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212 Vol. 32(3) - 2008

Sergio A. Calzavara, Jaime M. dos Santos, Luciany Favoreto, José C. Barbosa, Ednei R. Borelli & Alexandre C. Generoso

Desenvolvimento de Plantas Jovens de Citros Infectadas por Pratylenchusjaehni (Nematoda: Pratylenchidae) em Microparcelas

Sergio A. Calzavara1*, Jaime M. dos Santos2, Luciany Favoreto3, José C. Barbosa4,Ednei R. Borelli5 & Alexandre C. Generoso5

1Doutorando em Produção Vegetal, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Universidade Estadual Paulista(FCAV - UNESP), 14884-900 Jaboticabal (SP) Brasil.

2Professor Assistente Doutor, Laboratório de Nematologia, Departamento de Fitossanidade, FCAV - UNESP.3Doutoranda em Entomologia, Departamento de Fitossanidade, FCAV - UNESP.

4Professor Titular Doutor, Departamento de Ciências Exatas, FCAV - UNESP.5Graduandos em Agronomia do Instituto Taquaritinguense de Ensino Superior (ITES), Taquaritinga (SP) Brasil.

*Autor para correspondência: [email protected]

Recebido em 25 / 10 / 2007. Aceito em 30 / 05 / 2008Editado por Mário Inomoto

Resumo – Calzavara, S.A., J.M. dos Santos, L. Favoreto, J.C. Barbosa., E.R. Borelli & A.C. Generoso. 2008.Desenvolvimento de plantas jovens de citros infectadas por Pratylenchus jaehni (Nematoda: Pratylenchidae) emmicroparcelas.

Pratylenchus jaehni foi descrito em 2001 com base em população coletada em pomar de Itápolis (SP) Brasil.Na presente pesquisa, em microparcelas, a campo, estudou-se a influência do nematóide, em níveis crescentesde inóculo [0 (zero); 10; 100; 1.000; 10.000 e 100.000 indivíduos por microparcela] sobre o desenvolvimento deplantas jovens de laranjeiras ‘Valência’ enxertadas sobre limoeiro ‘Cravo’. O experimento foi conduzido emblocos ao acaso com dez repetições. As variáveis analisadas foram altura das plantas, diâmetro do caule e dasegunda pernada e volume da copa. As avaliações começaram aos 90 dias após a inoculação a intervalos de 30dias. A análise de variância evidenciou efeito significativo de P. jaehni aos 6 e 12 meses após inoculação para asvariáveis altura das plantas e diâmetro do caule, aos 12 meses para o diâmetro da segunda pernada e aos 6, 11 e12 meses para o volume da copa.Palavras-chaves: citros, altura das plantas, diâmetro do caule, volume da copa, nematóide das lesões.

Summary - Calzavara, S.A., J.M. dos Santos, L. Favoreto, J.C. Barbosa., E.R. Borelli & A.C. Generoso. 2008.Development of young plants of citrus infected with Pratylenchus jaehni (Nematoda: Pratylenchidae) in microplots.

Pratylenchus jaehni was described in 2001 based on a population collected in an orchard from municipality ofItápolis (SP) Brazil. In microplots under field conditions, it was studied the influence of the nematode inoculatedin a logarithmic scale [0 (zero); 10; 100; 1,000; 10,000 and 100,000 specimens per microplot] on the developmentof young plants of ‘Valencia’ orange trees, grafted on ‘Rangpur’ lime. The experiment was carried out in arandomized complete block design with 10 replicates. The following variables were evaluated: height of theplant, stem diameter, diameter of the second branch and the canopy volume. The evaluations started 90 daysafter inoculation at 30 day-intervals. There was a significant effect of P. jaehni on height of the plants anddiameter of the stem at 6 and 12 months after inoculation, on diameter of the second branch at 12 months, andon canopy volume at 6, 11 and 12 months.Key words: citrus, height of the plant, diameter of the stem, canopy volume, lesion nematodes.

ARTIGO

Nematologia BrasileiraPiracicaba (SP) Brasil

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Desenvolvimento de Plantas Jovens de Citros Infectadas por Pratylenchus jaehni (Nematoda: Pratylenchidae) em Microparcelas

IntroduçãoNove espécies de nematóides são consideradas

pragas-chaves na citricultura mundial, a saber,Belonolaimus longicaudatus Rau, Hemicycliophora sp.,Meloidogyne spp., Paratrichodorus sp., Pratylenchus spp.,Radopholus similis (Cobb) Thorne, Trichodorus sp.,Tylenchulus semipenetrans Cobb e Xiphinema spp. (Duncan& Cohn, 1990; Nyczepir & Becker, 1998). No Brasil,apenas o nematóide dos citros (T. semipenetrans) e onematóide das lesões radiculares dos citros (Pratylenchusjaehni Inserra et al.) são considerados pragas de altoimpacto destrutivo (Campos, 2002).

A distribuição geográfica do nematóide dos citrospraticamente coincide com a distribuição dacitricultura no mundo (Duncan & Cohn, 1990). Porsua vez, o nematóide das lesões radiculares dos citros(Pratylenchus jaehni) foi descrito em 2001, a partir deuma população coletada em Itápolis (SP) Brasil. Desdeentão, a distribuição desse nematóide vem sendoestudada. Campos (2002) relatou a ocorrência de P.jaehni em sete viveiros de citros a céu aberto no estadode São Paulo, do total de 595 viveiros analisados.Segundo Campos & Santos (2005), P. jaehni já foiregistrado em pomares comerciais de 29 municípiospaulistas, dois municípios mineiros e um paranaense.Calzavara & Santos (2005) registraram a ocorrênciado nematóide das lesões radiculares em dois talhõesde um pomar localizado no município de Cruzeiro doSul (PR). Posteriormente, Maceda et al. (2006)registraram a ocorrência do nematóide em outros doismunicípios paranaenses, elevando para três o númerode ocorrências naquele Estado.

No campo, plantas jovens de citros infectadas porP. coffeae exibiram diferenças de crescimento quevariaram de 49 a 80 %, nos quatro primeiros anos,dependendo do porta-enxerto. O número de frutosentre plantas infectadas e não-infectadas, nos primeirosanos de colheita, variou de três a 20 vezes (O’Bannon& Tomerlin, 1973). As estimativas mundiais das perdascausadas pelos nematóides dos citros chegam a14,2 % ao ano, embora essas estimativas tenham sidopublicadas no final da década de 1980 (Sasser &Freckman, 1987).

Em termos quantitativos, as perdas causadas porT. semipenetrans em pomelos foram estimadas porTimmer & Davis (1982), no Texas (EUA). Esse estudo

evidenciou a existência de correlação negativa (r = -0,47 e P < 0,01) entre a população do nematóide nosolo (número de nematóides / 100 cm3) e a produçãoem kg por árvore. Os dados obtidos ajustaram-se aomodelo exponencial: y = 160,3e-0,0000429x, em que y = aprodução em kg por árvore e x = ao número denematóides / 100 cm3 da amostra de solo. Contudo,admite-se que o efeito de T. semipenetrans na produçãodos citros depende de vários fatores, como o isoladodo nematóide - uma vez que são conhecidas três raçasdo nematóide, o enxerto, o porta-enxerto, além deoutros fatores bióticos e abióticos (Duncan & Cohn,1990; Nyczepir & Becker, 1998).

Na Califórnia (EUA), estimou-se que populaçõesde juvenis de T. semipenetrans no solo inferiores a 800/ 100 g não causavam dano econômico. Pomares compopulações maiores que 1.600 juvenis / 100 g de solopoderiam responder ao tratamento com nematicidas,enquanto o tratamento de pomares com níveis depopulação superiores a 3.600 juvenis / 100g de solopoderia aumentar substancialmente a produtividade(Van Gundy, 1984). Como ressalva, essas contagensdevem ser feitas nos períodos em que as populaçõesdo nematóide alcançam níveis máximos.

As perdas causadas em pomares infestados por P.jaehni ainda não foram quantificadas. Todavia, nalocalidade tipo do nematóide, no município de Itápolis,a porção do pomar infestada pelo nematóide produziucerca de três vezes menos que a não-infestada (Tersiet al., 1995). Várias plantas morreram ou definharamde tal modo que não mais respondiam aos tratosculturais. Em 2003, ao Norte do estado de São Paulo,no município de Palestina, reboleiras de plantasinfestadas por P. jaehni, em condições de elevado déficithídrico, também exibiram acentuada queda de folhas,sendo que algumas morreram, posteriormente (Santoset al., 2005).

Esta pesquisa teve por objetivo estudar a influênciade P. jaehni em diferentes níveis de inóculo sobre odesenvolvimento de plantas jovens de citros, emmicroparcelas no campo.

Material e MétodosLocal do experimento. O estudo foi conduzido

a campo no Sítio das Antas, localidade tipo de P. jaehni,situado no município de Itápolis (SP). Com base em

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acordo prévio com o proprietário, 60 plantas de cercade 15 anos de idade, em uma grande reboleira, foramremovidas da área, e as microparcelas foram instaladasno mesmo espaçamento da cultura.

Multiplicação e preparo do inóculo. Onematóide foi multiplicado in vitro, em cilindros decenoura, segundo a técnica descrita por Gonzaga etal. (2006), a partir de uma amostra da populaçãotopotipo recuperada de raízes de laranjeira ‘Valencia’(Citrus sinensis L. Osbeck) enxertada sobre limoeiro‘Cravo’ (Citrus limonia Osbeck), utilizando-se da técnicaCoolen & D’Herde (1972). Os nematóides foramaxenizados com ampicilina a 0,1 % e inoculadosassepticamente nos cilindros de cenouraacondicionados em vidros de 100 ml, previamentetampados com papel alumínio e autoclavados a 120ºC e 1 atm de pressão, por 20 minutos. A seguir, foramincubados a 25 ± 1 oC em BOD, no escuro por nomínimo 90 dias. Então, os nematóides foram extraídosdos cilindros de cenoura pela técnica de Coolen &D’Herde (1972). A concentração dos nematóides nasuspensão aquosa obtida foi determinada com auxílioda câmara de contagem de Peters, ao microscópiofotônico, e ajustada para 300 indivíduos por ml.

Remoção das plantas de laranjeira infectadase instalação das microparcelas. As plantas delaranjeira foram arrancadas e removidas da área comauxílio de uma pá-carregadeira. Para a instalação dasmicroparcelas, foram abertas trincheiras com 2,0 mde comprimento, 2,0 m de largura e profundidade de1,4 m. Essa etapa foi realizada com auxílio de umaretroescavadeira. Em seguida, duas manilhas deconcreto nas dimensões de 1,2 m de diâmetro e 0,7 mde altura foram colocadas sobrepostas em cadatrincheira, com auxílio de um guincho acoplado a umtrator, tomando-se o cuidado de colocá-las umas sobreas outras com exatidão.

Cada microparcela tinha as dimensões finais de 1,4m de profundidade e 1,2 m de diâmetro, deixando-seapenas 0,2 m acima do nível do solo para evitarcontaminação por meio de enxurradas. O soloremovido na abertura das trincheiras foi usado para opreenchimento das microparcelas, tomando-se ocuidado de se manter, ao máximo possível, adistribuição normal das camadas do perfil do solo.Essa etapa foi realizada com um trator equipado com

pá-carregadeira.Tratamento do solo com vapor. Após o

preenchimento das 60 microparcelas, seis delas,escolhidas ao acaso, foram amostradas com um tradonas profundidades de 0-20; 20-40 e 40-60 cm para aestimativa da população dos nematóides no solo. Osnematóides foram recuperados de uma alíquota de 100cm3 de cada amostra, pela técnica de Jenkins (1964).Os nematóides nas suspensões obtidas foramidentificados, e as populações médias foram estimadas,respectivamente, em 1.472; 1.076 e 736 indivíduos. Osnematóides presentes foram P. jaehni, T. semipenetrans,Aphelenchoides sp., Aphelenchus sp., Mesocriconema sp.,Xiphinema sp. e nematóides de vida livre.

A seguir, o solo contido nas microparcelas foitratado com vapor produzido por uma caldeira móvelCOPEC, modelo CE 3000. Para a aplicação uniformedo vapor nas microparcelas, foram confeccionadosdispositivos compostos por quatro canos de metal de¾ de polegada de diâmetro (19 mm) e 90 cm decomprimento, perfurados e interligados. Os furosforam feitos a intervalos de 10 cm em cada um dosquatro canos, para possibilitar a passagem do vapor,visando ao tratamento uniforme do solo contido nasmicroparcelas. Esses dispositivos foram afincados nosolo dentro das microparcelas e o vapor foi aplicado.Em seguida as microparcelas foram recobertas comuma lona plástica de 120 µm de espessura para aretenção do vapor, por um período de 24 horas. Nodecorrer da aplicação do vapor, a temperatura do solofoi monitorada, tendo alcançado cerca de 100 oC. Ovapor foi aplicado ao solo das microparcelas protegidascom a lona plástica, à temperatura de 170 oC e pressãode 8,2 kgf / cm2, por 30 minutos.

Uma semana após o tratamento com vapor,amostras de solo das microparcelas foram novamentecoletadas e processadas conforme técnica de Jenkins(1964). Nessas amostras, não foram constatadasquaisquer formas ativas de nematóides.

Transplante das mudas de laranjeira ‘Valência’enxertadas sobre limoeiro ‘Cravo’ nasmicroparcelas e inoculação. No ato do transplantedas mudas (realizado em janeiro de 2006, um mês apóso tratamento do solo) para as microparcelas, foirealizada a inoculação com níveis crescentes de inóculode P. jaehni, em escala logarítmica, a saber: 0 (zero);


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Figura 1 - Aplicação do inóculo de Pratylenchus jaehni em 10 ml de suspensão sobre as raízes da muda cítrica em microparcelas a campo,com auxilio de uma pipeta automática.

10; 100; 1.000; 10.000; 100.000 indivíduos donematóide por muda individual em cada microparcela,preparado como descrito anteriormente. Foi adotadoo delineamento experimental de blocos ao acaso, comdez repetições, sendo cada repetição constituída poruma planta por microparcela. O experimento foiirrigado uma vez por semana, com auxílio de um carro-pipa, até o pegamento das mudas.

Para a inoculação, cada muda foi removida do sacoplástico e 10 ml de suspensão do inóculo donematóide, em cada nível adotado, foram distribuídosuniformemente sobre as raízes das mudas, com auxíliode uma pipeta automática (Figura 1). Imediatamenteapós a inoculação, a muda foi transplantada namicroparcela e irrigada como anteriormentemencionado.

Avaliações do desenvolvimento das plantas. Apartir de 90 dias após a inoculação iniciaram-se asavaliações a intervalos aproximados de 30 dias. Asvariáveis analisadas foram altura das plantas (cm),diâmetro do caule na base da planta (mm), volume da

copa (cm3) e diâmetro da segunda pernada (mm). Aaltura das plantas foi avaliada com auxílio de uma trena,medindo-se a distância correspondente ao nível dosolo até a extremidade superior da copa, e os diâmetrosforam medidos com paquímetro. Para o cálculo dovolume da copa (V), foi medida a altura da planta nosentido do maior comprimento longitudinal, e a maiorlargura, no sentido transversal.

Os valores foram aplicados à equação (1) conformeO’Bannon & Tomerlin (1973).

(1)

Em que: V é o volume da copa (cm3), H é a altura dacopa e W é a largura.

Os dados relativos às variáveis consideradas foramsubmetidos à análise de regressão, utilizando-se oaplicativo SAS v.8.02 (1999), sendo que os valores davariável independente (níveis de inóculo) foramtransformados em logaritmo do número denematóides.

V = H x W2

4

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Resultados e DiscussãoNa primeira, segunda e terceira avaliações (aos 3;

4 e 5 meses após a inoculação, realizada em janeiro de2006), as análises de variância não revelaram efeitosignificativo para a altura das plantas, em função dologaritmo dos números de nematóides nos diferentesníveis de inóculo adotados. Na quarta avaliação (aos 6meses) e na décima (aos 12 meses), verificou-seregressão significativa, com relação linear negativa emambos os casos (Figuras 2A e B). Nas avaliaçõesintermediárias, a intervalos regulares de 30 dias (5ª.,6ª., 7ª., 8ª. e 9ª.), não ocorreram diferenças em funçãodos tratamentos.

Para o diâmetro do tronco (Figuras 3A e B), aos 6

e 12 meses após a inoculação, para o diâmetro dasegunda pernada (Figura 3C), aos 12 meses, e para ovolume da copa aos 6, 11 e 12 meses (Figura 4A-C)evidenciaram efeito significativo a 5 % deprobabilidade, pelo teste F. Nesses casos, novamenteforam observadas relações lineares negativas,evidenciando o efeito danoso do nematóide sobre odesenvolvimento das plantas.

O’Bannon & Tomerlin (1973) também observaramredução de crescimento de plantas jovens de citrosinfestadas com P. coffeae em condições de campo, quevariaram de 49 a 80 % nos quatro primeiros anos.Também mencionaram que o número de frutos emplantas infectadas, comparado ao de plantas não-

y = -2,4583x + 87,092

R 2 = 0,7501 F = 10,55*

60

65

70

75

80

85

90

0 1 2 3 4 5

Alt

ura

das

pla

nta

s(c

m)

Alt

ura

das

pla

nta

s(c

m)

y = -4,874x + 142,69

R 2 = 0,7918 F = 12,28*

80

90

100

110

120

130

140

150

0 1 2 3 4 5

Log do número de nematóides

A

B

Figura 2 - Interação entre altura das plantas e logaritmo do número de Pratylenchus jaehni inoculado em mudas de laranjeira ‘Valência’,enxertadas sobre limoeiro ‘Cravo’, em microparcelas a campo: A) 6 meses; B) 12 meses após inoculação realizada em janeiro de 2006.


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infectadas, foi de três a 20 vezes menor nas primeirascolheitas. A redução tanto do crescimento como daprodução de plantas de citros infectadas pornematóides é fato conhecido desde muito tempo(Timmer & Davis, 1982; Van Gundy, 1984; Duncan& Cohn, 1990). No presente estudo, o efeito de P.jaehn foi mais pronunciado aos 12 meses após ainoculação (Figuras 5A-B). Considerando-se que ainfecção pelo nematóide resulta em acentuada mortede radicelas e conseqüente redução da população do

nematóide, níveis populacionais muito altos donematóide não são usualmente observados nos solosdos pomares infestados e acentuadamentedepauperados. Por conseguinte, o problema vem sendosubestimado e pomares depauperados pela prolongadaação de P. jaehni vêm sendo renovados. A populaçãoem níveis mais baixos não acarreta danos mais drásticosinicialmente, mas seu progressivo aumentocompromete a longevidade e a produtividade dospomares.

y = -0,2011x + 13,936

R2 = 0,6533 F = 5,51*

10

11

12

13

14

15

0 1 2 3 4 5

Diâ

met

rod

oca

ule

(mm

)D

iâm

etro

do

cau

le(m

m)

y = -0,7974x + 27,485R2 = 0,5229 F = 5,27*

15

17

19

21

23

25

27

29

0 1 2 3 4 5

y = -0,0489x + 1,5905

R2 = 0,636 F = 7,44*

1,0

1,1

1,2

1,3

1,4

1,5

1,6

1,7

0 1 2 3 4 5


Diâ

met

rod

ase

gun

da

per

nad

a(m

m)

A

B

C

Figura 3 - Interação entre o diâmetro do caule e da segunda pernada de plantas jovens de laranjeira ‘Valência’, enxertadas sobrelimoeiro ‘Cravo’, em função do logaritmo do número de Pratylenchus jaehni inoculado: A) diâmetro do caule aos 6 meses; B) diâmetro docaule aos 12 meses; C) diâmetro da segunda pernada aos 12 meses após a inoculação.

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Figura 4 - Interação entre volume da copa e logaritmo do número de Pratylenchus jaehni inoculado em mudas de laranjeira ‘Valência’,enxertadas sobre limoeiro ‘Cravo’, em microparcelas a campo: A) aos 6 meses; B) aos 11 meses; C) aos 12 meses após a inoculação.

y = -21,966x + 274,01R2 = 0,5321 = F = 4,65*

50

100

150

200

250

300

0 1 2 3 4 5

y = -110,15x + 1553,1

R2 = 0,6928 F = 6,97*

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

1800

0 1 2 3 4 5

y = -382,86x + 4739,8

R2 = 0,7044 F = 14,08*

500

1000

1500

2000

2500

3000

3500

4000

4500

5000

0 1 2 3 4 5


Vo

lum

ed

aco

pa

(cm

)3

Vo

lum

ed

aco

pa

(cm

)3

Vo

lum

ed

aco

pa

(cm

)3

A

B

C

AgradecimentosOs autores agradecem ao Conselho Nacional de

Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)pela concessão da bolsa de doutorado, à Fundação deAmparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)pelo auxilio financeiro alocado no desenvolvimentodeste trabalho, e ao viveiro de mudas cítricas Blasco& Almeida Ltda., pela doação das mudas utilizadasno experimento.

Literatura CitadaCALZAVARA, S.A. & J.M. SANTOS. 2005. Ocorrência

do nematóide das lesões radiculares dos citros(Pratylenchus jaehni) no Estado do Paraná. In:CONGRESSO BRASILEIRO DENEMATOLOGIA, XXV, Piracicaba. Resumos, p. 112.

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Figura 5 - Experimento em microparcelas a campo para o estudo da influência de Pratylenchus jaehni em diferentes níveis de inóculo,sobre o desenvolvimento de mudas de larajeira ‘Valência’, enxertadas sobre limoeiro ‘Cravo’: A) planta não-inoculada, aos 12 mesesapós a instalação do experimento; B) planta inoculada com 100.000 indivíduos do nematóide.

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