I Congresso Nacional “ A Ponte Entre a Escola e a Ciência Azul”

20 Maio 2014

Efeito da Privação de Oxigénio nos Parâmetros Efeito da Privação de Oxigénio nos Parâmetros Efeito da Privação de Oxigénio nos Parâmetros Efeito da Privação de Oxigénio nos Parâmetros

Sanguíneos de Corvina (Sanguíneos de Corvina (Sanguíneos de Corvina (Sanguíneos de Corvina (Argyrosomus regius)Argyrosomus regius)Argyrosomus regius)Argyrosomus regius)

Trabalho Realizado por:

Artem Sukhenko

Tânia Martinho

Orientação:

Doutora Laura Ribeiro

Doutora Florbela Soares

Colaboração:

Professora Teresa Afonso

∗ A produção piscícola em

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∗ A produção piscícola emaquacultura envolve um conjuntode preocupações de forma agarantir o bem estar animal, porforma a garantir boas taxas decrescimento e peixes saudáveis.

∗ Bem estar animal pode definir-se como o

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definir-se como o conjunto de condições ambientais, nutricionais e sociais adequadas à espécie que se pretende cultivar.

∗ Condições ambientais adversas e uma má manipulação, são factores de Stress para o peixe.

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∗ Para recuperar o seu ∗ Para recuperar o seu equilíbrio, o peixe é obrigado a gastar energia para além das suas funções vitais, o que pode comprometer o seu crescimento.

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∗ Factores de Stress podem ∗ Factores de Stress podem ser, por exemplo, manipulação excessiva, aparecimento de doenças, défice de oxigénio, entre outros.

∗As respostas fisiológicas ao Stress podem ser:

�Primárias

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�Primárias [Ex: Produção Cortisol]

�Secundárias [Ex: Produção Glucose]

(Diouf et al. 2000, Barton et al. 2002).

∗A falta de oxigénio provoca alta taxa de mortalidade ou morbilidade em aquacultura

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∗ Causas frequentes:

i. Elevada densidade no tanque de cultivo

ii. Aumento da temperatura

∗Resposta específica à falta de oxigénio:

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oHiperventilação;

oRedução da ingestão de alimento;

oAumento da produção de glóbulos vermelhos;

oAumento da área de difusão gasosa.

∗ A Corvina (Argyrosomus regius) é uma espécieutilizada em aquacultura há relativamente pouco tempo, havendo ainda muito a estudar sobre o modo como reage a condições adversas, tais como o défice de oxigénio.

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de oxigénio.

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∗ O objetivo deste trabalho foi averiguar a forma como a corvina reage quando submetida a uma situação de Stress agudo provocada por défice de oxigénio.

Hipótese

A corvina irá reagir à redução brusca de oxigénio dissolvido

na água através de:

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�Libertação de cortisol

�Produção de glucose

�Aumento da produção de hemácias

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Condições iniciais

15 Corvinas15 Corvinas[5 exemplares / ponto amostragem]

Peso = 87.3 ± 22.3 g

Volume do tanque – 50 L

Parâmetros analisados

∗ Observação do comportamento

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∗ Observação do comportamento

∗ Biometria (peso e comprimento total)

∗ Hematócrito

∗ Cortisol plasmático

∗ Glucose plasmático

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Soluções

�Fenoxietanol 500 ppm

�Heparina

Material

�Ictiómetro

�Balança �Heparina

�tanque de hipoxia (10 L)

�Balança

�Capilares

�Seringas

�Agulhas

�microtubos

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Pontos de Amostragem

Corvinas colocadas no tanque de hipóxia

Basal/control

5 corvinas

15’ 30’

Normóxia (15 peixes) Hipóxia

0

5 corvinas 5 corvinas

|Monitorizada a variação de oxigénio

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Procedimento (Súmula)

Em cada ponto de amostragem:

∗ Anestesiámos 5 corvinas em fenoxietanol 500 ppm

∗ Recolhemos sangue, medimos e pesámos∗ Recolhemos sangue, medimos e pesámos

∗ Devolvemos estes peixes ao tanque de recuperação

IC = (peso (g)/comp total³)x100

A - Hematócrito

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Componente analítica

A - Hematócrito

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B - Determinação do Cortisol

Foi utilizado o teste VIDAS Cortisol S (Biomérieux), cujo

equipamento (Mini-VIDAS) faz a leitura automática da quantidade de

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equipamento (Mini-VIDAS) faz a leitura automática da quantidade de

cortisol existente no plasma.

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C - Determinação da Glucose

1 – Preparámos as soluções para a

curva padrão

2 – Retirámos as amostras de plasma

do congelador e deixámo-las

descongelar lentamente em gelo

3 - Preparámos a microplaca com o

branco, as soluções padrão

(triplicado) e as amostras

(duplicado). Volume amostra / padrão: 10 µl

Volume reagente: 200 µl

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4 – Incubámos a microplaca a 37ºC durante 10’.

0,60

0,70Curva padrão

y = 0,005x + 0,065R² = 0,997

0,00

0,10

0,20

0,30

0,40

0,50

0 50 100 150

Absorvância em função da concentração (mg/dl)

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Resultados

I - Variação dos Parâmetros da Água

Normóxia Hipóxia 15’ Hipóxia 30’

Saturação de oxigénio

70,5% 19% 17%

Temperatura 20,3ºC 25,8ºC 25,2ºC

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II - Biometria

biomassa (kg) 0,9

volume tanque (l) 15

WW (g) CT (cm) IC

média 87,3 20,3 1,0

0

10

20

30

40

50

60

70

80

1 2 3

oxig %

temp. ºC

densidade (kg.l-1) 0,06 sd 22,3 1,58 0,12

0,000 0,500 1,000 1,500

1

3

5

7

9

11

13

15

IC

IC = (peso (g)/comp total³)x100

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III - Hematócrito

35,000

40,000

% Hct

0,000

5,000

10,000

15,000

20,000

25,000

30,000

35,000

Cntl Hx15 Hx30

Tratamento % Hct

Cntl 26,536 ± 3,3

Hx15 26,688 ± 2,8

Hx30 33,388 ± 4,3

Hct(%) = comp hemácias/comp total de sangue)x100

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IV - Cortisol

30,000

ng/ml

0,000

5,000

10,000

15,000

20,000

25,000

30,000

Cntl Hx15 Hx30

Tratamento ng/ml

Cntl 6,0 ± 3,37

Hx15 3,716 ± 1,23

Hx30 28,082 ± 3,7

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V - Glucose

70,00

Conc (mg/dl )

0,00

10,00

20,00

30,00

40,00

50,00

60,00

Cntl Hx15 Hx30

Tratamento Conc (mg/dl)

Cntl 43,25 ± 9,64

Hx15 66,32 ± 11,92

Hx30 54,18 ± 10,65

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Discussão (Tópicos)

∗ Aumento do hematócrito ao fim de 30’ (de acordo com o esperado)

∗ Aumento significativo do cortisol ao fim de 30’ (de acordo com o esperado)

∗ Desvio Padrão elevado condiciona conclusões

∗ Variação da temperatura - mecanismos intrínsecos / extrínsecos (?)

∗ Resultados da glucose exigiriam ensaios complementares

∗ Referências

Diouf, Boucar; Rioux, Pierre; Blier, Pierre U; Rajotte, Denis.

Use of Brook Char (Salvelinus fontinalis) Phisiological

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Use of Brook Char (Salvelinus fontinalis) Phisiological

Responses to Stress as a Teaching Exercise, in Advances

Physiology Education, volume 23, nº 1; junho 2000

∗ Agradecimentos

IPMA – Instituto Português do Mar e da Atmosfera

Ciência Viva

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Ciência Viva

Doutora Laura Ribeiro

Doutora Florbela Soares

Escola Secundária Dr Jorge Correia - Tavira

Professora Teresa Afonso