“avaliação citogenética e molecular de neoplasias hematológicas – utilização da...
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Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Secretaria de Estado da SaúdeSecretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
“Avaliação citogenética e molecular de neoplasias hematológicas – utilização da classificação proposta pela
OMS”
Maria Cecília Menks Ribeiro DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA CELULAR,
EMBRIOLOGIA E GENÉTICA
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA
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Metodologia Aplicada
Cultura de células leucêmicas de curta duração
Análise citogenética clássica (bandas G)
Citogenética molecular (FISH)
Extração de DNA genômico
Extração de RNA
RT-PCR
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Resultados e Comentários93 amostras coletadas:
56 pacientes com Leucemia Aguda, Linfomas e LMC
38 pacientes com SMD e outras hemopatias.
52 amostras sucesso na análise citogenética clássica : 66% leucemias/linfoma 39% outras hemopatias.desenhadas e analizadas individualmente 781 metáfases em banda G.
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AVALIAÇÃO CITOGENÉTICA POSSIBILIDADE DE UTILIZAÇÃO DA CLASSIFICAÇÃO PROPOSTA PELA OMS:
BOM PROGNÓSTICOLMA t(8;21) (LMA-M2); LPA t(15;17) (LMA-M3); LMA inv(16) (LMA-M4)Alterações adicionais: podem influenciar o prognóstico
PROGNÓSTICO INTERMEDIÁRIO: normal, trissomia 8
PROGNÓSTICO DESFAVORÁVEL: 3, -5/del 5q, -7/del7q, cariótipo complexo
Além das alterações recorrentes, outras nuances das alterações cariotípicas foram detectadas
e seu significado foi sendo interpretado em função da evolução do pacientes.
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TAMBÉM AVALIADOS PACIENTES COM:
LLA- t(8;14)
LMC- t (9;22)
SMD- presença de alterações cromossômicas x cariótipo normal
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Padronização da técnica de FISH para detecção de rearranjos em células metafásicas e núcleos interfásicos.
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17q-
15q+
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transl
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A BFigura 1Figura 1: A - análise com FISH, metáfase e núcleo interfásico com t(15;17) da amostra 3507; B - Metáfase em bandas G, amostra 3207, com t(15; 17).
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Padronização dos procedimentos para extração de RNA e transcrição reversa (cDNA) para detecção dos genes quiméricos.
Opção para diagnóstico em culturas sem crescimento
Acompanhamento do tratamento/ Detecção de doença residual
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Impactos do ProjetoA avaliação citogenética para diagnóstico de neoplasias hematológicas possibilita a adequação necessária para a utilização da proposta da OMS para classificação destas neoplasias. Através desta proposta foi possível sua utilização sistemática ( em caráter experimental) de forma pioneira no Hospital Universitário da UFSC, o que permitiu caracterizar a natureza da demanda para esta avaliação na população atendida, estabelecer as alterações mais recorrentes, e também acompanhar a evolução dos pacientes avaliados.
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ADEQUAÇÃO DA INFRA-ESTRUTURA
-sistema de microscopia de fluorescência e fotodocumentação
- Micro-centrífuga refrigerada (extração RNA)
AQUISIÇÃO DE INSUMOS DE ALTO CUSTOMaterial descartávelMeios de cultura específicosReagentes para FISHReagentes para RT-PCR
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Aplicabilidade para o SUS
Disponibilização de metodologias validadas e recomendadas pela OMS para os pacientes atendidos no HU-UFSC
Opções terapêuticas baseadas nas alterações cromossômicas
Capacitação de profissionais na utilização de metodologias
Caracterização das patologias mais freqüentes na população de Santa Catarina
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IMPORTÂNCIA DA UTILIZAÇÃO DA CLASSIFICAÇÃO DA OMS
-diagnóstico
-classificação
-progressão
-escolha terapêutica
-detecção de doença residual mínima
-evolução