Download - Crescimento bacteriano
Requerimento nutricional
• As bactérias necessitam de uma FONTE DE CARBONO E NITROGENIO, FONTE DE ENERGIA, ÁGUA e vários ions para seu crescimento
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CULTURA = ISOLAMENTO DE GERMES
DIAGNÓSTICO DAS DOENÇAS INFECCIOSAS
Fontes de Nutrientes
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Carbono: CO2, carboidratos, aminoácidos, etc.
Nitrogênio: N2, NH3 (amonia), NO3(Nitrato), aminoácidos, etc.
Enxofre: SO4(sulfato), cisteína(proteína), vitaminas, etc.
Fontes de Nutrientes
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FÓSFORO: PO4 e nucleotídeos.
Minerais: Fe, Ca, Mg, Mn, Zn, K, Na, Cl, etc.
Fatores de crescimento: vitaminas, aminoácidos, nucleosídeos. (citosina, adenina, guanina, timina ou uracila)
CONDIÇÕES DE CULTIVO
• TEMPERATURA• D.B.O (Demanda Bioquímica de
Oxigênio)• TEMPO DE INCUBAÇÃO• PRESSÃO OSMÓTICA• UMIDADE• pH
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TEMPERATURA DE INCUBAÇÃO
•Psicrófilos = 12 a 17ºC•Mesófilos = 30 a 40 ºC•Termófilos = 57 a 87ºC
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Arqueobacter = 250 – 350ºCArqueobacter = 250 – 350ºCPsicrotrófico = deteriorização Psicrotrófico = deteriorização dos alimentosdos alimentos
D.B.O – Demanda Bioquímica de O2
• FACULTATIVAS: Staphylococcus sp.
• ANAERÓBIOS: Clostridium tetani
• AERÓBIOS: M. tuberculose
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CAMPINOFÍLICOS = Cresce em CO2
D.B.O – Demanda Bioquímica de O2
• MICROAERÓFILAS: Campylobacter jejuni, Neisseria meningitide
• AEROTOLERANTES: Enterococcus, faecalis
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CAMPNOFÍLICOS = Cresce em CO2
PRESSÃO OSMÓTICA
MEIO• ISOTÔNICO• HIPOTÔNICO• HIPERTÔNICO
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Bactérias halofílicas obrigatórias ( 30 % )Bactérias halofílicas obrigatórias ( 30 % )Bactérias halofílicas facultativas ( 2% )Bactérias halofílicas facultativas ( 2% )
Ágar Chapman-Stone para S. aureus
Ambientes com alta concentração de sais
TEMPO DE INCUBAÇÃO
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Tempo de Geração= Tempo de Geração= Tempo necessário para Tempo necessário para uma célula se dividir (dobro)]uma célula se dividir (dobro)]
Geralmente 1 a 3 Geralmente 1 a 3 HH(( E. coli E. coli 20 min.)20 min.)
Representação Representação logarítma ( Yx)logarítma ( Yx)TG
CRESCIMENTO E REPRODUÇÃO
• Crescimento Microbiano: É o aumento do número de indivíduo e não o aumento de tamanho de uma determinada célula.
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REPRODUÇÃOREPRODUÇÃO : É : É a perpetuação das a perpetuação das espécies de espécies de bactérias pelo bactérias pelo processo de divisão processo de divisão binária, Cisciparidadebinária, Cisciparidade
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No de bactérias/ml
Tempo
Fase de latênciaFase de crescimentoExponencial (fase log)
CURVA TÍPICA CRESCIMENTO BACTERIANOCURVA TÍPICA CRESCIMENTO BACTERIANO
Fase estacionária
Fase de decréscimo do número de bactérias (fase lag)
MEIOS DE CULTURA
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São misturas de nutrientes São misturas de nutrientes necessários ao crescimento necessários ao crescimento microbiano que deve conter a microbiano que deve conter a fonte de energia e de todos os fonte de energia e de todos os elementos imprescindíveis à elementos imprescindíveis à vida das células. vida das células.
MEIOS DE CULTURA
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A formulação deve levar em A formulação deve levar em conta o t ipo nutri t ivo ao qual conta o t ipo nutri t ivo ao qual o microorganismo pertence, o microorganismo pertence, considerando – se a fonte de considerando – se a fonte de energia, o substrato doador energia, o substrato doador de elétrons e a fonte de de elétrons e a fonte de carbono.carbono.
FATORES DE CRESCIMENTO
• Também é imprescindível acrescentar ao meio vitaminas, cofatores e aminoácidos quando estes compostos não são sintetizados pelo microorganismo que se deseja cultivar.
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Tipos de Meios de Cultura
Meio Quimicamente Definido Meio AR-103
Meio Complexo. Ex. ágar sangue
Meio Seletivo Ex. ágar Chapman Stone, ágar EMB
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Tipos de Meios de Cultura
Meio Diferencial. Ex. ágar SSMeio de Enriquecimento. Caldo Verde BrilhanteMeio de Transporte. Ex. Meio de Stuart
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MEIOS DE TRANSPORTE
• MEIO DE STUART• CARY BLAIN = Transporte para fezes• ROSA DUDET = Transporte para
Micoplasma• MEIO DE LIGNIER
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COPROCULTURA
• ÁGAR E.M.B (Eosina Blue Metioleno)• ÁGAR MAC CONKEY• ÁGAR SS ( Salmonella-Shigella)• CALDO TETRATIONATO• SKIRROW = CAMPYLOBACTER
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CULTURA DE SECREÇÕES
• ÁGAR SANGUE• ÁGAR CHOCOLATE• ÁGAR THAYER MARTIN (GONOCOCOS)• CALDO BHI• CALDO TIOGLICOLATO (anaeróbios)
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CULTURA PARA ANAEROBIOS
• CALDO TIOGLICOLATO• Agar Sangue para Anaeróbios (ASA)• ASA + álcool feniletila, • ASA + kanamicina + vancomicina• Agar cicloserina-cefoxitina—frutose,
Caldo tioglicolato enriquecido
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CULTURA PARA TUBERCULOSE
• Descontaminação prévia (Petrof, Lauril sulfato de sódio)• Meio de Lowenstein-Jensen: ovo
coagulado• Middlebrook 7H10 - Meio à base de
ágar27
ÁGAR SANGUE
• O sangue é adicionado a temperatura de 40ºC no ágar base ou ágar Mueller-Hinton. As hemácias são preservadas íntegras
Meio de enriquecimento
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ÁGAR CHOCOLATE
• O SANGUE QUANDO AQUECIDO A 56ºC LIBERA DIVERSAS SUBSTÂNCIAS QUE FUNCIONAM COMO FATORES DE CRESCIMENTO
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Cultura para Neisserias
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1- Morfologia das colônias;
2-Forma, Coloração de Gram,
Arranjo, Motilidade, Catalase;
3-Modo de fermentação da glicose
(carboidratos) e perfil bioquímico;
4-Fatores de crescimento;
5-Disponibilidade de oxigênio;
CARACTERÍSTICAS FENOTÍPICAS
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6-Testes de produção de gás;
7-Tolerância ao sal, pH e bile;
8-Crescimento em determinadas
temperaturas (máxima e mínima);
9-Condições do ácido láctico
produzido;
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10-Tipos de bacteriófagos;
11-Hidrólise da Arginina;
12-Formação de Acetoina
(Acetilmetilcarbinol);
13-Fermentação butilenoglicólica;
14-Tipo de hemólise;
15-Produção de polissacarídeos
extracelulares;
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16-Tipagem sorológica;
17-Presença de enzimas e
antígenos na superfície celular;
18-Perfil eletroforético de
proteínas;
19-Atividade antimicrobiana;
20-Lipídeos e constituintes da
parede celular
Características das Colonias
• 1.Qto ao BRILHO: TRANSPARENTE, TRANSLUCIDA OU OPACA• 2.Qto a COR: INCOLOR OU PIGMENTADA• 3.Qto ao ASPECTO:VISCOSA, ÚMIDA,
FILAMENTOSA, ETC,
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Fermentação da carboidratos
Bifidobacterium
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Fermentação da carboidratos
Tube 1:Culture en WW (rose) Tube 2:Lait Tube 3:Type respiratoire anaerobi (WW profond) Tube 4:Glucose Tube 5:Saccharose
Tube 6:Lactose Tube 7:Glycerol Tube 8:Mannitol Tube 9:Amidon Tube 10:Indole Tube 11:Nitrate
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PREPARAÇÃO DO MEIO
• 1-PESAGEM• 2-DISSOLUÇÃO• 3-ESTERILIZAÇÃO• 4-DISTRIBUIÇÃO• 5-TESTE DE ESTERILIDADE
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DISSOLUÇÃO
• A FRIO = MEIO LIQUIDO (CALDO, INFUSO)
• A QUENTE = MEIO SÓLIDO (ÁGAR-ÁGAR)
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Tubos
Placas
ESTERILIZAÇÃO
• FILTRAÇÃO = Membrana milipore
(Substâncias termolábil: Soro, vitaminas, antibióticos, açucares, etc)
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SEMEADURA
• Princípio: Uma população microbiana, sob condições naturais, contém muitas espécies diferentes. Os microbiologistas devem ser capazes de isolar, enumerar, e identificar os microrganismos em uma amostra, para então classificá-los e caracterizá-los.
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Técnica de Esgotamento
• A mais utilizada para isolamento de germes em meio sólido (ágar sangue, ágar EMB, etc ), onde se utiliza uma alça de platina, previamente flambada e esfriada
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Técnica de Esgotamento
• Com a alça de platina, tocar suavemente na amostra.• Passar a alça sobre o meio de cultura
em movimento de zigue-zague sem sobrepor as linha e sem recarregar a Alça.• Incubar as placas a 37ºC por 24 a 48
horas66
Espalhamento “Pour Plate”
• Consiste em fazer uma prévia diluição da amostra e colocar em uma placa de Petri vazia e depois derramar o meio sobre a amostra e agitar para homogenizar a amostra diluída com o meio de cultura.
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Cultura de urina = Contagem de colônias (UFC/ml)
Espalhamento “Pour Plate” Fazer diluição seriada da amostra, ex. 1/10,
1/100 e 1/1000. Colocar 1 ml de cada diluição em uma placa de
Petri estéril Fundir 10 ml de meio sólido e refriar a 65ºC Derramar sobre a amostra na placa e aplicar
movimentos suaves na placa para misturar a amostra com o meio;
Esperar o meio solidificar novamente e incubar as placas a 37ºC por 24 a 48 hora
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Espalhamento Pos Plate
• Consiste em colocar a amostra (diluida ou não) sobre o meio com auxilio da alça de platina calibrada e espalhar por toda placa.• Pode-se também colocar um volume
conhecido (10ul) com pipeta automática e espalhar com alça de Drigalsky.
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Recomendações Para Semeadura• Todo processo deve ser feito em ambiente limpo
e desinfectado, próximo de uma chama “azul” de um bico de Bunsen, ou então dentro de uma câmara de fluxo laminar;
• Alça de platina utilizada para semear, deve ser flambada antes e depois da semeadura;
• As placas semeadas devem ser incubadas com tampa invertida para não haver transpiração do meio sobre a tampa
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