 1,5 Hz, H-6’); 7,48 (1H, dddd, J=8,1; 7,4; 5,4 e 0,7 Hz,

H-5’); 7,10 (1H, dddd, J=8,1; 7,9; 2,4 e 1,5 Hz, H-4’). RMN de 13

C (125,76 MHz)

CDCl3 / TMS (δ ppm) : 184,0 (C-CHO); 163,0 (C-3’); 141,7 (C-3); 140,3 (C-1’);

131,0 (C-5’); 130,0 (C-5); 125,8 (C-4); 115,0 (C-6’); 114,8 (C-4’); 107,6 (C-2’). IV

máx. (KBr) cm-1

: 3101 (υ C-H), 1684 (υ C=O), 1217 (υ C-F).

1-(4-fluorfenil)-1H-pirazola-4-carbaldeído (15g)



5); 8,16 (1H, d, J= 0,5 Hz, H-3); 7,70 (1H, ddd, J= 9,3; 4,6 e 3,4 Hz, H-2’); 7,70

(1H,ddd, J= 10,3; 4,6 e 3,4 Hz, H-6’); 7,20 (1H, ddd, J=9,3; 8,3 e 3,4 Hz, H-3’), 7,20

(1H, ddd, J=10,3; 9,3 e 3,4 Hz, H-5’). RMN de 13


ppm): 184,0 (C-CHO); 161,8 (C-4’); 141,7(C-3); 135,3 (C-1’); 130,0 (C-5); 125,6

(C-4); 121,6 (C-2’e 6’); 116,5 (C-3’ e 5’). IV máx. (KBr) cm-1

: 3115 (υ C-H), 2734

e 2820 (υ C-H), 1677 (υ C=O), 1213 (υ C-F).

31

1-(3-bromofenil)-1H-pirazola-4-carbaldeído (15h)



5); 8,17 (1H, d, J= 0,5 Hz, H-3); 7,94 (1H, t, J= 2,0 Hz, H-2’); 7,66 (1H, ddd, J= 8,1;

2,0 e 0,9 Hz, H-6’); 7,52 (1H, ddd, J= 8,1; 2,0 e 0,9 Hz, H-4’); 7,38 (1H, t, J= 8,1



142,0 (C-3); 139,9 (C-1’); 131,2 (C-5’); 131,1 (C-4’); 130,1 (C-5); 125,9 (C-4);

123,2 (C-2’); 122,7 (C-3’); 118,1 (C-6’). IV máx. (KBr) cm-1

: 3114 (υ C-H), 1683

(υ C=O), 1033 (υ C-Br).

1-(4-toluilfenil)-1H-pirazola-4-carbaldeído (15i)


(500,13 MHz) CDCl3 / TMS (δppm): 9,95 (1H, s, CHO); 8,39 (1H, d, J=0,6 Hz, H-

5); 8,14 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-3); 7,59 (1H, ddq, J= 9,0; 2,4 e 0,3 Hz, H-2’); 7,59

(1H, ddq, J= 8,7; 2,4 e 0,3 Hz, H-6’); 7,29 (1H, ddq, J= 9,0; 1,9 e 0,7 Hz, H-3’); 7,29

(1H, ddq, J=8,7; 1,9 e 0,7 Hz, H-5’); 2,41 (3H, tt, J= 0,7 e 0,3 Hz, CH3). RMN de

13C (125,76 MHz) CDCl3 / TMS (δ ppm) : 184,2 (C-CHO); 141,8 (C-3); 138,4(C-

4’); 136,9 (C-1’); 130,3 (C-3’e 5’); 130,1 (C-5); 125,6 (C-4); 119,9 (C-2’ e 6’); 21,1

(CCH3). IV máx. (KBr) cm-1

: 3112 (υ C-H), 2921 (υ C-H), 1687 (υ C=O).

1-(3-nitrofenil)-1H-pirazola-4-carbaldeído (15j)


(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δppm): 9,94 (1H, s, CHO); 9,46 (1H, d, J=0,5 Hz;

H-5); 8,71 (1H, t, J= 2,2 Hz, H-2’); 8,39 (1H, ddd, J= 8,2; 2,2 e 0,9 Hz, H-6’);

8,34(1H, d, J= 0,5 Hz, H-3); 8,23 (1H, ddd, J= 8,2; 2,2 e 0,9 Hz, H-4’); 7,84 (1H, t,

J= 2,2 Hz, H-5’). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm) : 184,9 (C-

CHO); 148,4 (C-3’); 141,5(C-3); 139,6 (C-1’); 133,0 (C-5); 130,9 (C-5’); 125,8 (C-

4); 124,6 (C-6’); 121,6 (C-4’); 113,5(C-2’). IV máx. (KBr) cm-1

:3120 (υ C-H), 1682

(υ C=O), 1528 e 1356 (υ C-NO2).

32

3.5. Procedimento Geral para a Síntese dos Derivados (16a-16i)

(KLEIDERER, SHRINER, 1943)

Uma mistura de 1 mmol de aldeído (15a-15j) e 4 mmol de água

destilada, foi mantida sob agitação à temperatura de refluxo (100°C), na sequência,

foi adicionado uma solução de KMnO4 (1 mmol em 4 mL de água) lentamente. Após

o término da adição, a mistura reacional permaneceu em agitação sob temperatura de

refluxo, e o progresso da reação acompanhada via CCD. Ao término da reação (4

horas), a mesma foi resfriada à temperatura ambiente, e 10 mL de solução KOH 10%

foi adicionada à mistura reacional, a mesma foi filtrada em celite sob a pressão

reduzida. O sobrenadante foi mantido em banho de gelo e, em seguida, foi

adicionado 10 mL de HCl 10%, levando à precipitação dos produtos (16a-16j) os

quais foram filtrados e mantidos em dessecador.

4-ácido-1-fenil-1H-pirazola-carboxílico (16a)

Rendimento: 0,17 g (0,98 mmol, 98%); P.f. = 223-225°C. RMN de

1H (500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δppm): 12,66 (1H, sl, COOH); 8,97 (1H, d, J=

0,6 Hz, H-5); 8,0 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-3); 7,88 (1H, ddd, J= 7,6; 2,0 e 1,1Hz, H-2’);

7,88 (1H, dddd, J= 8,6; 2,1; 2,0 e 1,1 Hz, H-6’) 7,48 (1H, dddd, J=7,6; 7,4; 2,1 e 1,9

Hz, H-3’); 7,48 (2H, ddd, J=8,6; 7,4 e 1,9 Hz, H-5’); 7,33 (1H, tt, J= 7,4 e 1,1 Hz, H-

4’). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm) : 164,4 (C-COOH);

142,5 (C-3); 139,2 (C-1’); 131,1 (C-5); 129,9 (C-3’); 129,9 (C-5’); 127,5 (C-4’);

119,2 (C-2’); 129,9 (C-6’); 117,1 (C-4).IV máx. (KBr) cm-1

:: 3116 (υ O-H); 3056 (υ

C-H); 1667 (υ C=O).

4-ácido-1-(2-clorofenil)-1H-pirazola-carboxílico (16b)

Rendimento: 0,21 g (0,98 mmol, 98%); P.f.= 176-178°C.RMN de 1H

(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δppm): 12,66 (1H, sl, COOH); 8,97 (1H, d, J=

0,6 Hz, H-5); 8,0 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-3); 7,88 (1H, ddd, J= 7,6; 2,0 e 1,1 Hz, H-2’);

7,88 (1H,dddd, J= 8,6; 2,1; 2,0 e 1,1 Hz, H-6’); 7,1 (1H, dddd, J=7,6; 7,4; 2,1 e 1,9

Hz, H-3’); 7,53 (1H,ddd, J=8,6; 7,4 e 1,9 Hz, H-5’); 7,33 (1H, tt, J= 7,4 e 1,1 Hz, H-

33

4’). RMN de 13


142,0 (C-3); 137,4 (C-1’); 135,7 (C-5); 130,7 (C-3’); 130,1 (C-5’); 128,7 (C-6’);

128,7 (C-4’); 124,6 (C-2’); 116,4 (C-4). . IV máx. (KBr) cm-1

:3115 (υ O-H); 2603

(υ C-H); 1569 (υ C=O); 781 (υ C-Cl).

4-ácido-1-(3-clorofenil)-1H-pirazola-carboxílico (16c)

Rendimento: 0,17 g (0,78 mmol, 78%); P.f.= 201-203°C.RMN de 1H

(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δppm): ): 9,10 (1H, s, H-5); 8,10 (1H, s, H-3);

8,04 (1H, t, J= 2,1 Hz, H-2’); 7,91 (1H, ddd, J= 8,1;2,1 e 1,0 Hz, H-6’); 7,54 (1H, t,

J= 8,1 Hz, H-5’); 7,43 (1H, ddd, J= 8,1; 2,1 e 1,0 Hz, H-4’).. RMN de 13

C (125,76

MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm) : 163,4 (C-COOH); 142,6 (C-3); 140,2 (C-1’);

134,4 (C-3’); 131,8 (C-5’); 131,6 (C-5); 127,3 (C-4’); 119,2 (C-2’); 118,4 (C-4);

117,6 (C-6’). . IV máx. (KBr) cm-1

:3115 (υ O-H); 2603 (υ C-H); 1569 (υ C=O); 781

(υ Cl-C).

4-ácido-1-(4-clorofenil)-1H-pirazola-4-carboxílico (16d)

Rendimento: 0,21 g (0,97 mmol, 97%); P.f.= 215°C. RMN de 1H

(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δppm): 12,64 (1H, sl, COOH); 9,0 (1H, s, H-5);

8,0 (1H, s, H-3); 7,94 (1H, dd, J= 9,8 e 2,2 Hz, H-2’); 7,94 (1H, dd, J= 9,0 e 2,2 Hz,

H-6’); 7,57 (1H, dd, J= 9,0 e 2,9 Hz, H-3’); 7,57 (1H, dd, J= 9,0 e 2,9 Hz, H-5’).

RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm) : 163,9 (C-COOH); 147,7

(C-3); 138,1 (C-1’); 131,7 (C-4’); 131,5 (C-5); 129,8 (C-3’); 129,8 (C-5’); 121,0 (C-

2’); 121,0 (C-6’); 116,3 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

: 3117 (υ O-H); 2887 (υ C-H);

1666 (υ C=O); 824 (υ Cl-C).

4-ácido-1-(2-fluorfenil)-1H-pirazola-carboxílico (16e)


(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δppm): 8,64 (1H, dd, J= 0,6 e 2,3 Hz, H-5); 8,12

(1H, d, J= 0,6 Hz, H-3); 7,79 (1H, ddd, J= 8,1; 7,9 e 1,6 Hz, H-6’); 7,39 (1H, ddd,

J= 8,1; 7,5 e 1,9 Hz, H-3’); 7,51 (1H, td, J= 8,1 e 1,9 Hz, H-5’); 7,49 (1H, tdd, J=

8,0; 1,4 e 1,6 Hz, H-4’). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm) :

163,7 (C-COOH); 153,2 (C-2’); 140,5 (C-3); 135,2 (C-5); 130,5 (C-5’); 127,7 (C-1’);

34

125,7 (C-3’); 125,4 (C-4’); 117,7 (C-4); 117,6 (C-6’). IV máx. (KBr) cm-1

: 3117 (υ

O-H); 2607 (υ C-H); 1666 (υ C=O); 1566 (υ C=C); 1275 (υ C-N); 510 (υ F-C).

4-ácido-1-(3-fluorfenil)-1H-pirazola-carboxílico (16f)

Rendimento: 0,15 g (0,77 mmol, 77%); P.f.= 221-223 °C. RMN de

1H (500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δppm): 12.72 (1H, sl, COOH); 9,09 (1H, d, J=

0,6 Hz, H-5); 8,10 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-3); 7,82 (1H, dddd, J=10,3; 2,4; 1,9; 0,7 Hz,

H-2’); 7,80 (1H, ddd, J= 7,4; 1,9; 1,5 Hz, H-6’); 7,55 (1H, dddd, J=8,1; 7,4; 5,4; 0,7

Hz, H-5’); 7,20(1H, dddd, J= 8,1; 7,9; 2,4; 1,5 Hz, H-4´). RMN de 13

C (125,76

MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm) 163,7 (C-COOH); 161,8 (C-3’); 142,9 (C-3);

141,0 (C-1’); 132,9 (C-5); 131,7 (C-5’); 118,0 (C-4); 115,0 (C-6’); 114,1 (C-4’);

106,6 (C-2’). IV máx. (KBr) cm-1

: 3120 (υ O-H); 2361 (υ C-H); 1676 (υ C=O);

1252 (υ F-C).

4-ácido-1-(4-fluorfenil)-1H-pirazola-carboxílico (16g)

Rendimento: 0,2 g (1 mmol, 98%); P.f.= 220- 222°C. RMN de 1H

(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δppm): 8,97 (1H, sl, H-5); 8,07 (1H, sl, H-3); );

7,93 (1H, ddd, J= 9,3; 4,6 e 3,4 Hz, H-2’); 7,93 (1H, ddd, J= 10,3; 4,6 e 3,4 Hz, H-

6’); 7,35 (1H, ddd, J= 9,3; 8,3 e 3,4 Hz, H-3’); 7,35 (1H, ddd, J= 10,3; 9,3 e 3,4 Hz,

H-5’). RMN de 13


160,1 (C-4’); 142,3 (C-3); 135,6 (C-1’); 132,5 (C-5); 121,2 (C-2’); 121,2 (C-6’);

117,6 (C-4); 116,6 (C-3’); 116,6 (C-5’). IV máx. (KBr) cm-1

: 3116 (υ O-H); 2886

(υ C-H); 1685 (υ C=O); 1241 (υ F-C).

4-ácido-1-(3-bromofenil)-1H-pirazola-carboxílico (16h)


(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δppm): 9,20 (1H, d, J=0,6 Hz, H-5); 8,19 (1H, d,

J=0,6 Hz, H-3); ); 8,13 (1H, t, J= 2,0Hz, H-2’); 7,94 (1H, ddd, J= 8,1; 2,0 e 0,9Hz,

H-6’); 7,56 (1H, ddd, J= 8,1; 2,0 e 0,9Hz, H-4’); 7,45 (1H, t, J= 8,1Hz, H-5’). RMN

de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm) : 163,0 (C-COOH); 142,2 (C-3);

139,9 (C-1’); 134,8 (C-3’); 140,0 (C-5’); 131,9 (C-5); 127,6 (C-4’); 119,7 (C-2’);

35

118,6 (C-4); 117,2 (C-6’). . IV máx. (KBr) cm-1

:3114 (υ O-H); 2597 (υ C-H); 1678

(υ C=O); 678 (υ Br-C).

4-ácido-1-(3-nitrofenil)-1H-pirazola-carboxílico (16j)

Rendimento: 0,17g (0,75 mmol, 75%); P.f.= 226-228°C. RMN de 1H

(500,13 MHz) CDCl3 / TMS (δppm): 12,70 (1H, sl, COOH); 9,23 (1H, d, J=0,6

Hz, H-5); 8,14 (1H, d, J= 0,6Hz, H-3); 8,69 (1H, td, J= 2,2 Hz, H-2’); 8,37 (1H, ddd,

J= 8,2; 2,2 e 0,9Hz, H-6’); 8,18 (1H, ddd, J= 8,2; 2,2 e 0,9Hz, H-4’); 7,79 (1H, t, J=

2,2 Hz, H-5’). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3 / TMS (δ ppm) : 164,0 (C-

COOH); 148,9 (C-3’); 143.9 (C-2´); 139,4 (C- 1’); 134,5 (C-5); 133,2 (C-5’); 123,8

(C-6’); 125,0 (C-4’); 115,0 (C-4´), 114,8 (C-2’); 95,6 (C-4). IV máx. (KBr) cm-

1:3120 (υ C-H), 1680 (υ C=O), 1530 e 1352 (υ C-NO2).


(FURNISS et.al., 1989).

Uma mistura contendo 1 mmol dos compostos (16a-16j), 10 mL de

metanol e 1 gota de ácido sulfúrico, permaneceu a temperatura de refluxo (70-80°C)

por um período de 8 horas. Após consumo total do substrato, acompanhado via CCD,

o solvente foi evaporado, e o resíduo dissolvido em 30 mL de diclorometano, e em

seguida a fase orgânica foi lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio

(3x 10 mL). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrado a

pressão reduzida, o produto foi mantido em dessecador.

1-fenil-1H-pirazola-4-carboxilato de metila (17a)


(500,13 MHz) CDCl3 / TMS (δppm): 3,87 (3H, s, OCH3); 8,41 (1H, d, J= 0,6, H-

5); 8,10 (1H, d, J= 0,6, H-3); 7,70 (1H, ddd, J= 7,6; 2,0 e 1,1 Hz, H-2’); 7,70 (1H,

dddd, J= 8,6; 2,1; 2,0 e 1,1 Hz, H-6’); 7,47 (1H, dddd, J=7,6; 7,4; 2,1 e 1,9 Hz, H-

3’); 7,47 (1H, ddd, J=8,6; 7,4 e 1,9 Hz, H-5’); 7,32 (1H, tt, J= 7,4 e 1,1 Hz, H-4’).

RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3 / TMS (δ ppm) : 163,06 (C-COOCH3); 142,0

(C-3); 141,7 (C-1’); 139,6 (C-5); 129,6 (C-3’e 5’); 127,3 (C-4’); 125,2 (C-4); 118,7

36

(C-2’ e 6’) 52,8 (C-OCH3). IV máx. (KBr) cm-1

: 3200 (υ O-H), 1600 (υ C=O), 755

e 686 (υ C-H de aromático monosubstituído).

1-(2-clorofenil)-1H-pirazola-4-carboxilato de metila (17b)


(500,13 MHz) CDCl3 / TMS (δppm): 3,88 (3H, s, OCH3) 8,36 (1H, d, J= 0,6 Hz,

H-5); 8,13 (1H, d, J= 0,6 Hz; H-3); 7,59 (1H, ddd, J= 8,1; 1,4 e 0,4 Hz, H-3’); 7,55

(1H, ddd, J= 7,9; 1,8 e 0,4 Hz, H-6’); 7,40 (1H, ddd, J= 7,9; 7,4 e 1,4 Hz, H-5’); 7,39

(1H, ddd, J=8,1; 7,4 e 1,8 Hz, H-4’). RMN de 13


ppm) : 163,1 (C-COOCH3); 143,2 (C-3); 136,8 (C-1’); 134,7 (C-5); 134,8 (C-3’);

130,7 (C-4’); 130,1 (C-6’); 127,6 (C-5’); 115,9 (C-4) 51,4 (C-OCH3). IV máx.

(KBr) cm-1

: 3210 (υ O-H), 1620 (υ C=O), 686 (υ C-Cl).

1-(3-clorofenil)-1H-pirazola-4-carboxilato de metila (17c)


(500,13 MHz) CDCl3 / TMS (δppm): 3,88 (3H, s, OCH3) 8,41 (1H, d, J= 0,6 Hz,

H-5); 8,10 (1H, d, J= 0,6; H-3); 7,76 (1H, t, J= 2,1 Hz, H-2’); 7,59 (1H, ddd, J=

8,1;2,1 e 1,0 Hz, H-6’); 7,40 (1H, t, J= 8,1 Hz, H-5’); 7,32 (1H, ddd, J= 8,1; 2,1 e 1,0



COOCH3); 142,4 (C-3); 139,8 (C-3’); 135,2 (C-1’); 130,5 (C-5’); 130,0 (C-5); 127,5

(C-4’); 120,0 (C-2’); 117,5 (C-6’); 116,7 (C-4); 52,1 (C-OCH3). IV máx. (KBr) cm-

1: 32130 (υ O-H), 16190 (υ C=O), 696 (υ C-Cl).

1-(4-clorofenil)-1H-pirazola-4-carboxilato de metila (17d)


(500,13 MHz) CDCl3 / TMS (δppm): 3,87 (3H, s, OCH3) 8,38 (1H, dd, J= 0,6, H-

5); 8,09 (1H, dd, J= 0,6 Hz; H-3); 7,65 (1H, dd, J= 9,8 e 2,2 Hz, H-2’); 7,65 (1H, dd,

J= 9,0 e 2,2 Hz, H-6’); 7,45 (1H, dd, J= 9,0 e 2,9 Hz, H-3’); 7,45 (1H, dd, J= 9,0 e

2,9 Hz, H-5’). RMN de 13


COOCH3); 142,3 (C-3); 132,9 (C-1’); 137,6 (C-4’); 130,0 (C-5); 129,7 (C-3’e 5’);

120,4 (C-2’ e 6’); 116,8 (C-4); 51,6 (C-OCH3). IV máx. (KBr) cm-1

: 3210 (υ O-H),

1620 (υ C=O), 686 (υ C-Cl).

37

1-(2-fluorfenil)-1H-pirazola-4-carboxilato de metila (17e)


(500,13 MHz) CDCl3 / TMS (δppm): 3,88 (3H, s, OCH3); 8,12 (1H, dd, J= 0,6 e

2,4 Hz, H-5); 7,48 (1H, d, J= 0,6 Hz; H-3); 7,91 (1H, ddd, J= 8,1; 7,9 e 1,6 Hz, H-

6’); 7,34 (1H, ddd, J= 8,1; 7,5 e 1,9 Hz, H-3’); 7,28 (1H, td, J= 8,1 e 1,9 Hz, H-5’);

7,26 (1H, tdd, J= 8,0; 1,4 e 1,6 Hz, H-4’). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3 /

TMS (δ ppm) : 163,5 (C-COOCH3); 153,5 (C-2´), 142,0 (C-3); 134,2 (C-5); 128,8

(C-3’); 128,0 (C-1’); 124,9 (C-5’); 124,4 (C-6’); 116,6 (C-4’); 116,8 (C-4); 51,6 (C-

OCH3). IV máx. (KBr) cm-1

: 3210 (υ O-H), 1620 (υ C=O), 686 (υ C-F).

1-(3-fluor-fenil)-1H-pirazola-4-carboxilato de metila (17f)


(500,13 MHz) CDCl3 / TMS (δppm): 3,88 (3H, s, OCH3), 8,41 (1H, d, J= 0,6 Hz,

H-5); 8,09 (1H, d, J= 0,6 Hz; H-3); 7,50 (1H, dddd, J=10,3; 2,4; 1,9; 0,7 Hz, H-2’);

7,48 (1H, ddd, J= 7,4; 1,9; 1,5 Hz, H-6’); 7,45 (1H, dddd, J=8,1; 7,4; 5,4; 0,7 Hz, H-

5’); 7,06(1H, dddd, J= 8,1; 7,9; 2,4; 1,5Hz, H-4´). RMN de 13

C (125,76 MHz)

CDCl3 / TMS (δ ppm) : 162,9 (C-COOCH3); 163,5 (C-3’); 142,4 (C-3); 139,5 (C-

1’); 129,9 (C-5); 130,2 (C-5’); 114,2 (C-6’); 116,9 (C-4); 115,5 (C-4’); 107,6 (C-2’);

(C-4); 51,6 (C-OCH3). IV máx. (KBr) cm-1

: 3220 (υ O-H), 1620 (υ C=O), 686 (υ C-

F).

1-(4-fluorfenil)-1H-pirazola-4-carboxilato de metila (17g)



H-5); 8,09 (1H, d, J= 0,6 Hz; H-3); 7,67 (1H, ddd, J= 9,3; 4,6 e 3,4 Hz, H-2’); 7,67

(1H, ddd, J= 10,3; 4,6 e 3,4 Hz, H-6’); 7,17 (1H, ddd, J= 9,3; 8,3 e 3,4 Hz, H-3’);

7,17 (1H, ddd, J= 10,3; 9,3 e 3,4 Hz, H-5’). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3 /

TMS (δ ppm) : 163,5 (C-COOCH3); 162,4 (C-4’); 143,3 (C-3); 135,5 (C-1’); 130,0

(C-5); 121,2 (C-2’e 6’); 116,8 (C-4); 116,4 (C-3’ e 5’); 51,6 (C-OCH3). IV máx.

(KBr) cm-1

: 3210 (υ O-H), 1620 (υ C=O), 686 (υ C-Fl).

38

1-(3-bromofenil)-1H-pirazola-4-carboxilato de metila (17h)



H-5); 8,25 (1H, d, J= 0,6 Hz; H-3); 8,27 (1H, t, J= 2,0 Hz, H-2’); 8,05 (1H, ddd, J=

8,1; 2,0 e 0,9 Hz, H-6’); 7,66 (1H, ddd, J= 8,1; 2,0 e 0,9 Hz, H-4’); 7,56 (1H, t, J=

8,1 Hz, H-5’). RMN de 13


COOCH3); 142,1 (C-3); 139,7 (C-1’); 132,0 (C-5); 131,0 (C-5’); 130,4 (C-4’); 122,1

(C-2’); 122,0 (C-3’); 122,0 (C-6’); 116,3 (C-4); 51,2 (C-OCH3). IV máx. (KBr) cm-

1: 3210 (υ O-H), 1620 (υ C=O), 686 (υ C-Br).

1-(4-toluilfenil)-1H-pirazola-4-carboxilato de metila (17i)

Rendimento: 0,16 g (0,77 mmol, 77%); P.f.= 130-132°C, Rf.=0,67

(Hexano/AcOEt– 80:20). RMN de 1H (500,13 MHz) CDCl3 / TMS (δppm): 2,39

(3H, tt, J= 0,7 e 0,3 Hz, CH3); 3,86 (3H, s, OCH3); 8,36 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-5);

8,08 (1H, d, J= 0,6 Hz; H-3); 7,57 (1H, ddq, J= 9,0; 2,4 e 0,3Hz, H-2’); 7,57 (1H,

ddq, J= 8,7; 2,4 e 0,3Hz, H-6’); 7,27 (1H, ddq, J= 9,0; 1,9 e 0,7Hz, H-3’); 7,27 (1H,

ddq, J=8,7; 1,9 e 0,7Hz, H-5’). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3/ TMS (δ ppm):

164,0 (C-COOCH3); 142,0 (C-3); 136,7 (C-1’); 135,9 (C-4’); 129,8 (C-3’e 5’); 130,0

(C-5); 119,8 (C-2’ e 6’); 115,8 (C-4); 52,8 (C-OCH3); 21,1 (C-CH3). IV máx. (KBr)

cm-1

: 2920 (υ C-H), 814 (υ C-H de aromático 1,4-dissubstituído).

1-(3-nitrofenil)-1H-pirazola-4-carboxilato de metila (17j)


(500,13 MHz) CDCl3 / TMS (δppm): 3,90 (3H, s, OCH3); 8,53 (1H, d, J= 0,61 Hz,

H-5); 8,15 (1H, d, J= 0,61 Hz; H-3); 8,60 (1H, td, J= 2,2 Hz, H-2’); 8,21 (1H, ddd,

J= 8,2; 2,2 e 0,9 Hz, H-6’); 8,10 (1H, ddd, J= 8,2; 2,2 e 0,9 Hz, H-4’); 7,69 (1H, t, J=

2,2 Hz, H-5’). RMN de 13

C (125,76 MHz) CDCl3/ TMS (δ ppm): 162,1 (C-

COOCH3); 148,6 (C-3’); 142,7 (C-3); 140,2 (C-1’); 130,6 (C-5’); 129,8 (C-5); 124,4

(C-6’); 121,3 (C-4’); 114,2 (C-2’); 116,8 (C-4) 52,8 (C-OCH3). IV máx. (KBr) cm-

1: 3110 (υ O-H), 1620 (υ C=O), 686 (υ C-NO2).

39

3.7. Procedimento Geral para a Síntese dos Derivados (18a-18j) (JHA;

SAMAD; KUMAR, 2010).

Uma mistura de 1 mmol dos derivados ésteres (18a– 18j), 8 mmol do

hidrato de hidrazina 80% (v) e 30 mL de etanol, foi mantida à temperatura de refluxo

(90-100°C) pelo período de 8 horas. Após total consumo do éster, acompanhado via

CCD, o solvente foi evaporado e a solução resultante foi neutralizada com ácido

clorídrico 10% (v). O sólido obtido foi filtrado, seco e mantido em dessecador.

1-fenil-1-H-pirazola-4-carbohidrazida (18a)


(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δppm): 4,44 (2H, sl, -NH2); 9,48 (1H, sl, -

CONH); 8,88 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-3); 8,13 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-3); 7,83 (1H, ddd,

J= 7,6; 2,0 e 1,1Hz, H-2’); 7,83 (1H, dddd, J= 8,6; 2,1; 2,0 e 1,1 Hz, H-6’); 7,50 (1H,

dddd, J=7,6; 7,4; 2,1 e 1,9 Hz, H-3’); 7,50 (1H, ddd, J=8,6; 7,4 e 1,9 Hz, H-5’); 7,33

(1H, tt, J= 7,4 e 1,1 Hz, H-4’). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS

(δppm): 161,8 (C-CONH); 140,6 (C-3); 139,1 (C-1’); 129,0 (C-5); 129,8 (C-3’e 5’);

127,6 (C-4’); 119,2 (C-2’ e 6’); 119,5 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

:3120 (υ C-H),

1639 (υ C=N), 711 e 687 (υ C-H de aromático monosubstituído).

1-(2-clorofenil)-1-H-pirazola-4-carbohidrazida (18b)



CONH); 8,51 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-5); 8,11 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-3); 7,69 (1H, ddd,

J= 7,8; 1,4 e 0,4 Hz, H-3’); 7,65 (1H, ddd, J= 7,9; 1,8 e 0,4 Hz, H-6’); 7,52 (1H, ddd,

J= 7,9; 7,4 e 1,4 Hz, H-5’); 7,51 (1H, ddd, J=8,1; 7,4 e 1,8 Hz, H-4’). RMN de 13

C

(125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 161,7 (C-CONH); 140,3 (C-3); 132,9 (C-

5); 137,4 (C-2’); 130,7 (C-3’); 131,1 (C-4’); 129,8 (C-1´); 128,4 (C-6’); 128,5 (C-

5’); 117,8 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

:2920 (υ C-H), 814 (υ C-H de aromático 1,4-

dissubstituído).

40

1-(3-clorofenil)-1-H-pirazola-4-carbohidrazida (18c)


(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 4,43 (2H, sl, -NH2); 9,50 (1H, sl, -

CONH); 8,52 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-5); 8,12 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-3); 7,68 (1H, t, J=

2,1Hz, H-2’); 7,61 (1H, ddd, J= 8,1; 2,1 e 1,0 Hz, H-6’); 7,52 (1H, t, J= 8,1 Hz, H-

5’); 7,51 (1H, ddd, J= 8,1; 2,1 e 1,0 Hz, H-4’). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-

d6 / TMS (δppm): 161,7 (C-CONH); 140,8 (C-3); 140,2 (C-C1´); 131,7 (C-5´);

134,7 (C-3’); 128,8 (C-5); 126,8 (C-4’); 119,0 (C-2’); 118,8(C-6’); 119,4 (C-C4). IV

máx. (KBr) cm-1

: 2493 (υ C-H); 1045 (υ C-Cl), ≈1620 (υ C=N).

4.5.4. 1-(4-clorofenil)-1-H-pirazola-4-carbohidrazida (18d)



CONH); 8,90 (1H, d, J=0,6 Hz, H-5); 8,13 (1H, d, J=0,6 Hz, H-3); 7,86 (1H, dd, J=

9,8 e 2,1Hz, H-2’); 7,86 (1H, dd, J= 9,0 e 2,2Hz, H-6’); 7,56 (1H, dd, J= 9,8 e 2,9Hz,

H-3’); 7,56 (1H, dd, J=9,0 e 2,9Hz, H-5’). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6 /

TMS (δ ppm): 161,5 (C-CONH); 139,7 (C-3); 138,4 (C-1’); 131,8 (C-4’); 129,9 (C-

5); 129,2 (C-3’e 5’); 120,9 (C-2’ e 6’); 118,7 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

: 3390 (υ N-

H), 1036 (υ C-Cl), 1634 (υ C=N), 822 (υ C-H de aromático 1,4-dissubstituído).

1-(2-fluorfenil)-1-H-pirazola-4-carbohidrazida (18e)



CONH); 8,61 (1H, dd, J= 2,3 e 0,6 Hz, H-5); 8,14 (1H, d, J=0,61 Hz, H-3); 7,80

(1H, ddd, J= 8,1; 7,9 e 1,6 Hz, H-6’); 7,47 (1H, ddd, J= 8,1; 7,5 e 1,9 Hz, H-3’); 7,46

(1H, td, J= 8,1 e 1,9 Hz, H-5’); 7,36 (1H, tdd, J= 8,1; 2,4 e 1,6 Hz, H-4’). RMN de

13C (125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 162,2 (C-CONH); 153,2 (C-2’);

140,3 (C-3); 132,5 (C-5); 131,0 (C-5’); 125,4 (C-3’); 126,1 (C-1’); 116,9 (C-6’);

117,1 (C-4’); 118,5 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

: 2596 (υ C-H), 1113 (υ C-F), 1634

(υ C=N), 1037 (υ C-N), 766 (υC-H de aromático 1,2-dissubstituído).

41

1-(3-fluorfenil)-1-H-pirazola-4-carbohidrazida (18f)



COONH); 8,95 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-5); 8,15 (1H, d, J=0,6 Hz, H-3); 7,73 (1H,

dddd, J= 10,3; 2,4; 1,9 e 0,7 Hz, H-2’); 7,71 (1H, ddd, J=7,4; 1,9 e 1,5 Hz, H-6’);

7,55 (1H, dddd, J= 8,1; 7,4;5,4; e 0,7 Hz, H-5’); 7,18 (1H, dddd, J= 8,1; 7,9; 2,4; 1,5


C (125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS (δppm): 163,3 (C-3’);

161,2 (C-CONH); 141,0 (C-1´); 140,4 (C-3); 132,1 (C-5’); 130,6 (C-5); 119,8 (C-4);

115,6 (C-6’); 113,5 (C-4’); 106,6 (C-2’); IV máx. (KBr) cm-1

: 3135 (υ C-H), 1212

(υ C-F), 1635 (υ C=N), 838 (υ C-H de aromático 1,4-dissubstituído).

1-(4-fluorfenil)-1-H-pirazola-4-carbohidrazida (18g)



CONH); 8,85 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-5); 8,10 (1H, d, J=0,6 Hz, H-3) 7,86 (1H, ddd, J=

9,3; 4,6 e 3,4 Hz, H-2’); 7,86 (1H, ddd, J= 10,3; 4,6 e 3,4 Hz, H-6’); 7,35 (1H, ddd,

J=9,3; 8,3 e 3,4 Hz, H-3’), 7,35 (1H, ddd, J=10,3; 9,3 e 3,4 Hz, H-5’). RMN de 13

C

(125,76 MHz) DMSO-d6/ TMS (δ ppm): 162,2 (C-CONH); 160,7 (C-4’); 139,7 (C-

3); 136,2 (C-1’); 128,4 (C-5); 121,7 (C-2’e C-6´); 119,4 (C-4); 117,9 (C-3´e C-5´).

IV máx. (KBr) cm-1

: 3135 (υ C-H), 1212 (υ C-F), 1635 (υ C=N), 838 (υ C-H de


1-(3-bromofenil)-1-H-pirazola-4-carbohidrazida (18h)



COONH); 8,97 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-5); 8,13 (1H, d, J=0,6 Hz, H-3); 8,07 (1H, t, J=

2,0 Hz, H-2’); 7,87 (1H, ddd, J= 8,1; 2,0 e 0,9 Hz, H-6’); 7,53 (1H, ddd, J= 8,1; 2,0

e 0,9 Hz, H-4’); 7,46 (1H, t, J= 8,1Hz, H-5’). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6

/ TMS (δppm): 163,2 (C-CONH); 140,4 (C-3); 140,0(C-1’); 134,7 (C-3’); 132,0 (C-

5’); 130,0 (C-C4´); 129,2 (C-5); 121,6 (C-2’); 119,3 (C-C4); 117,3 (C-6’). IV máx.

(KBr) cm-1

: 2501 (υ C-H), 1319 (υ C-N), 1036 (υ C-Br), 747 (υ C-H de aromático

1,3-dissubstituído).

42

1-(4-toluilfenil)-1-H-pirazola-4-carbohidrazida (18i)



CONH); 8,82 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-5); 8,09 (1H, d, J=0,6 Hz, H-3); 7,69 (1H, ddq,

J= 9,0; 2,4 e 0,3 Hz, H-2’); 7,69 (1H, ddq, J= 8,7; 2,4 e 0,3 Hz, H-6’); 7,30 (1H, ddq,

J= 9,0; 1,9 e 0,7 Hz, H-3’); 7,30 (1H, ddq, J=8,7; 1,9 e 0,7 Hz, H-5’); 2,34 (3H, tt, J=

0,7 e 0,3 Hz, CH3). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS (δppm): 161,3

(C-CONH); 139,7 (C-3); 137,1 (C-1’); 137,8 (C-4’); 130,2 (C-5’e 3´); 129,5 (C-5);

119,0 (C-2’e 6´); 118,7 (C-5); 20,3 (C-CH3). IV máx. (KBr) cm-1

: 3152 (υ C-H),

2238 (υ C-H), 1637 (υ C=N); 812 (υ C-H de aromático 1,4-dissubstituído).

1-(3-nitrofenil)-1-H-pirazola-4-carbohidrazida (18j)



CONH); 9,12 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-5); 8,20 (1H, d, J=0,6 Hz, H-3); 8,63 (1H, t, J=

2,2 Hz, H-2’); 8,32 (1H, ddd, J= 8,2; 2,2 e 0,9 Hz, H-6’); 8,17 (1H, ddd, J= 8,2; 2,2 e

0,9 Hz, H-4’); 7,81 (1H, t, J= 2,2 Hz, H-5’). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6

/ TMS (δppm): 161,5 (C-CONH); 141,0 (C-3); 148,5 (C-3´); 140,2 (C-1’); 131,7

(C-5’); 129,2 (C-5); 124,9 (C-6’); 121,6 (C-4´); 119,5 (C-4); 113,1 (C-2’). IV máx.

(KBr) cm-1

: 3152 (υ C-H); 1547 e 1357 (υ C-NO2); 1036 (υ C-N); 673, 774 e 877 (υ

C-H de aromático 1,3-dissubstituído).


(JHA; SAMAD; KUMAR, 2010).

Para uma solução contendo 1 mmol de acil hidrazidas (8a-8j) , 3

mmol de hidróxido de potássio (KOH) e 10 mL de etanol, foram adicionados 3 mmol

de dissulfeto de carbono (0,06 mL, 1,26 g/cm³) (CS2). A mistura foi mantida sob

temperatura de refluxo (80-90°C) por um período de 12 horas. Decorrido o tempo

reacional, acompanhado via CCD, o solvente foi evaporado, e o resíduo resultante

solubilizado em água (v). Em seguida, a solução foi filtrada e o sobrenadante

43

acidificado com ácido clorídrico 10 % (v) até pH=5. O precipitado foi então filtrado,

seco e recristalizado em etanol/água.

5-(1-fenil-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19a)

Rendimento: 0,2 g (0,84 mmol, 84%); P.f.= 221-222 °C. RMN de 1H

(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 14,62 (1H, sl, H-3’’); 9,25 (1H, d, J= 0,6

Hz, H-5); 8,27 (1H, d, J= 0,6 Hz; H-3); 7,93 (1H, ddd, J= 7,6; 2,0 e 1,1Hz, H-2’); 7,

93 (1H, dddd, J= 8,6; 2,1; 2,0 e 1,1Hz, H-6’); 7,52 (1H, dddd, J=7,6; 7,4; 2,1 e

1,9Hz, H-3’); 7,52 (1H, ddd, J=8,6; 7,4 e 1,9 Hz, H-5’); 7,37 (1H, tt, J= 7,4 e 1,1 Hz,

H-4’).RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 178,9 (C-4’’);155,8

(C-1’’); 139,3 (C-3); 138,7 (C-1’); 129,7 (C-5); 126,9 (C-3’ e 5’); 125,8 (C-4’);

118,7 (C-2’ e 6’); 111,0 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

: 3080 (υ C-H), 1633 (υ C=N),

1373 (ν C=S), 750 e 710 (υ C-H de aromático monosubstituído).

5-(1-(2-clorofenil)-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19b)



Hz, H-5); 8,29 (1H, d, J= 0,6 Hz; H-3); 7,71 (1H, ddd, J= 8,1; 1,4 e 0,4 Hz, H-3’);

7,65 (1H, ddd, J= 7,9; 1,8 e 0,4 Hz, H-6’); 7,56 (1H, ddd, J= 7,9; 7,4 e 1,4 Hz, H-5’);

7,55 (1H, ddd, J= 8,1; 7,4 e 1,8 Hz, H-4’). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6 /

TMS (δ ppm): 176,8 (C-4’’);156,0 (C-1’’); 139,0 (C-3); 136,8 (C-1’); 132,8 (C-2’);

130,5 (C-3’); 130,8 (C-5); 128,4 (C-4’); 128,3 (C-5’); 128,0 (C-6’); 106,7 (C-4). IV

máx. (KBr) cm-1

:3110 (υ C-H), 1649 (υ C=N), 1319 (ν C=S), 712 e 632 (υ C-H de


5-(1-(3-clorofenil)-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19c)



Hz, H-5); 8,30 (1H, d, J= 0,6 Hz; H-3); 8,05 (1H, t, J= 2,1 Hz, H-2’); 7,92 (1H, ddd,

J= 8,1; 2,1 e 1,0 Hz, H-6’); 7,55 (1H, t, J= 8,1 Hz, H-5’); 7,43 (1H, ddd, J= 8,1; 2,1 e

1,0 Hz, H-4’). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 176,8 (C-

4’’);155,8 (C-1’’); 139,8 (C-3); 139,5 (C-1’); 134,1 (C-3’); 131,3 (C-5’); 128,8 (C-

44

5); 127,1 (C-4’); 118,7 (C-6’); 117,5 (C-2’); 108,0 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

: 3121

(υ C-H), 1654 (υ C=N), 1298 (ν C=S), 767 e 696 (υ C-H de aromático 1,3-

dissubstituído).

5-(1-(4-clorofenil)-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19d)



Hz, H-5); 8,29 (1H, d, J= 0,6 Hz; H-3); 7,97 (1H, dd, J= 9,8 e 2,2 Hz, H-2’); 7,97

(1H, dd, J= 9,0 e 2,2 Hz, H-6’); 7,60 (1H, dd, J= 9,8 e 2,9 Hz, H-3’); 7,60 (1H, dd,

J=9,0 e 2,9 Hz, H-5’). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm):

176,8 (C-4’’);155,9 (C-1’’); 139,4 (C-3); 137,5 (C-1’); 131,6 (C-4’’); 129,5 (C-3’ e

5’); 128,6 (C-5); 120,6 (C-2’ e 6’); 107,8 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

: 3121 (υ C-H),

1643 (υ C=N), 1302 (ν C=S), 814 (υ C-H de aromático 1,4-dissubstituído).

5-(1-(2-fluorfenil)-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19e)


(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 14,60 (1H, sl, H-3’’); 8,92 (1H, dd, J=

0,6 e 2,1 Hz, H-5); 8,34 (1H, dd, J= 0,6 Hz; H-3); 7,80 (1H, ddd, J= 8,1; 7,9 e 1,6

Hz, H-6’); 7,39 (1H, ddd, J= 8,1; 7,5 e 1,9 Hz, H-3’); 7,52(1H, td, J= 8,1 e 1,9 Hz,

H-5’); 7,50 (1H, tdd, J= 8,1; 2,4 e 1,0 Hz, H-4’). RMN de 13

C (125,76 MHz)

DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 176,8 (C-4’’);155,8 (C-2’); 154,8 (C-1’’); 139,3 (C-3);

132,0 (C-5); 130,1 (C-1’); 127,0 (C-4’); 125,5 (C-5’); 125,3 (C-6’); 117,1 (C-3’);

107,3 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1*

: 3113 (υ C-H), 1643 (υ C=N), 1310 (ν C=S), 766

(υ C-H de aromático 1,2-dissubstituído).

5-(1-(3-fluorfenil)-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19f)

Rendimento: 0,18 g (0,71 mmol, 71%); P.f.=215-217°C. RMN de 1H


Hz, H-5); 8,31 (1H, d, J= 0,6 Hz; H-3); 7,85 (1H, dddd, J= 10,3; 2,4; 1,9 e 0,7 Hz,

H-2’); 7,82 (1H, ddd, J=7,4; 1,9; e 1,5 Hz, H-6’); 7,57 (1H, dddd, J= 8,1; 7,4; 5,4; e

0,7 Hz, H-5’); 7,22 (1H, dddd, J= 8,1; 7,9; 2,4 e 1,5 Hz, H-4’). RMN de 13

C (125,76

MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 176,8 (C-4’’);161,5 (C-3’); 155,8 (C-1’’); 140,1

45

(C-3); 139,5 (C-1’); 131,6 (C-5’); 128,6 (C-5); 114,8 (C-6’); 113,9 (C-4’); 106,6 (C-

2’); 107,9 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

: 3120 (υ C-H), 1646 (υ C=N), 1318 (ν C=S),

856 e 782 (υ C-H de aromático 1,3-dissubstituído).

5-(1-(4-fluorfenil)-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona(19g)

Rendimento: 0,19 g (0,74 mmol, 74%); P.f.=198-199°C. RMN de 1H

(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 14,62 (1H, sl, H-3’’); 9,23(1H, d, J= 0,6

Hz, H-5); 8,26 (1H, d, J=0,6 Hz, H-3) 7,96 (1H, ddd, J= 9,3; 4,6 e 3,4Hz, H-2’);

7,96 (1H, ddd, J= 10,3; 4,6 e 3,4Hz, H-6’); 7,38 (1H, ddd, J=9,3; 8,3 e 3,4Hz, H-3’),

7,38 (1H, ddd, J=10,3; 9,3 e 3,4Hz, H-5’). RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6/

TMS (δ ppm): 176,7 (C-4’’); 161,8 (C-4’); 156,0 (C-1´´); 135,3 (C-1’); 128,5 (C-5);

139,2 (C-3); 121,2 (C-2’e C-6´); 107,8 (C-4); 116,3 (C-3´e C-5´). IV máx. (KBr)

cm-1*

:3105 (υ C-H), 1638 (υ C=N), 1310 (ν C=S), 824 (υ C-H de aromático 1,4-

dissubstituído).

5-(1-(3-bromofenil)-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19h)


(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 9,34 (1H, d, J=0,6 Hz; H-5); 8,29 (1H, d,

J= 0,6 Hz, H-3); 8,18 (1H, t, J= 2,0 Hz, H-2’); 7,96 (1H, ddd, J= 8,1; 2,0 e 0,9 Hz,

H-6’); 7,57 (1H, ddd, J= 8,1; 2,0 e 0,9 Hz, H-4’); 7,48 (1H, t, J= 8,1 Hz, H-5’).

RMN de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6/ TMS (δ ppm): 176,8 (C-4’’); 155,81(C-

1’’); 139,9 (C-3); 139,5 (C-1’); 131,5 (C-5’); 130,0 (C-4’); 128,8 (C-5); 121,5 (C-

2’); 122,3 (C-3’); 117,8 (C-6’); 107,9 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

: 3107 (υ C-H),

1655 (υ C=N), 1313 (ν C=S), 780 e 752 (υ C-H de aromático 1,3-dissubstituído).

5-(1-(4-toluilfenil)-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19i)


(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 9,21 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-5); 8,25 (1H,

d, J= 0,6 Hz; H-3); 7,81 (1H, ddq, J= 9,0; 2,4 e 0,3 Hz, H-2’); 7,81 (1H, ddq, J= 8,7;

2,4 e 0,3 Hz, H-6’); 7,32 (1H, ddq, J= 9,0; 1,9 e 0,7 Hz, H-3’); 7,32 (1H, ddq, J=8,7;

1,9 e 0,7 Hz, H-5’); 2,34 (3H, tt, J= 0,7 e 0,3 Hz, CH3). RMN de 13

C (125,76 MHz)

DMSO-d6/ TMS (δ ppm): 176,7 (C-4’’); 156,2(C-1’’); 139,0 (C-3); 136,9 (C-1’);

46

136,6 (C-4’); 130,0 (C-3’e 5’); 118,9 (C-2’ e 6’); 107,4 (C-4); 20,5 (C-CH3). IV

máx. (KBr) cm-1

: 3113 (υ C-H), 1653 (υ C=N), 1318 (ν C=S), 819 (υ C-H de


5-(1-(3-nitrofenil)-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19j)

Rendimento: 0,24 g (0,83 mmol, 83%); P.f.= 184-186. RMN de 1H

(500,13 MHz) DMSO-d6 / TMS (δ ppm): 9,50 (1H, d, J= 0,6 Hz, H-5); 8,35 (1H, d,

J=0,6 Hz, H-3); 8,74 (1H, t, J= 2,2 Hz, H-2’); 8,40 (1H, ddd, J= 8,2; 2,2 e 0,9 Hz, H-

6’); 8,20 (1H, ddd, J= 8,2; 2,2 e 0,9 Hz, H-4’); 7,82 (1H, t, J= 2,2 Hz, H-5’). RMN

de 13

C (125,76 MHz) DMSO-d6/ TMS (δ ppm): 176,9 (C-4’’); 155,7(C-1’’); 148,6

(C-3’); 140,0 (C-3); 139,4 (C-1´); 131,3 (C-5’); 129,3 (C-5); 124,8 (C-6’); 121,8 (C-

4´); 113,6 (C-2’); 108,3 (C-4). IV máx. (KBr) cm-1

: 3104 (υ C-H), 1649 (υ C=N),

1308 (ν C=S), 864 e 740 (υ C-H de aromático 1,3-dissubstituído).

3.9. Métodos Farmacológicos

Os testes foram realizados no Instituto de Biologia da Universidade

Federal de Goiás, sob a supervisão do Professor Dr. Elson Alves Costa.

3.9.1 Animais

Os experimentos foram conduzidos utilizando-se camundongos

albinos Swiss machos adultos (25-35 g) fornecidos pelo biotério central da

Universidade Federal de Goiás. Estes foram mantidos em gaiolas plásticas á 22 ± 2

°C, com acesso livre a agua e alimentação e sob ciclo de iluminação controlado

(ciclo claro/escuro de 12 h), conforme princípios internacionais para a pesquisa

biomédica envolvendo animais. Os camundongos foram climatizados por 7 dias

antes do início dos experimentos. Todos os protocolos experimentais foram

desenvolvidos de acordo com os princípios da ética e bem-estar animal designados

pela Comissão de Ética no Uso de Animal, e os protocolos aprovados pelo Comitê de

Ética em Pesquisa da UFG sob n° 17/13.

47

3.9.2. Fármacos e reagentes

Ácido acético (Merck, USA), dexametasona (Prodome, Brazil),

dimetilsulfóxido (Sigma Chemical, USA), carragenina (Sigma Chemical, USA),

dexametasona (Decadron®, Ache, Brasil), formaldeído (Synth, Brasil), indometacina

(Indocid®, Merck Sharp & Dohme Farmacêutica-Ltda), hidrocloreto de morfina

(Dimorf®, Cristalia, SP, Brasil). O composto 19f foi dissolvido em DMSO

10%(v/v), e os demais compostos em água destilada.

3.9.3. Atividade Antinociceptiva

3.9.3.1. Teste de contorções abdominais induzidas por ácido acético

Neste teste empregou-se a metodologia previamente descrita por

KOSTER; ANDERSON; BEER (1959). Grupos de camundongos (n = 8) foram

tratados por via oral (v.o.) com veículo (10% DMSO 10 mL/kg) ou composto 19f nas

doses de 89, 178 ou 356 µmol/kg ou indometacina (28 µmol/kg), controle positivo

para atividade antinociceptiva), 60 minutos antes da aplicação de ácido acético 1,2 %

(10 mL/kg, i.p). O número de contorções abdominais foi contado para cada animal,

durante o período de 30 minutos após injeção de ácido acético, e os resultados foram

expressos como média ± SEM do número de contorções.

3.9.3.2. Teste da formalina

O teste de nocicepção induzida pela formalina foi realizado como

descrito por HUNSKAAR; HOLE (1987). Grupos de camundongos (n = 8) foram

tratados via oral com veículo (DMSO 10% v/v, 10 mL/kg), composto 19f na dose

178 µmol/kg, indometacina (28 µmol/kg – controle positivo para atividade

antinociceptiva na segunda fase), ou morfina (17,5 µmol/kg, via subcutânea -

controle positivo para atividade antinociceptiva na primeira e segunda fases). Após

60 minutos dos tratamentos via oral (v.o.) ou 30 minutos após o tratamento pela via

48

subcutânea (s.c) os animais foram tratados na região intraplantar da pata posterior

direita, com 20 μL de formalina 3% v/v (formaldeído 1,2%). Após a injeção do

agente flogístico, os animais foram colocados em caixa de acrílico com fundo

especular para observação da pata a qual foi injetada formalina, por 30 minutos. O

tempo de reação à dor (tempo de lambida) foi determinado durante dois períodos, de

0 à 5 minutos, a primeira fase, onde a dor neurogênica é causada pela estimulação

direta dos nociceptores, e de 15 à 30 minutos, segunda fase do teste, na qual a dor

inflamatória é ocasionada pela liberação de mediadores inflamatórios. Os resultados

foram expressos como médias ± SEM, em segundos.

3.9.4. Atividade Anti-inflamatória

3.9.4.1. Edema induzido por carragenina

O edema de pata traseira induzido por carragenina foi utilizado como

modelo para avaliação da inflamação aguda em animais, conforme método descrito

por PASSOS; FERNANDES; CUNHA (2007). Inicialmente os grupos de

camundongos (n = 8) foram tratados via oral com veículo (DMSO 10%, 10 mL/kg),

composto 19f na dose 178 µmol/kg, ou indometacina (28 µmol/kg). Uma hora após o

tratamento, foi injetado 50 μL de carragenina (1%) intraplantar na pata posterior

direita. A pata posterior esquerda (contra lateral) foi utilizada como controle, e

recebeu uma injeção contendo o mesmo volume (50 μL) de solução salina (NaCl 0,9

% ). O volume basal de ambas as patas foi medido utilizando-se um pletismômetro

(Modelo 7141, Ugo Basile, Itália), e após a injeção de carragenina o edema foi

avaliado nos intervalos de tempo de 1, 2, 3 e 4 horas. A formação do edema foi

avaliada pela diferença de volume entre as patas.

3.9.4.2. Pleurisia induzido por carragenina

Neste teste foi possível avaliar parâmetros importantes da inflamação,

como migração de leucócitos e extravasamento de proteínas. Os animais foram

49

tratados, via oral, com veículo (DMSO 10%, 10 mL/kg), composto 19f na dose 178

µmol/kg, ou dexametasona (5 µmol/kg – controle positivo para atividade anti-

inflamatória). Uma hora após tratamento, os animais receberam uma injeção de 100

μL de carragenina 1% na cavidade pleural. Quatro horas após administração, o

exsudato pleural foi coletado com 1 mL de solução de fosfato salino tamponado PBS

(pH 7,6) heparinizado, sendo que o número de leucócitos totais/diferenciais foram

determinados em câmara de Neubauer, sob microscopia óptica. Parte do lavado

pleural recolhido foi utilizada para avaliar a atividade de enzima mieloperoxidase. Os

resultados foram expressos como média ± ± SEM (SALEH; CALIXTO;

MEDEIROS, 1999; VINEGAR; TRUAX; SELPH, 1973).

3.9.4.3. Doseamento da enzima mieloperoxidase

Para doseamento dos níveis de mieloperoxidase (MPO), amostras do lavado

pleural de animais pré-tratados via oral com veículo (DMSO 10%, 10 mL/kg),

composto 19f na dose de 178 µmol/kg, ou dexametasona (5 µmol/kg) foram

coletadas após a abertura da cavidade pleural, sendo que 20 μL do lavado pleural de

cada animal foram transferidos para os poços de microplacas. A reação foi iniciada

com a adição de 180 μL de tampão fosfato pH = 6,0 contendo 0,167 mg/mL de o-

dianisidina.2HCl e 0.0005% H2O2 e após 15 minutos interrompida com a adição de

10 μL de azida sódica a 1%. As amostras foram centrifugadas durante 5 minutos a

1000 rpm, e 100 μL dos sobrenadantes transferidos para os poços de microplacas. As

absorbâncias foram determinadas em leitor de ELISA no comprimento de onda 450

nm. Foi plotada uma curva-padrão com peroxidase (0,625–100 mU/mL) para

determinar a concentração de mieloperoxidase presente nas amostras, e os resultados

foram expressos como média ± SEM. (SALEH; CALIXTO; MEDEIROS, 1999;

LINO; MARTINS; FLORENTINO, 2012; COSTA et al., 2013).

50

3.9.4.3. Determinação da concentração de TNF-α do exsudato pleural

Para determinação da concentração do fator de necrose tumoral alfa

(TNF-α), parte do líquido recolhido da cavidade pleural foi centrifugado a 3000 rpm,

durante cinco minutos a 4°C. A concentração de TNF–α foi determinada através de

método imunoenzimático (ELISA) (eBioscience), como descrito por NICOLETTI;

AUCI; MANGANO (2010), sendo os resultados expressos como médias ± SEM da

concentração de TNF-α (pg/mL).

3.9.5. Análise estatística

Os dados foram analisados como médias ± erro padrão das médias. As

diferenças entre dois grupos foram detectadas pela análise de variância (ANOVA) de

uma via, seguida do pós-teste Newman-Keuls, ou duas vias (ANOVA) seguido pelo

pós-teste de Bonferroni (SOKAL; ROHLF, 1981). A análise estatística foi realizada

utilizando o software Graph Pad Prism 5.0®, sendo que os valores de P ≤ 0.05 foram

considerados significativos.

51

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO

4.1. Planejamento Estrutural dos Novos Candidatos a Protótipo de

Fármaco Anti-inflamatório (19a-19j).

Os compostos 1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-19j) foram

planejados a partir da estratégia de hibridação molecular (figura 13), originalmente

desenhados a partir do protótipo LQFM-021 (12) e do derivado do ácido

flufenâmico (11).

Figura 13 - Planejamento dos compostos 1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-19j), a partir do

protótipo LQFM-021 (12) e do derivado do ácido flufenâmico (10).

NN

F

N

N

NH

N

2´

3´

1´

4´

6´

5´

NN

N

O

NH

S

Hibridação Molecular

A A

A

B

B

C

C

LQFM-21 (12)Derivado ácido flufenâmico

(10)

Derivados

1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona

(19a-19j)

R

NH

CF3

N

O

NH

S

Onde: R= H (19a); R = 2´-Cl (19b); R= 3´-Cl (19c); R= 4´-Cl (19d); R= 2´-F (19e); R= 3´-F (19f);

R= 4´-F (19h); R= 3´- Br (19i); R= 4´- CH3 (19j); R= 3´-NO2 (19j)

Os novos padrões estruturais dos compostos (19a-19j) contemplam

em suas estruturas as subunidades farmacofóricas A, B e C presentes no protótipo

LQFM-021(12) e derivado do ácido flufenâmico (10). Os padrões de substituição da

subunidade fenila A foram eleitos a partir de descritores físico-químicos utilizados

no planejamento de fármacos, tais como, constante de Hammett (σ), refratividade

52

molar (RM), constante hidrofóbica (π) e topologia global da molécula (HAMMETT,

1937; LIPINSK, 2004; RAJARAJAN; SENBAGAM; VIJAYAKUMAR, 2016).

Além disso, os novos derivados 19a-19j contemplam os filtros

farmacocinéticos preconizados por Lipinski (2004). Segundo essas regras, os

candidatos a protótipos de fármacos devem apresentar número de unidades de massa

atômica menor ou igual a quinhentos; número de sítios aceptores de ligação de

hidrogênio menor ou igual a dez; número de sítios doadores de ligação de hidrogênio

menor ou igual a cinco; além de coeficiente de partição entre 2-3 (LIPINSK, 2004;

MOREIRA et al., 2016).

As propriedades moleculares dos derivados 19a-19j, descritas na regra

de Lipinski, foram calculadas utilizando o servido online chemicalize.org versão

beta. Este servidor é uma ferramenta disponível na Web, desenvolvido pela empresa

ChemAxon, o qual fornece dados a respeito das propriedades moleculares da

estrutura que se deseja pesquisar. Dentre as propriedades calculadas e previstas

destaca-se as propriedades químicas como análise elementar, geometria,

polarizabilidade, C log P e pKa, além de outros parâmetros relacionados a regra de

Lipinski (SOUTHAN; STRACZ, 2013).

Neste trabalho todos os compostos sintetizados (19a-19j) foram

compatíveis com a regra de Lipinski. Na tabela 3 encontram-se inseridas as

propriedades dos derivados 1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-19j).

Tabela 3 - Propriedades físico químicas dos compostos (19a-19j) frente ao filtro farmacocinético

preconizado por Lipinsk (2004).

Compostos Peso Molecular C Log

P

N º de

doadores de

ligação de

hidrogênio

N º de

aceptores de

ligação de

hidrogênio

19a (R= -H)

14a (R= -H)

14a (R= -H)

14a (R= -H)

244,3 2,64 1 2

19b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)

278,7 3,24 1 2

19c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)

278,7 3,24 1 2

19d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)

278,7 3,24 1 2

19e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)

262,3 2,78 1 2

19f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)

262,3 2,78 1 2

19g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)

262,3 2,78 1 2

19h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)

323,2 3,41 1 2

19i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)

258,3 3,15 1 2

19j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)

289,2 2,58 1 4

53

Assim, frente à similaridade estrutural observado nas subunidades A,

B e C dos compostos 11, 12 e 19a-19j (figura 13), pretende-se agregar aos novos

análogos atividades farmacológicas de inibição das vias COX-2 e 5-LOX, de modo

que estes compostos possam atuar de maneira sinérgica sobre essas vias bioquímicas

no processo inflamatório. Por meio desta lógica pode-se levar a estruturação de

compostos que possuam eficácia farmacológica, uma vez que atualmente não

existem medicamentos com este perfil de atuação. Muito embora os AINES

constituam terapia de primeira linha, eles falham no tratamento de doenças

inflamatórias crônicas como a artrite reumatoide. Além disso, apesar dos anticorpos

monoclonais, a exemplo do Adalimumabe, demonstrarem eficácia e serem

relativamente seguros, o alto custo destes fármacos limita seu uso, especialmente no

sistema público brasileiro (MARTIN; MEDEIROS; GOLDENSTEIN, 2006;

SCOTT; KINGSLEY, 2006; TANAKA, 2016).

Logo os compostos apresentados neste trabalho podem representar

inovação entre os agentes anti-inflamatórios, sendo ainda obtidos por vias sintéticas

clássicas e de baixo custo. Ademais, o uso destes padrões estruturais em análogos de

anti-inflamatórios é inédito, segundo pesquisa na base de dados SciFinder.

4.2. Análise Retrossintética para Obtenção dos Novos Candidatos a

Protótipos de Fármacos Anti-inflamatórios (19a –19j)

O planejamento sintético para a obtenção dos derivados-alvo (19a-

19j) foi realizado via análise da retrossintética, a fim de se obter uma rota de síntese

baseada na exploração de reações clássicas de baixo custo, e, quando possível

abordando aspectos de química verde.

A análise retrossintética descrita na figura 14 permitiu identificar o

processo de ciclização intramolecular dos intermediários acil hidrazidas (18a-18j)

como a etapa-chave para construção dos derivados alvo (19a-19j). Através das

desconexões das ligações C-O e C-N a partir do anel heterocíclico 1,3,4-

oxatiadiazola dos compostos (19a-19j), permitiu identificar os intermediários (18a-

18j) e o dissulfeto de carbono (25) como reagentes nesta etapa. Por sua vez, os

54

compostos (18a-18j) via interconversão de grupo funcional (IGF) de hidrazida a

éster conduzem aos compostos (17a-17j) e hidrato de hidrazina (24). Em seguida, os

derivados (17a-17j), via IFG de éster a acido carboxílico, conduzem aos compostos

(16a-16j) e metanol (C). Os intermediários (16a-16j) foram obtidos a partir dos

compostos (15a-15j) e permanganato de potássio (D), evidenciados por meio de IGF

de ácido carboxílico a aldeído. Na sequência, a partir de uma desconexão C-C, foi

possível identificar os intermediários (14a-14j) e hexametilenotetramina (21) como

reagentes para obtenção dos compostos (15a-15j). Sendo que, por meio de duas

desconexões consecutivas de ligações C-N a partir dos compostos (14a-14j),

puderam evidenciar os compostos (13a-13j) e tetrametoxipropano (20) como

precursores no inicio da rota sintética.

Figura 14 - Análise retrossintética para síntese dos compostos objeto de estudo (19a-19j).

Onde: R= H (a); R = 2´-Cl(b); R= 3´-Cl(c); R= 4´-Cl(d); R= 2´-F(e); R= 3´-F(f); R= 4´-F(g); R= 3´-

Br(h); R= 4´- CH3(i); R= 3´-NO2(j).

Vale salientar que o planejamento da rota sintética para obtenção dos

compostos alvo (19a-19j) visou à inserção de metodologias que remetem ao objetivo

da química verde, no qual se aliam desenvolvimento sustentável e tecnológico. Neste

contexto, utilizou-se permanganato de potássio como agente oxidante em meio

aquoso, em substituição aos agentes oxidantes a base de cromo, dicromato de

Ar-

NN

OCH3

O

Ar-

NN

NHNH2

O

Ar-

NN

OH

O

16a-16j17a-17j18a-18j19a -19j

Ar-

NHNH2

H3CO OCH3

OCH3 OCH3

+

13a-13j

Ar-

NN

14a-14j

N

N

N

N+

Ar-

NN

H

O

15a-15j

+ CS2

C O

C N

+

IGF

+ MeOH

IGF

+C C

K+

Mn

O

O

O

O-

(25) (24)

NHNH2.H2O

(23)

(22)(21)(20)

NN

N

O

NH

S

1´2´6´

3´5´

4´R

IGF

C N

55

piridinio (PDC) e clorocromato de piridínio (PCC) largamente utilizados em

procedimentos sintéticos (FERREIRA; ROCHA; SILVA, 2014).

Além disso, optou-se por condições reacionais brandas para as reações

de formilação dos 1-fenil-1H-pirazolas substituídos (14a-14j), bem como para a

síntese do núcleo 1,3,4-oxadiazol-2(3H)-tiona (19a-19j), visto que classicamente as

mesmas empregam oxicloreto de fósforo (POCl3) como reagente. Tais metodologias

apresentam inconvenientes relacionados ao reagente POCl3, uma vez que este é

corrosivo, tóxico, gera resíduos de fósforo, sendo que seu uso e acesso são

controlados pelo exército e polícia federal (VILSMEIER, HAACK, 1927; FINAR;

HURLOCK, 1957; BAGNO et al., 2001, JHA; SAMAD; KUMAR, 2010).

Ressalta-se ainda que os intermediários a partir dos compostos (15a-

15j) a (17a-17j) foram conduzidos diretamente para próxima etapa de síntese após

sua obtenção, sendo os derivados 19a-19j purificados por processos de

recristalização em etanol/água. Nesse sentido a utilização de métodos de purificação

de baixo custo e o emprego de reagentes comercialmente disponíveis estão dentre as

condições que qualificam o desenho da rota sintética de novos fármacos (SHELDON

et al., 2015).

Desta maneira, por meio da rota sintética proposta neste trabalho

obteve-se quantidades suficientes para realização dos ensaios farmacológicos.

4.3. Síntese Orgânica

A rota sintética que levou a obtenção dos derivados 1,3,4-oxadiazola-

2(3H)-tiona (19a-19j), é composta por 6 etapas (figura 15), seguindo via de síntese

linear e utilizando reações clássicas. Mais especificamente, os compostos (19a-19j)

podem ser preparados em processos que compreendem as etapas de:

1. Reação de Condensação: intermediários 1-fenil-1H-pirazolas

substituídos (14a-14j);

2. Reação adaptada de Duff: intermediários 1-fenil-1H-pirazola-4-

carbaldeídos substituídos (15a-15j);

56

3. Reação de oxidação: intermediários ácidos-1-fenil-1H-pirazola-4-

carboxílicos substituídos (16a-16j)

4. Reação de esterificação de Fisher: intermediários 1-fenil-1H-

pirazola-4-carboxilatos de metila substituídos (17a-17j);

5. Síntese de carbohidrazidas: intermediários 1-fenil-1H-pirazola-4-

carbohidrazidas substituídos (18a-18j);

6. Síntese dos derivados alvo 5-(1-fenil-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-

1,3,4-oxadiazolas-2(3H)-tiona substituídos (19a-19j).

Figura 15 - Reagentes e condições reacionais para a síntese dos compostos (19a-19j).

e

NHNH2.HC l NN

NN

H

O

NN

OH

O

NN

OCH3

O

NN

NHNH2

O

2´

3´

1´

4´

6´

5´

NN

N

O

N

H

S

a b c

d

f

R R RR

RR

R

(13a-13j) (14a-14j) (15a-15j) (16a-16j)

(17a-17j)(18a-18j)(19a-19j)

Onde: (a) 1,1,3,3 tetrametoxipropano, HCl, EtOH, refluxo 2 h; (b) hexametilenotetramina, ácido

trifluoracético, refluxo 12 h; (c) KMnO4, H2O, refluxo 4 h (d) MeOH, H2SO4, refluxo 8 h (e)

NHNH2.H2O 80 %, EtOH, refluxo 8 h; (f) CS2, KOH, EtOH, refluxo 12 h. R= H (a). R = 2´-Cl(b); R=

3´-Cl(c); R= 4´-Cl(d); R= 2´-F(e); R= 3´-F(f); R= 4´-F(g); R= 3´- Br(h); R= 4´- CH3(i); R= 3´-

NO2(j).

Destaca-se ainda que a partir das etapas de síntese dos compostos

intermediários 1-fenil-1H-pirazola-4-carboxilatos de metila substituídos (17a-17j)

aos derivados 5-(1-fenil)-1H-pirazola-4-il)-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona substituídos

(19a-19j), todos os compostos obtidos apresentam estruturas químicas ainda não

relatados na literatura, sendo todos inéditos. A estrutura química dos compostos

intermediários assim como dos derivados finais estão expostos na figura 16.

57

Figura 16 - Estrutura química dos intermediários sintéticos envolvidos na obtenção dos derivados

1,3,4-oxadiazolas-2(3H)-tiona substituídos 19a-19j.

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

Cl

Cl

Cl

F

F

F

Br

CH3

NO2

14a 14b 14c 14d 14e 14f 14g 14h 14i 14j

1° Etapa - Série 1-fenil-1H-pirazola substituídos (14a-14j)

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

Cl

Cl

Cl

F

F

F

Br

CH3

NO2

O

H

O

H

O

H

O

H

O

H

O

H

O

H

O

H

O

H

O

H

15a 15b 15c 15d 15e 15f 15g 15h 15i 15j

2° Etapa - Série 1-fenil-1H-pirazola-4-carbaldeídos substituídos (15a-15j)

3° Etapa - Série ácidos-1-fenil-1H-pirazola-4-carboxílicos substituídos (16a-16j)

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

Cl

Cl

Cl

F

F

F

Br

CH3

NO2

O

OH

O

OH

O

OH

O

OH

O

OH

O

OH

O

OH

O

OH

O

OH

O

OH

16a 16b 16c 16d 16e 16f 16g 16h 16i 16j

4° Etapa - Série 1-fenil-1H-pirazola-4-carboxilatos de metila substituídos (17a-17j)

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

Cl

Cl

Cl

F

F

F

Br

CH3

NO2

O

OCH3

O

OCH3

O

OCH3

O

OCH3

O

OCH3

O

OCH3

O

OCH3

O

OCH3

O

OCH3

O

OCH3

17a 17b 17c 17d 17e 17f 17g 17h 17i 17j

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

Cl

Cl

Cl

F

F

F

Br

CH3

NO2

O

NHNH2

O

NHNH2

O

NHNH2

O

NHNH2

O

NHNH2

O

NHNH2

O

NHNH2

O O

NHNH2

O

NHNH2

18a 18b 18c 18d 18e 18f 18g 18h 18i 18j

5° Etapa - Série 1-fenil-1H-pirazola-4-carboidrazidas substituídas (18a-18j)

NHNH2

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

NN

Cl

Cl

Cl

F

FF

Br

CH3

NO2

19a 19b 19c 19d 19e 19f 19g 19h 19i 19j

O

HN

N

O

HN

N

O

HN

N

O

HN

N

O

HN

N

O

HN

N

O

HN

N

O

HN

N

O

HN

N

O

HN

NS

6° Etapa - 5-(1-fenil)-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazolas-2(3H)-tiona substituídos (19a-19j)

S S S S S S S S S

58

4.4. Metodologia Sintética Empregada para Obtenção dos

Compostos 1-fenil-1H-pirazolas substituídos (14a-14j).

O início da rota sintética empregada para a obtenção dos compostos

objeto de estudo (19a-19j), se deu a partir da síntese dos compostos (14a-14j)

(figura17). A metodologia sintética empregada faz uso dos compostos fenilhidrazinas

(13a-13j), 1,1,3,3-tetrametoxipropano (20), HCl 37% (v) como catalisador, em meio

de etanol, no intervalo de tempo de 4 horas, levando à formação dos composto (14a-

14j) em rendimentos entre 76 a 98% (FINAR; HURLOCK, 1957).

Figura 17 - Metodologia sintética empregada para a obtenção dos compostos 1-fenil-1H-pirazolas

substituídos (14a-14j).

2´

3´

1´

4´

6´

5´

NHNH2

H3CO OCH3

OCH3 OCH3

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N

N

+ HCl

, EtOH

(13a-13j) (14a-14j)

R R(20)

76-98%

Onde: R= -H (13a, 14a); R = 2´-Cl (13b, 14b); R= 3´-Cl (13c, 14c); R= 4´-Cl (13d, 14d); R= 2´-F

(13e, 14e); R= 3´-F (13f-14f); R= 4´-F (13g, 14g); R= 3´- Br (13h, 14h); R= 4´- CH3(13i, 14i); R=

3´-NO2(13j, 14j).

Na tabela 4 estão ilustradas as formas de apresentação, Rf e

rendimentos obtidos para os compostos (14a-14j).

Tabela 4 - Formas de apresentação, valores de Rf, e rendimentos referente aos compostos (14a-14j).

Compostos Apresentação Rf1 Rendimento

14a (R= -H)

14a (R= -H)

14a (R= -H)

14a (R= -H)

Líquido viscoso 0,90 85

14b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)


14c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)


14d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)


14e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)


14f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)


14g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)


14h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)


14i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)


14j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)


1- Eluente: (Hexano/Acetato de Etila – 70:30 v/v)

59

O mecanismo da reação (figura 18) se dá através de dois processos

consecutivos devido a presença de uma diamina, presente na fenilhidrazina, e de um

diacetal, presente no composto 1,1,3,3, tetrametoxipropano (20) (SCUDDER, 1992).

A reação inicia-se pela protonação de uma das subunidades acetal, no qual via

assistência anquimérica leva a formação do intermediário metil oxônio (26) e

eliminação de metanol.

A espécie remanescente (26’), devido ao caráter eletrofílico do átomo

de carbono sp2, sofre ataque do átomo de nitrogênio mais nucleofílico da

fenilhidrazina, levando a formação do intermediário tetraédrico (27) na etapa de

adição a qual se caracteriza como etapa lenta da reação. Sucessivas etapas de

transferências de prótons ocorrem, levando à protonação da subunidade metoxila do

azoacetal (27’), o que o torna um bom grupo abandonador.

Novamente, através da assistência anquimérica do par de elétrons não

ligantes do átomo de nitrogênio do azacetal, favorece a eliminação de metanol (28’)

e formação do intermediário imínio (28). Uma vez formada a ligação C-N em uma

das extremidades, sucessivas transferências de prótons levam à protonação da

subunidade acetal remanescente, que via assistência anquimérica produz o segundo

intermediário oxônio (29).

O intermediário oxônio (29), formado na etapa anterior, sofre ataque

do átomo de nitrogênio adjacente ao anel aromático, levando à formação do

intermediário tetraédrico (30), na etapa de adição, e posterior ciclização. Em seguida,

sucessivas transferências de prótons possibilitam a saída da subunidade metoxilado

azacetal. Através da assistência anquimérica do par de elétrons não ligantes do átomo

de nitrogênio ocorre à formação do outro intermediário imínio (31), e eliminação de

metanol. Por fim, a abstração de um dos átomos de hidrogênio da posição 4 do anel

pirazólico por uma base presente no meio, leva à aromatização do anel pirazólico

(14a-14j) e restituição do par de elétrons não ligante do átomo de nitrogênio 1.

60

Figura 18 - Proposta mecanística para a reação de obtenção dos compostos 1-fenil-1H-pirazolas substituídos

(14a-14j), adaptado de SCUDDER, 1992.

H3CO OCH3

OCH3 OCH3

O OCH3

O OCH3

CH3

H

CH3

O OCH3

O OCH3

CH3

H

CH3

H

Ar

NHH2N

H OCH3

O OCH3

CH3

METILOXÔNIO

(13a-13j)(20) (26)

(26' )

H OCH3

O OCH3

CH3

H2NNH

Ar

H OCH3

O OCH3

CH3

H2NNH

Ar (27)

H OCH3

O OCH3

CH3

HNNH

Ar (27')

H

H OCH3

O OCH3

CH3

HNNH

Ar

H

HN OCH3

H OCH3

HNAr

IMÍNIO (28)

N OCH3

H OCH3

HNAr

(28')

H

T.PT.P

N OCH3

H OCH3

HNAr

H

N H

H O

HNAr

CH3

Ar

N

N

H

H

O

CH3

Ar

N

N

HO

CH3

Ar

N

NO

CH3

H

(29) (30) (30')

T.P

Ar

N

NO

CH3

H

(30'')Ar

N

NO

CH3

H

H

Ar

N

NH

IMÍNIO (31)

HH

Ar

N

NH

HH

N

N

O

H3C

H

R

(14a-14j)

2'

3'5'

1'

6'

4'

Onde: T.P = transferência de próton e Ar = Anel aromático, sendo R= -H (13a, 14a); R = 2´-Cl (13b, 14b); R=

3´-Cl (13c, 14c); R= 4´-Cl (13d, 14d); R= 2´-F (13e, 14e); R= 3´-F (13f-14f); R= 4´-F (13g, 14g); R= 3´- Br

(13h, 14h); R= 4´- CH3(13i, 14i); R= 3´-NO2(13j, 14j).

61

4.5. Metodologia Síntética Empregada na Obtenção dos Compostos

1-fenil-1H-pirazola-4-carbaldeídos substituídos (15a-15j)

Os compostos 1-fenil-1H-pirazolas substituídos (14a-14j) obtidos na

etapa anterior, foram formilados quimioseletivamente e regioespecificamente na

posição 4 do anel pirazola (figura 19), através das condições de Duff (OLIVEIRA et

al., 2013), aos correspondentes compostos 1-(1-fenil)-1H-pirazola-4-carbaldeídos

(15a-15j).

Figura 19 – Metodologia sintética empregada na obtenção dos compostos intermediários (15a-15j).

N

N

N

N+CF3CO2H

(14a-14j) (15a-15j)

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N

N

4

H

O

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N

N

4

RR(21)

76-97%



3´-NO2(14j, 15j).

A reação entre os compostos 1-fenil-1H-pirazolas substituídos (14a-

14j), hexametilenotetramina (HMTA) (21), em meio de ácido trifluoracético

(CF3CO2H), sob temperatura de refluxo, pelo período de 12 horas, levou a formação

dos compostos (15a-15j), com rendimentos que variaram de 76 a 97 %, como

ilustrados na tabela 5.

62

Tabela 5 - Formas de apresentação, valores de Rf, e rendimentos referente aos compostos (15a-15j).


(°C) 15a (R= -H)

14a (R= -H)

Sólido amorfo bege 0,55 84

15b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)


15c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)

Sólido amorfo branco 0,63 95

15d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)

Sólido marrom escuro 0,80 76

15e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)


15f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)

Sólido amorfo marrom escuro 0,70 90

15g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)

Sólido amorfo marrom claro 0,55 91

15h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)


15i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)

Sólido amorfo amarelo 0,52 86

15j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)

Sólido amorfo marron 0,38 97

1- Eluente: (Hexano/Acetato de Etila – 70:30 v/v)

O mecanismo da reação adaptada de Duff, exposto na figura 20, tem

início a partir da protonação de um dos átomos de nitrogênio da HMTA (21) a partir

do ácido trifluoracético, que via assistência anquimérica do par de elétrons não

ligante do outro átomo de nitrogênio, leva à formação do primeiro intermediário

imínio (33). Uma vez formado o intermediário (33), este sofre ataque

quimiosseletivo e regioespecífico do carbono C4 do anel pirazólico dos compostos

(14a-14j), semelhante ao mecanismo proposto para a reação de Mannich, logrando

no intermediário tetraédrico na etapa de adição. A seletividade observada nesta etapa

pode ser explicada pelas estruturas canônicas de ressonância (ECR) 14a-14j-ECR,

onde se observa maior densidade eletrônica na posição 4 do anel pirazola.

Na sequência, a abstração do átomo de hidrogênio da posição C4 do

anel pirazola por um dos nitrogênios azacetais no intermediário (34), restituiu a

aromaticidade do sistema, bem como nova assistência anquimérica levando a

formação do segundo intermediário imínio (36).

Por meio de um processo concertado, o par de elétrons do nitrogênio

metilênico migra para formar o terceiro intermediário imínio (37), paralelamente à

transferência do hidreto metilênico para o átomo de carbono sp2 do segundo

intermediário imínio (36). Devido ao caráter eletrofílico do terceiro intermediário

imínio (37), uma molécula de água é adiciona a ele e leva à formação do

intermediário tetraédrico na etapa de adição (38).

63

Sucessivas transferências de prótons tornam o átomo de nitrogênio

metilênico quaternário, requisito favorável como grupo abandonador. Através da

assistência anquimérica do par de elétrons não ligante do átomo de oxigênio

hidroxílico, ocorre à formação do 1-fenil-1H-pirazol-4-carbaldeídos substituídos

protonados (15a-15j) e eliminação da subunidade amônio, que foi neutralizado

durante o processo de extração.

64

Figura 20 - Proposta mecanística para a reação de obtenção dos compostos 1-fenil-1H-pirazola-4-

carbaldeídos substituídos (15a-15j), adaptado de BLAZEVIC et al., 1979.

N

N

N

N

F3C O H

N

N

N

N

H

O

CF3

O

N

N

N

N

H

N

N

N

N

H

N

N

N

N

H

(21)

(32)IMINÍO (33)

Ar

N

N

Ar

N

N

(14a-14j-ECR)

N

N

N

N

H

IMÍNIO

O

N

N

N

HN

N

N

Ar

N

N

N

HN

N

N

ArH

(34)

N

N

N

H2N

N

N

Ar

N

N

N

H2N

N

N

Ar

(35)

N

N

N

N

N

Ar

HH2N

OHH

(37)

N

N

N

N

N

Ar

HH2N

H2O

N

N

N

N

N

Ar

H

HH2N

IMÍNIO (36)

N

N

N

N

N

Ar

H

HH2N

N

N

N

N

N

Ar

HH2NOH

H

(38)

N

N

N

N

N

Ar

HH2NO

H

(38')

H

T.P

N

N

N

N

N

Ar

HH2NO

H

H

N

N

R

2'

3'5'

1'

6'

4'

N

N

R(15a-15j)

2'

3'5'

1'

6'

4'

H

O

H

OH

Onde: Ar = Anel aromático, sendo R= -H (14a, 15a); R = 2´-Cl (14b, 15b); R= 3´-Cl (14c, 15c); R= 4´-

Cl (14d, 15d); R= 2´-F (14e, 15e); R= 3´-F (14f-15f); R= 4´-F (14g, 15g); R= 3´- Br (14h, 15h); R=

4´- CH3(14i, 15i); R= 3´-NO2(14j, 15j).

65


4-ácido-fenil-1H-pirazola-carboxílico substituídos (16a-16j)

Os intermediários 1-fenil-1H-pirazola-4-carbaldeídos substituídos

(15a-15j) formados anteriormente, foram submetidos à reação de oxidação

(KLEIDERER; SHRINER, 1943) levando à formação dos 4-ácido-1-fenil-1H-

pirazola-carboxílico (16a-16j) (figura 21).

Figura 21 - Metodologia sintética empregada para a obtenção dos compostos intermediários (16a-

16j).

(15a-15i) (16a-16i)

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N

N

OH

O

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N

N

H

O

RR

KMnO4, H2O

70-98%



3´-NO2(15j, 16j).

A reação entre os intermediários (15a-15j) e permanganato de

potássio (KMnO4) em meio aquoso à temperatura de 100°C por 2 horas, levou a

formação dos compostos (16a-16j), em rendimentos entre 70 a 98 (tabela 6).

Tabela 6 - Formas de apresentação, valores de Rf, e rendimentos referentes aos compostos (16a-16j).


(°C) 16a (R= -H)

14a (R= -H)


16b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)


16c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)


16d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)


16e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)


16f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)


16g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)


16h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)


16i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)


16j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)


1- Eluente: (Diclorometano/Metanol – 90:10 v/v)

66

O mecanismo da reação de oxidação (figura 22) tem início a partir do

ataque nucleofílico de uma molécula de água à carbonila dos compostos (14a-14j),

levando a formação do intermediário tetraédrico na etapa de adição (39), sendo na

sequencia neutralizado por sucessivas transferências de prótons, logrando o aldeído

hidrato (40).

Na sequência, uma das hidroxilas do aldeído hidrato (40) ataca o

átomo de manganês (22), e através de transferências de prótons, é neutralizada (41).

Por fim, provavelmente a partir de um mecanismo consertado, o par de elétrons de

um dos átomos de oxigênio ligado ao manganês, abstrai o próton da subunidade

aldeído hidrato, e restituição da ligação dupla entre os átomos de carbono e oxigênio

(42), seguidos da eliminação de dióxido de manganês hidrato (43), levando à

formação da subunidade de ácido carboxílico (16a-16j).

Figura 22 - Proposta mecanística para a reação de obtenção dos compostos 4-ácido-fenil-1H-pirazola-

carboxílico substituídos (16a-16j), adaptado SCUDDER, 1992; CLAYDEN et al,. 2001.

Ar

N

N

H

O

O

H

H

(15a-15j) Ar

N

N

H

O

OH2

Ar

N

N

H

O

(39)

O H

H

Ar

N

N

O

HO

(40)

H H

MnO O

O O

(22)

ALDEÍDO HIDRATO

TP

Ar

N

N

O

HO H H

MnO

O

O

O

Ar

N

N

O

HO H H

MnO

O

O

O

TP

Ar

N

N

O

HO H

MnO

OH

O

O

(42)Ar

N

N

O

HO H

MnO

O

HO

O

N

N

R

(16a-16j)

2'

3'5'

1'

6'

4'

OH

O

MnO

OH

HO O

(43)(41)

Onde: Ar = Anel aromático, sendo R= H (15a, 16a); R = 2´-Cl (15b, 16b); R= 3´-Cl (15c, 16c); R=

4´-Cl (15d, 16d); R= 2´-F (15e, 16e); R= 3´-F (15f-16f); R= 4´-F (15g, 16g); R= 3´- Br (15h, 16h);

R= 4´- CH3 (15i, 16i); R= 3´-NO2 (15j, 16j).

67


1-fenil-1H-pirazola-4-carboxilatos de metila substituídos (17a-17j)

Os compostos 4-ácido-1-fenil-1H-pirazola-carboxílico (16a-16j)

obtidos na etapa anterior, foram esterificados segundo as condições de Fisher

(FURNISS et.al., 1989), conforme exposto na figura 23.


17j).

(16a-16j) (17a-17j)

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N

N

OCH3

O

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N

N

OH

O

RR

MeOH, H2SO4

Onde: R= H (16a, 17a); R = 2´-Cl (16b, 17b); R= 3´-Cl (16c, 17c); R= 4´-Cl (16d, 17d); R= 2´-F

(16e, 17e); R= 3´-F (16f-17f); R= 4´-F (16g, 17g); R= 3´- Br (16h, 17h); R= 4´- CH3 (16i, 17i); R=

3´-NO2 (16j, 17j).

Por meio do emprego de condições clássicas, via esterificação de

Fisher, que faz uso de metanol e ácido sulfúrico à temperaturas de refluxo por 4

horas foram obtidos os compostos 17a-17j, com rendimentos entre 70 a 98% (tabela

7).

Tabela 7 – Formas de apresentação, valores de Rf, e rendimentos referente aos compostos (17a-17j).


(°C) 17a (R= -H)

14a (R= -H)


17b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)

Sólido amorfo laranja 0,47 78

17c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)


17d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)


17e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)


17f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)


17g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)


17h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)


17i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)


17j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)


1- Eluente: (Hexano/Acetato de etila – 80:20 v/v)

68

A proposta mecanística para reação de esterificação, figura 24, se

inicia pela protonação da carbonila do ácido carboxílico (16a-16j), por meio da

transferência de prótons com íon metiloxônio (44). Este efeito aumenta

eletrofilicidade da carbonila e favorece a adição de uma molécula de metanol (23).

O íon alquil oxônio perde um próton gerando um intermediário

tetraédrico neutro (45). Este intermediário, após deslocalização eletrônica, elimina

uma molécula de água (46), e após posterior transferência de prótons (47) leva a

forma neutra do 1-fenil-1H-pirazola-4-carboxilatos de metila substituídos (17a-17j).


carboxilatos de metila substituídos (17a-17j), adaptado SCUDDER, 1992; CLAYDEN et al,. 2001.

Ar

N

N

(16a-16j)

OH

O OCH3

H

H

(23)

Ar

N

N

OH

HO

OCH3

H

(44)

Ar

N

N

O

CH3

H

HO

OHO

CH3

H

Ar

N

N

HO

OH

OCH3

OCH3

H

H

Ar

N

N

HOOCH3

O

HH

Ar

N

N

OCH3

H

O

H

OCH3

N

N

R

(17a-17j)

2'

3'5'

1'

6'

4'

OCH3

O

(45)

(46)

(47)

Onde: Ar = Anel aromático, sendo R= H (16a, 17a); R = 2´-Cl (16b, 17b); R= 3´-Cl (16c, 17c); R=

4´-Cl (16d, 17d); R= 2´-F (16e, 17e); R= 3´-F (16f-17f); R= 4´-F (16g, 17g); R= 3´- Br (16h, 17h);

R= 4´- CH3 (16i, 17i); R= 3´-NO2 (16j, 17j).

69


1-fenil-1H-pirazola-4-carbohidrazidas substituídos (18a-18j)

Os compostos 17a-17j foram submetidos á reação de hidrazinólise

(JHA; SAMAD; KUMAR, 2010) com hidrato de hidrazina, pelo período de 8 horas,

logrando nos correspondentes intermediários (18a-18j) (figura 25).


18j).

(17a-17j) 18a-18j)

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N

N

NHNH2

O

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N

N

OCH3

O

RR

NHNH2.H2O 80 %


(17e, 18e); R= 3´-F (17f-18f); R= 4´-F (17g, 18g); R= 3´- Br (17h, 18h); R= 4´- CH3 (17i, 18i);

R= 3´-NO2 (17j, 18j).

A síntese de acilhidrazidas é conhecida na literatura, sendo que

comumente, é realizada pelo tratamento do substrato com excesso de hidrato de

hidrazina, utilizando metanol ou etanol como solvente sob refluxo (EL‐ASHRY;

RASHED; AWAD, 2008; JHA; SAMAD; KUMAR, 2010). Para obtenção dos 1-

fenil-1H-pirazola-4-carboidrazidas substituídos (18a-18j) utilizou-se etanol e os

rendimentos variaram de 80 a 95%, conforme exposto na tabela 8.

70

Tabela 8 - Formas de apresentação, valores de Rf, e rendimento referente aos compostos (18a-18j).


(°C) 18a (R= -H)

14a (R= -H)


18b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)


18c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)


18d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)


18e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)

Sólido amorfo marrom 0,66 98

18f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)


18g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)


18h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)


18i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)


18j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)


1- Eluente: (Hexano/Acetato de etila – 80:20 v/v)

A proposta mecanística (figura 26), se dá pelo ataque nucleofílico dos

pares de elétrons da hidrazina (24) ao carbono carbonílico do grupo éster, o que leva

a formação do intermediário tetraédrico na etapa de adição, seguido de abstração do

próton do nitrogênio amínico e logrando no intermediário (48). Posteriormente o par

de elétrons do metanol restitui a ligação dupla no carbono seguido da saída do íon

metóxido, na etapa de eliminação, este promove posterior abstração do hidrogênio da

carbonila protonada, logrando nos respectivos composto 1-fenil-1H-pirazola-4-

carboidrazidas substituídos (18a-18j).


carboidrazidas substituídos (18a-18j), adaptado SCUDDER, 1992; CLAYDEN et al,. 2001.

Ar

N

N

(17a-17j)

OCH3

O

Ar

N

N

N

N

R

2'

3'5'

1'

6'

4'

NHNH2

O

NH2

NH2

O

NH

NH2

OCH3

Ar

N

N

HO

NH

NH2

OCH3

Ar

N

N

O

NH

NH2

OCH3

H

(24) (48)

H

H

OCH3

N

N

R

(18a-18j)

2'

3'5'

1'

6'

4'

NHNH2

O

Onde: Ar = Anel aromático, sendo R= H (17a, 18a); R = 2´-Cl (17b, 18b); R= 3´-Cl (17c, 18c); R= 4´-Cl

(17d, 18d); R= 2´-F (17e, 18e); R= 3´-F (17f-18f); R= 4´-F (17g, 18g); R= 3´- Br (17h, 18h); R= 4´-

CH3 (17i, 18i); R= 3´-NO2 (17j, 18j).

71


5-(1-fenil)-1H-pirazola-4-il)-2,3-diiidro-1,3,4-oxadiazolas-2(3H)-

tiona substituídos (19a-19j)

A síntese dos compostos objeto de estudo deste trabalho (19a-19j) foi

conduzida pela reação entre os compostos acil hidrazidas (18a-18j) e dissulfeto de

carbono sob condições básicas á temperatura de refluxo por 12 horas (figura 27),

seguida de acidificação com HCl 10% (v) (JHA; SAMAD; KUMAR, 2010).

Figura 27 - Metodologia sintética empregada para a obtenção dos compostos (19a-19j).

(18a-18j) (19a-19j)

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N

N

N

O

N

H

S

R

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N

N

NHNH2

O

R

CS2, KOH

Rendimento Parcial: 56-91%

Rendimento Global: 22-51%



3´-NO2 (18j, 19j).

Por meio desta metodologia foi possível a obtenção desses análogos

em rendimentos entre 56 a 91%, sendo que o rendimento global para a rota sintética

variou entre 22 e 51%. Os rendimentos das reações intermediárias, bem como o

rendimento global do procedimento sintético estão apresentados na tabela 9.

72

Tabela 9 - Rendimentos parciais e totais para a síntese dos derivados 5-(1-fenil-1H-pirazola-4-il)-2,3-diidro-

1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-19j).

Compostos

N-Fenil

Pirazolas

(4a-4j)

Carbaldeídos

(5a-5j)

Ácido

Carboxílico

(6a-6j)

Carboxilatos

(7a-7j)

Acil

Hidrazidas

(8a-8j)

1,3,4-

Oxadiazola-

2-tiona

(9a-9j)

Global1

19a (R= -H)

14a (R= -H)

85 84 98 70 95 84 39

19b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)

86 80 95 95 98 75 46

19c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)

80 90 77 79 90 71 28

19d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)

76 91 98 95 93 74 44

19e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)

78 82 98 78 80 56 22

19f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)

90 95 78 98 90 63 37

19g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)

85 76 97 90 95 91 49

19h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)

83 87 80 84 88 81 35

19i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)

91 86 - 77 80 88 42

19j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)

98 97 75 88 80 83 51

1- η(%)N-Fenilpirazola . η(%)Carbaldeído . η(%) Ácido Carboílico . η(%)Carboxilato . η(%)Acilhidrazida . η(%)1,3,4-Oxadiazola

1010

As formas de apresentação dos compostos finais (19a-19j), fatores de

retenção (Rf) em cromatografia em camada delgada (CCD) e faixa de fusão estão

ilustrados na tabela 10.

Tabela 10 - Formas de apresentação, Rf e faixa de fusão dos derivados 19a-19j.

Compostos Apresentação Rf1 Faixa de Fusão

(°C) 19a (R= -H)

14a (R= -H)

14a (R= -H)

14a (R= -H)

Sólido amorfo branco 0,72 221-222

19b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)

14b (R=2´-Cl)


19c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)

14c (R=3´-Cl)


19d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)

14d (R=4´-Cl)


19e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)

14e (R=2´-F)

Sólido amorfo bege 0,74 206-208

19f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)

14f (R=3´-F)

Sólido amorfo amarelo claro 0,70 215-217

19g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)

14g (R=4´-F)


19h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)

14h (R=3´-Br)


19i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)

14i (R=4´-CH3)

Sólido amorfo amarelo 0,71 215-217

19j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)

14j (R=3´-NO2)

Sólido amorfo marron 0,49 184-186

1- eluente: (Hexano/Acetato de Etila – 60:40 v/v)

A proposta mecanística para obtenção dos derivados 1,3,4-oxadiazola-

2-(3H)-tiona (19a-19j), conforme figura 28, se dá a partir do ataque nucleofílico do

átomo de nitrogênio dos intermediários acilhidrazidas (18a-18j) ao dissulfeto de

carbono (25) levando ao intermediário (50). Este provável intermediário sofre

73

ciclização nucleofílica intramolecular-1,5 (51) logrando no intermediário tetraédrico

(52), na sequência há a posterior liberação de dissulfeto de enxofre (53), e em meio

ácido obtêm-se então os correspondentes 1,3,4-oxadiazola-2-(3H)-tiona

funcionalizados (19a-19j). A existência de tautomerismo tiol-tiona da subunidade

1,3,4-oxadiazola-2-(3H)-tiona (19a-19j) é descrita na literatura, e por meio de

estudos cristalográficos observou-se que uma das formas tautoméricas é

predominante (KOPARIR; ÇETIN; CANSIZ, 2005). Através da análise dos

espectros de RMN de 1H e

13C foi possível verificar que a metodologia sintética

empregada para obtenção dos derivados 19a-19j conduz aos respectivos derivados na

forma tiona.

Figura 28 - Proposta mecanística para obtenção dos compostos (19a-19j), adaptado de SCUDDER,

1992; CLAYDEN et al,. 2001.

NN

R(18a-18j)

NHNH2

O

C

S

S

NN

R

NH

O

N

H

H

SH

S

NN

R

NH

O

N

S

S

K

(49)

NN

R

NH

O

HN

S

S

KH

H

(50)(25)

OH

NN

R

O

HN

NS

SH

NN

R

NH

OHN S

S

(51)

K

KOH

K

NN

R

O

HN

NSH

S

NN

R

O

HN

NSH2

S

NN

R

O

NN

SH

NN

R

2'

3'5'

1'6'

4'

O

HN

NS

(19a-19j)

-H2S

(52)

K

H



3´-NO2 (18j, 19j).

(53)

74

4.10. Espectroscopia na Região do Infravermelho

Os compostos 1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona substituídos (19a-19j)

apresentam frequências de absorções na região de infravermelho típicas, de forma a

auxiliar na caracterização estrutural .

As principais frequências de absorção observadas para os compostos

foram a deformação axial de C=C aromática, deformação axial de C=N, vibração de

deformação para o sistema C-O-C do anel oxadiazola-2(3H)-tiona e C=S, além das

frequências de vibrações características de substituintes do anel aromático. Portanto,

a discussão dos espectros no infravermelho dos compostos sintetizados será feita

considerando-se estas principais frequências de absorção dispostas na tabela 11.

Tabela 11 – Frequências de absorção na região de infravermelho dos compostos (19a-19j).

Número de ondas (cm -1

)

Composto ν (C-H)

Aromático

ν (C=C)

Aromático ν (C=N) δ (C-O-C) ν (C=S) ν (N-H) δ(CArom.-H)

19a (R= H) 3080 1503 1633 1093 1373 2918 750;710*

19b (R=2´-Cl) 3110 1508 1649 1156 1319 2915 712; 632

(12)

19c (R=3´-Cl) 3121 1589 1654 1167 1298 2926 767; 696

(13)

19d (R=4´-Cl) 3121 1508 1643 1110 1302 2915 837

(14)

19e (R=2´-F) 3113 1519 1653 1162 1310 2933 766

(12)

19f (R=3´-F) 3120 1504 1646 1140 1318 2949 856;782

(13)

19g (R=4´-F) 3105 1519 1638 1162 1310 2933 824

14

19h (R=3´-Br) 3107 1588 1655 1171 1313 2937 780; 752

(13)

19i (R=4´-CH3) 3113 1504 1653 1169 1318 2896 819

(14)

19j (R=3´-NO2) 3104 1519 1649 1162 1308 2920 864;740

(13)

- Padrão de substituição do Anel Aromático * Mono-substituído; (12)

1,2 Di-substituído; (1,3)

1,3 Di-

substituído; (14)

1,4 Di-substituído.

75

4.11. Caracterização por Ressonância Magnética Nuclear

As atribuições dos deslocamentos químicos (δ) e das constantes de

acoplamento (J) apresentadas nas tabelas 12 a 23 foram realizadas a partir de

experimentos unidimensionais e bidimensionais de RMN. Para os compostos 1-fenil-

1-H-pirazolas (14a-14j), 1-fenil-1-H-pirazola-4-carbaldeídos (15a-15j) 1-fenil-1-H-

pirazola-4-ácidos carboxílicos (16a-16j), 1-fenil-1H-pirazola-4-carboxilatos de

metila (17a-17j), 1-fenil-1-H-pirazola-4-carbohidrazidas (18a-18j) as atribuições se

deram através dos acoplamentos heteronucleares C-H, a uma ligação (1J), observados

nos experimentos de HSQC, bem como a múltiplas ligações (2-4

J), observados nos

experimentos HMBC. Para os compostos 5-(1-fenil-1-H-pirazolas-4-il)-2,3-dihidro-

1,3,4-oxadiazolas-2(3H)-tiona (19a-19j), além dos experimentos descritos acima,

também foram adquiridos espectros de RMN de 13

C (tabela 23), umas vez que os

átomos de carbono 1´´ e 4´´ (figura 29) não foram detectados por meio de outras

técnicas. Ademais, foi possível identificar os deslocamentos químicos que

confirmam a estrutura dos respectivos 1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-19j), em

especial ao próton (-NH) e ao carbono 4’’ (C=S).

Para discussão da caracterização estrutural dos compostos, estes foram

subdivididos de acordo com suas subunidades estruturais (figura 29), as quais

apresentaram perfil comparativo frente aos dados espectroscópicos de RMN. Para

discussão dos dados de RMN de 1H, a estrutura molecular de 5-(1-fenil-1H-

pirazolas-4-il)-2,3-diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona foi dividida em suas

subunidades, sendo elas a subunidade N-fenilpirazola (A e B) e 1,3,4-oxadiazola-

2(3H)-tiona (C).

76

Figura 29 - Subunidades estruturais dos 5-(1-fenil-1H-pirazola-4-il)-2,3-dihidro-1,3,4-oxadiazola-

2(3H)-tiona substituídos (19a-19j).

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N1

N2

5

3 4

N

O

N

H

S

1´´

2'' 4''

5''

R

A

B

C

Onde: R= H (19a); R = 2´-Cl (19b); R= 3´-Cl ( 19c); R= 4´-Cl (19d); R= 2´-F (19e); R= 3´-F

(19f); R= 4´-F (19g); R= 3´- Br (19h); R= 4´- CH3 (19i); R= 3´-NO2 (19j).

Os estudos das atribuições da subunidade fenila (A), dos compostos

intermediários e finais, foram adaptados a partir do trabalho descrito por Oliveira e

colaboradores, 2011. Devido à complexidade relacionada às multiplicidades e

valores de constante de acoplamento dos compostos funcionalizados, tendo em vista

que muitos dos sinais se encontram sobrepostos, foram utilizadas simulações dos

acoplamentos dos hidrogênios no software NMR Spectrum Simulation, para

determinação dos valores das constantes de acoplamento (J).

4.11.1 Caracterização estrutural dos compostos 1-fenil-1-H-pirazolas

(14a-14j)

As atribuições relativas ao deslocamento químico (δ), constante de

acoplamento (J) e multiplicidade dos sinais dos átomos de hidrogênio e carbono para

os compostos 1-R-fenil-1-H-pirazola se encontram representadas nas tabelas 12 e 13.

Para a subunidade pirazola (B) os átomos de hidrogênio da posição 5

foram os mais desblindados devido ao efeito de anisotropia diamagnética da

subunidade fenila (A), exceto para os compostos orto substituídos com átomos

passíveis ao acoplamento, tais como flúor o qual possui número de spin 1/2. Desta

forma o derivado 1-(2-fluorfenil)-1-H-pirazola (14e) apresentou um dd (duplo

77

dupleto) para os sinais de hidrogênio 3 e 4 e um ddd (duplo duplo dupleto) para

hidrogênio 5 do anel pirazola, respectivamente em δ 7,75; 6,48; 8,0 ppm.

Os derivados para-substituídos 1-(4-clorofenil)-1-H-pirazola (14d), 1-

(4-fluorfenil)-1-H-pirazola (14g) e 1-(4-toluil)-1-H-pirazola (14i) apresentaram

padrão típico, com prótons aromáticos quimicamente equivalentes e magneticamente

não equivalentes, apresentando, portanto, mesmo deslocamento químico (δ) para os

pares de hidrogênios 2é 6´, 3é 5´, com diferentes constantes de acoplamento. Nesse

sentido, mostraram um sistema de spin AA’BB’ de segunda ordem.

O composto 14d apresentou para os hidrogênios aromáticos dois

duplo dupletos característicos, quimicamente equivalentes e magneticamente não

equivalentes, em δ 7,89 (H-2’ e H-6´) e 7,56 (H-3’ e H-5´). Em contrapartida para o

compostos 14g com substituinte flúor, verifica-se para subunidade aromática dois

pares de ddd (duplo duplo dupletos) para H-2´; H-6é H-3´; H-5´ em δ 7,13 e 7,64.

Para o composto 14i verifica-se dois dd (duplo dubleto) para H-2é H-6´ em δ 7,56 e

dois duplo duplo quadrupleto (ddq) em δ 7,23 para H´-3é H-5´. As diferenças

referentes às multiplicidades entre os compostos 14d, 14g e 14i reside no fato dos

substituintes flúor e metila acoplarem com os hidrogênios do anel aromático.

O composto 1-fenil-1-H-pirazola (14a), semelhante aos compostos

para-substituídos 14d,14g e 14i, demonstra equivalência química e não equivalência

magnética para as posições 2’, 3’, 5’e 6’, em um sistema de spin AA’BB’X.

Os sinais presentes no espectro de RMN de 1H do composto 14a

abrangem sinais nas regiões de δ entre 6,47 e 7,93, sendo três duplo dubletos em δ

7,93 (1H, J= 2,4 e 0,5Hz, H-5), δ 7,73 (1H, J= 1,9 e 0,5 Hz, H-3) e δ 6,47 (1H, J=

2,4 e 1,9Hz, H-4) para subunidade pirazola (B), dois duplo duplo duplo dupletos em

δ 7,69 (1H, J= 7,5; 2,2; 1,6 e 0,7 Hz, H-2’ e 1H, J= 7,2; 2,2; 1,2 e 0,9Hz, H-6’) e δ

7,45 (1H, J= 7,5; 7,4; 1,9; 0,9Hz, H-3’ e 1H, J= 7,4; 7,2; 1,9; 0,7 Hz, H-5’), e um

triplo duplo dupleto em δ 7,29 (1H, J= 7,4; 1,6 e 1,2Hz, H-4').

Os compostos meta-substituídos 1-(3-clorofenil)-1-H-pirazola (14c),

1-(3-fluorfenil)-1-H-pirazola (14f), 1-(3-bromofenil)-1-H-pirazola (14h) e 1-(3-

nitrofenil)-1-H-pirazola (14j), possuem sinais compreendidos entre δ 6,48 e 8,56 que

caracterizam os espectros de RMN de 1H destes compostos.

78

Para os compostos 14c, 14h e 14j os hidrogênios aromáticos

apresentaram multiplicidade composta de três tripletos referentes aos hidrogênios 2’

(δ 7,75; 7,91e 8,56 respectivamente) e 5’ (δ 7,37; 7,30 e 7,64), e três duplo duplo

dupletos para os hidrogênios 4’ (respectivos δ 7,26; 7,40 e 8,13) e 6’ (respectivos δ

7,58; 7,62 e 8,09). Por outro lado, o derivado 14f mostrou um triplo duplo dupleto

em δ 6,98 (1H, J= 8,1, 2,2 e 1,1Hz, H-4’), um triplo dupleto em δ 7,4 (1H, J= 8,1 e

6,0Hz, H-5’), um duplo triplo dupleto em δ 7,47 (1H, J= 7,9, 2,2 e 1,1Hz, H-2’), e

um duplo tripleto em δ 7,48 (1H, J= 8,1 e 2,2Hz, H-6’).

Os compostos orto-substituídos, 1-(2-clorofenil)-1-H-pirazola (14b) e

1-(2-fluorfenil)-1-H-pirazola (14e), apresentam espectros de RMN de 1H com sinais

compreendidos entre δ 6,48 e 8,09.

Dois duplo duplo dupletos em δ 7,55 (H-4’) e δ 7,43 (H-6’), um triplo

dupleto em δ 7,53 (H-5’) e um duplo dupleto em δ 7,83 (H-3’) foram verificados

para subunidade aromática do composto 14b. Em contrapartida a subunidade

aromática do derivado 14e apresenta dois duplo duplo duplo dupletos em δ 7,21 (H-

3’) e δ 7,89 (H-6’), um triplo duplo dupleto em δ 7,24 (H-4’) e um triplo dupleto em

δ 7,27 (H-5’), segundo dados especificados nas tabelas 12 e 13.

79

Tabela 12 - Deslocamentos químicos de RMN de 1H dos compostos 1-fenil-1-H-pirazolas substituídos (14a-14j) em CDCl3.

Compostos (δ de1H (J, Hz)

Posições 14a 14b 14c 14d 14e 14f 14g 14h 14i 14j

R1 H Cl H H F H H H H H

R2 H H Cl H H F H Br H NO2

R3 H H H Cl H H F H CH3 H

3 7,73 (dd, 1,9;

0,5)

7,74 (dd, 1,7;

0,5) 7,73 (dl, 1,8)

7,77 (dd, 1,7;

0,5)

7,75 (dd, 1,8;

0,5) 7,73 (dl, 1,7)

7,71 (dd, 1,7;

0,5)

7,72 (dd, 1,7;

0,6)

7,70 (dd, 1,7;

0,5)

7,78 (dd, 1,7;

0,5)

4 6,47 (dd, 2,4;

1,9) 6,5 (dd, 2,4; 1,7)

6,48 (dd, 2,5;

1,8)

6,57 (dd, 2,5;

1,7)

6,48 (dd, 2,5;

1,8)

6,48 (dd, 2,2;

1,7)

6,45 (dd, 2,5;

1,7)

6,47 (dd, 2,5;

1,7)

6,44 (dd, 2,4;

1,7)

6,54 (dd, 2,6;

1,7)

5 7,93 (dd, 2,4;

0,5)

8,09 (dd, 2,4;

0,5) 7,91 (dl, 2,5)

8,54 (dd, 2,5;

0,5)

8,0 (ddd, 2,9;

2,5; 0,5) 7,92 (dl, 2,2)

7,85 (dd, 2,5;

0,5)

7,90 (dd, 2,5;

0,6)

7,87 (dd, 2,4;

0,5)

8,0 (ddd, 2,9;

2,5; 0,5)

2´

7,69 (dddd,

7,5; 2,2; 1,6;

0,7)

- 7,75 (t, 2,1) 7,89 (dd, 10,0;

3,1) -

7,47 (dtd, 7,9;

2,2; 1,1)

7,64 (ddd, 9,1;

4,7; 3,5) 7,91 (t, 2,2)

7,56 (dd, 9,1;

2,6) 8,56 (t, 2,2)

3´

7,45 (dddd,

7,5; 7,4; 1,9;

0,9)

7,83 (dd, 8,1;

1,2) -

7,56 (dd, 10,0;

2,2)

7,21 (dddd,

9,7; 7,7; 3,2;

2,5)

- 7,13 (ddd, 9,1;

8,2; 3,5) -

7,23 (ddq, 9,1;

1,9; 0,6) -

4´ 7,29 (tdd, 7,4;

1,6; 1,2)

7,42 (ddd, 8,1;

7,9; 5,6)

7,26 (ddd, 8,0;

2,1; 0,9) -

7,24 (tdd, 7,7;

5,8; 3,6)

6,98 (tdd, 8,1;

2,2; 1,1) -

7,40 (ddd, 8,1;

1,9; 1,0) -

8,13 (ddd, 8,1;

2,2; 0,9)

5´

7,45 (dddd,

7,4; 7,2; 1,9;

0,7)

7,43 (td, 7,9;

1,2) 7,37 (t, 8,0)

7,56 (dd, 9,0;

2,2)

7,27 (td, 7,7;

3,2)

7,4 (td, 8,1;

6,0)

7,13 (ddd,

10,3; 9,1; 3,5) 7,30 (t, 8,1)

7,23 (ddq, 8,5;

1,9; 0,6) 7,64 (t, 8,1)

6´

7,69 (dddd,

7,2; 2,2; 1,2;

0,9)

7,54 (ddd, 7,9;

5,6; 1,2)

7,58 (ddd, 8,0;

2,1; 0,9)

7,89 (dd, 9,0;

3,1)

7,89 (dddd,

7,7; 5,7; 3,6;

2,5)

7,48 (dt, 8,1;

2,2)

7,64 (ddd,

10,3; 4,7; 3,5)

7,62 (ddd, 8,1;

2,2; 1,0)

7,56 (dd, 8,5;

2,6)

8,09 (ddd, 8,1;

2,2; 0,9)

-CH3 - - - - - - - 2,37 (s) -

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N1

N2

5

3 4

R2

R3

R1

80

Tabela 13- Deslocamentos químicos de RMN de 13

C dos compostos 1-fenil-1-H-pirazolas substituídos (14a-14j) em CDCl3.

δ de C(ppm)

Posição 14a 14b 14c 14d 14e 14f 14g 14h 14i 14j

3 141,1 140,6 141,4 141,0 141,0 141,6 141,2 141,5 140,8 142,3

4 107,7 106,4 108,1 108,0 107,4 107,9 107,8 108,0 107,2 108,8

5 126,6 131,6 126,9 127,7 130,8 126,7 126,9 126,7 126,8 126,8

1´ 140,1 139,4 140,7 138,1 128,4 141,4 136,5 141,1 138,0 141,0

2’ 119,2 118,2 119,2 119,8 153,4 114,2 121,0 122,3 119,3 113,5

3’ 129,3 133,6 135,0 129,3 116,8 163,3 116,2 123,0 129,8 148,9

4’ 126,4 128,5 126,2 129,9 125,0 112,9 161,0 129,4 136,2 120,6

5’ 129,3 129,7 130,3 129,3 127,8 130,6 116,2 130,4 129,8 130,3

6’ 119,2 128,5 116,9 119,8 124,6 106,6 121,0 117,4 119,3 124,3

4-CH3 - - - - - - - - 20,8 -

81

4.11.2. Caracterização estrutural dos compostos 1-fenil-1H-pirazola-

4-carbaldeídos (15a-15j) a 5-(fluorofenil-1H-pirazola-4-il)-2,3-

diidro-1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona (19a-19j)

Os compostos carbaldeídos (15a-15j), ácidos carboxílicos (16a-16j),

ésteres (17a-17j), acilhidrazidas (18-18j) e derivados 1,3,4-oxadiazola-2(3H)-tiona

(19a-19j) apresentaram sinais de RMN de 1H com mesmo padrão de multiplicidades

e valores de constante de acoplamento para subunidade N-fenilpirazola (A e B), uma

vez que a função carbonilada que os diferencia, ocorre no carbono 4 do anel pirazola

(B). Desta maneira as multiplicidades e valores de constantes de acoplamento foram

extrapolados dos compostos da série aldeídica (15a-15j) a série 1,3,4-oxadiazola-

2(3H)-tiona (19a-19j), diferindo apenas nos valores de deslocamento químico,

conforme descrito nas tabelas 14, 16, 18, 20 e 22.

Os compostos 15a, 16a, 17a, 18a, e 19a, sem substituintes na

subunidade fenila (A), apresentaram para anel pirazola (B) dupletos para os

hidrogênios 3 e 5 do anel pirazola, diferindo somente nos valores de deslocamentos

químicos no sistema de spin AA’BB’X. Para os hidrogênios aromáticos H-2’ e H-5’,

foram visualizados dois duplo duplo dupletos e dois duplo duplo duplo dupletos para

H-6’e H-3’, sendo um triplo tripleto para H-4’.

Os derivados para-substituídos, 15d, 16d, 17d, 18d, e 19d

apresentaram o mesmo padrão de multiplicidade que o derivados 14d diferindo nos

valores de constante de acoplamento (J).

Nos compostos meta-substituídos com cloro (15c, 16c, 17c, 18c, e

19c) bromo (15h, 16h, 17h, 18h, e 19h) e nitro (15j, 16j, 17j, 18j, e 19j), os

hidrogênios aromáticos puderam ser visualizados através de dois tripletos referentes

aos hidrogênios 2’ e 5’e dois duplo duplo dupletos para os hidrogênios 4’ e 6’. Já os

derivado meta-flúor mostraram três duplo duplo duplo dupletos para H-4’,H-5’ e H-

2’, e um duplo duplo dupleto para H-6’.

Para os compostos orto-flúor substituídos (15e, 16e, 17e, 18e, e 19e),

a subunidade aromática (A) foi identificada como dois duplo duplo dupletos para H-

3’ e H-6’, um triplo duplo dupleto H-4’, sendo um triplo dupleto H-5’. Para os

82

demais compostos orto-substituídos, quatro duplo duplo dupletos para H-4’, H-5’,H-

6’ e H-3’foram verificados para subunidade aromática destes compostos.

83

Tabela 14- Deslocamentos químicos de RMN de 1H dos compostos 1-fenil-1-H-pirazola-4-carbaldeídos substituídos (15a-15j) em CDCl3 e DMSO-d6* .


Posições 15a* 15b 15c 15d 15e 15f 15g 15h 15i 15j*




3 8,29 (d, 0,5) 8,19 (d, 0,5) 8,18 (d, 0,5) 8,17 (d, 0,5) 8,18 (d, 0,6) 8,17 (d, 0,5) 8,16 (d, 0,5) 8,17 (d, 0,5) 8,14 (d, 0,6) 8,34 (d, 0,5)

5 9,26 (d, 0,5) 8,34 (d, 0,5) 8,45 (d, 0,5) 8,42 (d, 0,5) 8,53 (d; 0,6;

2,3) 8,46 (d, 0,5) 8,39 (d, 0,5) 8,43 (d, 0,5) 8,39 (d, 0,6) 9,46 (d, 0,5)

2´ 7,93 (ddd, 7,6;

2,0; 1,1) - 7,79 (t, 2,1)

7,68 (dd,

9,8;

2,2)

-

7,53 (dddd,

10,3; 2,4; 1,9;

0,7)

7,70 (ddd, 9,3;

4,6; 3,4) 7,94 (t, 2,0)

7,59 (ddq,

9,0; 2,4; 0,3) 8,71 (t, 2,2)

3´

7,57 (dddd,

7,6; 7,4; 2,1;

1,9)

7,75 (ddd, 8,1;

1,4; 0,4) -

7,62 (dd,

9,8;

2,9)

7,37 (ddd, 8,1;

7,5; 1,9) -

7,20 (ddd, 9,3;

8,3; 3,4) -

7,29 (ddq,

9,0; 1,9; 0,7) -

4´ 7,42 (tt, 7,4;

1,1)

7,36 (ddd, 8,1;

7,4; 1,8)

7,37 (ddd, 8,1;

2,1; 1,0) -

7,28 (tdd, 8,1;

2,4; 1,6)

7,1 (dddd, 8,1;

7,9; 2,4; 1,5) -

7,52 (ddd, 8,1;

2,0; 0,9) -

8,23 (ddd,

8,2;

2,2; 0,9)

5´ 7,57 (ddd, 8,6;

7,4; 1,9)

7,47 (ddd, 7,9;

7,4; 1,4) 7,44 (t, 8,1)

7,62 (dd,

9,0;

2,9)

7,30 (td, 8,1;

1,9)

7,48 (dddd,

8,1; 7,4; 5,4;

0,7)

7,20 (ddd,

10,3; 9,3; 3,4) 7,38 (t, 8,1)

7,29 (ddq,

8,7; 1,9; 0,7) 7,84 (t, 8,2)

6´

7,93 (dddd,

8,6; 2,1; 2,0;

1,1)

7,55 (ddd, 7,9;

1,8; 0,4)

7,61 (ddd, 8,1;

2,1; 1,0)

7,68 (dd,

9,0;

2,2)

7,93 (ddd, 8,1;

7,9; 1,6)

7,51 (ddd, 7,4;

1,9; 1,5)

7,70 (ddd,

10,3; 4,6; 3,4)

7,66 (ddd, 8,1;

2,0; 0,9)

7,59 (ddq,

8,7; 2,4; 0,3)

8,39 (ddd,

8,2;

2,2; 0,9)

-CHO 9,93 (s) 9,99 (s) 9,97 (s) 9,97 (s) 9,98 (s) 9,98 (s) 9,97 (s) 9,97 (s) 9,95 (s) 9,94 (s)

-CH3 2,41 (tt, 0,7;

0,3)

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N1

N2

5

34

R2

R3

R1

H

O

84

Tabela 15 - Deslocamentos químicos de RMN de 13

C dos 1-fenil-1-H-pirazola-4-carbaldeídos substituídos (15a-15j) em CDCl3 e DMSO-d6*.

δ de C(ppm)

Posição 15a* 15b 15c 15d 15e 15f 15g 15h 15i 15j*

3 141,0 141,3 141,7 141,9 141,0 141,7 141,7 142,0 141,8 141,5

4 125,2 125,0 125,7 125,9 125,6 125,8 125,6 125,9 125,6 125,8

5 132,0 135,1 129,8 129,9 134,6 130,0 130,0 130,1 130,1 133,0

1´ 138,6 138,9 139,9 137,6 127,3 140,3 135,3 139,9 136,9 139,6

2’ 119,1 118,3 120,0 120,8 153,4 107,6 121,6 123,2 119,9 113,5

3’ 129,7 134,2 135,6 129,7 129,2 163,0 116,5 122,7 130,3 148,4

4’ 127,3 130,9 127,7 133,7 117,1 114,8 161,8 131,1 138,4 121,6

5’ 129,7 128,6 130,4 129,7 125,1 131,0 116,5 131,2 130,3 130,9

6’ 119,8 128,3 117,3 120,8 124,6 115,0 121,6 118,1 119,9 124,6

CHO 184,8 184,2 183,9 183,9 183,9 184,0 184,0 183,8 184,2 184,9

4-CH3 - - - - - - - - 21,1 -

85

Tabela 16- Deslocamentos químicos de RMN de 1H dos compostos 4-ácidos-1-fenil-1H-pirazola-4-carboxílicos substituídos (16a-16j) DMSO-d6.

- Desloca


Posições 16ª 16b 16c 16d 16e 16f 16g 16h 16i 16j




3 8,00 (d, 0,6) 8,09 (d, 0,6) 8,10 (d, 0,6) 8,00 (d, 0,6) 8,12 (d, 0,6) 8,10 (d, 0,6) 8,07 (d, 0,6) 8,19 (d, 0,6) 8,30 (d, 0,6) 8,14 (d, 0,6)

5 8,97 (d, 0,6) 8,62 (d, 0,6) 9,10 (d, 0,6) 9,00 (d, 0,6) 9,64 (dd, 0,6;

2,3)

9,09 (dd, 0,6;

2,3) 8,97 (d, 0,6) 9,20 (d, 0,6) 9,11 (d, 0,6) 9,23 (d, 0,6)

2´ 7,88 (ddd, 7,6;

2,0; 1,1) - 8,04 (t, 2,1)

7,94 (dd, 9,8;

2,2) -

7,82 (dddd,

10,3; 2,4; 1,9;

0,7)

7,93 (ddd, 9,3;

4,6; 3,4) 8,13 (t, 2,0)

7,59 (ddq,

9,0; 2,4; 0,3) 8,69 (t, 2,2)

3´

7,48 (dddd,

7,6; 7,4; 2,1;

1,9)

7,70 (ddd,

8,1;

1,4; 0,4)

- 7,57 (dd, 9,8;

2,9)

7,39 (ddd, 8,1;

7,5; 1,9) -

7,35 (ddd, 9,3;

8,3; 3,4) -

7,72 (ddq,

9,0; 1,9; 0,7) -

4´ 7,33 (tt, 7,4;

1,1)

7,53 (ddd,

8,1;

7,4; 1,8)

7,43 (ddd, 8,1;

2,1; 1,0) -

7,49 (tdd, 8,1;

2,4; 1,6)

7,20 (dddd, 8,1;

7,9; 2,4; 1,5) -

7,56 (ddd, 8,1;

2,0; 0,9) -

8,18 (ddd, 8,2;

2,2; 0,9)

5´ 7,48 (ddd, 8,6;

7,4; 1,9)

7,54 (ddd,

7,9;

7,4; 1,4)

7,54 (t, 8,1) 7,76 (dd, 9,0;

2,9)

7,51 (td, 8,1;

1,9)

7,55 (dddd,

8,1; 7,4; 5,4;

0,7)

7,35 (ddd,

10,3; 9,3; 3,4) 7,45 (t, 8,1)

7,72 (ddq,

8,7; 1,9; 0,7) 7,79 (t, 8,2)

6´

7,88 (dddd,

8,6; 2,1; 2,0;

1,1)

7,64 (ddd,

7,9;

1,8; 0,4)

7,91 (ddd, 8,1;

2,1; 1,0)

7,94 (dd, 9,0;

2,2)

7,79 (ddd, 8,1;

7,9; 1,6)

7,80(ddd, 7,4;

1,9; 1,5)

7,93 (ddd,

10,3; 4,6; 3,4)

7,94 (ddd, 8,1;

2,0; 0,9)

7,92 (ddq,

8,7; 2,4; 0,3)

8,37 (ddd, 8,2;

2,2; 0,9)

-COOH 12,66 (s) 12,50 (s) - 12,64 (s) - 12,72 (s) - - 12,82 (s) 12,72 (s)

-CH3 2,40 (tt, 0,7;

0,3)

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N1

N2

5

34

R2

R3

R1

OH

O

86


C dos 4-ácidos-1-fenil-1H-pirazola-4-carboxílicos substituídos (16a-16j) em DMSO-d6.

δ de C(ppm)

Posição 16ª 16b 16c 16d 16e 16f 16g 16h 16i 16j

3 142,5 142,0 142,6 147,7 142,9 141,7 142,3 142,2 141,7 148,9

4 117,1 116,4 118,4 116,3 117,7 118,0 117,6 118,6 118,3 95,6

5 131,1 135,7 131,6 131,5 135,2 132,9 132,5 131,9 130,1 134,5

1´ 139,2 137,4 140,2 138,1 127,7 141,0 135,6 139,9 138,0 139,4

2’ 129,8 124,6 119,2 121,0 153,2 106,6 121,2 119,7 119,9 114,8

3’ 129,9 130,7 134,4 129,8 125,7 161,8 116,6 134,8 120,1 148,9

4’ 127,5 130,0 127,3 131,7 125,4 114,1 160,1 127,6 138,2 95,6

5’ 129,9 130,1 131,8 129,8 130,5 131,7 116,6 140,0 120,1 133,2

6’ 129,8 128,7 117,6 121,0 117,6 115,0 121,2 117,2 119,9 123,8

COOH 164,4 172,7 163,4 163,9 163,7 163,7 164,1 163,0 184,2 164,0

4-CH3 - - - - - - - - 21,17 -

87

Tabela 18 - Deslocamentos químicos de RMN de 1H dos compostos 1-fenil-1-H-pirazola-4-carboxilatos de metila (17a-17j) em CDCl3.






3 8,10 (d, 0,6) 8,13 (d, 0,6) 8,10 (d, 0,6) 8,09 (d, 0,6) 7,48 (d, 0,6) 8,09 (d, 0,6) 8,09 (d, 0,6) 8,25 (d, 0,6) 8,07 (d, 0,6) 8,14 (d,

0,6)

5 8,41 (d, 0,6) 8,36 (d, 0,6) 8,41 (d, 0,6) 8,38 (d, 0,6) 8,12 (dd, 0,6;

2,3) 8,41 (d, 0,6) 8,36 (d, 0,6) 9,30 (d, 0,6) 8,36 (d, 0,6)

8,53 (d,

0,6)

2´

7,70 (ddd,

7,6;

2,0; 1,1)

- 7,76 (t, 2,1) 7,65 (dd, 9,8;

2,2) -

7,50 (dddd,

10,3; 2,4; 1,9;

0,7)

7,67 (ddd, 9,3;

4,6; 3,4) 8,27 (t, 2,0)

7,57 (ddq,

9,0; 2,4; 0,3)

8,60 (t,

2,2)

3´

7,47 (dddd,

7,6; 7,4; 2,1;

1,9)

7,59 (ddd, 8,1;

1,4; 0,4) -

7,45 (dd, 9,8;

2,9)

7,34 (ddd, 8,1;

7,5; 1,9) -

7,17 (ddd, 9,3;

8,3; 3,4) -

7,27 (ddq,

9,0; 1,9; 0,7) -

4´ 7,35 (tt, 7,4;

1,1)

7,39 (ddd, 8,1;

7,4; 1,8)

7,32 (ddd, 8,1;

2,1; 1,0) -

7,26 (tdd, 8,1;

2,4; 1,6)

7,06 (dddd,

8,1;

7,9; 2,4; 1,5)

- 7,66 (ddd, 8,1;

2,0; 0,9) -

8,10

(ddd,

8,2;

2,2; 0,9)

5´

7,47 (ddd,

8,6;

7,4; 1,9)

7,40 (ddd, 7,9;

7,4; 1,4) 7,40 (t, 8,1)

7,45 (dd, 9,0;

2,9)

7,28 (td, 8,1;

1,9)

7,45 (dddd,

8,1; 7,4; 5,4;

0,7)

7,17 (ddd,

10,3; 9,3; 3,4) 7,56 (t, 8,1)

7,27 (ddq,

8,7; 1,9; 0,7)

7,69 (t,

2,2)

6´

7,70 (dddd,

8,6; 2,1; 2,0;

1,1)

7,55 (ddd, 7,9;

1,8; 0,4)

7,59 (ddd, 8,1;

2,1; 1,0)

7,65 (dd, 9,0;

2,2)

7,91 (ddd, 8,1;

7,9; 1,6)

7,48 (ddd, 7,4;

1,9; 1,5)

7,67 (ddd,

10,3; 4,6; 3,4)

8,05 (ddd, 8,1;

2,0; 0,9)

7,57 (ddq,

8,7; 2,4; 0,3)

8,21

(ddd,

8,2;

2,2; 0,9)

-COOCH3 3,86 (s) 3,87 (s) 3,88 (s) 3,87 (s) 3,88 (s) 3,88 (s) 3,88 (s) 3,88 (s) 3,86 (s) 3,90 (s)

-CH3 - - - - - - - - 2,39 (tt, 0,7; 0,3)

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N1

N2

5

34

R2

R3

R1

O

O

88


C dos 1-fenil-1-H-pirazola-4-carboxilatos de metila (17a-17j) em CDCl3.

δ de C(ppm)


3 142,0 143,2 142,4 142,4 142,0 142,4 143,3 142,1 142,0 142,7

4 125,2 115,9 116,7 116,8 116,8 116,9 116,8 116,3 115,8 116,8

5 131,1 134,7 130,0 130,0 134,2 129,9 130,0 132,0 130,0 129,8

1´ 141,7 136,8 139,8 132,9 128,0 139,5 135,5 139,7 136,7 140,2

2’ 118,7 124,6 120,0 120,4 153,5 107,6 121,2 122,1 119,8 114,2

3’ 139,6 134,8 139,8 129,7 128,8 163,5 116,4 122,0 129,8 148,6

4’ 127,3 130,7 116,7 137,6 116,6 115,5 162,4 130,4 135,9 121,3

5’ 139,6 127,6 130,5 129,7 124,9 130,2 116,4 131,0 129,8 130,6

6’ 118,7 128,7 117,5 120,4 124,4 114,2 121,2 122,0 119,8 124,4

-COOCH3 163,06 e 52,8 163,1 e 51,4 163,1 e 52,1 163,0 e 51,6 163,5 e 51,6 162,9 e 51,6 163,5 e 51,6 162,9 e 51,2 164,0 e 52,8 162,1 e 52,8

4-CH3 - - - - - - - - 21,1 -

89

Tabela 20 19- Deslocamentos químicos de RMN de 1H dos compostos 1-fenil-1-H-pirazola-4-carbohidrazidas (18a-18j) em DMSO-d6.






3 8,13 (d, 0,6) 8,11 (d, 0,6) 8,12 (d, 0,6) 8,13 (d, 0,6) 8,14 (d, 0,6) 8,15 (d, 0,6) 8,11 (d, 0,6) 8,27 (d, 0,6) 8,09 (d, 0,6) 8,20 (d, 0,6)

5 8,88 (d, 0,6) 8,51 (d, 0,6) 8,52 (d, 0,6) 8,90 (d, 0,6) 8,61 (dd, 0,6;

2,3) 8,95 (d, 0,6) 8,86 (d, 0,6) 9,09 (d, 0,6) 8,82 (d, 0,6) 9,12 (d, 0,6)

2´ 7,83 (ddd, 7,6;

2,0; 1,1) - 7,68 (t, 2,1)

7,86 (dd, 9,8;

2,2) -

7,73 (dddd,

10,3; 2,4; 1,9;

0,7)

7,86 (ddd, 9,3;

4,6; 3,4) 8,19 (t, 2,0)

7,69 (ddq,

9,0; 2,4; 0,3)

8,63 (t,

2,2;)

3´

7,50 (dddd,

7,6; 7,4; 2,1;

1,9)

7,69 (ddd, 8,1;

1,4; 0,4) -

7,56 (dd, 9,8;

2,9)

7,47 (ddd, 8,1;

7,5; 1,9) -

7,35 (ddd, 9,3;

8,3; 3,4) -

7,30 (ddq,

9,0; 1,9; 0,7) -

4´ 7,33 (tt, 7,4;

1,1)

7,51 (ddd, 8,1;

7,4; 1,8)

7,51 (ddd, 8,1;

2,1; 1,0) -

7,36 (tdd, 8,1;

2,4; 1,6)

7,18 (dddd,

8,1;

7,9; 2,4; 1,5)

-

7,65 (ddd,

8,1;

2,0; 0,9)

-

8,17 (ddd,

8,2;

2,2; 0,9)

5´ 7,50 (ddd, 8,6;

7,4; 1,9)

7,52 (ddd, 7,9;

7,4; 1,4) 7,52 (t, 8,1)

7,56 (dd, 9,0;

2,9)

7,46 (td, 8,1;

1,9)

7,55 (dddd,

8,1; 7,4; 5,4;

0,7)

7,35 (ddd,

10,3; 9,3; 3,4) 7,58 (t, 8,1)

7,30 (ddq,

8,7; 1,9; 0,7) 7,81 (t, 2,2)

6´

7,83 (dddd,

8,6; 2,1; 2,0;

1,1)

7,61 (ddd, 7,9;

1,8; 0,4)

7,61 (ddd, 8,1;

2,1; 1,0)

7,86 (dd, 9,0;

2,2)

7,80 (ddd, 8,1;

7,9; 1,6)

7,71 (ddd, 7,4;

1,9; 1,5)

7,86 (ddd,

10,3; 4,6; 3,4)

7,99 (ddd,

8,1;

2,0; 0,9)

7,69 (ddq,

8,7; 2,4; 0,3)

8,32 (ddd,

8,2;

2,2; 0,9)

-

CONHNH

2

4,44 (sl) e

9,48 (sl)

4,43 (sl) e

9,50 (sl)

4,43 (sl) e

9,50 (sl)

4,42 (sl) e

9,50 (sl)

4,37 (sl) e

9,54 (sl)

4,42 (sl) e

9,51 (sl)

4,42 (sl) e

9,47 (sl)

4,54 (sl) e

9,61 (sl)

4,40 (sl) e

9,45 (sl)

4,47 (sl) e

9,53 (sl)

-CH3 - - - - - - - - 2,33 (tt, 0,7;

0,3)

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N1

N2

5

34

R2

R3

R1

O

NHNH2

90

Tabela 201- Deslocamentos químicos de RMN de 13

C dos 1-fenil-1-H-pirazola-4-carbohidrazidas (18a-18j) em DMSO-d6.

δ de C(ppm)


3 140,6 140,3 140,8 139,7 140,3 140,4 139,7 140,4 139,7 141,0

4 119,5 117,8 119,4 118,7 118,5 119,8 119,4 119,3 118,7 119,5

5 129,0 132,9 128,8 129,9 132,5 130,6 128,4 129,2 129,5 129,2

1´ 139,1 129,8 140,2 138,4 126,1 141,0 136,2 140,0 137,1 140,2

2’ 119,2 137,4 119,0 120,9 153,2 106,6 121,7 121,6 119,0 113,1

3’ 129,8 130,7 134,7 129,2 125,4 163,3 117,9 134,7 130,2 148,5

4’ 127,6 131,1 126,8 131,8 117,1 113,5 160,7 130,0 137,8 121,6

5’ 129,8 128,5 131,7 129,2 131,0 132,1 117,9 132,0 130,2 131,7

6’ 119,2 128,4 118,8 120,9 116,9 115,6 121,7 117,3 119,0 124,9

-CONH 161,8 161,7 161,7 161,5 162,2 161,2 162,2 163,2 161,3 161,5

4-CH3 - - - - - - - - 20,3 -

91

Tabela 212 - Deslocamentos químicos de RMN de 1H dos compostos 5-(1-fenil-1H-pirazola-4-il)-2,3-dihidro-1,3,4-oxadiazolas-2(3H)-tiona substituídos (19a-9j) em DMSO-d6 .

2'

3'

1'

4'

6'

5'

N1

N2

5

3 4

N

O

NH

S

R1

R3

R2

2''

3''

4''

5''

6''

1''

Compostos (δ of 1H (J, Hz)





3 8,27 (d, 0,6)

8,29 (d, 0,6) 8,30 (d, 0,6) 8,29 (d, 0,6) 8,34 (d, 0,6) 8,31 (d, 0,6) 8,26 (d, 0,6) 8,30 (d, 0,6) 8,21 (d, 0,6) 8,33 (d, 0,6)

5 9,25(d, 0,6)

8,89 (d, 0,6) 9,34 (d, 0,6) 9,29 (d, 0,6)

8,92 (dd, 0,6;

2,1) 9,33 (d, 0,6) 9,23 (d, 0,6) 9,34 (d, 0,6) 9,21 (d, 0,6) 9,50 (d, 0,6)

2’ 7,93 (7,6; 2,0

e 1,1)

- 8,05 (t, 2,1) 7,97 (dd, 9,8

e 2,2) -

7,85 (dddd,

10,3; 2,4; 1,9

(e 0,7)

7,96 (ddd, 9,3;

4,6 e 3,4) 8,19 (t, 2,0)

7,81 (ddq,

9,0; 2,4; 0,3) 8,74 (t, 2,2)

3´ 7,52 (dddd,

7,6; 7,4; 2,1 e

1,9)

7,71 (ddd, 8,1;

1,4 e 0,4) -

7,60 (dd, 9,8 e

2,9)

7,39(ddd, 8,1;

7,5 e 1,9) -

7,38 (ddd, 9,3;

8,3 e 3,4) -

7,32 (ddq, 9,0;

1,9 e 0,7) -

92

Tabela 22 - Deslocamentos químicos de RMN de 1H dos compostos 5-(1-fenil-1H-pirazola-4-il)-2,3-dihidro-1,3,4-oxadiazolas-2(3H)-tiona substituídos (19a-19j) em DMSO-d6

(continuação).

2'

3'

1'

4'

6'

5'

N1

N2

5

3 4

N

O

NH

S

R1

R3

R2

2''

3''

4''

5''

6''

1''

Compostos (δ of 1H (J, Hz)





4´ 7,37 (tt, 7,4 e

1,1)

7,55 (ddd, 8,1;

7,4 e 1,8)

7,43 (ddd, 8,1;

2,1; 1,0) -

7,50 (tdd, 8,1;

2,4 e 1,6)

7,22 (dddd,

8,1; 7,9; 2,4 e

1,5)

- 7,56 (ddd, 8,1;

2,0 e 0,9) -

8,20 (ddd, 8,2; 2,2

e 0,9)

5´ 7,52 (ddd,

8,6; 7,4 e 1,9)

7,56 (ddd, 7,9;

7,4 e 1,4) 7,55 (t, 8,1)

7,60 (dd, 9,0;

2,9)

7,52 (td, 8,1 e

1,9)

7,57 (dddd,

8,1; 7,4, 5,4 e

0,7)

7,38 (ddd,

10,3; 9,3 e 3,4) 7,48 (t, 8,1)

7,32 (ddq, 8,7;

1,9 e 0,7 7,82 (t, 2,2)

6’ 7,93 (dddd,

8,6; 2,1; 2,0 e

1,1)

7,65 (ddd, 7,9;

1,8 e 0,4)

7,92 (ddd, 8,1;

2,1 e 1,0)

7,97 (dd, 9,0 e

2,2)

7,80 (ddd, 8,1;

7,9 e 1,6)

7,85 (ddd, 7,4;

1,9 e 1,5)

7,96 (ddd,

10,3; 4,6 e 3,4)

7,96 (ddd, 8,1;

2,0 e 0,9)

7,81 (ddq, 8,7;

2,4 e 0,3)

8,40 (ddd, 8,2; 2,2

e 0,9)

3’’ 14,62(sl) 14,64(sl) 14,67(sl) 14,67(sl) 14,60(sl) 14,65(sl) 14,62(sl)

4-CH3 - - - - - - - - 2,34 (tt, 0,7 e

0,3)

93


C dos compostos 5-(1-fenil-1H-pirazola-4-il)-2,3-dihidro-1,3,4-oxadiazolas-2(3H)-tiona substituídos (19a-19j) em

DMSO-d6.

δ of C(ppm)

Posição 19a 19b 19c 19d 19e 19f 19g 19h 19i 19h

3 139,3 139,0 139,8 139,4 139,3 140,1 139,2 139,9 139,0 140,0

4 111,1 106,7 108,0 107,8 107,3 107,9 107,8 107,9 107,4 108,3

5 129,7 130,5 128,8 128,6 132,0 128,6 128,5 128,8 128,1 129,3

1´ 138,7 136,8 139,5 137,5 130,1 139,5 135,3 134,8 136,9 139,4

2’ 118,7 132,8 117,5 120,6 155,8 106,6 121,2 121,5 118,9 113,6

3’ 126,9 130,5 134,1 129,5 117,1 161,5 116,3 139,5 130,0 148,6

4’ 125,8 128,4 127,1 131,6 127,0 113,9 161,5 130,0 136,6 121,8

5’ 126,9 128,3 131,3 129,5 125,5 131,6 116,8 131,5 130,0 131,3

6’ 118,7 128,0 118,7 120,6 125,3 114,8 121,2 117,8 118,9 124,8

1’’ 155,8 156,0 155,8 155,9 154,8 155,8 156,0 155,8 156,2 155,7

4’’ 178,9 176,8 176,8 176,8 176,8 176,8 176,8 176,8 17678 176,9

4-CH3 - - - - - - - 20,5

94

4.12. Resultados Farmacológicos e Discussão

A partir das perspectivas relacionadas ao planejamento estrutural dos

compostos alvo deste estudo, o derivado 19f foi selecionado para avaliação da

atividade analgésica e/ou anti-inflamatória, tendo em vista as similaridades das

subunidades estruturais A, B e C com o padrão de substituição do protótipo LQFM-

021 (12) e derivado do fármaco ácido flufenâmico (11), figura 30.

Figura 30 - LQFM-021 (12), derivado do ácido flufenâmico (11), derivado 19f e subunidades

estruturais A, B e C.

NN

F

N

N

NH

N

NN

N

O

NH

S

F

A A

A

B

B

C

C

LQFM-21 (12) Derivado ácido flufenâmico

(10)

Derivado 19f

NH

CF3

N

O

NH

S

4.12.1. Efeito antinociceptivo avaliado no teste de contorções

abdominais induzidas por ácido acético.

O teste de contorções abdominais induzidas por ácido acético é um

modelo de dor visceral amplamente utilizado para a triagem da atividade

antinociceptiva. Este teste apresenta elevada sensibilidade, porém baixa

especificidade a fármacos de diferentes classes terapêuticas, sendo utilizado para

avaliação da atividade analgésica de novos compostos. A administração de ácido

acético intraperitoneal induz atividade inflamatória periférica aguda, por meio da

liberação de uma variedade de mediadores químicos tais como, bradicinina,

95

substância P, prostaglandinas e citocinas que estimulam os nociceptores (RIBEIRO;

VALE; TOMAZZI, 2000; LE BARS; GOZARIU; CADDEN, 2001; ZAKARIA et

al., 2006; MALVAR; FERREIRA; CASTRO, 2014).

Neste modelo observa-se a contração e rotação do abdômen seguida

pela extensão de uma ou das duas patas traseiras dos camundongos. O tratamento

com o composto 19f produziu redução significativa no número das contorções

abdominais induzidas pelo ácido acético, quando comparado ao grupo controle

(veículo de DMSO 10%, 10 mL / kg). O tratamento oral (v.o) com derivado 19f nas

doses 89, 178 ou 356 µmol/kg reduziu o número de contorções abdominais de 99.75

± 3.9 (grupo tratado com veículo) para 75.17 ± 5.8 (24.6 % menor, P < 0.001), 64.5

± 3.8 (35.3 % menor, P < 0.001) ou 53.71 ± 3.2 (46.2 % menor, P < 0.001),

respectivamente. O controle positivo para este teste, indometacina (28 µmol/kg),

reduziu para 42 % (57.88 ± 5.0) o número de contorções (figura 31). Estes resultados

sugerem atividade antinociceptiva para o composto 19f semelhante ao controle

positivo indometacina. Nos testes seguintes foi utilizada apenas a dose intermediária

de 178 µmol/kg com o intuito de reduzir o número de animais, tal como

recomendado pela Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA).

Figura 31 – Efeito do composto 19f (89, 178 e 356 µmol/kg v.o.) no modelo de contorções

abdominais induzidas por ácido acético em camundongos (n = 8). O veículo foi DMSO 10%, 10

mL/kg v.o., e indometacina (28 µmol/kg v.o.) como controle positivo.

Veí

culo

10

mL/k

g

19f -

89

µmol/k

g

19f -

178

µm

ol/kg

19f -

356

µm

ol/kg

Indom

etac

ina

28 µ

mol/k

g

0

50

100

150

******

*** ***

Contorções abdominais

N°

Co

nto

rçõ

es a

bd

om

inais

As barras verticais na figura representam as médias ± erro padrão das médias do número de

contorções abdominais em 30 minutos após administração do ácido acético intraperitoneal (i.p.).*** p

96

≤ 0,001, indicam o nível de significância das diferenças, quando comparado com ao grupo controle

utilizado, de acordo com a análise de variância seguida do pós-teste de Newman-Keuls.

Os dados sugerem que o composto 19f apresenta uma relação dose-

efeito. Podemos inferir por este modelo que o composto analisado apresenta

atividade analgésica e/ou anti-inflamatória com dose efetiva média de 85,07 mg/kg

para 50 % da resposta nociceptiva.

4.12.2. Teste da dor induzida pela formalina

Uma vez que o teste de contorções abdominais apresenta baixa

especificidade na caracterização do efeito analgésico foi utilizado o teste da dor

induzida pela formalina, o qual permite discriminar entre a dor neurogênica e a dor

inflamatória. A primeira fase, conhecida como fase de dor neurogênica, ocorre nos 5

minutos primeiros minutos após a aplicação da formalina e envolve a estimulação

direta dos nociceptores e mediadores nociceptivos como a serotonina, substância P,

histamina e cininas. A segunda fase do teste ocorre entre 15-30 minutos após a

injeção da formalina, devido a estimulação de nociceptores após liberação de

diversos mediadores pró-inflamatórios. Esta fase é também conhecida como fase de

dor inflamatória, podendo ser inibida por anti-inflamatórios como a indometacina. A

redução do tempo de lambida nesta fase pode ser devido à diminuição da biossíntese

de mediadores pró-inflamatórios como as prostaglandinas (DUBUISSON; DENNIS,

1977; HUNSKAAR; HOLE, 1987; SHIBATA et al., 1989; CORREA; CALIXTO,

1993; MUNRON, 2007; SILVA et al., 2015).

Na primeira fase (0-5 minutos) do teste de dor induzida pela formalina

o tratamento dos animais com o composto 19f na dose de 178 µmol/kg não mostrou

efeito significativo, por outro lado, na segunda fase (15-30 minutos) do teste

observou-se redução no tempo de reatividade a dor quando comparado ao grupo

controle (figura 32). Na segunda fase, o grupo veículo (DMSO 10%, 10 mL/kg p.o.)

mostrou um tempo de lambida (s) de 223.6 ± 13.5, sendo que o composto 19f

reduziu esse tempo para 108.8 ± 9.7 (51.4 % menor, P < 0.001). O grupo tratado

com indometacina (dose - 28 µmol/kg, p.o.), controle positivo anti-inflamatório,

apresentou diminuição no tempo de lambida (s) na segunda fase, para 79.25 ± 12.7

(redução de 64.6 %, P< 0.001). O controle positive morfina (17.5 µmol/kg, s.c.),

97

diminuiu o tempo de lambida na primeira fase do teste para 5.37 ± 2.9 (90.3 %

menor, P< 0.001) e na segunda fase para 2.0 ± 1.7 (redução de 99.1 %, P< 0.001).

Figura 32 – Efeito antinociceptivo do composto 19f (178 µmol/kg, v.o.) na primeira e segunda fase

do teste da formalina em camundongos (n = 8). Veículo (10 mL/Kg, DMSO 10% v.o.), Indometacina

(28 µmol/kg, v.o.) e morfina (17.5 µmol/kg, s.c.), no tempo de lambida (s) foram usados como

controles positivo, durante a primeira (0–5 min) e segunda fase (15–30 min).

Veí

culo

19f -

178

µm

ol/kg

Indom

etac

ina

28 µ

mol/k

g

Morf

ina

- 17,

5 µm

ol/kg

0

20

40

60

80

1a Fase

***

Tem

po d

e r

eativid

ade (

s)

Veí

culo

19f -

178

µm

ol/kg

Indom

etac

ina

28 µ

mol/k

g

Morf

ina

17,5

µm

ol/kg

0

50

100

150

200

250

***

***

2a Fase

***Tem

po d

e r

eativi

dade (

s)

As barras verticais representam a média ± erro padrão das médias do tempo de reatividade a dor dos

animais expresso em segundos. **P ≤ 0.01 e ***P ≤ 0.001 indicam o nível de significância, quando

comparados ao grupo controle, de acordo com a análise de variância seguida do pós-teste de Newman-

Keuls.

Os resultados citados acima para o composto 19f demonstram atividade

antinociceptiva na segunda fase do teste, confirmando desta forma ser desprovido de

efeito analgésico central e possivelmente retentor de ação anti-inflamatória.

4.12.3. Teste do edema de pata induzido por carragenina

Para confirmar o efeito anti-inflamatório do composto 19f, observado

no teste anterior, foi realizado o teste do edema de pata induzido por carragenina. A

carragenina é um agente inflamatório que quando injetada na pata dos animais

promove o desenvolvimento do edema, devido a múltiplos mediadores inflamatórios

98

no exsudato da inflamação. Este teste é realizado com a injeção subplantar de

carragenina na pata dos animais, a qual em função de sua ação irritante induz a uma

reação inflamatória (LIEW; MCINNES, 2002; SILVA et al., 2015).

A elevação do volume do edema de pata na primeira hora é devido a

ação de histamina e serotonina na permeabilidade vascular. Na segunda fase, a

inflamação aumenta gradualmente e alcança picos entre três e quatro horas após a

aplicação do agente flogístico, o qual pode ser em função da liberação de

prostaglandinas e cininas (bradicinina) no tecido das patas, acompanhado de

migração leucocitária (VANE, 1971; VINEGAR; TRUAX; SELPH, 1973;

CAMPOS; CALIXTO, 1995).

Neste estudo, o tratamento com o composto 19f reduziu o edema da

pata no teste do edema induzido por carragenina. Na primeira hora, o tratamento via

oral com este composto na dose de 178 µmol/kg reduziu o edema para 117.27 ± 4.3

µL (14.9% de redução, P< 0.001), quando comparado ao grupo controle (diferença

entre as patas de 137.77 ± 3.7 µL). Esse tratamento também reduziu o edema para

110.9 ± 2.5 (18.6% de redução, P< 0.001), na segunda hora, reduziu para 105.55 ±

4.7 (11.4 % de redução, P< 0.001), na terceira hora, e para 94.54 ± 3.4 (17.4% de

reducão, P< 0.001), na quarta hora do teste quando comparado ao grupo controle

positivo (diferença entre as patas de 136,25 ± 6,5; 119,09 ± 3,7 e 114.44 ± 1.8 µL). O

grupo tratado com dexametasona (5 µmol/kg, p.o.), controle positivo anti-

inflamatório, diminuiu o edema da pata induzido por carragenina na 1°, 2°, 3° e 4°

hora após o tratamento (figura 33). Os resultados mostram que o tratamento dos

animais com o composto 19f na dose de 178 µmol/kg reduziu a formação do edema

em todas as horas do teste, sugerindo que este composto possui atividade anti-edema,

similar ao controle positivo dexametasona, e confirma a ação anti-inflamatória

sugerida na segunda fase do teste da formalina.

99

Figura 33 - Efeito do composto 19f (178 µmol/kg, v.o.), dexametasona (5 µmol/kg, v.o.- controle

positivo) e veículo (10 mL/Kg, DMSO 10% v.o.) no teste do edema induzido por carragenina em

camundongos (n =8).

Edema de Pata

0 1 2 3 40

50

100

150 Veículo 10 mL/kg v.o.

19f - 178 µmol/kg v.o.

*** P<0,001

******

*** ******

*** ***

***

Tempo (Horas)

Dif

ere

nça e

ntr

e a

s p

ata

s (

µL

)

O tratamento com 19f reduziu o edema em todas as horas após injeção da carragenina, quando

comparados ao grupo controle. Os valores foram expressos como medias ± erro padrão das médias da

diferença entre as patas.***P≤ 0.001, indicam o nível de significância das diferenças entre os grupos

tratados e o controle, de acordo com analise de variância de duas vias seguido do pós-teste de

Bonferroni.

4.12.4. Teste de pleurisia induzida por carragenina

Tendo em vista a complexidade do processo inflamatório, foi

realizado o teste de pleurisia induzida por carragenina, com o intuito de confirmar o

efeito anti-inflamatório do composto 19f. Neste modelo verificar-se parâmetros

como o extravasamento plasmático e a migração de leucócitos. Estudos demostram

que a administração de carragenina quando injetada intrapleural, promove a liberação

de mediadores pró-inflamatórios, como histamina, bradicinina, substância P,

prostaglandinas e citocinas pró-inflamatórias. Esses mediadores são responsáveis

pelo extravasamento plasmático e contribuem para a formação do exsudato pleural e

migração de leucócitos, sendo que o pico de concentração é atingido 4 horas após a

administração do agente flogístico (SALEH; CALIXTO; MEDEIROS, 1999;

MURAI; NAGAI; FUJISAWA, 2003; LUCHESE et al., 2012; LINO et al., 2012).

Neste teste, o tratamento com o composto 19f na dose de 178 µmol/kg

(p.o.) reduziu a migração celular. O número total leucócitos migrados reduziu para

100

3.385± 0.3 (43.8 % de redução, P< 0.001), comparado com o grupo veículo (6.029 ±

0.5 leucócitos x 106/mL). Como esperado, o controle positivo dexametasona reduziu

a migração celular para 2.375 ± 0.3 (60.6 % de redução, P< 0.001) (figura 34).

Figura 34 - Efeito do composto 19f (178 µmol/kg, p.o.), dexametasona (5 µmol/kg, p.o.- controle

positivo) e veículo (10 mL/Kg, DMSO 10% v.o.) no teste de pleurisia induzido por carragenina em

camundongos (n=8).

Veí

culo

19f -

178

µm

ol/kg

Dex

amet

asona

5 µm

ol/kg

0

2

4

6

8

***

***

N°

Leu

có

cit

os x

10

6/

mL

As barras verticais representam as médias ± erro padrão das médias do número de leucócitos

migrados.***P ≤ 0.001 indica o nível de significância das diferenças entre os grupos tratados e o

controle, de acordo com analise de variância seguido do pós-teste de Newman–Keuls.

Na contagem diferencial de leucócitos foi observado que o tratamento

oral com o composto 19f na dose de 178 µmol/kg reduziu a migração de leucócitos

polimorfonucleares de 3.888 ± 0.2 (grupo veículo) para 1.485± 0.2 (61.8 % de

redução, P< 0.001). O controle positivo dexametasona também reduziu a migração

de leucócitos polimorfonucleares para 0.9826± 0.2 (74.7 % de redução, P< 0.001)

(Figura 35). Logo, esses resultados sugerem que o composto 19f na dose de 178

µmol/kg reduziu a migração celular a partir da redução da migração de células

polimorfonucleares similar ao controle positivo dexametasona.

101

Figura 35- Efeito do composto 19f (178 µmol/kg, v.o.) e dexametasona (5 µmol/kg, v.o.- controle

positivo) na migração celular no exsudato pleural (n=8).

0

1

2

3

4Veículo 10mL/Kg v.o.

***

***

Poli Mono

N°

Leu

có

cit

os x

10

6/

mL

As barras verticais representam as médias ± erro padrão das médias, do número de leucócitos

migrados x 106. ***P ≤ 0.001 indica o nível de significância das diferenças entre os grupos tratados e

o controle, segundo análise de variância seguida do pós-teste Newman–Keuls.

Estes efeitos confirmam a atividade anti-inflamatória do composto

19f, e, portanto, buscou-se investigar a partir deste ponto o mecanismo de ação

responsável pela atividade biológica observada nos testes anteriormente descritos.

O doseamento de citocinas e enzimas relacionadas com o processo

inflamatório tem se tornado uma maneira de avaliar a intensidade do processo

inflamatório, constituindo-se de eficaz ferramenta para elucidar o mecanismo de ação

de determinados fármacos capazes de reduzir os sinais inflamatórios (LINO et al.,

2012). Neste sentido foram realizados os testes de pleurisia com o intuito de

determinar a inibição da atividade da enzima mieloperoxidase (MPO) e os níveis de

TNF-alfa no exsudato pleural.

Tendo em vista que a enzima mieloperoxidase (MPO) tem importante

papel no processo inflamatório, em especial como marcador da ativação de

neutrófilos, foi avaliado o efeito do 19f sobre a atividade da MPO. Uma vez que a

atividade da MPO é diretamente proporcional à concentração de neutrófilos nos

tecidos inflamados (DESMARCHELIER; BARROS; REPETTO, 1977; EDDOUKS;

102

CHATTOPADHYAY; ZEGGWAGH, 2012), por meio deste efeito buscou-se

confirmar a ação de modulação da ativação e quimiotaxia dos leucócitos.

O tratamento com o composto 19f na dose 178 µmol/kg reduziu a

atividade da MPO de 199.4 ± 20.9 mU/ml (grupo veículo) para 143.9 ± 6.7 (27.8 %

de redução, P< 0.01) , enquanto a dexametasona (5 µmol/kg, p.o.) diminuiu a

atividade da MPO para 117.9 ± 13.5 mU/ml (40.9 % de redução, P< 0.01) (Figura

36). Esses resultados confirmam o efeito anti-inflamatório do composto 19f e

sugerem que este efeito pode envolver uma redução e/ou bloqueio na liberação de

mediadores inflamatórios que promovem a quimiotaxia dos leucócitos, tais como as

citocinas (IL-1 e TNF-α) (FRODE; MEDEIROS, 2001; MAZZON; CUZZOCREA,

2007), quimiocinas (KOBAYASHI, 2008; SANZ; KUBES, 2012) e leucotrienos

(LTB4) (AFONSO; JANKA-JUNTTILA; LEE, 2012; SAMUELSSON, 1983).

Figura 36 - Efeito do composto 19f (178 µmol/kg, v.o.), dexametasona (5 µmol/kg, v.o.- controle

positivo) e veículo (10 mL/Kg, DMSO 10% v.o.) na atividade da mieloperoxidase no exsudato

pleural.

As barras verticais representam as médias ± erro padrão das médias da atividade enzimática da MPO

em mU/mL no teste de pleurisia. **P ≤ 0.01 indica o nível de significância, comparado com o grupo

controle, segundo análise de variância seguida do pós-teste Newman–Keuls.

O fator de necrose tumoral-α (TNF-α) é uma potente citocina pró-

inflamatória produzida em grandes quantidades por macrófagos, que contribui com o

desenvolvimento da dor inflamatória, além de mediar a migração de neutrófilos para

tecidos inflamados (VERRI et al., 2007). Após a injeção intrapleural de carragenina,

o tratamento com o composto 19f na dose 178 µmol/kg, reduziu a concentração de

TNF-𝛼 no exsudato pleural para 27.37± 4.8 pg/mL (56 % de redução, P< 0.001),

103

quando comparado ao grupo veículo (62.28 ± 5.6 pg/mL). Como esperado, a

dexametasona (5 µmol/kg, p.o.) também reduziu a concentração de TNF-𝛼 para

14.02 ± 0.4 pg/mL (77.5 % de redução, P< 0.001) (figura 37). Desta forma, o

derivado 19f também foi capaz de reduzir os níveis da citocina TNF-α semelhante ao

controle positivo dexametasona.

Figura 37 - Efeito do composto 19f (178 µmol/kg, v.o.) ou dexametasona (5 µmol/kg, v.o.- controle

positivo) na concentração de TNF-𝛼 no exsudato pleural.

0

20

40

60

80Veículo 10mL/Kg v.o.

Veículo 10mL/Kg v.o.

LQFM-146 50 mg/kg v.o.

LQFM-147 50 mg/kg v.o.

CarrageninaSal

***

***** p 0,01

*** p 0,001Nív

eis

de T

NF

- (

pg

/mL

)

Os exsudados pleurais foram recolhidos 4h após a injeção de carragenina, na pleurisia. As barras

verticais representam as médias ± erro padrão das médias da concentração de TNF-𝛼 em pg/mL no

teste de pleurisia (n=8). ***P ≤ 0.001 indica o nível de significância, comparado com o grupo

controle, segundo análise de variância seguida do pós-teste Newman–Keuls.

As atividades acima relacionadas podem explicar o efeito anti-

inflamatório observado nos diferentes modelos utilizados. Nesse sentido, pode-se

sugerir que a redução nos níveis de TNF-α é responsável pela redução na migração

celular. Tendo em vista que o TNF-α influi na cascata de síntese dos diversos

mediadores pró-inflamatórios, pode-se propor que a atividade anti-inflamatória do

composto 19f esteja relacionada a inibição da síntese desta citocina pró-inflamatória.

Considerando que o TNF-α é um importante componente na cascata

de citocinas que induzem doenças inflamatórias crônicas, como a artrite reumatóide,

e se encontra em concentrações elevadas nas articulações de pacientes. Podemos

inferir que o derivado 19f apresenta perfil promissor e pode corroborar no âmbito do

Derivado 19f – 178 µmol/Kg

Dexametasona - 5 µmol/Kg

104

desenvolvimento de novos protótipos de fármacos com perfil anti-inflamatório.

Ademais, pode representar uma proposta inovadora e de baixo custo quando

comparado aos medicamentos obtidos via tecnologia do DNA recombinante como o

Adalimumabe (Humira®), os quais conforme exposto no escopo deste trabalho

apresentaram maior taxa de faturamento em 2014 (SCOTT; KINGSLEY, 2006).

No entanto, é necessária uma avaliação da interação do composto 19f

com as diferentes enzimas envolvidas no processo inflamatório e a quantificação de

outras citocinas, os quais podem contribuir para uma melhor compreensão dos

mecanismos envolvidos no efeito anti-inflamatório do composto em questão.

105

5. CONCLUSÕES E PERSPECTIVAS

Com base nos resultados obtidos neste estudo, conclui-se que:

O Planejamento dos novos derivados heterocíclicos (19a-19j) a partir do

composto LQFM-021 (12) e do derivado do fármaco ácido flufenâmico (11), foi

validado uma vez que preserva a atividade anti-inflamatória, conforme avaliação

realizada com o composto 19f.

A estratégia sintética empregada para a obtenção dos derivados 5-(1-fenil-1H-

pirazola-4-il)-1,3,4-oxadiazola-2,3-diidro-2(3H)-tiona (19a-19j) mostrou-se

adequada, uma vez que as mesmos foram sintetizados com rendimentos entre 22

à 51% .

Todos os compostos sintetizados foram caracterizados através do emprego das

espectroscopias de ressonância magnética nuclear unidimensional e

bidimensional e no infravermelho. A utilização da RMN propiciou a completa

caracterização dos compostos por meio dos deslocamentos químicos de RMN 1H

e 13

C, e das constantes de acoplamento para os compostos intermediários e

derivados finais (19a-19j).

O composto 19f apresentou atividade antinociceptiva. Uma vez que foi capaz de

reduzir o número de contorções abdominais induzida por ácido acético e no teste

da dor induzida pela formalina, reduzindo o tempo de reatividade à dor na

segunda fase do teste, o que permitiu dissociar a atividade anti-inflamatória

deste composto de uma atividade analgésica central.

A atividade anti-inflamatória do composto 19f foi confirmada nos testes de

edema de pata e pleurisia induzidas por carragenina, de maneira a auxiliar na

compreensão dos resultados encontrados na fase inflamatória do teste da

formalina.

Para caracterizar o mecanismo de ação anti-inflamatório do composto 19f, foi

avaliado a atividade da mieloperoxidase e os níveis de TNF-α presentes no

106

exsudato pleural, sendo que 19f reduziu a atividade da MPO e diminuiu

significativamente a concentração de TNF-α. Logo, diante dos resultados

exibidos por 19f, este apresenta perfil promissor e pode corroborar no âmbito do

desenvolvimento de novos protótipos de fármacos relacionados a doenças

inflamatórias crônicas.

Ademais, desejamos submeter o composto 19f, a testes biológicos posteriores a

fim de avaliar a ação deste composto frente às diferentes enzimas envolvidas no

processo inflamatório e a quantificação de outras citocinas, além disso, verificar

a ação do mesmo diante das proteínas COX (1e 2) e 5-LOX.

Submeter o composto 19f a avaliação frente aos modelos de segurança pré-

clínica in vitro e in vivo.

Espera-se ainda, submeter os demais compostos (19a-19j) sintetizados neste

trabalho a testes biológicos, a fim de se estabelecer relações entre estrutura

química e atividade biológica, de maneira a potencializar a atividade anti-

inflamatória.

107

6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

AFONSO, P. V.; JANKA-JUNTTILA, M.; LEE, Y. J. LTB4 is a signal-relay

molecule during neutrophil chemotaxis. Developmental Cell, v. 22, p. 1079–1091,

2012.

AMIR, M.; KUMAR, H.; JAVED, S. A. Non-carboxylic analogues of naproxen:

design, synthesis, and pharmacological evaluation of some 1,3,4-

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119

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120

7. ANEXO

Anexo 1 - Espectro de RMN 1H do composto 14a destacando as regiões entre δ 7,93 e 6,47, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

6.56.66.76.86.97.07.17.27.37.47.57.67.77.87.98.0 ppm

6.4

64

6.4

68

6.4

70

6.4

73

6.4

74

7.2

64

7.2

85

7.2

87

7.2

88

7.2

89

7.2

91

7.2

95

7.2

99

7.4

32

7.4

36

7.4

38

7.4

41

7.4

53

7.4

55

7.4

57

7.4

59

7.4

61

7.4

70

7.4

73

7.6

76

7.6

79

7.6

83

7.6

85

7.6

88

7.6

91

7.6

94

7.6

96

7.6

97

7.7

00

7.7

02

7.7

04

7.7

06

7.7

08

7.7

29

7.7

30

7.7

32

7.7

33

0.9

7

1.1

7

2.0

4

2.0

1

0.9

1

1.0

0

7.93 ppm

7.9

37.9

37.9

37.9

37.9

3

7.737.74 ppm

7.7

37.7

37.7

37.7

3

7.70 ppm

7.6

97.6

97.6

97.7

07.7

07.7

07.7

1

7.447.467.48 ppm

7.4

37.4

47.4

47.4

47.4

57.4

57.4

67.4

67.4

77.4

7

7.287.307.32 ppm

7.2

67.2

87.2

97.2

97.2

97.2

97.3

07.3

0

6.48 ppm

6.4

66.4

76.4

76.4

76.4

7

8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 ppm

6.4

64

6.4

68

6.4

70

6.4

73

6.4

74

7.2

64

7.2

85

7.2

87

7.2

88

7.2

89

7.2

91

7.2

95

7.2

99

7.4

32

7.4

36

7.4

38

7.4

41

7.4

53

7.4

55

7.4

57

7.4

59

7.4

61

1.8

8

2.3

64.0

94.0

01.7

91.8

7

Current Data ParametersNAME R-LMM01EXPNO 11PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20090515Time 7.35INSTRUM spectPROBHD 5 mm TBI 1H/13PULPROG zg30TD 65536SOLVENT CDCl3NS 16DS 0SWH 12500.000 HzFIDRES 0.190735 HzAQ 2.6214399 secRG 144DW 40.000 usecDE 6.50 usecTE 292.5 KD1 1.00000000 secTD0 1

======== CHANNEL f1 ========NUC1 1HP1 9.90 usecPL1 4.80 dBPL1W 8.48398972 WSFO1 500.1328556 MHz

F2 - Processing parametersSI 32768SF 500.1300119 MHzWDW EMSSB 0LB 0 HzGB 0PC 1.00

121

Anexo 2 - Mapas de correlação de HSQC e HMBC do composto 14a (CDCl3, 125,76MHz).

ppm

6.56.66.76.86.97.07.17.27.37.47.57.67.77.87.98.08.1 ppm

110

115

120

125

130

135

140

ppm

6.26.46.66.87.07.27.47.67.88.08.2 ppm

70

80

90

100

110

120

130

140

150

HSQC HMBC

122

Anexo 3 - Espectro de infravermelho do composto 14a.

123

Anexo 4 - Espectro de RMN 1H do composto 14b destacando as regiões entre δ 8,09 e 6,5, e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

6.66.76.86.97.07.17.27.37.47.57.67.77.87.98.08.18.2 ppm

6.5

16

6.5

19

6.5

20

6.5

24

7.4

13

7.4

19

7.4

26

7.4

30

7.4

32

7.4

35

7.4

42

7.4

48

7.5

23

7.5

34

7.5

36

7.5

47

7.5

49

7.5

62

7.5

65

7.7

42

7.7

43

7.7

45

7.7

46

7.8

23

7.8

26

7.8

40

7.8

42

8.0

90

8.0

91

8.0

95

8.0

96

0.9

4

1.0

8

2.0

0

0.9

8

0.9

6

0.9

3

8.098.10 ppm

8.0

98

.09

8.0

98

.10

7.827.847.86 ppm

7.8

27

.83

7.8

47

.84

7.747.76 ppm

7.7

47

.74

7.7

57

.75

7.547.56 ppm

7.5

2

7.5

37

.54

7.5

57

.55

7.5

67

.57

7.427.447.46 ppm

7.4

17

.42

7.4

37

.43

7.4

37

.43

7.4

47

.45

6.516.526.53 ppm

6.5

26

.52

6.5

26

.52

8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

6.5

16

6.5

19

6.5

20

6.5

24

7.4

13

7.4

19

7.4

26

7.4

30

7.4

32

7.4

35

7.4

42

7.4

48

7.5

23

7.5

34

7.5

36

7.5

47

7.5

49

7.5

62

0.9

4

1.0

82

.00

0.9

80

.96

0.9

3

Current Data ParametersNAME FP43EXPNO 11PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20120403Time 8.27INSTRUM spectPROBHD 5 mm TBI 1H/13PULPROG zg30TD 65536SOLVENT DMSONS 16DS 0SWH 6996.269 HzFIDRES 0.106755 HzAQ 4.6836395 secRG 181DW 71.467 usecDE 6.50 usecTE 300.0 KD1 1.00000000 secTD0 1



124

Anexo 5 - Espectro de RMN 1H do composto 14c destacando as regiões entre δ 7,91 e 6,48, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

6.56.66.76.86.97.07.17.27.37.47.57.67.77.87.98.08.1 ppm

6.4

78

6.4

81

6.4

82

6.4

86

7.2

44

7.2

45

7.2

48

7.2

49

7.2

60

7.2

62

7.2

63

7.2

65

7.3

58

7.3

74

7.3

90

7.5

67

7.5

69

7.5

71

7.5

73

7.5

79

7.5

83

7.5

85

7.5

88

7.5

89

7.7

30

7.7

34

7.7

44

7.7

48

7.7

52

7.9

10

7.9

15

0.9

8

1.2

2

1.0

8

1.0

3

0.9

11

.01

1.0

0

7.917.92 ppm

7.9

1

7.9

1

7.75 ppm

7.7

4

7.7

5

7.7

5

ppm7.7

3

7.7

3

7.58 ppm

7.5

77.5

77.5

77.5

77.5

87.5

97.5

9

7.40 ppm

7.3

6

7.3

7

7.3

9

7.257.26 ppm

7.2

47.2

57.2

57.2

5

7.2

67.2

67.2

67.2

7

6.486.49 ppm

6.4

8

6.4

86.4

8

6.4

9

8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

6.4

78

6.4

81

6.4

82

6.4

86

7.2

44

7.2

45

7.2

48

7.2

49

7.2

60

7.2

62

7.2

63

7.2

65

7.3

58

7.3

74

7.3

90

7.5

67

7.5

69

0.9

8

1.2

21

.08

1.0

30

.91

1.0

11

.00

Current Data ParametersNAME CARLOS08-1EXPNO 1PROCNO 1




125

Anexo 6 - Espectro de RMN 1H do composto 14d destacando as regiões entre δ 8,54 e 6,57, e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

6.66.76.86.97.07.17.27.37.47.57.67.77.87.98.08.18.28.38.48.58.68.7 ppm

6.5

67

6.5

71

6.5

73

6.5

76

7.5

52

7.5

58

7.5

62

7.5

72

7.5

76

7.5

82

7.7

74

7.7

75

7.7

77

7.7

78

7.8

73

7.8

79

7.8

84

7.8

93

7.8

97

7.9

04

8.5

38

8.5

39

8.5

43

8.5

44

0.9

6

2.0

4

0.9

5

2.0

8

1.0

0

8.548.55 ppm

8.5

48.5

48.5

48.5

4

7.887.90 ppm

7.8

7

7.8

87.8

8

7.8

97.9

0

7.9

07.78 ppm

7.7

77.7

77.7

87.7

8

7.567.58 ppm

7.5

5

7.5

67.5

6

7.5

77.5

8

7.5

8 6.576.58 ppm

6.5

76.5

76.5

76.5

8

9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm6

.56

76

.57

16

.57

36

.57

67

.55

27

.55

87

.56

27

.57

27

.57

67

.58

27

.77

47

.77

57

.77

77

.77

87

.87

37

.87

97

.88

47

.89

3

0.9

6

2.0

40

.95

2.0

8

1.0

0




F2 - Processing parametersSI 65536SF 500.1299991 MHzWDW EMSSB 0LB -0.20 HzGB 0PC 70.00

126

Anexo 7 - Espectro de RMN 1H do composto 14e destacando as regiões entre δ 8,0 e 6,48, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

6.56.66.76.86.97.07.17.27.37.47.57.67.77.87.98.08.18.2 ppm

6.4

75

6.4

79

6.4

80

6.4

84

7.1

96

7.2

00

7.2

04

7.2

10

7.2

15

7.2

18

7.2

24

7.2

30

7.2

33

7.2

40

7.2

44

7.2

52

7.2

58

7.2

67

7.2

72

7.7

43

7.7

44

7.7

44

7.7

47

7.7

47

7.8

69

7.8

77

7.8

83

7.8

88

7.8

93

7.8

97

7.9

09

7.9

12

7.9

19

8.0

00

8.0

01

8.0

05

8.0

06

8.0

11

8.0

12

1.0

0

3.4

7

0.9

7

1.1

0

1.0

0

7.887.907.92 ppm

7.8

7

7.8

87.8

87.8

97.8

97.9

0

7.9

17.9

1

7.9

2

7.207.227.247.267.287.30 ppm

7.2

07.2

07.2

07.2

17.2

17.2

27.2

27.2

37.2

37.2

47.2

47.2

57.2

67.2

77.2

7

6.486.49 ppm

6.4

86.4

86.4

86.4

8

8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

6.4

75

6.4

79

6.4

80

6.4

84

7.1

96

7.2

00

7.2

04

7.2

10

7.2

15

7.2

18

7.2

24

7.2

30

7.2

33

7.2

40

7.2

44

7.2

52

7.2

58

7.2

67

7.2

72

1.0

0

3.4

7

0.9

71

.10

1.0

0


F2 - Acquisition ParametersDate_ 20120323Time 14.33INSTRUM spectPROBHD 5 mm TBI 1H/13PULPROG zg30TD 65536SOLVENT CDCl3NS 16DS 0SWH 6996.269 HzFIDRES 0.106755 HzAQ 4.6836395 secRG 71.8DW 71.467 usecDE 6.50 usecTE 291.9 KD1 1.00000000 secTD0 1



8.01 ppm

8.0

08.0

08.0

18.0

18.0

1

7.75 ppm

7.7

47.7

47.7

57.7

5

127

-

Anexo 8 - Espectro de RMN 1H do composto 14f destacando as regiões entre δ 7,92 e 6,48, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

6.56.66.76.86.97.07.17.27.37.47.57.67.77.87.98.0 ppm

6.4

77

6.4

81

6.4

82

6.4

86

6.9

63

6.9

65

6.9

68

6.9

69

6.9

79

6.9

81

6.9

84

6.9

86

6.9

95

6.9

97

7.0

00

7.0

03

7.3

82

7.3

90

7.3

94

7.3

99

7.4

04

7.4

10

7.4

15

7.4

27

7.4

57

7.4

59

7.4

61

7.4

63

7.4

65

7.4

70

7.4

74

7.4

77

7.4

78

7.4

86

7.4

91

7.4

95

7.7

29

7.7

32

7.9

18

7.9

23

1.0

2

1.1

5

1.1

8

2.3

0

0.9

9

1.0

0

7.927.93 ppm

7.9

2

7.9

2

7.73 ppm

7.7

37.7

3

7.487.50 ppm

7.4

67.4

67.4

67.4

67.4

77.4

77.4

77.4

87.4

87.4

97.4

9

7.40 ppm

7.3

87.3

97.3

97.4

07.4

17.4

27.4

3

6.987.00 ppm

6.9

66.9

76.9

86.9

86.9

86.9

97.0

07.0

07.0

0

6.48 ppm

6.4

86.4

86.4

86.4

9

8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 ppm

6.4

77

6.4

81

6.4

82

6.4

86

6.9

63

6.9

65

6.9

68

6.9

69

6.9

79

6.9

81

6.9

84

6.9

86

6.9

95

6.9

97

7.0

00

7.0

03

7.3

82

7.3

90

7.3

94

7.3

99

7.4

04

1.0

2

1.1

5

1.1

82

.30

0.9

91

.00

Current Data ParametersNAME CARLOS05EXPNO 1PROCNO 1




128

Anexo 9 - Espectro de RMN 1H do composto 14g destacando as regiões entre δ 7,85 e 6,45, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

6.56.66.76.86.97.07.17.27.37.47.57.67.77.87.9 ppm

6.4

52

6.4

55

6.4

57

6.4

60

7.1

11

7.1

17

7.1

22

7.1

27

7.1

36

7.1

43

7.1

48

7.1

52

7.1

59

7.6

22

7.6

29

7.6

33

7.6

38

7.6

43

7.6

47

7.6

52

7.6

56

7.6

63

7.7

08

7.7

12

7.7

12

7.8

47

7.8

48

7.8

52

7.8

53

0.9

6

2.1

3

2.1

2

0.9

6

1.0

0

7.85 ppm

7.8

57.8

57.8

57.8

5

7.717.72 ppm

7.7

17.7

17.7

17.7

1

7.627.647.66 ppm

7.6

27.6

37.6

37.6

47.6

47.6

57.6

57.6

67.6

6

7.147.16 ppm

7.1

1

7.1

27.1

27.1

3

7.1

4

7.1

47.1

57.1

5

7.1

6

6.466.47 ppm

6.4

56.4

66.4

66.4

6

8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm

6.4

52

6.4

55

6.4

57

6.4

60

7.1

11

7.1

17

7.1

22

7.1

27

7.1

36

7.1

43

7.1

48

7.1

52

7.1

59

7.6

22

7.6

29

7.6

33

7.6

38

0.9

6

2.1

3

2.1

20

.96

1.0

0


F2 - Acquisition ParametersDate_ 20120411Time 10.48INSTRUM spectPROBHD 5 mm TBI 1H/13PULPROG zg30TD 65536SOLVENT DMSONS 16DS 0SWH 6944.444 HzFIDRES 0.105964 HzAQ 4.7185922 secRG 71.8DW 72.000 usecDE 6.50 usecTE 300.0 KD1 1.00000000 secTD0 1



129

Anexo 10 - Espectro de RMN 1H do composto 14h destacando as regiões entre δ 7,91 e 6,47, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

6.56.66.76.86.97.07.17.27.37.47.57.67.77.87.98.0 ppm

6.4

71

6.4

75

6.4

76

6.4

80

7.2

92

7.3

08

7.3

24

7.3

95

7.3

97

7.3

99

7.4

01

7.4

11

7.4

13

7.4

15

7.4

17

7.6

13

7.6

15

7.6

17

7.6

19

7.6

29

7.6

31

7.6

33

7.6

36

7.7

22

7.7

23

7.7

25

7.7

27

7.9

00

7.9

01

7.9

05

7.9

06

7.9

10

1.0

1

1.2

0

1.1

3

1.1

1

0.9

8

2.0

0

7.91 ppm

7.9

07.9

0

7.9

17.9

1

7.9

1

7.617.627.637.64 ppm

7.6

17.6

17.6

27.6

2

7.6

37.6

37.6

37.6

4

7.407.417.42 ppm

7.4

07.4

07.4

07.4

0

7.4

17.4

17.4

17.4

2

7.30 ppm

7.2

9

7.3

1

7.3

2

6.4756.480 ppm

6.4

7

6.4

76.4

8

6.4

8

8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm

6.4

71

6.4

75

6.4

76

6.4

80

7.2

92

7.3

08

7.3

24

7.3

95

7.3

97

7.3

99

7.4

01

7.4

11

7.4

13

7.4

15

7.4

17

7.6

13

7.6

15

7.6

17

7.6

19

7.6

29

1.0

1

1.2

01

.13

1.1

10

.98

2.0

0





7.73 ppm

7.7

27.7

27.7

37.7

3

130

Anexo 11 - Espectro de RMN 1H do composto 14i destacando as regiões entre δ 7,87 e 2,37, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

2.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.0 ppm

2.3

70

2.3

71

2.3

72

6.4

27

6.4

34

6.4

37

7.2

19

7.2

20

7.2

22

7.2

24

7.2

25

7.2

26

7.2

28

7.2

28

7.2

29

7.2

31

7.2

32

7.2

35

7.2

37

7.2

38

7.2

40

7.2

40

7.2

41

7.2

42

7.2

44

7.2

45

7.2

45

7.2

47

7.2

49

7.5

45

7.5

51

7.5

55

7.5

64

7.5

68

7.5

72

7.6

95

7.6

97

7.6

99

7.7

00

7.8

64

7.8

65

7.8

69

3.2

5

1.0

8

2.2

4

2.3

71

.00

1.0

7

7.87 ppm

7.8

67.8

7

7.8

7

7.567.57 ppm

7.5

5

7.5

5

7.5

5

7.5

6

7.5

7

7.5

7

7.237.247.25 ppm

7.2

27.2

27.2

37.2

37.2

37.2

37.2

37.2

47.2

47.2

47.2

47.2

47.2

47.2

57.2

57.2

5

6.436.44 ppm

6.4

3

6.4

3

6.4

4

ppm

2.3

72.3

72.3

7

7.70 ppm

7.7

07.7

07.7

07.7

0

12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 ppm

2.3

70

2.3

71

2.3

72

6.4

27

6.4

34

6.4

37

7.2

19

7.2

20

7.2

22

7.2

24

7.2

25

7.2

26

7.2

28

7.2

28

7.2

29

7.2

31

7.2

32

7.2

35

7.2

37

7.2

38

7.2

40

7.2

40

7.2

41

7.2

42

7.2

44

7.2

45

7.2

45

7.2

47

7.2

49

7.5

45

7.5

51

7.5

55

7.5

64

7.5

68

7.5

72

7.6

95

7.6

97

7.6

99

7.7

00

3.2

5

1.0

8

2.2

42

.37

1.0

01

.07

Current Data ParametersNAME R-CARLOS18EXPNO 12PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20100312Time 11.45INSTRUM spectPROBHD 5 mm TBI 1H/13PULPROG zg30TD 65536SOLVENT CDCl3NS 16DS 2SWH 7500.000 HzFIDRES 0.114441 HzAQ 4.3690667 secRG 90.5DW 66.667 usecDE 6.50 usecTE 301.2 KD1 1.00000000 secTD0 1



131

Anexo 12 - Espectro de RMN 1H do composto 14j destacando as regiões entre δ 8,56 e 6,54, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

6.56.66.76.86.97.07.17.27.37.47.57.67.77.87.98.08.18.28.38.48.58.68.7 ppm

6.5

44

6.5

48

6.5

49

6.5

53

7.6

27

7.6

43

7.6

59

7.7

79

7.7

83

8.0

26

8.0

27

8.0

31

8.0

32

8.0

87

8.0

89

8.0

91

8.0

93

8.1

03

8.1

05

8.1

08

8.1

10

8.1

24

8.1

26

8.1

28

8.1

30

8.1

40

8.1

42

8.1

45

8.1

47

8.5

60

8.5

64

8.5

68

0.9

7

1.1

3

0.9

6

0.9

8

2.2

3

1.0

0

8.56 ppm

8.5

68.5

68.5

7

8.14 ppm

8.1

28.1

38.1

38.1

38.1

48.1

48.1

48.1

5

8.10 ppm

8.0

98.0

98.0

98.0

98.1

08.1

18.1

18.1

1

8.03 ppm8.0

38.0

3

8.0

38.0

3

7.78 ppm

7.7

87.7

87.7

87.7

8

7.65 ppm

7.6

3

7.6

4

7.6

6

6.55 ppm

6.5

46.5

56.5

56.5

5

9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm

6.5

44

6.5

48

6.5

49

6.5

53

7.6

27

7.6

43

7.6

59

7.7

79

7.7

83

8.0

26

8.0

27

8.0

31

8.0

32

8.0

87

8.0

89

8.0

91

8.0

93

8.1

03

8.1

05

0.9

7

1.1

30

.96

0.9

82

.23

1.0

0





132

Anexo 13 - Espectro de RMN 1H do composto 15a destacando as regiões entre δ 9,93 e 7,42, e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

7.47.67.88.08.28.48.68.89.09.29.49.69.810.0 ppm

7.4

36

7.4

39

7.4

41

7.5

47

7.5

52

7.5

55

7.5

67

7.5

69

7.5

80

7.5

83

7.5

88

7.9

23

7.9

25

7.9

27

7.9

28

7.9

36

7.9

40

7.9

42

7.9

45

8.2

97

8.2

98

9.2

64

9.2

65

9.9

34

1.1

4

2.3

1

2.1

8

0.9

4

1.0

0

1.0

0

9.94 ppm

9.9

3

7.927.947.96 ppm

7.9

27.9

27.9

37.9

37.9

47.9

47.9

47.9

4

7.567.58 ppm

7.5

57.5

57.5

6

7.5

77.5

7

7.5

87.5

87.5

9

7.427.437.44 ppm

7.4

17.4

17.4

1

7.4

27.4

27.4

3

7.4

47.4

47.4

4

11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 ppm

7.4

07

7.4

09

7.4

11

7.4

21

7.4

24

7.4

27

7.4

36

7.4

39

7.4

41

7.5

47

7.5

52

7.5

55

7.5

67

7.5

69

7.5

80

7.5

83

7.5

88

7.9

23

7.9

25

7.9

27

7.9

28

7.9

36

7.9

40

7.9

42

7.9

45

8.2

97

8.2

98

9.2

64

9.2

65

1.1

42

.31

2.1

8

0.9

4

1.0

0

1.0

0





133

Anexo 14 - Mapas de correlação HSQC e HMBC do composto 15a (DMSO, 125,76MHz).

ppm

7.67.88.08.28.48.68.89.09.29.4 ppm

115

120

125

130

135

140

145

ppm

7.07.58.08.59.09.510.0 ppm

110

120

130

140

150

160

170

180

190

HSQC HMBC

134


135

Anexo 16 - Espectro de RMN 1H do composto 15b destacando as regiões entre δ 9,99 e 7,36, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

7.67.88.08.28.48.68.89.09.29.49.69.810.010.2 ppm

7.5

39

7.5

39

7.5

42

7.5

43

7.5

55

7.5

55

7.5

58

7.5

59

7.7

37

7.7

38

7.7

40

7.7

40

7.7

53

7.7

54

7.7

56

7.7

57

8.1

91

8.1

92

8.3

45

8.3

46

9.9

90

1.0

4

1.0

5

0.9

9

1.0

1

0.9

1

0.9

4

0.9

0

9.990 ppm

9.9

9

8.35 ppm

8.3

58.3

5

7.747.76 ppm7.7

47.7

47.7

47.7

4

7.7

57.7

57.7

67.7

6

7.547.56 ppm

7.5

47.5

47.5

47.5

47.5

57.5

57.5

67.5

6

11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm

7.3

47

7.3

51

7.3

62

7.3

63

7.3

65

7.3

67

7.3

78

7.3

82

7.4

59

7.4

62

7.4

74

7.4

75

7.4

77

7.4

78

7.4

90

7.4

93

7.5

39

7.5

39

7.5

42

7.5

43

7.5

55

7.5

55

7.5

58

7.5

59

7.7

37

7.7

38

7.7

40

7.7

40

7.7

53

7.7

54

7.7

56

7.7

57

8.1

91

1.0

41

.05

0.9

91

.01

0.9

10

.94

0.9

0

Current Data ParametersNAME R-FP44EXPNO 1PROCNO 1




8.19 ppm

8.1

98.1

9

7.477.487.49 ppm

7.4

67

.46

7.4

77

.47

7.4

87

.48

7.4

97

.49

7.367.377.38 ppm

7.3

57.3

5

7.3

67.3

67.3

77.3

7

7.3

87.3

8

136


7.67.88.08.28.48.68.89.09.29.49.69.810.0 ppm

7.4

44

7.4

60

7.6

02

7.6

04

7.6

06

7.6

08

7.6

18

7.6

20

7.6

22

7.6

24

7.7

89

7.7

93

7.7

97

8.4

50

8.4

51

9.9

75

1.1

8

1.2

3

1.1

9

1.0

8

1.0

3

1.0

0

1.0

0

9.98 ppm

9.9

8

7.80 ppm

7.7

9

7.7

9

7.8

0

7.62 ppm

7.6

07.6

07.6

17.6

17.6

27.6

27.6

27.6

27.447.46 ppm

7.4

3

7.4

4

7.4

6

7.367.377.38 ppm

7.3

67.3

67.3

67.3

6

7.3

77.3

87.3

87.3

8

11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm

7.3

58

7.3

60

7.3

62

7.3

64

7.3

74

7.3

76

7.3

78

7.3

80

7.4

28

7.4

44

7.4

60

7.6

02

7.6

04

7.6

06

7.6

08

7.6

18

7.6

20

7.6

22

7.6

24

7.7

89

7.7

93

7.7

97

8.4

50

8.4

51

9.9

75

1.1

81

.23

1.1

91

.08

1.0

31

.00

1.0

0





8.45 ppm

8.4

58.4

5

8.18 ppm

8.1

88.1

8

137

Anexo 18 - Espectro de RMN 1H do composto 15d destacando as regiões entre δ 9,97 e 7,62, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

7.67.88.08.28.48.68.89.09.29.49.69.810.0 ppm

7.4

83

7.4

93

7.4

97

7.5

03

7.6

66

7.6

72

7.6

76

7.6

86

7.6

90

7.6

96

8.1

75

8.1

76

8.4

23

8.4

24

9.9

76

2.2

7

2.2

7

0.9

3

1.0

1

1.0

0

9.975 ppm

9.9

8

8.428.43 ppm

8.4

28.4

2

8.18 ppm

8.1

78.1

8

7.677.687.697.70 ppm

7.6

7

7.6

7

7.6

8

7.6

9

7.6

9

7.7

0

7.487.497.507.51 ppm

7.4

7

7.4

8

7.4

8

7.4

9

7.5

0

7.5

0

10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm

7.4

73

7.4

79

7.4

83

7.4

93

7.4

97

7.5

03

7.6

66

7.6

72

7.6

76

7.6

86

7.6

90

7.6

96

8.1

75

8.1

76

8.4

23

8.4

24

9.9

76

2.2

72.2

7

0.9

3

1.0

1

1.0

0

Current Data ParametersNAME R-KR2EXPNO 1PROCNO 1




138


7.58.08.59.09.510.0 ppm

7.3

06

7.3

21

7.3

24

7.3

56

7.3

59

7.3

65

7.3

69

7.3

70

7.3

74

7.3

84

7.3

90

7.3

96

7.3

99

7.9

13

7.9

16

7.9

29

7.9

32

7.9

45

7.9

48

8.1

87

8.1

88

8.5

27

8.5

31

9.9

85

2.0

0

0.9

4

0.9

3

0.8

9

0.9

4

0.9

2

10.00 ppm

9.9

8

8.54 ppm

8.5

38.5

3

7.95 ppm

7.9

17.9

27.9

37.9

37.9

47.9

5

7.367.387.40 ppm

7.3

67.3

67.3

67.3

77.3

77.3

7

7.3

8

7.3

9

7.4

07.4

0

7.287.307.32 ppm

7.2

67.2

7

7.2

87.2

87.2

9

7.3

1

7.3

27.3

2

11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm

7.2

65

7.2

69

7.2

81

7.2

84

7.2

90

7.3

06

7.3

21

7.3

24

7.3

56

7.3

59

7.3

65

7.3

69

7.3

70

7.3

74

7.3

84

7.3

90

7.3

96

7.3

99

7.9

13

7.9

16

7.9

29

7.9

32

7.9

45

7.9

48

8.1

87

8.1

88

8.5

27

8.5

31

9.9

85

2.0

00

.94

0.9

30

.89

0.9

4

0.9

2





139


7.07.58.08.59.09.510.0 ppm

7.1

11

7.1

14

7.1

16

7.1

19

7.4

55

7.4

58

7.4

67

7.4

68

7.4

72

7.4

83

7.4

86

7.4

88

7.4

99

7.5

03

7.5

06

7.5

14

7.5

17

7.5

19

7.5

21

7.5

34

7.5

38

7.5

42

7.5

42

8.1

75

8.1

76

8.4

65

8.4

66

9.9

78

0.4

9

1.5

1

0.4

6

0.4

7

0.4

8

9.980 ppm

9.9

8

8.465 ppm

8.4

68.4

7

8.175 ppm

8.1

78.1

8

7.467.487.507.527.547.56 ppm

7.4

67.4

77.4

77.4

77.4

87.4

97.4

97.5

07.5

07.5

17.5

17.5

27.5

27.5

27.5

37.5

47.5

47.5

4

7.087.097.107.117.12 ppm

7.0

87.0

87.0

87.0

9

7.1

0

7.1

07.1

07.1

0

7.1

1

7.1

17.1

2

7.1

2

-112 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm

7.0

80

7.0

82

7.0

84

7.0

87

7.0

96

7.0

99

7.1

01

7.1

03

7.1

11

7.1

14

7.1

16

7.1

19

7.4

55

7.4

58

7.4

67

7.4

68

7.4

72

7.4

83

7.4

86

7.4

88

7.4

99

7.5

03

7.5

06

7.5

14

7.5

17

7.5

19

7.5

21

7.5

34

7.5

38

7.5

42

7.5

42

8.1

75

8.1

76

8.4

65

8.4

66

9.9

78

0.9

7

3.0

0

0.8

90.9

3

0.9

4

Current Data ParametersNAME CARLOS10EXPNO 2PROCNO 1




140


7.58.08.59.09.510.0 ppm

7.2

11

7.2

16

7.2

20

7.2

24

7.2

25

7.2

32

7.6

77

7.6

80

7.6

87

7.6

89

7.6

92

7.6

96

7.7

01

7.7

06

7.7

10

7.7

13

7.7

15

7.7

22

8.1

65

8.1

66

8.3

98

8.3

99

9.9

70

2.3

2

2.3

2

0.9

7

1.0

6

1.0

0

ppm

9.9

7

8.400 ppm

8.4

08.4

0

ppm

8.1

65

8.1

66

0.9

7

7.697.707.717.727.73 ppm

7.6

8

7.6

8

7.6

97.6

97.6

97.7

0

7.7

0

7.7

17.7

17.7

17.7

1

7.7

2

7.197.207.217.227.237.24 ppm

7.1

87.1

97.1

97.2

07.2

07.2

07.2

17.2

17.2

17.2

17.2

17.2

27.2

27.2

27.2

27.2

3

11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 ppm

7.1

84

7.1

91

7.1

91

7.1

95

7.2

00

7.2

04

7.2

07

7.2

07

7.2

08

7.2

09

7.2

11

7.2

16

7.2

20

7.2

24

7.2

25

7.2

32

7.6

77

7.6

80

7.6

87

7.6

89

7.6

92

7.6

96

7.7

01

7.7

06

7.7

10

7.7

13

7.7

15

7.7

22

8.1

65

8.1

66

8.3

98

2.3

2

2.3

2

0.9

71

.06

1.0

0





141

Anexo 22 - Espectro de RMN 1H do composto 15h destacando as regiões entre δ 9,97 e 7,38, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

7.67.88.08.28.48.68.89.09.29.49.69.810.010.2 ppm

7.5

16

7.5

26

7.5

28

7.5

30

7.5

32

7.6

46

7.6

48

7.6

51

7.6

53

7.6

63

7.6

65

7.6

67

7.6

69

7.9

42

7.9

47

7.9

51

8.1

69

8.1

70

8.4

35

8.4

36

9.9

73

1.1

4

1.0

9

1.1

1

1.0

5

1.0

0

1.0

0

1.0

0

9.98 ppm

9.9

7

7.95 ppm

7.9

4

7.9

5

7.9

5

7.66 ppm

7.6

57.6

57.6

57.6

57.6

67.6

67.6

77.6

7

7.517.527.53 ppm

7.5

17.5

17.5

17.5

2

7.5

37.5

37.5

37.5

3

7.387.40 ppm

7.3

6

7.3

8

7.3

9

11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 ppm

7.3

59

7.3

76

7.3

92

7.5

10

7.5

12

7.5

14

7.5

16

7.5

26

7.5

28

7.5

30

7.5

32

7.6

46

7.6

48

7.6

51

7.6

53

7.6

63

7.6

65

7.6

67

7.6

69

7.9

42

7.9

47

7.9

51

8.1

69

8.1

70

8.4

35

8.4

36

9.9

73

1.1

41

.09

1.1

11

.05

1.0

01

.00

1.0

0





8.435 ppm

8.4

38

.44

8.17 ppm

8.1

78

.17

142


2.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.5 ppm

2.4

10

2.4

11

2.4

11

2.4

12

2.4

13

7.2

81

7.2

82

7.2

82

7.2

83

7.2

84

7.2

84

7.2

85

7.2

85

7.2

86

7.2

88

7.2

88

7.2

89

7.2

91

7.2

92

7.2

98

7.3

00

7.3

01

7.3

03

7.3

04

7.3

05

7.3

07

7.3

08

7.3

09

7.3

10

7.5

77

7.5

78

7.5

82

7.5

83

7.5

83

7.5

84

7.5

86

7.5

87

7.5

95

7.5

96

7.5

98

7.5

99

7.5

99

7.6

00

7.6

04

7.6

05

8.1

48

8.1

49

8.3

96

3.2

3

2.3

3

2.3

4

0.9

8

0.9

5

1.0

0

9.96 ppm

9.9

6

8.40 ppm

8.4

08.4

0

-112 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm

2.4

09

2.4

09

2.4

10

2.4

11

2.4

11

2.4

12

2.4

13

7.2

83

7.2

85

7.2

85

7.2

86

7.2

88

7.2

88

7.2

89

7.2

91

7.2

92

7.3

00

7.3

01

7.3

03

7.3

04

7.3

05

7.3

07

7.3

09

7.3

10

7.5

77

7.5

78

7.5

82

7.5

83

7.5

83

7.5

84

7.5

86

7.5

87

7.5

95

7.5

96

7.5

98

7.5

99

7.5

99

7.6

00

7.6

04

7.6

05

8.1

48

8.1

49

8.3

96

8.3

97

9.9

56

3.2

3

2.3

32

.34

0.9

80

.95

1.0

0





8.15 ppm

8.1

58.1

5

7.597.60 ppm

7.5

87.5

87.5

87.5

87.5

87.5

87.5

97.5

97.6

07.6

07.6

07.6

07.6

07.6

07.6

0

7.297.307.31 ppm

7.2

97

.29

7.2

97

.29

7.2

97

.29

7.2

97

.30

7.3

07

.30

7.3

07

.31

7.3

1

2.4102.415 ppm

2.4

12.4

12.4

12.4

12.4

12.4

12.4

1

143

Anexo 24 - Espectro de RMN 1H do composto 15j destacando as regiões entre δ 9,94 e 7,84, e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

7.88.08.28.48.68.89.09.29.49.69.810.0 ppm

7.8

27

7.8

43

7.8

60

8.2

19

8.2

20

8.2

23

8.2

25

8.2

35

8.2

37

8.2

40

8.2

41

8.3

43

8.3

44

8.3

73

8.3

75

8.3

78

8.3

79

8.3

90

8.3

91

8.3

94

8.3

96

8.7

07

8.7

12

8.7

16

9.4

57

9.4

58

9.9

36

1.1

5

1.1

1

1.0

71

.10

1.0

5

1.0

0

1.0

0

9.94 ppm

9.9

4

8.718.72 ppm8.7

1

8.7

1

8.7

2

8.388.39 ppm

8.3

78.3

78.3

88.3

8

8.3

98.3

98.3

98.4

0

8.228.238.24 ppm

8.2

28.2

28.2

28.2

2

8.2

48.2

48.2

48.2

4

7.847.86 ppm

7.8

3

7.8

4

7.8

6

12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm

7.8

27

7.8

43

7.8

60

8.2

19

8.2

20

8.2

23

8.2

25

8.2

35

8.2

37

8.2

40

8.2

41

8.3

43

8.3

44

8.3

73

8.3

75

8.3

78

8.3

79

8.3

90

8.3

91

8.3

94

8.3

96

8.7

07

8.7

12

8.7

16

9.4

57

9.4

58

1.1

51

.11

1.0

71

.10

1.0

5

1.0

0

1.0

0





9.46 ppm

9.4

69.4

6

8.345 ppm

8.3

48

.34

144


7.67.88.08.28.48.68.89.09.29.49.69.810.0 ppm

7.4

83

7.4

93

7.4

97

7.5

03

7.6

66

7.6

72

7.6

76

7.6

86

7.6

90

7.6

96

8.1

75

8.1

76

8.4

23

8.4

24

9.9

76

2.2

7

2.2

7

0.9

3

1.0

1

1.0

0

9.975 ppm

9.9

8

8.428.43 ppm

8.4

28.4

2

8.18 ppm

8.1

78.1

8

7.677.687.697.70 ppm

7.6

7

7.6

7

7.6

8

7.6

9

7.6

9

7.7

0

7.487.497.507.51 ppm

7.4

7

7.4

8

7.4

8

7.4

9

7.5

0

7.5

0

10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 ppm

7.4

73

7.4

79

7.4

83

7.4

93

7.4

97

7.5

03

7.6

66

7.6

72

7.6

76

7.6

86

7.6

90

7.6

96

8.1

75

8.1

76

8.4

23

8.4

24

9.9

76

2.2

72.2

7

0.9

3

1.0

1

1.0

0

Current Data ParametersNAME R-KR2EXPNO 1PROCNO 1




145

Anexo 26 - Mapas de correlação Espectros de HSQC e HMBC do composto 16d (CDCl3, 125,76MHz).

ppm

7.57.67.77.87.98.08.18.28.38.48.58.6 ppm

120

125

130

135

140

145

ppm

7.58.08.59.09.510.0 ppm

120

130

140

150

160

170

180

HSQC HMBC

146

Anexo 27 - Espectro de Infravermelho do intermediário 16d.

147


5.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.512.012.513.013.5 ppm

7.34

7.34

7.34

7.35

7.35

7.36

7.37

7.37

7.37

7.49

7.49

7.49

7.50

7.50

7.50

7.51

7.52

7.52

7.52

7.90

7.90

7.90

7.90

7.91

7.91

7.92

8.08

8.08

9.00

9.00

12.61

0.97

1.93

1.92

0.94

1.00

0.73

Current Data ParametersNAME Aman_AHBA1-1EXPNO 1PROCNO 1


======== CHANNEL f1 ========SFO1 500.1330008 MHzNUC1 1HP1 9.90 usecPLW1 8.48398972 W


9.01 ppm

9.00

9.00

7.507.52 ppm

7.49

7.49

7.49

7.50

7.50

7.50

7.51

7.52

7.52

7.52

8.08 ppm

8.08

8.08

7.907.91 ppm

7.90

7.90

7.90

7.90

7.91

7.91

7.92

7.347.36 ppm

7.34

7.34

7.34

7.35

7.35

7.36

7.37

7.37

7.37

148

Anexo 29 - Espectro de RMN 1H do composto 16b, com os sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

67891011121314 ppm

2.76

1.22

1.09

0.93

1.00

1.04

Current Data ParametersNAME Orto_cloro_ácidoEXPNO 1PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20141017Time 3.32INSTRUM spectPROBHD 5 mm TBI 1H/13PULPROG zgTD 65536SOLVENT DMSONS 16DS 0SWH 10000.000 HzFIDRES 0.152588 HzAQ 3.2767999 secRG 36DW 50.000 usecDE 6.50 usecTE 298.1 KD1 1.00000000 secTD0 1



7.607.627.647.667.687.707.727.74 ppm

7.527.547.56 ppm

8.618.628.63 ppm

8.08 ppm

149

Anexo 30 - Espectro de RMN 1H do composto 16c destacando as regiões entre δ 7,41 e 9,11 e sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

NN

1

2

3 4

5

1'

2'

3'

4'

5'

6'

O

OH

Cl

6

7

150

Anexo 31 - Espectro de RMN 1H do composto 16e, com os sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

NN

1

2

3 4

5

1'2'

3'

4'

5'

6'

O

OH6

F

7

151

Anexo 32 - Espectro de RMN 1H do composto 16f, com os sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

NN

1

2

3 4

5

1'

2'

3'

4'

5'

6'

O

OH

F

6

7

152

Anexo 33 - Espectro de RMN 1H do composto 16g, com os sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

NN

F

1

2

3 4

5

1'

2'

3'

4'

5'

6'

O

OH6

7

153

Anexo 34 - Espectro de RMN 1H do composto 16h, com os sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

NN

1

2

3 4

5

1'

2'

3'

4'

5'

6'

O

H6

Br

154

Anexo 35 - Espectro de RMN 1H do composto 16i, com os sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

3.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.0 ppm

3.09

1.99

2.00

0.82

Current Data ParametersNAME Para_toluil_ácidoEXPNO 1PROCNO 1




8.038.048.058.068.07 ppm7.787.80 ppm

7.307.317.32 ppm

155

Anexo 36 - Espectro de RMN 1H do composto 16j destacando as regiões entre δ 7,77 e 9,23 e sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

7.58.08.59.09.510.010.511.011.512.012.513.013.5 ppm

7.77

7.79

7.80

8.14

8.14

8.16

8.16

8.17

8.18

8.18

8.18

8.37

8.37

8.39

8.39

8.69

8.69

9.23

9.23

12.70

1.03

0.96

1.00

0.99

1.02

1.00

0.68

Current Data ParametersNAME r-ahba8-1EXPNO 1PROCNO 1




9.23 ppm

9.23

9.23

8.70 ppm

8.69

8.69

ppm

8.37

8.37

8.39

8.39

8.158.20 ppm

8.14

8.14

8.16

8.16

8.17

8.18

8.18

8.18

7.787.807.82 ppm

7.77

7.79

7.80

156


ppm

8.41

8.41

Current Data ParametersNAME r-ahba2.1EXPNO 11PROCNO 1




ppm

8.10

7.707.727.74 ppm

7.68

7.69

7.69

7.69

7.70

7.70

7.71

7.71

7.71

7.467.48 ppm

7.46

7.46

7.46

7.47

7.47

7.47

7.48

7.48

7.49

7.49

7.337.347.357.367.37 ppm

7.33

7.33

7.33

7.34

7.35

7.35

7.36

7.36

7.36

4.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.5 ppm

3.87

7.33

7.33

7.33

7.34

7.35

7.35

7.36

7.36

7.36

7.46

7.46

7.46

7.47

7.47

7.47

7.48

7.48

7.49

7.49

7.68

7.69

7.69

7.69

7.70

7.70

7.71

7.71

7.71

8.10

8.41

8.41

3.08

0.97

1.99

1.99

0.98

1.00

4.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.5 ppm

3.87

7.33

7.33

7.33

7.34

7.35

7.35

7.36

7.36

7.36

7.46

7.46

7.46

7.47

7.47

7.47

7.48

7.48

7.49

7.49

7.68

7.69

7.69

7.69

7.70

7.70

7.71

7.71

7.71

8.10

8.41

8.41

3.08

0.97

1.99

1.99

0.98

1.00

157

Anexo 38 - Mapas de correlação HSQC e HMBC do composto 17a (CDCl3, 125,76MHz)

ppm

8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 ppm

160

140

120

100

80

60

40

20

0

ppm

6.66.87.07.27.47.67.88.08.28.48.68.8 ppm

100

105

110

115

120

125

130

135

140

145

150

155

160

165

158

Anexo 39 - Espectro de Infravermelho do composto 17a.

159

Anexo 40 - Espectro de RMN 1H do composto 17b destacando as regiões entre δ 3,88 e 8,36, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

8.36 ppm

8.36

8.36





3.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.5 ppm

3.88

7.37

7.38

7.39

7.39

7.39

7.40

7.40

7.41

7.41

7.41

7.42

7.43

7.54

7.54

7.54

7.54

7.55

7.55

7.56

7.56

7.58

7.58

7.58

7.59

7.59

7.60

7.60

7.60

8.13

8.13

8.36

8.36

2.96

1.94

0.90

0.95

0.98

1.00

ppm

8.13

8.13

7.547.557.56 ppm

7.54

7.54

7.54

7.54

7.55

7.55

7.56

7.56

7.387.397.407.417.427.437.44 ppm

7.37

7.38

7.39

7.39

7.39

7.40

7.40

7.41

7.41

7.41

7.42

7.43

7.587.597.60 ppm

7.58

7.58

7.58

7.59

7.59

7.60

7.60

7.60

160


ppm

8.41





1.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.5 ppm

3.88

7.27

7.32

7.32

7.32

7.32

7.33

7.33

7.34

7.34

7.39

7.41

7.43

7.58

7.58

7.58

7.58

7.59

7.60

7.60

7.60

7.77

7.77

7.77

8.10

8.41

3.15

1.03

1.04

1.03

0.99

0.95

1.00

ppm

8.10

7.767.78 ppm

7.77

7.77

7.77

7.587.60 ppm

7.58

7.58

7.58

7.58

7.59

7.60

7.60

7.60

7.407.427.44 ppm

7.39

7.41

7.43

7.317.327.337.347.35 ppm

7.32

7.32

7.32

7.32

7.33

7.33

7.34

7.34

161


8.388.39 ppm8.38

8.38





4.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.5 ppm

3.87

7.44

7.45

7.46

7.46

7.47

7.64

7.65

7.66

7.66

8.09

8.09

8.38

8.38

2.96

2.02

2.02

1.00

1.00

7.647.657.667.67 ppm

7.64

7.65

7.66

7.66

8.09 ppm

8.09

8.09

7.447.457.46 ppm

7.44

7.45

7.46

7.46

7.47

162


3.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5 ppm

3.88

7.24

7.24

7.24

7.25

7.26

7.26

7.26

7.26

7.27

7.28

7.28

7.28

7.29

7.29

7.30

7.30

7.32

7.32

7.33

7.33

7.33

7.34

7.34

7.34

7.34

7.35

7.35

7.35

7.35

7.35

7.36

7.36

7.89

7.89

7.90

7.91

7.91

7.92

3.12

2.26

1.00

1.03

0.99

1.00





8.488.49 ppm

8.48

8.48

8.49

8.49

ppm

8.12

7.897.907.917.92 ppm

7.89

7.89

7.90

7.91

7.91

7.92

7.92

7.337.347.357.367.37 ppm

7.32

7.32

7.33

7.33

7.33

7.34

7.34

7.34

7.34

7.35

7.35

7.35

7.35

7.35

7.36

7.36

7.257.267.277.287.297.30 ppm

7.24

7.24

7.24

7.25

7.26

7.26

7.26

7.26

7.27

7.28

7.28

7.28

7.29

7.29

7.30

7.30

163


8.408.45 ppm

8.41

Current Data ParametersNAME r-estermf-okEXPNO 1PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20151016Time 10.57INSTRUM spectPROBHD 5 mm TBI 1H/13PULPROG zgTD 65536SOLVENT CDCl3NS 8DS 0SWH 6270.903 HzFIDRES 0.095686 HzAQ 5.2254038 secRG 181DW 79.733 usecDE 10.00 usecTE 301.2 KD1 1.00000000 secTD0 1



4.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.0 ppm

3.88

7.04

7.04

7.04

7.04

7.05

7.06

7.06

7.07

7.07

7.07

7.08

7.26

7.42

7.42

7.43

7.44

7.45

7.45

7.45

7.47

7.47

7.47

7.48

7.49

7.49

7.49

7.51

7.51

7.52

8.10

8.41

3.58

0.96

3.17

0.80

1.00

8.10 ppm

8.10

7.447.467.487.507.52 ppm

7.42

7.42

7.43

7.44

7.45

7.45

7.45

7.47

7.47

7.47

7.48

7.49

7.49

7.49

7.51

7.51

7.52

7.057.067.077.08 ppm

7.04

7.04

7.04

7.04

7.05

7.06

7.06

7.07

7.07

7.07

7.08

164


3.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.5 ppm

3.87

7.16

7.16

7.16

7.17

7.17

7.17

7.18

7.18

7.18

7.19

7.19

7.19

7.27

7.66

7.66

7.66

7.67

7.67

7.68

7.68

7.68

7.69

8.08

8.08

8.35

8.35

3.15

2.04

2.05

0.98

1.00





ppm

8.35

8.35

8.085 ppm

8.08

8.08

7.667.677.687.69 ppm

7.66

7.66

7.66

7.67

7.67

7.68

7.68

7.68

7.69

7.167.177.187.19 ppm

7.16

7.16

7.16

7.17

7.17

7.17

7.18

7.18

7.18

7.19

7.19

7.19

165

Anexo 46 - Espectro de RMN 1H do composto 17h destacando as regiões entre δ 3,88 e 9,29 e sinais ampliados (DMSO d6, 500MHz).

9.29 ppm

9.29

9.29 Current Data Parameters

NAME r-fahba4.10EXPNO 12PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20140812Time 8.02INSTRUM spectPROBHD 5 mm TBI 1H/13PULPROG zgcpprTD 65536SOLVENT DMSONS 16DS 0SWH 6996.269 HzFIDRES 0.106755 HzAQ 4.6836395 secRG 101DW 71.467 usecDE 6.50 usecTE 298.2 KD1 1.00000000 secD12 0.00002000 secTD0 1

======== CHANNEL f1 ========SFO1 500.1325089 MHzNUC1 1HP1 10.38 usecPLW1 10.00000000 WPLW9 0.00004310 W


4.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.5 ppm

3.88

7.54

7.55

7.57

7.64

7.64

7.64

7.64

7.65

7.66

7.66

7.66

8.03

8.03

8.03

8.04

8.05

8.05

8.05

8.05

8.24

8.24

8.26

8.26

8.26

9.29

9.29

3.01

1.01

0.82

1.05

1.51

1.00

8.258.26 ppm

8.24

8.24

8.26

8.26

8.26

8.048.05 ppm

8.03

8.03

8.03

8.04

8.05

8.05

8.05

8.05

7.647.657.66 ppm

7.64

7.64

7.64

7.64

7.65

7.66

7.66

7.66

7.56 ppm

7.54

7.55

7.57

166


2.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.5 ppm

2.39

2.39

2.39

2.39

2.40

3.87

7.26

7.26

7.26

7.26

7.26

7.26

7.26

7.27

7.27

7.27

7.28

7.28

7.28

7.28

7.56

7.57

7.58

7.58

7.58

8.08

8.08

8.36

8.36

3.22

3.18

2.34

2.08

0.98

1.00





2.392.40 ppm

2.39

2.39

2.39

2.39

2.40

ppm

8.36

8.36

ppm

8.08

8.08

7.577.58 ppm

7.56

7.57

7.58

7.58

7.58

7.267.277.28 ppm

7.26

7.26

7.26

7.26

7.26

7.26

7.26

7.27

7.27

7.27

7.28

7.28

7.28

7.28

167

Anexo 48 - Espectro de RMN 1H do composto 17j destacando as regiões entre δ 3,90 e 8,61, e sinais ampliados (CDCl3, 500MHz).

4.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.5 ppm

3.90

7.68

7.68

7.70

7.70

7.71

7.71

8.09

8.09

8.10

8.10

8.11

8.11

8.11

8.11

8.15

8.15

8.21

8.21

8.21

8.21

8.22

8.22

8.23

8.23

8.53

8.53

8.60

8.61

8.61

3.13

1.03

1.03

0.95

1.00

1.00

1.01





8.61 ppm

8.60

8.61

8.61

8.53 ppm

8.53

8.53

8.218.228.23 ppm

8.21

8.21

8.21

8.21

8.22

8.22

8.23

8.23

8.108.11 ppm

8.09

8.09

8.10

8.10

8.11

8.11

8.11

8.11

7.687.707.72 ppm

7.68

7.68

7.70

7.70

7.71

7.71

ppm

8.15

8.15

168

Anexo 49 - Espectro de RMN 1H do composto 18a destacando as regiões entre δ 4,44 e 9,49, e sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

3.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.5 ppm

3.33

4.44

7.33

7.34

7.35

7.49

7.50

7.52

7.82

7.84

8.13

8.89

9.49

1.76

1.88

1.02

2.05

2.10

1.01

1.04

1.00





9.5 ppm

9.49

ppm

8.89

ppm

8.13

7.827.847.86 ppm

7.82

7.84

7.507.52 ppm

7.49

7.50

7.52

7.347.36 ppm

7.33

7.34

7.35

169

Anexo 50 - Mapas de correlação Espectros de HSQC e HMBC do composto 18a (DMSO-d6, 125,76MHz).

ppm

6.46.66.87.07.27.47.67.88.08.28.48.68.89.09.2 ppm

90

95

100

105

110

115

120

125

130

135

140

145

150

155

160

165

ppm

7.27.47.67.88.08.28.48.68.89.09.29.4 ppm

120

125

130

135

140

145

150

155

160

165

170

Anexo 51 - Espectro de Infravermelho do composto 18a

171

Anexo 52 - Espectro de RMN 1H do composto 18b destacando as regiões entre δ 4,44 e 9,50, e sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

ppm

9.50




F2 - Processing parametersSI 65536SF 500.1300098 MHzWDW noSSB 0LB 0 HzGB 0PC 1.00

4.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.5 ppm

4.44

7.51

7.51

7.52

7.53

7.60

7.61

7.62

7.68

7.68

7.69

7.70

8.12

8.52

9.50

1.22

2.38

1.08

1.03

0.96

1.00

0.81

ppm

8.52

8.128.14 ppm

8.12

7.687.70 ppm

7.68

7.68

7.69

7.70

7.62 ppm

7.60

7.61

7.62

7.507.527.54 ppm

7.51

7.51

7.52

7.53

172

Anexo 53 - Espectro de RMN 1H do composto 18c destacando as regiões entre δ 4,43 e 9,49, e sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

9.50 ppm

9.49





5.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.5 ppm

4.43

7.38

7.40

7.51

7.52

7.54

7.54

7.82

7.83

7.93

8.15

8.97

9.49

1.78

1.09

1.22

1.19

1.06

1.08

1.17

1.00

ppm

8.97

8.2 ppm

8.15

7.95 ppm

7.93

7.407.457.507.557.607.657.707.757.807.85 ppm

7.38

7.40

7.51

7.52

7.54

7.54

7.82

7.83

173

Anexo 54 - Espectro de RMN 1H do composto 18d destacando as regiões entre δ 4,42 e 9,49, e sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

8.905 ppm

8.90

8.91





5.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.0 ppm

4.42

7.56

7.56

7.57

7.57

7.85

7.86

7.87

7.87

8.14

8.90

8.91

9.49

1.91

2.00

2.18

0.86

1.02

0.98

ppm

8.14

7.847.867.887.90 ppm

7.85

7.86

7.87

7.87

7.567.577.58 ppm

7.56

7.56

7.57

7.57

174

Anexo 55 - Espectro de RMN 1H do composto 18e destacando as regiões entre δ 4,40 e 9,55, e sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

4.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.5 ppm

4.38

7.35

7.35

7.35

7.36

7.37

7.38

7.38

7.43

7.44

7.45

7.45

7.45

7.45

7.46

7.47

7.47

7.48

7.48

7.48

7.49

7.49

7.51

7.51

7.79

7.79

7.81

7.81

7.82

7.82

8.13

8.15

8.61

8.61

9.55

1.64

1.16

2.17

1.08

0.98

1.00

1.45





9.55 ppm

9.55

8.618.62 ppm

8.61

8.61

8.61

8.61

7.807.82 ppm

7.79

7.79

7.81

7.81

7.82

7.82

7.447.467.487.50 ppm

7.43

7.44

7.45

7.45

7.45

7.45

7.46

7.47

7.47

7.48

7.48

7.48

7.49

7.49

7.51

7.51 7.367.38 ppm

7.35

7.35

7.35

7.36

7.37

7.38

7.38

8.150 ppm

8.15

8.15

175

Anexo 56 - Espectro de RMN 1H do composto 18f destacando as regiões entre δ 4,42 e 9,51, e sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

4.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.5 ppm

4.42

7.16

7.17

7.17

7.17

7.18

7.18

7.19

7.19

7.20

7.20

7.20

7.21

7.52

7.53

7.54

7.54

7.54

7.54

7.54

7.55

7.56

7.56

7.56

7.57

7.57

7.70

7.71

7.71

7.71

7.72

7.72

7.73

7.73

7.74

7.74

7.75

8.15

8.15

8.96

8.96

9.51

2.06

0.91

1.00

1.90

0.88

0.99

1.00

Current Data ParametersNAME r-ahba9-5EXPNO 1PROCNO 1




9.52 ppm

9.51

8.96 ppm

8.96

8.96

8.15 ppm8.15

8.15

7.717.727.737.747.757.76 ppm

7.70

7.71

7.71

7.71

7.72

7.72

7.73

7.73

7.74

7.74

7.75

7.537.547.557.567.57 ppm

7.52

7.53

7.54

7.54

7.54

7.54

7.54

7.55

7.56

7.56

7.56

7.57

7.57

7.177.187.197.207.21 ppm

7.16

7.17

7.17

7.17

7.18

7.18

7.19

7.19

7.20

7.20

7.20

7.21

176

Anexo 57 - Espectro de RMN 1H do composto 18g destacando as regiões entre δ 4,42 e 9,47, e sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

4.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.5 ppm

4.42

7.33

7.33

7.34

7.34

7.36

7.36

7.83

7.84

7.85

7.86

7.86

7.86

7.87

8.10

8.11

8.84

8.85

9.47





8.85 ppm

8.84

8.85

7.837.847.857.867.877.88 ppm

7.83

7.84

7.85

7.86

7.86

7.86

7.87

7.337.347.357.367.37 ppm

7.33

7.33

7.34

7.34

7.36

7.36

8.108.12 ppm

8.10

8.11

177

Anexo 58 - Espectro de RMN 1H do composto 18h destacando as regiões entre δ 4,43 e 9,49, e sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

4.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.5 ppm

4.43

7.45

7.46

7.48

7.53

7.53

7.53

7.53

7.54

7.54

7.54

7.55

7.86

7.86

7.86

7.87

7.88

7.88

7.88

7.88

8.07

8.07

8.08

8.13

8.15

8.97

9.49

0.67

1.03

0.91

0.97

0.89

0.87

1.00

0.78

Current Data ParametersNAME r-fahba5.10EXPNO 13PROCNO 1




ppm

8.97

8.078.08 ppm

8.07

8.07

8.08

8.148.16 ppm

8.13

8.15

7.877.88 ppm

7.86

7.86

7.86

7.87

7.88

7.88

7.88

7.88

7.537.547.55 ppm

7.53

7.53

7.53

7.53

7.54

7.54

7.54

7.55

7.467.48 ppm

7.45

7.46

7.48

178

Anexo 59 - Espectro de RMN 1H do composto 18i destacando as regiões entre δ 2,33 e 9,45, e sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

2.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.0 ppm

2.33

4.40

7.29

7.30

7.31

7.31

7.69

7.69

7.69

7.70

7.71

7.71

8.09

8.09

8.82

8.82

9.45

3.84

2.00

2.53

2.49

1.03

1.12

1.00





9.46 ppm

9.45

8.82 ppm

8.82

8.82

8.09 ppm

8.09

8.09

7.687.697.707.717.72 ppm

7.69

7.69

7.69

7.70

7.71

7.71

7.307.31 ppm

7.29

7.30

7.31

7.31

179

Anexo 60 - Espectro de RMN 1H do composto 18j destacando as regiões entre δ 4,47 e 9,53, e sinais ampliados (DMSO-d6, 500MHz).

4.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.5 ppm

4.47

7.79

7.81

7.82

8.16

8.17

8.17

8.17

8.18

8.18

8.19

8.19

8.20

8.21

8.31

8.31

8.31

8.32

8.33

8.33

8.33

8.33

8.63

8.63

8.63

9.12

9.12

9.53

2.15

1.03

1.03

0.88

1.03

0.99

1.00

0.94





9.12 ppm

9.12

9.12

ppm

9.53

8.63 ppm

8.63

8.63

8.63

8.328.33 ppm

8.31

8.31

8.31

8.32

8.33

8.33

8.33

8.33

ppm

8.20

8.21

8.18 ppm

8.16

8.17

8.17

8.17

8.18

8.18

8.19

8.19

7.807.82 ppm

7.79

7.81

7.82

180

Anexo 61 - Espectro de RMN 1H do composto 19a destacando as regiões entre δ 7,51 e 14,63, e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

9.26 ppm

9.26

9.26

ppm

8.28

8.28

7.527.537.54 ppm

7.51

7.51

7.52

7.53

7.53

7.54

7.54

7.54

7.377.387.397.40 ppm

7.36

7.36

7.37

7.38

7.38

7.38

7.39

7.39

7.40

7.927.937.94 ppm

7.92

7.92

7.92

7.93

7.93

7.94

7.94

7.58.08.59.09.510.010.511.011.512.012.513.013.514.014.5 ppm

7.51

7.52

7.53

7.53

7.54

7.54

7.54

7.92

7.92

7.92

7.93

7.93

7.94

7.94

8.28

8.28

9.26

9.26

14.63

1.11

2.42

2.41

0.42

1.09

1.00

15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 ppm

Current Data ParametersNAME r-oxahEXPNO 1PROCNO 1




181

Anexo 62 - Mapas de contorno bidimensionais HSQC e HMBC do composto 19a (DMSO, 125,76MHz).

ppm

5.56.06.57.07.58.08.59.09.5 ppm

100

110

120

130

140

150

160

170

180

190

200

ppm

6.57.07.58.08.59.0 ppm

100

110

120

130

140

150

160

170

180

182

Anexo 63 - Espectro de RMN 13

C do composto 19a (DMSO, 500MHz).

405060708090100110120130140150160170180 ppm

39.20

39.37

39.53

39.70

39.87

40.03

40.20

111.17

118.76

125.83

126.90

129.73

129.75

129.76

138.70

139.36

155.81

178.90

Current Data ParametersNAME Aman_AHBA1EXPNO 2PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20120627Time 16.18INSTRUM spectPROBHD 5 mm BBO BB-1HPULPROG zgpg30TD 32768SOLVENT DMSONS 1024DS 2SWH 29761.904 HzFIDRES 0.908261 HzAQ 0.5505024 secRG 2050DW 16.800 usecDE 6.50 usecTE 298.2 KD1 2.00000000 secD11 0.03000000 secTD0 1

======== CHANNEL f1 ========SFO1 125.7703643 MHzNUC1 13CP1 8.88 usecPLW1 55.94699860 W

======== CHANNEL f2 ========SFO2 500.1320005 MHzNUC2 1HCPDPRG[2 waltz16PCPD2 80.00 usecPLW2 14.40799999 WPLW12 0.50652999 WPLW13 0.32418001 W


183


184

Anexo 65 - Espectro de RMN 1H do composto 19b destacando as regiões entre δ 7,58 e 14,64, e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

8910111213141516171819 ppm

7.58

7.65

7.65

7.66

7.67

7.67

7.71

7.71

7.71

7.72

7.73

8.29

8.30

8.90

8.90

14.64

3.75

1.68

1.47

0.78

0.89

1.10

Current Data ParametersNAME r-oxa2clEXPNO 12PROCNO 1




8.91 ppm

8.90

8.90

ppm

8.29

8.30

7.72 ppm

7.71

7.71

7.71

7.72

7.73

7.66 ppm

7.65

7.65

7.66

7.67

7.67

7.537.547.557.567.577.58 ppm

7.52

7.52

7.53

7.54

7.54

7.54

7.54

7.55

7.55

7.55

7.56

7.56

7.57

7.57

7.58

7.58

7.58

2´

3´

1´

4´

6´

5´

N1

N2

5

3 4 1´´

N

O

N

H

S

Cl

2´´

3´´

4´´

5´´

185

Anexo 66 - Mapas de contorno bidimensionais HSQC e HMBC do composto 19b (DMSO, 125,76MHz).

ppm

7.27.47.67.88.08.28.48.68.89.0 ppm

100

110

120

130

140

150

160

170

180

190

ppm

6.87.07.27.47.67.88.08.28.48.68.8 ppm

90

100

110

120

130

140

150

160

170

180

190

186


C do composto 19b (DMSO, 500MHz).

405060708090100110120130140150160170 ppm

39.19

39.36

39.52

39.69

39.86

106.71

128.30

128.37

128.48

130.51

130.86

132.84

136.87

139.02

156.01

176.83

Current Data ParametersNAME r-oxa2.2clEXPNO 2PROCNO 1




F2 - Processing parametersSI 65536SF 125.7578519 MHzWDW EMSSB 0LB 5.00 HzGB 0PC 1.00

187

Anexo 68 - Espectro de infravermelho do composto 19b.

188

Anexo 69 - Espectro de RMN 1H do composto 19c destacando as regiões entre δ 7,44 e 14,67, e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

8.06 ppm

8.05

8.05

8.06

7.437.44 ppm

7.42

7.42

7.43

7.43

7.44

7.44

7.44

7.45

9.35 ppm

9.35

9.35

7.927.93 ppm

7.91

7.91

7.92

7.92

7.93

7.93

7.93

7.93

ppm

8.30

8.30

7.55 ppm

7.54

7.55

7.57

7.58.08.59.09.510.010.511.011.512.012.513.013.514.014.5 ppm

7.44

7.45

7.54

7.55

7.57

7.91

7.91

7.92

7.92

7.93

7.93

7.93

7.93

8.05

8.05

8.06

8.30

8.30

9.35

9.35

14.67

1.28

1.42

1.27

1.14

1.02

1.22

1.00

15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 ppm

7.42

7.42

7.43

7.43

7.44

7.44

7.44

7.45

7.54

7.55

7.57

7.91

7.91

7.92

7.92

7.93

7.93

7.93

7.93

8.05

8.05

8.06

8.30

8.30

9.35

9.35

14.67

1.28

1.42

1.27

1.14

1.02

1.22

1.00

Current Data ParametersNAME r-oxa3clEXPNO 1PROCNO 1




189

Anexo 70 - Mapas de contorno bidimensionais HSQC e HMBC do composto 19c (DMSO, 125,76MHz).

ppm

7.58.08.59.09.510.0 ppm

50

60

70

80

90

100

110

120

130

140

150

160

170

180

190

200

210

ppm

7.07.58.08.59.09.510.0 ppm

80

90

100

110

120

130

140

150

160

170

190


C do composto 19c (DMSO, 500MHz).

405060708090100110120130140150160170180 ppm

39.19

39.36

39.52

39.69

39.86

40.02

108.00

117.51

118.77

127.17

128.81

131.37

134.13

139.59

139.84

155.89

176.87

Current Data ParametersNAME r-oxa2.3clEXPNO 2PROCNO 1





191

Anexo 72 - Espectro de infravermelho do composto 19c.

192

Anexo 73 - Anexo-Espectro de RMN 1H do composto 19d destacando as regiões entre δ 7,59 e 9,29, e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

7.607.62 ppm

7.59

7.59

7.60

7.61

7.967.988.00 ppm

7.96

7.96

7.97

7.98

ppm

9.29

9.29

ppm8.30

8.30

7.67.77.87.98.08.18.28.38.48.58.68.78.88.99.09.19.29.3 ppm

7.59

7.59

7.60

7.61

7.96

7.96

7.97

7.98

8.30

8.30

9.29

9.29

2.10

2.07

0.97

1.00

2.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.5 ppm

7.59

7.59

7.60

7.61

7.96

7.96

7.97

7.98

8.30

8.30

9.29

9.29

2.10

2.07

0.97

1.00

Current Data ParametersNAME Aman_AHBA2EXPNO 1PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20120627Time 11.29INSTRUM spectPROBHD 5 mm BBO BB-1HPULPROG zg30TD 65536SOLVENT DMSONS 8DS 0SWH 8012.820 HzFIDRES 0.122266 HzAQ 4.0894465 secRG 456DW 62.400 usecDE 6.50 usecTE 298.1 KD1 1.00000000 secTD0 1



193


C do composto 19d (DMSO, 500MHz).

5060708090100110120130140150160170180 ppm

107.86

120.66

128.60

129.59

131.63

137.59

139.49

155.94


NAME Aman_AHBA2EXPNO 2PROCNO 1





194

Anexo 75 - Espectro de infravermelho do composto 19d.

195

Anexo 76 - Espectro de RMN 1H do composto 19e destacando as regiões entre δ 7,38 e 9,92 e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

8.90 ppm

8.89

8.89

8.90

7.58.08.59.09.510.010.511.011.512.012.513.013.514.014.5 ppm

7.41

7.41

7.49

7.50

7.50

7.50

7.51

7.51

7.52

7.52

7.79

7.81

7.82

8.89

8.89

8.90

14.61

1.27

2.22

1.19

0.82

1.00

0.81

8.35 ppm

7.807.82 ppm

7.79

7.81

7.82

7.507.52 ppm

7.49

7.50

7.50

7.50

7.51

7.51

7.52

7.52

7.387.397.407.41 ppm

7.38

7.38

7.39

7.39

7.40

7.40

7.41

7.41

Current Data ParametersNAME r-oxa2.2fEXPNO 1PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20151110Time 14.48INSTRUM spectPROBHD 5 mm BBO BB-1HPULPROG zgTD 65536SOLVENT DMSONS 4DS 0SWH 15000.000 HzFIDRES 0.228882 HzAQ 2.1845334 secRG 25.4DW 33.333 usecDE 6.50 usecTE 301.2 KD1 1.00000000 secTD0 1



196

Anexo 77 - Mapas de contorno bidimensionais HSQC e HMBC do composto 19e (DMSO, 125,76MHz).

ppm

7.37.47.57.67.77.87.98.08.18.28.38.48.58.68.78.88.99.0 ppm

115

120

125

130

135

140

145

150

ppm

7.47.57.67.77.87.98.08.18.28.38.48.58.68.78.88.99.09.1 ppm

100

105

110

115

120

125

130

135

140

145

150

155

160

165

170

197


C do composto 19e (DMSO, 500MHz).

405060708090100110120130140150160170180 ppm

39.19

39.35

39.52

39.69

39.85

107.35

117.00

117.16

125.36

125.38

125.53

130.05

130.11

131.97

132.02

139.31

152.87

154.85

155.88

176.85

Current Data ParametersNAME r-oxa2.2fEXPNO 2PROCNO 1





198

Anexo 79 - Espectro de infravermelho do composto 19e.

199

Anexo 80 - Espectro de RMN 1H do composto 19f destacando as regiões entre δ 7,58 e 14,65 e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

7.58.08.59.09.510.010.511.011.512.012.513.013.514.014.515.015.516.016.5 ppm

7.58

7.58

7.59

7.60

7.81

7.81

7.81

7.81

7.82

7.83

7.83

7.84

7.85

7.85

7.86

8.31

8.31

9.33

9.33

9.34

9.38

9.39

14.65

1.10

1.30

2.53

0.42

1.22

1.00

Current Data ParametersNAME r-oxa3f .1EXPNO 1PROCNO 1




9.335 ppm

9.33

9.33

9.34

8.3108.315 ppm

8.31

8.31

7.817.827.837.847.857.86 ppm

7.81

7.81

7.81

7.81

7.82

7.83

7.83

7.84

7.85

7.85

7.86

7.567.577.587.597.60 ppm

7.55

7.56

7.57

7.57

7.58

7.58

7.58

7.59

7.60

7.227.237.247.25 ppm

7.21

7.21

7.21

7.21

7.23

7.23

7.23

7.23

7.24

7.25

7.25

200

Anexo 81 - Mapas de contornos bidimensionais HSQC e HMBC do composto 19f (DMSO, 125,76MHz).

ppm

7.07.58.08.59.09.5 ppm

80

90

100

110

120

130

140

150

160

170

180

190

200

ppm

7.07.27.47.67.88.08.28.48.68.89.09.29.49.6 ppm

100

110

120

130

140

150

160

170

180

190

201


C do composto 19f (DMSO, 500MHz).

405060708090100110120130140150160170180190 ppm

39.19

39.36

39.52

39.69

39.86

107.95

113.98

114.15

114.86

128.79

131.61

139.56

155.88

161.54


NAME r-oxa3fEXPNO 2PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20151015Time 16.07INSTRUM spectPROBHD 5 mm TBI 1H/13PULPROG zgpg30TD 32768SOLVENT DMSONS 1901DS 0SWH 37878.789 HzFIDRES 1.155969 HzAQ 0.4325376 secRG 203DW 13.200 usecDE 6.50 usecTE 301.4 KD1 0.50000000 secD11 0.03000000 secTD0 1




202

Anexo 83 - Espectro de infravermelho do composto 19f.

203

Anexo 84 - Espectro de RMN 1H do composto 19g destacando as regiões entre δ 7,36 e 14,62 e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

7.367.387.40 ppm

7.36

7.36

7.38

7.39

7.39

7.967.98 ppm

7.95

7.95

7.96

7.96

7.97

7.97

7.97

9.25 ppm

9.23

9.23

8.30 ppm

8.27

7.58.08.59.09.510.010.511.011.512.012.513.013.514.014.5 ppm

7.36

7.36

7.38

7.39

7.39

7.95

7.95

7.96

7.96

7.97

7.97

7.97

8.27

9.23

9.23

14.62

2.44

2.48

1.04

1.19

1.00

3456789101112131415 ppm

7.36

7.36

7.38

7.39

7.39

7.95

7.95

7.96

7.96

7.97

7.97

7.97

8.27

9.23

9.23

14.62

2.44

2.48

1.04

1.19

1.00

Current Data ParametersNAME r-oxa4fEXPNO 1PROCNO 1




204

Anexo 85 - Mapas de contorno bidimensionais HSQC e HMBC do composto 19g (DMSO, 125,76MHz).

ppm

5.56.06.57.07.58.08.59.09.510.0 ppm

80

90

100

110

120

130

140

150

160

170

180

190

200

210

ppm

7.07.58.08.59.09.510.0 ppm

100

105

110

115

120

125

130

135

140

145

150

155

160

165

170

175

180

205


C do composto 19g (DMSO, 500MHz).

405060708090100110120130140150160170180 ppm

39.19

39.36

39.52

39.69

39.86

40.02

107.60

116.30

116.49

121.13

121.20

128.53

135.33

139.23

156.01

159.93

161.87


NAME r-oxa2.4fEXPNO 2PROCNO 1





206

Anexo 87 - Espectro de infravermelho do composto 19g.

207

Anexo 88 - Espectro de RMN 1H do composto 19h destacando as regiões entre δ 7,47 e 9,35 e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

7.50 ppm

7.47

7.49

7.50

7.58 ppm

7.56

7.56

7.57

7.57

7.58

7.58

7.58

7.58

7.967.98 ppm

7.96

7.96

7.96

7.96

7.97

7.97

7.98

7.98

8.20 ppm

8.19

8.19

8.19

8.30 ppm

8.30

8.30

7.47.57.67.77.87.98.08.18.28.38.48.58.68.78.88.99.09.19.29.39.49.5 ppm

7.47

7.49

7.50

7.56

7.56

7.57

7.57

7.58

7.58

7.58

7.58

7.96

7.96

7.96

7.96

7.97

7.97

7.98

7.98

8.19

8.19

8.19

8.30

8.30

9.35

9.35

1.04

0.92

1.04

0.96

0.68

1.00

9.4 ppm

9.35

9.35

2.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.0 ppm

7.47

7.49

7.50

7.56

7.56

7.57

7.57

7.58

7.58

7.58

7.58

7.96

7.96

7.96

7.96

7.97

7.97

7.98

7.98

8.19

8.19

8.19

8.30

1.04

0.92

1.04

0.96

0.68

1.00

Current Data ParametersNAME r-oxa2.3brEXPNO 11PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20151110Time 14.08INSTRUM spectPROBHD 5 mm BBO BB-1HPULPROG zgprTD 65536SOLVENT DMSONS 8DS 0SWH 15000.000 HzFIDRES 0.228882 HzAQ 2.1845334 secRG 25.4DW 33.333 usecDE 6.50 usecTE 301.2 KD1 1.00000000 secD12 0.00002000 secTD0 1



208

Anexo 89 - Mapas de contorno bidimensionais HSQC e HMBC do composto 19h (DMSO, 125,76MHz).

ppm

7.67.88.08.28.48.68.89.09.29.4 ppm

90

100

110

120

130

140

150

160

170

180

ppm

7.27.47.67.88.08.28.48.68.89.09.2 ppm

105

110

115

120

125

130

135

140

145

150

155

160

209


C do composto 19h (DMSO, 500MHz).

30405060708090100110120130140150160170180 ppm

39.19

39.35

39.52

39.69

39.86

107.96

117.89

121.53

122.37

128.83

130.08

131.58

139.58

139.90

155.87

176.83

Current Data ParametersNAME r-oxa2.3brEXPNO 2PROCNO 1





210

Anexo 91 - Espectro de infravermelho do composto 19h.

211

Anexo 92 - Espectro de RMN 1H do composto 19i destacando as regiões entre δ 2,34 e 9,21 e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

345678910111213 ppm

2.34

7.32

7.32

7.32

7.34

7.34

7.34

7.80

7.81

7.82

7.82

8.25

8.25

9.21

9.21

3.35

2.28

2.15

0.97

1.00

Current Data ParametersNAME R-AHBA6EXPNO 1PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20120904Time 16.14INSTRUM spectPROBHD 5 mm BBO BB-1HPULPROG zg30TD 65536SOLVENT DMSONS 16DS 0SWH 8012.820 HzFIDRES 0.122266 HzAQ 4.0894465 secRG 362DW 62.400 usecDE 6.50 usecTE 301.2 KD1 1.00000000 secTD0 1



9.2059.210 ppm

9.21

9.21

ppm

8.25

8.25

7.807.817.827.83 ppm

7.80

7.81

7.82

7.82

7.337.34 ppm

7.32

7.32

7.32

7.34

7.34

7.34

212

Anexo 93 - Mapas de contornos bidimensionais HSQC e HMBC do composto 19i (DMSO, 125,76MHz).

ppm

2.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.0 ppm

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

110

120

130

140

ppm

7.27.47.67.88.08.28.48.68.89.09.2 ppm

110

115

120

125

130

135

140

213


C do composto 19i (DMSO, 500MHz).

30405060708090100110120130140150160170180 ppm

20.52

39.19

39.36

39.52

39.69

39.86

107.40

118.93

128.18

130.07

136.61

136.97

139.06

156.20

176.75

Current Data ParametersNAME R-AHBA6EXPNO 2PROCNO 1





214

Anexo 95 - Espectro de infravermelho do composto 19i.

215

Anexo 96 - Espectro de RMN 1H do composto 19j destacando as regiões entre δ 7,81 e 9,50 e sinais ampliados (DMSO, 500MHz).

9.5 ppm

9.50

8.74 ppm

8.73

8.74

8.74

8.40 ppm

8.39

8.39

8.40

8.41

9.5 ppm

9.50

8.74 ppm

8.73

8.74

8.74

8.40 ppm

8.39

8.39

8.40

8.41

8.20 ppm

8.19

8.20

8.21

8.21

9.5 ppm

9.50

8.74 ppm

8.73

8.74

8.74

8.40 ppm

8.39

8.39

8.40

8.41

9.5 ppm

9.50

8.74 ppm

8.73

8.74

8.74

8.40 ppm

8.39

8.39

8.40

8.41

7.85 ppm

7.81

7.82

7.84

9.5 ppm

9.50

8.74 ppm

8.73

8.74

8.74

8.40 ppm

8.39

8.39

8.40

8.41

9.5 ppm

9.50

8.74 ppm

8.73

8.74

8.74

8.40 ppm

8.39

8.39

8.40

8.41

9.5 ppm

9.50

8.74 ppm

8.73

8.74

8.74

8.40 ppm

8.39

8.39

8.40

8.41

ppm

8.35

9.5 ppm

9.50

8.74 ppm

8.73

8.74

8.74

8.40 ppm

8.39

8.39

8.40

8.41

7.98.08.18.28.38.48.58.68.78.88.99.09.19.29.39.49.5 ppm

7.81

7.82

7.84

8.19

8.20

8.21

8.21

8.35

8.39

8.39

8.40

8.41

8.73

8.74

8.74

9.50

1.16

1.05

0.62

1.00

0.91

1.00

2.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.5 ppm

2.49

2.49

2.49

7.81

7.82

7.84

8.19

8.20

8.21

8.21

8.35

8.39

8.39

8.40

8.41

8.73

8.74

8.74

9.50

1.16

1.05

0.62

1.00

0.91

1.00

Current Data ParametersNAME r-oxa2.3no2EXPNO 11PROCNO 1

F2 - Acquisition ParametersDate_ 20151110Time 14.13INSTRUM spectPROBHD 5 mm BBO BB-1HPULPROG zgprTD 65536SOLVENT DMSONS 8DS 0SWH 15000.000 HzFIDRES 0.228882 HzAQ 2.1845334 secRG 25.4DW 33.333 usecDE 6.50 usecTE 301.2 KD1 1.00000000 secD12 0.00002000 secTD0 1



216

Anexo 97 - Mapas de contorno bidimensionais HSQC e HMBC do composto 19j (DMSO, 125,76MHz).

ppm

7.67.88.08.28.48.68.89.09.29.49.69.8 ppm

90

95

100

105

110

115

120

125

130

135

140

145

150

155

160

165

170

175

ppm

7.67.88.08.28.48.68.89.09.29.49.6 ppm

90

95

100

105

110

115

120

125

130

135

140

145

150

155

160

165

217

Anexo 98 - Anexo - Espectro de RMN 13

C do composto 19j (DMSO, 500MHz).

5060708090100110120130140150160170 ppm

39.35

39.52

39.68

108.39

113.69

121.81

124.87

129.33

131.33

139.44

139.99

148.62

155.79

176.91

Current Data ParametersNAME r-oxa2.3no2EXPNO 2PROCNO 1





218

Anexo 99 - Espectro de infravermelho do composto 19j.

planejamento, sÍntese e avaliaÇÃo farmacolÓgica de

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