25/5/2010

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Universidade Federal Rural do Semi-Árido – UFERSADepartamento de Ciências AnimaisCurso de Medicina VeterináriaMonitoria de Microbiologia Geral

Maria Rociene AbrantesJean Berg

Introdução

Microrganismos indicadores

Qualidade dos alimentos

Vida de prateleira Segurança

Patógenosalimentares

Sanificação dos alimentos

Introdução

IndicadoresMicrorganismo e/ou

produto do metabolismo

Presença em certos níveis

Avaliar a qualidade e predizer a vida de

prateleira

Não pode ser afetados por outros

microrganismo

Ser detectável

Concentração/crescimento: qualidade

do produto

Quantificado e distinguível de

microrganismos

Microrganismos IndicadoresContagem

padrão

Mesófilas

Psicotróficas

Termófilos

Contagem

Bolores

Leveduras

Contagem de coliformes

Coliformes totais

Termotolerantes

CONTAGEM PADRÃO

7°c/10 D

PSICROTRÓFICOS

MESÓFILOS

35º/24/48hs.

55°C/24 hs.

TERMÓFILOS

Contagem total de aeróbios mesófilosÉ o método mais utilizado como indicador geral de

populações bacterianas em alimentos.

Utilizado

Obter informações

Práticas de manufaturas

Matéria prima

Condições de processamento

Vida de prateleira

Não diferencia tipos de bactérias

Não é um indicador de segurança

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Método de análise

Contagem padrão em

placas

Plaqueamentoem

profundidade

Superfície

Filtração em membrana

Ága

rPa

drã

o p

ara

Con

tage

m

(PC

A) • 35±1º

• 48±2h

Material requerido para a análise

Preparação da amostra e diluições seriada

Diluente• Água

peptonada 0,1% ou tampão fosfato pH 7,2

Tubos• 9ml de(H2Op)

ou TB pipetas

Material requerido para a análise

Plaqueamento em profundidade• Placas de petri• PCA

Plaqueamento em superfície• PCA• Alça de espalhamento

(alça de Drigalski)

Filtração em membranas• PCA• Membranas de 47mm,

porosidade de 0,45µm, brancas e quadriculadas

• Bomba de váquo• Pinças e provetas

Incubação• Com termômetro calibrado• Estufa regulada a 35±1º

Procedimentos

Procedimentos

Preparação das amostras

Homogenizaçãodo conteúdo e

retirada da unidade analítica

Preparação da primeira diluição

Preparação de diluições seriadas

seriadas

IMPORTANTE !!!

• Assegurar que a área de trabalho esteja limpo e todo material esteja disponível

• Inocular 1ml de cada diluição em placas de petri

Inoculação

• 12 a 15ml de PCA, misturar, distribuir as placas em bancadas frias e planas

Adição do meio de cultura

• Inverter e incubar as placas

Incubação

• 25 a 250 colônias com auxílio de uma lupa e um contador de colônia

Contagem das colônias e cálculos dos resultados

Plaqueamento em profundidade

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Plaqueamento em superfície

• Inicialmente colocar placas com PCA em estufas ou em capelas de fluxo laminar

Preparação das placas

• 0,1 ml nas superfície das placas e espalhar

Inoculação

• 15 min, inverter e incubar

Incubação

• Segue os mesmos procedimentos, multiplica por 10 os resultados

Contagem das colônias e cálculos dos resultados

Diluições

Sample HomogenateDilution Blanks Containing 90 ml Diluent

10 ml 10 ml 10 ml 10 ml

10-1 10-2 10-3 10-4 10-5

(1:10) (1:100) (1:1000)(1:10000)

(1:100000)

Plating

10-1 10-2 10-3 10-4 10-5

Put 1 ml of Each Dilution into Empty Petri-Dish

1 ml1 ml1 ml1 ml1 ml1 ml 1 ml1 ml1 ml1 ml

Método em petrifilm

Inoculação• 1ml de cada diluição separadas no centro

da área circular do filme inferior

Incubação• Após um minuto

Contagem das colônias e cálculos dos resultados • 25 a 250 colônias

• É composto por dois filmes estéreis, reidratáveis, impregnados por substânciageleificantes solúveis em água fria, pelo meio de cultura e por um indicador dettetrazólio.

CONSIDERAÇÕES FINAIS