image-pro ® plus – medições histólógicas mais comuns felipe welter langer – acadêmico de...

Image-Pro® Plus – Medições Histólógicas mais

comuns

Felipe Welter Langer – Acadêmico de Medicina da Universidade Federal de Santa Maria

Santa Maria, 13 de dezembro de 2012

Aspectos gerais da medição histológica

• Parte importantíssima do processo de análise histológica• Hardware utilizado (mouse, notebook, precisão)• Pressa x qualidade de medição• Vários parâmetros passíveis de análise (área, comprimento, número de células, espessura epitelial, ...)•Inúmeros softwares disponíveis

Image-Pro® Plus

•Calibragem (4x, 10x, 40x)•Medição de área

•Medição de comprimento•Contagem celular manual•Exportação dos dados para

Excel

Princípios gerais de operação do software

•Comparação: todas as medidas são feitas com base em uma calibragem inicial, a qual existe para que o número de pixels que selecionarmos tenha uma correspondência morfométrica (milímetros, micrômetros, ...)

•Calibragem é feita usando-se fotografia de régua milimetrada (mostrada a seguir)

Princípios gerais de operação do software

* Essa será nossa imagem padrão para calibragem, utilizada em diferentes aumentos conforme a necessidade!

•Corresponde a uma fotografia de régua milimetrada

•1 mm = 1000 µm

1 mm

Calibragem no Image-Pro Plus•Uma calibragem necessária para cada aumento (4x, 10x, 40x)•Para cada aumento, uma imagem de régua a ser aberta (mesma imagem, diferentes aumentos)

4x 10x 40x

1 mm 0,9 mm 0,2 mm

Calibragem no Image-Pro Plus1º passo: abrir programa

Calibragem no Image-Pro Plus2º passo: abrir imagem da régua no aumento selecionado (no exemplo, 4x)File -> Open -> Selecionar imagem na pasta correspondente

Calibragem no Image-Pro Plus3º passo: ir para “Measure -> Calibration -> Spatial”

Calibragem no Image-Pro Plus4º passo: selecionar a opção “New”

Calibragem no Image-Pro Plus5º passo: Nomear e alterar unidade para micrômetros

Calibragem no Image-Pro Plus6º passo: Clicar em “Image” para selecionar o trecho da imagem a ser medido

Calibragem no Image-Pro Plus7º passo: Selecionar o trecho a ser medido e inserir a medida correspondente EM MICRÔMETROS* Para maior precisão, ampliar imagem da régua

Calibragem no Image-Pro Plus

•Para aumentos de 10x e 40x, o processo é o mesmo, só atentando para alterar valor de micrômetros na hora de salvar a calibragem!

•Uma vez feitas as calibragens, é possível iniciar as medidas.

Medidas no Image-Pro Plus

Medidas Abordadas:Comprimento

ÁreaContagem celular

Medidas no Image-Pro Plus1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)• Abrir a imagem a ser medida (File -> Open ou ctrl + O)

Medidas no Image-Pro Plus1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)* No ícone “Spatial Calibration”, selecionar aumento em que foto foi tirada (após

calibrado o programa)

Medidas no Image-Pro Plus1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)* Clicar em “Manual Measurements” e selecionar “Create click and drag feature”

Medidas no Image-Pro Plus1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)*Clicar na imagem e arrastar até atingir ponto desejado

Medidas no Image-Pro Plus1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)

• Processo se repete para as próximas medições, sendo que as novas medidas aparecerão abaixo da primeira (L1) na aba “Features”

• Para exportar dados, clicar na aba “Input/Output” (a ser abordado posteriormente)

Medidas no Image-Pro Plus2) Área (de glomérulo, ilhota, ...)• Mesmos procedimentos iniciais, modificando-se a opção selecionada da aba

“Features” (Create polygon feature)

Medidas no Image-Pro Plus2) Área (de glomérulo, ilhota, ...)

• Há dois modos de se medir área através da ferramenta selecionada:

a) Seleção com um único clique contínuo (arrastando-se o mouse sem soltá-lo)

b) Seleção clicando-se várias vezes em torno da imagem

• Em ambas, após o fim da seleção, clica-se com o botão direito do mouse para concluir a área a ser medida

Medidas no Image-Pro Plus3) Contagem celular

• Na maior parte das vezes, usa-se uma “Grid Mask” para realizar as medições, que é conjunto de linhas, pontos ou formas aplicado sobre a imagem original

• Diferentes Grid Masks podem ser utilizadas, a critério da preferência do pesquisador

• Objetivo do uso de Grid Masks: definir, de forma aleatória, áreas cujos núcleos serão contados

Medidas no Image-Pro Plus3) Contagem celular• Para aplicar: Process -> Grid Mask

Medidas no Image-Pro Plus3) Contagem celular• Exemplo de Grid Mask para contagem de núcleos: distribuição de

retângulos em 4x4• Após abrir janela de Grid Mask, selecionar “CircConc.grd” e definir

tamanho adequado em “Spacing” na aba Grid

Medidas no Image-Pro Plus3) Contagem celular• Clicar em Apply e não fechar a janela (caso contrário, grid

desaparecerá)

Medidas no Image-Pro Plus3) Contagem celular• Outros exemplos:

Medidas no Image-Pro Plus3) Contagem celular• Para não “se perder” na contagem: usar a “Create polygon feature”

(mesma da medição de área) e clicar sobre cada núcleo contado

Medidas no Image-Pro PlusExportando os dados

• Manual measurements -> aba “Input/Output” -> Selecionar “Data to ouput: Features” e “Output data to: File...” e clicar em “Export now”


• Após selecionar a pasta de destino e salvar, o arquivo aparecerá da seguinte maneira:


• Como se vê, os dados estão desalinhados, e somente um deles nos interessa, a área

• Logo, copiaremos somente o valor da área e colaremos em uma tabela do Excel

• O processo se repete para cada medição feita

• DETALHE IMPORTANTE: os pontos dos números precisam ser trocados para vírgulas!

Muito Obrigado pela atenção!

Dúvidas:[email protected]

Santa Maria, 13 de dezembro de 2012

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