PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM BIOLOGIA

CELULAR E MOLECULAR (CINCIAS BIOLGICAS)

ANATOMIA, HISTOLOGIA, HISTOQUMICA E ULTRA-ESTRUTURA DAS GLNDULAS SALIVARES

CEFLICAS DE ABELHAS EUSSOCIAIS (HYMENOPTERA, APIDAE)

SILVANA BEANI POIANI

Dissertao apresentada ao Instituto de Biocincias do Cmpus de Rio Claro, Universidade Estadual Paulista, como parte dos requisitos para obteno do ttulo de Meste em Cincias Biolgicas -Biologia Celular e Molecular.

Agosto - 2007

ii

ANATOMIA, HISTOLOGIA, HISTOQUMICA E ULTRA-ESTRUTURA DAS GLNDULAS SALIVARES

CEFLICAS DE ABELHAS EUSSOCIAIS (HYMENOPTERA, APIDAE)

SILVANA BEANI POIANI

Orientadora: Carminda da Cruz Landim

Dissertao apresentada ao Instituto de Biocincias do Cmpus de Rio Claro, Universidade Estadual Paulista, como parte dos requisitos para obteno do ttulo de Meste em Cincias Biolgicas -Biologia Celular e Molecular.

Agosto - 2007

iii

A toda minha famlia: Pais, irms, avs, tios e primos

Dedico.

iv

AGRADECIMENTOS

Agradeo a Deus por me guiar e pela famlia que me deu. Aos meus pais

Osvaldo e Adlia e irms Cludia e Mrcia pelo amor, apoio e unio. minha

orientadora Carminda da Cruz Landim pela oportunidade de trabalharmos juntas mais

uma vez, pela seriedade profissional e por compartilhar seus conhecimentos, guiando-

me pelo caminho da pesquisa cientfica.

Agradeo aos tcnicos dos laboratrios de Histologia (Grson), de Microscopia

Eletrnica (Mnika e Antnio) e, especialmente ao Srgio do Biotrio por valiosas

informaes. Aos amigos de orientao Vagner, Thasa, Luciana, Fernanda e Bruno.

Aos amigos da minha turma de Biologia que tornam a vida em Rio Claro mais

prazerosa, especialmente ao Pablo pelas ajudas com computador e discusses

produtivas, ao Fbio (Morcego) que me auxiliou nas anlises estatsticas e ao Eduardo

por estar presente nos momentos-chave, sempre me apoiando.

Agradeo aos amigos de So Paulo (Deivis, Fernando, Luciana, Samantha e

Lorena) pelo apoio e amizade verdadeira.

Agradeo s amigas do peito Mirella, Juliana e Cintia pela convivncia divertida

e companheirismo e CAPES pelo suporte financeiro para a realizao deste trabalho.

1

NDICE

Pgina

INTRODUO GERAL..................................................................................................4

OBJETIVOS GERAIS....................................................................................................10

CAPTULO 1 - Anatomia e Morfometria das Glndulas Salivares Ceflicas de Apis

mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae) em Fmeas e Machos com

Diferentes Idades.............................................................................................................13

RESUMO.............................................................................................................13

ABSTRACT.........................................................................................................14

1. INTRODUO...................................................................................................15

2. MATERIAL E MTODOS.................................................................................16

2.1. Material.........................................................................................................16

2.2. Mtodos.........................................................................................................17

2.2.1. Anatomia e Morfometria..............................................................17

2.2.2. Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)..............................18

3. RESULTADOS...................................................................................................18

3.1. Anatomia......................................................................................................18

3.1.1. Microscopia de Luz (ML)............................................................18

3.1.2. Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)..............................20

3.2. Morfometria..................................................................................................21

3.2.1. Apis mellifera...............................................................................21

3.2.2. Scaptotrigona postica...................................................................21

4. FIGURAS E TABELAS......................................................................................22

5. DISCUSSO.......................................................................................................31

5.1. Anatomia......................................................................................................31

5.2. Morfometria..................................................................................................34

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS................................................................37

CAPTULO 2 - Histologia e Histoqumica das Glndulas Salivares da Cabea de Duas

Espcies de Abelhas Eussociais, Apis mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera,

Apidae)............................................................................................................................42

2

RESUMO.............................................................................................................42

ABSTRACT.........................................................................................................43

1. INTRODUO...................................................................................................44

2. MATERIAL E MTODOS.................................................................................45

2.1. Material.........................................................................................................45

2.2. Mtodos........................................................................................................45

2.2.1. Histologia (HE)............................................................................45

2.2.2. Histoqumica................................................................................46

2.2.2.1. Identificao de Protenas Pelo Mtodo de Colorao por

Azul de Bromofenol (PEARSE, 1960)............................................................................46

2.2.2.2. Identificao de lipdios Pelo Mtodo de Colorao por

Sudan Black e Azul do Nilo............................................................................................47

3. RESULTADOS...................................................................................................47

3.1. Histologia......................................................................................................47

3.1.1. Apis mellifera...............................................................................47

3.1.2. Scaptotrigona postica...................................................................48

3.2. Histoqumica.................................................................................................49

3.2.1. Identificao de Protenas Pelo Mtodo de Colorao por Azul de

Bromofenol (PEARSE, 1960).........................................................................................49

3.2.2. Identificao de Lipdios Pelos Corantes Sudan Black e Azul do

Nilo..................................................................................................................................49

4. FIGURAS............................................................................................................51

5. DISCUSSO.......................................................................................................58

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS................................................................68

CAPTULO 3 - Ultra-Estrutura das Glndulas Salivares Ceflicas de Operrias e

Rainhas de Apis mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae) em

Diferentes Fases da Vida.................................................................................................77

RESUMO.............................................................................................................77

ABSTRACT.........................................................................................................78

3

1. INTRODUO...................................................................................................78

2. MATERIAL E MTODOS.................................................................................80

2.1. Material.........................................................................................................80

2.2. Mtodos........................................................................................................80

3. RESULTADOS...................................................................................................81

3.1. Ductos e Bolsa Salivar..................................................................................81

3.2. Poro Secretora...........................................................................................82

3.2.1. Apis mellifera...............................................................................82

3.2.1.1. Caractersticas Comuns...................................................83

3.2.1.2. Caractersticas Particulares.............................................83

3.2.2. Scaptotrigona postica...................................................................84

4. FIGURAS............................................................................................................86

5. DISCUSSO.......................................................................................................97

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS..............................................................104

DISCUSSO E CONCLUSES FINAIS....................................................................110

PERSPECTIVAS FUTURAS.......................................................................................116

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS..........................................................................117

4

INTRODUO GERAL

As diferentes espcies de abelhas variam em tamanho, forma e hbitos. Contudo, a

grande maioria tem como fonte de energia o nctar ou leo e, de protena, o plen

(MICHENER, 1974). Existem trs espcies comprovadamente carnvoras (ROUBIK,

1992) e outras ainda so cleptobiticas, vivem s custas do roubo do nctar e plen

colhidos pelas espcies que visitam as flores. As abelhas que tm hbitos sociais mais

avanados pertencem subfamlia Apinae e, dentro da tribo Apini, as subtribos Apina,

Meliponina e Bombini so as que esto em um estgio social mais avanado e so as

chamadas abelhas eussociais (SILVEIRA et al., 2002). As caractersticas que definem

as abelhas eussociais so: a sobreposio de geraes, o cuidado com a prole e a diviso

do trabalho reprodutivo entre as fmeas. A grande maioria dos outros grupos de abelhas

tem hbitos solitrios ou so sociais primitivos (ROUBIK, 1992; WINSTON, 1987).

Apini a tribo da qual fazem parte as espcies do gnero Apis. A subtribo

Meliponina composta pelas abelhas cujo ferro atrofiado, entre as quais esto as

abelhas indgenas brasileiras sem ferro, tal como Scaptotrigona postica (SILVEIRA et

al., 2002).

As colnias das abelhas eussociais so formadas por trs tipos de indivduos

adultos: rainha, operrias e machos. Conforme a espcie tambm podem estar presentes

rainhas virgens. Alm dos adultos, tambm est presente a cria em vrias fases do

desenvolvimento.

As rainhas e as operrias constituem castas do sexo feminino, responsveis por

diferentes funes na colnia. As rainhas fecundadas so as principais responsveis pela

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postura de ovos fecundados ou no, os quais do origem, respectivamente, s operrias

e aos machos, mantendo a populao das colnias. As operrias so responsveis pela

construo, abastecimento e manuteno da colnia, alm de dispensarem cuidados

cria e aos adultos, especialmente rainha.

O trabalho realizado pelas operrias obedece a uma seqncia determinada de

acordo com a idade (polietismo etrio), maturidade fisiolgica do indivduo e

necessidades da colnia. Tarefas realizadas dentro do ninho incluem o cuidado com a

cria, limpeza, construo e manipulao de alimento e, fora da colnia, coleta de

alimento, gua e resina. H tambm uma fase de guarda antes da fase de campeira

(FREE, 1980).

Os machos s esto presentes na colnia nas ocasies favorveis para reproduo,

so responsveis pela fecundao da rainha e, em Apis mellifera, pouca ou nenhuma

tarefa desempenham alm desta. Ao contrrio dos zanges de A. mellifera, os machos

dos meliponneos se alimentam nas flores, trabalham com o cerume (resina misturada

com cera), desidratam nctar, incubam clulas de cria, defendem o ninho e seguem

pistas de odor (IMPERATRIZ-FONSECA, 1973; KERR, 1951, 1990). Nogueira-Neto

(1997) de opinio que tais tarefas desempenhadas pelos machos devem ser eventuais,

j que no substituem as das operrias nas colnias.

As abelhas eussociais apresentam uma variedade de glndulas excrinas

distribudas por todo o corpo, cujos produtos so usados no desempenho de suas tarefas.

A cera na construo dos ninhos, a gelia real na alimentao da cria, feromnios no

controle da atividade de outros indivduos da mesma ou de outras colnias, defesa e

comunicao e tambm em processos fisiolgicos prprios como digesto e lubrificao

dos apndices articulados.

Todos insetos apresentam glndulas ligadas aos apndices bucais, as quais recebem

denominaes de acordo com o apndice a que esto conectadas. Nas abelhas adultas,

as principais destas glndulas esto ligadas ao lbio (glndulas labiais), s mandbulas

(glndulas mandibulares) e ao assoalho da cavidade bucal (glndulas hipofarngeas).

Todas estas glndulas fazem parte de um sistema designado sistema salivar, apesar de

apresentarem funes diversificadas, muitas vezes com pequena ou nenhuma relao

com a ingesto ou digesto de alimento.

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Nas abelhas adultas, as glndulas labiais descarregam sua secreo no premento da

glossa estando, portanto, em condio de misturar seus produtos ao alimento ingerido.

Seja por este motivo, ou porque so homlogas das glndulas salivares dos outros

insetos, ou ainda porque se originam das glndulas salivares larvais, elas so

consideradas as glndulas salivares propriamente ditas (CRUZ-LANDIM, 1967; SILVA

DE MORAES, 2002; SNODGRASS, 1956).

Em todos os insetos, um par de glndulas salivares est localizado no trax e seus

ductos penetram na cabea onde se unem em um nico ducto excretor comum que se

abre entre a base da hipofaringe e o premento do lbio. A funo dessas glndulas

muito variada dependendo da dieta do inseto, de modo que impossvel atribuir-lhe

nome funcional consistente, mas, embriologicamente, so glndulas labiais porque se

desenvolvem como invaginaes ectodrmicas do segmento labial da cabea (CRUZ-

LANDIM; MELLO, 1967; SNODGRASS, 1956).

Nas abelhas eussociais da subfamlia Apinae, pertencentes s subtribos Euglossina,

Bombina, Meliponina e Apina, as glndulas labiais ou salivares dos adultos so

formadas por um par de glndulas localizado no trax, como nos demais insetos, e por

um par localizado na cabea, sendo denominadas de glndulas salivares (ou labiais) da

cabea. Estas glndulas ceflicas no esto presentes em outros himenpteros, nem em

outros insetos e, por isso, constituem uma caracterstica especial destas tribos, no

sendo encontradas, plenamente desenvolvidas, nas outras abelhas (CRUZ-LANDIM,

1967, 2000; SILVA DE MORAES, 2002).

Parece que ao longo da filogenia, h grande variao morfolgica da glndula

salivar ceflica entre as abelhas. De um modo geral, parece ocorrer um aumento no grau

de desenvolvimento dessa glndula em espcies com maior grau de sociabilidade. Nas

abelhas em que as glndulas salivares ceflicas no esto presentes, o ducto excretor

comum das glndulas salivares torcicas, no interior da cabea, apresenta-se como uma

fita oca, reforada por tendeas. Em algumas espcies de abelhas pertencentes s

famlias Halictidae, Megachilidae e Anthophorini, o mesmo ducto apresenta expanses

laterais foliceas que podem ser interpretadas como prenncios da glndula salivar

ceflica. No se sabe se essas expanses so funcionais. Nos Anthophorini, tais

prenncios aparecem como expanses unilaterais, digitiformes. J em Halictidae e

Megachilidae as expanses so bilaterais com forma folicea conectadas ao ducto

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excretor comum das glndulas torcicas por canais cilndricos (CRUZ-LANDIM,

1967).

O par da glndula salivar presente na cabea formado durante a pupao, por

evaginaes do epitlio do ducto excretor comum da glndula salivar larval, que

atravessa a cabea (CRUZ-LANDIM; MELLO, 1967). Nos Meliponina e Bombina, na

juno dos ductos das glndulas salivares torcicas com os ductos da poro glandular

ceflica permanece uma dilatao, denominada bolsa salivar ou reservatrio, o qual no

est presente nos Apina e Euglossina (CRUZ-LANDIM, 1967). Contudo, Salles e Cruz-

Landim (1998) no identificaram bolsa salivar em Camargoia nordestina, um

meliponneo, e sim estruturas globulares recobrindo a juno dos ductos.

Apesar de terem a mesma origem e desembocadura comum, os pares de glndulas

torcicos e ceflicos so distintos morfolgica e funcionalmente. As glndulas salivares

torcicas so formadas por unidades secretoras tubulares enquanto a poro ceflica

formada por unidades secretoras alveolares. Cada conjunto lateral de unidades

secretoras considerado uma glndula, portanto, as glndulas salivares da cabea so

estruturas pares (CRUZ-LANDIM, 1967).

De acordo com a terminologia dada s clulas glandulares dos insetos, com relao

ao modo pelo qual a clula secreta seus produtos (NOIROT; QUENNEDEY, 1974,

1991), os alvolos das glndulas salivares ceflicas so constitudos por clulas

glandulares da classe I as quais esto organizadas de modo a formar um rgo interno

no corpo da abelha (CRUZ-LANDIM, 2002). Nesta classe de clulas glandulares, cada

clula alveolar est envolvida no processo de produo e descarga da secreo e

diretamente recoberta pela cutcula.

A secreo das glndulas salivares do trax aquosa e segundo Delage-Darchen et

al. (1979), Simpson (1960) e Simpson et al. (1968) contm enzimas digestivas,

enquanto a secreo das glndulas salivares da cabea tem aspecto oleoso. Segundo

Simpson (1960), essa secreo oleosa serve para lubrificar as peas bucais. Foi tambm

sugerida a funo de amolecer a cera durante sua manipulao na construo do ninho

(HESELHAUS, 1922), a qual foi posta em dvida por Simpson (1960) j que nem todas

as abelhas que apresentam a glndula salivar ceflica desenvolvida trabalham com a

cera.

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Engels et al. (1997) demonstraram a presena de pelo menos 68 diferentes

substncias volteis pertencentes a 5 grupos qumicos com potencial para

desempenharem papel feromonal em extratos da cabea de rainhas de Scaptotrigona

postica sem, contudo, determinarem onde eram produzidas. Porm, levando em

considerao a natureza dos compostos, apenas as glndulas hipofarngeas poderiam ser

excludas da funo de produzir tais compostos.

Entre as glndulas da cabea, as mandibulares tm sido apontadas como as mais

provveis fontes de feromnios. Contudo, Jarau et al. (2004) e Schorkopf et al. (2007)

demonstraram, atravs de bioensaios, que as glndulas salivares da cabea de operrias

campeiras de, respectivamente, Trigona recursa e T. spinipes (Subtribo Meliponina)

produzem componentes volteis que esto relacionados comunicao por trilhas de

cheiro.

As substncias produzidas pelas glndulas excrinas nas abelhas so em sua

maioria feromnios usados para comunicao e reconhecimento da posio social de

cada indivduo e para inter-relacionamentos dos mais diferentes tipos, necessrios na

comunidade. Assim, o ciclo funcional das glndulas determina a funo do indivduo na

sociedade ou vice-versa (CRUZ-LANDIM, 1994).

Como j mencionado anteriormente, as abelhas passam por fases da vida em que

desempenham tarefas diferentes. Silva de Moraes (1978) verificou que desde o incio da

diferenciao das clulas das glndulas salivares da cabea, seus ncleos se apresentam

poliplides, mas que o grau de ploidia atingido por eles mais baixo que aquele

alcanado pelos ncleos das torcicas, o que desde logo evidencia diferenas de funo,

principalmente quanto intensidade de sntese protica. Cruz-Landim e Akahira (1966)

constataram que as glndulas salivares torcicas e ceflicas nas operrias das espcies

sociais apresentam um nico ciclo secretor durante a vida adulta, o qual est

correlacionado diviso de trabalho, desenvolvendo-se em um certo perodo da vida e

regredindo posteriormente. Dias (1992) estudando o processo de desenvolvimento e de

regresso das glndulas salivares da cabea e alguns aspectos morfo-funcionais de

operrias de S. postica, observou um desenvolvimento progressivo dessas glndulas,

desde a emergncia da operria at ao fim da vida. Esta verificao est de acordo com

o observado nas glndulas salivares ceflicas de Camargoia nordestina, um

meliponneo, por Salles e Cruz-Landim (1998).

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As glndulas das abelhas ocorrem de maneira bastante diferente entre machos e

fmeas, sendo mais abundantes nas fmeas (CRUZ-LANDIM, 1994). A presena e o

grau de desenvolvimento das glndulas salivares, tanto do trax quanto da cabea,

diferem entre os dois sexos intra e inter-especificamente. Operrias e rainhas de A.

mellifera apresentam ambos pares de glndulas, mas nos machos as da cabea so

vestigiais (GRAF, 1968; SIMPSON, 1962).

J em Bombus, o grau de desenvolvimento varia entre os sexos nas diferentes

espcies. Machos de Bombus pomorum (RIBBANDS, 1953), B. atratus e B. morio

(LAUER, 1992) possuem a glndula salivar da cabea mais desenvolvida que nas

fmeas de sua espcie, porm em B. campestris (RIBBANDS, 1953) e B.

(Rhodobombus) mesomelas (TERZO et al., 2005) elas so rudimentares nos machos e,

nesta ltima espcie, grandes nas rainhas e operrias. Alguns machos de mamangavas

usam a secreo de suas glndulas salivares ceflicas para marcar com cheiro rotas de

vo e atrair rainhas virgens (BERGMAN; BERGSTRM, 1997; KULLENBERG et al.,

1973), entretanto em B. mesomelas esta funo no encontra paralelo e a secreo

corresponde aos hidrocarbonetos cuticulares.

Variaes morfolgicas ocorrem tambm entre os meliponneos. Em alguns

Meliponina esta glndula nas operrias to desenvolvida que ramos alcanam o trax

(CAVASIN-OLIVEIRA, 1995; CRUZ-LANDIM, 1967; SILVA DE MORAES, 1978).

Portanto, apesar da morfologia, ocorrncia e aspectos morfo-funcionais das

glndulas salivares da cabea virem sendo estudados desde h bastante tempo, pouco se

sabe sobre seu ciclo secretor, diferenas entre rainhas, operrias e machos de espcies

eussociais e sua funo ainda no se encontra completamente esclarecida. Neste sentido,

um estudo da morfologia geral e da ultra-estrutura celular da glndula salivar ceflica

foi proposto para compreender melhor a biologia celular, o ciclo funcional e o papel

desta glndula em espcies sociais, Apis mellifera e Scaptotrigona postica, comparando

seu desenvolvimento em indivduos de ambas as castas femininas e entre os sexos, com

diferentes idades.

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OBJETIVOS GERAIS

Em vista do exposto, os objetivos deste trabalho so:

1. Atravs da anatomia e morfometria, caracterizar as glndulas salivares ceflicas

nas espcies Apis mellifera e Scaptotrigona postica, comparando seu desenvolvimento

entre as idades dentro de cada casta e sexo;

2. Estudar as glndulas salivares da cabea nos nveis histolgico, histoqumico e

ultra-estrutural em operrias, rainhas e machos das espcies acima mencionadas, em

vrias fases da vida;

3. Comparar a morfologia das glndulas com a finalidade de detectar diferenas

passveis de serem correlacionadas funo secretora, nesses indivduos.

A apresentao dos resultados foi organizada em 3 artigos aqui denominados

captulos:

Captulo 1 Anatomia e Morfometria das Glndulas Salivares Ceflicas

de Apis mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae) em

Fmeas e Machos com Diferentes Idades.

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Captulo 2 Histologia e Histoqumica das Glndulas Salivares da

Cabea de Duas Espcies de Abelhas Eussociais, Apis mellifera e

Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae).

Captulo 3 Ultra-Estrutura das Glndulas Salivares Ceflicas de

Operrias e Rainhas de Apis mellifera e Scaptotrigona postica

(Hymenoptera, Apidae) em Diferentes Fases da Vida.

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Anatomia e Morfometria das Glndulas Salivares Ceflicas de Apis mellifera e

Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae) em Fmeas e Machos com Diferentes

Idades.

Silvana Beani Poiani, Carminda da Cruz-Landim1

Departamento de Biologia, Instituto de Biocincias de Rio Claro (UNESP/RC),

Av. 24A, no.1515, Bela Vista, CEP 13506-900, Rio Claro, So Paulo, Brasil

RESUMO: Os insetos apresentam glndulas associadas aos apndices bucais, dos quais

recebem suas denominaes e constituem um sistema designado sistema salivar. As

glndulas labiais ou salivares fazem parte desse sistema e so estruturas pares

localizadas no trax dos insetos adultos. Nas abelhas da subfamlia Apinae, um par de

glndulas salivares tambm se desenvolve na cabea. Deste modo, as glndulas

salivares ceflicas constituem uma caracterstica exclusiva de algumas espcies de

abelhas. Estudou-se a anatomia, atravs de microscopia de luz e eletrnica de varredura,

e o grau de desenvolvimento da glndula salivar ceflica, atravs de morfometria, em

operrias, rainhas e machos, em diferentes idades, das espcies Apis mellifera e

Scaptotrigona postica. Os resultados mostram que as glndulas salivares ceflicas

encontram-se igualmente desenvolvidas nas fmeas de Apis mellifera e Scaptotrigona

postica e tambm nos machos maduros sexualmente desta ltima espcie. J nos

machos maduros de A. mellifera so vestigiais. Ocorre variao da morfologia dos

alvolos secretores e ductos conforme a espcie. Em ambas espcies, o

desenvolvimento da glndula progressivo, atingindo grau mximo nas operrias

campeiras e nas rainhas em postura. Nos machos de A. mellifera ocorre o inverso, a

glndula degenera com o passar da idade. Machos de S. postica apresentam

desenvolvimento glandular semelhante ao das operrias de sua espcie. A microscopia

eletrnica de varredura revelou que fmeas jovens apresentam alvolos e ductos

colapsados enquanto as mais velhas apresentam alvolos trgidos e, em A. mellifera,

ductos robustos. Em A. mellifera existem pontuaes na superfcie dos alvolos e

ductos, j perceptveis nas glndulas das operrias nutridoras e bem evidentes nas das

campeiras e rainhas em postura, tais estruturas correspondem a aberturas dos espaos

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intercelulares. Anlises estatsticas confirmaram que h diferena significativa (p0,05)

na rea alveolar das glndulas nas diferentes fases da vida das operrias das duas

espcies e entre rainhas virgens e em postura de S. postica.

PALAVRAS-CHAVE: abelha, glndula labial, operria, rainha, microscopia eletrnica

de varredura

ABSTRACT: Insects present exocrine glands attached to mouthparts which take their

names and form a system designated salivary system. Adult insects labial or salivary

glands take part in this system and are structures paired located at torax. Apinae

subfamily bees have a pair salivary glands develop in head constituting exclusive

feature of some bees species. This work studied the anatomy of cephalic salivary glands

by ligth and varredure eletron microscopy, and development degree by morphometric

analises, in workers, queens and males of Apis mellifera and Scaptotrigona postica in

various ages. The results show the cephalic salivary glands are equally developed in

females of Apis mellifera, and females and sexually mature males of Scaptotrigona

postica. Mature males of A. mellifera exhibit vestigial glands. The head salivary glands

consist of alveolar secretory units and ducts. The morphology of alveoli and ducts vary

according to the species. In both species, the development of the gland is progressive,

reaching its maximum level in foragers and egg-laying queens. In A. mellifera males,

the inverse occurs, the gland degenerates as aging progresses. Gland development in S.

postica males is similar to that of workers of its species. Scanning electron microscopy

revealed collapsed alveoli and ducts in young females, while older ones exhibit turgid

alveoli and, in A. mellifera, robust ducts. In the latter, a punctured surface in alveoli and

ducts can be observed in glands of nurse bees, and better conspicuous in foragers and

egg-laying queens. These structures correspond to openings of intercellular spaces.

Statistical analysis confirmed significant differences (p0.05) in the area of alveoli of

glands of workers in different life stages of both species and between S. postica virgin

and egg-laying queens.

KEYWORDS: bee, labial gland, worker, queen, scanning eletron microscopy

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1. INTRODUO

Todos os insetos so dotados de um sistema salivar composto por pares de

glndulas, os quais esto conectados aos apndices bucais. Em abelhas adultas, as

principais glndulas so as labiais, mandibulares e hipofarngeas que, apesar de

constiturem o sistema salivar, apresentam funes variadas de modo que nem sempre

esto relacionadas com a ingesto ou digesto de alimento.

As glndulas labiais tambm so designadas como glndulas salivares

propriamente ditas, seja porque descarregam sua secreo na base da lngua, condio

esta que permite a mistura imediata da secreo com o alimento ingerido, ou porque so

homlogas das glndulas salivares dos demais insetos, ou ainda porque originam-se das

glndulas salivares larvais (CRUZ-LANDIM, 1967; SILVA DE MORAES, 2002;

SNODGRASS, 1956).

Em todos os insetos, as glndulas salivares dos adultos esto localizadas no

trax. Porm, uma caracterstica que distingue algumas espcies de abelhas dos demais

insetos a presena de um par de glndulas salivares tambm na cabea. A glndula

salivar ceflica s encontrada plenamente desenvolvida em algumas espcies de

abelhas da subfamlia Apinae (CRUZ-LANDIM, 1967).

A glndula salivar ceflica forma-se durante a pupao, por evaginaes do

epitlio do ducto excretor comum, remanescente da glndula salivar larval, no interior

da cabea (CRUZ-LANDIM; MELLO, 1967). Nos Meliponina e Bombina, existe uma

dilatao no local de convergncia dos ductos das glndulas salivares torcicas com os

das ceflicas, que chamada de bolsa salivar ou reservatrio.

As glndulas salivares torcicas e ceflicas tm origem ectodrmica e

desembocadura comum, porm diferem quanto funo. Estudos feitos por Delage-

Darchen et al. (1979), Simpson (1960) e Simpson et al. (1968) verificaram que a

secreo da glndula salivar torcica aquosa e contm enzimas digestivas, enquanto a

secreo da poro ceflica da glndula tem aspecto oleoso.

As glndulas das abelhas ocorrem de modo diferente nos machos e nas fmeas,

sendo mais abundantes nas fmeas. As operrias realizam tarefas na colnia,

obedecendo a uma seqncia de acordo com a idade, estado fisiolgico ou necessidades

da colnia, e essas mudanas de fases da vida esto correlacionadas ao desenvolvimento

16

e regresso das glndulas excrinas espalhadas pelo corpo da abelha (CRUZ-LANDIM,

1994). Observaes feitas por Heselhaus (1922), Inglesent (1940) e Simpson (1960,

1961, 1963) apontam que, em A. mellifera, na fase de campeira da operria que a

glndula salivar ceflica atinge maior grau de desenvolvimento. Anos mais tarde

Katzav-Gozansky et al. (2001) comprovaram tal observao atravs de anlises

estatsticas mas, abordaram apenas em operrias.

Rainhas so responsveis pela oviposio e integrao dos membros da colnia e

os machos tm a funo de fecundar a rainha e, nos meliponneos, podem

eventualmente desempenhar algumas outras tarefas (NOGUEIRA-NETO, 1997).

O presente trabalho tem por finalidade abordar caractersticas morfo-anatmicas

e morfomtricas das glndulas salivares ceflicas, relacionando o desenvolvimento da

glndula com as diferentes fases da vida de operrias, rainhas e machos de duas

espcies de abelhas eussociais, Apis mellifera Linnaeus (1758) e Scaptotrigona postica

Latreille (1807).

2. MATERIAL E MTODOS

2.1. Material

Operrias, rainhas e machos de Apis mellifera e Scaptotrigona postica foram

coletados no apirio e meliponrio mantidos pelo Instituto de Biocincias da

Universidade Estadual Paulista (UNESP), em Rio Claro, SP.

Para ambas espcies, as operrias recm-emergidas foram capturadas ao

emergirem da clula de cria, as nutridoras enquanto aprovisionavam as clulas de cria e

as campeiras ao voltarem da coleta para as colnias. Rainhas virgens de A. mellifera

foram criadas em laboratrio enquanto as de S. postica e as rainhas em postura de

ambas espcies foram retiradas de colnias fortes. Machos recm-emergidos de A.

mellifera coletados no interior da colnia e os maduros sexualmente nos agregados de

machos, prximos s colnias. Os indivduos recm-emergidos de S. postica foram

analisados sob estereomicroscpio e separados em fmeas (operrias recm-emergidas)

e machos jovens, conforme presena ou ausncia de corbcula.

17

2.2. Mtodos

2.2.1. Anatomia e Morfometria

As reas (m2) dos alvolos das glndulas salivares ceflicas foram medidas em

operrias em diferentes fases da vida (recm-emergidas, nutridoras e campeiras), e em

rainhas (virgens e em postura) de ambas espcies, S. postica e A. mellifera. Machos no

foram analisados devido dificuldade de encontrar a glndula, j que nem sempre foi

possvel observ-la, ou porque encontrava-se envolvida pelo corpo gorduroso, no

sendo possvel distinguir os alvolos.

As glndulas foram dissecadas em soluo fisiolgica para inseto tamponada

(NaCl Na2HPO4 KH2PO4), colocadas em lminas, fixadas em Bouin aquoso e levadas

ao microscpio de luz. As reas alveolares foram medidas usando um sistema de

tratamento e captura de imagem (Leica Qwin 550 Servers Image and Peripheral

Server Software). As imagens capturadas serviram tambm para a anlise anatmica das

glndulas.

Para operrias, foram capturados 10 indivduos em cada fase da vida, ou seja, 10

recm-emergidas, 10 nutridoras e 10 campeiras. Cada indivduo forneceu um par de

glndulas salivares ceflicas. Foram tomadas, aleatoriamente, as medidas da rea de 10

alvolos de cada glndula de cada indivduo. Ou seja, para cada idade obteve-se 100

medidas alveolares.

Quanto s rainhas, ocorreu uma variao na quantidade de medidas feitas devido

disponibilidade desses indivduos nas colnias, porm, como feito com as operrias,

foram medidas, aleatoriamente, as reas de 10 alvolos de cada glndula de cada

indivduo. Para S. postica foram usadas 4 rainhas virgens (40 medidas) e 5 fecundadas

(50 medidas), e em A. mellifera 10 rainhas virgens (100 medidas) e 1 fecundada (10

medidas).

Para as anlises estatsticas, as medidas alveolares foram transformadas em log e

os resduos apresentaram normalidade e distribuio homognea. O teste estatstico

paramtrico aplicado foi a anlise de varincia - ANOVA, com o qual se avaliou a

ocorrncia de diferenas significativas (p 0.05), ou no, entre os grupos. Nos casos em

18

que houve diferena significativa, aplicou-se o teste Tukey para verificar entre quais

grupos tal diferena ocorreu.

2.2.2. Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)

As glndulas salivares da cabea de 5 operrias em cada fase da vida (recm-

emergida, nutridora e campeira) e 4 rainhas virgens e 2 em postura de A. mellifera e S.

postica, foram dissecadas e fixadas em Karnovisky (paraformaldedo 2% e

glutaraldedo 2,5% em tampo cacodilato de sdio 0,1M, pH 7,4), durante 1 hora, em

seguida, lavadas em gua destilada, desidratadas com etanol 70%, 90%, 95% e 3 banhos

de lcool 100%, 10 minutos cada banho. A seguir, levadas ao Critical Point Drying

para a retirada do lquido, coladas em suporte de alumnio, metalizadas com ouro e

examinadas ao microscpio eletrnico de varredura.

3. RESULTADOS

3.1. Anatomia

3.1.1. Microscopia de Luz (ML)

A glndula salivar ceflica, tanto de A. mellifera quanto de S. postica, formada

por dois ramos laterais independentes, os quais esto localizados um de cada lado da

cabea, apresentando-se como estrutura par. Cada glndula formada por conjuntos de

unidades secretoras alveolares e, sendo uma glndula excrina, por ductos. Os alvolos

so constitudos por um epitlio secretor recoberto na face luminal por cutcula. Dos

alvolos partem ductos que, progressivamente, unem-se at formarem ductos nicos de

cada uma das glndulas ceflicas que, com os ductos das glndulas salivares do trax,

do origem ao ducto excretor final, o qual se abre no premento da glossa.

Cada glndula salivar ceflica de S. postica divide-se em um ramo supra-

cerebral, o qual contm maior quantidade de alvolos, e um ramo sub-cerebral, o qual

contm menor quantidade de alvolos (Figura 1), porm, na figura, torna-se difcil

19

apontar cada uma dessas regies devido ao emaranhado formado pelos ductos e

alvolos. Os alvolos so esfricos ou ovais e os ductos assumem distribuio esparsada

em ambos os ramos. Os ductos que partem dos alvolos so pouco calibrosos.

As operrias recm-emergidas de S. postica possuem alvolos glandulares

murchos (Figura 2), enquanto que operrias campeiras e rainhas em postura os possuem

trgidos (Figura 1). Operrias nutridoras e rainhas virgens apresentam desenvolvimento

glandular intermedirio entre os indivduos jovens e velhos, ou seja, alguns alvolos j

encontram-se cheios de secreo (Figura 3).

Em A. mellifera os alvolos so predominantemente piriformes e formam uma

massa mais uniforme e compacta (Figura 4, 5 e 6), a qual se apia na parede ltero-

posterior da cabea e se divide em ramos sub e supra-cerebrais. Os ductos apresentam-

se mais calibrosos quando comparados com os da glndula salivar ceflica de S. postica.

Tal como para S. postica, operrias recm-emergidas de A. mellifera possuem

alvolos colapsados (Figura 4) que tornam-se progressivamente mais trgidos conforme

os indivduos envelhecem, atingindo grau mximo de desenvolvimento nas operrias

campeiras e rainhas em postura (6) e situao intermediria em nutridoras e rainhas

virgens (Figura 5).

Igualmente para ambas espcies, em cada glndula, os ductos que partem dos

alvolos so chamados de coletores e unem-se para formarem os ductos condutores.

Cada glndula possui 2 ductos condutores, um da poro supra-cerebral e outro da

poro sub-cerebral. Estes, ento, se fusionam e formam o ducto excretor da glndula.

Os ductos excretores, por sua vez, unem-se na regio mediana central da cabea aos

ductos excretores das glndulas torcicas para formarem a bolsa salivar da qual parte o

canal excretor final das glndulas torcicas e ceflicas, no caso de S. postica, ou com o

canal excretor comum das glndulas torcicas, no caso de A. mellifera. O canal excretor

final cilndrico, com aspecto mais calibroso em A. mellifera, e fino em S. postica.

Ento, em S. postica, no local de convergncia dos ductos excretores torcicos e

ceflicos, existe uma dilatao, denominada bolsa salivar ou reservatrio, da qual parte

o canal excretor final (Figura 1). Em A. mellifera, os ductos excretores da glndula

salivar torcica unem-se ainda no trax, de modo que formado um canal excretor

comum da poro glandular torcica. Este canal penetra na cabea atravs do formen

occipital e, ento, une-se aos ductos excretores de cada glndula salivar ceflica para

20

formar o canal excretor final. Neste caso, no se observa uma dilatao no local de

convergncia dos ductos.

Comparando-se as espcies, estas diferem ainda pela quantidade de alvolos, ou

seja, grau de desenvolvimento. Mesmo levando em conta a diferena de tamanho dos

indivduos das espcies estudadas, a glndula mais desenvolvida em A. mellifera. No

mais, o padro anatmico geral das glndulas das duas espcies bastante semelhante.

Machos recm-emergidos de S. postica no foram analisados, porm os maduros

possuem glndula desenvolvida como nas fmeas de sua espcie (Figura 7).

Convm observar que a glndula, em machos recm-emergidos de A. mellifera

(Figura 8), envolvida por clulas do corpo gorduroso e nos maduros, alm disso,

sofreu regresso, de modo que na disseco possvel visualizar apenas os ductos que a

formavam.

3.1.2. Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)

A anlise ao MEV confirmou o observado ao microscpio de luz, que em ambas

as espcies, nas operrias recm-emergidas, os alvolos e ductos esto colapsados

(Figuras 9 e 13). Geralmente nas operrias nutridoras e rainhas virgens, a maioria dos

alvolos encontram-se colapsados, embora alguns j assumam aspecto trgido (Figura

10), enquanto que indivduos mais velhos, como as operrias campeiras e rainhas em

postura, apresentam alvolos completamente trgidos (Figuras 11, 14 e 15) e, no caso

de A. mellifera, ductos robustos (Figura 12).

Em A. mellifera o formato dos alvolos varia podendo ser alongado,

arredondado ou piriforme (Figura 11). Nas operrias recm-emergidas, os limites

celulares na superfcie dos alvolos e ductos so bem marcados (Figura 9). J em

operrias nutridoras, campeiras e rainhas virgens e em postura no so perceptveis

(Figuras 10 e 11). Ainda, em relao A. mellifera, com exceo das operrias recm-

emergidas, a superfcie dos alvolos e ductos apresenta pontuaes externas,

semelhantes a poros (Figuras 10, 11 e 12).

As pores secretoras da glndula em S. postica so predominantemente

arredondadas (Figuras 13, 14), mas em rainha em postura predominam alvolos

alongados (Figura 15). No se observa a superfcie dos alvolos e ductos marcada pelos

21

poros, mas a superfcie alveolar em rainha em postura apresenta contornos celulares. Os

ductos so cilndricos e finos (Figuras 13, 14 e 15). Os alvolos so bem supridos por

traqueolas (Figuras 13, 14 e 15).

3.2. Morfometria

3.2.1. Apis mellifera

Tratando-se de operrias, os resultados dos testes estatsticos mostram que no

s h diferena significativa dentro da casta (p=0,001), mas tambm dentro de cada

grupo etrio (p=0,002) (Tabela 1). Atravs do teste Tukey verificou-se que os grupos

que diferem entre si so das operrias nutridoras e das campeiras (p=0,0007) (Tabela 2).

As abelhas recm-emergidas apresentam valor mdio da rea alveolar entre as

nutridoras e campeiras, no diferindo destes grupos. A Figura 16 mostra os grficos

representativos das mdias alveolares em cada grupo etrio das operrias.

Em relao s rainhas virgens e em postura no houve diferena significativa

entre os grupos (p=0,623) (Tabela 3 e Figura 17).

3.2.2. Scaptotrigona postica

No caso das operrias de S. postica, assim como o observado em operrias de A.

mellifera, existe diferena significativa entre as idades (p=0,000) e dentro de cada idade

(p=0,000) (Tabela 4). A tabela 5 mostra que, pelos resultados do teste Tukey, as

diferenas nas mdias das reas alveolares ocorrem entre todos os grupos (p=.000022).

A mdia da rea dos alvolos tende a aumentar conforme o indivduo envelhece, sendo

encontrados, ento, valores baixos para recm-emergidas e os valores maiores para as

campeiras, como mostra o grfico da Figura 18.

Entre as rainhas tambm constatou-se diferena significativa entre virgens e em

postura (p=0,000) (Tabela 6), sendo que rainhas virgens apresentam reas alveolares

menores que as em postura (Figura 19).

22

_______________Figuras e Tabelas

23

Figuras 1 a 8 - Aspecto anatmico das glndulas salivares ceflicas em Scaptotrigona

postica e Apis mellifera. 1 Aspecto geral da glndula em operria campeira de S.

postica mostrando os ductos (du) finos nesta espcie, alvolos (a) trgidos e bolsa

salivar (bs) na sua juno com os ductos torcicos (dt) e ducto excretor final (def). 2 e 4

- Nas operrias recm-emergidas de S. postica (2) e A. mellifera (4), os alvolos (a)

apresentam-se colapsados e, em A. mellifera, os ductos (du) so robustos e achatados. 3

e 5 Operrias nutridoras e rainhas virgens apresentam grau de desenvolvimento

glandular semelhante, com alguns alvolos (a) j contendo secreo, em S. postica (3) e

A. mellifera (5). 6 Nas rainhas em postura de A. melliferaa glndula atinge grau

mximo de desenvolvimento, com alvolos (a) trgidos contendo secreo de aspecto

oleoso. 7 Macho maduro de S. postica apresenta glndula to desenvolvida quanto as

operrias da mesma espcie. 8 Machos recm-emergidos de A. mellifera possuem a

glndula envolvida por clulas do corpo gorduroso (cg), de modo que apenas os ductos

so visveis.

Figuras 9 a 15 - Micrografias eletrnicas de varredura. 9 - Operria recm-emergida de

A. mellifera. Alvolos (a) e ductos (du) achatados. Os limites celulares so bem visveis

na superfcie dos alvolos e ductos. 10 - Operrias nutridoras e rainhas virgens de A.

mellifera. Parte dos alvolos encontra-se trgido. 11- Alvolos (a) trgidos alongados,

arredondados ou piriformes em operrias campeiras e rainhas em postura de A.

mellifera. Com exceo das operrias recm-emergidas, todas as outras fmeas de A.

mellifera apresentam a superfcie dos alvolos (10 e 11) e ductos (12) marcada por

pontuaes (setas) que correspondem a aberturas intercelulares. 13 e 14 - Operrias de

S. postica, recm-emergida (13) e campeira (14). Alvolos (a) arredondados, trgidos

nas campeiras e ductos (du) cilndricos, achatados nas recm-emergidas. 15 Rainha

em postura de S. postica. Os alvolos (a) so mais alongados que nas operrias da

mesma espcie e as superfcies so marcadas pelos contornos celulares. tr = traqueolas.

24

100m

20 m

du

bs dt

def

40m

1 2

20 m 20 m

3

4

20 m 20 m

6 5

20 m

7

20 m

8

40m

40 m

10

9

40 m

40 m

11

13

20 m

12

20 m 40 m

14 15

a

dua

a

a

du

du dudu

a

a

a

a

a

a

a a dudu

cgdu

adu

du

a aa

du

du aa

a

tr

tr tr

tr

25

Tabela 1 Resultado da anlise de varincia (ANOVA), em operrias de Apis mellifera, com valor de p significativo entre as idades e entre as glndulas em cada idade (p0,05).

0.144 27038.753 Erro

0.002 2.040 0.293 277.905 GL(ID$)

0.0017.4021.06222.125ID$

P Razo F Mdia quadr-

tica

G.L.* Soma de quadrados

Fonte

Tabela 2- Teste Tukey em operrias de Apis mellifera, mostrando que os grupos que diferem entre si (p0,05) so o das operrias nutridoras e campeiras.

.000759.076601 Campeiras (3)

.000759.296688 Nutridoras (2)

.076601 .296688 Recm-emergidas (1)

Campeiras (3) 9.995360

Nutridoras (2) 9.790370

Recm-emergidas (1)

9.873780

Operrias

26

Figura 16 Grfico das mdias alveolares em diferentes fases da vida de operrias de Apis mellifera.

Operrias

re

a al

veol

ar u

m

(Log

)

9.3

9.5

9.7

9.9

10.1

10.3

10.5

Recm-emergida Nutridora Campeira

27

0.127 10813.718 Erro

0.623 0.244 0.031 10.031 ID$

P Razo-F Mdia quadrtica

G.L.* Soma de quadrados

Fonte

Tabela 3 - Anlise de varincia (ANOVA) das reas alveolares das glndulas salivares ceflicas de rainhas virgens e em postura de Apis mellifera. No houve diferena significativa (p>0,05) entre os grupos.

Figura 17- Grfico das mdias alveolares em diferentes fases da vida de rainhas de Apis mellifera.

*G.L. = Graus de liberdade

28

Tabela 4 Diferena significativa (p0,05) dada pela anlise de varincia (ANOVA) das reas alveolares das glndulas salivares ceflicas de operrias de Scaptotrigona postica, tanto entre as idades quanto entre as glndulas em cada idade.

0.075 27020.152 Erro

0.000 7.357 0.549 2714.827 GL(ID$)

0.000404.780 30.212 260.424 ID$

P Razo-F Mdia quadrtica

G.L.* Soma dos quadrados

Fonte

*G.L. = Graus de liberdade

Tabela 5 O teste Tukey em operrias de Scaptotrigona postica revelou que todos os grupos diferem entre si.

.000022.000022Campeira {3}

.000022.000022Nutridora {2}

.000022.000022Recm-emergida {1}

Campeira (3) 8.452050

Nutridora (2) 8.044490

Recm-emergida (1)

7.364160

Operrias

29

Figura 18 - Grfico das mdias alveolares em diferentes fases da vida de operrias de Scaptotrigona postica.

Operrias

re

a A

lveo

lar

um

(Log

)

6.8

7.2

7.6

8.0

8.4

8.8

9.2

Recm-emergida Nutridora Campeira

30

Tabela 6 - Anlise de varincia (ANOVA) das reas alveolares das glndulas salivares ceflicas de rainhas de Scaptotrigona postica. H diferena significativa (p

31

5. DISCUSSO

As abelhas passam por fases da vida em que desempenham tarefas diferentes e,

nas operrias das espcies eussociais, a diviso de trabalho est parte ou totalmente

relacionada ao ciclo funcional de glndulas excrinas (CRUZ-LANDIM, 1994).

Nas abelhas das espcies A. mellifera e S. postica, as glndulas salivares

ceflicas so igualmente desenvolvidas em operrias e rainhas. Nos machos

sexualmente maduros de S. postica as glndulas salivares ceflicas so to

desenvolvidas quanto nas fmeas, no entanto, so reduzidas nos machos maduros de A.

mellifera, o que pode ser relacionado com as tarefas desempenhadas por estas classes de

indivduos na comunidade.

5.1. Anatomia

A localizao, o arranjo e a forma dos alvolos variam entre as espcies

estudadas. Estas observaes concordam com estudo feito por Cruz-Landim (1967) em

que as caractersticas descritas para A. mellifera so semelhantes s observadas em

Bombus, Euplusia e Euglossa, mas diferem dos Meliponina.

Em S. postica foi encontrada bolsa salivar no local de convergncia dos ductos

provenientes das glndulas salivares torcicas e ceflicas. A presena de bolsa salivar

foi verificada tambm em Euplusia violacens, Euglossa cordata, Eulaema nigrita e

algumas espcies de Bombina e outros Meliponina (CRUZ-LANDIM, 1967), porm

no foi atribudo a ela significado funcional. A autora sugere tratar-se de uma estrutura

residual proveniente do canal excretor final que achatado em espcies de abelhas

solitrias que no tem a glndula ceflica, sendo, portanto, a sua ausncia em A.

mellifera um carter apomrfico. Os resultados aqui apresentados concordam com a

sugesto de Cruz-Landim (1967). A secreo acumula-se progressivamente na luz dos

alvolos no parecendo ser necessria a bolsa salivar para seu armazenamento.

As tendeas da cutcula que reveste os ductos de ambas as espcies conferem

rigidez e previnem o colapso dos mesmos. Estudo detalhado do canal salivar em

abelhas (GRAF, 1968) revelou nos Meliponina a parte do canal salivar que forma a

bolsa salivar, bem como parte dos ductos excretores torcicos que precedem a sua

32

fuso, perde a regularidade da estrutura cuticular com reforos em espiral e reorganiza-

se novamente no canal excretor final, que vai para o premento, e nos ductos condutores

das glndulas salivares da cabea. No presente estudo verificou-se que em A. mellifera

no h desaparecimento da espiral cuticular que se apresenta com regularidade.

Em operrias de alguns Meliponina, a glndula salivar ceflica to

desenvolvida que ramos alcanam o trax e se entremeiam aos alvolos da poro

torcica, da qual diferem nitidamente, j que a poro secretora torcica tubular e a

ceflica formada por alvolos arredondados (CAVASIN-OLIVEIRA, 1995; CRUZ-

LANDIM, 1967; GRAF, 1968; SILVA DE MORAES, 1978). Esta condio no

encontra paralelo no presente estudo, onde verifica-se que a poro secretora da

glndula em S. postica e A. mellifera limita-se cabea.

As glndulas de ambas espcies diferem quanto morfologia dos alvolos e

ductos. Em A. mellifera os alvolos so predominantemente piriformes e esto

arranjados de modo a formarem uma massa uniforme e compacta, e os ductos so

robustos. J em S. postica os alvolos so esfricos ou ovais e os ductos so finos e

assumem distribuio esparsada. Apesar das diferenas anatmicas, a atividade

glandular semelhante entre as operrias e rainhas das duas espcies e machos de S.

postica, nos quais a secreo se acumula nos alvolos conforme os indivduos

envelhecem, diferindo apenas em relao aos machos de A. mellifera, nos quais a

glndula sofre regresso.

Machos recm-emergidos de A. mellifera apresentam a glndula salivar ceflica

envolvida pelo corpo gorduroso e, medida que envelhecem, a visualizao dos ductos

e unidades secretoras torna-se mais difcil e, s vezes, no so encontrados, indicando

regresso. Os zanges de A. mellifera so designados para uma nica e importante

funo, a fecundao da rainha. Desde que o zango no realiza trabalhos na colnia e

alimentado pelas operrias, as estruturas relacionadas s tarefas, nos machos, so

reduzidas ou ausentes (WINSTON, 1987), como parece ser o caso da glndula salivar

ceflica. Interessante ressaltar que machos de S. postica apresentam atividade glandular

semelhante a das operrias de sua espcie e, segundo Nogueira-Neto (1997),

eventualmente desempenham tarefas na colnia. O mesmo raciocnio pode ser usado

para explicar a regresso da glndula nos machos de A. mellifera, os quais no realizam

nenhuma atividade na colnia e no se alimentam mais depois que a abandonam. Os

33

machos de Bombus pomorum (RIBBANDS, 1953), B. atratus e B. morio (LAUER,

1992) possuem a glndula salivar da cabea desenvolvida, porm em grau maior que

das fmeas de sua espcie. Machos de B. pratorum e B. lapidarius marcam territrio e

atraem fmeas com a secreo da glndula salivar ceflica (BERGMAN;

BERGSTRM, 1997).

A anlise por varredura permite maior detalhamento da anatomia dessas

glndulas. Uma caracterstica presente apenas em A. mellifera, mais especificamente

nas operrias nutridoras e campeiras e rainhas virgens e em postura, a superfcie

alveolar e dos ductos cheia de pontuaes ou poros que parecem adentrar alvolos e

ductos. Estas estruturas correspondem a aberturas dos espaos intercelulares na regio

basal, como pde ser observado ao microscpio de luz (Captulo 2) e eletrnico de

transmisso (Captulo 3), e que no exame com MEV assemelham-se a poros na

superfcie dos alvolos e ductos. Estas estruturas so perceptveis quando os alvolos

esto trgidos, condio encontrada nas operrias campeiras e rainhas em postura, mas

j observveis em operrias nutridoras e rainhas virgens. Alm disso, tais aberturas

foram confirmadas com o auxlio da anlise ao microscpio eletrnico de transmisso

(Captulo 3). A abertura dos espaos intercelulares para o meio externo indica funo de

absoro de substncias atravs dessas aberturas. A sua presena a partir da fase de

nutridora com intensificao na de campeira indica aumento desse tipo de atividade

glandular. Em alguns insetos, especialmente em Colembola, as glndulas salivares

torcicas apresentam caractersticas semelhantes e tm papel excretor (CHAPMAN,

1998). A absoro de material da hemolinfa atravs de espaos intercelulares abertos

parece indicar que tambm nas abelhas possam exercer essa funo.

O aspecto dos alvolos das operrias tanto ao ML como ao MEV mostra que

estes se apresentam mais trgidos nas operrias campeiras e rainhas em postura

significando que contm maior quantidade de secreo, embora nas operrias nutridoras

e nas rainhas virgens boa parte dos alvolos j se apresentarem trgidos. A maior

turgidez dos alvolos nos indivduos mais velhos deve-se ao acmulo de secreo no

seu interior. Como nestas glndulas o aumento do tamanho dos alvolos contnuo

desde a emergncia alcanando o mximo nas campeiras, isto parece indicar que a

secreo pouco utilizada nas tarefas intra-coloniais. Esta ltima hiptese, pelo menos

34

para S. postica, parece pouco provvel porque as clulas glandulares se achatam

medida que o alvolo se enche de secreo (Captulos 2 e 3).

Estudo de Blochtein (2006) com Plebeia emerina revelou que ao MEV, a

glndula salivar ceflica em operrias de meia vida (nutridoras) formada por alvolos

arredondados, assim como observado em S. postica. J nas operrias campeiras de P.

emerina, os alvolos so achatados lateralmente. Ou seja, nesta espcie, a glndula

salivar ceflica atinge desenvolvimento mximo em operrias de meia vida, diferente do

observado nas espcies aqui estudadas. A funo sugerida para P. emerina

(BLOCHTEIN, 2006) a de que a secreo produzida seja misturada s pelotas de

prpolis espalhadas pela colnia, como forma de defesa contra invasores. A secreo

amoleceria a prpolis tornando-a viscosa, acabando os invasores por ficarem presos a

ela. Uma vez que a glndula est mais desenvolvida nas operrias mais velhas, em S.

postica e A. mellifera, provvel que a secreo produzida auxilie principalmente nas

tarefas de coleta de resinas e no tanto nas atividades dentro do ninho, mostrando que a

secreo glandular pode ter funo diferente em diferentes espcies, mais uma vez

apoiando a conhecida plasticidade funcional das glndulas das abelhas.

5.2. Morfometria

Apesar de alguns estudos sobre as glndulas salivares ceflicas de abelhas

abordarem o grau de desenvolvimento das mesmas, comparando-o entre os indivduos

em diferentes fases da vida, poucos esto baseados em testes estatsticos, gerando

interpretaes subjetivas. Deste modo, a morfometria permitiu comparaes com base

estatstica entre os indivduos exercendo diferentes tarefas na colnia.

Quanto s operrias de A. mellifera, estudos tm revelado que as glndulas

salivares ceflicas atingem desenvolvimento mximo na faixa de 17 a 41 dias de idade,

fase de transio para tarefas de campo (17 dias) ou em que essas tarefas j esto

completamente estabelecidas (41 dias) (HESELHAUS, 1922; INGLESENT, 1940;

SIMPSON 1960, 1961, 1963). Apesar destes autores no se basearem em testes

estatsticos para essa afirmao, dados posteriores neles apoiados (KATZAV-

GOZANSKY et al., 2001) esto de acordo com os primeiros autores, mostrando que as

35

operrias campeiras de A. mellifera contm significativamente mais secreo que as

nutridoras, o que relacionaram com o comportamento da abelha e no com sua idade.

O aumento de tamanho dos alvolos das glndulas salivares ceflicas em

operrias de S. postica e A. mellifera seguem aproximadamente o mesmo padro:

progressivo durante a fase adulta e mximo quando a abelha exerce a funo de

campeira. Porm, as diferenas no tamanho alveolar entre as operrias com diferentes

idades de S. postica, parecem ser mais marcantes que em A. mellifera (Tabela 5, figura

7) j que todos os grupos diferiram entre si (recm-emergidas, nutridoras e campeiras).

Os resultados das anlises estatsticas no presente estudo, em operrias de A. mellifera,

esto de acordo com as observaes feitas por Katzav-Gozansky et al. (2001), embora,

como mostrado na tabela 2 e figura 16 a mdia da rea alveolar das recm-emergidas

seja ligeiramente menor em relao s campeiras, no apresentando diferena

significativa.

Uma primeira informao sobre a funo dessas glndulas nas operrias de A.

mellifera e S. postica pode ser extrada de sua simples presena e grau de

desenvolvimento. A variao do tamanho dos alvolos da glndula reflete a quantidade

de secreo produzida e, pode-se supor que, entre as operrias, a fase campeira a que

requer maior quantidade de secreo. A secreo requerida nas campeiras as quais

exercem funes de coleta, ou seja, a substncia produzida por estas glndulas pode

auxiliar de alguma forma as atividades de coleta, seja no manuseio de compostos

coletados, seja na identificao do indivduo ao chegar colnia, ou at mesmo no

informar a fonte de alimento s companheiras, como proposto por Jarau et al. (2004) e

Schorkopf et al. (2007) para, respectivamente, Trigona recursa e T. spinipes, ou at

como proposto por Simpson (1960) lubrificao das peas bucais e, como em outras

abelhas (BERTSCH et al., 2005) contribuio para a composio das substncias de

superfcie que identificam os indivduos.

As glndulas de rainhas virgens e em postura de S. postica tambm diferem

significativamente, apresentando-se maiores nas ltimas. No h estudos anteriores

feitos a respeito da glndula salivar ceflica de rainhas de S. postica. Ao contrrio das

operrias, a funo das rainhas est confinada oviposio de modo que no saem da

colnia, a no ser para acasalamento e enxameao. Supe-se, ento, que a glndula

salivar ceflica desempenhe funo diferente a das operrias. Alm disso, a glndula

36

salivar da cabea atinge mximo desenvolvimento em rainhas em postura, podendo

estar relacionada com a produo de feromnio, j que a histoqumica (Captulo 2)

revelou que a secreo de natureza lipdica.

Rainhas de A. mellifera no apresentaram diferenas significativas quanto ao

tamanho alveolar. Os resultados obtidos na anatomia e histologia (Captulo 2) mostram

que os alvolos das glndulas nas rainhas virgens so muito semelhantes aos das

operrias nutridoras, ou seja, j apresentam alguma secreo na luz de alguns alvolos,

o que evidencia um certo grau de atividade glandular e o motivo para no ter sido

constatada diferena significativa entre os dois grupos de rainhas. Entretanto, deve ser

levado em conta que a similaridade no tamanho dos alvolos da glndula, entre os dois

grupos de rainhas, pode estar relacionado ao nmero de medidas feitas nos dois grupos,

o qual foi bem maior nas virgens, ou seja, o nmero amostral no foi suficiente para

detectar disparidade entre os dois grupos analisados.

Sabe-se que o produto das glndulas mandibulares das rainhas de A. mellifera

(substncia de rainha) atrai operrias e promove a integrao das duas castas (BUTLER,

1957; BUTLER; SIMPSON, 1958; RIBBANDS, 1953), alm de atrair machos para o

acasalamento, agiria na formao de enxame na diviso de colnia e inibio do

desenvolvimento ovariano das operrias e do comportamento de criao de novas

rainhas. Porm, quando a glndula mandibular removida de rainhas em postura, estas

perdem 85% de sua atratividade para as operrias (GARY, 1963), mesmo assim

conseguem manter uma corte normal (VELTHUIS; VAN-ES, 1964). Este fato pode

estar relacionado presena de outras fontes adicionais de substncia de rainha que

Velthuis (1967, 1970) sugeriu estarem no abdmen da rainha de A. mellifera. Os

resultados obtidos no presente trabalho permitem sugerir que a glndula salivar ceflica

possa ser uma dessas fontes adicionais de feromnios que, em ao sinergstica com

os feromnios da glndula mandibular atue na integrao das castas. A secreo da

glndula salivar ceflica descarregada na base da lngua pode ser disseminada entre as

operrias atravs da trofalaxia.

37

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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42

Histologia e Histoqumica das Glndulas Salivares da Cabea de Duas Espcies de

Abelhas Eussociais, Apis mellifera e Scaptotrigona postica (Hymenoptera, Apidae).

Silvana Beani Poiani, Carminda da Cruz-Landim1

Departamento de Biologia, Instituto de Biocincias de Rio Claro (UNESP/RC),

Av. 24A, no.1515, Bela Vista, CEP 13506-900, Rio Claro, So Paulo, Brasil

RESUMO: As abelhas eussociais apresentam uma variedade de glndulas excrinas

distribudas por todo o corpo, cujos produtos so usados no desempenho de suas tarefas.

Em todos os insetos, pares de glndulas esto associados s peas bucais e, nas abelhas,

as principais destas glndulas esto ligadas ao lbio (glndulas labiais ou salivares), s

mandbulas (glndulas mandibulares) e ao assoalho da cavidade bucal (glndulas

hipofarngeas). O par de glndulas labiais ou salivares dos insetos adultos localiza-se no

trax, porm ramos ceflicos se desenvolvem em algumas espcies de abelhas,

formando as glndulas salivares ceflicas, as quais so plenamente desenvolvidas em

algumas espcies da subfamlia Apinae. O presente trabalho estudou a histologia e a

histoqumica das glndulas salivares ceflicas de fmeas e machos, em diferentes

idades, de Apis mellifera e Scaptotrigona postica. Os resultados mostram que a

histologia das glndulas salivares ceflicas difere entre as espcies. Enquanto as clulas

alveolares e dos ductos so predominantemente cbicas nas operrias e rainhas de A.

mellifera, em S. postica passam de cbicas a escamosas conforme a operria envelhece,

e os ductos, nesta espcie, so invariavelmente constitudos por clulas escamosas.

Machos recm-emergidos de A. mellifera apresentam a glndula com grau de

desenvolvimento semelhante ao das operrias recm-emergidas de sua espcie, porm

conforme atingem a maturidade sexual, ocorre regresso glandular de modo que nem

sempre foi possvel encontr-la. Por outro lado, machos velhos de S. postica so

dotados de glndulas to desenvolvidas quanto as fmeas de sua espcie. A

histoqumica no revelou incluses proticas, porm indicou que a secreo das

glndulas de operrias e rainhas de ambas espcies composta por lipdios neutros. A

secreo se acumula progressivamente na luz dos alvolos de modo que operrias

campeiras e rainhas em postura possuem alvolos mais trgidos que os indivduos mais

43

jovens. A partir dos resultados obtidos, algumas funes puderam ser sugeridas, tais

como: tratando-se de operrias, reconhecimento do indivduo ao voltar da coleta para a

colnia e auxiliar a coleta e manipulao de resinas vegetais (ambas espcies) e leos

florais (S. postica), marcao de trilha de cheiro (S. postica); nas rainhas, funo

feromonal de integrao dos membros da colnia (ambas espcies); e nos machos de S.

postica, atrao da fmea.

PALAVRAS-CHAVE: abelha, glndula labial, morfologia, lipdio, feromnio

ABSTRACT: Eusocial bees present a variety exocrine glands disperse on body whose

products are used in tasks performance. Pairs of glands are attached at mouthparts in

whole insects and, in bees, main glands are attached to labium (labial or salivary

glands), mandibules (mandibular glands) and floor mouth cavity (hiphofaringeal

glands). Adult insects labial or salivary pair glands are located in torax. However

cephalic branchs develop in some bees species, composing the cephalic salivary glands

which are completely develop in some species of Apinae subfamily. The present work

studied the histology and histochemic of females and males cephalic salivary glands of

Apis mellifera and Scaptotrigona postica in different ages. The histology results showed

cephalic salivary glands differs between species. While cells of alveoli and ducts are

primarily cuboidal in workers and queens of A. mellifera, in workers of S. postica, cells

undergo of cuboidal to squamous with age and ducts invariably consist of squamous

cells. Newly emerged males of A. mellifera exhibit glands in developmental stages

similar to that of newly emerged workers of their species. However, as males become

sexually mature, the gland degenerates difficulting its localization. Nevertheless, old

males of S. postica present glands as developed as those of females of their species.

Histochemical techniques demonstrate no protein inclusions and indicated the secretion

of glands of workers and queens of both species were neutral lipids. The secretion

gradually accumulates in the lumen of alveoli, and as a result, foragers and egg-laying

queens exhibit more turgid alveoli that younger individuals. Our findings suggest some

possible roles for the gland: in workers, recognition of nestmates upon returning to the

colony from the filed and to aid collection and manipulation of resins (both species) and

floral oils (S. postica), scent marking (S. postica); in queens, pheromonal role in

44

integrating all members of the colony (both species); and in males of S. postica, female

attraction.

KEYWORDS: bee, labial gland, morphology, lipid, pheromone

1. INTRODUO

As glndulas salivares dos insetos adultos so estruturas pares localizadas no

trax, constitudas por unidades secretoras e ductos. Existe um ducto excretor comum

que recebe a secreo das duas glndulas que formam o par e penetra na cabea do

inseto, atravs do formen occipital, e se abre na base da lngua onde descarrega a

secreo produzida por estas glndulas (CRUZ-LANDIM, 1967; SNODGRASS, 1956).

Exclusivamente em algumas espcies de abelhas, alm do par de glndulas

salivares do trax, existe um par tambm na cabea. A glndula salivar ceflica forma-

se durante a pupao, por evaginaes do ducto excretor das glndulas salivares larvais

(CRUZ-LANDIM; MELLO, 1967; SNODGRASS, 1956). Entretanto, as glndulas

salivares da cabea apresentam graus de desenvolvimento diferentes na filogenia das

abelhas e apenas em algumas abelhas da subfamlia Apinae estas glndulas esto

plenamente desenvolvidas (CRUZ-LANDIM, 1967, 2000; SILVA DE MORAES,

2002).

Apesar das glndulas salivares torcicas e ceflicas terem origem (ectodrmica)

e desembocadura comum, a morfologia e funo so diferentes. De acordo com Delage-

Darchen et al. (1979), Simpson (1960) e Simpson et al. (1968) a secreo da glndula

salivar torcica aquosa e contm enzimas digestivas, enquanto a poro ceflica da

glndula produz secreo de aspecto oleoso para a qual foram apontadas algumas

funes, tais como auxlio na manipulao de cera (HESELHAUS, 1922), lubrificao

das peas bucais (SIMPSON, 1960) e marcao de trilha de cheiro (JARAU et al.,

2004). Ainda, nos Bombina e Meliponina, existe uma bolsa salivar ou reservatrio no

local de unio dos ductos excretores torricos com os ceflicos, de onde, ento, parte o

ducto excretor final (CRUZ-LANDIM, 1967).

Entre as abelhas, as fmeas so dotadas de maior quantidade de glndulas que os

machos e geralmente so mais desenvolvidas nas primeiras. As glndulas salivares

45

ceflicas atingem diferentes nveis de desenvolvimento nos sexos e nas espcies de

abelhas. Em A. mellifera, as operrias e rainhas as possuem mais desenvolvidas que nos

machos, nos quais a glndula vestigial ou ausente (GRAF, 1968; SIMPSON, 1962).

Porm, em algumas espcies de Bombus, os machos as possuem bem desenvolvidas

(BERGMAN; BERGSTRM, 1997; KULLENBERG et al., 1973; LAUER, 1992).

Poucos estudos foram conduzidos para determinar a morfologia e funo das

glndulas salivares ceflicas, alm do que, nem sempre abordaram as mudanas que

ocorrem no desenvolvimento da glndula com o passar da idade, tanto nas operrias e

rainhas como nos machos. Deste modo, este trabalho tem por finalidade analisar

conjuntamente a histologia e histoqumica das glndulas salivares ceflicas de fmeas e

machos exercendo diferentes tarefas na colnia, nas espcies Apis mellifera e

Scaptotrigona postica, a fim de contribuir para elucidar a funo das glndulas nestas

espcies.

2. MATERIAL E MTODOS

2.1. Material

As abelhas das espcies Apis mellifera e Scaptotrigona postica utilizadas neste

trabalho foram coletadas no apirio e meliponrio do Instituto de Biocincias,

Universidade Estadual Paulista (UNESP), Campus de Rio Claro, SP.

Operrias foram retiradas das colnias exercendo funes caractersticas das

etapas da diviso de trabalho: recm-emergidas, nutridoras e campeiras. Rainhas

virgens, quando no presentes na colnia, foram criadas em laboratrio e rainhas em

postura retiradas de colnias fortes. Machos recm-emergidos de A. mellifera foram

coletados dentro da colnia e os sexualmente maduros foram capturados nos agregados

de machos, prximos s colnias, geralmente pousados em galhos de arbustos.

2.2. Mtodos

2.2.1. Histologia (HE)

46

Para microscopia de luz, foram utilizadas as glndulas salivares ceflicas de 13

operrias recm-emergidas, 13 nutridoras e 13 campeiras, 7 rainhas virgens e 3 em

postura, 7 machos recm-emergidos e 7 maduros sexualmente de A. mellifera; 15

operrias recm-emergidas, 15 nutridoras e 15 campeiras, 5 rainhas virgens e 2 em

postura.

As glndulas salivares da cabea foram dissecadas em soluo fisiolgica para

inseto tamponada e fixadas em Bouin aquoso por 2 horas. Em seguida, passaram por

banhos sucessivos de lcool 70%, 80%, 90% e 95%, durante 15 minutos cada banho

para desidratao, aps o que foram embebidas em resina Leica por 24h. A incluso foi

feita na mesma resina acrescida de catalisador. Aps a polimerizao da resina, os

blocos foram seccionados com 4 a 6m de espessura, postos em lminas e corados com

hematoxilina e eosina. As lminas foram montadas com lamnula e blsamo e seguiram

para anlise ao microscpio de luz.

2.2.2. Histoqumica

2.2.2.1. Identificao de Protenas pelo Mtodo de Colorao por Azul de

Bromofenol (PEARSE, 1960).

Este mtodo de colorao presta-se para detectar a presena e o teor aproximado

de protenas presentes nas clulas e na secreo celular. Dependendo do teor protico,

as clulas e a secreo so coradas com diferentes tonalidades de azul. O azul de

bromofenol evidencia as protenas, corando-as de azul intenso.

As glndulas salivares ceflicas, para esta anlise histoqumica, passaram pelo

mesmo procedimento e etapas da preparao histolgica (HE), at os cortes serem

postos nas lminas. As lminas foram colocadas no azul de bromofenol a temperatura

ambiente, por 2h. Aps esse perodo, foram lavadas com gua corrente por 5 minutos e

passadas rapidamente por cido actico 0,5%, para remoo do corante no fixado s

protenas. Em seguida, foram lavadas com gua destilada, passadas por lcool butlico

tercirio, secas e montadas em blsamo. A passagem pelo lcool butlico tercirio pode

no ser feita, pois foi observado que este descola ou enruga os cortes nas lminas.

47

2.2.2.2. Identificao de lipdios Pelo Mtodo de Colorao por Sudan Black e

Azul do Nilo

O Sudan Black cora quaisquer substncias de natureza lipdica em negro ou

cinza esverdeado. J o sulfato de Azul do Nilo uma mistura que contm 3

componentes com cores diferentes, as quais se dissolvem diferentemente nos lipdios

conforme a composio destes. Deste modo, os lipdios neutros coram-se pelo

componente rosa, enquanto os lipdios cidos e alguns outros componentes celulares

no lipdicos coram-se pelo azul (MELLO; VIDAL, 1980).

Para cada corante, foram utilizadas as glndulas de 5 operrias recm-emergidas,

5 nutridoras e 5 campeiras de S. postica e A. mellifera, 2 rainhas virgens e 1 em postura

de S. postica e 3 rainhas virgens e 1 em postura de A. mellifera.

A colorao das lminas foi feita em preparaes totais. As glndulas de

operrias e rainhas de ambas espcies foram dissecadas em soluo fisiolgica para

inseto e colocadas sob lmina contendo poly-lisina, uma tentativa para imobiliz-las, j

que ao colocar fixador as glndulas tendiam a emaranhar-se, dificultando a anlise das

amostras. Logo aps esticadas na lmina com o auxlio da poly-lisina, as glndulas

foram fixadas em Formol Ca 1% e coradas com os corantes para lipdios. As lminas

foram montadas em gelatina glicerinada.

3. RESULTADOS

Algumas caractersticas histolgicas so compartilhadas entre os indivduos das

duas espcies estudadas. As glndulas salivares ceflicas so de origem ectodmica e,

por isso, apresentam a luz dos alvolos e dos ductos revestida por cutcula. Nos ductos,

a cutcula apresenta tendeas que so reforos em espiral, semelhantes aos das traquias.

3.1. Histologia

3.1.1. Apis mellifera

48

As glndulas salivares ceflicas de operrias recm-emergidas so constitudas

por alvolos e ductos com luz estreita. Nos alvolos e ductos, as clulas so

predominantemente cbicas, o ncleo ocupa grande poro do citoplasma e apresenta

nuclolos bem evidentes, os quais so mais numerosos nos alvolos que nos ductos

(Figura 1).

O citoplasma das clulas alveolares e dos ductos cora-se fracamente pela eosina.

possvel identificar regies mais claras entre as clulas provavelmente refletindo a

presena de espaos intercelulares abertos.

Em operrias nutridoras e rainhas virgens, tal como nas operrias recm-

emergidas, as clulas dos alvolos e dos ductos so cbicas, os ncleos ocupam o centro

celular e os nuclolos ocorrem em grande quantidade. Porm, alguns alvolos

apresentam luz um pouco mais ampla que a encontrada nas operrias recm-emergidas

(Figura 2).

Em operrias campeiras e rainhas em postura a luz dos alvolos e ductos

ampla. As clulas so cbicas e os ncleos, em alguns casos, apresentam nuclolo. No

citoplasma das clulas, como j mencionado anteriormente, existem regies mais claras

pouco coradas pela eosina (Figura 3), semelhantes a vacolos, melhor visualizados com

a tcnica histoqumica de colorao com azul de bromofenol (Figura 4).

Em machos, pode-se observar a reduo da glndula conforme o indivduo

amadurece sexualmente. Machos recm-emergidos apresentam a glndula formada por

ductos e alvolos com luz estreita (Figura 5), muito semelhante glndula das operrias

recm-emergidas. As clulas alveolares so cbicas, ncleo central e nuclolo. O

citoplasma pouco acidfilo. J em machos maduros sexualmente, a glndula encontra-

se bem reduzida, envolvida por clulas do corpo gorduroso (Figura 6). Os alvolos so

de difcil visualizao, podendo ser confundidos com os ductos, pois aparecem

colapsados. As clulas que formam os alvolos e ductos so escamosas. Algumas

clulas alveolares e dos ductos ainda apresentam nuclolos nos ncleos, mas

predominam ncleos de colorao homognea. O citoplasma dessas clulas pouco se

cora pela hematoxilina e eosina.

3.1.2. Scaptotrigona postica

49

As clulas alveolares em operrias recm-emergidas so achatadas ou cbicas.

Os ncleos so homogneos e grandes, ocupando praticamente toda a clula. O

citoplasma apresenta-se claro quando corado com hematoxilina e eosina (Figura 7).

Nas operrias nutridoras e rainhas virgens os alvolos so formados por clulas

cbicas, quando h pouca ou nenhuma secreo (Figura 8). O citoplasma apresenta-se

um pouco mais corado em relao ao das operrias recm-emergidas. Os ncleos so

basais e contm nuclolos.

Em operrias campeiras e rainhas em postura as clulas alveolares so

predominantemente escamosas, com ncleos homogneos basais e citoplasma

perinuclear pouco corado pela hematoxilina e eosina. J na regio apical, o citoplasma

aparece acidfilo (Figur