declaração de conflito de antígenos plaquetários...
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Antígenos Plaquetários
LEANDRA C N SILVA
Biomédica - PesquisadoraLaboratór io de Granulóci tosDiscip l ina de Hematologia e HemoterapiaUniversidade Federal de São Paulo
DECLARO QUE NÃO POSSUO CONFLITOS DE INTERESSE
Declaração de Conflito de Interesse
Antígenos Plaquetários
LEANDRA C N SILVA
Discip l ina de Hematologia e HemoterapiaUniversidade Federal de São Paulo
Estrutura da apresentação
Anticorpos plaquetários
Implicações Clínicas
Antígenos Plaquetários
Identificação de Antígenos e Anticorpos Plaquetários
Plaquetas Pequenos fragmentos celulares anucleados
Discoídes :1,5-3,0 µm diamêtro (1/3-1/4 hemácia)
Vida média na circulação: 7-11 dias
Contagem Normal: 150 - 400 x 103/ µl
Plaquetas Reparação endotelial ( 7-10000/ µl/dia)
Aderência à células dos vasos danificados Secreção de grânulos. Formação do coágulo (agregado).
Vaso sanguíneo Fluxo sangue
= Interação plaquetária com colágeno= Interação plaquetária
Ativação Plaquetária
Collagen
GPIbα/Ibβ-IX-V
GPIV [CD36]
Lysosomeα-granule
GPVI
CD63CD62P
GPIa-IIa[CD49b/29]
ACTIVATED PLATELET
FIBRINOGEN
ThrombospondinT
CD62P
GPIIb-IIIa
GPIIb-IIIa
CD63
GPIV
GPIV
vWf
ACTIVATED PLATELET
ThrombospondinT
LESION
GPIbα
GPIaIIaGPVI
GPIIb-IIIaCD62P
CD63
CD63
GPIV
GPIc-IIa GPIbβ-IX-V
C M Hurd 3/2000 v1.0Subendothelium
Blood VesselEndothelial cells
HLA class IGrupo ABO
Plaquetas em descanso Plaquetas Ativadas
Antígenos PlaquetáriosGPIbα/Ibβ-IX-V
Lysosomeα-granule
GPIV
CD63
CD62P
GPIa-IIa[CD49b/29]
HLA class I
GPIIb-IIIa[CD41/61]
CD109
ABO
Antígenos Plaquetários Específicos GP IIb/IIIa (HPA1,3) GP Ia/IIa (HPA-5) GP Ib/IX (HPA-2)
Antígenos Compartilhados ABO, I, Lewis HLA Classe I GPIV
Glicoproteínas Plaquetárias - GP IIb/IIIa
80.000 moléculas por plaquetas
Receptor para fibrinogênio, Fator von Willebrand, Fibronectina
Plaquetas, megacarócitos e células endoteliais
Alta imunogenicidade
21 antígenos plaquetários
HPA-1,-3,-4,-6,-7,-8,-9,-10,-11......
Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014) 106, 93-102
Glicoproteínas plaquetárias - GP Ia/IIa
3000-5000 moléculas por plaqueta.
Receptor para colágeno.
Também presente em células endoteliais e linf. T
HPA-5, -13
Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014) 106, 93-102
Glicoproteínas Plaquetárias – GP Ib/IX
25.000 moléculas por plaqueta.
Receptor para von Willebrand.
HPA-2
Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014) 106, 93-102
CD109
CD109 é um membro da família das proteínas α2-macroglobulinas
1000 moléculas por plaqueta
Plaquetas, linfócitos ativados, cels endotelias
Carrega o sistema HPA-15 (Gov).
Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014) 106, 93-102
35 Antígenos em 06 GPs
www.ebi.ac.uk/ipd/hpa
)
Antígenos Plaquetários Específicos
Antígenos Plaquetários
35 antígenos
06 sistemas bi-alélicos (HPA-1, -2,-3,-4,-5 e -15)23 antígenos de baixa frequência
Base Molecular: troca de um nucleotídeo resultando na troca de uma aminoácido na glicoproteína resultando no antígeno correspondente.
Sistema Gene Antígeno Sinônimo Subst. Subst aa.
HPA-1 GPIIIa HPA-1a PlA1, Zwa T 196 Leu 33
HPA-1b PLA2, Zwb C 196 Pro 33
Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)
Santoso et al , Vox Sanguinis(2015)
Nomenclatura HPA
1959 - van Loghem descreveu o primeiro antígeno plaquetário Zwa, PlA1
1990 Nomeclatura HPA - ISBT
HPA – Human Platelet Antigen
2003 - PNC (Platelet Nomenclature Committee)
P. Metcalfe, Vox Sanguinis( 2004)Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)
Nomenclatura HPA HPA - Aloantígenos protéicos expressos na membrana plaquetária
Base molecular definida
Os antígenos e sistemas numerados cronologicamente: Zwa = HPA-1a
Alelos HPA designados alfabeticamente – frequência populacional ‘a’ – alta frequência ‘b’- baixa frequência
Sistemas HPA: descrição de anticorpos para os antígenos de alta e baixa frequência. Sistema HPA-1 (Antígenos HPA-1a e HPA1b)
Descrição de anticorpos apenas contra o antígeno de baixa frequência - ‘w’ HPA-8bw P. Metcalfe, Vox Sanguinis( 2004)
Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)
Antígenos PlaquetáriosTabela 1 Antígenos plaquetários Humanos
SISTEMA ANTÍGENO NOME ORIGINAL GLICOPROTEINA
HPA-1 HPA-1a Zwa, PlA1
GPIIIaHPA-1b Zwb, PlA2
HPA-2 HPA-2b Kob
HPA-2a Koa, Siba GpIBα
HPA-3 HPA-3a Baka, Leka
GPIIbHPA-3b Bakb
HPA-4 HPA-4a Yuka, Pena
GPIIIaHPA-4b Yukb, Penb
HPA-5 HPA-5a Brb, Zavb
GPIaHPA-5b Bra, Zava
HPA-6bw Caa, Tua GPIIIa
HPA-7bw Moa
GPIIIaHPA-7cw Hita
HPA-8bw Sra GPIIIa
HPA-9bw Maxa GPIIb
HPA-10bw Laa GPIIIa
HPA-11bw Groa GPIIIa
HPA-12bw lya GPIbβ
HPA-13bw Sita GPIa
HPA-14bw Oea GPIIIa
HPA-15 HPA-15a Govb
CD109HPA-15b Gova
HPA-16bw Duva GPIIIa
HPA-17bw Vaa GPIIIa
HPA-18bw Caba GPIa
HPA-19bw Sta GPIIIa
HPA-20bw Kno GPIIb
HPA-21bw Nos GPIIIa
HPA-22bw Sey GPIIb
HPA-23bw Hug GPIIIa
HPA-24bw Cab2 GPIIb
HPA-25bw Swi GPIa
HPA-26bw Sec GPIIIa
HPA-27bw Cab3 GPIIb
HPA-28bw Var GPIIbHPA-29bw Khab GPIIIa
Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)
Castro Pereira Chiba CardoneHPA-1a 98 97.9 99 100 99.5 >99.9 - 99 96.1 100 -HPA-1b 20 28.8 26.5 0.3 2 <0.15 - 14 28.8 16 -HPA-2a 97 100 99 99.2 99 - - 97 97.8 96 -HPA-2b 15 13.5 16.5 19.7 14 - - 27 20.5 24 -HPA-3a 88 81 83.5 85.1 82.5 78.5 - 83 86.9 86 -HPA-3b 54 69.8 66.5 66.2 71.5 71.9 - 47.7 52.8 58 -HPA-4a 100 100 - 100 100 >99.9 - 100 100 100 -HPA-4b 0 0 - 2 2 <0.2 - 0 0 0 -HPA-5a 98 100 99.5 99 100 99.3 - 99 99.6 100 -HPA-5b 21 19.7 10 7 4.5 17.7 - 15 16.6 35 -HPA-6a - - 100 99.7 100 - - - - - -HPA-6b - - 2.4 4.8 4 - - - - - -HPA-15a - - - - - - 78 - - - 80HPA-15b - - - - - - 75 - - - 73
FINLANDESES JAPONESES
Frequências (%) de antígenos Plaquetários em diferentes populações 18,19,20,21,22
COREANOS BRASILEIROS HOLANDESES CHINESESAMERICANOS ALEMÃESAntígeno
Frequência de Antígenos Plaquetários
P Metcalfe Transfusion, 2000Castro et al European Journal ,1999
Chiba et al Transfusion Medicine, 2000Cardone et al Transfusion Medicine, 2004
Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis,2014
HLA Classe I Genes HLA-A, HLA-B, HLA-C Todas as células nucleadas Plaquetas: 50-180.000 moléculas Hemácias
Alto Polimorfismo (IGMT/HLA/database – 11/2016)HLA*A: 3657 alelosHLA*B: 4459 alelosHLA*C: 3290 alelos
Freqüência Heterogenia
Antígenos Plaquetários não específicos
Antígenos Plaquetários não específicosABO •Determinantes A e B presentes ancoradas nas GPs•Expressão ABO Heterogenia em um mesmo indivíduo
HPA-1aCtr-
Anti-A
Br J Haematol 1985: 61, 603-609.
Antígenos Plaquetários não específicos
Naka – antígeno presente na Glicoproteína IV
Plaquetas,macrófagos, adipócitos e outros tecidos
3-5% africanos e asiáticos são GPIV deficiente. Caucasianos 0,06%
Anti-Naka
Formado por exposição em gravidez e transfusão. Relatos de trombocitopenia neonatal aloimune
Anticorpos plaquetários
Aloimunização gravidez, transfusão e transplantes
Implicação Clínica:
Trombocitopenia Neonatal Aloimune
Púrpura Pós Tranfusional
Refratariedade Plaquetária
Púrpura Pós Transfusional
Trombocitopenia grave após evento transfusional (CH, PL, PLQ)
Anticorpos dirigidos contra complexo GPIIbIIIa Anti-HPA-1a (80%)
Destruição de plaquetas transfundidas e autólogas
10-15% dos casos evolui a óbito por sangramento em SNC
Mulheres ( gravidez ou TX prévia)
Autolimitada – 3 semanas
Kroll, Kiefel and Santoso, Vox Sanguinis, 1998
Trombocitopenia Neonatal Aloimune (TNAI) Descrita em 1953 por Moulliner
Causada pela incompatibilidade deantígenos plaquetários feto-materna..
Anticorpos antiplaquetários IgGlevam a destruição imune mediadadas plaquetas fetais/neonato.
Equivalente a DHRNR Ahya et al. Transfusion and Apheresis Science, 2010
Kaplan, C. ISBT Science Series, 2009Kaplan C. Immunohematology, 2007
Trombocitopenia Neonatal Aloimune (TNAI)
Quadro Clínico: RN termo e saudável
↓ plaquetas ao nascimento
Pétequias
Hemorragias
Incidência:
1/1000 nascimentos
50% casos na primeira gestação
R Ahya et al. Transfusion and Apheresis Science, 2010Kaplan, C. ISBT Science Series, 2009
Kaplan C. Immunohematology, 2007
Trombocitopenia Neonatal Aloimune (TNAI)
HLA e ABO: controverso na literatura R Ahya et al. Transfusion and Apheresis Science, 2010Kaplan, C. ISBT Science Series, 2009
Kaplan C. Immunohematology, 2007
Resposta ineficaz a transfusão de Plaquetas
Causas de RefratariedadeCausas Clínicas Causas Imunes
Refratariedade Plaquetária
ASCO (J Clin Oncology, 2001; 5:1519-1538)
British Guidelines, (Br J Haematol, 2003; 122:10-23).
Vassallo(Imunohematology,2009;25:119-124)
Resposta ineficaz a transfusão de Plaquetas
Causas de RefratariedadeCausas Clínicas (60%)Causas Imunes (40%)
Refratariedade Plaquetária
ASCO (J Clin Oncology, 2001; 5:1519-1538)
British Guidelines, (Br J Haematol, 2003; 122:10-23).
Vassallo(Imunohematology,2009;25:119-124)
Refratariedade Plaquetária Fatores Imunes: Ac HLA Classe I : 80 - 90%.
Ac HPAs: 10-20%. Anti-HPA-1b : 55% Anti-HPA-5b: 30% Associados a HLA
Ac ABO
Diagnóstico das Trombocitopenia Aloimune
Confirmação da incompatibilidade HPA
Identificação de anticorpo anti - HPA
Santoso et al , Vox Sanguinis(2015)
Genotipagem HPA Métodos
Genotipagem em larga escala: genotipagem de um grande número de amostras e em de antígenos em um único ensaio ( bead based assay e microarray) banco de doadores/suporte Transfusional
Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)
Santoso et al , Vox Sanguinis(2015)
Identificação de Anticorpos Plaquetários
Três diferentes linhas:
Ensaios com plaquetas intactas
Ensaios glicoproteína específicos
Ensaios de fase sólida utilizando antígenos purificados ou recombinantes
Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)
Santoso et al , Vox Sanguinis(2015)
Identificação de Anticorpos Plaquetários
Hemaglutinação
Fase sólida
Ag recombinante
Ensaios GP Específico
↑Sensibilidade↓Especificidade
HLA/HPA/ABO
EspecificidadeSensibilidade
↑Especificidade↑Sensibilidade
MPHASPRCA
MAIPA
ELISA –ACE BBA - LUMINEX
MACE
Imunofluorescência PIFT
Plaquetas Intactas
Identificação de Anticorpos Plaquetários Recomendado utilização de técnicas
MAIPA: falsos negativos – competitividade de Acs Moab
Anti-HPA-3: anticorpos de difícil detecção Falhas com técnicas de fase sólida e com utilização de soluções detergentes. Melhores resultados em técnicas com plaquetas intactas
PIFT e MAIPA Lab de referência em Imunologia plaquetária Workshops Internacionais de plaquetas.
Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)
Santoso et al , Vox Sanguinis(2015)
Síntese Plaquetas: Ag ABO, HLA Classe I e Ags específicos (HPA)
Antígenos HPA: 35 antígenos em em 06 GP.
Implicações clinicas: TNAI, PPT e RP TNAI e PPT: anti-HPA-1a RP: anti-HLA-I
Métodos: Antígenos plaquetários: genotipagem Anticorpos plaquetários: PIFT + MAIPA