helena zamith - testes mutagênicos e carcinogênicos e sua

4° Jornada de Ciências Farmacêuticas da UEZO

26 de maio de 2015

Testes mutagênicos e carcinogênicos e

sua respectiva importância em

vigilância sanitária

Helena Pereira da Silva Zamith

Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (INCQS/FIOCRUZ)

Departamento de Farmacologia e Toxicologia

[email protected]

Avaliação de Risco

1. Identificação do dano ou perigo

2. Avaliação da relação dose-resposta

3. Avaliação da exposição

4. Caracterização do risco

Avaliação de risco

Avaliação de risco à saúde humana direcionada ao estudo dos

seguintes potenciais de efeitos tóxicos às populações humanas

considerando-se as vias de exposição oral, inalatória e dérmica

EFEITOS

• toxicidade aguda

• irritação

• corrosividade

• sensibilidade

• toxicidade em doses repetidas

• mutagenicidade

• carcinogenicidade

• toxicidade para a reprodução

Avaliação de risco para saúde

humana

População humana

• trabalhadores;

• consumidores;

• pessoas expostas indiretamente através

da exposição ambiental

DIRETRIZES

MEDICAMENTOS

The International Conference on Harmonization of Technical Requirements

for Registration of Pharmaceuticals for Human Use (ICH).

ICH Harmonised Tripartite Guideline: Genotoxicity Studies

Projeto envolvendo autoridades regulatórias da Europa, Japão e Estados Unidos da

América e especialistas da indústria farmacêutica.

http://www.ich.org/cache/compo/276-254-1.html

Diretrizes

SUBSTÂNCIAS QUÍMICAS

European Commission Technical Guidance Document (TGD) on Risk

Assessment . Part I in support of Comission Directive 93/67/EEC on

Risk Assessment for new notified substances

Commission Regulation (EC) No. 1488/94 on Risk Assessment for

existing substances

http:// ecb.jrc.it/?A=ECB&B=/tgdoc

Ensaios de genotoxicidade

Na avaliação de risco das substâncias é

necessário tratar do potencial efeito de

“mutagenicidade“.

“Testes de genotoxicidade“ são usados para

investigar efeitos nocivos no material genético

__________________________________________ “European Commission Technical Guidance Document (TGD) on Risk

Assessment“

Legislação Federal de Agrotóxicos e Afins

Secretaria de Defesa Agropecuária- Departamento de Defesa e

Inspeção Vegetal, 1998

Capítulo III: Do Registro, Seção I: Do Registro do Produto

Artigo 8°: IV- relatório técnico III

e) dados relativos ao potencial mutagênico, embriofetotóxico e

carcinogênico em animais.

Seção III: Das Proibições:

Art. 22: São proibidos os registros de agrotóxicos, seus

componentes e afins:

IV- os considerados carcinogênicos que apresentarem evidências

suficientes nesse sentido, a partir de observações na espécie humana ou de

estudos com, pelo menos, duas espécies de animais de experimentação.

Legislação Federal de Agrotóxicos e Afins

Secretaria de Defesa Agropecuária- Departamento de Defesa e

Inspeção Vegetal, 1998

Art. 22: São proibidos os registros de agrotóxicos, seus componentes e

afins:

V- os considerados mutagênicos, capazes de induzir mutações

observadas em, no mínimo, dois testes, um deles para detectar mutações gênicas,

realizado inclusive com o uso de ativação metabólica, e o outro para detectar

mutações cromossômicas.

§2° - Os testes, provas e estudos sobre mutagênese, carcinogênese e

teratogênese devem ser efetuados com critérios aceitos por instituições

científicas ou de saúde pública, nacionais ou reconhecidas internacionalmente,

devendo os resultados ser avaliados, caso a caso, por uma Comissão Técnica do

Ministério da Saúde, que inclua especialistas da comunidade científica nacional

Definições de mutagenicidade e de

genotoxicidade

Mutagenicidade refere-se à indução de alterações permanentes transmissíveis quantitativas ou estruturais do material genético de células ou organismos. (mutações gênicas; mutações cromossômicas; mutações genômicas)

detectada com os testes de mutagenicidade

Genotoxicidade é um termo mais amplo e refere-se aos efeitos potencialmente nocivos ao material genético que não estão necessariamente associados com a mutagenicidade.

detectada com os testes de genotoxicidade (i. e. mutagenicidade- e testes indicadores) _________________________________________________

Testes de Genotoxicidade

I: Testes de Mutagenicidade: Teste de Mutação Reversa Bacteriano (“Teste de Ames“)

Teste de Aberração Cromossômica em Mamífero In Vitro

Teste de Micronúcleo In Vitro

Teste de Mutação Gênica em Células de Mamífero In Vitro

Teste de Aberrações Cromossômicas em Medula Óssea de Mamífero

Teste de Micronúcleo em Eritrócitos de Mamífero

II: Testes Indicadores: Teste de Síntese de DNA Não Programada In Vivo (UDS)

Ensaio Cometa In Vivo

__________________________________________

Testes de Genotoxicidade

3 componentes:

Células alvo

Endpoint genético

Ativação metabólica

Testes de genotoxicidade

originalmente realizados para detectar mutágenos em células germinais

no momento atual realizado

no screening quanto aos possíveis efeitos carcinogênicos

crescentemente sendo usado para esclarecer o significado de estudos de carcinogenicidade duvidosos

para esclarecer se os efeitos carcinogênicos estão associados à genotoxicidade

__________________________________________________

Testes de genotoxicidade

uma combinação de testes de genotoxicidade é aplicada

várias estratégias de testes existem: usualmente subdividas em “testes básicos“ e “testes de seguimento “

testes básicos: testes de mutagenicidade são principalmente usados

testes de seguimento: testes indicadores são frequentemente usados

(esclarecimento do significado de resultados positivos)

__________________________________________

Estratégia dos testes de genotoxicidade

flexível e abordagem em etapas

possibilita a identificação do perigo (i e. o potencial mutagênico de uma substância)

dados são usados para a caracterização do risco; incluindo classificação e rotulagem

deve reduzir ao mínimo o uso de animais

deve reduzir ao mínimo os custos (tanto quanto seja consistente com o rigor científico!)

______________________________________

Estratégia dos testes de genotoxicidade –

considerações gerais:

informação sobre mutações gênicas, aberrações cromossômicas estruturais (clastogenicidade) e aberrações cromossômicas numéricas (aneugenicidade) é requerida

Informação sobre as propriedades físico-químicas da

substância-teste devem ser levadas em conta

potencial efeito de uma substância sobre o pH, solubilidade e estabilidade em veículos teste devem ser considerados

as propriedades toxicocinéticas devem ser consideradas antes de realizar testes em animais

protocolos rigorosos devem ser usados para aumentar ao máximo o potencial para detecção do efeito mutagênico, para assegurar que um resultado negativo seja aceito com confiança (OECD guidelines; GLP) _______________________________________

Estratégia dos testes de genotoxicidade:

Nivel de teste básico

em geral, dois testes in vitro são exigidos

um teste de mutação gênica em bactéria

um teste in vitro em células de mamífero capaz

de detectar aberrações cromossômicas

o nível básico para biocidas adicionalmente inclui

um ensaio in vitro de mutação gênica em células

de mamífero

____________________________________

Estratégia dos testes de genotoxicidade:

Necessidade de prosseguimento de testes

Ensaio em células somáticas

resultados positivos de testes in vitro

níveis potencialmente altos ou insuficientemente controlados de exposição humana

química da substância ou outros dados de toxicidade

Ensaio em células germinais

resultados positivos in vivo constituem o gatilho para consideração da investigação da genotoxicidade em células germinais

______________________________________


II. Prosseguimento de teste:

Seguindo um resultado positivo no teste in vitro de mutagenicidade em células de mamífero, adequadamente conduzido é exigido ensaio em células somáticas in vivo para averiguar se este potencial pode ser expresso in vivo.

Antes da realização de qualquer ensaio in vivo é necessário, uma revisão dos resultados dos testes in vitro e de toda informação disponível sobre o perfil toxicocinético da substância teste.

Garantia de que o tecido alvo será adequadamente exposto à substância teste e/ou a seus metabólitos

No caso de biocidas, se um dos três testes in vitro for positivo, um teste in vivo deverá ser realizado

___________________________________________


Ensaios padrão para prosseguimento:

Para substâncias com adequada disponibilidade sistêmica os testes in vivo recomendados são:

Teste de aberração cromossômica em medula óssea de mamífero

Teste de micronúcleo em eritrócito de mamífero

Teste UDS in vivo

______________________________________

Estratégia dos testes de genotoxicidade –

Ensaios específicos para prosseguimento

Para substâncias que são de vida curta, mutágens reativos in vitro ou para as quais não se tenha apresentado indicações de disponibilidade sistêmica, devem ser considerados testes alternativos in vivo com tecidos nos locais iniciais de contato com o corpo.

Testes alternativos devem também ser selecionados quando é mais apropriado avaliar genotoxicidade em outros tecidos sistêmicos diferentes da medula óssea ou fígado.

OPÇÕES:

Ensaio Cometa in vivo

Estudos in vivo de adutos no DNA

Testes in vivo de mutação gênica com animais transgênicos

___________________________________________

Estratégia de testes de genotoxicidade – Ensaios de

prosseguimento após resultados in vivo positivos:

Ensaio em células germinais deve ser considerado para substâncias com resultados positivos em testes para efeitos genotóxicos em células somáticas in vivo.

Um estudo sobre a toxicocinética é preferido se resolver o problema.

Exposição de células germinais pode ser determinado com testes indicadores (por exemplo: ensaio cometa; análise de adutos de DNA).

Testes específicos para investigar efeitos transmitidos (por exemplo: teste de translocação hereditária; teste locus específico) não serão normalmente exigidos para substâncias químicas industriais e biocidas.

___________________________________________

Ensaio de genotoxicidade:

Avaliação dos dados

I. Resultados de teste positivo:

efeito “claro“?

efeito reprodutível?

dose-resposta?

toxicidade / citotoxicidade?

________________________

Ensaio de genotoxicidade:


II. Resultados de teste “negativo“:

protocolo de teste de acordo com guideline?

dose apropriada / concentração?

volatilidade da substância teste (in vitro)?

apropriada ativação metabólica (in vitro)?

reatividade da substância teste?

apropriada exposição das células alvo (in vivo)?

_________________________________

Ensaio de genotoxicidade :


III. Resultados de teste “equívoco“:

tem que ser esclarecido

repetição do teste

introdução de variações no protocolo

__________________________

Teste de genotoxicidade:


IV. Resultados de testes contraditórios:

deve ser avaliado com respeito ao seu significado individual

a qualidade de cada estudo tem que ser avaliado (planejamento do estudo, reprodutibilidade dos dados, relação dose-efeito, plausibilidade biológica, GLP)

resultados de testes de mutagenicidade são geralmente de maior significado do que os resultados de testes indicadores

resultados de testes in vivo realizados apropriadamente geralmente indicam um maior grau de confiança em comparação com resultados de testes in vitro

______________________________________

helena zamith - testes mutagênicos e carcinogênicos e sua

Documents