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BACTBACTÉÉRIAS RIAS ANAERANAERÓÓBIAS BIAS

ESTRITASESTRITAS

MICROBIOLOGIA ORAL - TP

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• As bactérias anaeróbias estritas são mo que não podem viver na presença de O2, uma vez que o O2 os inibe ou mata.

• Possuem um escasso poder de síntese, de tal forma que o seu crescimento em meios sintéticos quimicamente definidos depende em boa medida do aporte de diversos factores de crescimento, especialmente de vitaminas.

• Podem ter diversas enzimas (lipases, proteases, peptidases, etc) que lhes permitem actuar sobre diversos produtos orgânicos.

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• A degradação e/ou fermentação de compostos orgânicos conduz à formação de 3 tipos de substâncias:

Compostos simples – utilizados em processos de síntese

Compostos intermédios – utilizados para a obtenção de energia

Compostos terminais ou catabolitos – que são devolvidos ao meio

• A fermentação de glícidos determina a formação de ácidos gordos de cadeia curta

• A descarboxilação de a.a. origina catabolitos fétidos ou pútridos (aminas voláteis) e catabolitos sem odor

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1. PODER PATOGÉNICOAs infecções provocadas pelas bactérias anaeróbias são essencialmente de dois tipos

• Infecções específicas• Infecções mistas ou polibacterianas– quando as

bactérias se associam a outras do mesmo ou distinto tipo respiratório

PARTICULARIDADES DO ESTUDO DE BACTÉRIAS ANAÉRÓBIAS

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3. TÉCNICA GERAL

3.1. Colheita e meio de transporte• Deve-se evitar ao máximo o contacto das

amostras com o oxigénio do ar

• A colheita é executada por intermédio de cones de papel

• Se necessário, colocar as amostras num meio de transporte

2. HABITAT• Meio ambiente (germes telúricos)• Flora de Veillon

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3.2. Exame directo da amostra

•Exame a fresco – mobilidade espiroquetasbacilos móveis

•Exame corado – coloração de Gram morfologiaGram + /Gram -

O exame directo de produtos patológicos permite também observar o aspecto monobacteriano ou polibacteriano da amostra

Escolha dos meios de cultura apropriados

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3.3. Meios de cultura

• Utilização de meios de cultura para bactérias anaeróbias

Meios líquidos de enriquecimentoRosenow (com ou sem cisteína)Schaedler e Wikins-chalgren

Meios sólidos não selectivosMeio gelosado TYGVFSchaedlen

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3.3. Meios de cultura (cont)

Meios sólidos selectivosVancomicina (7,5µg/ml)Kanamicina (100µg/ml)Bilis (20%) – BacteroidesVerde Brilhante - Fusobacterium

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3.4. Obtenção de anaerobiose

Dois procedimentos são geralmente efectuados:

A) Eliminação do oxigénio dos meios de cultura (utilizam-se meios profundos regenerados)

B) Absorção do oxigénio na amostra de inoculação

• Jarras de anaerobiose (H2 + CO2) (1)• Sacos de anaerobiose (2)• Câmara de anaerobiose (3)

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(1)

(2)

(3)

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3.5. Métodos de identificação

A) Identificação presuntiva

B) Identificação definitiva- Galerias bioquímicas (bactérias

fermentativas)- Hidrólise da esculina- Sensibilidade à vancomicina e colistina- Provas de ADN- Perfil proteico por PAGE

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AQUANDO DO ESTUDO DOS ANAERÓBIOS DEVE-SE EVITAR (SE POSSÍVEL):

Fazer a colheita com a zaragatoaContaminar a amostra com a flora comensalDeixar a amostra várias horas, sem proceder à sua análise laboratorialDesprezar o exame microscópico directoUtilizar meios de cultura que não sejam recentes e que não tenham sido regeneradosDeixar as placas de Petri, depois de inoculadas, em contacto com o arNão ter em atenção o controlo de anaerobiose nas jarras utilizadas para esse fimDeitar fora, as placas inoculadas, após 48 h de incubação

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ESTUDO DE GÉNEROS BACTERIANOS ANAERÓBIOS COM INTERESSE EM PATOLOGIA ORAL

1. Esporulados

2. Não esporulados

Atendendo à sua morfologia, os anaeróbios com interesse clínico classificam-se em 2 grandes grupos:

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1. Esporulados – constituídos por bacilos Gram +, geralmente móveis, com esporo central, subterminal ou terminal que pode ser ou não deformante. Dentro deste grupo encontram-se os clostridios que são subdivididos de acordo com o processo patológico que determinam.

2. Não esporulados – compreendem conjunto heterogéneo de m.o., que inclui cocos e bacilos, Gram(+) , Gram(-) e espiroquetas

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BACILOS GRAM POSITIVOS

Clostridium

ANAERÓBIOS ESPORULADOS

No quadro seguinte encontra-se a divisão deste grupo de acordo com o processo patológico.

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BACILOS GRAM NEGATIVOS –IMÓVEIS

Bacilos não fermentativos, com pigmento

Porphyromonas

Bacteroides

Bacilos fermentativos, com pigmento

Prevotella (P. meleninogenica, P. intermedia)

ANAERANAERÓÓBIOS NÃO ESPORULADOSBIOS NÃO ESPORULADOS

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Porphyromonas spp.

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Bacteroides in Bacteroides Bile Esculin Agar (BBE)

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Prevotella melaninogénica

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Bacilos fermentativos, sem pigmento

Prevotella - P.buccalis, P. bivia

BacteroidesB. tonsythus – Patogenicidade demonstradaB. gracilis, B. ureolyticus

Mitsuokella - M. dentalis

FusobacteriumF. nucleatum, F. periodonticumF. alocis e F. sulci

Leptotrichia - L. buccalis

BACILOS GRAM NEGATIVOS –IMÓVEIS (cont)

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BACILOS GRAM NEGATIVOS – MÓVEIS

Selenomonas

Centipeda

Wolinella recta

BACILOS GRAM POSITIVOS

Bifidobacterium

Eubacterium

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COCOS GRAM POSITIVOS

Veillonella - V. parvula, V. dispar, V. atypica

As espécies de Veillonella obtêm a sua energia pela fermentação de ácidos orgânicos (piruvato e lactato). Os seus produtos finais incluem acetato, propionato, CO2 e H2. Este metabolismo apresenta um grande potencial protector em relação à formação de cáries (ác. láctico).

COCOS GRAM POSITIVOS

Peptococcus

Peptostreptococcus

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ESPIROQUETAS

Treponema

T.pallidum

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FACTORES A CONSIDERAR QUANDO SE TRATA DE UMA INFECÇÃO PRESUNTIVA DEVIDO A A BACTÉRIAS ANAERÓBIAS:

A maior parte destes m.o. é comensal, e poucos causam doença (infecção endógena)

Para causarem doença, têm que se espalhar para além das barreiras normais

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São necessárias condições favoráveis à propagação como:

- trauma- destruição dos tecidos- aporte vascular comprometido- complicação de uma infecção preexistente que

produza necroseGeralmente são infecções mistas, formadas por aeróbios e anaeróbiosOs organismos anaeróbios tendem a ser encontrados em abcessos ou em tecidos necróticosO tratamento não necessita ser dirigido a todos os mo no local infectado.