Micologia médica

• Laboratório Clínico• 4o ano Biomedicina

Classificação dos fungos

Classificação dos fungosAscomycotina (ascomicetos) – esporos sexuados = formação de um saco ou asco contendo os produtos da meiose, 4 ou 8 espsoros (ascoporos)

- esporos assexuados = conidios externos nas pontas das hifasEx. Trichophyton, Microsporum, Blastomyces

Basidiomycotina (basidiomicetos) – fusão sexuada = formação de organela em forma de clava, basidio,4 produtos da meiose (basiodiosporos)

- esporos assexuados = conidios externos nas pontas das hifasEx. Cryptococcus neoformans

Classificação dos fungosDeuteromycotina (fungos imperfeitos) – classe artificial incluídas todas as formas cujo processo sexuado ainda é desconhecido. Morfologia semelhante aos ascomicetosEx. Epidermophyton, Sporothrix, especies de candida

Zygomycotina (ficomicetos) – micélio não é septado - fusão sexuada resulta na formação de uma célula

quiescente e de parede espessa = zigosporo - esporos assexuados = produzidos em número indefinido

na estrutura esporangioEx. Rhizopus nigrans (apenas patógenos oportunistas)

EB FC D

Tipos de conídias

A

Crescimento e isolamento dos fungos

• ágar Sabouraud - cultivo, isolamento e identificação de fungos patogênicos e leveduras • crescimento fungos - altas concentrações de carboidratos

• inibidores de microflora acompanhante - ciclohexemida (500mg/L), penicilina (20.000UI/L), estreptomicina (40mg/L), cloranfenicol (40mg/L)

• detecção de leveduras - 40mg/L de neomicina e 20.000UI/L de penicilina

•isolar Candida albicans - Sabouraud com 4% de dextrose adicionado de cloreto de trifeniltetrazolio (TTC) (100mg/L)

• pH levemente ácido - inibe o desenvolvimento de algumas bactérias e de algumas espécies de fungos

• período de incubação - mínimo 3 dias a 25ºC

• ágar Sabouraud glicose - meio adequado para o isolamento dermatófitos

• Ágar Sabouraud com cloranfenicol - meio usado quando se deseja inibir o crescimento bacteriano e realizar a contagem de fungos.

Tipos de infecção Microrganismos causais DoençaSuperficial Malassezia furfur Pitiríase versicolor

Cutânea Trichophyton, epidermophyton e especies de Microsporum

Dermatofitose (pele, couro cabeludo unhas) Candidiase na pele, candidiase oral (sapinho) das mucosas

Subcutânea Sporothrix schenkii Esporotricose

Profunda (sistemica) Blastomyces dermatidis, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum, Paracoccidioides brasiliensis

Blastomicose, coccicioidomicose, histoplasmose, paracoccicioidomicose

Oportunista sistemica

Aspergillus fumigatus e outras especies de Aspergillus, Candida albicans e outras especies, Cryptococcus neoformans e especies de Mucor e Rhizopus

Aspergilose, candidiase, criptococose, zigomicose

Principais infecções fúngicas e microrganismos causais

Micoses superficiais

Tinea versicolor = Pitiríase versicolor

Infecção superficial leve e comum – Malassezia furfur, fungo semelhante a levedura, membro da microbiota normal da pele

Afeta jovens na puberdade provavelmente está relacionada com mudanças hormanais e aumento da secreção sebácea. Crianças também são afetadas. Mulheres e homens são igualmente afetados

Temperaturas altas e humidade favorecem a ocorrência de pitiríase versicolor

Crescimento no interior da pele (estrato córneo) de cachos de células esféricas, brotamento parede espessa e de hifas curtas e curvas

Máculas múltiplas e escamas de aparecimento variável (hipopigmentada, hiperpigmentada, marrom escuro ou eritematosa) rodeadas por pele normal são lesões típicas de pitiríase versicolor

Extensão e severidade das lesões tende a ser pior em climas tropicais. Áreas afetadas: tórax, costas, abdome, pescoço e braço

Coloração PAS - pele

Cultura de Malassezia furfur agar Dixon's

Micoses superficiais

Tinea versicolor = Pitiríase versicolor

Diagnóstico – baseado dados clínicos. Forma rápida de confirmar o diagnóstico utilizar Wood's lamp = fluorescencia amarelo a amarelo-verde

Tratamento – sulfeto de selênio a 1%, ketoconazol, fluoconazol e itraconazol

Malassezia furfur requer cadeias longas de ácidos graxos (adicionar óleo de oliva ao meio). Levedura cresce em 3-7 dias a 30°-37°C. (colonias amarelo-marrom cremoso). Leveduras podem ser isoladas de cateteres contaminados

365 nm

Micoses superficiais

Tinea nigra = pitiríase nigra, ou tinea nigra palmares

Infecção superficial do estrato córneo – Exophiala werneckii, mais recentemente classificado como Hortaea werneckii.

Tinea nigra é rara. Mais frequente em climas tropicais. Adquirida pelo contato com vegetação, madeira e solo

Doença normalmente assintomática. Máculas castanho clara a negra. Mais comum no estrato córneo palmar ou plantar

Raspado superficial em 10% KOH apresenta hifas septadas e fragmentadas (1.5 a 5 µm de diametro). Células alongadas em brotamento ( 3 X 10 µm) em clusters.

Inocular espécimens clínicos no agar glicose sabouraud, incubar 30°C – 21 dias. Tolera 10% NaCl

Tratamento – uso tópico de antifúngicos. Agentes antifúngicos sistemicos, itraconazole tervinafine

Horteae werneckii hifa pele - KOH

Horteae werneckii Levedura - conidia

Micoses superficiaisPiedra

Fungo encontrado no solo clima tropical (piedra negra e branca) e água, vegetais, mamíferos e aves (piedra branca). Faz parte da flora normal da boca, pele e nariz (piedra branca)

Nódulos duros e negros (Piedra negra) em torno dos fios de cabelo por Piedraia hortae

Nódulos de consistência mais macia, de coloração branca a castanho clara (piedra branca) causado por Trichosporon beigelii formam-se nos pelos axilares, púbicos barba e nos cabelos

Colonias de Piedraia hortae tem crescimento lento, são pequenas e encurvadas, com cor marrom escuro a preto.

Colonias deTrichosporon colonies são leveduras-like, crescimento rápido,brancas ou amareladas. Produzem urease. Produzem pseudohifas e hifas em agar cornmeal tween 80 a 25°C após 72 h de incubação. A principal característica microscópica desse genero é a produção de artroconídia, que são unicelulares, cúbicas e alongadas em forma.

Terapia - raspagem de áreas afetadas e aplicação de ácido salicídico, formaldeído a 2% ou cremes azois. Terapia oral com ketoconazol ou terbinafine tb tem sido utilizada. Recidivas são frequentes, mesmo após terapia adequada.

Piedraia hortae

Trishosporon beigelii

Micoses cutâneas

Fungos que invadem apenas o tecido queratinizado superficial - pele, cabelos e unhas

Fungos dermatófitos classsificados em tres generos: Epidermophyton, Microsporum e TrichophytonReino: FungiFilo: AscomycotaClasse: EuascomycetesOrdem: OnygenalesFamilia: Arthrodermataceae

Espécies só encontradas no solo, outras podem provocar doenças nos seres humanos (parasitismo completo)

Formam colonias agar sabouraud a temperatura ambiente. Formam conidios na cultura em lamina

Trichophyton

Genero: Trichophyton (teleomorph: Arthroderma)

Dermatófito que habita o solo, homens e animais. É um dos fungos que causam infecções humanas do cabelo, pele e unha. Apresentam formas teleomórficas e essas formas classificam o genero em Artroderma

Fungo filamentoso com habilidade de invadir tecidos queratinosos. Fatores de virulencia = enzimas como proteinases, elastase e queratinase

Trichophyton rubrum é o principal agente causador da dermotofitose no mundo. Espécies de Trichophyton podem causar infecções invasivas em hospedeiros imunocomprometidos

Colonias de Trichophyton crescem lentamente a moderado. Coloração branca a amarelo brilhante

Hifas septadas onde observa-se conidiosporos (pouco diferenciado das hifas), microconidia (microaleuriconidia – predominante, forma piriforme produzidas em grandes quantidades - solitarias ou arranjadas em clusters), macroconidias (macroaleuriconidia – muticelular, cilindrica, macia, forma de charuto, produzidas em pequenas quantidades - solitarias ou arranjadas em clusters)

Tratamento : terbinafine, ketoconazol, clotrimazol, itraconazol, naftifine e amorolfine, derivados de azois

Micoses cutâneas

T. mentagrophytes

T. rubrum

Micoses cutâneasMicrosporum

Genero: MicrosporumDermatófito filamentoso queratinofilico. Seu habitat natural é o solo (espécies geofílicas), outros afetam animais (zoofílicas) ou humanos (antropofílicas).

Composto de 17 espécies, detnre elas: M audouinii, M gallinae, M. Ferrugineum, M distortum, M nanum, M canis, M gypseum, M cookei, M vanbreuseghemii

Microsporum é um dos generos que causam a dermatofitose = infecção do cabelo, pele e unha. Tem a habilidade de degradar a queratina e então pode residir na pele e seus arredores e permanecer não invasivo. A maioria dos Microsporum spp. infectam a pele, exceto Microsporum persicolor .

A patogenese da infecção depende do reservatório natural das espécies.

Colonias de Microsporum são cotonosas. O crescimento no agar sabouraud dextrose a 25°C pode ser lento ou rápido e o diametro das colonias variam entre 1 a 9 cm após 7 dias de incubação. A cor da colonia varia dependendo da espécie, de branco para beje ou amarelo para rosa.

Teste da perfuração do cabelo, habilidade em crescer em grãos de arroz a 37°C ajuda na diferenciação de uma espécie de Microsporum spp. da outra

Microsporum spp. produz hifas septadas, microaleurioconidia (solitárias, unicelular, oval de parede fina), e macroaleurioconidia (fusiforme, multicelular)

Tratamento : terbinafine, itraconazol

Microsporum gypseum macroconidia e microconidia

Microsporum canis

Cultura de M. audouinii agar sabouraud dextrose

M. ferrugineum no agar micobiotico

Micoses cutâneasEpidermophyton

Genero: Epidermophyton Epidermophyton é um fungo filamentoso dermatófito. Distribuído no mundo e o homem é o principal hospedeiro de Epidermophyton floccosum, a única espécie patogênica.

E. floccosum é o um dos mais comuns causadores da dermatofitose em indivíduos normais. Infecta pele (tinea corporis, tinea cruris, tinea pedis) e unhas (onychomycosis). Infecção é restrita a camadas cornificadas de células mortas da epiderme. Esse fungo não tem a habilidade de penetrar em tecidos viaveis de hospedeiros imunocompetentes.

Colonias de E. floccosum crescem rapidamente e maturam em 10 dias. Após incubação a 25 °C no agar batata-dextrose, as colonias são amarelas amarronzadas a cinza

Hifas septadas, macroconidia, e ocasionalmente clamidoconidias são visualizadas. Ausencia de microconídias e as macroconídias são de parede fina, em forma de clave com pontas arredondadas.

Epidermophyton floccosum é diferenciado do Microsporum eTrichophyton pela ausencia de microconidia

Tratamento: terbinafine, itraconazol, voriconazol e ketoconazol

Onychomycosis devido a Epidermophyton floccosum

Epidermophyton floccosum

Doença cutânea

Localização das lesões

Aspecto clínico Fungos mais frequentes responsáveis

Tinea corporis (tinha)

Pele lisa e glabra Placas circulares com bordas vesiculares e vermelhas que avaçam e descamação central

Microsporum canis, Trichophyton mentagrophytes

Tinea pedis (pé de atleta)

Espaços interdigitais nos pes (sapatos)

Aguda – pruriginosa, vesicular avermelhadacronica – pruriginosa, escamação fissura

Trichophyton rubrum, T. mentagrophytes, Epidermophyton floccosum

Tinea cruris (prurido de jóquei)

Virilha Lesão eritematosa descamativa na região intertriginosa, pruriginosa

T. rubrum, T. mentagrophytes, E floccosum

Tinea capitis Couro cabeludo Placas circulares de calvicie com pontas de cabelo no interior de folículos profundos

M. canis, Trichophyton tonsurans

Tinea barbae Pelos da barba Lesão edematosa e eritomatosa T. rubrum, T. mentagrophytes

Tinea unguium (onicomicose)

Unhas Unhas espessadas ou com fragmentação distalmente, despigmentadas sem brilho

T. rubrum, T. mentagrophytes, E. floccosum

Dermatofitides Faces laterais e flexora dos dedos das mãos. Palma das mãos

Lesões visuculares bolhosas, pruriginosas

Ausencia de fungos na lesão, pode torna-se infectada por bacterias

Manifestações clínicas das dermatofitoses

tinea capitis - Trichophyton tonsuransEpidermophyton floccosum – antes e após tratamento

tinea corporis - Epidermophyton or Trichophyton

tinea cruris - Epidermophyton floccosum.

Infecções cutaneas

onychomycosis - Epidermophyton ou Trichophyton destruindo as unhas

Infecção por Trichophyton sp

Infecções cutaneas

Micoses cutâneas

Diagnóstico Laboratorial

Amostras – raspados da pele e das unhas, pelos arrancados de áreas afetadasPelos infectados por Microsporum emitem fluorescencia sob a lampada de Wood

Exame microscópico – amostras são colocadas na lâmina com uma gota de hidróxido de potássio 10-20%, cobertas com lamínulas e examinadasPele e unha – observam-se hifas ramificadas ou cadeias de artrosporos

Pêlos – Microsporum formam bainhas de esporos num padrão de mosaico ao redor do folículo piloso

Cultura – identificação de todos os dermatófitos baseia-se em culturas. Inocular em ágar inclinado de sabouraud com cicloexamida e cloranfenicol (incubar 1-3 semans a t.a.) e examinadas em culturas de laminas.

Determinação da especie baseia-se na morfologia das colonias, exame microscopico e alguns casos testes bioquímicos

Tratamento

Couro cabeludo – cabelos são arrancados manualmente, cortados ou raspados. Griseofulvina (1-2 semanas). Shampoos e creme de miconazolInfecções do corpo – creme de miconazol, creme de ácido undecilênico, ácido salicílico ou benzóicoInfecções dos pés – permanganato de potássio (forma aguda) antifúngicos cremes (fase crônica)