Universidade Federal de Pernambuco Centro de Ciências da Saúde

Departamento de Nutrição Programa de Pós-Graduação em Nutrição

Manipulação nutricional

e/ou serotoninérgica no período gestacional em ratos: Estudo do Comportamento Alimentar dos filhotes.

Matilde Cesiana da Silva

Recife - 2008

ii

Universidade Federal de Pernambuco Centro de Ciências da Saúde

Departamento de Nutrição Programa de Pós-Graduação em Nutrição

Área de Concentração: Bases experimentais da Nutrição

Manipulação nutricional

e/ou serotoninérgica no período gestacional em ratos: Estudo do Comportamento Alimentar dos filhotes.

Dissertação apresentada para obtenção do título de Mestre em Nutrição do Programa de Pós-Graduação em Nutrição do Centro de Ciências da Saúde da Universidade Federal de Pernambuco. Contou com apoio financeiro do Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). Mestranda: Matilde Cesiana da Silva Orientador: Raul Manhães de Castro Co-Orientadora: Sandra Lopes de Souza.

Recife - 2008

iii

Silva, Matilde Cesiana da

Manipulação nutricional e/ou serotoninérgica no período gestacional em ratos: estudo do comportamento alimentar dos filhotes / Matilde Cesiana da Silva. – Recife: O Autor, 2008.

70 folhas. il: fig., tab.

Dissertação (mestrado) – Universidade Federal de

Pernambuco. CCS. Nutrição, 2008.

Inclui bibliografia.

1. Desnutrição - Gestantes. 2. Sistema serotoninérgico -

Gestantes. I.Título.

613.22 CDU (2.ed.) UFPE 612.3 CDD (22.ed.) CCS2008-072

iv

v

APRESENTAÇÃO

O presente estudo foi realizado no laboratório de Fisiologia da Nutrição Dra Naide

Teodósio do Departamento de Nutrição da Universidade Federal de Pernambuco,

tendo como orientador o Professor Raul Manhães de Castro, Doutor em science de la

vie pela Université de Paris IV.Neste estudo foram investigados os efeitos da

desnutrição e/ou da manipulação farmacológica do sistema serotoninergico durante a

gestação sobre parâmetros do comportamento alimentar dos filhotes. Este trabalho de

pesquisa gerou os seguintes artigos científicos: 1- A desnutrição fetal pode programar

o controle serotoninérgico do comportamento alimentar neonatal? 2- Efeito da

desnutrição e do tratamento com fluoxetina sobre a Seqüência comportamental de

saciedade em ratos.

vi

“Ser bom para ser feliz,

pois a felicidade existe”

(Autor desconhecido)

vii

Dedicatória

A Deus e a Nossa Senhora da Conceição por tudo que me permitiram viver e por estarem comigo

em todos os momentos na realização deste trabalho.

Aos amores da minha vida meu tudo A minha mãe-avó Josefa Maria da Conceição, faço tudo por você, para você, pensando em você. Te amo e te amarei por toda a minha vida. A minha mãe Margarida Maria da Silva, és a felicidade em minha vida, és tão grande, que mesmo precisando trabalhar, me deixasse protegida por minha avó e minha tia. Te amo mãezinha sou tua admiradora. A minha tia Raimunda Maria da Silva muito obrigada por ter me permitido sonhar, deixasse de viver os teus sonhos para que os meus se tornassem realidade. Levo comigo todos os teus ensinamentos de vida, e ainda me presenteasse com Francisco Henrique, a criança que deixa os meus dias mais felizes. Amo vocês. Ao meu irmão José Eraldo pelo companheirismo diário e pela torcida, compartilhando comigo todas as etapas da dissertação, inclusive os gritos. Te amo. Ao meu padrasto José Eraldo pelo papel de pai que desempenhou ao longo destes anos. Obrigada por tudo. Ao meu primo Evandro in memorian que mesmo estando em outro plano é eterno em nossos pensamentos. Obrigada por ter feito parte da minha vida, levo comigo a sua torcida constante.

viii

Aos meus Pais Científicos:

Professor Raul Manhães de Castro

Muito obrigado por ter me permitido conhecer o caminho da ciência e ter acreditado em mim desde o início,

sou muito grata pela tua orientação, pelo ser humano que és, pela tua alma gigantesca. Ao mestre, meus

aplausos. Valeu por tudo, levo para toda a minha vida todos os teus ensinamentos.

Sandra Lopes de Souza

Muito obrigado por ter me permitido ter sido tua estagiária, foi um privilégio e uma honra você ter me

ensinado a fazer ciência como uma grande cientista. Obrigada por ter acreditado em mim, até mesmo nos

momentos que eu achava que não era capaz. Sou grata pela confiança, amizade, carinho e pela força ao

longo destes anos. Mesmo do outro lado do oceano estivesse sempre presente, o teu profissionalismo é

admirável. Teu tamanho é divino. A você toda minha admiração, respeito e estima, és uma irmãzinha que

Deus colocou em minha vida.

ix

Agradecimentos

A professora Débora Catarine Nepomuceno Pessoa você me fez acreditar que os anjos são reais, pois és

o anjo da minha vida, seria impossível traduzir em poucas palavras o meu carinho e admiração. Você me

permitiu fazer parte desta família e receber o carinho de Lu, Kátia e Sr. Pessoa. A vocês o meu muito

obrigado.

Ao departamento de Nutrição da Universidade Federal de Pernambuco, por proporcionar todas as

condições necessárias para realização deste estudo.

Rhowena Jane a irmãzinha que Deus me deu de presente. Rhó levo comigo os momentos felizes que

compartilhamos na residência estudantil, nunca esqueço o dia que você me levou para fazer estágio com

o Professor Raul, obrigado por ter me conduzido ao caminho da ciência. Eu e a minha família te amamos.

Soégima Cristina (Sol) por tudo, lembro com carinho às compras feitas na residência estudantil. A você

todo o meu carinho, estima e admiração. Te adoro.

Flávia Henrique a malinha sem alça que Deus me deu de presente. Flavinha a nossa amizade é eterna, te

adoro.

As estagiárias Keite, Amanda, Uyara e Aline vocês foram brilhante, muito obrigado por ter compartilhado

comigo toda a parte experimental.

A família Peixoto que Deus me presenteou, Carol Peixoto, Pedro, Gabriel, Calu e Renata Campina. Adoro

vocês. Carolzinha valeu por tudo. Renatinha o Cisne e eu choche serão inesquecíveis. A vocês todo o

meu carinho.

Ao amigão Ricardo Orozco, Ricardinhooooooooooooooo você me fez acreditar que é possível construir

uma grande amizade à distância, não esqueço as informações diárias sobre a gramática inglesa antes da

proficiência do Doutorado, que privilégio ter tido você como professor. Sua amizade, seu carinho, seu

x

respeito me emocionam. A você toda a minha admiração e amizade, pois simplesmente te adoro. Estou

aguardando sua visita ao Brasil.

A família Souza, Sandra Lopes, Dona Marluce, Sr.Amaro, Wilson e Vaninho pelo carinho constante, sou

feliz por ter conhecido vocês. Obrigado por tudo.

Luciene Oliveira de Lira, a Lú. Entre tapas e beijos construímos uma grande amizade, você será

inesquecível. Sim, obrigado por ter compartilhado as suas estagiárias comigo Dani e Kiko. A vocês todo o

meu carinho.

Wylla, Dudu e Lili. Wylinha obrigado por tudo, levo comigo os momentos felizes que compartilhamos no

Bosque da Várzea. Vocês foram uns amores.

Aos amigos Sebastião Rogério, Tereza Deiró por ter participado da minha formação. A vocês toda a minha

admiração. Ao meu pai adotivo Aroldo Deiró, Deny, Ricardo, Jairza, Mateus e Maira pelo carinho de

sempre.

Elizabeth Nascimento, Betina, você foi também a minha orientadora, a você todo o meu carinho, amizade

e admiração. Obrigado por tudo, gosto muito de você. Maíra, Tiago e Pádua fazem parte deste

agradecimento.

Lúcia Pires, Lucinha obrigada por tudo, a tua competência é singular. Obrigado pela amizade de sempre.

Aos amigos que amo Aristóteles, Lurdinha, Gláucia, a nossa grande amizade de 16 anos. Amo vocês.

Graça, Dan, Enzo, Edlene estão no meu coração, sou grata por tudo.

Carol Leandro pela contribuição no inglês chique e por ter me dado oportunidade de conhecer o ser

humano que você é.

Ao mestre Sr. Paulino levo comigo os seus ensinamentos constates. Ao Dr. França e o Sr. Everaldo pela

atenção e profissionalismo.

À Antônio, o meu anjo da guarda dos finais de semana, obrigada por tudo, a você todo o meu carinho.

xi

Aos amigos Karla Mônica, Daniel, Sônia Marinho, Ana Elisa, Renata Vasconcelos, Iracema, Marcos Fidalgo, Michele, Graça Paiva, Lisiane, Bruno Galvão, Solange, Raquel, Roberta Leite, Madge pelo carinho e atenção de sempre. A Neci, Necizinha te amo. Obrigado por tudo.

A professora Célia Barbosa todo o meu carinho, respeito e admiração.

As Professoras Maria do Carmo Medeiros e Francisca Bion pelo carinho e por acreditarem em mim. A

vocês toda a minha admiração e respeito. Carol Andrade todo o meu carinho obrigado pela torcida.

Aos amigos Roberto, Artur Bibiano, Sônia Pedrosa e Fernanda, vocês são maravilhosos. Obrigado por

tudo.

Surama, Carlos e todo o pessoal que compartilhou comigo o almoço de Dona Lourdes. Valeu por tudo.

Meus vizinhos Carlos e Ivanise pelo carinho de sempre.

A todos os professores do Departamento de Nutrição da Universidade Federal de Pernambuco.

As amigas do mestrado Eduila, Silvia, Manuela, Silvia Patrícia, Vanessa, Cibele, Roberta e Luciene., as

amigas da graduação Fabi , Amanda e Ana Paula Valeu por tudo .

Aos amigos Beatriz, Ligia, Celsa, Luiz Cláudio, Ragnar, Adnéa, Bruno, Andreza, Davi, Ana Gabriela, Dedê,

Ligia, Sérgio e Geovana por tudo.

Aos professores do Departamento de Anatomia Silvia Regina, Elizabeth Neves e Romeu e a todos os

funcionários pelo carinho de sempre.

Ao grupo de pesquisa Nutrição, Neuropsicofarmacologia e Imunidade por tudo.

Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) pela concessão da bolsa.

Agradecer todo mundo.... tarefa difícil. Muita coisa acontece, muita gente se envolve no processo, que é

um processo de uma vida. Então caso eu tenha esquecido de alguém, me perdoe, mas fica aqui

registrado o meu muito obrigado, de coração.

xii

LISTA DE TABELAS

Artigo 1

1- Composição das dietas experimentais oferecidas durante o período de gestação.

27

2- Efeito da desnutrição e do tratamento com fluoxetina no período de gestação sobre duração de gestação, número de filhotes, mortalidade e ganho de peso materno.

29

3- Efeito da fluoxetina em animais desnutridos no período gestacional sobre a duração da gestação, número de filhotes, mortalidade e ganho de peso materno.

33

Artigo 2

1. Dados da seqüencia comportamental de saciedade em animais desnutridos e/ou tratados com fluoxetina.

53

2. Parâmetros da seqüência comportamental de saciedade em ratos desnutridos e/ou tratados com fluoxetina.

54

xiii

LISTA DE FIGURAS

Artigo 1

1- Esquema da distribuição dos grupos experimentais.

26

2- Efeito da desnutrição e do tratamento farmacológico sobre a curva de peso em ratos lactentes.

30

3- Efeito da desnutrição ou do tratamento com fluoxetina durante a gestação sobre a duração do comportamento de sucção (A) e a quantidade de alimento ingerido (B) durante a lactação.

31

4- Efeito da desnutrição ou do tratamento com fluoxetina durante a gestação sobre o peso corporal (A) e a ingestão alimentar (B) em ratos após o desmame.

32

5- Efeito do tratamento com fluoxetina sobre o peso corporal de animais desnutridos na gestação.

33

6- Efeito da desnutrição e do tratamento com fluoxetina durante a gestação sobre o comportamento de sucção e ingestão alimentar em ratos.

34

7- Efeito do tratamento com fluoxetina sobre o peso corporal (A) e a ingestão alimentar (B) pós-desmame em ratos desnutridos durante a gestação.

35

8- Efeito da administração aguda de fluoxetina sobre a ingestão alimentar de animais controle ou desnutridos na gestação.

36

Artigo 2

1- Esquema da distribuição dos grupos experimentais. 48

2- Efeito da desnutrição e do tratamento com fluoxetina sobre a seqüência comportamental de saciedade.

51

3- Efeito da desnutrição e do tratamento com fluoxetina sobre o período de saciedade em ratos.

52

4- Efeito da desnutrição e/ou da fluoxetina no período gestacional sobre a ingestão alimentar.

54

xiv

LISTA DE ABREVIAÇÕES

AIN - American Society for Nutritional Sciences ATT- Ingestão consumida no tempo total

5-HT- 5- hidroxitriptamina

LAT - Período de latência

AUT - Proporção da ingestão alimentar por unidade de tempo.

NPY- Neuropeptideo Y

SCS – Seqüência Comportamental de Saciedade

Grupos Experimentais C- Controle

CS- Controle salina

F- Fluoxetina

CFA- Controle fluoxetina agudo

CFG-Controle fluoxetina gestação

CFGA-Controle fluoxetina gestação agudo

D- Desnutrido

DS- Desnutrido salina

DF-Desnutrido fluoxetina

DFA –Desnutrido fluoxetina agudo

DFG-Desnutrido fluoxetina gestação

DFGA-Desnutrido fluoxetina gestação agudo

GC- Gestante controle

GF-Gestante fluoxetina

xv

SUMÁRIO

1- INTRODUÇÃO GERAL 17

2-OBJETIVOS 21

3-HIPÓTESES 22

ARTIGO 1 - A desnutrição fetal pode programar o controle

serotoninérgico do comportamento alimentar neonatal? 23

1-Introdução 24

2- Material e Métodos 25

3- Resultados 29

4- Discussão 36

5- Referências Bibliográficas 41

ARTIGO 2 - Efeito da desnutrição e do tratamento com fluoxetina sobre

a Seqüência comportamental de saciedade em ratos. 45

1-Introdução 46

2-Material e Métodos 47

3-Resultados 50

4- Discussão 55

5-Referências Bibliográficas 57

4- DISCUSSÃO GERAL 61

5-CONCLUSÕES 64

6-PERSPECTIVAS 65

7- REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 66

xvi

RESUMO

O ambiente intrauterino exerce importante influência sobre o desenvolvimento

fetal alterando uma diversidade de mecanismos regulatórios adultos. O presente

estudo teve como objetivo avaliar as repercussões da desnutrição e/ou manipulação do

sistema serotoninérgico durante a gestação, sobre o desenvolvimento do

comportamento alimentar em ratos. Ratas da linhagem Wistar foram desnutridas e/ou

tratadas com inibidor seletivo de recaptação da serotonina durante a gestação. Durante

a lactação, foram avaliados parâmetros do comportamento alimentar, como duração de

sucção e quantidade de leite ingerido. Aos trinta e cinco dias de vida foi avaliada a

Seqüência Comportamental de Saciedade após injeção aguda de fluoxetina. Com

essas modificações do ambiente fetal associadas a análises comportamentais, pode-se

identificar o perfil de alterações que podem ser promovidas sobre parâmetros

importantes que constituem o comportamento alimentar. No presente estudo, a

desnutrição e o tratamento com fluoxetina na gestação promoveram modificações na

duração de sucção, ingestão de leite e na seqüência comportamental de saciedade em

ratos pré-adolescentes. A desnutrição promoveu hipo-responsividade à fluoxetina,

indicando alterações no controle serotoninérgico do comportamento alimentar. O

contato prévio com a fluoxetina durante a gestação também alterou a resposta a esse

fármaco após o desmame. Esses resultados indicam que alterações do ambiente

uterino, como a desnutrição e o tratamento com fluoxetina podem alterar

funcionalmente mecanismos de controle do comportamento alimentar. Dentre os vários

componentes desse comportamento, a saciedade parece ser particularmente afetada.

Palavras chaves: Desnutrição, gestação, serotonina, comportamento alimentar, ratos.

xvii

ABSTRACT

Intrauterine milleu influences the fetal development and alters the regulatory

mechanisms in adult life. The main goal of the present study was to evaluate the

repercussions of the undernutrition and/or the manipulation of the serotoninergic system

during gestation on the development of feed behavior in rats. Male Wistar rats were

submitted either undernutrition or the treatment with a selective inhibitor serotonine

reuptake during gestation. During lactation, it was evaluated parameters related to the

development of the feed behavior, such as: suckling duration, and the amount of

ingested milk. The behavioral satiety sequence following the treatment with fluoxetine

was evaluated in offspring at 35 days old. According to these changes in the fetal

environment associated with behavioral analysis, we can identify the profile of

alterations which can be associated to important parameters that constitute the feed

behavior. In the present study, undernutrition and the treatment with fluoxetine during

gestation induced alterations in the suckling duration, ingestion of milk and in the

behavioral satiety sequence at 35 days old. Undernutrition induced hypo-response to

fluoxetine, and it can indicate alteration in the serotoninergic control of feed behavior.

The previous contact with fluoxetine during gestation also changed the response to this

drug at weaning. These results indicate that alterations in the intrauterine milleu, as

undernutrition and the treatment with fluoxetine, can alter functional mechanisms of the

feed behavior control. Among various components of feed behavior, satiety seems to be

particularly affected.

Key Words: Undernutrition, pregnance, serotonin, feeding behavior, rat.

17

1- INTRODUÇÃO GERAL

Durante as “janelas precoces de plasticidade fisiológica” existem fases de

crescimento do sistema nervoso que se apresentam sensíveis às agressões

ambientais, sendo considerados períodos críticos do desenvolvimento (Morgane et al.,

1993; Morgane et al., 1978; Winick, 1972). As características morfofuncionais do

sistema nervoso maduro dependem dos processos de formação e diferenciação

neuronal, sinaptogênese, multiplicação glial e mielinização que ocorrem nestes

períodos críticos (Morgane et al, 1978). Os períodos de gestação e lactação, no rato,

constituem a fase de maior desenvolvimento do encéfalo, por conseguinte de maior

vulnerabilidade a vários tipos de agressões (Morgane et al 1978). Nesse contexto os

insultos nutricionais apresentam grande destaque, particularmente por poderem causar

alterações irreversíveis (Morgane et al, 1993;1992).

Estudos epidemiológicos apontaram uma importante relação entre o crescimento

fetal e o desenvolvimento de doenças metabólicas na vida adulta, como o diabetes tipo

II, hipertensão arterial e obesidade (Hales e Barker, 1992). Estas evidências foram, de

forma crescente, sendo asseguradas por vários estudos em humanos e em animais de

laboratório (Vickers et al, 2008). Investigações têm encontrado programação de

estrutura e função de diversos mecanismos, cujo estado nutricional precoce é seu

determinante provável (Lucas, 1991). No entanto durante décadas, há grande interesse

na programação que tem sido resultantes de inúmeros estudos epidemiológicos

mostrando a relação entre o crescimento após restrição de nutrientes no período de

desenvolvimento e subseqüentes doenças degenerativas na vida adulta (Lucas, 1999).

Essas observações geraram a hipótese do fenótipo protetor postulando que a

exposição à dieta deficiente no útero desencadeará uma preparação adequada para

um ambiente com as mesmas características após o nascimento (Hales e Barker,

1992). Ou seja, o organismo em desenvolvimento produz “respostas adaptativas

preditivas” em antecipação ao ambiente da vida adulta (Gluckman e Hanson, 2005).

Quando o individuo é submetido à dieta adequada, ou em excesso após o período de

adaptação, existirá um confronto com os mecanismos adaptados, desencadeando

conseqüentemente alterações metabólicas como hiperleptinemia, hiperinsulinemia e

hipertensão (Gluckman & Hanson, 2004; Remacle et al, 2004; Fagundes et al,

18

2007).Ou seja, existe uma associação entre o crescimento fetal e uma situação de

elevada taxa de crescimento, que quando associados projetam o organismo para o

fenômeno de “programação” (Singhal e Lucas, 2004). Essas alterações metabólicas na

vida adulta são conseqüências do fenômeno de programação, no entanto, vários

estudos, nos últimos anos, têm relacionado outros aspectos do ambiente neonatal

precoce com alterações patológicas na vida adulta (Gluckman e Hanson 2004; Ely et al

1997).Em muitos casos, o insulto durante o período de desenvolvimento é ocasionado

por estresse gerado na interação mãe-filhote, ou mesmo por agentes farmacológicos

(García et al 2005;Meaney et al 2002,).

Agressões nutricionais e farmacológicas, durante a gestação ou o aleitamento

podem levar às alterações morfológicas e funcionais permanentes inclusive sobre a

expressão comportamental (Manhães-de-Castro et al., 1993; Manhães-de-Castro et al.,

2001; Blundell 1998). Os mecanismos de controle do comportamento alimentar se

apresentam como importante alvo das adaptações a agressões ambientais durante o

desenvolvimento (Langley-Evans et al, 2005).

No sistema nervoso central, o hipotálamo se apresenta como centro

homeostático do controle do comportamento alimentar (Berthoud, 2002; Woods, 2005),

dentro desta estrutura cerebral se encontram diversos núcleos e acúmulos de

neurônios que em conjunto controla o comportamento alimentar.

Alterações estruturais e funcionais em núcleos hipotálamicos, como o

paraventricular, ventromedial e supraquiasmático, foram observadas em animais

submetidos à restrição alimentar (Plagemann et al 2000). Aumento do consumo de

alimentos foi relacionado à restrição alimentar durante períodos iniciais da vida (Zippel

et al, 2001).

Ainda no sistema nervoso, o comportamento alimentar apresenta-se fortemente

modulado por sistemas de neurotransmissão, dentre os quais o serotoninérgico.

Durante o período gestacional, os primeiros neurônios serotoninérgicos no encéfalo de

humanos são observados a partir da 5ª semana (Levallois et al., 1997; Sundstrom et

al., 1993; Kontur et al., 1993 Shen et al., 1989), apresentando sua organização típica

nos núcleos da rafe por volta da 15ª semana (Takahashi et al., 1986). Nos ratos, os

primeiros neurônios serotoninérgicos aparecem entre 10o e o 14o dia da gestação

(Lauder e Bloom, 1974). Durante a vida fetal, a serotonina modula processos de

crescimento neuronal e diferenciação (Mercado et al, 1998; Haydon et al, 1987).

19

Após sua liberação na fenda sináptica, a serotonina pode ser recaptada para o

neurônio que a liberou pela proteína transportadora de serotonina (5-HTT). Essa

proteína é alvo para vários fármacos com ação antidepressiva, denominados inibidores

seletivos da recaptação da 5-HT (Hyttel, 1994). Esses fármacos são utilizados

freqüentemente para o tratamento de depressão materna durante a gestação e

lactação (Oberlander et al., 2002). Considerando-se esse fato, nosso laboratório vem

se dedicando há anos ao estudo das seqüelas promovidas ao feto por esse tipo de

tratamento. Nós demonstramos que a utilização de um inibidor seletivo da recaptura da

serotonina ISRS durante o período de desenvolvimento promove déficit no crescimento

somático, desenvolvimento sensório-motor, redução do comportamento agressivo, e

alterações na expressão dos comportamentos alimentar e locomotor (Deiró et al., 2005,

Souza et al., 2004; Medeiros et al 2004; Mendes et al, 2002).

A serotonina apresenta importante ação sobre a modulação do controle

homeostático e hedônico que é o controle psicológico do comportamento alimentar

(Blundell, 2007;Blundell 1977, Simansky et al 1996,) com repercussões sobre o peso

corporal (Blundell, 1994; Curzon 1990; Leibowitz et al, 1988). A elevação dos níveis de

serotonina no hipotálamo desencadeia saciedade (Schreiber, 2000 et al), enquanto sua

redução promove hiperfagia (Halford et al, 2005). O tratamento com ISRS promove

aumento de preferência alimentar por carboidratos (Brenda et al., 1999).Os subtipos de

receptores 5-HT1B e 5-HT2C mediam a ação da serotonina no controle do

comportamento alimentar (Dourish et al., 1989).

Os níveis de serotonina parecem ser afetados pelo estado nutricional. Dessa

forma, foram observados níveis elevados de serotonina em regiões encefálicas de

animais desnutridos (Mokler et al, 1999). Ratos desnutridos apresentam aumento da

densidade dos receptores 5-HT1A, aceleração na síntese de serotonina por aumento da

atividade da triptofano hidroxilase (Manjarrez et al, 2003; 1988).

Durante o período neonatal, o comportamento alimentar dos mamíferos passa

por intensa mudança. Ao nascimento, ele é automático, transformando-se, em pouco

tempo, no comportamento adulto complexo (Souza et al, 2003). O controle maduro do

comportamento alimentar ainda não é efetivo até o 18o dia de vida no rato (Weller,

2000). Outro fator de grande relevância é a dependência materna. O rato neonato

depende da mãe em várias funções orgânicas, tais como manutenção da temperatura

corporal, excreção urinária e alimentação (Friedman, 1975). Aproximadamente até o

14o dia de vida, as mães são a única fonte de alimento, apresentam assim a

20

disponibilidade de leite com sua presença ou ausência no ninho, e com seu estado

emocional e nutricional (Friedman, 1975). A mãe influência o tipo de alimento

selecionado e o momento inicial da alimentação (Galef e Clark,1972;1971). O

desmame representa estágio crítico no desenvolvimento pela transição do

comportamento alimentar. Na terceira semana de vida os ratos iniciam a ingestão de

alimentos sólidos (Ferre et al, 1986). Por volta do 25o dia de vida, o metabolismo está

maduro para utilizar carboidrato para sintetizar lipídio. No 27o dia é estabelecido o ritmo

noturno de alimentação (Thiels et al., 1990). O comportamento reflete operações

associadas a eventos fisiológicos ao longo do tempo em que o ambiente tem uma

grande influência na estrutura do comportamento em animais experimentais, assim a

manipulação serotoninérgica como o estado nutricional influência na operação natural

dos processos fisiológicos que envolvem a modulação da ingestão alimentar. A ação

da droga anoréxica que distingue em mecanismos neuroquímicos que difere em efeito

do comportamento (Blundell, 1998).

Assim, diante das evidências supramencionadas da participação da serotonina

em mecanismos que adaptam as condições integrativas dos sistemas fisiológicos entre

si e do organismo com o meio ambiente e, outrossim, sabendo-se que esse mediador

químico, esta pequena molécula derivada do triptofano, frente à evolução dos seres

vivos na terra, tem assumido papéis tão decisivos na integração homeostática

intracelular e intercelular parece-nos importante entender que ação mais complexa em

nível mesmo comportamental e, sobretudo, em situações que permitam os mamíferos

sobreviver no ambiente em que os circundam, tem essa surpreendente bioamina.

Pretendemos contribuir tentando responder dentro dos limites desse trabalho a uma

pergunta mais ampla, mais ousada e extremamente desafiadora para grande parte dos

cientistas que se debruçam diante de um dos paradigmas mais atuais da Nutrição: Que

papel tem a serotonina nos mecanismos envolvidos na programação do

comportamento alimentar?

21

2 - OBJETIVOS

2.1 - Geral

Investigar os efeitos da desnutrição e/ou da inibição da recaptação da serotonina

durante a gestação sobre parâmetros do comportamento alimentar dos filhotes.

2.2 - Específicos

- Obtenção do peso corporal diário de mães e filhotes;

- Avaliar a duração do comportamento de sucção e a ingestão alimentar aos 3o, 7o, 14o

e 21o dias de vida;

- Analisar a seqüência comportamental de saciedade após o desmame na pré-

adolescência com 35 dias de vida.

22

3. HIPÓTESES

- A desnutrição e o tratamento farmacológico com fluoxetina no período gestacional

causam alterações no padrão do comportamento alimentar neonatal em ratos;

- Ratos submetidos, durante o período de gestação, a desnutrição e/ou manipulação do

sistema serotoninérgico apresentam hiporesponsividade a ação hipofágica da

serotonina após o desmame.

23

Artigo 1

Titulo: A desnutrição fetal pode programar o controle serotoninérgico do comportamento alimentar neonatal?

Resumo A desnutrição no período gestacional tem sido associada ao aumento de risco para o

desenvolvimento da obesidade, diabetes e doenças cardiovasculares na vida adulta,em

estudo epidemiológico, demonstra que o baixo peso ao nascer apresentou elevada

correlação com o desenvolvimento destas doenças metabólicas. A exposição à

desnutrição e a fármacos parece ser importante fator de agressão durante períodos

precoces da vida, a administração aguda de fluoxetina em ratos adultos promove

aumento da síntese de serotonina e conseqüente efeito hipofágico. Animais

desnutridos na gestação mostraram hiperfagia e pequeno aumento de serotonina (5-

HT) no cérebro.A serotonina esta diretamente relacionada à regulação negativa da

ingestão alimentar, entretanto tem observado efeitos anoréxicos da serotonina que são

alterados por desnutrição protéica. No presente estudo, nos propomos a testar o

fenômeno biológico da programação no controle do comportamento alimentar por

manipulação do sistema serotoninérgico durante a vida fetal. Foram utilizadas ratas

prenhas da linhagem Wistar divididas em 8 grupos experimentais. Ratas receberam

dieta normoprotéica (caseína 17%) ou hipoprotéica (DS, caseína 8%) durante o período

de gestação. O tratamento crônico com fluoxetina (fluoxetina 1mg/Kg p.c.) foi realizado

do 14o ao 21o dia de gestação. As ratas que receberam dieta hipoprotéica

apresentaram redução no número dos filhotes nascidos e mortalidade das mães. Os

grupos desnutrido e desnutrido com fluoxetina mostraram diminuição significante do

peso corporal, duração da sucção, da ingestão lactacional e na seqüência

comportamental de saciedade comparado ao controle. A desnutrição durante a

gestação promove hiperfagia após o desmame e diminui o efeito hipofagico da

fluoxetina. No entanto, a fluoxetina gestacional aumenta a ingestão alimentar de

lactentes, o que está associado ao aumento do peso corporal destes, e após o

desmame.

24

1-INTRODUÇÃO

O período fetal da vida parece ser determinante para consolidação de aspectos

anatômicos, fisiológicos e metabólicos observados na vida adulta (Morgane et al.,

1993). Dessa forma, qualquer alteração no ambiente intra-uterino pode repercutir de

forma irreversível no feto levando às patologias ao longo do tempo (Godfrey & Breier

2001). Quando o organismo é submetido a um ambiente hóstil, ele poderá programar

estrutura e função para interagir com esse ambiente (Lucas et al., 1991). No entanto,

quando há mudança do ambiente, em períodos mais tardios, o organismo

“programado” poderá desenvolver patologias variadas (Hales e Barker, 1992; Godfrey

& Breier et al, 2001). A exposição à desnutrição e a fármacos parece ser importante

fator de agressão durante períodos precoces da vida (Almeida, 1996). Em estudo

epidemiológico, o baixo peso ao nascer apresentou elevada correlação com o

desenvolvimento de doenças metabólicas como Diabetes, hipertensão arterial e

obesidade na vida adulta. A hipótese do fenótipo protetor foi lançada por Hales e

Barker (1992) para explicar essa programação.

A dieta influência a expressão de diversas moléculas que regulam o

desenvolvimento de órgãos e tecidos (Gluckman & Hanson, 2004). Dentre essas se

destaca o neurotransmissor serotonina (5-HT). Esse se distribui em concentrações

variadas em diferentes regiões encefálicas (Whitaker-Azmitia, 1991). A desnutrição pré

e pós-natal em ratos acelera a síntese de 5-HT no encéfalo por aumentar os níveis de

seu precursor, o aminoácido L-triptofano (Hernandez, 1980). Esse insulto nutricional

causa alteração irreversível no sistema serotoninérgico (Morgane et al, 1993). Esse

neurotransmissor parece estar associado com o mecanismo de saciedade (Blundell,

1998).A administração aguda de fluoxetina em ratos adultos promove aumento da

síntese de serotonina e conseqüente efeito hipofágico (Lightowler et al., 1996; Tsuiki et

al., 1995; Dreshfield-Ahmad et al., 2000). Alterações nestes receptores 5-HT foram

identificadas em resposta a agressões nutricionais na vida fetal (Manjarrez et al 2003).

No entanto, os detalhes da regulação e ativação dos receptores serotoninérgicos em

animais desnutridos ainda não estão esclarecidos. Os subtipos de receptores 5-HT1A,

5-HT1B e o 5-HT2C são implicados no controle da ingestão alimentar (Curzon et al

1988,Dourish 1994). Quando estimulados, os subtipos 5-HT1B e o 5-HT2C suprimem a

ingestão alimentar (Hewitt et al,2002, Clifton et al, 2000) enquanto o 5-HT1A aumenta

25

(Cooper et al 1993; Mancilla-Diaz et al, 2005). A ação anoréxica da serotonina é

mediada pelos receptores 5-HT1B e 5-HT2C localizados nos núcleos hipotalámicos

(Heisler et al 2002; 2006; Dalton et al, 2006).

Durante a gestação ou o aleitamento, fármacos serotoninérgicos podem induzir

alterações no crescimento e desenvolvimento do sistema nervoso promovendo

alterações na expressão comportamental (Barreto Medeiros et al., 2004;Manhães de

Castro et al., 2001). No presente estudo, nos propomos a testar o fenômeno biológico

da programação no controle do comportamento alimentar por manipulação do sistema

serotoninérgico durante a vida fetal. A manipulação do sistema serotoninérgico

associados com a desnutrição hipoprotéica na gestação nos fornecerá importantes

informações, pois é encontrado na literatura que há um pequeno aumento de

serotonina no cérebro que persiste no desenvolvimento em que os efeitos anoréxicos

da serotonina são alterados em ratos submetidos à desnutrição-protéica durante a

gestação e lactação (Manjarrez et al 2003, Hernandez et al 1989); As alterações

supracitadas que foram programadas e parece modular as adaptações de mecanismos

do controle da ingestão alimentar que podem ser importantes contribuintes para o

desenvolvimento de obesidade na vida adulta e doenças metabólicas associadas.

2-MATERIAL E MÉTODOS

Foram utilizadas ratas prenhas da linhagem Wistar, albinas, pesando entre

(220–240g), da colônia do Biotério do Departamento de Nutrição da Universidade

Federal de Pernambuco, com alimentação e água ad libitum, ciclo claro-escuro 12/12 h

(início às 6h). Os procedimentos experimentais obedeceram aos princípios do Comitê

de ética em experimentação animal (CEEA, protocolo 009367/2006-12) da

Universidade Federal de Pernambuco. A gestação foi diagnósticada com a verificação

de espermatozóide no esfregaço vaginal. O primeiro dia de vida foi considerado o dia

seguinte ao nascimento. Foram formadas ninhadas com seis filhotes machos e

distribuídas em grupos experimentais segundo dieta, com diferentes percentuais de

proteína, oferecida as mães durante a gestação (Figura 1). Grupos experimentais

também foram formados segundo tratamento de mães ou filhotes com inibidor seletivo

de recaptação da serotonina (fluoxetina). A composição das dietas seguiu as normas

da American Society for Nutritional Sciences (AIN 93), sendo utilizadas dieta

normoprotéica (caseína 17%) ou hipoprotéica (caseína 8%) (Tabela 1).

26

GESTAÇÃO

Caseina17% Caseina17%

14 d Salina 21 d1 d 35d

14 d Fluoxetina 21 d1 d 35d

14 d Salina 21 d1 d 35d

14 d Fluoxetina 21 d1 d 35d

Caseina17% Caseina17%

Caseina8% Caseina17%

Caseina8% Caseina17%

CS

CFG

DS

DFG

Caseina17% Caseina17%

14 d Salina 21 d1 d 35d

14 d Fluoxetina 21 d1 d 35d

14 d Salina 21 d1 d 35d

14 d Fluoxetina 21 d1 d 35d

Caseina17% Caseina17%

Caseina8% Caseina17%

Caseina8% Caseina17%

CFA

CFGA

DFA

DFGA

Salina

Salina (1 ml/Kg pc)

Salina

Salina

Fluoxetina

Fluoxetina

Fluoxetina

Fluoxetina

GRUPOSLACTAÇÃO

Figura 1 – Esquema da distribuição dos grupos experimentais. Ratos receberam dieta controle (CS, caseína 17% salina) ou hipoprotéica (DS, caseína 8% salina) durante o período de gestação. O tratamento crônico com fluoxetina (CFG, controle fluoxetina gestante; DFG, desnutrido fluoxetina gestante, 1mg/Kg p.c.) foi realizado a partir do 14o ao 21o dia de gestação. Após o desmame, os grupos receberam fluoxetina (CFA, controle fluoxetina adulto; DFA, desnutrido fluoxetina adulto; CFGA, controle fluoxetina gestante adulto; DFGA, desnutrido fluoxetina gestante adulto; 10mg/Kg p.c.) por administração aguda.

27

Tabela 1 - Composição das dietas experimentais oferecidas durante o período de gestação.

Constituintes Dieta

hipoprotéica (8%)

Dieta normoprotéica

(17%) g % 100,00 100,0

Proteínas

8,10 17,30

Carboidratos

75,10 65,90

Lipídios

7,00

7,00

Fibras 5,00 5,00

Vitaminas 1,00 1,00

Minerais 3,50

3,50

Metionina 0,30 0,30 % Kcal 362,48 363,44

Análise da Duração de Sucção

Neste estudo, as ninhadas dos diferentes grupos experimentais foram

submetidas, nos dias de avaliação, à privação alimentar para estimular a busca pelo

alimento. Esta consistiu na retirada dos filhotes da gaiola, separando-os assim por 4

horas de suas mães, de acesso à água e comida. Durante o período de privação (12:00

às 16:00h) as ninhadas permaneceram em gaiolas com características semelhantes às

de origem, incluindo a presença do ninho. Devido ao controle ainda imaturo da

temperatura corporal, as ninhadas com idade de 3 e 7 dias foram mantidas em gaiolas

com temperatura de +/- 31 °C. A adoção de privação alimentar tornou-se necessária

para possibilitar uma avaliação comportamental direta e em curto período de tempo

(1h). Esta foi realizada imediatamente após o período de privação alimentar.

Nos dias de avaliação (3o, 7o, 14o e 21o dias de aleitamento), foi registrada a

duração (em segundos) do comportamento de sucção. Para o registro da duração dos

comportamentos, foram utilizados protocolo comportamental e cronômetro digital,

28

permanecendo o observador a 1,5 m de distância da gaiola em observação. Apenas

duas ninhadas foram avaliadas por dia, cada uma por um observador. Todos os

experimentos foram realizados por dois observadores previamente treinados. As

gaiolas foram transferidas das estantes para o local de observação dois dias antes do

teste. Os testes foram realizados no período de 16-17h (Souza et al, 2001).

Análise da Ingestão Alimentar aos 21 dias de idade. O consumo alimentar individual dos filhotes, em miligramas (mg), foi obtido em todos

os dias de avaliação comportamental. Este foi quantificado através do ganho de peso

dos filhotes (HOUPT e HOUPT, 1975) durante uma hora de observação

comportamental (1h). O consumo foi o resultado da subtração do peso corporal obtido

depois da observação comportamental pelo peso obtido anteriormente ao início desta.

Para obtenção do peso corporal pré-observação, foi realizada estimulação genital para

promover a excreção de urina e fezes (HALL et al., 1977). Esta consistiu de fricção de

objeto macio sobre a região genital dos filhotes até o término da excreção. Esse

procedimento garante maior confiabilidade à quantificação do consumo alimentar em

ratos com 3, 7 e 14 dias de vida.

Consumo Alimentar Pós-Desmame

A ingestão foi calculada pela fórmula: peso inicial-peso final. A avaliação de

ingestão alimentar aos 35 dias de vida foi obtida pela subtração do peso da ração antes

e após período de observação de uma hora.

Droga

A fluoxetina foi dissolvida em solução salina. Foi utilizada dose de 1mg/Kg pc

durante a gestação e 10mg/Kg pc no estudo aos 35 dias de vida.No estudo do

comportamento alimentar peri-adolescente, a droga foi administrada uma hora antes do

teste.

29

Análise Estatística

Para análise estatística foi utilizada ANOVA two-way seguida por test de Tukey.

O peso corporal foi analisado por teste t de Student com nível de significância p<0.05.

3- RESULTADOS

Efeito da desnutrição e do tratamento com fluoxetina na gestação

O grupo de ratas desnutridas, comparado ao controle, apresentou redução (p <

0,01) no número de filhotes e maior mortalidade materna. (Tabela 2). A desnutrição

não alterou os dias de gestação e o percentual de ganho de peso. (Tabela 2). O grupo que recebeu fluoxetina (1mg/Kg s.c) não apresentou diferenças no

número dos filhotes, mortalidade materna,dias de gestação e percentual de ganho de

peso,quando comparado ao controle. (Tabela 2).

Tabela 2 – Efeito da desnutrição e do tratamento com fluoxetina na gestação sobre duração da gestação, do número de filhotes, de mortalidade e do ganho de peso materno. Ratas foram submetidas à desnutrição durante a gestação ou ao tratamento com fluoxetina (1mg/Kg s.c) a partir do 14o dia de gestação.

Os dados estão representados em média () + desvio padrão (DP). n=8 para todos os grupos. Teste t de student (p<0,01). * indica diferença entre os grupos desnutrido e salina.

Parâmetros de gestação

Controle

Salina

Controle

Fluoxetina

Desnutrido

Salina

Duração da gestação em dias

22,0 ++ 0,3

22,4 ++ 0,3

22,3 ++ 0,7

Número de filhotes nascidos

12,9 ++ 1,2

13,9 ++ 1,2

7,3 ± 0,7 *

Mortalidade das mães

0,0

0,0

5,0 ++ 0,0 *

Ganho de peso total das ratas (%).

39 ++ 4,7 41 ++ 8,0 31,4 ++ 9,2

30

Peso Corporal

O peso corporal dos filhotes desnutridos foi menor (p<0,01) que aquele dos

controles a partir do 9o dia (DS= 15,7± 2,5; CS=16,7± 1,77) de vida (Figura 2). Os

filhotes do grupo CFG quando comparados aos filhotes do grupo CS apresentaram

aumento (p< 0,01) dos pesos corporais a partir do 11o dia pós-natal (CFG= 20,7± 2,8;

CS =19,5 ±2,0) (Figura 2).

3 6 9 12 15 18 210

5

10

15

20

25

30

35

40

45

CSDS

*

CFG

***

* ***

* **

**

Dias de Vida

Peso

cor

pora

l (g)

#

####

## #

##

#

Figura 2 - Efeito da desnutrição e do tratamento farmacológico sobre a curva de peso em ratos lactentes. Os ratos foram desnutridos durante o período de gestação caseína 17% (n=46) ou a 8% (n=46) e/ou receberam fluoxetina (n= 46 ;1mg/Kg, s.c) administrada nas mães a partir do 14o dia de gestação.Os dados estão representados em média ± DP (desvio padrão). # indica diferenças entre os grupos CS e DS, * indica diferença entre CS e CFG.

Sucção e Ingestão Alimentar

O grupo desnutrido apresentou redução (p<0,05) na duração do comportamento

de sucção em (s) no 7o dia de vida (CS = 3308 (3462,0 -2767,0); DS = 3036,5 (3307,0 -

1460,0) e aumento (p<0,05) no 21o dia (CS= 2025,0 (2981,0 – 120,0); DS= 2897(3568

– 2096,0) quando comparado ao controle (Figura 3A). No grupo CFG houve redução

(p<0,05) na duração do comportamento de sucção no 14o (CS = 3030.5, 3594 -1645;

CFG = 2492.5, 2676 -1946) e 21o dia de vida (CS = 2025, 2981-120; CFG =1813,

31

1949-818) comparado ao grupo controle (Figura 3A). A ingestão alimentar no grupo

desnutrido diminuiu (p<0,05) no 3° (DS= 0,2 ± 0,1; CS= 0,2 ± 0,07) e no 21o (DS=

0,7±0,1; CS= 0,9±0,1) dia pós-natal quando comparado ao Controle (Figura 3 B). A

ingestão alimentar no grupo CFG apresentou aumento (p< 0,05) no 7o (CFG =0,53 +

0,1; CS= 0,4 ± 0,1), 14o (CFG = 0,83 + 0,2; CS= 0,66 + 0,1) e 21° dias de vida (CFG =

1,3 ± 0,1; CS =1,0 + 0,1) quando comparado aos CS (Figura 3B).

3 7 14 210

1

2

3

4CS DS

* *

CFG

**

Dias d e Vid a

Dur

ação

da

Sucç

ão (s

)

3 7 14 210.0

0.5

1.0

1.5CS DS CFG

* *

**

*

Dias de vida

Inge

stão

alim

enta

r (g

)

Figura 3 - Efeito da desnutrição ou do tratamento com fluoxetina durante a gestação sobre a duração do comportamento de sucção (A) e a quantidade de alimento ingerido (B) durante a lactação. A duração do comportamento de sucção e a ingestão alimentar (g) foram obtidos no período de 1h após 4h de privação alimentar. O grupo controle (CS) recebeu dieta normoproteica (n=46, caseína 17%) e o desnutrido dieta hipoprotéica (n=46, caseína 8%). A fluoxetina (1mg/Kg, s.c) foi administrada nas mães (n=8) a partir do 14o dia de gestação. Os dados estão representados em média ± DP. * indica diferença entre os grupos DS e CFG em relação ao controle, ANOVA.

A

B

32

Peso Corporal e Ingestão Alimentar Pós-Desmame

Os filhotes do grupo DS (123,3 ± 7,8) quando comparado ao grupo CS (141,6 ±

5,9) reduziram (p< 0,05) o peso corporal aos 35 dias de vida (Figura 4A). A ingestão

alimentar relativa foi maior (p< 0,05) no grupo DS (2,58 ± 0,1) quando comparado ao

grupo CS (1,6 ± 0,1) aos 35 dias de vida (Figura 4B). O grupo CFG (1,92 ± 0,3)

apresentou a ingestão alimentar relativa maior (p<0,05) quando comparado ao CS aos

35 dias de vida (Figura 4B). O peso corporal no grupo CFG (140,0 ± 13,3) não

apresentou diferença em relação ao CS (141,6 ± 5,9) aos 35 dias de vida.

CS DS CFG0

1

2

3 **

Inge

stão

alim

enta

r(g

/g p

eso

corp

oral

)

CS DS CFG0

50

100

150 *

Peso

cor

pora

l (g)

Figura 4 - Efeito da desnutrição ou do tratamento com fluoxetina durante a gestação sobre o peso corporal (A) e a ingestão alimentar (B) em ratos após o desmame. A duração da ingestão alimentar foi obtida no período de 1h após 4h de privação alimentar. O grupo controle (CS) recebeu dieta normoprotéica (n=46, caseína 17%) e o desnutrido dieta hipoprotéica (n=46, caseína 8%). A fluoxetina (1mg/Kg, s.c) foi administrada nas mães (n=8) a partir do 14o dia de gestação. Os dados estão representados em média ± DP. *Indica diferença entre os grupos DS e CFG em relação ao controle, ANOVA.

A

B

33

Efeito do tratamento com fluoxetina em animais desnutridos na gestação.

O grupo de ratas desnutridas que recebeu fluoxetina (1mg/Kg s.c), não

apresentou diferenças no número de filhotes, nos dias de gestação e na mortalidade

quando comparado ao controle (Tabela 3).

Tabela 3 – Efeito da fluoxetina no período gestacional sobre a duração da gestação, número de filhotes, mortalidade e ganho de peso materno.

Os dados estão representados em média (X) + desvio padrão (DP).

Peso Corporal

Os filhotes do grupo DFG quando comparados aos filhotes do grupo DS não

apresentaram diferença dos pesos corporais diários do 1o (DS=5,9 ± 0,6; DFG=5,9 ± 0,8) ao 21o (DS =28,9 ± 13,8;DFG=29,4 ± 14,1) dia pós-natal (Figura 5).

3 6 9 12 15 18 210

10

20

30

40

50 DSDFG

Dias de Vida

Peso

cor

pora

l (g)

Figura 5 - Efeito do tratamento com fluoxetina sobre o peso corporal de animais desnutridos na gestação. Os ratos desnutridos (n= 46, caseína 8%) receberam fluoxetina (1mg/Kg, s.c) a partir do 14o dia de gestação. Os dados estão representados em média + DP.

Parâmetros da gestação

Desnutrido Salina

Desnutrido Fluoxetina

Duração da gestação 22,3+ 0,7 22,3 + 0,7

Números de filhotes 7,3 + 0,7 6,7 + 0,8

Mortalidade das mães 5,0 + 0,0 7,0 + 0,0

34

Sucção e Ingestão Alimentar

Não houveram diferenças na duração de sucção entre os grupos DFG e DS nos

dias avaliados (Figura 6 A). A ingestão alimentar do grupo DFG reduziu (p<0,05) no 7o (DFG = 0,32 + 0,09;

DS = 0,4 + 0,07) e 14o (DFG = 0,54 + 0,14 ; DS = 0,6 + 0,07) dia de vida pós-natal

quando comparado ao DS (Figura 6 B).

3 7 14 210.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5DSDFG

Dur

ação

da

sucç

ão (s

)

Dias de Vida

3 7 14 210.00.10.20.30.40.50.60.70.80.9

*

*

Dias de Vida

Inje

stão

alim

enta

r ab

solu

ta (g

) DSDFG

Figura 6-Efeito da desnutrição e do tratamento com fluoxetina durante a gestação sobre o comportamento de sucção e ingestão alimentar em ratos.A duração do comportamento de sucção foi obtida no período de 1h após 4h de privação alimentar. O grupo desnutrido recebeu dieta hipoprotéica (n=46, caseína 8%). A fluoxetina (1mg/Kg, s.c) foi administrada nas mães a partir do 14o dia de gestação. Os dados estão representados em média +DP. *Indica diferença entre os grupos, Test t Student.

A

B

35

Peso Corporal e Ingestão Alimentar aos 35 dias de vida

Os filhotes do grupo DS (123,3 ± 7,8) quando comparados aos filhotes do grupo

DFG (130,6 ± 7,9) não apresentaram diferenças dos pesos corporais ao 35o dia de vida

(Figura 7A). O grupo DFG (2,43 ± 0,2) apresentou redução (p<0,05) na ingestão

alimentar relativa quando comparado ao DS (2,58 ± 0,2) (Figura 7B).

DS DFG0

50

100

150

Grupos

Peso

cor

pora

l (g)

DS DFG0

1

2

3

DS DFG

*

Grupos

Inge

stão

alim

enta

r (g

/g p

eso

corp

oral

)

Figura 7 –. Efeito do tratamento com fluoxetina sobre o peso corporal (A) e a ingestão alimentar (B) pós-desmame em ratos desnutridos durante a gestação. O grupo desnutrido recebeu dieta hipoprotéica (n=8, caseína 8%). A fluoxetina (1mg/Kg, s.c) foi administrada nas mães a partir do 14o dia de gestação. Os dados estão representados em média + DP. *Indica diferença entre os grupos, Test, t Student.

Efeito da fluoxetina na ingestão alimentar de animais que foram desnutridos e/ou manipulados farmacologicamente na gestação

O grupo de DFGA não apresentou diferença na ingestão alimentar quando

comparado ao grupo CFGA. A ingestão alimentar do grupo CFA (0,7 ± 0,2) diminuiu

(p<0,05) comparado ao CFGA (0,8 ± 0,1). A ingestão alimentar dos filhotes DFA (0,9 ±

0,2) diminuiu (p<0,05) comparado aos DFGA (1,0 ± 0,2) (Figura 8).

A B

36

CFA CFGA DFA DFGA0.00

0.25

0.50

0.75

1.00

1.25

* *

Grupos

Inge

stão

alim

enta

r (g

/g p

eso

corp

oral

)

Figura 8 – Efeito da administração aguda de fluoxetina sobre a ingestão alimentar de animais controle ou desnutridos na gestação. Os ratos receberam fluoxetina (10mg/Kg) administrada por via intraperitoneal aos 35 dias de vida. Os dados são representados em média + DP. *indica diferenças entre os grupos CFA e CFGA, DFA e DFGA.

4-DISCUSSÃO

A desnutrição protéica no período gestacional não alterou o ganho de peso

materno, mas promoveu redução do peso ao nascer e do número de filhotes nascidos.

O peso corporal é uma variável vulnerável ao processo de desnutrição, mas durante o

período de gestação parecem ocorrer adaptações que não permitem grande déficit do

peso corporal materno. Embora o peso ao nascer não tenha sido afetado no presente

estudo, o número de filhotes nascidos sofre redução. Quando a desnutrição incide

sobre períodos críticos como a gestação, processos adaptativos ocorrem para

preservação da prole (Bellinger et al 2006). Durante a gestação existe uma fase de

anabolismo protéico, primeira metade da gestação, para suportar uma segunda fase de

catabolismo. Essa observação pode ser suportada por análise de proteína da carcaça

de gestantes que foram submetidas a diferentes níveis de proteína na dieta (Pine et al,

1998). A redução de proteína apenas na segunda fase da gestação promove redução

do peso corporal e de músculo esquelético em ratas (Zartarian et al, 1980). A

37

manipulação dietética baixa em proteina durante a gestação leva a diferenças no

conteúdo de proteína da carcaça ao parto,mas não no tamanho do estoque do tecido

adiposo, peso de órgãos e composição ou tamanho dos filhotes (Pine et al.,

1994).Durante a fase catabólica da gestação, ratas desnutridas podem liberar

aminoácidos para o desenvolvimento do feto e da placenta havendo declínio na síntese

protéica muscular (Mayel-Afshar & Grimble, 1983). A relação entre baixo peso ao

nascer,crescimento fetal e idade gestacional relaciona-se a uma boa nutrição intra-

uterina, Fagundes et al (2007) observaram desproporcional crescimento fetal quando

ofertaram dietas com restrição protéica a filhotes recém nascidos. Em outro estudo,

relata-se que a subnutrição com o aumento do tamanho da ninhada, retardou o

crescimento físico do rato e revelou déficits de peso corporal oscilando entre 20 e 30%,

com permanência até os 600 dias de vida pós-natal (Loraca, 1999). O modelo de

desnutrição protéica, aplicada no presente estudo, reduziu a ingestão alimentar de

ratos no 3º e no 21º dias de vida. Esse resultado comprova a menor quantidade de

alimento disponível durante a lactação. Dieta hipoprotéica durante a gestação, reduz a

quantidade de lactose com conseqüências sobre a osmolaridade do leite e seu volume

(Grimble et al, 1987).

Os animais submetidos à desnutrição gestacional apresentaram estado de

hiperfagia aos 35 dias de idade. As dietas hipoprotéicas impostas no inicío da vida

apresentam relação com hiperfagia ao longo do tempo (Desai, 2005;Vickers, 2000).

Mudanças na expressão comportamental de ratos desnutridos na vida fetal foram

observadas anteriormente (Ward, 1991). Em animais adultos, a restrição alimentar

parece estar associada ao aumento da síntese do NPY no hipotálamo (Widdowson,

1997). Embora as investigações do presente estudo não tenham abordado aspectos

38

morfológicos, sugerimos que as alterações comportamentais evidenciadas possuam

estreita associações com tais alterações.

Este estudo promoveu análise da ação do sistema serotoninérgico sobre

parâmetros de crescimento e do comportamento alimentar quando esse sistema foi

previamente manipulado na vida fetal em animais normais ou desnutridos. Observamos

que a utilização de um inibidor da recaptura da serotonina no período crítico do

desenvolvimento não alterou o número de filhotes nascidos, a mortalidade materna ou

a duração da gestação. Por outro lado, estudo utilizando doses superiores a 7,5

mg/kg/peso corporal, observaram aumento de 10 a 20% de mortalidade da prole (Hoyt

et al., 1989). Outras alterações como a presença de hematomas subcutâneos e

redução do tamanho encefálico foram observadas em ratos expostos a fluoxetina no

útero (Monteiro et al, 1990). O uso de doses elevadas encontra-se relacionada à

neurotoxicidade fetal, toxicidade materna com perda de peso (Sheets et al., 1989) e,

indiretamente, com o aumento da serotonina na fenda sináptica (Davis et al., 1988). No

presente estudo, observamos redução do peso corporal apenas a partir do 11° dia de

vida em resposta ao tratamento com fluoxetina gestacional. Esse resultado foi diferente

de estudo prévio realizando manipulação semelhante, o qual encontrou baixo peso

desde o nascimento (Aigrain, 2005). Essa divergência pode ser atribuída à

concentração da droga utilizada, pois neste ultimo estudo a dose foi maior.

Em nossos resultados,o tratamento materno com fluoxetina promoveu aumento

na ingestão alimentar dos filhotes no 7º, 14º, 21º e 35º dias de vida. Por outro lado,

houve diminuição da duração de sucção no 14º, 21º dias de vida. Esses resultados

indicam em conjunto, uma ação serotoninérgica para o adiantamento do processo de

desmame. Estudos pioneiros definiram o papel da serotonina no processo de lactação

com a utilização de drogas agonistas e antagonistas evidenciando favorecimento do

39

sistema 5-HT na transição de sucção para ingestão de alimento sólido (Hall et

al.,1977).A serotonina estimula a sucção ate aproximadamente o 150 dia de lactação

apresentando a partir dessa data inibição desse comportamento e da conseqüente

quantidade de alimento ingerido que vai ser observado na vida adulta (Aigrain, 2005).

Os resultados obtidos no 350 dia de vida podem sugerir um possível fenômeno

de “programação serotoninérgica” da ingestão alimentar.Observamos que o tratamento

gestacional com fluoxetina promoveu aumento da ingestão ainda nessa idade. A partir

do 300 dia de vida, o controle do comportamento alimentar apresenta características

do sistema de regulação adulto (Halford e Blundell 1998). Dessa forma, podemos

sugerir que o tratamento imposto nesse estudo promoveu alterações comportamentais

permanentes. Outros estudos não observaram, após tratamento gestacional com

fluoxetina, alterações da ingestão alimentar (Silva et al., 1999). Essas diferenças

podem estar associadas às diferentes doses utilizadas nesses estudos (Aigrain et al

2005). Sabemos que inibidores da recaptação da serotonina podem apresentar efeitos

distintos a depender da dose administrada.Dessa maneira, estudos relatam a

“programação” da resposta anorexigênica da serotonina em ninhadas que

apresentaram diminuição do crescimento intrauterino, reduzindo os efeitos

anorexigênico (Desai et al, 2005). Em humanos, o tratamento com inibidor seletivo de

recaptação da serotonina promove hipofagia e redução do peso corporal (Leibowitz et

al, 1988). Entre as manipulações ambientais que pode alterar os níveis e serotonina

encefálica está a desnutrição. Animais desnutridos apresentam níveis elevados de

serotonina no encéfalo, semelhante ao tratamento com ISRS (Rodriguez et al, 2006). O

aumento cerebral de triptofano, triptofano hidroxilase, serotonina e 5-ácido

hidroxiindolácetico (5HIAA) foram observados em animais que sofreram desnutrição no

periodo de gestação e lactação (Manjarrez 1994; Wiggins et al, 1984). Esses animais

40

apresentam hiperfagia na vida adulta quando associada às dietas altamente palatáveis

(Bellinger et al, 2004). Diante dessas observações podemos sugerir que existem

alterações do sistema serotoninérgico em organismos manipulados com ISRS durante

a gestação, e essas favorecem as alterações observadas sobre a ingestão alimentar.

Quando associadas às manipulações nutricionais e farmacológicas, observamos

resultados distintos dos obtidos isoladamente. O uso de fluoxetina em ratas desnutridas

no período e dose utilizadas neste estudo não alterou o número de filhotes nascidos, a

mortalidade materna ou a duração da gestação. A evolução ponderal dos pesos das

mães e dos filhotes desnutridos não foi diferente dos desnutridos que recebiam

fluoxetina em todos os dias de observação. A ingestão alimentar aos 35 dias de vida

mostrou-se reduzida nesses animais, ao contrário dos resultados com tratamento

nutricional ou farmacológico isolados. Ambas as agressões, incidindo durante período

de grande vulnerabilidade, podem ter promovido potencialização da ação hipofágica do

sistema serotoninérgico observada nos tratamentos agudos na vida adulta (Li et al,

2000). Em estudos anteriores do nosso laboratório, observamos que animais

desnutridos durante o período neonatal apresentaram hiporesponsividade ao efeito de

ISRS sobre comportamento agressivo e alimentar na vida adulta (Barreto-Medeiros et

al., 2004; Manhães de Castro et al., 2001). Estudo morfológico demonstrou leve

aumento de constituintes do sistema serotoninérgico em ratos desnutridos e tratados

com agonista 5-HT no período pré e pós-natal (Almeida et al., 1996). Somando-se a

esses resultados foi observada reduzida sensibilidade de receptores 5-HT (Almeida et

al., 1996).

Em ratos desnutridos na segunda semana de vida pós-natal, há redução da

densidade de receptores 5-HT, com provável alteração do receptor 5-HT1B , que é

importante no controle do comportamento alimentar (Duncan et al., 2000). É bem

41

documentado que tanto a administração aguda como a crônica do fármaco repercute

em possíveis alterações em diversos componentes do sistema serotoninérgico.

O ultimo resultado desse estudo, descreve o efeito da fluoxetina quando essa foi

administrada aos 35 dias de vida, visando o estudo da responsividade aos efeitos

hipofágicos da serotonina em organismos normais ou desnutridos que foram ou não

sensibilizados precocemente quando tratados com ISRS. Nesse contexto observamos

que a ingestão alimentar reduziu em ambos os grupos após a aplicação aguda de

fluoxetina. Ação hipofágica da serotonina é bem documentada na literatura (Blundell et

al., 1998). Evidenciamos, no entanto, que a desnutrição gestacional promoveu

alteração na ingestão alimentar mesmo após aplicação de fluoxetina, promovendo a

programação do comportamento alimentar produzindo mudanças no apetite durante o

período pós-natal precoce e que por vezes, parece persistir por toda a vida.

5-REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS Aigrain -Jacqz- E, Koren G. Effects of drugs on the fetus. Semin Fetal Neonatal Med. 2005; Apr;10(2):139-47. Almeida Sebastião S., Jhon Tonkiss and Janina R. Galler. Malnutrition and Reactivity to Drugs Acting in the Central Nervous System. Neuroscience and Biobehavioral Reviews,Vol. 20, N° 3 pp. 389-402,1996. AIN-1993. Purified diets for laboratory rodents; final report of the American Institute of Nutrition ad Hoc Writing Committee on the Reformulation of the AIN -76A rodent diet. The Journal of Nutrition, v. 123, n. 10, p. 1939-1951,1993. Azmitia, E. Modern views on an anciet chemical: serotonin effects on cell proliferation,maturation, and apoptosis. Brain.Res.Bull 2001;56:413-424. Barreto-Medeiros J.M, Feitoza E.G, Magalhaes K, Cabral-Filho J.E, Manhaes-de-Castro F.M, De-Castro C.M, Manhaes-De-Castro R. Malnutrition during brain growth spurt alters the effect of fluoxetine on aggressive behavior in adult rats. Nutr Neurosci. Feb. 2004; 7(1):49-52. Bellinger, L, Lilley,C. and Langley-Evans,S.C.(2004) Prenatal exposure to a maternal low-protein diet programmes a preference for high-fat foods in the young adult rat.Br.J.Nutr.92,513-520.

42

Blundell J.E. Halford J.C, Wanninayake S.C, Behavioral satiety sequence (BSS) for the diagnosis of drug action on food intake. Pharmacol Biochem Behav. 1998 Oct;61(2):159-68. Bouret S.G, Simerly R.B. Drapher S.J, Simerly R.B. Trophic action of leptin on hypothalamic neurons that regulate feeding.Science. 2004; 304:108-10. Clifton P.G, Lee M.D, Dourish C.T. Similarities in the action of Ro 60-0175, a 5-HT2C receptor agonist and d-fenfluramine on feeding patterns in the rat. Psychopharmacology (Berl). 2000 Oct;152(3):256-67. Cooper SJ, Ciccocioppo R. Effects of selective 5-HT1 receptor agonists in water-deprived rats on salt intake in two-choice tests.Pharmacol Biochem Behav. 1993 Jul;45(3):513-8. Curzon G. Serotonergic mechanisms of depression Clin Neuropharmacol. 1988;11 Suppl 2:S11-20. Davis, M; Cassela, J.V, Kehne, J.H. Serotonergic modulation of sensorimotor reactivity and conditioned fear as measured with the acoustic startle reflex. In 5-HT Agonists as Psychoactive Drugs, 1988; 163-184. Desai Mina, Dave Gayle,Guang Han, Michael G.Ross. Programmed Hyperphagia due to reduced anorexigenic mechanisms in intrauterine growth-restricted offspring.Reproductive Sciences 2005;14;329. Dourish CT, Kitchener SJ, An examination of the behavioural specificity of hypophagia induced by 5-HT1B,5-HT1C and 5-HT2 receptor agonists using the post-prandial satiety sequence in rats Psychopharmacology (Berl). 1994 Jan;113(3-4):369-77. Dreshfield-Ahmad L.J, Thompson D.C, Schaus J.M, Wong D.T. Enhancement in extracellular serotonin levels by 5-hydroxytryptophan loading after administration of WAY 100635 and fluoxetine. Life Sci. 2000 Apr 14; 66(21):2035-41. Duncan M.J, Crafton C.J, Wheeler D.L. Aging regulates 5-HT(1B) receptors and serotonin reuptake sites in the SCN. Brain Res. 2000 Feb 21;856(1-2):213-9. Gluckman, P.D.; Hanson, M.A Living with the past: evolution, development and patterns of disease. Science, 2004; 305, 1733-1736. Godfrey, KM; Barker DJ. Fetal programming and adult health. Public Health Nutr. 2001 Apr;4(2B):611-24. Grimble RF, Mansaray YK. Effects in rats of dietary protein inadequacy on lactose production, milk volume and components of the lactose synthetase complex (EC 2.4.1.22).Ann Nutr Metab. 1987;31(3):179-84. Hales C.N, Barker D.J. Type 2 (non-insulin-dependent) diabetes mellitus: the thrifthy phenotype hypothesis. Diabetologia, 1992; 35,595-601.

43

Hall, G.W, Cramer, P.C. Ontogeny of Suckling in rats: Transitions Toward Adult Ingestion. Journal of Comparative and Physiological Psychology 1977,Vol.91,N°5,1141-1155. Halford, J.C.G; Blundell, J.E. 5-hydroxytriptaminergyc drugs compared on the behavioural sequence associated with satiety.Br.J.Pharmacol.100s;95P; 1993. Hewitt KN, Lee MD, Dourish CT, Clifton PG. Serotonin 2C receptor agonists and the behavioural satiety sequence in mice. Pharmacol Biochem Behav. 2002 Apr;71(4):691-700. Hernández, R.J. Effects of malnutrition and quipazine on rat cerebral cortex ATPase activity during development. Dev. Neurosci. 1980; 3: 277-282. Hoyt, J.A, Byrd, R.A, Brophy, G.T, Markham, J.K. A reproduction study of fluoxetine hydrochloride (I) administered in the diet to rats. Teratology, 1989; 39,459. Houpt KA, Houpt TR. Effects of gastric loads and food deprivation on subsequent food intake in suckling rats.J Comp Physiol Psychol. 1975 Feb;88(2):764-72. Li Q, Wichems C, Heils A, Lesch KP, Murphy DL. Reduction in the density and expression, but not G-protein coupling, of serotonin receptors (5-HT1A) in 5-HT transporter knock-out mice: gender and brain region differences. J Neurosci. 2000 Nov 1;20(21):7888-95. Lightowler S, Wood M, Brown T, Glen A, Blackburn T, Tulloch I, Kennett G. An investigation of the echanism responsible for fluoxetine-induced hypophagia in rats.Eur J Pharmacol. 1996 Jan 25;296(2):137-43. Lucas B.D. How healthy is your sick leave program? Bus Health. 1991 Dec;9(13):78-80 Mancilla-Diaz JM, Escartin-Perez RE, Lopez-Alonso VE, Floran-Garduño B, Romano-Camacho JB. Role of 5-HT1A and 5-HT1B receptors in the hypophagic effect of 5-HT on the structure of feeding behavior. Med Sci Monit. 2005 Mar;11(3):BR74-9. Mayel-Afshar S, Grimble RF. Changes in protein turnover during gestation in the foetuses, placentas, liver, muscle and whole body of rats given a low-protein diet. Biochim Biophys Acta. 1983 Mar 31;756(2):182-90. Manjarrez G, Manuel-A L, Mercado-C R, Hernandez-R J Serotonergic receptors in the brain of in utero undernourished rats. Int J Dev Neurosci. 2003 Aug;21(5):283-9. Manhães–de–Castro, R.; Barreto Medeiros, J.M.; Mendes da Silva, C.; Ferreira, L.M.P.; Guedes, R.C.A.; Cabral Filho, J.E. Reduction intraspecific agression in adult rats by neonatal treatment with a selective serotonin reuptake inhibitor. Braz J Med Biol Res, 2001; 34: 121 – 124.

44

Montero D, Ceballos, M.L, Del Rio, J. Down-Regulation of 3H-imipramine binding sites in rat cerebral cortex alter prenatal exposure to antidepressants. Life Sci. 1990; 46,1619-1626. Morgane P.J, Austin-Lafrance R.J, Bronzino J.D, Tonkiss J, Diazcintra S, Cintra L, Kemper T, Galler J.R. Prenatal malnutrition and development of the brain. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 1993; 17, 91-128. Odorizzi M, Max JP, Tankosic P, Burlet C, Burlet A.Dietary preferences of Brattleboro rats correlated with an overexpression of galanin in the hypothalamus. Eur J Neurosci. 1999 Sep;11(9):3005-14 Pine AP, Jessop NS, Allan GF, Oldham JD. Maternal protein reserves and their influence on lactational performance in rats. Br J Nutr. 1994 Dec;72(6):831-44. Plagemann A, Harder T, Rake A, Melchior K, Rohde W, Dorner G. Hypothalamic nuclei are malformed in weanling offspring of low protein malnourished rat dams. J Nutr. 2000; 130: 2582-9. Plagemann A, Harder T, Rake A, Waas T, Melchior K, Ziska T, Rohde W, Dörner G. Observations on the orexigenic hypothalamic neuropeptide Y-system neonatally overfed weanling rats. J Neuroendocrinol. 1999;11:541-6. Rodríguez VM, Gutiérrez A, Saracíbar G, Casis L, Echevarría E, , Macarulla MT, Abecia LC, Portillo MP Effects of fluoxetine administration on neuropeptide y and orexins in obeso zucker rat hypothalamus. Obes Res. 2002 Jun;10(6):532-40. Sheets, L.P; Cook, LL and Reiter, LW. Serotonergic modulation of the acoustic tartle response in rats during preweaning development. Pharmacol. Biocchem. Behav., 1989;33:415-422. Tsuiki K, Takada A, Nagahiro S, Grdisa M, Diksic M, Pappius H.M. Synthesis of serotonin in traumatized rat brain. J Neurochem. 1995 Mar; 64(3):1319-25. Vichers MH, Breier BH, Cutfield WS, Hofman PL, Gluckman PD. Fetal origins of hyperphagia, obesity, and hypertension and postnatal amplification by hypercaloric nutrition. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2000; 279: E83-87. Zartarian GN, Galler JR, Munro HN. Marginal protein deficiency in pregnant rats. I. Changes in maternal body composition. J Nutr. 1980 Jul;110 (7):1291-7. Ward, I.L; Stehm, K.E. Prenatal stress feminizes juvenili play patterns in male rats. Physiol.Behav. 1991;50: 601-605. Whitaker-Azmithia, P.M. Role of Serotonin and other neurotransmitter receptors in brain development: basis for developmental pharmacology. Pharmacol. Rev. 1991; 43, 553-561. Widdowson P.S. Regionally-selective down-regulation of NPY receptor subtypes in the obese Zucker rat. Relationship to the Y5 feeding receptor. Brain Res, 1997; 758:17-25.

45

Wiggins, R.C; Fuller, G; Enna, S.J. Undernutrition and the development of brain neurotransmitter systems. Life Sci. 1984; 35:2085-2094.

Artigo 2

Titulo:Efeito da desnutrição e do tratamento com fluoxetina sobre a Seqüência comportamental de saciedade em ratos.

Resumo

A estrutura do comportamento animal reflete a operação natural e fisiológica que

envolve a modulação da ingestão alimentar. A Seqüência Comportamental de

Saciedade (SCS) em ratos é caracterizada pela transição dos comportamentos de

alimentação, descanso e limpeza, associado ao término natural da alimentação. Essa

característica comportamental do rato nos permite utilizar a SCS como ferramenta para

testar o efeito de uma dieta hipoprotéica no período crítico de desenvolvimento como a

gestação e a ação de drogas ou outras manipulações que possam agir sobre o

desencadeamento de saciedade, como, por exemplo, drogas anoréxicas. Foram

utilizadas ratas prenhas da linhagem Wistar divididas em 8 grupos experimentais.Ratos

receberam dieta normoprotéica (CS, caseína 17%) ou hipoprotéica (DS, caseína 8%)

durante o período de gestação. O tratamento crônico com fluoxetina (fluoxetina 1mg/Kg

p.c.) foi realizado do 14o ao 21o dia de gestação. Após o desmame, os grupos

receberam fluoxetina agudamente (fluoxetina 10mg/Kg p.c.). A desnutrição aumentou a

duração da alimentação e retardou o descanso. O grupo desnutrido fluoxetina na

gestação quando comparado ao grupo controle fluoxetina na gestação manteve a

estrutura normal da SCS, entretanto houve aceleração da transição alimentação-

descanso, mantendo normal o comportamento de limpeza e atividade. O grupo

desnutrido fluoxetina aguda quando comparado ao grupo controle fluoxetina agudo

manteve a estrutura normal da SCS, entretanto retardou a transição alimentação-

descanso mantendo normal o comportamento de limpeza e da atividade. Podemos

concluir que a desnutrição gestacional e o tratamento crônico com fluoxetina durante a

gestação promove hiperfagia após o desmame por alterar variáveis quantitativas e

temporais da expressão do comportamento alimentar. O disparo da saciedade parece

ser particularmente afetado por desnutrição gestacional.

46

1-INTRODUÇÃO

É conhecido na literatura que a desnutrição durante o inicío da vida induz

mudanças na estrutura do cérebro. Animais experimentais que sofreram desnutrição no

útero durante os primeiros estágios de desenvolvimento pós-natal reduziram respostas

a drogas psicoativas do sistema nervoso central (Brozek,1990; Morgane et al, 2002).

Quando a dieta hipoprotéica é imposta durante o período de gestação, existe

grande probabilidade da ocorrência de baixo peso ao nascer, com conseqüentes

alterações morfofuncionais de caráter permanente (Snoeck et al, 1990). A expressão

do comportamento alimentar parece ser programada com várias alterações nos seus

mecanismos fisiológicos de controle (Bellinger et al 2004; Kehoe et al., 2001). Essas

alterações serão responsáveis pelo aumento da ingestão alimentar (Colombo et al,

1992) e conseqüente ganho de peso na vida adulta (Rothwell et al, 1987).

Nessa agressão nutricional, ocorre também diminuição na concentração de

várias substâncias no hipotálamo, estrutura encefálica importante no controle da

homeostase energética (Kehoe et al., 2001).O controle serotoninérgico é um dos

principais atingidos, com elevação da concentração de serotonina e mudanças no

metabolismo do seu precursor, o aminoácido essencial triptofano (Resnick et al. 1979;

Manjarrez et al., 2003; Lister et al., 2005). Por exemplo ratos que foram submetidos há

uma dieta hipoprotéica durante a gestação ou lactação, acelerou a síntese de

serotonina no cérebro e mostraram alterações no hipotálamo em estudos realizados

por Manjarrez et al (1993) , Plagemann (2000) e Almeida et al (1996).

A Serotonina tem importante papel no controle do comportamento alimentar

(Leibowitz et al, 1998), particularmente na ingestão de carboidratos (Noach et al, 1994).

Drogas que bloqueiam a recaptação da serotonina na fenda sináptica, aumentando sua

disponibilidade, inibem a ingestão alimentar (Weiss et al, 1986, 1990). No hipotálamo a

serotonina parece atuar nos núcleos arqueado e paraventricular (Leibowitz 1998;

Blundell, 1998). A administração de agonistas serotoninérgicos produz redução na

duração das refeições individuais associada à diminuição da quantidade de alimento

(Blundell et al, 1984).Foram encontrados em ratos submetidos à aplicação de agonistas

8-OH-DPAT uma diminuição da ingestão alimentar (Alonso et al, 2007).

47

Os subtipos de receptores 5-HT1B e o 5-HT2C são importantes na regulação da

atividade serotoninérgica sobre o comportamento alimentar (Dalton et al, 2006;

Blundell, 1997).

A estrutura do comportamento animal reflete a operação natural e fisiológica que

envolve a modulação da ingestão alimentar. A Seqüência Comportamental de

Saciedade (SCS) em ratos é caracterizada pela transição dos comportamentos de

alimentação, descanso e limpeza, associado ao término natural da alimentação

(Blundell, 1998).Essa característica comportamental do rato nos permite utilizar a SCS

como ferramenta para testar a ação de drogas ou outras manipulações que possam

agir sobre o desencadeamento de saciedade, como por exemplo drogas anoréxicas

(Blundell et al, 1981,1980). Em estudos que ratos receberam tratamentos com drogas

anoréxicas, agonistas e antagonistas serotoninérgicos mostraram mudanças da

Seqüência Comportamental de Saciedade (Halford et al, 1998; Rodger et al, 2000;

Alonso, 2007) . A ação destas drogas pode distinguir mecanismos neuroquimícos que diferem

em efeitos comportamentais (Blundell, 1998).No presente estudo utilizaremos a SCS

para investigar a ação de manipulações nutricionais e farmacológicas durante a

modulação dos mecanismos de controle do comportamento alimentar. 2-MATERIAL E MÉTODOS

Animais Foram utilizados ratos da linhagem Wistar da colônia do Biotério do

Departamento de Nutrição da Universidade Federal de Pernambuco. Os animais foram

mantidos com água e ração ad libitum, ciclo claro-escuro 12/12 h (início às 6h). Os

procedimentos experimentais obedeceram aos princípios do Comitê de ética desta

Universidade.

Grupos Experimentais Após a verificação de gestação, por observação de espermatozóides no

esfregaço vaginal, ratas receberam dieta normoproteica (CS, caseína 17%) ou

hipoproteica (DS, caseina 8%) durante toda a gestação. Esses dois grupos receberam

tratamento com fluoxetina (10mg/Kg pc, sc) a partir do 14o dia de gestação constituindo

os grupos controle fluoxetina na gestação (CFG) ou desnutrido fluoxetina na gestação

48

(DFG). Após o desmame os animais receberam tratamento agudo com fluoxetina

(10mg/Kg pc) constituindo os grupos controle ou desnutrido fluoxetina aguda (CFA,

DFA) e controle ou desnutrido fluoxetina gestacional e aguda (CFGA, DFGA). Os

grupos experimentais estão descritos na figura 1.

GESTAÇÃO

Caseina17% Caseina17%

14 d Salina 21 d1 d 35d

14 d Fluoxetina 21 d1 d 35d

14 d Salina 21 d1 d 35d

14 d Fluoxetina 21 d1 d 35d

Caseina17% Caseina17%

Caseina8% Caseina17%

Caseina8% Caseina17%

CS

CFG

DS

DFG

Caseina17% Caseina17%

14 d Salina 21 d1 d 35d

14 d Fluoxetina 21 d1 d 35d

14 d Salina 21 d1 d 35d

14 d Fluoxetina 21 d1 d 35d

Caseina17% Caseina17%

Caseina8% Caseina17%

Caseina8% Caseina17%

CFA

CFGA

DFA

DFGA

Salina

Salina (1 ml/Kg pc)

Salina

Salina

Fluoxetina

Fluoxetina

Fluoxetina

Fluoxetina

GRUPOSLACTAÇÃO

Figura 1 – Esquema da distribuição dos grupos experimentais. Ratos receberam dieta controle (CS, caseína 17%) ou hipoprotéica (DS, caseína 8%) durante o período de gestação. O tratameto crônico com fluoxetina (CFG, DFG, 1mg/Kg p.c.) foi realizado a partir do 14° ao 21° dia de gestação. Após o desmame, os grupos receberam fluoxetina (CFA, DFA, CFGA, DFGA, 10mg/Kg p.c.) por administração aguda.

Procedimentos Para a avaliação da SCS, os animais foram mantidos previamente em privação

alimentar de cinco horas. Após este periodo, alimento com peso conhecido foi

oferecido, e dado inicío ao registro permanecendo o pesquisador a 1,5m de distância

49

da gaiola. Foi registrada, durante um periodo de 40 minutos, a duração dos seguintes

comportamentos: Alimentação: O registro desse comportamento foi iniciado imediatamente quando o rato

foi observado junto ao comedouro iniciando a ingestão de ração. O mesmo foi

finalizado no momento em que o rato abandonou o comedouro.

Limpeza: O rato procedeu inicialmente o lamber de patas anteriores e movimentos

dessas sobre a cabeça continuando-se com o lamber da região ventral, do dorso e das

patas posteriores.

Repouso: O rato foi observado em posição de descanso, apresentando o corpo

respousado sobre o assoalho da gaiola.

Atividade: Incluem outros comportamentos como: locomoção, cheirar, levantar as patas

anteriores e explorar a área. Ingestão alimentar: Foi obtida pela diferença do peso da ração antes e após a

observação comportamental.

Análise Estatística Na comparação dos diferentes grupos, será empregada a ANOVA para os

dados paramétricos. Quando a ANOVA revelar diferença significativa, será utilizado o

teste de Tukey para identificar as diferenças entre os grupos. Para os dados não

paramétricos, será utilizado o teste de Kruskal-Wallis, seguido do teste de Mann-

Whitney.

Consumo Alimentar pós-desmame

A avaliação de ingestão alimentar aos 35 dias de vida foi obtida pela subtração

do peso da ração antes e após o período de observação comportamental de 40

minutos.

Parâmetros Alimentares Os parâmetros alimentares associam elementos estruturais importantes na

expressão do comportamento alimentar. Assim, relacionam a quantidade de alimento

ingerido em cada teste em relação temporal. Foram observados durante quarenta

minutos da avaliação da seqüência comportamental de saciedade. Os parâmetros

avaliados foram:

ATT- Quantidade de alimento consumida pelo animal no tempo total de teste (g/40min).

50

AUT- Quantidade de alimento consumida pelo animal por unidade de tempo (g/min).

LAT- Tempo (latência) gasto (s) pelo animal para iniciar a ingestão de ração no inicío

do teste.

3-RESULTADOS

Seqüência Comportamental de Saciedade (SCS) A progressão da alimentação, limpeza e descanso foram analizadas em todos os

grupos, sem observação de interrupção da seqüência comportamental. Os animais

desnutridos (DS) quando comparados ao CS (controle), mantiveram a estrutura normal

da SCS, entretanto, houve aceleração da transição alimentação-descanso mantendo

normal o comportamento de limpeza e atividade. A desnutrição aumentou a duração da

alimentação e retardou o descanso. O grupo desnutrido fluoxetina na gestação (DFG)

quando comparado ao grupo controle fluoxetina na gestação (CFG) manteve a

estrutura normal da SCS, entretanto houve aceleração da transição alimentação-

descanso, mantendo normal o comportamento de limpeza e atividade. (Figura 2) A progressão da alimentação, limpeza e descanso foram observadas. O grupo

desnutrido fluoxetina aguda (DFA) quando comparado ao grupo controle fluoxetina

agudo (CFA) manteve a estrutura normal da SCS, entretanto retardou a transição

alimentação-descanso mantendo normal o comportamento de limpeza e da atividade.

(Figura 2)

51

CS

1 2 3 4 5 6 7 80

100

200

300

Períodos

Dur

ação

(s)

DS

1 2 3 4 5 6 7 80

100

200

300

Alimentação Descanso Limpeza Atividade

Períodos

Dur

ação

(s)

CFG

1 2 3 4 5 6 7 80

100

200

300

Períodos

Dur

ação

(s)

DFG

1 2 3 4 5 6 7 80

100

200

300

Períodos

Dur

ação

(s)

CFA

1 2 3 4 5 6 7 80

100

200

300

Periodos

Dur

ação

(s)

DFA

1 2 3 4 5 6 7 80

100

200

300

Periodos

Dur

ação

(s)

Figura 2 - Efeito da desnutrição e do tratamento com fluoxetina sobre a seqüência comportamental de saciedade. Foram avaliados os comportamentos de alimentação, descanso, limpeza e outras atividades no período de 40 minutos. A fluoxetina (1mg/Kg p.c) foi injetada do 14o ao 21o dia de gestação, e administração aguda aos 35 dias de vida (10 mg/Kg p.c.). Grupos experimentais: CS, CFG e CFA (controle salina, fluoxetina gestacional, fluoxetina aguda), DS, DFG e DFA (Desnutrido salina, fluoxetina gestacional e aguda).

52

A transição entre a alimentação-descanso foi evidente no período 5.5 (27.5 min

da sessão) no grupo Controle (CS), no período 7 (35 minutos da sessão) no grupo

desnutrido (DS), no periodo 6 (30 min da sessão) no grupo controle fluoxetina na

gestação (CFG) e no período 7.3 (30 minutos da sessão) no grupo desnutrido

fluoxetina na gestação (DFG) (Figura 3). A transição entre a alimentação e descanso foi observada no período 5 (25.0

min da sessão) no grupo CFA e no período 4 (20.0 min da sessão) no DFA. A

administração aguda de fluoxetina diminuiu a duração da alimentação e acelerou o

descanso no grupo DFA comparado ao CFA (Figura 3).

CS

0 1 2 3 4 5 6 7 80

50

100

150

200

250

300

350 AlimentaçãoDescanso

Periodos

Dur

ação

(s)

DS

0 1 2 3 4 5 6 7 80

50

100

150

200

250

300

350

Periodos

Dur

ação

(s)

CFG

0 1 2 3 4 5 6 7 80

50

100

150

200

250

300

350

Periodos

Dur

ação

(s)

DFG

0 1 2 3 4 5 6 7 80

100

200

300

Periodos

Dur

ação

(s)

CFA

0 1 2 3 4 5 6 7 80

100

200

300

Periodos

Dur

ação

(s)

DFA

0 1 2 3 4 5 6 7 80

100

200

300

Periodos

Dur

ação

(s)

Figura 3 - Efeito da desnutrição e do tratamento com fluoxetina sobre o período de saciedade em ratos. Foram avaliados os comportamentos de alimentação e descanso evidenciando o ponto de transição entre esses dois comportamentos. A fluoxetina foi injetada (1mg/Kg p.c) do 14° ao 21° dia de gestação, e administração aguda (10mg/Kg p.c.) realizada no 35º dia de vida. Grupos experimentais: CS, CFG e CFA (controle salina, fluoxetina gestacional, fluoxetina aguda), DS, DFG e DFA (desnutrido salina, fluoxetina gestacional e aguda). Duração de 40 minutos os dados foram agrupados em período de 5 minutos.

53

Duração da seqüência comportamental de saciedade durante o tempo total

Os dados gerais da seqüencia comportamental de saciedade estão expressos

na Tabela 1. O grupo DS apresentou maior (p<0,05) tempo de alimentação e descanso

quando comparado ao CS e DFG. A duração do comportamento de limpeza foi maior

(p<0,05) no grupo CS em relação ao DS. O grupo DFG apresentou maior (p<0,05)

duração de atividade quando comparado ao DS. Os animais CFA apresentaram a

duração do comportamento de alimentação maior p<0,05 que os DFA. O grupo DFA

apresentou a duração do comportamento de alimentação maior (p<0,05) que o DFGA. O comportamento de limpeza dos animais CFA foi maior (p<0,05) quando comparados

ao DFA e ao CFGA.

Tabela 1 – Dados da seqüência comportamental de saciedade em animais desnutridos e/ou tratados com fluoxetina.

Os dados estão expressos em média ± DP. * e # indica diferença entre os grupos.

Os dados estão expressos em média±DP. * Indica diferença entre os grupos em relação ao CS e # indica diferença com o DS.

Análises de parâmetros temporais associados à Seqüência Comportamental de Saciedade

Os animais desnutridos salina (DS) apresentaram valores de ATT maiores

(p<0,01), e de Latência menores que os animais controles salina (CS) (Tabela 2). Os

grupos CFG e DFG apresentaram valores de AUT maiores que os grupos CS e DS

respectivamente. A latência para iniciar a ingestão foi menor nos grupos DS, CFG e

CFA quando comparados ao grupo CS, e maior nos grupos DFG e DFA quando

comparados com o grupo DS (Tabela 2).

Grupos experimentais

Alimentação Limpeza Descanso Atividade

CS 1096,0 ± 57,7 156 ± 22,1* 523 ± 98,1 609± 94,2 DS 1652,7 ± 64,1* 69,7 ± 18,8 285,1± 26,2* 426 ± 11,1

CFG 1170,1 ± 108,8 156,7± 23,2 411,3 ± 70,2 605,8 ± 67,8 DFG 1435,1 ± 62,4 91,3 ± 14,4 213,4 ± 31,2 658,2 ± 76,6* CFA 861,0 ± 104,7* 210 ± 31,5# 850,0 ± 138,7 412,0 ± 78,1 DFA 722,3 ± 61,5 # 161,8 ± 22,8 874,3 ± 143,7 566,6 ± 96,6

54

Tabela 2. Parâmetros da seqüência comportamental de saciedade em ratos desnutridos e/ou tratados com fluoxetina.

Valores são expressos em media +/- desvio padrão. Student t test. * indica diferença com o grupo CS, # indica diferença com o grupo DS.

Ingestão alimentar de animais desnutridos e tratados com fluoxetina no período gestacional e na vida adulta.

O grupo DS (2,6 ± 0,2) e DFG (2,4 ± 0,3) apresentou aumento (p<0,01) na

ingestão alimentar comparados ao grupo CS (1,6 ± 0,2); CFG (1,92 ± 0,4). No grupo

DFG (2,4 ± 0,3) houve aumento (p<0,01) da ingestão alimentar em relação ao grupo

CFG (1,92 ± 0,4). A ingestão alimentar dos grupos CFA e DFA foram menores que

aquelas dos grupos CS e DS respectivamente (CFA 0,73 ± 0,2; DFA 0,93 ± 0,2).

Quando comparado ao grupo CFA, o grupo DFA apresentou maior (p<0,05) ingestão

alimentar (Figura 4).

CS DS CFG DFG0

1

2

3 **

#

Grupos

Inge

stão

alim

enta

r (g

/g p

c)

CS CFA DS DFA0

1

2

3

**#

Grupos

Inge

stão

alim

enta

r (g

/g p

c)

Figura 4 - Efeito da desnutrição e/ou da fluoxetina no período gestacional sobre a ingestão alimentar. Os filhotes de ambos os grupos receberam aos 35 dias de vida solução salina (n= 18, NaCl 0,9%) ou fluoxetina (n=18, 10mg/Kg) 1 hora antes da análise comportamental. Os dados estão representados em média ± DP. * indica diferença com o grupo CS, # indica diferença com os grupos CFG ou CFA.

Grupos Experimentais

Ingestão (g) ATT (g/min) AUT (g/min) LAT (min)

CS 1,6 ± 0,2 8,1±2,1 3,87±0,9 64,6±37 CFA 0,7 ± 0,1 5±1,9 1,81±0,5 30,9±15* CFG 1,9±0,4 10,6±3,9* 4,34±1,1 52,9±20* DS 2,62±0,2 8,7±0,9 6,54±0,4 * 0*

DFA 0,93±0,2 7,91±1,9 2,32±0,5 46,6±14,8#

DFG 2,4±0,2 11,1±2,4# 5,90±0,7 41,7±21,2#

55

4-DISCUSSÃO

Nesse estudo, investigamos individualmente e simultaneamente as

repercussões da desnutrição protéica e do tratamento com inibidor de recaptação da

serotonina durante a gestação sobre o comportamento alimentar em ratos. Os dados

da análise comportamental revelaram importantes características de variáveis do

comportamento alimentar, como duração da refeição e quantidade de alimento ingerido

nesses animais.

Esse estudo demonstrou que a desnutrição e a fluoxetina durante o período de

gestação promovem mudanças na SCS de ratos, evidenciando-se aumento ou

diminuição do disparo da saciedade dependendo do agente agressor. Da mesma

forma, esses tratamentos durante a gestação, modularam as respostas do sistema

serotoninérgico no controle do comportamento alimentar após o desmame.

Observamos que o tratamento crônico com fluoxetina durante a última semana

de gestação promoveu mudanças na sequência comportamental de saciedade após o

desmame com antecipação no declínio do período de alimentação e aumento do

descanso. Esse contato inicial com a fluoxetina pode ter desenvolvido uma

“programação” com anormalidades no controle serotoninérgico sobre o comportamento

alimentar (Halford et al 2005). Essa seqüela pode ter sido promovida particularmente

porque a manipulação foi realizada durante o período de aparecimento dos primeiros

neurônios serotoninérgicos (Lauder e Bloom 1974).

Esse resultado foi semelhante aquele observado em animais que receberam a

fluoxetina apenas no período após o desmame neste mesmo estudo. Ou seja, o

tratamento com fluoxetina durante a vida fetal promove alterações sobre o disparo da

saciedade semelhantes aquela observada com o tratamento agudo na fase pós

desmame.Como observado em animais adultos, à fluoxetina promove adiantamento do

disparo da saciedade observado por antecipação do declínio da duração de

alimentação (David et al, 2003),uma possível explicação para estes nossos achados é

que a serotonina inibe a ingestão alimentar antecipando a alimentação devido à

interação com os receptores 5-HT1B e 5-HT2C que são os principais receptores

serotoninérgicos relacionados ao comportamento alimentar e localizados no hipotálamo

(Leibowitz et al, 1990; Halford e Blundell, 1996; Heisler et al, 2002,2006; Dalton et al,

2006).

56

Um estudo realizado por Guirk (1992) em ratos com administração crônica de

fluoxetina demonstrou rompimento do perfil da SCS. Esse autor atribue essa alteração a

ação prolongada do fármaco devido à longa vida de seu metabolito a nor-fluoxetina (Guirk

et al, 1992). Alguns estudos relatam que a nor-fluoxetina parece afetar a SCS por

mecanismos não serotoninérgicos (Simansky e Halford, 1990,1997).

Observamos que a administração crônica de fluoxetina na gestação promoveu

aumento da ingestão e da quantidade de alimento por unidade de tempo em animais

controle e redução em desnutridos. Essa ação inversa da fluoxetina durante o período

gestacional sobre a ingestão alimentar pós-desmame caracteriza as diferentes respostas

de organismos desnutridos frente à ação de alguns fármacos.

No nosso estudo a fluoxetina não promoveu ação em animais desnutridos,

indicando uma hiporesponsividade desse sistema no controle do comportamento

alimentar, o tratamento farmacológico em animais desnutridos parece não exercer a

função com a eficiência de um organismo normal, outras evidências mostram que o

aumento da atividade serotoninérgica no cérebro destes animais induz a

desensibilização da ação anoréxica da serotonina.

Em laboratórios camundongos tratados farmacologicamente apresentaram

hiperfagia e um maior tempo no consumo das refeições, sendo um indicativo no déficit

da saciedade.Em outros experimentos foi encontrado o aumento do ganho de peso

(Teccot et al, 1997).O receptor 5-HT2C desempenha importante função no controle do

comportamento alimentar e no tamanho das refeições. O receptor 5-HT1B está

relacionado à ingestão alimentar e a saciedade,provavelmente um destes receptores

teve alguma alteração funcional, quando submetemos os nossos animais à exposição

ao fármaco na gestação que conseqüentemente aumentou a quantidade de alimento

por unidade de tempo sendo uma provável explicação para os nossos

achados.Observamos em nosso experimento que a desnutrição aumentou a ingestão e

retardou o inicio da saciedade, aumentando o tempo de alimentação no tempo total,

estudos relatam que animais desnutridos mostraram uma baixa densidade dos

receptores na vida adulta (Li et al, 2000) e evidenciou-se que a interação dos

neurotransmissores com os seus receptores foram diferentes .

Alguns experimentos indicam que uma dieta hipoprotéica durante o inicío de

desenvolvimento altera a ação da serotonina no circuito hipotalámico, que regula a

alimentação e sugere que a hiperfagia esta associada à programação metabólica em

resposta a desnutrição gestacional que diminue a função regulatória da serotonina e a

57

ingestão alimentar (Leibowitz et al, 1990; Passos et al, 2007).Outras observações

indicam que a desnutrição gestacional afeta alguns componentes no processo da

saciedade.

Ninhadas de ratas fêmeas que receberam dieta hipoprotéica no período

gestacional apresentaram alterações nos números de neurônios do neuropeptídeo Y

(NPY), repercutindo em mudanças no comportamento alimentar (Plagemann et al

2000a;Yura et al, 2005).Outros estudos relataram que os neurotransmissores também

foram programados (Plagemann, 2000b; Terroni et al, 2005), e há uma associação

entre a desnutrição gestacional e a hiperfagia que provavelmente é decorrente das

alterações da ação modulatória da serotonina e a ingestão alimentar (Mokler et al,

2003).

Outro ponto a ser discutido é a concentração utilizada, em estudo anterior do

nosso laboratório observamos que o tratamento neonatal com inibidor seletivo de

recaptação da serotonina promoveu alterações do crescimento somático e do

desenvolvimento sensório motor, mas esses resultados foram inversos quando se

administrou baixas doses do mesmo fármaco (Deiró et al., 1998). Em nosso estudo, a

dose utilizada durante a gestação foi dez vezes menor que aquela efetiva em promover

a saciedade em ratos. Essas respostas alteradas a saciedade podem refletir efeito

semelhante no presente experimento,a escolha da menor dose foi devido à associação

com outro agente agressor como a desnutrição.

Em conclusão o nosso trabalho mostrou que a desnutrição no período gestacional

modulou a resposta inibitória da serotonina e da ingestão alimentar,e que a hipótese da

programação fetal indica que a hiperfagia induzida por restrição de nutriente no útero

reduz a função regulatória da serotonina na ingestão alimentar.

5-REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Almeida SS, Tonkiss J, Galler JR. Malnutrition and reactivity to drugs acting in the central nervous system. Neurosci Biobehav Rev. 1996 Autumn;20(3):389-402. Alonso,VEL; Díaz,JMM; Domingo,MR;Hernandez,GB;Pérez,REE.The effects of 5-HT1A and 5-HT2C receptor agonists on behavioral satiety sequence in rats.Neuroscience Letters 416(2007)285-288.

58

Bellinger, L., C. Lilley, et al. Prenatal exposure to a maternal low-protein diet programmes a preference for high-fat foods in the young adult rat. Br J Nutr, v.92, n.3, Sep, p.513-20. 2004. Blundell, J. E. Serotonin and appetite. Neuropharmacology, v.23, n.12B, Dec, p.1537-51. 1984. Blundell, J. E., E. Tombros, et al. Behavioural analysis of feeding: implications for the pharmacological manipulation of food intake in animals and man. Prog Neuropsychopharmacol, v.4, n.4-5, p.319-26. 1980. Blundell JE, Macdiarmid JI. Passive overconsumption. Fat intake and short-term energy balance. Ann N Y Acad Sci. Sep 20;827:392-407. 1997 Brozek J. Effects of generalized malnutrition on personality. Nutrition. Sep-Oct;6(5):389-95. 1990 Colombo, J. P., H. Cervantes, et al. Effect of different protein diets on the distribution of amino acids in plasma, liver and brain in the rat. Ann Nutr Metab, v.36, n.1, p.23-33. 1992. Dalton, G. L., M. D. Lee, et al. Serotonin 1B and 2C receptor interactions in the modulation of feeding behaviour in the mouse. Psychopharmacology (Berl), v.185, n.1, Mar, p.45-57. 2006. David DJ Malagié I, , Jolliet P, Hen R, Bourin M, Gardier AM. Improved efficacy of fluoxetine in increasing hippocampal 5-hydroxytryptamine outflow in 5-HT(1B) receptor knock-out mice. Eur J Pharmacol. 2002 May 17;443(1-3):99-104. Dreshfield-Ahmad, L. J., D. C. Thompson, et al. Enhancement in extracellular serotonin levels by 5-hydroxytryptophan loading after administration of WAY 100635 and fluoxetine. Life Sci, v.66, n.21, Apr 14, p.2035-41. 2000. Guirk Mc J, Muscat R, Willner P. Effects of the 5-HT uptake inhibitors, femoxetine and paroxetine, and a 5-HT1A/B agonist, eltoprazine, on the behavioural satiety sequence. Pharmacol Biochem Behav. 1992 Apr;41(4):801-5 Halford, J. C., Blundell,JE .Wanninayake, et al. Behavioral satiety sequence (BSS) for the diagnosis of drug action on food intake. Pharmacol Biochem Behav, v.61, n.2, Oct, p.159-68. 1998. Halford JC, Blundell JE. The 5-HT1B receptor agonist CP-94,253 reduces food intake and preserves the behavioural satiety sequence. Physiol Behav. 1996 Sep;60(3):933-9. Halford JC, Goudie AJ, Cooper GD,. 87. Antipsychotic-induced weight gain. Diabetes Obes Metab. 2005 Sep;7(5):478- Hjorth, S., H. J. Bengtsson, et al. Serotonin autoreceptor function and antidepressant drug action. J Psychopharmacol, v.14, n.2, Jun, p.177-85. 2000.

59

Heisler LK, Cowley MA, Tecott LH, Fan W, Low MJ, Smart JL, Rubinstein M, Tatro Activation of central melanocortin pathways by fenfluramine JB, Marcus JN, Holstege H, Lee CE, Cone RD, Elmquist JK.Science. 2002 Jul 26;297(5581):609-11. Kehoe, P., K. Mallinson, et al. Effects of prenatal protein malnutrition and neonatal stress on CNS responsiveness. Brain Res Dev Brain Res, v.132, n.1, Dec 14, p.23-31. 2001. Lauder, J. M. e F. E. Bloom. Ontogeny of monoamine neurons in the locus coeruleus, Raphe nuclei and substantia nigra of the rat. I. Cell differentiation. J Comp Neurol, v.155, n.4, Jun 15, p.469-81. 1974. Leibowitz SF. Hypothalamic neuropeptide Y in relation to energy balance. Ann N Y Acad Sci. 1990;611:284-301. Leibowitz, S. F. e J. T. Alexander. Hypothalamic serotonin in control of eating behavior, meal size, and body weight. Biol Psychiatry, v.44, n.9, Nov 1, p.851-64. 1998. Li Q, Wichems C, Heils A, Lesch KP, Murphy DL. Reduction in the density and expression, but not G-protein coupling, of serotonin receptors (5-HT1A) in 5-HT transporter knock-out mice: gender and brain region differences. J Neurosci. 2000 Nov 1;20(21):7888-95. Lister, J. P., G. J. Blatt, et al. Effect of prenatal protein malnutrition on numbers of neurons in the principal cell layers of the adult rat hippocampal formation. Hippocampus, v.15, n.3, p.393-403. 2005. Manjarrez, G., A. L. Manuel, et al. Serotonergic receptors in the brain of in utero undernourished rats. Int J Dev Neurosci, v.21, n.5, Aug, p.283-9. 2003. Mokler, D. J., J. R. Galler, et al. Modulation of 5-HT release in the hippocampus of 30-day-old rats exposed in utero to protein malnutrition. Brain Res Dev Brain Res, v.142, n.2, May 14, p.203-8. 2003. Morgane PJ, Mokler DJ, Galler JR. Effects of prenatal protein malnutrition on the hippocampal formatio Neurosci Biobehav Rev. 2002 Jun;26(4):471-83. Noach, E. L. Appetite regulation by serotoninergic mechanisms and effects of d-fenfluramine. Neth J Med, v.45, n.3, Sep, p.123-33. 1994. Passos MC, Fagundes AT, Moura EG, , Oliveira E, Toste FP, Bonomo IT, Trevenzoli IH, Garcia RM, Lisboa PC. Maternal low-protein diet during lactation programmes body composition and glucose homeostasis in the adult rat offspring. Br J Nutr. 2007 Nov;98(5):922-8. Plagemann, A., T. Harder, et al. Hypothalamic nuclei are malformed in weanling offspring of low protein malnourished rat dams. J Nutr, v.130, n.10, Oct, p.2582-9. 2000.

60

Rothwell NJ, Stock MJ, Tedstone AE. Effects of ciglitazone on energy balance, thermogenesis and brown fat activity in the rat. Mol Cell Endocrinol. 1987 Jun;51(3):253-7. Resnick, O., M. Miller, et al. Developmental protein malnutrition: influences on the central nervous system of the rat. Neurosci Biobehav Rev, v.3, n.4, Winter, p.233-46. 1979. Simansky KJ, Vaidya AH. Behavioral mechanisms for the anorectic action of the serotonin (5-HT) uptake inhibitor sertraline in rats: comparison with directly acting 5-HT agonists. Brain Res Bull. 1990 Dec;25(6):953-60. Simansky KJ.Lee MD, Psychopharmacology (Berl). 1997 Jun;131(3):264-70. CP-94, 253: a selective serotonin1B (5-HT1B) agonist that promotes satiety. Snoeck, A., C. Remacle, et al. Effect of a low protein diet during pregnancy on the fetal rat endocrine pancreas. Biol Neonate, v.57, n.2, p.107-18. 1990. Tecott LH, Nonogaki K, Strack AM, Vichers SP,Dourish CT,Clifton PG: A primary satiety defect leads to adult-onset obesity in serotonin 5-HT2C receptor mutant mice.Soc Neurosci Abs 23:514. Terroni PL, Anthony FW, Hanson MA, Cagampang FR. Expression of agouti-related peptide, neuropeptide Y, pro-opiomelanocortin and the leptin receptor isoforms in fetal mouse brain from pregnant dams on a protein-restricted diet. Brain Res Mol Brain Res. 2005 Oct 31;140(1-2):111-5. Epub 2005 Aug 15. Yura S, Itoh H, Sagawa N, Yamamoto H, Masuzaki H, Nakao K, Kawamura M, Takemura M, Kakui K, Ogawa Y, Fujii S. Role of premature leptin surge in obesity resulting from intrauterine undernutrition. Cell Metab. 2005 Jun;1(6):371-8. Weiss, G. F., P. Papadakos, et al. Medial hypothalamic serotonin: effects on deprivation and norepinephrine-induced eating. Pharmacol Biochem Behav, v.25, n.6, Dec, p.1223-30. 1986. Weiss GF, Rogacki N, Fueg A, Buchen D, Leibowitz SF. Impact of hypothalamic d-norfenfluramine and peripheral d-fenfluramine injection on macronutrient intake in the rat. Brain Res Bull. 1990 Dec;25(6):849-59.

61

3-DISCUSSÃO GERAL

Submetendo organismos imaturos a insulto nutricional e farmacológico, esse

estudo identificou processos adaptativos do comportamento alimentar em resposta a

ambas as agressões. Com os resultados deste estudo identificamos que a desnutrição

protéica e o tratamento com fluoxetina durante a gestação promovem mudanças no

comportamento alimentar durante e após o período do insulto ambiental. Essas

alterações incidiram sobre a duração de sucção, na quantidade de alimento consumido

e no disparo da saciedade. São crescentes as discussões e evidencias para a

programação do organismo as condições de desnutrição durante a gestação (Lucas et

al., 1999). Nossos resultados reforçam essas discussões e indicam uma possivel

programação em resposta a insulto farmacológico durante a gestação. As alterações

promovidas pelo tratamento com fluoxetina durante o período do insulto e após o

desmame podem indicar certa “programação serotoninérgica” sobre mecanismos do

controle do comportamento alimentar que atuarão no catch-up do crescimento na idade

estudada. Quando os dois insultos (desnutrição e fluoxetina) se somam durante a

gestação, parece conduzir o processo de adaptação para o mesmo caminho,

apresentando as mesmas influencias dos tratamentos isolados.

A desnutrição gestacional esta associada ao retardo no crescimento fetal

(Hocher, 2007) com anormalidades morfofuncionais de vários sistemas orgânicos como

aqueles envolvidos no controle do comportamento alimentar (Breier, 2001; Plagemann,

2000). Vários estudos em ratos e humanos têm associado essas anormalidades a

patologias na vida adulta (Plagemann. 2000b; Vickers, 2008), incluindo distúrbios do

controle do comportamento alimentar (Plagemann 2000). Nesse estudo, observamos

modificações do comportamento alimentar durante o aleitamento e após o demame. De

forma geral, a desnutrição protéica e o tratamento com fluoxetina parecem inibir o

comportamento de sucção e a ingestão de alimentos durante a lactação, e aumentar a

ingestão após o desmame. Esses dois insultos parecem promover desregulações

semelhantes sobre o sistema serotoninérgico. A desnutrição parece promover aumento

na concentração encéfalica de serotonina e alterações no seu metabolismo (Rodríguez

et al, 2006) que parecem ser persistentes na vida adulta (Mokler et al, 2003).

62

O estudo da seqüencia comportamental de saciedade nos permitiu identificar um

dos possíveis mecanismos do complexo controle do comportamento alimentar alterado

pelos insultos ambientais precoces. Observamos que a desnutrição e o tratamento com

fluoxetina promoveram retardo no disparo da saciedade. Assim, a desnutrição

promoveu retardo no aparecimento temporal da saciedade, enquanto o tratamento com

fluoxetina na gestação provocou seu adiantamento. A desnutrição promove aumento

na concentração encefálica de serotonina, assim como o tratamento com inibidor da

recaptação da serotonina (Almeida, 1996). A serotonina atua sobre o controle do

comportamento alimentar promovendo saciedade (Blundell, 1998). Assim, o

adiantamento temporal no disparo da saciedade é característico após injeção aguda de

agonistas serotoninérgicos (Blundell, 1998). Ao interpretarmos esses resultados

levando em consideração apenas os níveis de serotonina, poderíamos identificar

incoerência para a maior ingestão alimentar e retardo no disparo de saciedade em

animais desnutridos. No entanto, alguns estudos recentes comprovam que animais

desnutridos durante períodos críticos de desenvolvimento apresentam

hiporesponsividade ao efeito anoréxico da serotonina (Souza et al., 2008).

Quando submetemos esses animais a tratamento agudo com fluoxetina após o

desmame, observamos anormalidades na seqüencia temporal da alimentação, mas

não quando esses animais foram desnutridos na gestação. Esse resultado confirmou a

hipótese de hiporesponsividade dos mecanismos de controle serotoninérgicos do

comportamento alimentar em animais que foram desnutridos em período iniciais da

vida. Para concluir as análises de experiências durante a vida fetal e controle da

saciedade, analisamos a ação da fluoxetina após o desmame em animais previamente

expostos a esse mesmo tratamento durante a gestação. Observamos que essa

experiência precoce não modifica a ação da fluoxetina em animais controle, mas sim

em desnutridos. Apesar da desnutrição fetal alterar a resposta de mecanismos

serotoninérgicos sobre o comportamento alimentar, quando existe uma experiência

conjunta com inibidores seletivos da serotonina na gestação, ocorre um processo

adaptativo no qual se anula o efeito dos dois insultos sobre o comportamento alimentar.

No contexto, alguns estudos contribuem com os nossos resultados que uma dieta

hipoprotéica no período de gestação, altera o comportamento alimentar na prole de

ratos durante a vida adulta, desenvolvendo preferência para alimentos palatáveis ao

longo do tempo (Bellinger et al, 2004; Langley-Evans , 2005).

63

O presente estudo pode abordar importantes questionamentos a cerca dos

processos adaptativos envolvendo periodos inicias da vida. Com ênfase em insultos

nutricionais e farmacológicos durante a vida fetal, nos identificamos modificações no

controle do comportamento alimentar em particular aquelas envolvendo o sistema de

neurotransmissão serotoninérgico. A desnutrição gestacional parece favorecer maior

ingestão alimentar, o que poderá ser associada ao favorecimento de ganho de peso.

Manipulando o sistema de neurotransmissão serotoninérgica, nós pudemos identificar a

sua participação nesse processo adaptativo do controle do comportamento alimentar.

Atualmente, a população mundial vem sofrendo com a elevação na incidência de

doenças associadas à obesidade. Esta vem apresentando índices alarmantes de

prevalência em países desenvolvidos e subdesenvolvidos, indicando a sua associação

não apenas com poder de aquisição alimentos. No Brasil, houve aumento na

prevalência de obesidade na região sudeste bem como na região nordeste nas últimas

três décadas (Malaquias Batista e Rissin, 2003). A transição nutricional observada no

Brasil pode estar associada à programação fetal, bem como o aumento no poder de

aquisição de alimentos altamente energéticos. Nosso estudo vem contribuir com bases

fisiológicas para o entendimento dessa tendência do quadro de saúde relacionado a

doenças metabólicas. Poderiamos sugerir que indivíduos com experiências diversas

durante o período fetal apresentarão mecanismos de controle da homeostase

energética adaptados para o ambiente do desenvolvimento. O sistema serotoninérgico

parece ser um importante alvo para esses processos adaptativos, contribuindo para

alterações nos mecanismos de saciedade, que implicarão diretamente na quantidade

de alimento consumido, conseqüentemente na quantidade de energia armazenada na

forma de tecido adiposo. O conjunto de evidências sobre as possíveis seqüelas dos

insultos em período de desenvolvimento orgânico faz-se necessário o desenvolvimento

de estratégias voltadas para a atenção de períodos do desenvolvimento como

determinantes da saúde da vida adulta.

64

5-CONCLUSÕES

A desnutrição gestacional promove hiperfagia em ratos relacionada ao retardo no

disparo de mecanismos de saciedade;

A exposição gestacional a inibidor de recaptação da serotonina predispõe os fetos a

desenvolvimento de hiperfagia após o desmame, mas não relacionada a modificação do

padrão de disparo da saciedade;

A desnutrição durante a gestação reduz a sensibilidade de ratos ao efeito anoréxico da

serotonina associado a parâmetros quantitativos mas não com parâmetros temporais do

comportamento alimentar.

65

6-PERSPECTIVAS

Diante dos resultados obtidos no presente trabalho é possível delinear as seguintes

perspectivas:

Estudar a ritmicidade circadiana da ingestão alimentar em animais desnutridos na

vida fetal;

Analisar, em animais desnutridos na vida fetal, a seqüência comportamental de

saciedade em resposta a agonistas serotoninérgicos;

Analisar a ritmicidade da ingestão de dieta hipercalórica e a preferência alimentar a

macro nutrientes na vida adulta, em animais desnutridos na gestação.

66

7-REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Barreto-Medeiros, J. M., E. G. Feitoza, et al. Malnutrition during brain growth spurt alters the effect of fluoxetine on aggressive behavior in adult rats. Nutr Neurosci, v.7, n.1, Feb, p.49-52. 2004. Batista Filho, M. e A. Rissin. [Nutritional transition in Brazil: geographic and temporal trends]. Cad Saude Publica, v.19 Suppl 1, p.S181-91. 2003. Bellinger, L., C. Lilley, et al. Prenatal exposure to a maternal low-protein diet programmes a preference for high-fat foods in the young adult rat. Br J Nutr, v.92, n.3, Sep, p.513-20. 2004. Berthoud, H. R. Multiple neural systems controlling food intake and body weight. Neurosci Biobehav Rev, v.26, n.4, Jun, p.393-428. 2002. Blundell, J. E. Is there a role for serotonin (5-hydroxytryptamine) in feeding? Int J Obes, v.1, n.1, p.15-42. 1977. Blundell, J. E. e J. C. Halford. Regulation of nutrient supply: the brain and appetite control. Proc Nutr Soc, v.53, n.2, Jul, p.407-18. 1994. Blundell JE.Bryant EJ, King NA,Disinhibition: its effects on appetite and weight regulation. Obes Rev. 2007 Dec 26. Blundell, J. E. e C. J. Latham. Serotonergic influences on food intake: effect of 5-hydroxytryptophan on parameters of feeding behaviour in deprived and free-feeding rats. Pharmacol Biochem Behav, v.11, n.4, Oct, p.431-7. 1979. Breier, B. H., M. H. Vickers, et al. Fetal programming of appetite and obesity. Mol Cell Endocrinol, v.185, n.1-2, Dec 20, p.73-9. 2001. Curzon, G. Serotonin and appetite. Ann N Y Acad Sci, v.600, p.521-30; discussion 530-1. 1990. De-Castro, R. M., J. E. Cabral-Filho, et al. Neonatal treatment with naloxone causes permanent hyperalgesia in rats. Braz J Med Biol Res, v.26, n.7, Jul, p.747-51. 1993. De Castro R, Barreto Medeiros JM, Mendes da Silva C, Ferreira LM, Guedes RC, Cabral Filho JE, Costa JA. Reduction of intraspecific aggression in adult rats by neonatal treatment with a selective serotonin reuptake inhibitor. Braz J Med Biol Res. 2001 Jan;34(1):121-4. Deiró TC, Manhães-de-Castro R, Cabral-Filho JE, Souza SL, Freitas-Silva SR, Ferreira LM, Guedes RC, Câmara CR, Barros KM. Neonatal administration of citalopram delays somatic maturation in rats. Braz J Med Biol Res. 2004 Oct;37(10):1503-9. Epub 2004 Sep 22.

67

Dourish, C. T., M. L. Clark, et al. Evidence that blockade of post-synaptic 5-HT1 receptors elicits feeding in satiated rats. Psychopharmacology (Berl), v.97, n.1, p.54-8. 1989. Ferre, P., J. F. Decaux, et al. Changes in energy metabolism during the suckling and weaning period in the newborn. Reprod Nutr Dev, v.26, n.2B, p.619-31. 1986. Friedman, E., S. Gershon, et al. Effects of acute cocaine treatment on the turnover of 5-hydroxytryptamine in the rat brain. Br J Pharmacol, v.54, n.1, May, p.61-4. 1975. Galef, B. G., Jr. e M. M. Clark. Social factors in the poison avoidance and feeding behavior of wild and domesticated rat pups. J Comp Physiol Psychol, v.75, n.3, Jun, p.341-57. 1971. Galef, B.G,Jr. e M.M.Clark. Mother's milk and adult presence: two factors determining initial dietary selection by weanling rats. J Comp Physiol Psychol, v.78, n.2, Feb, p.220-5. 1972. Garcia GB, Biancardi ME, Quiroga AD. Vanadium (V)-induced neurotoxicity in the rat central nervous system: a histo-immunohistochemical study. Drug Chem Toxicol. 2005;28(3):329-44. Gluckman, P. D. e M. A. Hanson. The developmental origins of the metabolic syndrome. Trends Endocrinol Metab, v.15, n.4, May-Jun, p.183-7. 2004. Gluckman PD, Hanson MA, Pinal C.The developmental origins of adult disease. Matern Child Nutr. 2005 Jul;1(3):130-41. Hales, C. N. e D. J. Barker. Type 2 (non-insulin-dependent) diabetes mellitus: the thrifty phenotype hypothesis. Diabetologia, v.35, n.7, Jul, p.595-601. 1992. Halford, J. C., S. C. Wanninayake, et al. Behavioral satiety sequence (BSS) for the diagnosis of drug action on food intake. Pharmacol Biochem Behav, v.61, n.2, Oct, p.159-68. 1998. Halford JC. Pharmacotherapy for obesity. Appetite. 2006 Jan;46(1):6-10. Epub 2005 Oct 17. Haydon, P. G., D. P. Mccobb, et al. The regulation of neurite outgrowth, growth cone motility, and electrical synaptogenesis by serotonin. J Neurobiol, v.18, n.2, Mar, p.197-215. 1987. Hocher, B. Fetal programming of cardiovascular diseases in later life - mechanisms beyond maternal undernutrition. J Physiol, v.579, n.Pt 2, Mar 1, p.287-8. 2007. Hyttel, J. Pharmacological characterization of selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs). Int Clin Psychopharmacol, v.9 Suppl 1, Mar, p.19-26. 1994.

68

Kontur, P. J., C. Leranth, et al. Tyrosine hydroxylase immunoreactivity and monoamine and metabolite levels in cryopreserved human fetal ventral mesencephalon. Exp Neurol, v.121, n.2, Jun, p.172-80. 1993. Langley-Evans SC, Bellinger L, McMullen S. Animal models of programming: early life influences on appetite and feeding behaviour. Matern Child Nutr. 2005 Jul;1(3):142-8. Lisboa PC, Fagundes AT, Denolato AT, Oliveira E, Bonomo IT, Alves SB, Curty FH, Passos MC, Moura EG. Neonatal low-protein diet changes deiodinase activities and pituitary TSH response to TRH in adult rats. Exp Biol Med (Maywood). 2008 Jan;233(1):57-63. Lauder, J. M. e F. E. Bloom. Ontogeny of monoamine neurons in the locus coeruleus, Raphe nuclei and substantia nigra of the rat. I. Cell differentiation. J Comp Neurol, v.155, n.4, Jun 15, p.469-81. 1974. Leibowitz, S. F. [Central neurotransmitters and control of specific appetite for the macronutrients]. Ann Endocrinol (Paris), v.49, n.2, p.133-40. 1988. Levallois, C., C. Valence, et al. Morphological and morphometric analysis of serotonin-containing neurons in primary dissociated cultures of human rhombencephalon: a study of development. Brain Res Dev Brain Res, v.99, n.2, Apr 18, p.243-52. 1997. Lucas, A. Programming by early nutrition in man. Ciba Found Symp, v.156, p.38-50; discussion 50-5. 1991. Lucas A. Programming by early nutrition: an experimental approach. J Nutr. 1999 Feb;128(2 Suppl):401S-406S. Manjarrez, G., G. Chagoya, et al. Perinatal brain serotonin metabolism in rats malnourished in utero. Biol Neonate, v.54, n.4, p.232-40. 1988. Manjarrez, G., A. L. Manuel, et al. Serotonergic receptors in the brain of in utero undernourished rats. Int J Dev Neurosci, v.21, n.5, Aug, p.283-9. 2003. Manjarrez GG, Magdaleno VM, Chagoya G, Hernández J. Nutritional recovery does not reverse the activation of brain serotonin synthesis in the ontogenetically malnourished rat. Int J Dev Neurosci. 1996 Aug;14(5):641-8. Mokler, D. J., J. D. Bronzino, et al. The effects of median raphe electrical stimulation on serotonin release in the dorsal hippocampal formation of prenatally protein malnourished rats. Brain Res, v.838, n.1-2, Aug 14, p.95-103. 1999. Meaney Laplante P, Diorio J, Serotonin regulates hippocampal glucocorticoid receptor expression via a 5-HT7 receptor. MJ.Brain Res Dev Brain Res. 2002 Dec 15;139(2):199-203 Mendes-da-Silva C, de Souza SL, Barreto-Medeiros JM, de Freitas-Silva SR, Antunes DE, Cunha AD, Ribas VR, de França MF, Nogueira MI, Manhães-de-Castro R.

69

Neonatal treatment with fluoxetine reduces depressive behavior induced by forced swim in adult rats. Arq Neuropsiquiatr. 2002 Dec;60(4):928-31. Epub 2003 Jan 15. Mercado, R., B. Floran, et al. Regulated release of serotonin from axonal growth cones isolated from the fetal rat brain. Neurochem Int, v.32, n.1, Jan, p.103-6. 1998. Mokler, D. J., J. R. Galler, et al. Modulation of 5-HT release in the hippocampus of 30-day-old rats exposed in utero to protein malnutrition. Brain Res Dev Brain Res, v.142, n.2, May 14, p.203-8. 2003. Morgane, P. J., R. Austin-Lafrance, et al. Prenatal malnutrition and development of the brain. Neurosci Biobehav Rev, v.17, n.1, Spring, p.91-128. 1993. Morgane PJ,Leahy JP, Stern WC, Resnick O,. A neuropharmacological analysis of central nervous system catecholamine systems in development protein malnutrition. Dev Psychobiol. 1978 Jul;11(4):361-70. Morgane PJ. Austin KB, Beiswanger C, Bronzino JD, Austin-Lafrance RJ, Galler JR, Prenatal protein malnutrition alters behavioral state modulation of inhibition and facilitation in the dentate gyrus. Brain Res Bull. 1992 Feb;28(2):245-55. Oberlander, T. F., R. Eckstein Grunau, et al. Prolonged prenatal psychotropic medication exposure alters neonatal acute pain response. Pediatr Res, v.51, n.4, Apr, p.443-53. 2002. Plagemann, A., T. Harder, et al. Hypothalamic nuclei are malformed in weanling offspring of low protein malnourished rat dams. J Nutr, v.130, n.10, Oct, p.2582-9. 2000. Plagemann A, Waas T, Harder T, Rittel F, Ziska T, Rohde W. Neuropeptides. 2000 Feb;34(1):1-6. Hypothalamic neuropeptide Y levels in weaning offspring of low-protein malnourished mother rats. Rodríguez-Puertas R, Barreda-Gómez G. Recent Patents CNS Drug Discov. 2006 Jun;1(2):207-17. Development of new drugs that act through membrane receptors and involve an action of inverse agonism. Remacle, C., F. Bieswal, et al. Programming of obesity and cardiovascular disease. Int J Obes Relat Metab Disord, v.28 Suppl 3, Nov, p.S46-53. 2004. Souza,SL;Solis,RO;Manhães de Castro,R;Bolanõs-Jiménez,F.Perinatal protein restriction reduces the inhibitory action of serotonin on food intake.European Journal of Neuroscience . Schreiber R, Selbach K, Asmussen M, Hesse D, de Vry J. Effects of serotonin(1/2) receptor agonists on dark-phase food and water intake in rats. Pharmacol Biochem Behav. 2000 Oct;67(2):291-305. Shen, W. Z., Z. B. Luo, et al. Immunohistochemical studies on the development of 5-HT (serotonin) neurons in the nuclei of the reticular formations of human fetuses. Pediatr Neurosci, v.15, n.6, p.291-5. 1989.

70

Simansky, K. J. e W. J. Kachelries. Prenatal exposure to cocaine selectively disrupts motor responding to D-amphetamine in young and mature rabbits. Neuropharmacology, v.35, n.1, Jan, p.71-8. 1996. Singhal A, Lucas A. Early origins of cardiovascular disease: is there a unifying hypothesis? Lancet. 2004 May 15;363(9421):1642-5. Sundstrom, E., S. Kolare, et al. Neurochemical differentiation of human bulbospinal monoaminergic neurons during the first trimester. Brain Res Dev Brain Res, v.75, n.1, Sep 17, p.1- 12. 1993. Takahashi, H., S. Nakashima, et al. Distribution of serotonin-containing cell bodies in the brainstem of the human fetus determined with immunohistochemistry using antiserotonin serum. Brain Dev, v.8, n.4, p.355-65. 1986 Thiels, E., J. R. Alberts, et al. Weaning in rats: II. Pup behavior patterns. Dev Psychobiol, v.23, n.6, Sep, p.495-510. 1990. Vickers MH, Gluckman PD, Coveny AH, Hofman PL, Cutfield WS, Gertler A, Breier BH, Harris M. The effect of neonatal leptin treatment on postnatal weight gain in male rats is dependent on maternal nutritional status during pregnancy. Endocrinology. 2008 Jan 10 Weller, A., L. Tsitolovskya, et al. Ontogeny of hypertonic preabsorptive inhibitory control of intake in neonatal rats. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol, v.278, n.1, Jan, p.R44-9. 2000. Winick M, Coombs J. Nutrition, environment, and behavioral development. Annu Rev Me d. 1972;23:149-60. Zippel, U., E. Heidel, et al. Action of CCK and 5-HT on lateral hypothalamic neurons depends on early postnatal nutrition. Nutr Neurosci, v.4, n.2, p.143-52. 2001.