Microbiologia prática Coliformes a 45ºC e E. coli

Resultados para Coliformes a 35ºC

• Calcular o NMP de coliformes a 35ºC (tubos com VBB);

• A presença de coliformes a 45ºC em alimentos já processados indica:

- Processamento inadequado, tratamento térmico ineficiente;

- Recontaminação pós-processamento (equipamento, manipulação sem cuidados de higiene);

- Provável presença de outros microrganismos patogênicos e toxigênicos

Riscos à saúde do consumidor

Segurança pública Legislação

Pesquisa de Coliformes a 45ºC

• Coliformes a 45ºC (coliformes termotolerantes):

• possuem as mesmas características dos coliformes totais (ou a 35ºC), porém possuem a particularidade de serem capazes de fermentar a lactose com produção de gás, quando incubadas à temperatura de 45ºC.

• Fazem parte deste grupo os gêneros Enterobacter, Klebsiella e Escherichia coli.

• Já foram denominados como “coliformes fecais”, mas atualmente sabe-se que somente o gênero Escherichia tem como habitat o trato intestinal de homens e animais, sendo que os outros podem ter origem no solo e/ou vegetais.

A presença de coliformes a 45ºC, não indica necessariamente contaminação fecal.

Pesquisa de Coliformes a 45ºC

Coliformes a 45ºC

(se coliformes 35ºC feito em tubos)

- A partir dos tubos positivos em VBB (turvação e formação de gás), inocular um cap em caldo Escherichia coli (caldo EC ou ECmug), contendo em cada tubo, 10 mL do caldo e um tubo de Durhan, previamente esterilizados;

- Homogeneizar e incubar em banho-maria a 45ºC por 24h;

- após incubação, examinar os tubos positivos, ou seja, que apresentaram turvação e formação de gás;

- Em caso de positividade, para confirmar a presença de E. coli deve-se verificar crescimento de colônias típicas em ágar Mc conkey ou EMB.

Coliformes a 45ºC

(se coliformes totais feito em placas)

- Após contar as colônias típicas crescidas em ágar VRB, passar 5 colônias para caldo Escherichia coli(caldo EC ou ECmug), contendo em cada tubo, 10 mL do caldo e um tubo de Durhan, previamente esterilizados;

- Homogeneizar e incubar em banho-maria a 45ºC por 24h;

- após incubação, examinar os tubos positivos, ou seja, que apresentaram turvação e formação de gás;

- Calcular o numero de UFC/mL através da fórmula abaixo

UFC/mL = col. Contadas (VRB) x col. Confirmadas (EC) x inverso diluição usada (VRB)

Col. Isoladas (EC – 5 colônias)

• - Em caso de positividade, para confirmar a presença de E. coli deve-se verificar crescimento de colônias típicas em ágar Mc conkey ou EMB e a partir delas, faz-se provas bioquímicas (indol, vermelho de metila, Voges Proskauer e citrato).

Incubar a 35ºC/24-48h

Teste positivo: turvação e produção de gás

Tubos positivos com VBB: passar para caldo EC

Incubar em banho-maria a 45,5ºC/24h

Teste positivo: turvação e produção de gás

Tubos positivos no EC:

passar para meio EMB

Incubar em banho-maria a 35ºC/24h

Colônias típicas: negras com brilho metálico

Provas confirmativas: Testes bioquímicos

Coliformes em ágar ChromoCult®

• O ágar ChromoCult®:

• possui características seletivas e diferenciais, podendo ser utilizado para alimentos e águas.

• Permite a detecção e a enumeração de coliformes a 30-35ºC e, ao mesmo tempo, de E. coli,

• método mais rápido, simples e mais barato.

• As colônias de coliformes totais se desenvolvem na cor rosa, enquanto as colônias de E. coli, na cor azul, permitindo assim diferenciá-las.

• Transferir 1mL das diluições escolhidas para placas de petri esterilizadas; • Adicionar aproximadamente, 15 mL de meio previamente fundido e resfriado a

45ºC; • Homogeneizar cuidadosamente com movimentos em forma de “8”; • Após a solidificação, adicionar cerca de 4mL de meio, segunda camada e

aguardar solidificar; • Incubar as placas invertidas a 35ºC/24h; • Selecionar para contagem placas entre 25 e 250 colônias;

• - Para expressar o resultado: Contar separadamente as colônias azuis e rosas: Coliformes totais (UFC/mL) = colônias contadas (azuis e rosas) x inverso da diluição E. coli (UFC/mL) = colônias contadas (azuis) x inverso da diluição

Coliformes em ágar ChromoCult®

Incubar a 35ºC/24-48h

Teste positivo: turvação e produção de gás

Tubos positivos com VBB: passar para caldo

EC

Incubar em banho-maria a 45,5ºC/24h

Teste positivo: turvação e produção de gás

Tubos positivos no EC:

passar para meio EMB

Incubar em banho-maria a 35ºC/24h

Colônias típicas: negras com brilho metálico

Provas confirmativas: Testes bioquímicos

Incubar: - Tubos de EC: 45ºC/ 24h - Placas ChromoCult®: 35ºC/ 24h