coliformes a 45 e chromocult
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Apresentação da analise de coliformeTRANSCRIPT
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Microbiologia prática Coliformes a 45ºC e E. coli
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Resultados para Coliformes a 35ºC
• Calcular o NMP de coliformes a 35ºC (tubos com VBB);
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• A presença de coliformes a 45ºC em alimentos já processados indica:
- Processamento inadequado, tratamento térmico ineficiente;
- Recontaminação pós-processamento (equipamento, manipulação sem cuidados de higiene);
- Provável presença de outros microrganismos patogênicos e toxigênicos
Riscos à saúde do consumidor
Segurança pública Legislação
Pesquisa de Coliformes a 45ºC
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• Coliformes a 45ºC (coliformes termotolerantes):
• possuem as mesmas características dos coliformes totais (ou a 35ºC), porém possuem a particularidade de serem capazes de fermentar a lactose com produção de gás, quando incubadas à temperatura de 45ºC.
• Fazem parte deste grupo os gêneros Enterobacter, Klebsiella e Escherichia coli.
• Já foram denominados como “coliformes fecais”, mas atualmente sabe-se que somente o gênero Escherichia tem como habitat o trato intestinal de homens e animais, sendo que os outros podem ter origem no solo e/ou vegetais.
A presença de coliformes a 45ºC, não indica necessariamente contaminação fecal.
Pesquisa de Coliformes a 45ºC
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Coliformes a 45ºC
(se coliformes 35ºC feito em tubos)
- A partir dos tubos positivos em VBB (turvação e formação de gás), inocular um cap em caldo Escherichia coli (caldo EC ou ECmug), contendo em cada tubo, 10 mL do caldo e um tubo de Durhan, previamente esterilizados;
- Homogeneizar e incubar em banho-maria a 45ºC por 24h;
- após incubação, examinar os tubos positivos, ou seja, que apresentaram turvação e formação de gás;
- Em caso de positividade, para confirmar a presença de E. coli deve-se verificar crescimento de colônias típicas em ágar Mc conkey ou EMB.
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Coliformes a 45ºC
(se coliformes totais feito em placas)
- Após contar as colônias típicas crescidas em ágar VRB, passar 5 colônias para caldo Escherichia coli(caldo EC ou ECmug), contendo em cada tubo, 10 mL do caldo e um tubo de Durhan, previamente esterilizados;
- Homogeneizar e incubar em banho-maria a 45ºC por 24h;
- após incubação, examinar os tubos positivos, ou seja, que apresentaram turvação e formação de gás;
- Calcular o numero de UFC/mL através da fórmula abaixo
UFC/mL = col. Contadas (VRB) x col. Confirmadas (EC) x inverso diluição usada (VRB)
Col. Isoladas (EC – 5 colônias)
• - Em caso de positividade, para confirmar a presença de E. coli deve-se verificar crescimento de colônias típicas em ágar Mc conkey ou EMB e a partir delas, faz-se provas bioquímicas (indol, vermelho de metila, Voges Proskauer e citrato).
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Incubar a 35ºC/24-48h
Teste positivo: turvação e produção de gás
Tubos positivos com VBB: passar para caldo EC
Incubar em banho-maria a 45,5ºC/24h
Teste positivo: turvação e produção de gás
Tubos positivos no EC:
passar para meio EMB
Incubar em banho-maria a 35ºC/24h
Colônias típicas: negras com brilho metálico
Provas confirmativas: Testes bioquímicos
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Coliformes em ágar ChromoCult®
• O ágar ChromoCult®:
• possui características seletivas e diferenciais, podendo ser utilizado para alimentos e águas.
• Permite a detecção e a enumeração de coliformes a 30-35ºC e, ao mesmo tempo, de E. coli,
• método mais rápido, simples e mais barato.
• As colônias de coliformes totais se desenvolvem na cor rosa, enquanto as colônias de E. coli, na cor azul, permitindo assim diferenciá-las.
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• Transferir 1mL das diluições escolhidas para placas de petri esterilizadas; • Adicionar aproximadamente, 15 mL de meio previamente fundido e resfriado a
45ºC; • Homogeneizar cuidadosamente com movimentos em forma de “8”; • Após a solidificação, adicionar cerca de 4mL de meio, segunda camada e
aguardar solidificar; • Incubar as placas invertidas a 35ºC/24h; • Selecionar para contagem placas entre 25 e 250 colônias;
• - Para expressar o resultado: Contar separadamente as colônias azuis e rosas: Coliformes totais (UFC/mL) = colônias contadas (azuis e rosas) x inverso da diluição E. coli (UFC/mL) = colônias contadas (azuis) x inverso da diluição
Coliformes em ágar ChromoCult®
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Incubar a 35ºC/24-48h
Teste positivo: turvação e produção de gás
Tubos positivos com VBB: passar para caldo
EC
Incubar em banho-maria a 45,5ºC/24h
Teste positivo: turvação e produção de gás
Tubos positivos no EC:
passar para meio EMB
Incubar em banho-maria a 35ºC/24h
Colônias típicas: negras com brilho metálico
Provas confirmativas: Testes bioquímicos
Incubar: - Tubos de EC: 45ºC/ 24h - Placas ChromoCult®: 35ºC/ 24h