MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS

INSTITUTO DE PATOLOGIA TROPICAL E SAÚDE PÚBLICA

JÚLIO HENRIQUE DE OLIVEIRA

ESTUDO DA ATIVIDADE LARVICIDA E EFEITOS TOXICOLÓGICOS DO EXTRATO BRUTO ETANÓLICO DE Sapindus saponaria L (Sapindaceae) SOBRE Aedes aegypti L. (Diptera, Culicidae)

Orientador: Prof. Dr. Ionizete Garcia da Silva

Dissertação de Mestrado

Goiânia – GO, 2005

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS INSTITUTO DE PATOLOGIA TROPICAL E SAÚDE PÚBLICA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA TROPICAL

JÚLIO HENRIQUE DE OLIVEIRA

ESTUDO DA ATIVIDADE LARVICIDA E EFEITOS TOXICOLÓGICOS DO EXTRATO BRUTO ETANÓLICO DE Sapindus saponaria L (Sapindaceae) SOBRE Aedes aegypti L. (Diptera, Culicidae)

Orientador: Prof. Dr. IONIZETE GARCIA DA SILVA

Dissertação submetida à

CPGMT/IPTSP /UFG como requisito

parcial para obtenção do Grau de

Mestre em Medicina Tropical na

área de concentração em

Parasitologia.

Goiânia – GO, 2005

2

Dados Internacionais de Catalogação-na-Publicação (CIP) (GPT/BC/UFG)

Oliveira, Júlio Henrique de. O48e Estudo da atividade larvicida e efeitos toxicológicos do extrato bruto etanólico de Sapindus saponaria L. (Sapinda- ceae) sobre Aedes aegypti L. (Diptera, Culicidae) / Júlio Henrique de Oliveira. - Goiânia, 2005. 48 f. : il. Orientadora: Ionizete Garcia da Silva. Dissertação (Mestrado) – Universidade Federal de Goiás, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública, 2005. Bibliografia. 1. Aedes aegypti – Controle biológico 2. Aedes Aegypti L. – Combate 3. Sapindus saponaria L. – Larvicida 4. Sapindus saponaria L. – Efeitos toxicológicos 5. Endemias – Controle I. Silva, Ionizete Garcia da .II.Universidade Federal de Goiás. Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública. III. Título. CDU:595.771:582.772.4

3

Aos meus pais,

Sebastião Júlio e

Maria Rita

e a toda minha família,

dedico.

4

AGRADECIMENTOS

Agradeço primeiramente a Deus e a todos que de alguma forma colaboraram para a

realização deste trabalho, e, em especial:

ao Dr. Ionizete Garcia da Silva, Professor Titular do Departamento de Microbiologia,

Imunologia, Patologia e Parasitologia (DMIPP), do Instituto de Patologia Tropical e Saúde

Pública (IPTSP), da Universidade Federal de Goiás (UFG), pela orientação, ajuda, estímulo,

amizade e compreensão constantes;

à Dra. Heloisa Helena Garcia da Silva, Professora Adjunto do Departamento de

Microbiologia, Imunologia, Patologia e Parasitologia (DMIPP), do Instituto de Patologia

Tropical e Saúde Pública (IPTSP), da Universidade Federal de Goiás (UFG), pela ajuda,

estímulo, amizade e compreensão constantes;

à Coordenação de Pós-Graduação em Medicina Tropical e ao DMIPP pela oportunidade

oferecida;

à Fundação de Apoio à Pesquisa (FUNAPE) e ao CNPq pelo apoio financeiro

concedido;

a Carmeci Natalina Elias, Técnica de Laboratório da Secretaria de Estado da Saúde de

Goiás/ Fundação Nacional de Saúde-GO e aos amigos Edson de Castro, Girlene Sena de Assis e

Taísia Izabel Vieira, pelo apoio técnico e amizade durante o desenvolvimento deste trabalho;

ao companheiro de graduação, estágio, bolsa, trabalho e de tantos outros momentos Vitor

Chaves Arantes.

5

Sumário

Lista de Figuras ......................................................................................................06

Resumo ..................................................................................................................07

Abstract ..................................................................................................................08

1-Introdução ...........................................................................................................09

1.1-O uso de plantas como medida de combate a insetos.....................................09 1.2-Sapindus saponaria..........................................................................................10 1.3-Dengue.............................................................................................................12

2-Objetivos .............................................................................................................17

2.1-Gerais...............................................................................................................17

2.2-Específicos .......................................................................................................17

3-Materiais e Métodos ............................................................................................18

3.1-Coleta dos frutos e obtenção dos extratos.......................................................18

3.2-Obtenção das larvas ........................................................................................19

3.3-Bioensaios........................................................................................................22

3.4-Testes de toxicidade ........................................................................................23

4-Resultados e Discussão......................................................................................24

5-Referências Bibliográficas...................................................................................25

6-Artigo 1................................................................................................................32

7-Instruções aos Autores - Revista da Sociedade Brasileira de Medicina

Tropical...................................................................................................................49

6

Lista de Figuras

Figura 1. Aspectos de Sapindus saponaria. A - Caule e copa da árvore. B - Frutos e folhas.... .............................................................................. . 11

Figura 2 . Sorotipos circulantes do vírus do dengue por estados do Brasil...................................................................................................12

Figura 3 . Casos notificados do dengue por semana epidemiológica segundo regiões do Brasil..................................................................................13

Figura 4 . A - Alimentação de fêmeas de Aedes aegypti em camundongos presos em tela de nylon. B – Alimentação de machos de Aedes aegypti em absorvente interno feminino embebido em água açucarada...........................................................................................20

Figura 5 . A – Copo de vidro âmbar com papel filtro para oviposição das fêmeas de Aedes aegypti. B - Papel filtro para oviposição com ovos de Aedes aegypti.................................................................................................21

7

Resumo

O surgimento de resistência do Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) com a

diminuição da sua suscetibilidade aos inseticidas sintéticos estimulou

estudos sobre a atividade de plantas como alternativa para o seu controle.

Neste trabalho, foram realizados ensaios biológicos para verificar a

atividade larvicida do extrato bruto etanólico (e.b.e) do fruto de Sapindus

saponaria sobre A. aegypti, em condições de laboratório. O material

botânico foi coletado, dessecado em estufa de ar forçado a 40°C, moído,

percolado a frio em etanol por 72 horas, filtrado, concentrado em

evaporador rotativo e dessecado em uma capela com auxílio de ar quente.

O e.b.e. obtido foi solubilizado em dimetilsulfóxido (DMSO) e a solução

preparada com água destilada. Os bioensaios foram realizados com larvas

de 3º estádio de A. aegypti, em recipientes de vidro, nos quais colocavam-

se 25 mL de solução e 20 larvas. As leituras foram realizadas 24 e 48 horas

após o início do teste. Foram feitas cinco repetições, sendo os controles

realizados com água e DMSO. Pela Análise de Probit, foram interpoladas as

CL50 do e.b.e. da casca e da semente, os quais apresentaram os valores de

53,4 e 56,7 ppm, respectivamente. Testes toxicológicos foram realizados

com o e.b.e. da semente de S. saponaria com camundongos e com coelhos.

Não foi encontrado efeito tóxico de acordo com as normas brasileiras

vigentes para produtos de origem vegetal.

8

Abstract

The resistance’s arisement of Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) with the

decrease of its susceptibility to the synthetic insecticides has stimulated

studies about the activity of plants as an alternative for its control. In this

research, biological assays were accomplished in order to verify the

larvicidal activity of the crude ethanol extract (c.e.e.) of Sapindus saponaria

in the A. aegypti, in laboratory conditions. The botanical material was

collected, dried in greenhouse of forced air to 40°C, ground, percoleted in

etanol at room temperature for 72 hours, filtrated, concentrated in rotative

evaporator and dried in a fume-hood with hot air supply. The extract was

solved in dimethylsulphoxide (DMSO) and the solutionwere prepared using

distilled water. The bioassays were accomplished with 20 larvaes of 3rd

instar of A. aegypti, in glass containers, with 25 mL solution. Reading of

results ocurred 24 and 48 hours after the beginning of the experiment. Five

repetitions were done and the controls were carried out with water and

DMSO. The LC50 of bark and seeds c.e.e. were established by interpolation

using the Analysis Probit Program and the values were 53.4 and 56.7,

respectively. Toxicological tests were accomplished with seed’s c.e.e. of S.

saponaria with mice and rabbits. Toxic effect was not found in the

experiment, according to the Brazilian norms for products of vegetable

origin.

9

1- Introdução

1.1-O uso de plantas como medida de combate a insetos.

No campo da saúde pública, os mosquitos apresentam-se como

vetores das mais diversas doenças como febre amarela e dengue, além de

causarem vários incômodos que vão desde reações alérgicas locais até

reações sistêmicas (Cheng et al. 2003).O aumento da resistência das mais

variadas espécies de insetos aos inseticidas sintéticos provocado pelo uso

indiscriminado desses, bem como os efeitos deletérios na flora e na fauna,

têm promovido a busca de novas alternativas de combate a esses

artrópodes (Ramos & Valle 2003, Cavalcanti et al. 2004, Silva et al. 2004).

O uso de substâncias naturais como larvicida tem concentrado a atenção de

pesquisadores em diversos países. Extratos brutos, óleos essenciais, bem

como princípios isolados de plantas, têm demonstrado bioatividade em

várias espécies de insetos (Silva et al. 1998b, Pizarro et al. 1999, Cheng et

al. 2003, Silva et al. 2003, Cavalcanti et al. 2004, Harve & Kamath 2004,

Silva et al. 2004, Wandscheer et al. 2004, Luna et al. 2005, Prajapati et al.

2005).

O primeiro trabalho com plantas do Cerrado foi o de Silva et al. (1996)

em que o extrato bruto etanólico (e.b.e.) da casca do caule de Magonia

pubescens L. (Sapindaceae) mostrou ação larvicida sobre Aedes aegypti

em laboratório e, posteriormente, Silva et al. (2003) demonstraram sua

aplicabilidade em campo. Estudos químicos subseqüentes guiados por

bioensaios, evidenciaram a presença de taninos catéquicos como principais

constituintes ativos do e.b.e. de M. pubescens contra o 3º estádio de A.

aegypti (Silva et al. 2004). Isso criou perspectivas de aplicação desse

produto sobre outras espécies de insetos, assim como a pesquisa sobre

plantas pertencentes à mesma família.

10

1.2-Sapindus saponaria

Sapindus saponaria, uma planta pertencente à família Sapindaceae, é

encontrada na extensão da Mata Amazônica até o Cerrado. Possui

característica rústica, sendo utilizada para paisagismo e construção civil.

Floresce nos meses de abril/junho e a maturação dos frutos ocorre de

setembro a outubro. Pode ser caracterizada como árvore de porte médio,

atingindo entre cinco e nove metros de altura, e as folhas são compostas

imparipenadas com sete folíolos glabros, medindo de 10 a 16 cm de

comprimento por três a quatro cm de largura (Fig. 1A e Fig. 1B) (Lorenzi

1992).

O fruto de S. saponaria é utilizado como inseticida e repelente no

meio popular. Boiça et al. (2005) utilizaram extrato aquoso a 10% contra

larvas de Plutella xylostella em couve e obtiveram 100% de mortalidade.

Além disso, alguns estudos demonstram as propriedades bioquímicas

de S. saponaria. Pott & Pott (1994) isolaram saponinas sem caracterizar as

atividades biológicas e Castro et al. (1999) demonstraram a neutralização

hemorrágica induzida pelo veneno da serpente Bothrops asper pelo extrato

das folhas dessa planta. Albiero et al. (2002) estudaram o potencial anti-

úlcera gástrica do extrato das folhas e dos frutos de S. saponaria em ratos

pela diminuição da concentração de ácido clorídrico gástrico.

A grande disponibilidade de S. saponaria no Cerrado, associado a

um número reduzido de investigações sobre essa planta, motivaram

estudos em relação a sua capacidade larvicida contra A. aegypti, o principal

vetor do dengue.

11

Figura 1. Aspectos de Sapindus saponaria. A - Caule e copa da árvore. B - Frutos e folhas.

12

1.3-Dengue

O dengue é hoje um dos principais problemas de saúde pública do

mundo. Cerca de 50 a 100 milhões de pessoas infectam-se anualmente em

todos os continentes, exceto na Europa, e aproximadamente 500 mil

necessitam de hospitalização (Stephenson 2005).

No Brasil, há circulação dos sorotipos 1, 2 e 3 em 24 estados (Fig. 2).

Em 2004, registraram-se mais de 107 mil casos, sendo confirmados 81

casos de febre hemorrágica do dengue (FHD), com 3 óbitos (MS 2005). Na

região Centro-Oeste, o estado de Goiás foi o que apresentou maior número

de casos: 8.552 com 18 ocorrências da FHD.

Figura 2. Sorotipos circulantes do vírus do dengue nos estados do Brasil. (MS 2005)

13

A abrangência dessa doença em todas as regiões deste país (Fig. 3)

deve-se à capacidade de proliferação do seu principal vetor: o A. aegypti.

Esse mosquito, juntamente com todos da família Culicidae, constituem o

maior grupo de hematófagos entre os insetos que molestam o homem e

animais, tanto em áreas urbanas quanto rurais (Consoli & Oliveira 1994).

Figura 3. Casos notificados do dengue por semana epidemiológica segundo regiões do Brasil. (MS

2005)

Em algumas áreas da África, o A. aegypti apresenta comportamento

silvestre sendo, por isso, considerado nativo daquele continente.

Provavelmente, esse mosquito apareceu nas Américas por meio das

navegações européias no período das colonizações, quando eram

transportados negros africanos para serem vendidos como escravos em

colônias americanas. Adaptou-se muito bem às condições urbanas,

proliferando em criadouros com água limpa e com pouca poluição,

dispersando-se por todas as regiões do continente, acompanhando a

movimentação humana (Silva et al. 1999, Forattini 2002).

O grande sucesso reprodutivo do A. aegypti em ecótopos artificiais

tem facilitado o adensamento desse mosquito nas cidades situadas na faixa

cosmotropical e a conseqüência é o aumento dramático dos casos do

dengue nos centros urbanos (Consoli & Oliveira 1994, Silva et al. 1999).

Esse mosquito foi considerado erradicado do Brasil nas décadas de

50 e 70, sendo reintroduzido em 1976. A partir de então, as condições

sócio-ambientais propícias possibilitaram a sua dispersão e avanço do

dengue (MS 2004).

Silva et al. (1991a,b) fizeram o primeiro relato do A. aegypti em

Goiânia. Essa cidade tem funcionado como centro de dispersão do

mosquito para outras cidades através da movimentação e deslocamento da

população (Silva et al. 2002).

Como ainda não existe uma vacina pronta para uso na prevenção do

dengue, o combate se restringe às ações contra o vetor, que se concentram

em 4 pontos básicos: saneamento do meio ambiente, ações de educação,

14

comunicação e informação; combate ao vetor com os inseticidas químicos e

biológicos; além de métodos físicos através da destruição de criadouros

potenciais para esse mosquito (FUNASA 2002).

Além dessas ações não serem realizadas adequadamente, outros

fatores atrapalham o combate a esse vetor. O A. aegypti é altamente

antropofílico e cria-se em qualquer tipo de coleção de água límpida em

áreas urbanas (Silva et al. 1998a). Porém, já foi observada uma adaptação

desse mosquito em criadouros artificiais com água poluída (Silva et al.

1999). Os ovos de A. aegypti apresentam uma forte resistência aos

períodos de seca podendo permanecer viáveis por mais de 400 dias fora da

água. Nessa fase de resistência, os ovos podem passar intactos da ação

dos inseticidas, pois estes agem apenas sobre as larvas e adultos (Silva &

Silva 1999). O crescimento da indústria de embalagens descartáveis e a

expansão desorganizada dos centros urbanos, com o grande acúmulo de

lixo inorgânico que servem como criadouros, têm dificultado o controle do A.

aegypti (FUNASA 2002). Por último, o uso de inseticidas sintéticos é a

principal forma de ação para combater esse vetor. Os inseticidas derivados

de produtos naturais já foram muito utilizados até a década de 1940,

quando foram substituídos pelos sintéticos, porém, seu uso indiscriminado e

contínuo promoveu uma resistência a esses produtos (Thavaselvam et al.

1993, Failloux et al. 1994, Macoris et al. 1995, Raw lins 1998, Carvalho &

Silva 2000, Macoris et al. 2003).

Após mais de 30 anos de uso do temephos contra A. aegypti no

sudeste da Ásia, estudos demonstraram a diminuição da sua efetividade

provocada pelo desenvolvimento da resistência nessa espécie de mosquito

(Lee 1984). Paeporn et al. (2003) indentificaram que o mecanismo de

resistência ao temephos ocorre por ação de esterases. Em 1999, a

Fundação Nacional de Saúde iniciou o Programa de Monitoramento da

Resistência a Inseticidas do A. aegypti. No contexto desse programa, vários

pesquisadores trabalharam a fim de identificar localidades que apresentam

cepas resistentes. Nas regiões Sudeste, Centro-Oeste e Nordeste do Brasil,

a suscetibilidade do A. aegypti ao temephos tem diminuído

15

consideravelmente (Carvalho & Silva 2000, Lima et al. 2003, Macoris et al.

2003, Carvalho et al. 2004, Braga et al. 2004). Essa situação aponta para a

necessidade de pesquisas de novos produtos eficazes e mais seguros ao

meio ambiente.

A bactéria entomopatogênica Bacillus thuringiensis israelensis (Bti)

apresentou resultados satisfatórios para o controle de A. aegypti, mas ainda

existem ressalvas em relação ao uso em larga escala desse tipo de

controle, considerando principalmente o alto custo (Polanczyk et al. 2003,

Vilarinhos & Monnerat 2004).

Outra forma alternativa de combate ao A. aegypti são os inibidores de

crescimento (IGR’s), que causam modificações fisiológicas e morfológicas

durante o desenvolvimento do inseto, atuando seletivamente ao invés de

intoxicação direta, sendo assim menos tóxicos para mamíferos do que

outros inseticidas. O IGR diflubenzuron foi testado em larvas de todos os

estádios de A. aegypti apresentando resultados eficientes (Martins & Silva

2004).

O uso de plantas como alternativa de controle ao A. aegypti já é uma

constante. Por se tratar de produto natural, sua degradação é mais simples

e não afetam de forma severa, como os inseticidas sintéticos, a fauna e a

flora (Silva et al. 1998b, Pizarro et al. 1999, Cheng et al. 2003, Silva et al.

2003, Cavalcanti et al. 2004, Harve & Kamath 2004, Silva et al. 2004,

Wandscheer et al. 2004, Luna et al. 2005, Prajapati et al. 2005).

Este trabalho teve como finalidade estudar a capacidade larvicida da

S. saponaria, assim como sua toxicidade em mamíferos com o intuito de

utilizar essa planta, bastante encontrada no Cerrado, na formulação de

novos produtos como nova alternativa de controle ao A. aegypti.

16

2-Objetivos

2.1-Gerais

Procurar novas alternativas de controle e/ou combate do A. aegypti

através do estudo de princípios ativos inseticidas de origem botânica,

utilizando os recursos naturais que dispomos na região Centro-Oeste.

2.1-Específicos

• Obter o extrato bruto etanólico do fruto de S. saponaria;

• Testar o efeito larvicida o e.b.e. obtido sobre A. aegypti;

• Verificar a toxicidade do e.b.e. sobre mamíferos.

17

3-Materiais e Métodos

3.1-Coleta dos frutos e obtenção dos extratos

Foram coletados frutos maduros da S. saponaria, em outubro de

2003, na região central da cidade de Goiânia-Goiás e encontram-se

identificados no herbário da Universidade Federal de Goiás sob o número

28528. Esses foram processados no Laboratório de Bioatividade de Plantas

e Entomologia do Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública (IPTSP)

da Universidade Federal de Goiás (UFG). O material foi dessecado em

estufa de ventilação forçada à temperatura de 40ºC, separou-se a casca da

semente e então cada parte foi moída separadamente em moinho elétrico

de facas, até atingirem baixa granulometria. A quantidade de pó obtido da

casca foi aproximadamente duas vezes a quantidade do produto obtido da

semente.

18

O pó foi armazenado em sacos plásticos até o momento da

percolação a frio. Neste procedimento, o pó foi colocado em um béquer com

capacidade para dois litros até o volume aproximado de um litro.

Acrescentou-se etanol até atingir aproximadamente quatro centímetros

acima do produto. A mistura foi deixada em repouso por 72 horas, protegida

da luz por papel alumínio. Após a percolação, o sobrenadante foi filtrado

com papel filtro do tipo coador de café e concentrado em evaporador

rotativo. O extrato bruto etanólico (e.b.e.) obtido, colocado em placas de

vidro, foi dessecado em uma capela de exaustão com auxílio de ar quente,

até completa evaporação do solvente. Estes produtos foram então

armazenados em dessecador até a utilização nos testes de atividade

larvicida.

3.2-Obtenção das larvas

As larvas de A. aegypti foram retiradas de uma criação em alta escala

do Laboratório de Bioatividade de Plantas e Entomologia do IPTSP/UFG,

onde foram criadas de acordo com a metodologia de Silva et al. (1998b).

Nesta metodologia os mosquitos são mantidos numa câmara climatizada a

27 ± 1ºC, umidade relativa de 80 ± 5% e fotofase aproximada de 12 horas.

As fêmeas são alimentadas em camundongos presos numa tela de nylon

(Fig. 4A) e os machos em um absorvente feminino (tipo o.b.) embebido em

solução açucarada (Fig 4B). A oviposição é feita em copos de vidro âmbar

com água e um papel filtro, tipo coador de café em contato com a água,

onde os ovos são postos. Esse papel filtro é trocado diariamente. O papel

retirado com os ovos, depois de seco, é armazenado em sacos plásticos,

formando uma “ovoteca”. Para a obtenção das larvas, o papel filtro é

colocado em uma bacia plástica com água da rede pública de

abastecimento. Após a eclosão, as larvas são alimentadas com ração para

19

gatos, previamente triturada, até alcançarem o 3° estádio. Esta criação

originou-se de mosquitos capturados em Goiânia em 1993, mantida por

gerações sucessivas até o momento (Silva et al. 2003).

20

Figura 4. A - Alimentação de fêmeas de Aedes aegypti em camundongos presos em tela de nylon.

B – Alimentação de machos de Aedes aegypti em absorvente interno feminino embebido em

água açucarada.

21

Figura 5. A – Copo de vidro âmbar com papel filtro para oviposição das fêmeas de Aedes aegypti. B -

Papel filtro para oviposição com ovos de Aedes aegypti.

3.3-Bioensaios

Os bioensaios foram realizados em câmara climatizada com as

mesmas características da câmara de criação. Para obter a solução-mãe,

pesou-se a quantidade do e.b.e. necessária em balança analítica de alta

precisão. O e.b.e. da semente foi pré-solubilizado em 0,6 mL de DMSO

enquanto que, o e.b.e. da casca foi solubilizado diretamente em água,

posteriormente, foi acrescentado água destilada até atingirem o volume de

100 mL. As soluções-mãe foram então diluídas em água destilada até

atingirem as concentrações desejadas: 500, 250, 100 e 50 ppm para a

primeira bateria de testes e 60, 50, 40, 30 e 20 para a segunda. Foram

usados recipientes de vidro nos quais se colocaram 25 mL da solução a ser

testada juntamente com 20 larvas de 3º estádio de A. aegypti. O uso deste

estádio ocorreu devido a sua maior tolerância ou resistência em relação aos

demais (Silva et al. 2003).

22

Foi utilizada a mesma quantidade de larvas para os grupos

controles. Para o controle da solução do e.b.e. da semente utilizou-se água

destilada e DMSO na mesma quantidade usada para solubilizar o e.b.e. e,

para controle da solução do e.b.e. da casca, utilizou-se água destilada pura.

As leituras de mortalidade foram feitas 24 e 48 horas após o início do

experimento. Realizaram-se cinco repetições de cada concentração testada.

3.4-Testes de toxicidade

Foram realizados os seguintes testes de toxicidade de acordo com a

metodologia de Brito (1994): toxicidade oral aguda, irritação primária da pele

e irritação ocular aguda.

Os testes de toxicidade oral aguda foram realizados com quatro

casais de camundongos, pesando em média 25 g. Antes dos testes, os

camundongos ficavam 12 horas em jejum absoluto, em caixa de polietileno

coberta com grade de arame inox, permanecendo dentro dessas até o final

dos experimentos. As caixas foram acondicionadas em salas apropriadas no

biotério do IPTSP, com fotofase natural de aproximadamente 12 horas,

temperatura média cerca de 28 ±3°C e umidade relativa de 70 ±15%.

Utilizaram-se 75 mg do e.b.e. da semente de S. saponaria na dose de 3

g/kg

23

As doses foram administradas, através de uma sonda, diretamente no

esôfago do camundongo. Os animais permaneciam sem alimentação por

duas horas. Depois recebiam água e ração e eram observados diariamente

por duas semanas para avaliação de sintomas de intoxicação aguda. As

observações prosseguiram por dois meses para análise de intoxicação.

Para o teste de irritação primária da pele foi utilizado um casal de

coelhos, com pesos de 1490 g para a fêmea e de 1310 g para o macho. Os

pêlos foram raspados (cortados) em quatro sítios de aproximadamente 2

cm2, sendo dois para tratamento e dois para controle. Após 24 horas, dois

sítios foram escarificados e dois permaneceram com a pele íntegra; em

seguida aplicou-se 0,5 mL do e.b.e. da semente de S. saponaria em um

sítio escarificado e em um sítio são. As áreas foram cobertas com uma gaze

e removida após 24 horas. Realizaram-se as avaliações, de acordo com a

“Tabela de Draize” para reações cutâneas, 24, 48, 72 horas após aplicação

do produto (Brito 1994).

O teste de irritação ocular aguda foi realizado com um casal de

coelhos, com a fêmea pesando 1490 g e o macho 1310 g. Instilou-se 0,1 mL

do e.b.e. da semente de S. saponaria no olho esquerdo e o direito, não

tratado, permaneceu como controle. As pálpebras foram mantidas juntas por

trinta segundos. As observações foram feitas 24, 48, 72 e 96 horas e no

sétimo dia após a aplicação seguindo-se a graduação de intensidade das

reações do método de Draize (Brito 1994).

4-Resultados e Discussão Os resultados estão apresentados no Artigo 1.

24

5-Referências bibliográficas

Albiero ALM, Sertie JAA, Bacchi EM 2002. Antiulcer activity of Sapindus

saponaria L. in the rat. J Ethnopharmacol 82: 41 - 44.

Boiça ALJ, Medeiros CAM, Torres AL, Chagas NRF 2005. Efeito de

extratos aquosos de plantas no desenvolvimento de Plutella xylostella

(L.)(Lepidoptera:Plutellidae) em couve. Arq Inst Biol 72: 45-50.

Braga IA, Lima JBP, Soares SS, Valle D 2004. Aedes aegypti resisteance

to Temephos during 2001 in several minicipalities in the states of Rio de

Janeiro, Sergipe and Alagoas, Brazil. Mem Inst Oswaldo Cruz 99: 199-

203.

25

Brito AS 1994. Manual de ensaios toxicológicos in vivo. Ed. UNICAMP,

Campinas, SP.

Carvalho LAF, Silva IG 2000. Avaliação longitudinal da atividade do

temephos a 1% sobre o Aedes aegypti. Entomol Vec 7: 191-201.

Carvalho MS, Caldas ED, Degallier N, Vilarinhos PT, Souza LC,

Yoshizawa MA, Knox MB, Oliveira C 2004. Susceptibility of Aedes

aegypti larvae to the insecticide temephos in the Federal District, Brazil.

Rev Saude Pública 38: 623-9.

Castro O, Gutierrez JM, Barrios M 1999. Neutralización del efecto

hemorrágico inducido por veneno de Bothrops asper (Serpentes:

Viperidae) por extractos de plantas tropicales. Rev Biol Trop 47: 605-

616.

Cavalcanti ESB, Morais SM, Lima MA 2004. Larvicidal Activity of essential

oils from Brazilian plants against Aedes aegypti L. Mem Inst Oswaldo

Cruz 99: 541-544.

Cheng SS, Chang HT, Chang ST, Tsai KH, Chen WJ 2003. Bioactivity of

selected plant essential oils against the yelow fever mosquito Aedes

aegypti larvae. Bioresour Technol 89: 99-102

Consoli RAGB, Oliveira RL 1994. Principais mosquitos de importância

sanitária no Brasil. Ed Fiocruz. 255p.

Failloux AB, Ung A, Raymond M, Pasteur N 1994. Inseticide susceptibility

in mosquitoes (Diptera: Culicidae) from French Polynesia. J Med

Entomol 31: 639-44.

Forattini OP 2002. Culicidologia Médica. Ed. EDUSP, São Paulo.

26

FUNASA - Fundação Nacional de Saúde 2002 – Programa Nacional de

Controle da Dengue. 34p.

Harve G, Kamath V 2004. Larvicidal activity of plants extracts used alone

and combination with know synthetic larvicidal agents against Aedes

aegypti. Indian J Exp Biol 42: 1216-1219.

Lee HL 1984. Preliminary studies on the susceptibility of field-collected

Aedes aegypti to abate (temephos) in Kuala Lumpur. Rev Trop Biomed

1: 37-40.

Lima JB, Da-Cunha MP, Silva RC, Galardo AK, Soares SS, Braga IA, Ramos RP, Valle D 2003. Resistance of Aedes aegypti to

organophosphates in several municipalities in the State of Rio de Janeiro

and Espirito Santo, Brazil. Am J Trop Med Hyg 68: 329-333.

Lorenzi IH 1992. Árvores brasileiras – manual de identificação e cultivo de

plantas arbóreas nativas do Brasil. Ed. Plantarum, Piracicaba.

Luna LS, Santos AF, Lima MR, Omena MC, Mendonça FA, Bieber LW, Sant’ana AE 2005. A study of the larvicidal and molluscicidal activities

some medicinal plants from northeast Brazil. J Ethnopharmacol 97: 199-

206. Macoris MLG, Camargo MF, Silva IG, L Takaku, Andrighetti MT 1995.

Modificação da suscetibilidade de Aedes (Stegomyia) aegypti ao

temephos. Rev Pat Trop 24: 31-40.

27

Macoris MLG, Andrighetti MT, Takaku L 2003. Resistance of Aedes

aegypti from the state of São Paulo, Brazil, to organophosphates

insecticides. Mem Inst Oswaldo Cruz 98: 703-708.

Martins F, Silva IG 2004. Avaliação da atividade inibidora do diflubenzuron

na ecdise das larvas de Aedes aegypti (Linnaeus, 1762)(Diptera.

Culicidae). Rev Bras Med Trop 37: 135-138.

MS - Ministério da Saúde 2004. Saúde Brasil 2004 - Uma análise da

situação de saúde. 365 pp.

MS - Ministério da Saúde 2005. Secretaria de Vigilância em Saúde.

Dengue – Boletim da semana 35/2005.13 pp.

Paeporn P, Komalamisra N, Deesin V, Rongsriyam, Eshita Y,

Thongrungkiat S 2003. Temephos resistance in two forms of Aedes

aegypti and its significance for the resistance mechanism. Southeast

Asian J Trop Public Health 34: 786-792.

Pizarro AP, Oliveira AM, Parente JP, Melo MT, Santos CE, Lima PR 1999. Utilization of the waste of sisal industry in control of mosquito

larva. Rev Soc Bras Med Trop 32: 23-29.

Polanczyk RA, Garcia MO, Alves SB 2003. Potencial de Bacillus

thuringiensis israelensis Berliner no controle de Aedes aegypti. Rev

Saúde Pública. 37: 813-816. Pott A, Pott VJ 1994. Plantas do pantanal. MAARA/ EMBRAPA/SPI/CPAP,

Brasília.

Prajapati V, Tripathi AK, Khanuja SP 2005. Insecticidal, repellent and

oviposition-deterrent activity of selected essential oils against Anopheles

28

stephensis, Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus. Bioresour

Technol 96: 1749-1757.

Ramos RP, Valle D 2003. Resistance of Aedes aegypti to

organophosphates in several municipalities in the State of Rio de Janeiro

and Espirito Santo, Brazil. Am J Trop Med Hyg 68: 329-333.

Rawlins SC 1998. Spatial distribution of insecticide resistance in Caribbean

populations of Aedes aegypti and its significance. Rev Panam Salud

Pública 4: 243-251.

Silva HHG, Silva IG 1999. Influência do período de quiescência dos ovos

sobre o ciclo de vida de Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) (Diptera,

Culicidae) em condições de laboratório. Rev Soc Bras Med Trop 32: 349-

355.

Silva HHG, Silva IG, Oliveira CLNS, Elias CN 1999. Adaptação do Aedes

aegypti (Linnaeus, 1762) em criadouros artificiais com água poluída.

Entomol Vect 6: 383-391.

Silva HHG, Silva IG, Rocha C, Lira KS 1998a. Metodologia de criação,

manutenção de adultos e estocagem de ovos de Aedes aegypti

(Linnaeus, 1762) em laboratório. Rev Soc Bras Med Trop 27: 51-63.

Silva HHG, Silva IG, Rocha C, Lira KS, Elias CN, Melo RL, Lima CG 1998b. Atividade larvicida da Magonia pubescens St. Hil (Tingui-do-

Cerrado) como alternativa de combate ao Aedes aegypti (Linnaeus,

1792) (Diptera Culicidae). Rev Soc Bras Med Trop 31: 96.

Silva HHG, Silva IG, Santos RMG 2004. Atividade larvicida de taninos

isolados de Magonia pubescens St. Hil. (Sapindaceae) sobre Aedes

aegypti (Diptera, Culicidae). Rev Soc Bras Med Trop 37:396-399.

29

Silva IG, Araujo ESO, Silva HHG, Cantuaria PB 1991a. Ocorrência de

Aedes (Stegomyia) aegypti (Linnaeus, 1792) em Goiânia. An Soc Ent

Bras 20:459-460.

Silva IG, Cantuaria PB, Silva HHG, Araújo ESO 1991b. Distribuição de

Aedes (Stegomyia) aegypti (Linnaeus, 1792) (Diptera Culicidae) em

Goiânia. Rev Pat Trop 20:1-5.

Silva IG, Guimarães VP, Lima CG, Silva HHG, Elias CN, Mady CM, Silva VVM, Nery AP, Rocha KR, Rocha C 2003. E. Efeito larvicida e

toxicológico do extrato bruto etanólico da casca do caule de Magonia

pubescens sobre Aedes aegypti (Diptera, Culicidae), em criadouros

artificiais. Rev Pat Trop 32: 73-86

Silva IG, Santos AH, Ferri PH, Alves FBN, Melo RQ, Peixoto L, Silva

HHG, Elias CN, Isac E, Lira KS 1996. Ação larvicida de extrato bruto

etanólico de Magonia pubescens St. Hil (tingui-do-Cerrado), sobre o

Aedes aegypti (Lin.) em laboratório. Rev Pat Trop 25: 51-59.

Silva IG, Silva HHG, Guimarães VP, Elias CN, Lima CG 2002. Atividade

de espécies de culicídeos sinantrópicos em uma cidade brasileira com

transmissão do dengue. Entomol Vect 9: 15-24.

Stephenson JR 2005. Undestending dengue pathogenesis: implications for

vaccine design. Bulletin of the World Health Organization 83:308-314.

Thavaselvam D, Kumar A, Sumodan PK 1993. Inseticide susceptibility

status of Anopheles stephensi, Culex quinquefascitus, and Aedes

aegypti in Panaji, Goa. Indian J Malariol 30: 75-79.

30

Vilarinhos PT, Monnerat R 2004. Larvicidal persistence of formulations of

Bacillus thuringiensis var. israelensis to control larval Aedes aegypti. J

Am Mosq Control Assoc 20: 311-4.

Wandscheer CB, Duque JE, Silva MA, Fukuyama Y, Wohlke JL, Adelmann J, Fontana JD 2004. Larvicidal action of ethanolic extracts

from fruits endocarps of Melia azedarach and Azadirachta indica against

the dengue mosquito Aedes aegypti. Toxicon 44: 829-835.

Artigo 1

Efeito larvicida e toxicológico do extrato bruto etanólico do fruto de

Sapindus saponaria L (Sapindaceae) sobre Aedes aegypti L

(Diptera:Culicidae)

31

Larvicidal and toxicological effects of the ethanol crude extract of Sapindus saponaria

L (Sapindaceae) in the Aedes aegypti L (Diptera:Culicidae)

Júlio Henrique de Oliveira1, Heloísa Helena Garcia Silva1, Carmeci Natalina Elias1, Ionizete

Garcia Silva1

1Laboratório de Biologia e Fisiologia de Insetos do Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública da Universidade Federal de Goiás - Rua Delenda Rezende de Melo, S/N – Setor Universitário. Caixa Postal 131 - Goiânia – GO CEP 74605-050 – Fone/Fax (62) 3261.2077 – email: ionizete@iptsp.ufg.br Apoio financeiro: CNPq, CAPES, FUNAPE. RESUMO

Foram realizados bioensaios para verificar a atividade larvicida do extrato bruto etanólico

(e.b.e) de Sapindus saponaria sobre Aedes aegypti e efeito tóxico sobre mamíferos, em

condições de laboratório. O material botânico foi coletado, dessecado em estufa de ar

forçado a 40°C, moído, percolado a frio em etanol por 72 horas, filtrado, concentrado em

evaporador rotativo e dessecado em uma capela com auxílio de ar quente. O e.b.e. obtido

foi solubilizado em dimetilsulfóxido (DMSO) e a solução preparada com água destilada.

Foram realizadas cinco repetições de cada teste com 20 larvas de 3º estádio de A. aegypti,

sendo os controles realizados com água e DMSO. As leituras foram realizadas 24 e 48 horas

após o início do teste. As CL50 do e.b.e. da casca e da semente foram, respectivamente, de

53,4 e 56,7 ppm. Testes toxicológicos foram realizados com o e.b.e. da semente em

camundongos e em coelhos, sendo o produto considerado como atóxico.

Palavras-chaves: Larvicida, Sapindus saponaria, Aedes aegypti, Dengue

32

ABSTRACT

Bioassays were accomplished in order to verify the larvicidal activity of the crude ethanol

extract (c.e.e.) of Sapindus saponaria in the Aedes aegypti and toxicological effect in

mammals, in laboratory conditions. The botanical material was collected, dessecated in

greenhouse of forced air to 40°C, ground, percoleted in ethanol at room temperature for 72

hours, filtrated, concentrated in rotative evaporador and dessecated in a fume-hood with

support of hot air. C.e.e. which was obtained was solved in dimethylsulphoxide (DMSO)

and solutions were obtained with distilled water in order to get the desired concentrations.

Five repetitions were carried out. 20 larvae of 3rd stadium of A. aegypti and the controls

were accomplished with water and DMSO. The results were accomplished with 24 and 48

hours after the beginning of the test. The LC50 of c.e.e. from bark and seeds were of 53.4

and 56.7 ppm, respectively. Toxicological tests were accomplished with c.e.e. of the seed

from S. saponaria with mice and with rabbits, and the product was considerated innocuous.

33

Key-words: Larvicidal, Sapindus saponaria, Aedes aegypti, Dengue.

Introdução

34

O dengue apresenta-se como um dos principais problemas de saúde pública do

mundo, acometendo cerca de 50 a 100 milhões de pessoas anualmente em todos os

continentes, exceto na Europa. Sendo que, aproximadamente 500 mil pessoas necessitam de

hospitalização32.

No Brasil, há circulação dos sorotipos 1, 2 e 3 em 24 estados brasileiros. Em 2004

registraram-se mais de 107 mil casos do dengue e foram confirmados 77 casos de febre

hemorrágica do dengue (FHD)20.

A abrangência dessa doença em todas as partes do nosso país deve-se à capacidade

de proliferação do Aedes aegypti nas condições urbanas em recipientes com água limpa e

com pouca poluição, dispersando-se por todas as regiões do continente com a

movimentação humana10 26.

Como ainda não existe uma vacina pronta para uso na prevenção do dengue, o

combate restringe-se às ações antivetoriais com os inseticidas sintéticos e biológicos, além

de métodos físicos através da destruição de criadouros potenciais11.

Os inseticidas derivados de produtos naturais já foram muito utilizados até a década

de 1940, quando foram substituídos pelos sintéticos. O uso contínuo promoveu o

aparecimento de resistência do mosquito a esses produtos 4 5 9 13 16 17 24 25 33.

O uso de substâncias naturais como larvicida tem concentrado a atenção de vários

pesquisadores. Extratos brutos, óleos essenciais, bem como princípios isolados de plantas

têm demonstrado bioatividade para as mais diversas espécies de insetos6 8 12 15 21 23 28 29 30 31

34.

A Sapindus saponaria (Sapindaceae) é encontrada desde a Mata Amazônica até o

Cerrado. É uma planta rústica que é utilizada para paisagismo e construção civil. Floresce

nos meses de abril a junho e a maturação dos frutos ocorre entre setembro e outubro. Pode

ser caracterizada como árvore de porte médio com cinco a nove metros de altura, folhas

compostas imparipenadas com sete folíolos glabros14.

35

O fruto dessa planta é utilizado como inseticida e repelente no meio popular. Boiça

et al. (2005) utilizaram extrato aquoso contra larvas de Plutella xylostella em couve com

bons resultados. Além disso, essa planta é objeto de estudos de várias áreas do

conhecimento a fim de desvendar propriedades de seus constituintes1 7 18 22.

A grande disponibilidade de S. saponaria na região do Cerrado somada à falta de

estudos para A. aegypti motivaram estudos em relação a sua capacidade larvicida.

Este trabalho teve como objetivo verificar a atividade larvicida do e.b.e. dos frutos

maduros de S. saponaria sobre A. aegypti, na busca de uma alternativa ao controle desse

mosquito.

Materiais e métodos

Foram coletados frutos maduros de S. saponaria, em outubro de 2003, na região

central da cidade de Goiânia-Goiás e processados no Laboratório de Bioatividade de Plantas

e Entomologia do Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública (IPTSP) da Universidade

Federal de Goiás (UFG). O material foi dessecado em estufa de ventilação forçada à

temperatura de 40 ºC, a casca foi separada da semente, e cada parte moída até baixa

granulometria. A quantidade de pó obtido da casca foi aproximadamente duas vezes a

quantidade do produto obtido da semente.

O pó foi colocado em sacos plásticos até o momento da percolação a frio. Neste

procedimento, o pó foi colocado em um béquer com capacidade para dois litros, até a

metade de seu volume, acrescentando etanol até atingir quatro centímetros acima do

produto. Em seguida, o material foi deixado em repouso por 72 horas, protegido da luz por

papel alumínio. Após a percolação, o sobrenadante foi filtrado com papel filtro do tipo

coador de café e concentrado em evaporador rotativo. O e.b.e. foi colocado em placas de

vidro, dessecado em uma capela de exaustão com auxílio de jato de ar quente, e armazenado

em dessecador até a utilização nos testes.

36

As larvas de A. aegypti foram retiradas de uma criação em alta escala do

laboratório do IPTSP/UFG, onde foram criadas de acordo com metodologia já definida27.

Os bioensaios foram realizados em câmara climatizada similarmente a da criação. O e.b.e.

foi pesado em balança analítica de precisão. O e.b.e. da semente foi solubilizado em 0,6 mL

de dimetilsulfóxido (DMSO) enquanto que, o e.b.e. da casca foi solubilizado diretamente

em água, posteriormente, acrescentou água destilada até atingirem o volume de 100 mL. A

partir dessas soluções, foram feitas diluições para atingirem-se as concentrações a serem

testadas. Foram usados recipientes de vidro com 25 mL da solução teste, na qual foram

adicionadas 20 larvas de 3º estádio. Foi utilizada a mesma quantidade de larvas para os

grupos controle. Para controle da solução do e.b.e. da semente utilizou-se água destilada e

DMSO na mesma quantidade usada para solubilizar o e.b.e.. Já para controle da solução do

e.b.e. da casca, utilizou-se água destilada pura.

As leituras de mortalidade foram feitas com 24 e 48 horas após o início do

experimento. Cada teste foi repetido cinco vezes. As larvas eram consideradas mortas

quando havia perda total dos movimentos, com escurecimento do corpo e cápsula cefálica30.

Foram realizados testes de toxicidade, de acordo com metodologia já existente3,

para toxicidade oral aguda, irritação primária da pele e irritação ocular aguda. A toxicidade

oral aguda foi testada em quatro casais de camundongos, pesando em média 25 g com 12 h

em jejum absoluto, acondicionados em salas apropriadas no biotério do IPTSP, com

fotofase natural de aproximadamente 12 horas, temperatura de 28 ±3 °C e umidade relativa

de 70 ±15 %. Utilizou-se 75 mg do e.b.e. da semente de S. saponaria na dose de 3 g/kg.

As doses foram administradas, através de uma sonda, diretamente no esôfago do

camundongo. Os animais permaneciam sem alimentação por duas horas. Depois recebiam

água e ração e eram observados diariamente por duas semanas para avaliação de sintomas

de intoxicação aguda. As observações prosseguiram por dois meses para análise de

intoxicação3.

37

A irritação primária da pele foi testada em um casal de coelhos, com pesos de 1310

g e 1490 g, respectivamente para o macho e para fêmea. Os pelos foram raspados em quatro

sítios de aproximadamente 2 cm2, sendo dois para tratamento e dois para controle. Após 24

horas, dois sítios foram escarificados e dois permaneceram com a pele íntegra; em seguida

aplicou-se 0,5 mL do e.b.e. da semente de S. saponaria em um sítio escarificado e em um

sítio são. As áreas foram cobertas com uma gaze para evitar que o animal removesse o

material e removida após 24 horas. As avaliações ocorreram de acordo com a “Tabela de

Draize” para reações cutâneas 24, 48 e 72 horas após aplicação do produto3.

A irritação ocular aguda foi testada em um casal de coelhos, com 1490 g e 1310 g

para a fêmea e o macho, respectivamente. Instilou-se 0,1 mL do e.b.e. da semente de S.

saponaria no olho esquerdo e o direito, não tratado, permaneceu como controle. As

pálpebras foram mantidas juntas por trinta segundos. As observações foram feitas 24, 48, 72

e 96 horas e no sétimo dia após a aplicação seguindo-se a graduação de intensidade das

reações do método de Draize3.

Resultados e Discussão

O e.b.e. da semente apresentou aspecto oleoso de baixa viscosidade, de cor amarelo

claro, e solubilização incompleta em água destilada e também em DMSO, ficando pequenas

gotículas de óleo na superfície que desaparecem após intensa agitação, formando uma

solução de aspecto leitoso. Já o e.b.e. da casca apresentou um aspecto espesso, semelhante a

graxa, de cor amarelo-âmbar; solubilizou-se completamente em água destilada, dando

origem a uma solução de aspecto levemente leitoso com formação de espuma.

Os primeiros bioensaios foram realizados a partir de uma solução mãe a 500 ppm

dos dois extratos e, posteriormente, a partir de uma solução mãe a 250 ppm. Os resultados

obtidos são apresentados na Tabela 1 e Figs. 1 e 2.

38

As CL50 encontradas foram 53,4 ppm e 56,7 ppm, respectivamente, para o e.b.e. da

casca e da semente. Esses resultados dão perspectivas para estudos subseqüentes de

fracionamento para conhecimento do princípio ativo guiados por bioensaios com o A.

aegypti.

Estudo com o extrato aquoso do fruto de S. saponaria contra Plutella xylostela em

couve obteve 100% de mortalidade no primeiro dia de observação demonstrando seu

potencial larvicida3.

De acordo com experimentos realizados30 a CL50 da solução do e.b.e. da casca do

caule de Magonia pubescens para o 3° estádio de A. aegypti é de 750 ppm. No entanto,

apesar de terem sido utilizadas partes diferentes das plantas, S. saponaria apresentou

atividade larvicida consideravelmente superior à planta citada, com concentrações letais

menores.

Estudos mostraram a atividade do extrato bruto desidratado e de frações contendo

saponina da Agave sisalana e encontraram atividade larvicida sobre o A. aegypti, com CL50

de 322 e 204 ppm, respectivamente, para o extrato e a fração21. Foi isolada saponina de S.

saponaria sem que fosse testada como larvicida22. O e.b.e. das partes estudadas de S.

saponaria apresentou CL50 menor do que dos trabalhos com frações de saponina isolada.

Isso sugere que a bioatividade não advém apenas da saponina, mas que há mais substâncias

bioativas, ou ainda, a interação entre elas.

Ressalta-se que o e.b.e. da casca do fruto é hidrossolúvel o que possibilitou uma

manipulação mais simples e com menores custos.

No teste de toxicologia oral aguda em camundongos não houve registro de morte,

nem sinais de intoxicação aguda, como ataxia, paralisia muscular, sialorréia contínua ou

perda de controle dos esfíncteres. O comportamento dos animais foi normal e não se

encontravam agitados, tensos ou latentes.

39

Os testes de irritação primária da pele não apresentaram formação de nenhum tipo

de eritema ou edema. Aqueles de irritação ocular aguda não apresentaram qualquer sinal de

irritação da mucosa, quando avaliados pelos parâmetros: ocorrência de hiperemia, secreção

ou quimose na conjuntiva, área ou opacidade da córnea, e inflamação da íris. Não houve

irritação de conjuntiva. A íris mostrou-se normal, com pupilas isofotorreagentes, e a córnea,

sem ulceração, com coloração normal e sem opacidade.

Os resultados do efeito larvicida obtidos com o e.b.e. de ambas as partes do fruto de

S. saponaria quando comparados com os resultados de outras plantas podem ser

considerados promissores, abrindo perspectiva para estudos subseqüentes de isolamento do

princípio ativo.

Os resultados dos testes de toxicidade analisados de acordo com as Normas para

Estudo da Toxicidade de Produtos Fitoterápicos19 indicam que o produto testado neste

trabalho é considerado atóxico.

Referências Bibliográficas

1. Albiero ALM, Sertie JAA, Bacchi EM. Antiulcer activity of Sapindus saponaria L. in

the rat. Journal of Ethnopharmacology 82:41-44, 2002.

40

2. Boiça ALJ, Medeiros CAM, Torres AL, Chagas NRF. Efeito de extratos aquosos de

plantas no desenvolvimento de Plutella xylostella (L.)(Lepidoptera:Plutellidae) em

couve. Arquivo do Instituto Biológico 72:45-50, 2005.

3. Brito AS. Manual de ensaios toxicológicos in vivo. Ed. UNICAMP, Campinas, SP,

1994.

4. Carvalho LAF, Silva IG. Avaliação longitudinal da atividade do temephos a 1% sobre

o Aedes aegypti. Entomologia y Vectores 7:191-201, 2000.

5. Carvalho MS, Caldas ED, Degallier N, Vilarinhos PT, Souza LC, Yoshizawa MA,

Knox MB, Oliveira C. Susceptibility of Aedes aegypti larvae to the insecticide

temephos in the Federal District, Brazil. Revista de Saúde Pública 38:623-9, 2004.

6. Cavalcanti ESB, Morais SM, Lima MA. Larvicidal Activity of essential oils from

Brazilian plants against Aedes aegypti L. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz

99:541-544, 2004.

7. Castro O, Gutierrez JM, Barrios M. Neutralización del efecto hemorrágico inducido

por veneno de Bothrops asper (Serpentes: Viperidae) por extractos de plantas

tropicales. Revista de Biologia Tropical 47:605-616, 1999.

8. Cheng SS, Chang HT, Chang ST, Tsai KH, Chen WJ. Bioactivity of selected plant

essential oils against the yelow fever mosquito Aedes aegypti larvae. Bioresource

Technology 89:99-102, 2003.

9. Failloux AB, Ung A, Raymond M, Pasteur N. Inseticide susceptibility in mosquitoes

(Diptera: Culicidae) from French Polynesia. Journal of Medical Entomology 31:639-

44, 1994.

10. Forattini OP. Culicidologia médica. Ed. EDUSP, São Paulo, 2002.

11. FUNASA - Fundação Nacional de Saúde 2002 – Programa Nacional de Controle do

Dengue. 34p.

41

12. Harve G, Kamath V. Larvicidal activity of plants extracts used alone and combination

with know synthetic larvicidal agents against Aedes aegypti. Indian Journal of

Experimental Biology 42: 1216-1219, 2004.

13. Lima JB, Da-Cunha MP, Silva RC, Galardo AK, Soares SS, Braga IA, Ramos RP,

Valle D. Resistance of Aedes aegypti to organophosphates in several municipalities in

the State of Rio de Janeiro and Espírito Santo, Brazil. American Journal of Tropical

Medicine and Hygiene 68:329-333, 2003.

14. Lorenzi IH. Árvores brasileiras – Manual de identificação e cultivo de plantas

arbóreas nativas do Brasil, Ed. Plantarum, Piracicaba 2002.

15. Luna LS, Santos AF,Lima MR, Omena MC, Mendonça FA, Bieber LW, Sant’ana AE.

A study of the larvicidal and molluscicidal activities os some medicinal plants from

northest Brazil. Journal of Ethnopharmacology 97:199-206, 2005.

16. Macoris MLG, Camargo MF, Silva IG, Takaku L, Andrighetti MT. Modificação da

suscetibilidade de Aedes (Stegomyia) aegypti ao temephos. Revista de Patologia

Tropical 24:31-40, 1995.

17. Macoris MLG, Andrighetti MT, Takaku L. Resistance of Aedes aegypti from the state

of São Paulo, Brazil, to organophosphates insecticides. Memórias do Instituto

Oswaldo Cruz 98:703-708, 2003.

18. Medrano B, Esther R, Trujillo S. Extraccion, estudio quimico y determinación de la

actividad esparmicida de las saponinas de Sapindus saponaria L. (boliche). Lima.

180, 1993.

19. MS - Ministério da Saúde – Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Brasília, DF.

Portaria no 116 de 08 de agosto de 1996.

20. MS - Ministério da Saúde – Secretaria de Vigilância em Saúde. Dengue – Boletim da

semana 35/2005, 2005.

42

21. Pizarro APB, Oliveira AM, Parente JP, Melo MT, Santos CE, Lima PR. Utilization of

the waste of sisal industry in control of mosquito larvae. Revista da Sociedade

Brasileira de Medicina Tropical 32:23-29, 1999.

22. Pott A, Pott VJ. Plantas do pantanal. MAARA/ EMBRAPA/SPI/CPAP, Brasília,

1994.

23. Prajapati V, Tripathi AK, Khanuja KK, Khanuja SP. Insecticidal, repellent and

oviposition-deterrent activity of selected essential oils against Anopheles stephensis,

Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus. Bioresource Technology 96:1749-1757,

2005.

24. Ramos RP, Valle D. Resistance of Aedes aegypti to organophosphates in several

municipalities in the State of Rio de Janeiro and Espirito Santo, Brazil American

Journal of Tropical Medicine and Hygiene 68:329-333, 2003.

25. Rawlins SC. Spatial distribution of insecticide resistance in Caribbean populations of

Aedes aegypti and its significance. Revista Panamericana de Salud Pública 4:243-251,

1998.

26. Silva HHG, Silva IG, Oliveira CLNS, Elias CN. Adaptação do Aedes aegypti

(Linnaeus, 1762) em criadouros artificiais com água poluída. Entomologia y Vectores

6:383-391, 1999.

27. Silva HHG, Silva IG, Rocha C, Lira KS. Metodologia de criação, manutenção de

adultos e estocagem de ovos de Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) em laboratório.

Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 27:51-63, 1998a.

28. Silva HHG, Silva IG, Rocha C, Lira KS, Elias CN, Melo RL, Lima CG. Atividade

larvicida da Magonia pubescens St. Hil (Tingui-do-Cerrado) como alternativa de

combate ao Aedes aegypti (Linnaeus, 1792) (Diptera Culicidae). Revista da Sociedade

Brasileira de Medicina Tropical 31:96, 1998b.

43

29. Silva HHG, Silva IG, Santos RMG. Atividade larvicida de taninos isolados de

Magonia pubescens St. Hil. (Sapindaceae) sobre Aedes aegypti (Diptera, Culicidae).

Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 37:396-399, 2004.

30. Silva IG, Guimarães VP, Lima CG, Silva HHG, Elias CN, Mady CM, Silva VVM,

Nery AP, Rocha KR, Rocha C. Efeito larvicida e toxicológico do extrato bruto

etanólico da casca do caule de Magonia pubescens sobre Aedes aegypti (Diptera,

Culicidae), em criadouros artificiais. Revista de Patologia Tropical 32:73-86, 2003.

31. Silva IG, Santos AH, Ferri PH, Alves FBN, Melo RQ, Peixoto L, Silva HHG, Elias

CN, Isac E, Lira KS. Ação larvicida de extrato bruto etanólico de Magonia pubescens

St. Hil (tingui-do-Cerrado), sobre o Aedes aegypti (Lin.) em laboratório. Revista de

Patologia Tropical 25:51-59, 1996.

32. Stephenson JR. Understanding dengue pathogenesis: implications for vaccine design.

Bulletin of the World Health Organization 83:308-314, 2005.

33. Thavaselvam D, Kumar A, Sumodan PK. Inseticide susceptibility status of Anopheles

stephensi, Culex quinquefascitus, and Aedes aegypti in Panaji, Goa. Indian Journal of

Malariology 30:75-79, 1993.

34. Wandscheer CB, Duque JE, Silva MA, Fukuyama Y, Wohlke JL, Adelmann J,

Fontana JD. Larvicidal action of ethanolic extracts from fruits endocarps of Melia

azedarach and Azadirachta indica against the dengue mosquito Aedes aegypti.

Toxicon 44:829-835, 2004.

Tabela 1. Suscetibilidade de larvas de 3º estádio de Aedes aegypti ao extrato bruto

etanólico (e.b.e.) de Sapindus saponaria após 48 horas de exposição. (n = 100 larvas)

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E. B. E. CL50 (ppm)

IC 95%

Casca 53,4

48,9 – 59,9

Semente 56,7

52,9 – 65,1

CL50 – Concentração letal que causa mortalidade de 50% das larvas.

IC 95% – Intervalo de confiança com probabilidade de 95%.

ppm – parte por milhão.

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Figura 1 Mortalidade de larvas de 3° estádio de Aedes aegypti submetidas ao extrato bruto

etanólico da casca e da semente de Sapindus saponaria, com leituras em 48 horas, em

condições de laboratório (Solução mãe de 500 ppm).

Figura 2. Mortalidade de larvas de 3° estádio de Aedes aegypti, submetidas ao extrato bruto

etanólico da casca e da semente de Sapindus saponaria com leituras em 48 horas, em

condições de laboratório (Solução mãe de 250 ppm).

Instruções aos autores

Objetivo e política editorial

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A Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical destina-se à publicação de trabalhos científicos relacionados às doenças infecciosas e parasitárias, medicina preventiva, saúde pública e assuntos correlatos. A revista tem periodicidade bimestral e aceitará trabalhos de pesquisadores brasileiros ou estrangeiros desde que obedeçam às normas e que sejam aprovados pelos relatores indicados pelos Editores. 1. Além de Artigos, a revista publica Comunicações para a divulgação de resultados de ensaios terapêuticos, notas prévias, relatórios técnicos, relatos de casos, cartas ao editor, fatos históricos, resenhas bibliográficas e resumos de teses. Artigos de revisão e editoriais serão publicados por solicitação do Corpo Editorial. 2. Os trabalhos devem ser originais e inéditos, digitados em espaço duplo, deixando margem de 3 cm à esquerda e remetidos em três vias ao endereço abaixo, sendo uma a original. Após revisão, pede-se que os trabalhos sejam enviados em disquete, devidamente acompanhados de uma cÓpia impressa da versão revisada.

Preparação de originais

3. Normas para enviar trabalhos, após revisão, em meio eletrônico; obedecer os seguintes requisitos:

a) podem ser utilizados disquetes MS-DOS compatíveis nos formatos 3 1/2" ou 5 1/4". Disquetes de Macintosh no formato 3 1/2" também serão aceitos. Elimine dos disquetes todos os arquivos não pertinentes ao artigo enviado. Escreva na etiqueta do disquete: título do artigo, nome do autor, nome do arquivo, editor de texto utilizado e nome dos arquivos acessórios (folhas de estilos, gráficos, tabelas etc);

b) envie artigos compatíveis com os seguintes processadores de texto: Word para Windows (versão 6.0 ou anterior), Word para Mac (versão 6.0 ou anterior), outros formatos podem ser aceitos mediante consulta prévia. Nunca envie artigos em formato ASCII (só texto/"text only");

c) ao redigir o texto, o comando de retorno de linha ("Enter") deve ser utilizado exclusivamente no final dos parágrafos. Não adicione espaços extras ou "tabs" ao texto para obter recuo da primeira linha ou centralização de títulos na página. Tampouco retornos ("enters") adicionais para espaçar os parágrafos. Para obter esses efeitos, utilize apenas os comandos de formatação de parágrafo, disponíveis em todos os editores de texto acima;

d) podem ser incluídas tabelas, desde que montadas no próprio editor de texto. Observações e notas de rodapé devem ser, preferencialmente, colocadas após o final do artigo, devidamente numeradas e referenciadas;

e) ilustrações, tabelas e gráficos produzidos em outros programas e "importados" para inclusão no texto devem ser enviados em arquivos anexos, em formatos universais de fácil compatibilidade (TIFF, BMP, PICT, GIF etc). Evite formatos não-padronizados (EPS, WMF etc) e arquivos que só podem ser abertos por programas específicos. De qualquer forma, envie sempre uma cópia bem impressa do gráfico, tabela ou ilustração para eventual reprodução.

4. Os trabalhos devem ser redigidos preferencialmente em português, embora sejam também aceitos trabalhos em inglês e espanhol. A linguagem deve ser clara e precisa, e o texto conciso normalmente não ultrapassando 12 páginas digitadas para Artigos e 6 para Comunicações.

47

5. A seguinte seqüência deve ser observada:

a) título original e traduzido e nome dos autores em letras minúsculas. No rodapé, instituição onde foi realizado o trabalho, filiação dos autores, quando for o caso, órgão financiador e o endereço completo para correspondência, inclusive telefone, fax e e-mail;

b) resumo: máximo de 150 palavras para os artigos e 50 para as comunicações e relatos de casos. Deve ser informativo e não indicativo, apresentando o objetivo do trabalho, como foi realizado, os resultados alcançados e a conclusão. Não usar abreviaturas ou citações bibliográficas. Citar 4 ou 5 palavras-chave, que expressem com precisão o conteúdo do trabalho;

c) abstract: inserido logo após o resumo, deve ser a tradução fiel do mesmo, seguido pelas palavras-chaves;

d) introdução: clara, objetiva, contendo informações que justifiquem o trabalho, restringindo as citações ao necessário;

e) material e métodos: descrição concisa, sem omitir o essencial para a compreensão e reprodução do trabalho. Métodos e técnicas já estabelecidos devem ser referidos por citação;

f) resultados: sempre que necessário devem ser acompanhados por tabelas, figuras ou outras ilustrações, auto-explicativas. Texto e documentação devem ser complementares. Quando aplicáveis, os dados deverão ser submetidos à análise estatística. O conteúdo deve ser informativo, não interpretativo; g) discussão: limitar aos resultados obtidos e conter somente as referências necessárias. O conteúdo deve ser interpretativo e as hipóteses e especulações formuladas com base nos achados;

h) agradecimentos: limitados ao indispensável;

i) referências bibliográficas: digitadas em minúsculas, sem ponto entre as abreviaturas, em espaço duplo, numeradas e organizadas em ordem alfabética pelo último sobrenome do autor; citar todos os autores de cada referência. Quando houver mais de uma citação do mesmo autor, seguir a ordem cronológica. As citações devem ser referidas no texto pelos respectivos números, acima da palavra correspondente, sem vírgula e sem parênteses; na lista de referências, deve seguir o seguinte estilo e pontuação:

Artigos em periódicos (os títulos dos periódicos devem aparecer por extenso): Coura JR, Conceição MJ. Estudo comparativo dos métodos de Lutz, Kato e Simões Barbosa no diagnóstico da esquistossomose mansoni. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 8:153-158, 1974.

Livros: Chandra RK, Newberne PM. Nutrition, immunity and infection: machanisms of interactions. Plenum, New York, 1977.

Capítulos de livros:

Fulton JD. Diagnosis of protozoal diseases. In: Gell PGH, Coombs RRA (ed) Clinical aspects of immunology, 2nd edtition, Blackwell, Oxford, p.133-136, 1968. Resumos de congressos:

Daher RH, Almeida Netto JC, Pereira LIA. Disfunção hepática na malária grave. Estudo de 161 casos. In: Resumos do XXXI Congresso da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, Brasília p.16, 1995.

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Teses: Tavares W. Contaminação do solo do Estado do Rio de Janeiro pelo Clostridium tetani. Contribuição ao conhecimento da distribuição natural do bacilo tetânico. Tese de Doutorado, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, RJ, 1975. Somente deverão ser citados os trabalhos publicados. Dados não publicados ou comunicações pessoais devem ser referidos no texto da seguinte forma: (AB Figueiredo: comunicação pessoal, 1980) e (CD Dias, EF Oliveira: dados não publicados). 6. Tabelas: numeradas em algarismos arábicos e dotadas de título descritivo conciso. Manter seu número ao mínimo necessário e lembrar que tabelas muito grandes são difíceis de serem lidas. Devem ser digitadas em espaço duplo em folhas separadas, sem linhas verticais e as unidades referidas no título de cada coluna. Todos os dados das tabelas, inclusive o título, devem ser em minúsculas, exceto as siglas.

7. Ilustrações: de boa qualidade e numeradas consecutivamente em algarismos arábicos. Além das fotografias, os gráficos, quadros etc. devem ser referidos no texto como Figuras. Anotar no verso com lápis o número da figura e o nome do autor e trabalho. Listar as legendas numeradas com os respectivos símbolos e convenções em folha separada e em espaço duplo. O número de ilustrações deve ser restrito ao mínimo necessário.

8. Comitê de ética: no trabalho de pesquisa envolvendo seres humanos, deverá constar o nome do Comitê de Ética que o aprovou.

9. Permissão dos autores: anexar carta com o ciente de todos os autores concordando com a publicação.3. Normas para enviar trabalhos, após revisão, em meio eletrônico; obedecer os seguintes requisitos:

a) podem ser utilizados disquetes MS-DOS compatíveis nos formatos 3 1/2" ou 5 1/4". Disquetes de Macintosh no formato 3 1/2" também serão aceitos. Elimine dos disquetes todos os arquivos não pertinentes ao artigo enviado. Escreva na etiqueta do disquete: título do artigo, nome do autor, nome do arquivo, editor de texto utilizado e nome dos arquivos acessórios (folhas de estilos, gráficos, tabelas etc); b) envie artigos compatíveis com os seguintes processadores de texto: Word para Windows (versão 6.0 ou anterior), Word para Mac (versão 6.0 ou anterior), outros formatos podem ser aceitos mediante consulta prévia. Nunca envie artigos em formato ASCII (só texto/"text only");

c) ao redigir o texto, o comando de retorno de linha ("Enter") deve ser utilizado exclusivamente no final dos parágrafos. Não adicione espaços extras ou "tabs" ao texto para obter recuo da primeira linha ou centralização de títulos na página. Tampouco retornos ("enters") adicionais para espaçar os parágrafos. Para obter esses efeitos, utilize apenas os comandos de formatação de parágrafo, disponíveis em todos os editores de texto acima;

d) podem ser incluídas tabelas, desde que montadas no próprio editor de texto. Observações e notas de rodapé devem ser, preferencialmente, colocadas após o final do artigo, devidamente numeradas e referenciadas.

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