estudo da atividade antioxidante da própolis

Anais Eletrnico

VVIIII EEPPCCCC EEnnccoonnttrroo IInntteerrnnaacciioonnaall ddee PPrroodduuoo CCiieennttffiiccaa CCeessuummaarr CESUMAR Centro Universitrio de Maring

Editora CESUMAR Maring Paran - Brasil

ESTUDO DA ATIVIDADE ANTIOXIDANTE DOS EXTRATOS DE

PRPOLIS E PERESKIA ACULEATA

Bruna Hyplito Garcia1; Leandro Alexandre Krauss1; Claudenice Francisca Providelo Sartor2; Daniele Fernanda Felipe3

RESUMO: A prpolis considerada uma importante alternativa teraputica, devido suas inmeras propriedades farmacuticas, dentre estas esto comprovadas as aes antimicrobiana, antiinflamatria, cicatrizante, anestsica, anticariognica e antioxidante. A Pereskia aculeata tem sido empregada na medicina popular no abrandamento dos processos inflamatrios, estimulao imunolgica, na recuperao da pele em casos de queimadura e na cicatrizao de lceras, Alm disso, espcies do gnero Pereskia, como a Pereskia grandifolia, apresenta ao antioxidante moderada. Neste trabalho foi avaliada a ao antioxidante dos extratos de prpolis verde e vermelha e da Pereskia aculeata. A ao antioxidante foi realizada pelo mtodo fotocolorimtrico in vitro do radical livre estvel DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazila). Quanto ao antioxidante, a prpolis verde apresentou melhor ao com o IC50 de 80,64 g/mL quando comparada com a prpolis vermelha, a Pereskia aculeata apresentou melhor ao antioxidante do que as prpolis testadas, apresentando um IC50 de 56,64 g/mL, sendo o extrato de prpolis verde e de Pereskia aculeata empregado na formulao de um cosmtico. Ambos os produtos desenvolvidos apresentaram-se estveis e dentro dos parmetros analisados para o controle de qualidade. Assim, justifica-se a utilizao da prpolis verde e de Pereskia aculeata em formulaes cosmticas destinadas a preveno do envelhecimento cutneo. PALAVRAS-CHAVE: Antioxidante; Envelhecimento; Prpolis; Pereskia aculeata

INTRODUO

O processo do envelhecimento tem reflexo em todo o nosso organismo, e um dos rgos que mais cedo e melhor revela os sinais do envelhecimento a pele, por representar 12% do peso total do corpo, sendo o maior sistema de rgos expostos ao meio ambiente (GUIRRO;GUIRRO, 2004). A pele um rgo complexo no qual interaes celulares e moleculares reguladas de modo preciso governam muitas das agresses provindas do meio ambiente (HIRATA et al, 2004).

Como consequncia da exposio crnica ou excessiva a fatores extrnsecos do envelhecimento, as espcies de oxignio reativo (EROs) podem reduzir a capacidade de defesa antioxidante da pele, acelerando o processo de envelhecimento pela morte ou mau funcionamento das clulas (SOUZA et al, 2007).

Com o objetivo de retardar ou prevenir a deteriorao, dano ou destruio provocada pela oxidao so empregadas substncias antioxidantes. Os antioxidantes podem ser

1 Acadmicos do Curso de Farmcia do Centro Universitrio de Maring (CESUMAR), Maring Paran. Programa de Iniciao Cientfica do Cesumar (PROBIC). [email protected], [email protected] 2 Co-orientador, Docente do curso de Farmcia do Centro Universitrio de Maring (CESUMAR), Maring [email protected] 3 Orientador, Docente do curso de Farmcia do Centro Universitrio de Maring (CESUMAR), Maring Paran. [email protected]

ISBN 978-85-8084-055-1 25 a 28 de Outubro de 2011

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encontrados naturalmente em nosso organismo, em alimentos e em cosmticos. Estes so responsveis pela proteo do organismo contra a ao oxidativa dos radicais livres (CHORILLI; LEONARDI; SALGADO, 2007).

Produtos cosmticos so utilizados na manuteno e aperfeioamento da esttica do corpo humano, porm sem interferir nos processos normais do metabolismo celular, devem colaborar para que esses processos ocorram de forma a melhorar a qualidade da pele e anexos (ROQUE et al, 2009). A formulao para obteno de cosmticos naturais significa dar a preferncia, sempre que possvel, aos derivados vegetais, evitando a sua substituio por substncias sintticas. Portanto, extremamente importante realizar um balanceamento lgico e coerente entre as matrias-primas sintticas e naturais, maximizando a ao farmacolgica, a fim de alcanar melhores efeitos (IHA, 2008).

A prpolis uma importante alternativa teraputica do ponto de vista econmico e eficcia farmacolgica por ser de fcil obteno e por apresentar inmeras propriedades farmacuticas. Entre estas, est comprovada a ao antimicrobiana, antiinflamatria, cicatrizante, anestsica, anticariognica e antioxidante (LONGHINI et al, 2007). Os principais compostos qumicos isolados da prpolis at o momento podem ser organizados em alguns grupos principais como: cidos e steres alifticos, cidos fenlicos e steres aromticos, acares, lcoois, aldedos, cidos graxo, aminocidos, esterides, cetonas, charconas e di-hidrocharconas, flavonides (flavonas, flavonis e flavononas), Terpenides, Protenas, vitaminas B1, B2, B6, C, E, bem como diversos minerais (MENEZES, 2005).

A Pereskia aculeata, a qual conhecida popularmente como ora-pro-nobis uma planta que tem se mostrado promissora no campo fitoteraputico. Tal planta tem sido empregada na medicina popular no abrandamento dos processos inflamatrios, na recuperao da pele em casos de queimadura e na cicatrizao de lceras (ROSA; SOUZA, 2003; DUARTE; HAYASHI, 2005; GRONNER et al., 1999). Alm disso, espcies do gnero Pereskia, como a Pereskia grandifolia, apresenta ao antioxidante moderada (TURRA, 2007). Segundo alguns estudos, foram encontradas substncias como betacianina flavonis, alm de betana, isobetanina e filocactina (SIERAKOWSKI et al., 1987).

Baseado neste contexto, a presente pesquisa teve como objetivo testar a ao antioxidante a partir dos extratos de prpolis verde e vermelha e da Pereskia aculeata, tendo em vista que a medicina tem buscado alternativas para o desenvolvimento de novos frmacos com menos riscos a sade, principalmente derivado de espcies vegetais.

MATERIAL E MTODOS

A avaliao da atividade antioxidante, foi realizada pelo mtodo fotocolorimtrico in vitro do radical livre estvel DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazila). Preparou-se uma soluo 0,3 mM de DPPH em metanol. As amostras foram preparadas adicionando-se 400 L desta soluo de DPPH a 3,0 mL de solues dos extratos diludos em metanol nas concentraes de 150; 125; 100; 75; 50; 25; 12,5; 6,25; 3,12 e 1 g/mL para prpolis verde, concentraes de 200; 150; 100; 75; 50; 25; 1; e 0,5 g/mL para prpolis vermelha e concentraes de 75; 50; 25; 12,5; 6,25; 3,12 e 1,56 g/mL. Para calibrao do espectrofotmetro utilizou-se metanol. Como controle negativo, foi adicionado 3 mL de metanol em um tubo e 400 L de DPPH . A soluo de DPPH possui uma colorao roxa intensa e a ao antioxidante de um extrato pode ser visualizada pelo progressivo descoloramento da soluo, ao final do qual a mesma torna-se amarelada. Trinta minutos aps a adio de DPPH s amostras, foi feita a leitura em um espectrofotmetro de Ultravioleta UV- VIS (Varian) em 518nm. Todas as leituras foram realizadas em triplicata e, com a mdia dos dados obtidos foi calculada a

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capacidade de seqestrar o radical livre, ou seja, a atividade antioxidante foi expressa em percentuais, segundo a expresso abaixo:

%sequestro = Abs do controle negativo Abs da amostra x 100 Abs do controle negativo

A partir das atividades antioxidantes percentuais e da concentrao de cada extrato foi realizada uma regresso linear, chegando-se assim concentrao necessria para se obter 50% do efeito antioxidante mximo estimado de 100% (IC50) (VICENTINO; MENEZES, 2007).

Para o desenvolvimento do gel-creme com ao antioxidante, foi utilizado prpolis verde. Em um bcker foi adicionado BHT (0,05 g), metilparabeno (0,1 g), propilparabeno (0,1 g), EDTA (0,1 g), gua destilada q.s.p 100 mL e aqueceu a 70C dissolvendo as matrias-primas. Aps foi adicionado aos poucos o Sepigel 305, com agitao lenta e constante, at completa homogeneizao. Resfriou a 40C e adicionou estearado de octila (5 mL), leo de amndoas (3 mL) e o extrato de prpolis verde (0,016 g) baseado no IC50. Homogeneizou e verificou o pH (6).

Para o desenvolvimento da base creme Polawax, com ao antioxidante, foi utilizado o extrato de Pereskia aculeata. Para a preparao do creme a formulao foi dividida em fase 1, 2 e 3, onde fase 1 foi composta por 3mL de leo Mineral e 19,5g de Polawax. A fase 2 foi composta por 4g de Estearato de Octila, 0,1g de Metilparabeno, 0,1g de Propilparabeno, 5g de Propilenoglicol, 0,05g de Butilhidroxitolueno (BHT) e q.s.p. 100mL de gua Destilada. Fase 3 foi composta por 0,011g de extrato de Pereskia aculeata baseado no valor de IC50. Homogeneizou e verificou o pH (6).

Foi realizado controle de qualidade dos produtos desenvolvidos sendo avaliados os itens aspecto, cor, odor e pH. Alm disso, foi realizado o estudo de estabilidade preliminar, neste teste, amostras do produto foram armazenadas em estufa (40C), na geladeira (5C) e em temperatura ambiente durante 21 dias, sendo avaliadas nos tempos zero, 24 horas e aps 7,14 e 21 dias quanto aos mesmos itens que foram verificados no controle de qualidade, segundo o Guia de Estabilidade da Anvisa (2004). RESULTADOS E DISCUSSO

A concentrao inibitria mdia (IC50) uma medida da eficcia de um composto em funo biolgica ou bioqumica de inibio. Esta medida quantitativa indica o quanto de um determinado medicamento ou outra substncia (inibidor) necessria para inibir um determinado processo biolgico (ou componente de um processo, ou seja, uma enzima, clulas, receptor de clulas ou microorganismo) pela metade. O IC50 de uma droga pode ser determinada pela construo de uma curva dose-resposta. Valores de IC50 podem ser calculados para um antagonista dada por determinao da concentrao necessria para inibir a metade da resposta mxima biolgica do agonista. Em geral, quanto maior a concentrao de inibidor, mais a atividade do agonista ser reduzida (MOLYNEUX, 2003). O IC50 foi calculado a partir do grfico 1 atravs da equao da reta.

Grfico 1 A) Atividade sequestrante de radical DPPH do extrato de prpolis verde (IC50 80,64 g/mL). B) Atividade sequestrante de radical DPPH do extrato de prpolis vermelha (IC50 86,10 g/mL). C) sequestrante de radical DPPH do extrato de Pereskia aculeata (IC50 56,64g/mL)

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Concentrao em (g/mL)

Com respeito atividade antioxidante, as amostras se comportaram de maneira distinta, isto , observou-se que a amostra Pereskia aculeata apresentou um IC50 de 56,64g/mL, o extrato de prpolis verde apresentou um IC50 de 80,64 g/mL e a prpolis vermelha apresentou um IC50 de 86,10 g/mL (Grfico 1). Mostrando que o extrato de Pereskia aculeata possui uma maior atividade antioxidante, seguida da prpolis verde e por ultimo a prpolis vermelha.

Atualmente, possvel observar que esto sendo realizados diversos estudos com produtos vegetais, com o objetivo de analisar a atividade antioxidante destes, pois possuem em sua composio compostos fenlicos (CANTERLE, 2005). Para Santos et al. (2003), diversas substncias fenlicas so importantes antioxidantes, uma vez que possuem esqueleto carbnico propcio para a estabilizao de radicais livres. Verificou-se que a posio e o grau de hidroxilao so fatores importantes para a atividade antioxidante dos flavonides.

Segundo Alencar (2009), a composio qumica da prpolis altamente dependente da localizao geogrfica, ou seja, dependendo do local e da estao do ano sua composio qumica muda. Isto pode justificar os resultados encontrados, onde a ao antioxidante da prpolis vermelha foi menor quando comparada com a prpolis verde.

Chaves et al. (2007), relata em seu estudo uma boa ao antioxidante de 5 plantas medicinais estudadas, mostrando os seus respectivos IC50 em g/mL (Terminalia brasiliensis IC50 27,59; Terminalia fagifolia IC50 44,53; Cenostigma macrophyllum IC50 78,45; Qualea grandiflora IC50 50,16; Copernicia prunifera IC50 111,14). Quanto maior o consumo de DPPH por uma amostra, menor ser a seu IC50 e maior a sua atividade antioxidante. Em trabalho

A B

AA

%

AA

%

concentrao em (g/mL) concentrao em (g/mL)

AA

%

C

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realizado por Salgado et al. (2007), mostra que a goiaba possui uma considervel ao antioxidante, apresentando um IC50 de 150 g/mL.

Sendo assim, a Pereskia aculeata apresentou um IC50 de 56,64g/mL possui uma boa ao antioxidante e a prpolis verde apresentou um IC50 de 80,64 g/mL indicando uma considervel ao antioxidante, quando comparada s atividades antioxidantes dos diferentes extratos demonstrados nos trabalhos relatados acima, o que justifica o emprego do extrato de Pereskia aculeata e da prpolis verde no desenvolvimento de formulaes.

Desta forma, as formulaes desenvolvidas foram com a prpolis verde e Pereskia aculeata, sendo empregado o extrato de prpolis verde em um gel-creme e o extrato de Pereskia aculeata em um base creme Polawax contra envelhecimento cutneo. As formulaes apresentaram-se estveis durante o estudo da estabilidade preliminar (21 dias), e dentro dos itens avaliados no controle de qualidade, ou seja, cor branca, odor caracterstico, aspecto homogneo e pH 6.

O perfil de estabilidade de um produto serve para avaliar o seu desempenho, segurana e eficcia, alm de sua aceitao pelo consumidor. Fornece indicaes sobre o comportamento do produto, em determinado intervalo de tempo, frente s condies ambientais a que possa ser submetido, desde a fabricao at o trmino da validade. Os ensaios organolpticos fornecem parmetros que permitem avaliar, de imediato, alteraes como separao de fases, precipitao e turvao (ANVISA, 2004).

CONCLUSO

Os resultados encontrados mostram um caminho promissor para o uso dos extratos de prpolis verde e Pereskia aculeata. Sendo assim, ambos os extratos foram empregadas no desenvolvimento de formuaes que mantiveram-se estveis durante o perodo de anlises, quanto aos testes de qualidade realizados.

Desta forma, justifica-se a utilizao dos extratos de prpolis verde e Pereskia aculeata em formulaes cosmticas destinadas a preveno do envelhecimento cutneo, tendo em vista que nas ultimas dcadas tem sido observado um crescente interesse no aproveitamento da biodiversidade, particularmente de espcie vegetais, que vm sendo utilizadas em vrias reas da sade em programas preventivos e curativos.

REFERNCIAS

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